Scribd Logo
Cargar

¡Te damos la bienvenida a Scribd!

  • 508 vistas

    Succinato DH y Citocromos

    Cargado por

    Gibran Meza Castrejon
    Este documento describe dos prácticas realizadas en un laboratorio de bioquímica para determinar la actividad de la succinato deshidrogenasa y el sistema de citocromos y citocromo oxidasa en mitocondrias de hígado de rata. Se midió la actividad de estas enzimas a través de la decoloración del azul de metileno y la oxidación de la N,N-p-dimetilfenildiamina en presencia y ausencia de inhibidores como el malonato de sodio y el cianuro de potasio.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    Succinato DH y Citocromos

    Cargado por

    Gibran Meza Castrejon
    508 vistas2 páginas
    Este documento describe dos prácticas realizadas en un laboratorio de bioquímica para determinar la actividad de la succinato deshidrogenasa y el sistema de citocromos y citocromo oxidasa en mitocondrias de hígado de rata. Se midió la actividad de estas enzimas a través de la decoloración del azul de metileno y la oxidación de la N,N-p-dimetilfenildiamina en presencia y ausencia de inhibidores como el malonato de sodio y el cianuro de potasio.

    Descripción original:

    Deshidrogenasa

    Derechos de autor

    © © All Rights Reserved

    Formatos disponibles

    PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    ¿Le pareció útil este documento?

    ¿Este contenido es inapropiado?

    Este documento describe dos prácticas realizadas en un laboratorio de bioquímica para determinar la actividad de la succinato deshidrogenasa y el sistema de citocromos y citocromo oxidasa en mitocondrias de hígado de rata. Se midió la actividad de estas enzimas a través de la decoloración del azul de metileno y la oxidación de la N,N-p-dimetilfenildiamina en presencia y ausencia de inhibidores como el malonato de sodio y el cianuro de potasio.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    508 vistas2 páginas

    Succinato DH y Citocromos

    Cargado por

    Gibran Meza Castrejon
    Este documento describe dos prácticas realizadas en un laboratorio de bioquímica para determinar la actividad de la succinato deshidrogenasa y el sistema de citocromos y citocromo oxidasa en mitocondrias de hígado de rata. Se midió la actividad de estas enzimas a través de la decoloración del azul de metileno y la oxidación de la N,N-p-dimetilfenildiamina en presencia y ausencia de inhibidores como el malonato de sodio y el cianuro de potasio.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    de 2

    LABORATORIO DE BIOQUÍMICA GENERAL. ​3FV2.

    SECCIÓN 1
    Galicia Ornelas, Bryan & Meza Castrejón, G. Jesus
    Práctica: Determinación de la actividad de SDH y sistema de citocromos y citocromo oxidasa.🐈

    Introducción 6 min + ++ ++ +++ + ++ ++ ++


    La enzima succinato deshidrogenasa pertenece a la
    clase óxido-reductasa. Es una flavoenzima encargada 8 min + ++ ++ ++++ ++ ++ ++++ ++

    de la oxidación de succinato en fumarato, que


    10min + ++ ++ ++++ ++ +++ ++++ +++
    transporta un grupo hemo que funciona como parte del
    sistema citocromo b y constituye el ejemplo más A mayor número de (+) mayor de decoloración presentada.
    característico de sistema enzimático que no precisa de Discusión
    la colaboración de alguna coenzima de la serie La enzima succionato deshidrogensa “SDH” (1.3.99.1)
    nicotinamídica (NAD y NADP)​1​. cataliza la reacción de conversión del succinato a
    La enzima citocromo oxidasa pertenece a la clase fumarato obteniendo de esta manera FAD reducido.​1
    óxido-reductasa, son las principales responsables de El azul de metileno es un identificador característico
    la generación de ATP por la vía de transporte de que se encuentra oxidado y al decolorarse se reduce y
    electrones. Está formada por un dímero que se por tanto identifica la actividad de la SDH. En el tubo 1
    extiende desde la matriz hasta el espacio obtenemos un alto grado de decoloración, ya que no
    intermembrana o el citosol, atravesando la membrana​2​. contiene inhibidor de la actividad enzimática, malonato
    Objetivos de sodio. El testigo negativo que es el tubo 2 mantiene
    -Identificar la presencia del sistema de citocromos y su una coloración azul pues en este no se agregó enzima.
    oxidasa, y el efecto de inhibidores sobre la cadena El tubo 3 presentó decoloración ligera debido a la
    transportadora de electrones. presencia de poco sustrato, ya que en este tubo no se
    -Evaluar la actividad de la succinato deshidrogenasa adiciona succinato de sodio. El tubo 4 contiene una
    en la fracción mitocondrial de hígado de rata en mayor cantidad de malonato, esto nos da una
    presencia y en ausencia de un inhibidor competitivo. coloración verde-azul, decrementando la reacción.
    Resultados Para el tubo 5 y 6 al disminuir la cantidad de inhibidor,
    Tabla 1. Lecturas de decoloración en tubos. Actividad de SDH respectivamente se obtiene una decoloración mayor,
    pues la enzima puede realizar su actividad con el
    Tubo 1 2 3 4 5 6 7
    succinato sin que el malonato interfiera en mayor
    2 min + + - + + + + media. En el tubo 7 se obtiene la mayor decoloración
    de la prueba, esto es por la presencia del succinato,
    4 min ++ + - + + ++ ++
    que es el sustrato de la enzima. En todos los tubos se
    6 min +++ + - + ++ +++ +++ añadió aceite para así impedir la interacción del
    oxígeno del ambiente y el azul de metileno.​3,4 ​(Fig. 1.1
    8 min +++ + - + ++ ++++ ++++
    y 1.2).
    ++++ ++ - + ++ +++++ +++++
    Con respecto a la actividad de la citocromo
    10 min
    oxidasa (​1.9.3.1)​, se utilizó KCN como inhibidor. El
    15 min ++++ +++ - + +++ ++++++ ++++++ cianuro de potasio se enlaza covalentemente con el
    complejo IV impidiendo la función de la cadena
    20 min ++++ +++ - + +++ ++++++ ++++++
    respiratoria. En este experimento no se utiliza aceite
    Mayor decoloración presentada (+). No hubo coloración (-) dado que el oxígeno es reducido en el complejo IV
    Tabla 2. Lecturas de decoloración en tubos. Actividad del
    para obtener H​2​O​5​. (Fig. 2.1 y 2.2).
    sistema de citocromos y citocromo oxidasa
    Se utilizó N,N-p-dimetilfenildiamina como donador
    Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 artificial de electrones. Éste reemplaza al succinato y
    + + + + + + +
    al NADH, y se mide la decoloración respecto al tiempo.
    1 min
    En el tubo 1, se considera como testigo positivo,
    2 min + + + ++ + + + + obteniendo un color oscuro, pues contiene el extracto
    crudo de SDH-CIT y el donador artificial. El tubo 2,
    4 min + + ++ ++ + + ++ +
    también se utilizó como testigo negativo, debido a que
    LABORATORIO DE BIOQUÍMICA GENERAL. ​3FV2. SECCIÓN 1
    Galicia Ornelas, Bryan & Meza Castrejón, G. Jesus
    Práctica: Determinación de la actividad de SDH y sistema de citocromos y citocromo oxidasa.🐈

    no contiene SDH-CIT, obteniendo así un color azul, 4. Stryer L. (2008) “Bioquímica” Editorial Reverte.
    causa de la oxidación espontánea del donador e-. En Mexico. España. pp. 698-700
    el tubo 3 hubo una baja actividad por la presencia del 5. Vejar I. (2005) “Prácticas de Bioquímica
    inhibidor KCN, que es de tipo irreversible y no permite descriptiva” Textos Académicos. Universidad
    el transporte de electrones dando un color azul de Sonora. Mexico.
    intenso. El tubo 4, no presentó coloración debido a que 6. Sierra, I. (28 de junio de 2013). ​Practica
    sólo contenía agua y SDH-CIT, al no contener el grupo transporte de cargas 7.​ Url:
    donador de electrones, ésta reacción no procede. http://es.slideshare.net/ingridjohanasierramejia/
    Desde el tubo 5 al 8, se adicionó α-naftol. Se obtiene practica-transporte-de-cargas-7
    un compuesto llamado azul de indofenol, el inhibidor Anexo​:
    es aquí donde se une covalentemente y el
    N,N-dimetilfenildiamina se oxida. En el tubo 5 hay una
    reacción inmediata con la enzima y el grupo donador.
    El tubo 6 al no contener la SDH-CIT, genera que no
    haya reacción, la poca coloración presentada en este
    tubo es causa de la oxidación directa del grupo
    Imagen 1.1 Coloración de los tubos con deshidrogenasa
    donador. Para el caso del tubo 7, la presencia de succínica antes del calentamiento
    inhibidor influye en el complejo IV y no hay reacción.
    En el tubo 8, no hay reacción debido a la ausencia del
    SDH-CIT y la coloración es debido a la oxidación de la
    N,N-p-dimetilparafenildiamina​6​.
    Conclusiones
    La actividad enzimática de las óxido-reductasas es
    Imagen 1.2: Coloración de los tubos con deshidrogenasa
    afectada por la presencia o ausencia de diferentes succínica después del calentamiento
    elementos, entre los que se encuentran el sustrato, el
    cofactor e inhibidores.
    Se pudo visualizar la actividad enzimática gracias a la
    presencia del identificador, en caso de la SDH, azul
    de metileno, el cual se reduce debido a los reductores Imagen 2.1 Tubos al inicio de la reacción del sistema de
    producidos en la reacción catalizada por esas citocromos.
    enzimas. Para el caso de la citocromo oxidasa,
    coloración es ocasionada porque la fenilendiamina se
    oxida.
    Bibliografía
    1. Alvarado et.al. (2008). ​BIOQUIMICA II. Url:
    http://quimicosfarmacobiologos.bligoo.com.mx/
    media/users/10/523320/files/51871/Ma​.
    2. Jenner Us Martin. (2014). Oxidorreductasa. Url: Imagen 2.2 Coloración de los tubos con citocromo, y
    http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz1 citocromo oxidasa después del calentamiento
    3.htm#c1
    3. BRENDA. (2015). ​Información sobre EC
    1.3.99.1 - succinato deshidrogenasa. Url:
    http://www.brenda-enzymes.org/enzyme.php?e
    cno=1.3.99.1&Suchword=succinato+deshidroge
    nasa&organism%5B%5D=#INHIBITORS

    También podría gustarte