Intro TP N2
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TRABAJO PRÁCTICO N° 2
Organización celular: modelos y tipos. Instrumentos para su observación
Contenidos: ¿Qué es una célula? Características distintivas de los modelos y tipos celulares.
Estructuras subcelulares. Microscopía: tipos de microscopio; partes de un microscopio óptico y
uso del mismo.
Objetivos:
- Visualizar a la célula como un sistema, reconociéndola como una estructura autónoma
con capacidad de integración, base de la diversidad.
- Identificar similitudes y diferencias en los planes celulares a partir de estructuras y
funciones.
- Relacionar los componentes estructurales y las funciones en células especializadas.
- Reconocer alcances y limitaciones de los instrumentos auxiliares.
Aunque algunas células son más complejas que otras, todas poseen los componentes físicos y
químicos necesarios para su mantenimiento, crecimiento y división. Así, son capaces de
convertir la energía de una forma a otra, almacenarla y utilizarla para diversos tipos de
actividades, desde el trabajo mecánico hasta la síntesis química. Asimismo, poseen la
información genética en moléculas especiales que duplican con fidelidad y transmiten a la
progenie durante la división celular y por otra parte utilizan esa información para controlar el
metabolismo y especificar el tipo de estructura.
Por supuesto, una célula es un sistema abierto, que requiere intercambio de materia y energía
con el ambiente que la rodea.
Todas las células comparten dos características esenciales:
1- Membrana externa, la membrana celular o membrana plasmática, que separa al citoplasma,
en estado coloidal, del ambiente externo.
2- Material genético, la información hereditaria, que dirige las actividades de la célula y le
permite reproducirse y transmitir sus características a la progenie.
La membrana celular o membrana plasmática: no solamente define los límites de la célula sino
que le permite que exista como una entidad diferente de su entorno; así, regula el tránsito hacia
fuera y hacia adentro de la célula. Está constituida por una doble capa lipídica en la que están
incluidas varias proteínas. Más allá de las particularidades químicas, los componentes de la
membrana plasmática se ajustan al mismo plan general en cualquier modelo y variante celular.
Al analizar la segunda característica común esencial de las células, el material genético,
encontramos que si bien la función básica es la misma para todos los planes celulares (es decir la
transmisión de los caracteres hereditarios en la progenie y el control y dirección de las
actividades metabólicas), la forma, ubicación y asociación con otras estructuras difiere de un
modelo celular a otro.
Si el material genético se encuentra adherido a la membrana o en el
citoplasma, y en general presenta una forma circular grande a la
que están débilmente asociadas proteínas, estamos en presencia
del plan celular u organismo procariota.
Si el material genético se encuentra asociado a proteínas especiales
y rodeadas por una doble membrana formando lo que se denomina
núcleo, de manera tal que se constituye en un compartimiento Glóbulo rojo, glóbulo blanco y
separado pero con el citoplasma, estamos definiendo al plan celular bacterias
eucariota.
La comparación entre los dos Planes o Modelos Celulares - procariotas y eucariotas - pone de
manifiesto la mayor complejidad estructural de las células eucariotas frente a las procariotas. Sin
embargo, ambas comparten muchas semejanzas en su funcionamiento, lo que no deja dudas
acerca de su parentesco. Los científicos han podido establecer que, en algún momento de la
historia de la Tierra, diversas variantes de eucariotas se escindieron de un tronco procariota,
formando ramas que evolucionaron de manera independiente.
Las adquisiciones de los eucariotas marcaron muchas diferencias con sus predecesores
procariotas. En las células procarióticas, todos los procesos ocurren en un único compartimiento
limitado por la membrana celular. Por el contrario, en las células eucariotas existe una
separación espacial de las funciones: el DNA se mantiene en un compartimiento separado, el
núcleo, y en el citoplasma se encuentran distintas organelas, entre ellas las mitocondrias,
presentes en todas las células eucariotas, o los cloroplastos, presentes en células fotosintéticas.
Se sabe que las formas más simples de vida son células solitarias que se propagan dividiéndose y
se conocen como organismos unicelulares, mientras que otros organismos más complejos, como
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nosotros mismos, son como "ciudades celulares" en las que grupos de células realizan funciones
especializadas y están unidas por complejos sistemas de comunicación. Son los denominados
organismos pluricelulares.
Una célula no es una combinación fortuita de componentes, sino una entidad dinámica e
integrada.
No debemos perder de vista que estudiamos a las células:
Para conocer por un lado, cómo están formadas, es decir como una unidad viva constituida
por partes menores.
Por otro lado, para conocer cómo cooperan para constituir un organismo más complejo, es
decir como parte constitutiva de una estructura mayor.
ACTIVIDADES:
Luego de leer el ANEXO: MICROSCOPIA ÓPTICA, realiza las actividades propuestas:
Materiales:
Provistos por la Cátedra Provistos por los alumnos (por grupo)
Microscopio óptico compuesto Hoja de malvón
Microscopio estereoscópico Servilletas de papel
Porta y cubre objetos Pinza de depilar, agujas de disección
Preparados permanentes Trozo de tela suave para limpiar las lentes
Elodea Útiles de dibujo (lápices de colores, hojas lisas)
Cebolla Guardapolvo
1. Coloque una letra “e” recortada de un periódico sobre un portaobjeto, humedézcala con
una gota de agua y tape con un cubreobjeto. La letra debe estar colocada en su posición
normal al ser enfocada. Obsérvela en Microscopio óptico compuesto (MOC) y en
Microscopio óptico simple o estereoscópico (MOS). Dibuje e indique si la imagen de la
letra se presenta en la misma posición.
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3. Ordene correctamente los pasos a seguir para lograr una correcta observación al
microscopio óptico compuesto (coloque números en los paréntesis):
( ) Colocar el preparado sobre la platina, ubicada en el punto más bajo, sujetando con las
pinzas.
( ) Verificar si el campo está completamente iluminado.
( ) Afinar la observación del objeto con el tornillo micrométrico.
( ) Encender el microscopio.
( ) Cambiar a los objetivos de mayor aumento, observando lateralmente para evitar el
impacto entre la lente objetivo y el preparado.
( ) Ubicar el objetivo de menor aumento en el eje óptico.
( ) Con el tornillo macrométrico acercar la platina al objetivo, hasta lograr enfocar la
preparación.
4. Con el microscopio estereoscópico observe un insecto u otro material provisto por la
Cátedra. Grafique y rotule lo observado.
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c) Según la función que cumplen las células en cada tipo de tejido, justifique la forma de las
células y las estructuras que pudo observar.
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11. Las células eucariotas se distinguen por la presencia de compartimientos en el citoplasma
denominados organelos u organelas.
a) Elabore una definición de organelo teniendo en cuenta el criterio de la Cátedra.
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12. Realiza esquemas de las variantes celulares (célula animal, vegetal y fungal) rotulando
todas las organelas que poseen:
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Membrana
Celular
Citoplasma
Dominio Bacteria Archaea Eukaria
Reino Protista Fungi Plantae Animalia
Ribosomas (Pequeños) (Más grandes)
Retículo
Endoplásmico
Mitocondrias
Presentes en
Plástidos
algas
Complejos de
Golgi
Estructuras
similares
Habitualmente Habitualmente Habitualmente
Lisosomas (compartimientos
presentes presentes presentes
lisosómicos
presentes)
Frecuentemente Presentes en Habitualmente Habitualmente
Peroxisomas
presentes alguna forma presentes presentes
Habitualmente una
única vacuola Pequeñas o
Vacuolas
grande en la célula ausentes
madura
Habitualmente
Centríolos Presentes sólo en
presentes
plantas con flor
El ojo humano tiene un poder de resolución (la menor distancia entre dos puntos para que
éstos puedan verse separados) de 100 μ ó 0,1mm. El microscopio -del griego micro, pequeño, y
skopein, observar- es un instrumento óptico que aumenta el tamaño de los objetos que no
pueden ser estudiados a simple vista. Es una de las herramientas básicas en el estudio de la
Biología.
Uno de los primeros constructores de microscopios fue el inglés
Robert Hooke (físico, meteorólogo, biólogo, ingeniero y arquitecto).
Contemporáneo de Hooke fue el holandés Anton Van Leeuwenhoek
(1632 - 1723), considerado el padre de la Microscopía, quien
construyó más de doscientos microscopios, con los que alcanzó hasta
los 275 aumentos. A partir de entonces surgieron nuevos modelos de
microscopios, que en lo sucesivo permitieron la puesta a punto de los Microscopio empleado
actuales microscopios compuestos de investigación. por R. Hooke
Dos principios están involucrados en el uso del microscopio: magnificación (la capacidad de
aumentar el tamaño de una imagen), y resolución (la capacidad de producir una imagen nítida
o bien definida de puntos situados muy cerca uno del otro en el objeto).
Existen distintos tipos de microscopios, que nos permiten realizar diversos tipos de
observaciones, de acuerdo a nuestras necesidades. El microscopio óptico compuesto (MOC) es
el más empleado y utiliza como fuente de iluminación la luz visible. Consiste básicamente en
un tubo con lentes en ambos extremos, o una combinación de lentes. Una de ellas – el
objetivo- se posiciona cerca del objeto y proyecta la imagen hacia otra lente- el ocular,- a la
que acercamos los ojos para observar una imagen ampliada del objeto, logrando aumentos o
magnificaciones de hasta 1.500 veces.
El aumento de la imagen definitiva resulta del producto entre el aumento del objetivo por el
aumento del ocular. En consecuencia, los mayores aumentos que pueden conseguirse con el
microscopio óptico son de 1.000 a 1.500 X. Esto significa que una estructura que mide 1 μ
puede observarse como si tuviera 1 o 1,5 mm.
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Como la posición de la imagen depende de la ubicación del objeto, para que sea visible, debe
procederse a enfocar. Esto consiste en desplazar el tubo del microscopio acercándolo o
alejándolo del objeto a observar hasta que la imagen aparezca bien nítida.
Las observaciones biológicas corrientes se efectúan por transmitancia de la luz a través de la
preparación, razón por la cual la muestra debe ser lo suficientemente delgada para dejar pasar
la luz. La muestra es colocada sobre un vidrio que es el portaobjeto, que puede estar cubierto
por otro vidrio muy delgado llamado cubreobjeto. Finalmente se ubica al portaobjeto sobre la
platina.
Una vez que el campo de observación se ha iluminado bien, se desplaza el tubo que sostiene el
sistema óptico hasta ver una imagen nítida del preparado, usando sucesivamente los tornillos
macro y micrométrico. Siempre se procede desde el menor aumento posible del instrumento
hasta su mayor aumento. Un sistema de revolver que porta los objetivos facilita su reemplazo
en las siguientes observaciones.
PREPARACIÓN DEL MATERIAL PARA SU OBSERVACIÓN
Existen distintas técnicas de preparación del material para su observación con microscopio
óptico. Los portas y cubreobjetos deben estar limpios, preferentemente enjuagados con
alcohol y secos. La preparación del material se debe realizar sobre una superficie limpia y
plana. Si se realizan cortes, estos deben ser sumamente delgados como para dejar pasar la luz
a través del material.
Se puede realizar un “montaje húmedo” o transitorio colocando una gota de agua en el centro
del portaobjeto y sobre ella, el material a observar; luego el cubreobjeto. Además existen dos
técnicas especiales para realizar el montaje del material: squash o aplastado, y frotis o
extendido.
Squash: Consiste en la disgregación de la muestra mediante el aplastamiento del material
entre porta y cubreobjeto. Se procede de la siguiente manera:
1- Se disgrega el material con la ayuda de una pinza o
Papel de Filtro Cubreobjeto
agujas de disección. Se puede colorear el tiempo
necesario.
2- Se cubre con un cubreobjeto.
3- Sobre una superficie plana se coloca el preparado y
sobre el cubre un papel secante o papel de filtro y se
aplasta con el dedo pulgar sin deslizar ni rotar el Muestra Portaobjeto
cubreobjeto. Se debe operar con precaución pero con
firmeza para evitar la rotura del material.
1- Se coloca una gota del material sobre un extremo del portaobjeto limpio y seco.
2- Se apoya sobre la gota un borde de otro portaobjeto formando un ángulo agudo.
3- Cuando la gota se extiende por capilaridad a todo lo ancho del portaobjeto, se desliza hacia
el otro extremo con movimiento suave y uniforme.
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5- Al terminar de utilizar el microscopio, a veces la parte superior del tubo queda mojada por la
humedad de la respiración, en ese caso secar con otro trapo limpio.
6- Si utiliza aceite de cedro, retírelo del objetivo con un paño humedecido en alcohol.
Iluminación
1- Encender la lámpara mediante la perilla reguladora. Controlar la iluminación, hasta que la
imagen de la lámpara se observe clara y centrada a través del ocular. El campo de observación
debe estar uniformemente iluminado, caso contrario corregir.
2- El diafragma debe estar abierto unos dos tercios aproximadamente.
3- El condensador debe estar en el punto superior.
4- Revisar si no hay intercalado un filtro de color.
Enfoque
1- Una vez iluminado el campo se coloca la preparación, previa selección del objetivo de
menor aumento.
2- Bajar la platina por medio del tornillo macrométrico, mirando lateralmente.
3- Levantar suavemente la platina con el mismo tornillo, esta vez observando por el ocular,
hasta ver el preparado.
4- Una vez visualizado el objeto, corregir la nitidez con el tornillo macrométrico primero y
luego con el micrométrico.
5- Pasar sucesivamente a mayores aumentos siguiendo las instrucciones precedentes.
La lupa binocular consta realmente de dos microscopios completos, cada uno con su objetivo y
ocular, en los que al no coincidir sus ejes ópticos, las imágenes formadas en los oculares son
distintas (lo mismo que ocurre en la visión ocular), por lo que vemos una imagen en tres
dimensiones. Es un instrumento de baja magnificación. La imagen que se obtiene es virtual,
directa y mayor que el objeto.
Moviendo los tubos oculares se busca la distancia interpupilar adecuada para cada
observador, de manera de obtener una imagen en tres dimensiones.
Enfocar primeramente con el ocular fijo y luego ajustar el foco de la imagen
tridimensional con el ocular de foco ajustable.
Debe colocarse en la platina una placa de contraste, de un color tal que realce la
observación.
El tornillo de sujeción debe estar suficientemente apretado para evitar la caída del
brazo de la lupa.
EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
El estudio de la organización interna de estructuras pequeñas (como las de las células) se halla
restringido por el limitado poder de resolución del microscopio óptico, actualmente los
biólogos recurren a otros tipos de microscopio para estudiarlas.
El microscopio electrónico (ME) es una herramienta mucho más poderosa y tiene una
capacidad más alta de magnificación alcanzando aumentos de 250.000 veces o más. Su poder
de resolución permite estudiar la ultraestructura biológica.
El ME utiliza la propiedad que tienen los haces de electrones de ser desviados por un campo
electrostático o electromagnético, de la misma forma que un rayo de luz es refractado al
atravesar una lente.
Existen dos tipos básicos de microscopios electrónicos: microscopio electrónico de barrido
MEB y el microscopio electrónico de transmisión MET.
El MEB es útil para estudiar detalladamente la superficie de las muestras, el haz de electrones
barre la superficie del objeto previamente recubierto con una delgada película de oro y la
imagen obtenida se proyecta en una pantalla, el resultado es una imagen que aparece como
tridimensional.
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El MET emite un haz de electrones que atraviesa una sección muy delgada del espécimen
teñido previamente con átomos de metales pesados, la imagen se crea mediante un patrón de
electrones trasmitidos que puede observarse en una pantalla o película fotográfica.
Con los microscopios electrónicos se pueden observar estructuras que escapan a la capacidad
de resolución del microscopio óptico, sin embargo las técnicas utilizadas para la preparación
del material a observar impiden la observación de estructuras vivas.
Requerimientos en microscopia electrónica
En el microscopio electrónico los electrones son absorbidos y dispersados por el aire, por lo
que el interior del mismo debe tener un vacío muy elevado, y como los materiales biológicos
también absorben electrones, se deben cortar secciones muy delgadas, de menos de 100 nm,
utilizando micrótomos con cuchillas de vidrio, zafiro o diamante. Las muestras se fijan con
glutaraldehido o tetróxido de osmio. Posteriormente se deshidratan y se las incluye con
resinas (parafina) que sostienen el tejido mientras se cortan las secciones de la muestra. Se
deben teñir con metales pesados como plomo, oro y osmio para lograr contrastes adecuados.
Debido a todo el proceso al cual se debe someter el material biológico, solo se observa
material muerto.
Se debe tener en cuenta que las microfotografías electrónicas bidimensionales de células son
visiones estáticas de sistemas dinámicos tridimensionales. El interior de la célula es un sistema
muy activo. Las estructuras se mueven y cambian de forma, y constantemente se están
construyendo y degradando moléculas.
Cue rp o hu m ano
1m
Lo ng itu d de alg un as
cél ula s n er vio sas y
m us cula re s
Oj o hum ano
0. 1 m
Huev o d e g al lina
1 cm
Hue vo d e sap o
1 mm
Microscopio óptico
Unid ad es 100 µm
1 c en tím et ro (cm ) = 1 0– 2 m et ro s (m )
Ma yo ría de la s
1 m ilí me tr o ( mm ) = 1 0–3 m
cé lula s d e p lan ta s
1 m ic ró me tro ( µm ) = 10 –3 mm = 10 –6 m
y anim a les
1 n an om et ro (n m ) = 10– 3 µm = 1 0–9 m
10 µm
Núcle os
Ba cte ria s
Microscopio el ectrónico
1 µm mi toc on drias
Ribosomas
10 nm
Prote inas
Lipidos
1 nm
Peq u eña s m o lécu las
Atom o s
0. 1 nm
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BIBLIOGRAFÍA:
De Robertis, E.M.F.; Hib, J y R. Panzio. 1997. BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR de Eduardo
D. P. De Robertis. 12° edición. Ed. El Ateneo.
Campbell. N. A. y J.B. Reece. 2007. Biología. Séptima edición. Ed. Médica Panamericana.
Smith, C. A. y E. J. Wood. 1998. BIOLOGIA CELULAR. Ed. Addison Wesley Longman. México.