Práctica de Laboratorio - CROMATOGRAFIA

1 CROMATOGRAFÍA.
PIGMENTOS
FECHA:…………………CURSO:………………
FOTOSINTÉTICOS HACIENDO CIENCIA
ALUMNO:……………………………………………………………………………………………………………. Profesor: Federico Amaya.
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS FOTOSINTÉTICOS POR CROMATOGRAFÍA.
OBJETIVOS:
- Reconocer la importancia de la fotosíntesis como proceso generador de O2 en la naturaleza.
- Conocer la presencia de distintos pigmentos fotosintéticos capaces de captar las distintas longitudes de onda.
- Comprender los principios básicos de la técnica de cromatografía.
FUNDAMENTO TEÓRICO:
Las plantas verdes y algunos microorganismos que abundan en la superficie terrestre llevan a cabo un proceso llamado fotosíntesis, por el cual,
mediante la energía solar, transforman el dióxido de carbono en carbohidratos como la glucosa y su polímero el almidón, que son compuestos
con alto contenido en energía química y, por ello, estos seres vivos son productores primarios de los ecosistemas.
Para atrapar la energía solar e iniciar el proceso de transformación de energía luminosa a energía química, las plantas superiores contienen en
sus células una organela llamada cloroplasto, en donde se encuentran los llamados centros de reacción, formados por proteínas y diversos
pigmentos, en especial las clorofilas.
 Las clorofilas a y b se encuentran en las plantas y las bacterioclorofilas a o b se encuentran en las bacterias fotosintéticas.
 Además de estas moléculas, los organismos fotosintéticos tienen otros pigmentos con capacidad para absorber luz. Los pigmentos
accesorios incluyen por ejemplo a los carotenos, xantofilas, antocianinas y otras moléculas con colores característicos.
La clorofila absorbe bien en la región del rojo y el azul y muy poco en la zona del verde. Las plantas que contienen clorofila son verdes porque la
luz verde se refleja, no se absorbe. Estos pigmentos no son solubles en agua, pero pueden extraerse con solventes orgánicos cuando las células
que los contienen se rompen. Entre los tipos de pigmentos más solubles en solventes orgánicos, se encuentran las clorofilas (azul-verde) y los
carotenoides (amarillo-naranja). Algunos colores rosas y rojos en las plantas (por ejemplo en el betabel, la col morada, la jamaica y en las flores)
se deben a antocianinas, las cuales si son solubles en agua y no se extraen con solventes orgánicos
La cromatografía es una técnica de separación de sustancias basada en el arrastre

diferencial las sustancias que se encuentran en una mezcla debido a la diferente
velocidad con que se mueve da uno de ellos en un medio poroso como es el
papel.
En la cromatografía en fase líquida se usa una fase móvil (líquida) y una fase
estacionaria (sólida), siendo los adsorbentes más comunes la sílica gel
(SiO2.H2O), alúmina (A2O3) y celulosa.
El principal factor para controlar el movimiento de los diferentes compuestos en
un cromatograma es la polaridad del solvente.
Una lista de los solventes más usados en los diferentes tipos de cromatografía, en
orden de polaridad creciente, se indica en la Tabla 1. Entre más polar sea un
solvente, más rápido es el movimiento de los compuestos y menos efectiva la
separación.
La polaridad es una propiedad de las moléculas que representa la separación de
las cargas eléctricas dentro de la molécula, según el número y tipo de enlaces que posea.
MATERIAL NECESARIO:
- Zanahoria o - Base soporte. - Alcohol etílico al 96 %.
- Espinaca o perejil. - Éter de petróleo. - Papel de filtro.
- - Agua. - Placa de Petri.
- Mortero de vidrio. - Gradilla y tubos de ensayo.
- Embudo. - Vasos de precipitados.
PROCEDIMIENTO:
1. Coloca en el mortero la muestra a triturar con el alcohol etílico y tritura hasta obtener una mezcla homogénea.
2. Filtra la mezcla resultante a través de un papel de filtro situado encima de un embudo y recoge el filtrado en un vaso de precipitados.
3. Echa 5 ml del filtrado en un tubo de ensayo (guarda el restante) y añade otros 5 ml de éter de petróleo muy suavemente, de manera que no
caiga encima del filtrado sino que resbale por la pared del tubo.
4. Mezcla ambas fases muy suavemente.
5. Añade 2 ml de agua y vuelve a agitar.
6. Deja reposar un tiempo la mezcla, observa y anota el resultado.
7. Coge el resto de la mezcla inicial que aún no has utilizado y viértelo en un vaso de precipitados hasta una altura de 1 cm.
8. Coloca una tira de papel de filtro sobre la mezcla y manténla suspendida mediante un soporte y una pinza (de forma que toque el fondo del
vaso) en esta posición durante unos 20 minutos.
9. Observa y anota los resultados.
ANÁLISIS Y CONCLUSIONES:
Sabiendo que: Verde: Clorofilas. Amarillos: Carotenos y xantofilas. Rosado: Antocianina
a) ¿A qué pigmentos se corresponden las bandas que has obtenido?
b) ¿cuál es su posición en cada una de las pruebas?
c) Si al triturar la muestra hubieras utilizado agua en lugar de alcohol, ¿hubieras obtenido la disolución de pigmentos fotosintéticos?
d) ¿Para qué utilizan estos pigmentos las plantas?
e) ¿Qué pretenden las técnicas cromatográficas?

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