Tecnología del Medio Ambiente

Prácticas de Laboratorio
Curso 2019 - 2020

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Prácticas de laboratorio

Objetivo:
Determinación de la concentración de nitritos (NO2-) en aguas residuales.

Fundamento teórico:
El ión nitrito es un estado de oxidación intermedio del nitrógeno, tanto en la oxidación de
amoníaco a ión nitrato como en la reducción de ión nitrato. Esta oxidación y reducción puede
ocurrir en las plantas de tratamiento de aguas residuales.
La concentración de nitritos en un agua residual no se determina directamente, sino a través
de la medida de la concentración de una sustancia coloreada que se desarrolla a partir del nitrito
presente en la disolución. El procedimiento se basa en la reacción del ión nitrito a valores de pH
entorno a 2 con la sulfanilamida que permite obtener una sal de diazonio. Posteriormente se
añade diclorhidrato de N-(1-naftil)-etilendiamina que reacciona con la sal produciendo un color
violeta. La cantidad del compuesto azoico formada depende de la cantidad de nitrito añadido.

Para caracterizar la composición de NO2-de las muestras y cuantificarla se utiliza la ley de

Lambert-Beer que relaciona linealmente, en escala logarítmica, la cantidad de luz absorbida por la
disolución con la composición de la sustancia que absorbe. Donde se tiene:

I1/I0 = 10-bC = 10-A Ec. 1

Siendo:

I1, I0, las intensidades de la radiación entrante y saliente

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A, la absorbancia
b, la longitud atravesada por la luz, camino óptico
C, la concentración del absorbente en la disolución
, el coeficiente de absorción, absortividad molar

Figura 1. Descripción de los parámetros que intervienen en la ley de Lambert-Beer.

Se definen además la transmitancia de una disolución como la relación de intensidades I/I0,

con un valor de 0 cuando la intensidad transmitida es cero, y 100 cuando se transmite toda la luz
incidente. La transmitancia se expresa en forma de porcentaje. Por otro lado, la absorbancia es
cero cuando se transmite toda la luz incidente, la muestra no absorbe luz, y es uno cuando la
muestra absorbe toda la luz incidente.
Para poder aplicar correctamente esta ley se debe cumplir que las disoluciones sean
homogéneas y la radiación incidente monocromática. Para tener mayor sensibilidad en las
medidas, se selecciona la longitud de onda para la cual la absorbancia de la disolución es máxima.
En este caso corresponde a una longitud de onda de 540 nm.
También se puede expresar como:

Absorbancia= (, Coeficiente de absorción)*(b, distancia)*(C, concentración) Ec. 2

La absorbancia es directamente proporcional a la concentración, lo que permite conocer la

concentración de la muestra. Para obtener la relación se preparan una serie de disoluciones de
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concentración conocida en nitritos (disoluciones patrón) y se mide la absorbancia. A continuación

se determina la relación entre la absorbancia y concentración (y = ax), que permite determinar la
concentración de nitritos en una disolución para una absorbancia medida.

Materiales y reactivos:
Sulfanilamida
Dicloruro de N-(1-naftil)-etilendiamina
Disolución de 0,5 ppm de NO2-

1 matraz aforado de 50 mL para cada una de las muestras de aguas residuales.

5 matraces aforados de 50 mL para las disoluciones de patrones. Tapones de matraces aforados.
1 embudo, 1 büchner y 1 kitasato
Pipetas de varios volúmenes (25, 10 y 1 mL) y pipeteadores.
Espectrofotómetro visible SELECTA, celdas.

Precauciones:
La presencia de partículas en suspensión en las aguas puede originar la dispersión de la luz
incidente. Este fenómeno se traduce en una mayor absorbancia aparente de las disoluciones y,
por lo tanto, en un error de las medidas. La disolución que presenta partículas en suspensión es la
de agua residual, por lo que es necesario filtrarla adecuadamente antes de llevar a cabo los
tratamientos específicos.
Todo el material de vidrio (matraces aforados, pipetas, etc) debe estar perfectamente
limpio. Cualquier tipo de contaminación, sobre todo la debida a prácticas anteriores, puede hacer
que las disoluciones se coloreen sin haber añadido los reactivos correspondientes.
El comportamiento lineal es válido en el rango de concentraciones del patrón medido. Es
decir, la concentración de nitritos se puede determinar por interpolación. Fuera del rango de
concentraciones medido puede que el comportamiento no siga siendo lineal.

Procedimiento experimental:
Muestra de agua residual
Se pipetean 10 mL del agua residual filtrada y se introducen en un matraz aforado. El
tratamiento a seguir será como el de las disoluciones patrón (véase Tabla 1 anexa).

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Muestras patrón
Estas muestras son necesarias para realizar el calibrado y poder obtener una relación entre
la absorbancia de las disoluciones y la concentración de nitritos en el agua.
Se toman 5 matraces y se preparan las siguientes disoluciones (véase Tabla 1 anexa):

Se añade 1 mL de sulfanilamida a todas las muestras (patrón y agua residual). Después de

tres minutos se añade 1 mL de N-naftil, se enrasa hasta 50 cm3 y se agita vigorosamente.

Medidas
Transcurridos 10 min, se mide la absorbancia a una longitud de onda de 540 nm, primero las
muestras patrón y a continuación las muestras del agua residual. A partir de las absorbancias
medidas y las concentraciones finales de los patrones se construye la curva de calibración en
Excel. Se determina el contenido en nitritos de las muestras del agua residual.

Referencias bibliográficas:
1. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 20th Edition, L.S. Clesceri,
A.E. Greenberg, A.D. Eaton (editores), American Public Health Association, 1998, método
4500-NO2-.
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Tabla 1. Procedimiento de la medida de NO2- en un A.R., volúmenes y reactivos a emplear.

Espectrofotómetro
Preparación de
Reactivos de color de absorbancia Concentraciones finales
disoluciones
UV-vis
V (mL) V (mL) Enrasar
V (mL) V (mL)
patrón 0,5 agua a 50 mL absorbancia ppm
sulfanilamida N-naftil
ppm destilada

0 25 1 1
2 25 1 1
Patrones
4 25 1 1
6 25 1 1
V (mL) V (mL)
V (mL) V (mL)
agua agua absorbancia ppm
sulfanilamida N-naftil
residual destilada

Muestra 10 25 1 1

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Objetivo:
Determinación de la concentración de amoniaco (NH3) en aguas residuales.

Fundamento teórico:
El procedimiento consiste en determinar la cantidad de amoníaco presente en una muestra
de agua residual a través del método Kjendahl. El procedimiento utilizado en esta práctica consta
de dos procesos: destilación y valoración. El tratamiento de la muestra se lleva a cabo añadiendo
una disolución de NaOH concentrado. Por una parte, se trata de atacar la M.O. presente en el A.R.
y por otro, que todo el nitrógeno amoniacal presente en la muestra se encuentre como amoniaco
(NH3), desplazando el siguiente equilibrio hacia la formación de NH3:

NH4+ + OH-  NH3 + H2O

La concentración de amoniaco en el agua se puede reducir si se hace pasar una corriente de

vapor de agua. El amoniaco desplazado se puede retener si la corriente de vapor de agua se hace
pasar a través de una disolución de un ácido, donde quedará retenido por reacción ácido-base.

NH3 + H3BO3  NH4+ + H2BO3-

La cantidad de ión borato puede determinarse mediante reacción con un ácido, como es el
caso de ácido sulfúrico. Para determinar el punto final de la valoración se emplea el indicador de
Tashiro que cambia de color en función del valor de pH de la disolución. Cuando todo el ión borato
ha sido valorado en la disolución, hay un exceso de ácido que es lo que hace que cambie el color
de la disolución.

H+ + H2BO3-  H3BO3

Materiales y reactivos:
Disolución de hidróxido sódico (NaOH) 8 mol/L (se encuentra en el equipo de destilación).
Disolución de ácido bórico (H3BO3) al 4%
Disolución de ácido sulfúrico (H2SO4)
Indicador de Tashiro (pH = 4,4 – 5,8)
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Un vaso de precipitados de 600 mL

Un tubo de destilación Tekator
Una bureta de 25 mL
Un agitador magnético

Precauciones:
Las cantidades de amoníaco presente en las aguas residuales suele ser relativamente
pequeño por lo que el volumen de ácido sulfúrico que se utiliza en la valoración es muy pequeño.

Procedimiento experimental:
Muestra de agua residual
Se pipetean 25 mL de agua residual (no se necesita que sea filtrada) en un tubo de
destilación Tekator.
En un vaso de precipitados se vierten 20 mL de disolución de ácido bórico y se añaden 5-6
gotas de indicador de Tashiro.
Se lleva el tubo Tekator y el vaso al equipo de destilación y se añade agua destilada al vaso
que contiene el ácido hasta un volumen que cubra la parte inferior de tubo de entrada de vapor.
Se añade una dosis de disolución de NaOH a la muestra de agua residual, se pone en marcha el
equipo y se deja pasar vapor de agua durante 10 minutos.

En la mesa del laboratorio y mediante una bureta, se realiza la valoración del contenido del
vaso con la disolución de H2SO4 0,025 N, hasta viraje de color verde a morado.

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Figura 2. Dispositivo experimental para la destilación de amoniaco.

Cálculos:
La cantidad de nitrógeno amoniacal puede calcularse como:

ppm N-NH4 = [( Vg 350) / Vmuestra Ec. 3

Vg = mL de disolución de ácido sulfúrico gastado en la valoración

Vmuestra = mL de muestra (agua residual)

Referencias bibliográficas:
2. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 20th Edition, L.S. Clesceri,
A.E. Greenberg, A.D. Eaton (editores), American Public Health Association, 1998, método
4500-NH3.
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Tabla 2. Procedimiento de la medida de NH3 en un A.R., volúmenes y reactivos a emplear.

Tubo de
destilación Vaso de precipitados
Tekator
gotas de
Vg (mL) V (mL) Ácido sulfúrico 0,025 N
indicador de ppm N-NH4
agua residual Ácido bórico
Tashiro Vinicial (mL) Vfinal (mL) Vi – Vf (mL)

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Objetivo:
Determinación de la Demanda Química de Oxígeno (DQO) en aguas residuales.

Fundamento teórico:
Uno de los tratamientos más importantes para el agua residual urbana o industrial es la
regulación de la cantidad de materia orgánica (M.O.) hasta niveles aceptables para su vertido. Para
ello, es necesario evaluar la cantidad de M.O. a través de la medida de alguno de los parámetros
que caracterizan la presencia de este tipo de contaminantes en las aguas. Es el caso de la
Demanda Química de Oxígeno (DQO).
La DQO es un parámetro que mide la M.O. por medios químicos que hay disuelta o en
suspensión en una muestra líquida. Se utiliza para medir el grado de contaminación y se expresa
en miligramos de oxígeno diatómico por litro (mg O2/L).
La cantidad de materia orgánica total contenida en una muestra acuosa puede determinarse
mediante oxidación con dicromato potásico en medio ácido.

CHONP + Cr2O72- + H+  CO2 + H2O + NH3 + PO43-+ Cr3+

En esta reacción, el ión plata actúa de catalizador para favorecer la oxidación de la M.O. más
resistente.
La cantidad inicial de dicromato se añade en exceso, de forma que la cantidad que no ha
reaccionado con la materia oxidable puede determinarse mediante reacción con Fe2+. El Fe2+ se
proporciona a través de la sal de Mohr que es un sulfato amónico de Fe2+.

6 Fe2+ + Cr2O72- + 14 H+ 6 Fe3+ + 2 Cr3+ + 7 H2O

El final de esta reacción se determina por la aparición de un color rojo-teja, producto de la

reacción del indicador de ferroína con el Fe2+ en exceso, una vez que todo el dicromato se ha
reducido a cromo.
Si se determina la cantidad de dicromato que no ha reaccionado con la materia oxidable
mediante la reacción con la sal de Mohr y se conoce la cantidad inicialmente añadida, se puede
determinar la cantidad de materia oxidable presente en el agua. El valor de la DQO en mg O2/L
puede calcularse como:
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DQO = [( Vb – Vg ) · M · 8000] / Vmuestra Ec. 4

Siendo:
Vb = mL de la sal de Mohr empleados en la valoración del blanco
Vg = mL de la sal de Mohr empleados en la valoración del agua residual
Vmuestra = mL de muestra (agua residual, blanco)
M = concentración de la sal de Mohr

Materiales y reactivos:
Ácido sulfúrico concentrado – sulfato de plata (en la campana).
Piedra pómez calcinada (en la campana).
Disolución de sulfato ferroso amónico (sal de Mohr).
Disolución de dicromato potásico (K2Cr2O7).
Indicador de ferroína.

Refrigerantes esmerilados (en la campana).

Placas calefactoras (en la campana).
Erlenmeyers esmerilados.
Una bureta de 25 mL
Un agitador magnético

Precauciones:
En esta práctica se emplean reactivos químicos fuertemente oxidantes y agresivos, por lo
que en todo momento es necesario utilizar guantes y gafas de protección. Si la disolución de
dicromato se vierte sobre la mesa de trabajo, hay que limpiarla rápidamente. Los tratamientos con
ácido sulfúrico concentrado y en placa calefactora hay que realizarlos en campana extractora bajo
control contínuo de al menos uno de los estudiantes.
Es recomendable valorar en primer lugar la muestra en blanco (agua desionizada) para tener
una referencia de color y de volumen de sal de Mohr consumido. La muestra en blanco no
contiene sustancias oxidables. Por tanto, la cantidad de dicromato a valorar debe ser superior que
en el resto de muestras, y lo mismo con la cantidad de sal de Mohr utilizada en la valoración.

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Aunque este método pretende medir principalmente la concentración de materia orgánica,

sufre interferencias por la presencia de sustancias inorgánicas susceptibles de ser oxidadas
(sulfuros, sulfitos, yoduros, etc), que también se reflejan en la medida por lo que el resultado final
no es exacto.

Procedimiento experimental:
Es necesario efectuar una muestra en blanco, empleando 5 mL de agua desionizada en lugar
de 5 mL de agua residual. Se lleva a cabo el mismo procedimiento que el seguido para la muestra
de agua residual (véase a continuación). Finalmente, se anota el volumen de sal de Mohr utilizado
en la valoración (Vb).

Muestra de agua residual

Se pipetean 5 mL de agua residual (no se necesita que sea filtrada) y 10 mL de disolución de
dicromato potásico a un matraz Erlenmeyer esmerilado.
Se transfiere la mezcla a la campana y se añaden aproximadamente 0,5 g de piedra pómez
(no es necesario pesar) y 15 mL de la disolución de ácido sulfúrico-sulfato de plata. Se coloca el
matraz sobre la placa, se conecta el refrigerante y se calienta hasta que se produzca la ebullición.
Una vez iniciada ésta, se mantiene durante 10 minutos. Se quita el matraz con cuidado y se deja
reposar en la campana durante cierto tiempo hasta que se enfrie.
Pasado este tiempo el Erlenmeyer se transfiere a un baño con agua fría y se enfría durante
5-10 min. Se añade agua destilada hasta completar un volumen aproximadamente 150 mL,
agitando y refrigerando nuevamente.
Una vez alcanzada la temperatura ambiente, se introduce un agitador y 4-5 gotas de
indicador de ferroína. La muestra se valora con la sal de Mohr hasta que vire de tono azul-cielo a
rojo-teja. Se anota el volumen de sal de Mohr utilizado en la valoración (Vg).

Referencias bibliográficas:
3. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 20th Edition, L.S. Clesceri,
A.E. Greenberg, A.D. Eaton (editores), American Public Health Association, 1998, método
5220 Chemical Oxygen Demand (COD).