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    Coliformes Huevo de Codorniz Imprimir

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    Herrera Sanchez Raúl
    Este documento describe los objetivos y procedimientos para determinar la presencia de coliformes fecales, coliformes totales y E. coli en una muestra de alimento preparado (huevo de codorniz con papa y maní). Los objetivos específicos incluyen realizar el aislamiento en placas, siembra en caldos, aislamiento de E. coli en placas EMB y confirmación con prueba de indol. El documento también describe los materiales y medios requeridos, incluidos agar VRBL, caldo E.C., agar EMB y caldo de

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    Este documento describe los objetivos y procedimientos para determinar la presencia de coliformes fecales, coliformes totales y E. coli en una muestra de alimento preparado (huevo de codorniz con papa y maní). Los objetivos específicos incluyen realizar el aislamiento en placas, siembra en caldos, aislamiento de E. coli en placas EMB y confirmación con prueba de indol. El documento también describe los materiales y medios requeridos, incluidos agar VRBL, caldo E.C., agar EMB y caldo de

    Descripción original:

    REPORTE DE COLIFORMES

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    Este documento describe los objetivos y procedimientos para determinar la presencia de coliformes fecales, coliformes totales y E. coli en una muestra de alimento preparado (huevo de codorniz con papa y maní). Los objetivos específicos incluyen realizar el aislamiento en placas, siembra en caldos, aislamiento de E. coli en placas EMB y confirmación con prueba de indol. El documento también describe los materiales y medios requeridos, incluidos agar VRBL, caldo E.C., agar EMB y caldo de

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    COLIFORMES FECALES, COLIFORMES TOTALES

    y E. COLI
    OBJETIVOS:
    Objetivo general:

    ● Determinar si en el análisis del alimento preparado (plato preparado huevo de codorniz con
    papa y maní) cumple o no el rango aceptable de microorganismos patógenos de acuerdo a la
    norma española presente en el libro Pascual Andersson.

    Objetivos específicos:

     Realizar el aislamiento en placas de VRBL.


     Realizar la siembra de colonias típicas en los caldos (VBB y E.C.)
     Realizar el aislamiento de Echerechia Coli en placas EMB.
     Confirmar la presencia Echerechia Coli con prueba indol.

    MARCO TEORICO:
    1.Generalidades:

    la denominación de Coliformes se le otorga a todo aquel grupo de bacterias que tienen ciertas
    características bioquímicas en común y son de mucha importancia como indicadores de
    contaminación del agua y de los alimentos. El termino Coliformes proviene de Coli de la bacteria
    principal de este grupo, el cual es la Echerechia Coli. Como ya se sabe la bacteria E. Coli es de
    origen fecal; para distinguir a las demás que no son de origen fecal se utiliza el término de
    Coliformes Totales y a los de origen intestinal o fecal Coliformes Fecales.

    2.Coliformes totales:

    Los Coliformes totales son las Enterobacteriaceae lactosa-positivas y constituyen un grupo de


    bacterias que se definen más por las pruebas usadas para su aislamiento que por criterios
    taxonómicos. Pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y se caracterizan por su capacidad para
    fermentar la lactosa con producción de ácido y gas, más o menos rápidamente, en un periodo de
    24 horas y con una temperatura de incubación comprendida entre 30-37ºC.

    3.Escherichia Coli:

    Las investigaciones ecológicas han demostrado que E. Coli proviene del tracto intestinal del
    hombre y de los animales de sangre caliente, si puede sobre vivir e incluso multiplicarse en otros
    nichos apropiados. Por lo tanto, la presencia de esta bacteria indica que puede haber existido
    contaminación fecal y que el consumidor podría expuesto a patógenos entéricos cuando ingiere el
    alimento.
    MATERIALES Y MEDIOS:
    Aislamiento en placas:

    MATERIALES MEDIO
     3 cajas Petri  Agar VRBL.
     4 pipetas de 2 ml.
     1 gradilla
     1 matraz
     1 mechero
     Franela
     Encendedor
     Marcador
     Desinfectante
     Alcohol
     Papel aluminio
     Papel craf
     Probeta
     Indumentaria personal

    EQUIPO
     Autoclave
     Incubadora
     balanza

    Aislamiento en caldos:

    MATERIAL MEDIO
     6 tubos de ensayo con tapas
     Asa bacteriológica  Caldo E.C.
     1 mechero  Caldo VERDE BILIS BRILLANTE
     1 encendedor
     1 marcador
     2 matraces
     2 pipetas de 10 ml
     1 espátula
     Desinfectante
     Franela
     Alcohol
     Agua destilada
     Indumentaria personal

    EQUIPOS
     Autoclave
     Incubadora
     balanza
    Aislamiento de Echerechia Coli:

    MATERIAL MEDIO
     1 matraz  Agar E.M.B.
     Asa bacteriológica
     1 espátula
     1 mechero
     1 encendedor
     3 Caja Petri
     Papel aluminio
     Papel craf
     Franela
     Desinfectante
     Alcohol
     Agua destilada
     Indumentaria personal
    EQUIPO
     Autoclave
     Incubadora
     balanza

    Confirmación de Echerechia Coli:

    MATERIAL MEDIO
     3 tubos de ensayo con tapas  Agua triptona
     Asa bacteriológica  Prueba de indol
     1 Mechero
     1 encendedor
     Franela
     Desinfectante
     Alcohol
     Indumentaria personal
    EQUIPO
     Autoclave
     Incubadora
     balanza

    PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

    Indicaciones de los medios a utilizar:


    AISLAMIENTO EN PLACAS
    AGUA DE PEPTONA Preparar 265 ml de agua de peptona.
    Esterilizar en autoclave 121°C durante 15
    minutos. (preparación para muestra madre y
    tubos de disolución)
    AGAR BILIS ROJO VIOLETA LACTOSADO Disolver por calentamiento. No esterilizar en
    autoclave. Incubar a 37°C durante 24 horas.

    AISLAMIENTO EN CALDOS
    CALDO VERDE BILIS BRILLANTE Disolver por calentamiento, hasta que tome
    VBB color (solo en la práctica porque el medio esta
    pasado) distribuir en cada tubo a 10 ml cada
    uno. Esterilizar en autoclave 121°C durante 15
    minutos. Incubar a 37°C durante 24-48 horas.

    CALDO E.C. Esterilizar en autoclave 121°C durante 15


    minutos. Incubar a baño maría a 44.5°C
    durante 24-48 horas.

    AISLAMIENTO DE ESCHERICHIA COLI


    AGAR EMB Esterilizar en autoclave 121°C durante 15
    minutos. Incubar a 37°C durante 24 horas.

    CONFIRMACION DE ECHERICHIA COLI


    CALDO DE TRIPTONA Esterilizar en autoclave 121°C durante 15
    minutos. Incubar a baño maría a 44.5°C
    durante 24 horas.

    Aislamiento en placas:

     Pesar 0.4 g de peptona en un matraz limpio y seco.


     Añadir al matraz 265 ml de agua destilada, tapar con papel aluminio y agitar hasta disolver
    completamente.
     Preparar 90 ml de agua destilada en un matraz limpio
     Empaquetar pipetas y cajas petrie llevar al autoclave junto a la probeta, matraz adicional y
    tubos de ensayo.
     Esterilizar por 15 minutos a una temperatura de 121°C.
     Posterior se prepara la muestra madre y rotulamos los tubos de ensayo y las cajas Petri con
    sus respectivas disoluciones que se harán, en este caso se harán 3 cajas Petri de (-1,-3 y -4).
     Hacer las disoluciones en cada tubo y sembrar en cada caja Petri.
     En el matraz esterilizado se pesará 3.6 g de agar VRBL y se añade 90 ml de agua
    esterilizada, disolver y llevar a ebullición por 1 minuto.
     Una vez obtenido el sembrado en cada caja Petrie se debe agregar el agar VRBL 20 ml
    aproximadamente supervisando que la temperatura del agar sea soportable en la piel (no
    debe de ser muy caliente porque mataremos a los microorganismos ni muy frio por que el
    agar se solidificara rápido).
     Dejar solidificar las 3 cajas petrie y posterior añadir la segunda capa de agar VRBL de 5 ml
    aproximado dejar solidificar. llevar a incubar por 24 horas a 37°C.
    AGAR VRBL

    Aislamiento en caldos:

     Pesar en matraces limpios los gramos requeridos de cada caldo.


     Agregar agua destilada disolver y tapar con papel aluminio.
     En caso del caldo verde bilis brillante se calentará para que tome el color porque el
    medio esta pasado.
     Distribuir en 3 tubos 10 ml de caldo E.C. y en los otro3 tubos 10 ml de caldo verde bilis
    brillante.
     Esterilizar por 15 minutos a una temperatura de 121°C.
     Posterior se debe de enfriar los caldos y rotular cada tubo.
     De la placa VRBL que entra en rango se escogerá 3 colonias aisladas y típicas de
    Coliformes para hacer el sembrado en caldos.
     Desinfectar el área de trabajo, y encender el mechero.
     realizar la siembra en cada tubo de ensayo. Comenzando a esterilizarel aza de aguja,
    enfriar pinchar la colonia escogida y sembrar primero en caldo e.c. y sin esterilizar
    pinchamos nuevamente en caldo verde bilis brillante (tomar en cuenta que cada vez
    que se alce nueva colonia se debe de esterilizar el asa)
     Una vez obtenido los tubos de ensayo ya sembrado se lleva a incubar.

    CALDO VERDE BILIS BRILLANTE CALDO E.C.


    Aislamiento de Echerechia Coli:

     En un matraz limpio y seco pesar g del agar EMB.


     Agregar 65 ml de agua destilada y tapar con papel aluminio, disolver por calentamiento.
     Disponer de 3 cajas Petrie.
     Esterilizar el agar y las cajas petrie por 15 minutos a 121°C.
     Posterior se debe de agregar 20 ml aproximadamente a cada caja Petrie y dejar solidificar.
     Posterior desinfectar el área de trabajo y proseguir con el sembrado por estría de los
    caldos E.C. positivos con el asa bacteriológica.
     Una vez terminada llevar a incubar por 24 horas a 37°C.

    AGAR EMB
    Confirmación de Echerechia Coli.

     En un matraz limpio y seco pesar g de triptona, añadir ml de agua destilada y disolver.


     Agregar 9 ml a cada tubo y llevar a esterilizar.
     Esterilizar por 15 minutos a 121°C.
     Una vez terminado la esterilización proseguir con la siembra de las placas de EMB escoger
    de cada placa una colonia típica de colis.
     Proseguir a la siembra en cada tubo de ensayo con las colonias escogidas.
     Posterior incubar por 24 horas a temperatura de 37°C.
     Después de las 24 horas pasadas se agrega de 2 a 3 gotas del reactivo de kovacs para la
    prueba de indol y observar si forma no un anillo rojo, confirmar presencia o ausencia de
    Echerechia colas en la muestra.
    CALCULOS:

    Aislamiento en placas:

    1.5 g. 1000 ml
    X g.=0.4 g de peptona.
    X g. 225 ml

    40.5 g. 1000 ml
    X g.=3.6 g de VRBL.
    X g. 90 ml

    Aislamiento en caldos:

    37 g. 1000 ml
    X g.=1.3 g de caldo E.C.
    X g. 35 ml

    40 g. 1000 ml
    X g.=1.4 g de caldo VBB.
    X g. 35 ml

    Aislamiento de Echerechia Coli:

    36 g. 1000 ml
    X g.=2.5 g de EMB
    X g. 70 ml

    Confirmación de Echerechia Coli.

    31 g. 1000 ml
    X g.=0.3 g de triptona
    X g. 10 ml
    RESULTADOS:
    Recuento de la placa VRBL

    Placa -1 Placa -3 Placa -4

    Datos obtenidos pasado 24 horas:

    Disolución Placa –1 Placa -3 Placa -4


    # de colonias
    típicas. 15 3 0
    Caldo E. COLI.:

    COLONIA 1 COLONIA 2 COLONIA 3

    Presencia de gas, turbidez y Presencia de gas, turbidez y Presencia de gas y turbidez


    precipitados precipitados.

    Caldo VBB:

    COLONIA 1 COLONIA 2 COLONIA 3

    Presencia de gas, turbidez y Presencia de gas, turbidez y Presencia de turbidez y no se


    precipitados. precipitados. nota gas en el tubo Durham.
    La placa que está dentro del rango es la -1

    CF CT

    𝟑 𝑼𝑭𝑪 𝟑 𝑼𝑭𝑪
    𝐶𝐹 = 𝟏𝟓 ∗ ∗ 𝟏𝟎𝟏 = 𝟏. 𝟓 ∗ 𝟏𝟎𝟐 𝑪𝑻 = 𝟏𝟓 ∗ ∗ 𝟏𝟎𝟏 = 𝟏. 𝟓 ∗ 𝟏𝟎𝟐
    𝟑 𝒈 𝟑 𝒈

    Determinación de la norma española que se encuentra en el libro de Pascual Anderson el máximo


    para calificar las condiciones higiénicas es:

    MÁXIMO RANGO PERMITIDO POR NORMA MÁXIMO RANGO PERMITIDO POR NORMA
    ESPAÑOLA PARA C. TOTALES ESPAÑOLA PARA C. TOTALES

    𝑼𝑭𝑪
    𝐶𝐹 = 𝟏. 𝟎 ∗ 𝟏𝟎𝟐 3
    𝒈 𝐶𝑇 = 1 ∗ 10 ⁄𝑔

    PRUEBA DE INDOL PARA REPORTAR ECHERICHIA COLI


    Placa de EMB:

    COLONIA 1 COLONIA 2 COLONIA 3


    No presentan colonias de No presentan colonias de color No presenta colonias de
    color verde metálico. verde metálico. color verde metálico.

    Entonces si no se tiene colonias típicas verde metálicas no se prepara el medio agua de triptona y
    tampoco se añade gotas del reactivo de Kovacs

    PRUEBA DE INDOL

    Negativo en los dos tubos realizados la presente prueba


    Entonces se verifica que no hay presencia del microorganismo E. Coli como las especies
    gallinarum pollurum.

    E. Coli < 3 según criterio microbiológico


    OBSERVACIONES:

     En la placa de VRBL se debe de tener precaución en que el agar este líquido en el


    momento de agregar a las placas, en todo caso se debe de flamear en el mechero.
     En la colonia 1, 2 y 3 se observa en caldo E.C y VBB. Que es los dos se da la presencia de
    gas, precipitado y turbidez.
     En el aislamiento de echerechia Coli no se observa crecimiento en ninguna placa de
    colonias típicas verdes metálicos no se realiza las siguientes pruebas.

    CONCLUSIONES:
     El análisis de la muestra huevo de codorniz con papa y mani según los resultados
    obtenidos no tuvo los cuidados en desinfección, higiene del ambiente materiales equipos,
    etc., en la elaboración del presente producto el cual es totalmente inaceptable su
    consumo es inadecuado para la población.
     Se realiza en sembrado de doble capa de VRBL donde se hace el recuento de colonias
    típicas de Coliformes, donde encontramos mucho más elevado que el rango máximo de la
    norma española; en conclusión, el alimento no fue realizada higiénicamente y que
    presenta alta contaminación.
     Se realiza el aislamiento de E. COLI por estría en la placa EMB donde no se observaron
    colonias verdes metálicas típicas de E. Coli

    ● la prueba de indol realizada fue negativa el cual indica que no hay presencia de echerechia

    Coli.

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