Scribd Logo
Cargar

¡Te damos la bienvenida a Scribd!

  • 86 vistas

    ReportedeLaboratorio2 Quishpe Vaca

    Cargado por

    Jean Pierre Q N
    Este documento describe los métodos de extracción selectiva y cuantificación de linfocitos a través de la centrifugación en gradiente de densidad y el uso de un medio llamado Lymphoprep. Los autores lograron purificar 8,55x106 células totales por ml, de las cuales el 81% eran linfocitos viables. Esto demuestra que es posible aislar linfocitos viables a partir de sangre total mediante estas técnicas.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    ReportedeLaboratorio2 Quishpe Vaca

    Cargado por

    Jean Pierre Q N
    86 vistas1 página
    Este documento describe los métodos de extracción selectiva y cuantificación de linfocitos a través de la centrifugación en gradiente de densidad y el uso de un medio llamado Lymphoprep. Los autores lograron purificar 8,55x106 células totales por ml, de las cuales el 81% eran linfocitos viables. Esto demuestra que es posible aislar linfocitos viables a partir de sangre total mediante estas técnicas.

    Descripción original:

    purificacion y conteo de linfositos

    Derechos de autor

    © © All Rights Reserved

    Formatos disponibles

    PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    ¿Le pareció útil este documento?

    ¿Este contenido es inapropiado?

    Este documento describe los métodos de extracción selectiva y cuantificación de linfocitos a través de la centrifugación en gradiente de densidad y el uso de un medio llamado Lymphoprep. Los autores lograron purificar 8,55x106 células totales por ml, de las cuales el 81% eran linfocitos viables. Esto demuestra que es posible aislar linfocitos viables a partir de sangre total mediante estas técnicas.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    86 vistas1 página

    ReportedeLaboratorio2 Quishpe Vaca

    Cargado por

    Jean Pierre Q N
    Este documento describe los métodos de extracción selectiva y cuantificación de linfocitos a través de la centrifugación en gradiente de densidad y el uso de un medio llamado Lymphoprep. Los autores lograron purificar 8,55x106 células totales por ml, de las cuales el 81% eran linfocitos viables. Esto demuestra que es posible aislar linfocitos viables a partir de sangre total mediante estas técnicas.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    de 1

    Extracción selectiva y cuantificación de linfocitos

    J.Quishpe1,L. Vaca1
    1Departamento de Ciencias de la Vida y de la Agricultura, Laboratorios de Docencia, Universidad de las Fuerzas Armadas-ESPE, Sangolquí, Ecuador.

    [email protected], [email protected]

    Métodos de Criogenización / CPA: Agentes


    Introducción
    crioprotectores penetrantes: Dimetilsulfóxido
    La centrifugación de alta
    (DMSO), Etilenglicol (EG), Glicerol, Trehalosa.
    RPM tiene velocidades
    de hasta 30.000 rpm, 1) Congelación de 3-2 °C /min a -196 °C/min
    para amplio rango de lenta (equilibrio) tiempo = 2 horas) baja [CPA]
    separaciones, permite la 2) Vitrificación: congelación instantánea a
    separación de partículas Alta [CPA] -196°C tiempo: < 10 minutos
    muy pequeñas en un 3)Almacenamiento (a - 4 °C)
    tiempo práctico, tienen
    a bajo cero
    usualmente rotores a 4°C,
    denominadas centrífugas 4) Conservación en Liofilización
    en frío [1]. estado seco [3].
    Fig1.Cromatografía de Inmunoafinidad [4] .

    Metodología
    8) Usar trypan blue y
    1) Toma de muestra de sangre. conteo Neubauer.

    2) Dilución 1:1 Sangre entera Sobrenadante 7) Obtención del pellet


    y de PBS10X (3ml). (plasma) (Linfocitos).

    3) Adición del medio de PBMC e 6) Adición de buffer lisis de


    densidad (mantener dos fases). histopaque eritrocitos y centrifugación.

    Granulocitos, .
    4) (20min)Centrifugadora de eritrocitos RBC 5) Extracción de la
    enfriamiento a 4°C 1800rpm.
    suspensión de PBMC.

    Resultados
    81% Células
    viables
    29% Células no
    7
    viables
    6,8
    Log(células /mL)

    6,6
    6,4
    6,2
    6 Células totales
    5,8
    Células viables Células no viables
    𝟖, 𝟓𝟓𝒙𝟏𝟎𝟔 cell/ml
    Fig2. Pellet del linfocitos
    Fig3. Recuento celular en Fig4 .Razones obtenidas de células
    cámara de Neubauer viable s y no viables
    Discusión
    Monocitos in vitro con factor estimulante de colonias de granulocitos macrófagos GM-CSF y citocinas como interleucinas IL-4, se
    diferenciaron en células dendríticas DC, que expresaran antígenos tumorales (inmunoterapia del cáncer) [5] .

    8550 cell/µL
    1000 a 4800 cell/µL Recomendaciones
    *El rendimiento y viabilidad de las
    3000 a 9500 cell/µL
    separaciones de leucocitos de la sangre por
    Conclusiones buffer lisis de eritrocitos es mucho mayor
    que gradiente de densidad [2].
    Se logró purificar linfocitos tanto viables como no viables mediante la * El transporte de muestras debe ser con kit
    centrifugación en Lymphoprep el medio de gradiente de densidad para derrames (material absorbente, un
    cuantificando 8,55𝑥106 cell/ml totales de las cuales el 81% son viables por desinfectante, contenedor).
    medio de recuento en la cámara de Neubauer con trypan blue. * La toma de muestras animales debe ser
    menos doloroso y estresante, el estrés
    afectará el resultado del estudio [6].
    Referencias
    [1] Alshareef, N. (2012). KAU-Faculty of Science- Biochemistry department.http://www.kau.edu.sa/GetFile.aspx?=CENTRIFUGATION%20short.pdf
    [2] Dagur, P., & McCoy, P. (2015). Collection, Storage, and Preparation of Human Blood Cells. HHS Public Acces.
    [3] Jang, T., & Clhoel, S. (2017). Cryopreservation and its clinical applications. Integrative Medicine Research , 12-18.
    [4] Mohr, F., & Pezbilla, S. (2018). Cromatografía de inmunoafinidad eficiente de linfocitos directamente de sangre entera. Acientific Reports.
    [5] Neidhardt, E., & Berard , F. (2004). Dendritic cells induce differentiation of tumor-specific cytotoxic T lymphocytes. Breast Cancer Research.
    [6] Parasuram, S., & Raveendran, R. (2010). Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacothe, 87-93.

    También podría gustarte