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Arms

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ARMS

Es un método simple para detectar cualquier mutación que involucre cambios de


una sola base o pequeñas deleciones. ARMS se basa en el uso de cebadores de
PCR específicos de secuencia que permiten la amplificación del ADN de prueba
solo cuando el alelo objetivo está contenido dentro de la muestra.
Dicho de otra forma, una PCR ARMS estándar consiste en dos reacciones
complementarias (dos tubos) y utiliza 3 cebadores. Un cebador es constante y
complementarios a la plantilla en ambas reacciones, los otros cebadores difieren
en sus extremos 3' y son específicos para la secuencia de ADN de tipo normal o la
secuencia mutada en una base dada. Los productos de PCR se separan por
electroforesis a través de un gel de agarosa que contiene bromuro de etidio. Si la
muestra es homocigótica para el alelo normal u homocigótico para el alelo
mutante, sólo se producirá sólo en uno de los tubos, si la muestra es
heterocigótica se verá en ambos tubos.6
ARMS es un método basado en la Reacción en Cadena de la Polimerasa, que
utiliza cebadores específicos para el alelo normal o el alelo mutante.

TIPOS

ARMS-PCR múltiple
En la práctica, los ensayos multiplex pueden ser desarrollados para la detección
de cuatro a seis mutaciones diferentes un solo tubo de PCR.
T-ARMS-PCR
El sistema de mutación refractario a la amplificación por PCR con tetra-cebadores
(T-ARMS-PCR) es un método rápido y económico para el análisis de
polimorfismos de un nucleótido simple (SNP)
RT-ARMS-q-PCR
Amplificación refractaria del sistema de mutación refractaria en tiempo real
ARMS-PCR con hexa-cebadores
Utiliza 6 cebadores y proporciona información directa sobre la estructura de
haplotipos.

METODOLGIA

La preparación de ADN, ADN genómico aislado a partir de células de sangre


periférica; amplificación de oligonucleótidos, la amplificación y la secuenciación
refractarios; los cebadores comunes cuyas secuencias fueron D
(CCCACCTTCCCCT CTCTCCAGGCAAATGGG), d
(GGGCCTCAGTCCCAACATGGCTAAGAGGTG), d (TGTCCA
CGTGAGCCTTGCTCGAGGCCTGGG) y D
(GAGACTTGGTATTTTGTTCAATCATTAAG); así como los cebadores para el
control interno, un fragmento de 510 pares de bases de un exón del gen de la
apolipoproteína B humana se utilizó sin purificación adicional.
APLICACIONES
• Genotipificación
Las PCR-ARMS se pueden utilizar para determinar el genotipo de las
muestras para la mutación más común asociada con la hemocromatosis
hereditaria. Las PCR-ARMS se pueden utilizar para determinar los
genotipos para las mutaciones individuales o SNP; es decir, distinguir
heterocigotos de los homocigotos.
• Haplotipado
PCR-ARMS-PCR pueden ser utilizados para establecer los haplotipos de
los individuos en la ausencia de muestras de los familiares. Esto es
particularmente útil para determinar el haplotipo de SNP que se encuentran
dentro de las distancias que son susceptibles de amplificación por PCR
• Biopsias clínicas
Los ensayos ARMS maximizan el número de muestras que podrían
analizarse cuando tanto la calidad y cantidad de ADN fue baja, y mejoraron
tanto la sensibilidad y la velocidad de análisis
• Análisis de mutaciones puntuales
Una aplicación común de PCR-ARMS es la detección de mutaciones
puntuales individuales en el ADN. Se diseñan cebadores que
preferentemente amplificará el alelo mutante, mientras que ser refractario a
la amplificación del alelo normal. Incluido en la mezcla de reacción es un
segundo conjunto de cebadores que son específicos para un locus
heterólogo que sirve como control positivo para la amplificación PCR.
Haplotipo: es una combinación de alelos de diferentes locus de un cromosoma que son
transmitidos juntos. Un haplotipo puede ser un locus, varios loci, o un cromosoma entero
dependiendo del número de eventos de recombinación que han ocurrido entre un
conjunto dado de loci.

Polimorfismos de nucleótido simple (SNP)

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