1. Utilizando la gráfica, determine el tamaño más 16.6 en que le sigue pesando menos 8.

Con la actinomicina D no se obtienen

(en kb) de los fragmentos de DNA que se 6.4 correspondería a la hebra líder. fragmentos de DNA, ¿que el indica eso?
La actinomicina D impide la síntesis de
observan en los carriles 2-7. 6. ¿Porque el tratamiento con
fosfodiesterasa del veneno de serpiente no DNA. Esta se une al ADN bicatenario
Carril 2: Fragmento1; 9.6 kb; fragmento2; 6,1
Kb ; fragmento3; 1,4 kb afecta el resultado obtenido? impidiendo su separación haciendo así que
Carril 3: fragmento1 15,8 kb; fragmento2 2,6 Porque la fosfodiesterasa tiene actividad la replicación no se realice.
kb; fragmento3 1,4 kb. exonucleasa y actúa en dirección en 9. Uridina H3, después de 30 segundos solo
Carril 4: fragmento1 9,6 kb; fragmento2 6,1 kb; dirección 3' a 5', para producir nucleósidos marca los fragmentos mas pequeños ¿por
fragmento3 1,3 kb.
5'-fosfatos. Sin embargo, los extremos 3´a que? ¿que indica el hecho de que tales
Carril 5: fragmento1 9,6 kb; fragmento2 6 kb;
fragmento3 1,2 kb. 5´ están ocupados por lo que evita el fragmentos se maquen con uridina
Carril 6: fragmento1 0 funcionamiento de la fosfodiesterasa de
No continua sintetizando nucleótidos
Carril 7: fragmento1 1,6 kb serpiente. El replisoma ya está ocupando
porque seguro la DNA polimerasa no
3. Cuál es la razón de tratar el DNA obtenido uno de los extremos
en cada paso con NaOH 0.1M los reconoce y queda con fragmento
7. ¿Porque el tratamiento con
El NaOH es una base fuerte el cual permitirá muy pequeño.
fosfodiesterasa de bazo disminuye el
separar las hebras hidrolizando los puentes de tamaño del fragmento más pequeño que 10. Considerando el tamaño del genoma de
E. coli (1.4 mm) y la velocidad de
hidrogeno. se observa en el carril 5 y no el de los más
replicación en µm/minuto de la Tabla 1,
4. Que le indica el resultado obtenido en el grandes? ¿cuánto tiempo demora la replicación
carril 2 En el caso de la fosfodiesterasa de total del genoma de E. coli? Haga el
Se observan tres fragmentos de DNA, que bazo, esta actúa en dirección 5´a 3´, cálculo en minutos.
representan a los fragmentos de Okazaki. A 𝑇𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑝𝑙𝑖𝑐𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙
además hay que considerar que el 𝑇𝑎𝑚𝑎ñ𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑔𝑒𝑛𝑜𝑚𝑎 ÷ 𝑉𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑝𝑙𝑖𝑐𝑎𝑐𝑖ó𝑛
los 30 seg. se esperan tener solo dos extremo 5´esta libre por lo que esta =
2
fragmentos. Un fragmento representa la fosfodiesterasa si puede actuar; el
hebra líder y las demás son replicas 46.667
fragmento pequeño es afectado 𝑇=
5. Que le indica el resultado obtenido en el 2
(fragmento de Okazaki con cebadores 𝑇 = 23.33
carril 3. ¿Podría usted sugerir cual fragmento 11. Considerando los datos de Tabla 1, la
es el que corresponde a la cadena líder? de RNA) ya que esta fosfodiesterasa
velocidad de replicación de la horquilla
Al ser extraído el DNA a los 5 minutos los prefiere las que tienen ARN para (nucleótidos/segundo) y el número de
producir nucleósidos 3' monofosfato pares de bases (pb) del genoma de E.
fragmentos se ligaron y por ello pesarían
 coli. ¿Cuántos minutos demora la Las dos cadenas de polinucleótidos que C¿Qué efectos esperaría si se añadiera
replicación del genoma de E. coli? conforman el DNA tienen la característica de dideoxicitidina monofosfato (ddCMP) a la
3.9 𝑥 106 1𝑚 reacción de replicación del DNA en exceso o
𝑇= = 4588235 𝑠 ( ) ser antiparalelas (polaridad opuesta), es decir
850 60𝑠 a un 10% de la concentración de dCTP?
𝑋 = 76.47 𝑚𝑖 una en dirección 5´a 3´y la otra en dirección 3´a
12. Si se usara un inhibidor de la DNA 5´. Por lo tanto El grupo fosfato que se La dideoxicitidina monofosfato (ddCMP) solo
girasa, tal como el ácido nalidíxico, ¿Se encuentra en la figura se encuentra en el presenta 1 solo fosfato en su estructura por
obtendrá marcación con timidina extremo 5´ lo cual si se podría formar el enlace
tritiada? ¿Por qué? Y ¿qué pasará con fosfodiéster, sin embargo, no se liberaría el
uridina tritiada? 3. Mire cuidadosamente las estructuras pirofosfato ya que no presenta los fosfatos β
El superenrollamiento relajado por la de las moléculas que aparecen en la ni γ
girasa. No ingresa la T 34 porque sigue Figura 5-2. Al no liberarse este pirofosfato no habría una
superenrollado A ¿Qué esperaría que pasara si la fuerza impulsora para la síntesis del DNA, ya
12 𝑚𝑚 → 1 𝜇𝑚 dideoxicitidina trifosfato (ddCTP) se añadiera que normalmente esta fuerza se debe a la
33 𝑚𝑚 → 𝑋 𝜇𝑚 a una reacción de replicación del DNA en hidrolisis del pirofosfato por acción de la
X = 𝟐, 𝟕𝟓 𝝁𝒎 exceso por encima de la concentración de pirofosfatasa (Watson, 2016).
1600 𝑚𝑚 → 0. 1 𝜇𝑚 deoxicitidina trifosfato (ddCTP)? ¿Se
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑒𝑛𝑡𝑟𝑒 4 𝑦 5 → 3500 𝑚𝑚 incorporaría en el DNA? Si así fuera, ¿Qué 4¿De qué forma esperaría que afectara la
160 𝑚𝑚 → 0.7 𝜇𝑚 sucedería después? Razone la respuesta. pérdida de la actividad exonucleasa
3500 𝑚𝑚 → 𝑋 𝜇𝑚 correctora de pruebas 3’ a 5’ de la DNA
𝑿 = 𝟐. 𝟏𝟖 𝝁𝒎 → 𝟐𝟏𝟖. 𝟕𝟓 𝒎𝒎 La dideoxicitidina trifosfato (ddCTP), la cual es polimerasa a la fidelidad de la síntesis de
1 𝑛𝑢𝑐𝑙𝑒𝑜𝑡𝑖𝑑𝑜 → 0.34 𝑚𝑚 incorporada por la DNA polimerasa, al ser DNA en E. coli? ¿De qué forma afectaría su
𝑋 𝑛𝑢𝑐𝑙𝑒𝑜𝑡𝑖𝑑𝑜𝑠 → 370 𝑚𝑚 añadida a una reacción de replicación causaría pérdida a la velocidad de síntesis del DNA?
𝑿 = 𝟔𝟒𝟑. 𝟑𝟖 𝒏𝒖𝒄𝒍𝒆𝒐𝒕𝒊𝒅𝒐𝒔 que esta se detenga ya que no se podría Razone su respuesta.
𝐷 = 𝑉 ∙ 𝑇 → 643.38 = 50 𝑛𝑢𝑐𝑙⁄2 ∙ 𝑇 formar el enlace fosfodiéster. El ddCTP no
Si no hay exonucleasa no se eliminaría el
𝑻 = 𝟏𝟐. 𝟖𝟔 posee el grupo hidroxilo en su estructura nucleótido incorrecto a la cadena cebadora y
PROBLEMA no se podrá dar la oportunidad de sumar el
1El fragmento de DNA de la Figura 5.1 tiene B ¿Qué pasaría si se añadiera ddCTP a un nucleótido correcto.
una doble cadena en cada extremo, pero 10% de la concentración de dCTP? Cuando se añade un nucleótido apareado de
una cadena sencilla en el centro. Se indica modo incorrecto, el ritmo de adición de
la polaridad de la cadena superior. ¿El Cuando la ADN polimerasa incorpora ddCTP nucleótidos nuevos se reduce y el ritmo de
fosfato (PO4-) que se muestra en la cadena la reacción se detiene, de manera que se actividad exonucleasa revisora aumenta. El
inferior está en el extremo 5’ o en el 3’ del generan fragmentos de distinta longitud, todos DNA mal apareado altera la geometría del
fragmento al cual está unido? ellos con un ddCTP terminal. OH 3´y del nucleótido entrante, esta
geometría alterada reduce el ritmo de
adición de nucleótidos (Watson, 2016).