P3 Técnica Del Número Más Probable

TECNOLÓGICO DE ESTUDIOS
SUPERIORES DE ECATEPEC
Análisis de Inocuidad de Alimentos
Practica 3:
Técnica del Número más Probable
Resumen
 Métodos para el conteo de microorganismos

Estos métodos se basan en poner en evidencia la presencia de los microorganismos vivos.
Requieren al menos 24 horas para el cultivo y la interpretación de resultados.
Se emplean medios de cultivo generales, enriquecidos selectivos y diferenciales
dependiendo de los microorganismos a cuantificar.
 Cuenta en placa
Se determina el número de microorganismos en una muestra en relación a las colonias que
forman, las UFC (Unidades Formadoras de Colonias). Se emplean soluciones diluidas o
diluciones de una muestra concentrada para que cada colonia formada provenga de un solo
microorganismo, aunque algunas agrupaciones no pueden ser separadas por las diluciones.
Se utilizan principalmente para la cuantificación de bacterias, levaduras y hongos
filamentosos. Se reporta como: UFC ****/unidad de volumen o peso
 Número Más Probable (NMP)
También llamada técnica de dilución en tubo, proporciona una estimación estadística de la
densidad microbiana presente con base a que la probabilidad de obtener tubos con
crecimiento positivo disminuye conforme es menor el volumen de muestra inoculado.
 Técnica de la Gota
Involucra la preparación de diluciones seriadas de una suspensión bacteriana. Las placas
son divididas en sectores separados. Se inocula cada sector una gota empleando una Pipeta
Pasteur calibrada o bien micropipetas inoculando 0.02mL. Las placas se incuban de 18 a 24
horas a la temperatura adecuada (37ºC). Se toman en cuenta los sectores donde hay menos
de 20 UFC. El número de bacterias viables se obtiene calculando la media de cada dilución
en las repeticiones realizadas. (Protocolo de prácticas: 1)
Objetivo general:
Determinar la presencia de Unidades formadoras de colonias en el agar TSB en un cultivo

de Listeria monocytogenos mediante la técnica número más probable.
Objetivos específicos:
1. Identificar la presencia UFC que encuentran presentes en las diferentes diluciones.

2. Conocer el fundamento de la Técnica del número más probable.
3. Cuantificar y analizar los resultados de la Listeria monocytogenos obtenido en el
agar mediante el valor en tablas.
Metodología:
Se vacio el medio de A 6 viales se les

Se preparo el medio de
cultivo en tubos de agrego 900 μL de agua
cultivo TSA
ensayo con tapa rosca esterilizada a cada uno
Se añadio al primer
Se tomarón 100 μL del vial, y se hizo las
Se tomo 100 μL de la
primer vial y se siguientes diluciones
muestra de Listeria
sembro en 5 tubos de tomando 100 μL de
monocytogenes
ensayo con tapa rosca. cada vial hasta el sexto
vial.
Se aplico lo mismo Se marcarón los tubos

para cada vial en cada de ensayo Se colorarón en una
sección de tubos de identificados por el incubadora a 37°C
ensayo vial usado.
Resultados y discusiones:
Por la Técnica del Número Más Probable (NMP) de la siembra de Listeria monocytogenes,
se realizaron las diluciones:
1 1 1 1 1 1
, , , , y
5 x 10 5 x 10 5 x 10 5 x 10 5 x 10 5 x 106
1 2 3 4 5
Después de incubar los tubos, observamos que en todos hubo crecimiento y por lo tanto el
resultado fue positivo.
A continuación, en la Tabla 1 se muestran los resultados obtenidos en el sembrado por el
método de dispersión en caja de la bacteria Listeria monocytogenes en cada dilución.
Diluciones 1 2 3 4 5 6 Dilución
Núm. De tubos positivo a listeria 5 5 5 5 5 5 1
500
Por lo tanto, en valor de tablas
población estimada.
Resultados Población
Dilución Muestra UFC/ml logUFC/ml
Positivo Negativo estimada
1 X
2 X
1 3 X
4 X
5 X
1 X
2 X
3 X
2
4 X
5 X
1 X
2 X
3 3 X
4 X
5 X
1 X
2 X
4 3 X
4 X 1312535 656267500 8.8170
5 X
1 X
2 X
5 3 X
4 X
5 X
1 X
6 2 X
3 X
4 X
5 X
(Grafica 1 representativa del Equipo 2)
En la siguiente Ilustración se muestran los resultados grupales, donde observamos que los
resultados de todos los similares, puesto que todos obtuvieron crecimiento en la mayoría de
los tubos sembrado.
(Grafica 2 comparativa con los Equipos)

Anova
(Ho): No existe diferencia estadísticamente significativa entre los promedios de las

técnicas, por lo tanto, la técnica extensión en placa, por gota y número más probable
proporciona la información verídica en la cuenta de microorganismos
(Hi): Si existe diferencia estadísticamente significativa entre los promedios de las técnicas
por lo tanto las tres técnicas difieren significativamente en el número de microorganismos
Nivel de confianza de 95%
Nivel de significancia de 5%
Valor crítico: 3.4028
0.95
0.05
La grafica representa los diferentes
resultados que se obtuvieron a
travez de diferentes uso de tecnicas para la determinacion de UFC de listeria
monocytogenes.
En las siguientes imágenes se muestra el resultado positivo que se obtuvo.
Discusión de resultados
Este método es una manera de obtener datos cuantitativos en

concentraciones de elementos discretos a partir de datos de incidencia positiva/negativa, si
bien es cierto esta práctica nos resultó de gran ayuda y sirve mucho, es más práctica y no es
tediosa. Respecto a nuestras muestras todas ellas nos salieron positivas y no presentamos
ningún error.
Hipótesis nula: Como se observa en las tablas (numero tal de tabla) el nivel de significancia
de los promedios de las tres técnicas no es de gran consideración entre la técnica de
extinción en placa y la técnica de gota y la técnica d enumero más probable.
Hipótesis Relativa. Existe gran significancia entre l las tres técnicas realizadas por lo tanto
los números no son confiables
Nivel de confianza: 97%
Nivel de significancia: 3%
Conclusión se rechaza la hipótesis relativa ya que si se encontró similitud entre los datos
Bibliografía
1-. PROTOCOLO DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA EXPERIMENTAL 2012

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE QUÍMICA
Departamento de Biología. Recuperado el 25/04/2019
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Análisis de Inocuidad de Alimentos

 Métodos para el conteo de microorganismos

Determinar la presencia de Unidades formadoras de colonias en el agar TSB en un cultivo

1. Identificar la presencia UFC que encuentran presentes en las diferentes diluciones.

Se vacio el medio de A 6 viales se les

Se aplico lo mismo Se marcarón los tubos

Por lo tanto, en valor de tablas

(Grafica 2 comparativa con los Equipos)

(Ho): No existe diferencia estadísticamente significativa entre los promedios de las

Nivel de confianza de 95%

Valor crítico: 3.4028

Este método es una manera de obtener datos cuantitativos en

1-. PROTOCOLO DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA EXPERIMENTAL 2012

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