UNIVERSIDAD RAFAEL LANDÍVAR VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIÓN Y PROYECCIÓN

INSTITUTO DE Investigación y Proyección en Ambiente y Sociedad

Protocolos para el cultivo in vitro de

orquídeas con distribución en Guatemala
febrero 2017
 Tabla de Contenido
Protocolos para el cultivo in vitro de orquídeas con distribución en Guatemala ............................... 3
1. Introducción ............................................................................................................................ 3
2. Las Orquídeas en Guatemala .................................................................................................. 3
Número estimado de especies y estatus dentro del territorio nacional ................................... 3
Importancia de las orquídeas dentro de los ecosistemas ........................................................... 4
3. Metodología para la reproducción in vitro de orquídeas ....................................................... 5
3.1 Obtención de semillas ........................................................................................................... 5
3.2 Desinfección de semillas ....................................................................................................... 6
3.3 Protocolo de desinfección para cápsulas cerradas: ............................................................. 7
3.4 Protocolo de desinfección de cápsulas abiertas .................................................................. 8
3.5 Preparación de Medios de Cultivo ....................................................................................... 9
3.5.1 Medio MS (Murashige & Skoog, 1962) ............................................................................ 11
3.5.2 ½ Medio MS (Murashige y Skoog, 1962): ........................................................................ 11
3.5.3 Medio MS modificado con ANA y GA3 (Murashige y Skoog, 1962) (Ávila y Salgado-
Garciglia, 2006).......................................................................................................................... 12
3.5.4 Medio para crecimiento de orquídeas de Coco-tiamina (Archila, E. s.p.)........................ 12
3.5.5 Medio Knudson C1 (Rizal Technological University, 2010): ............................................. 12
3.5.6 Medio Knudson C2 (Damon A. et al, 2004): ..................................................................... 13
3.5.7 Medio Knudson C3 (Mayo A. et al., 2010): ...................................................................... 13
4. Resultados de la germinación y desarrollo crecimiento de algunas especies de orquídeas 14
5. Cuidado de orquídeas in vitro ............................................................................................... 17
6. Traslado de plantas al invernadero ....................................................................................... 17
7. Referencias ............................................................................................................................ 19
Protocolos Para El Cultivo In Vitro de Orquídeas con Distribución en
Guatemala

1. Introducción

El crecimiento de orquídeas in vitro ha sido objeto de amplios esfuerzos de investigación sobre

especies de interés comercial. La germinación de embriones de orquídea en medios preparados
con sales de nutrientes, micronutrientes, hormonas y gelificantes ha sido la solución para que la
industria propague masivamente a estas plantas que en la naturaleza, requieren de tiempo y
condiciones muy particulares para crecer. Sin embargo, existe un vacío en la investigación y
documentación de técnicas que sean efectivas para el crecimiento de orquídeas nativas de Centro
América, que en muchos casos se les considera raras y que son menos conocidas que las
tradicionales orquídeas asiáticas que se comercializan.

El crecimiento óptimo de tejidos en medios de cultivo varía según la especie y según la etapa de
desarrollo en la que se encuentre la orquídea. Este documento presenta resultados que provienen
de las observaciones sobre el desarrollo de plantas a partir de embriones (semillas) sembrados
mediante técnicas convencionales de laboratorios de cultivo de tejidos, en diferentes medios de
crecimiento y que corresponden a los hallazgos producto de la investigación Conservación de
Orquídeas Amenazadas de Guatemala, que inició en el año 2013 y que sigue desarrollándose
dentro del marco del Subprograma Conocimiento de la diversidad y riqueza natural de Guatemala
y Mesoamérica del Instituto de Investigación y Proyección sobre Ambiente Natural y Sociedad –
IARNA- de la Universidad Rafael Landívar y específicamente para cumplir con el objetivo de:
Desarrollar conocimientos que apoyen a la conservación de flora nativa, endémica y/o amenazada
de Guatemala.

2. Las Orquídeas en Guatemala

Número estimado de especies y estatus dentro del territorio nacional

La familia Orchidaceae es la más grande de las monocotiledóneas a nivel mundial, con más de 800
géneros y 20,000 especies descritas; es de distribución mundial y puede encontrarse en casi todos
los hábitats con excepción de los desiertos más extremos y los de agua salada (Dix M. & Dix, M.
2006).

Es la familia más diversa en Guatemala y los autores que la han descrito no concuerdan con el
número de especies identificadas y el número de especies endémicas. De acuerdo a Veliz, M.
(2008) existen 796 especies descritas y 200 de ellas son endémicas y conforme la más reciente
publicación de Dix, M. y Dix, M. (2006) al momento de publicar existían 770 especies
documentadas, 41 de ellas endémicas. Los reportes más recientes nos indican que cada año se
descubren más especies y que ya son más de 1000 las descritas para el país.

La mayor diversidad de orquídeas en el país se encuentra entre un rango altitudinal entre 800 a
1600 msnm y la mayor riqueza de especies ocurre en el departamento de Alta Verapaz, en donde
se encuentra 60% de todas las especies registradas para Guatemala. Los departamento de Baja
Verapaz y Zacapa, Izabal y Huehuetenango, Guatemala, Chimaltenango, Suchitepéquez y Petén
representan, después de Alta Verapaz, los más diversos en orden descendente en cuanto al grupo
de las orquídeas se refiere (Dix M. & Dix, M. 2006).

En relación al estatus de las orquídeas en la naturaleza, todas las especies se consideran

amenazadas y están incluidas en los apéndices de la Convención sobre el Comercio Internacional
de Especies Amenazadas de Flora y Fauna Silvestres (CITES). De las 800 especies distribuidas en
Guatemala, 125 están dentro de la Lista de Especies de Flora Amenazada (Lista Roja) que publica el
Consejo Nacional de Áreas Protegidas; 8 de ellas, incluyendo a la flor nacional Monja Blanca
(Lycaste skinneri var alba) son parte de la Categoría 1 que contiene especies con mayor grado de
amenaza de extinción.

Importancia de las orquídeas dentro de los ecosistemas

Las orquídeas juegan diferentes roles dentro de los ecosistemas, entre ellos el de proveedoras de
néctar y aceites esenciales para colibríes, murciélagos, mariposas, palomillas, abejas, abejorros y
otros polinizadores. Sus hojas y pseudobulbos también proveen alimento para insectos y algunos
mamíferos.

Agregan estructura a los troncos de árboles y sustratos en donde crecen y por lo tanto, son
importante fuente de refugios para insectos, arañas y aves.

Tienen un rol dentro del ciclo de vitaminas y otros elementos nutritivos que son importantes en el
metabolismo de la comunidad y que pueden ser limitantes. En los trópicos, estos micronutrientes
están la mayor parte del tiempo como parte de la biomasa y su ciclo se desarrolla dentro de
organismos como las orquídeas.

La mayoría de orquídeas requiere de polinizadores debido a que su polen no es un polvo suelto

que pueda dispersarse por viento o agua, sino es una masa pegajosa, llamada polinia, que se
adhiere al insecto, ave o mamífero que la visite y se desprende cuando el animal se posa en otra
flor, dejando la polinia lista para fecundarla. Debido a este requerimiento para su fecundación, las
flores de orquídeas son estructuras que evolucionaron con la finalidad de atraer polinizadores
mediante diferentes tácticas. Una de ellas es la habilidad de mimetizar insectos y aromas fuertes.
Las flores que semejan ser insectos atraen a especies específicas que se posan en la flor con la
intensión de aparearse o pelear.

La especialización de las estructuras florales para atraer polinizadores ha resultado en flores que
también el ser humano considera hermosas, principalmente por sus variadas formas y colores. Las
orquídeas tienen un amplio mercado con coleccionistas y aficionados que pagan precios elevados
por los ejemplares. De esta inclinación a coleccionarlas y al uso que se les da para decoración se
deriva su importancia económica, que ha conducido a la creación de híbridos que no existen de
forma natural en los ecosistemas.

En el ámbito de la evaluación del estado del subsistema natural, las orquídeas son utilizadas como
especies indicadoras debido a su relación y dependencia con otros organismos: relación específica
con el sustrato, que puede determinar el crecimiento de plantas dependiendo de la presencia o no
de micorrizas; relación con polinizadores de quienes depende la reproducción de la especie;
dependencia de microclimas. Su presencia o ausencia en las áreas silvestres contribuye a inferir
sobre la salud del ecosistema.

Entre las dudas que existen en relación a los efectos de la desaparición de una especie de
orquídea, las más comunes son respecto al futuro de los polinizadores específicos ya que las
relaciones de dependencia son en muchos casos exclusivas. En estos casos es válido argumentar
que la desaparición de una especie de orquídea puede tener implicaciones en todo el ecosistema,
si consideramos que su polinizador específico también se verá afectado, así como los otros
organismos con quien éste tenga relación. ¿Qué sucede con ellos si desaparece la orquídea?
¿Cómo afecta la desaparición a otras especies relacionadas al polinizador? Estas preguntas
merecen atención inmediata considerando la alta tasa de desaparición de bosques naturales.

El valor biológico, material y cultural de la diversidad biológica para la presente y las futuras
generaciones son razones suficientes para enfocar nuestros esfuerzos en la conservación. La
diversidad constituye una riqueza, muchas veces aún por descubrir, debido al potencial que
representa como fuente de alimento, medicina y de recreación.

3. Metodología para la reproducción in vitro de orquídeas

3.1 Obtención de semillas
Las orquídeas tienen estructuras conocidas como cápsulas que son contenedores de miles de
embriones desnudos o sin endospermo, es decir, sin alimento que los sustente. Estos embriones o
semillas son tan pequeños que con frecuencia se les describe con apariencia de polvo. La cápsula
que los contiene se forma a partir la columna ensanchada de la flor e inmediatamente después de
que la flor ha sido polinizada.

El grado de madurez de la cápsula es de especial importancia para su cultivo in vitro. Las cápsulas
muy verdes pueden tener embriones muy inmaduros que tardan mucho tiempo en madurar in
vitro o que pueden no desarrollarse del todo. Las cápsulas demasiado maduras se abren y son
propensas a la contaminación por hongos y microorganismos.
El momento exacto para sembrar los embriones dentro de la cápsula es cuando ésta ha empezado
a cambiar de color verde a amarillo/naranja/café y antes de que se vean grietas en su exterior. La
figura 1 muestra cápsulas en estado apropiado para su siembra.

Figura 1. Cápsulas maduras

Fotos 1 y 2: Cápsulas de dos especies de orquídeas diferentes Fuente: Laboratorio de Biotecnología del Iarna/URL

Las cápsulas pueden obtenerse de colecciones privadas o del medio silvestre. Las primeras tienden
a estar en mejores condiciones debido a que no están tan expuestas al deterioro que causan los
insectos en el medio silvestre. En caso de obtener las semillas del medio silvestre, procure colectar
semillas que no presenten daño en la corteza externa. Si solo hubiera disponibles semillas sin
madurar, tenga en cuenta que pueda ser que la germinación se demore incluso hasta un año,
dependiendo del grado de madurez del embrión y de su respuesta al medio de cultivo.

3.2 Desinfección de semillas

Antes de abrir las cápsulas para sembrar a los embriones, éstas tienen que pasar por un proceso
de desinfección que limpia la corteza exterior y evita que se contaminen los medios de cultivo. Las
técnicas de desinfección que se aplican deben ser administradas con cuidado para evitar la muerte
de los embriones.

El momento ideal para sembrar las semillas es cuando las cápsulas empiezan a madurar y antes de
que muestren grietas en la corteza exterior (ver figura 2). Sin embargo, en las ocasiones en que las
cápsulas muestran abertura de la corteza, también pueden aplicarse técnicas específicas de
desinfección para lograr la germinación de embriones in vitro.

Equipo y reactivos utilizados en la desinfección de cápsulas cerradas:

- Jabón líquido
- Hipoclorito de sodio 5.25% (Cloro comercial)
- Etanol al 70%
- Tween 20
- Agua destilada estéril
 - Beakers
- Pinzas estériles
- Papel estéril

3.3 Protocolo de desinfección para cápsulas cerradas:

Determine el estado de la cápsula haciendo una revisión detallada de la superficie, de ser posible
ponga bajo un estereoscopio y de NO observar grietas ni aberturas, prosiga con los siguientes
pasos para desinfectar:

1. Quitar el residuo floral de la parte basal de la cápsula.

2. Lavar con agua y jabón para eliminar esporas.
3. Sumergir cápsula en cloro comercial al 5.25% con una gota de Tween 20 durante 5-15
minutos (dependiendo del tamaño y textura de la cápsula, para cápsulas lisas y pequeñas
sumergir por 5 min y para cápsulas rugosas y grandes sumergir hasta 15 min).
4. Ingresar a la cámara de flujo laminar el recipiente con la cápsula y el cloro para
descartarlo.
5. Realizar tres lavados con agua destilada, previamente esterilizada, durante 3 minutos cada
uno.
6. Sumergir la cápsula en alcohol al 70% durante 5-10 minutos (dependiendo del tamaño y
textura de la cápsula).
7. Realizar tres lavados más con agua estéril durante 3 minutos cada uno.
8. Dejar secar por completo en papel estéril antes de realizar el corte.

Figura 2 Cápsulas de orquídea abiertas

Foto 3. Cápsulas maduras y abiertas de Guarianthe aurantiaca

Fuente: Laboratorio de Biotecnología del Iarna/URL

3.4 Protocolo de desinfección de cápsulas abiertas

Para la desinfección de cápsulas que ya están abiertas es necesario aplicar la técnica que se
describe a continuación. Tome en cuenta que en este caso las probabilidades de contaminación
del medio de cultivo son más altas que cuando las cápsulas se encuentran aún cerradas.

Equipo y reactivos utilizados en la desinfección de cápsulas abiertas:

- Hipoclorito de sodio al 0.5%

- Tween 20
- Agua destilada estéril
- Beakers
- Embudo estéril
- Pinzas estériles
- Papel para filtrar

Protocolo de desinfección para cápsulas abiertas:

1. En un beaker con cloro comercial al 0.5% y una gota de Tween 20, verter los embriones de
la cápsula.
2. Dejarlos durante 15 minutos en cloro (0.5%) revolviendo cada minuto.
3. Ingresar a la cámara de flujo laminar con el beaker que contiene a los embriones y filtrar
utilizando papel filtro previamente tratado en autoclave y un embudo desinfectado.
4. Realizar 5 lavados con agua destilada previamente esterilizada, agregando el agua al papel
filtro.

Dejar secar el papel filtro por completo antes de sembrar.

 Foto 4: Siembra de cápsulas de orquídea. Fuente: Laboratorio de Biotecnología Iarna/URL

3.5 Preparación de Medios de Cultivo

Para la preparación de soluciones stock prepare y tenga disponibles los siguientes materiales y
equipo:

- Beakers de 2 lt o más
- Probetas 1 lt y de 100 ml
- Espátulas
- Bandejas para pesar
- Papel o recipientes plásticos para pesar
- Goteros
- Plato agitador
- Agitadores magnéticos
- Balanza analítica 0.01mg (min)
- Autoclave

El cuadro 1 muestra los compuestos y las cantidades que requiere la preparación de los medios de
cultivo Murishage & Skoog (MS); ½ MS; MS con hormonas; Knudson 1, 2 y 3 y Coco-tiamina.
El procedimiento usual para preparar medio de cultivo es hacer soluciones stock por separado,
que después se agregan para hacer una solución final. Estas soluciones stock pueden almacenarse
para utilizarse posteriormente en la preparación de más medio.

Para hacer los medios MS haga una solución por macronutrientes; una solución de calcio, una de
hierro, una solución de micronutrientes y una de vitaminas. A estas soluciones se les conoce como
soluciones madre o stock. Vierta la solución en un frasco con tapadera de rosca. Coloque el frasco
con solución y tapadera de rosca solo sobrepuesta en autoclave por 20 minutos.

Más adelante tomará solo una pequeña cantidad de éstas para preparar el medio de cultivo en el
que hará las siembras.

Para preparar el medio Knudson C1 haga soluciones madre por componente. Agregue la cantidad
indicada del componente en el cuadro 1 y enrase con agua desmineralizada a 1 litro.

Para los medios Knudson C2 y C3 y el de Coco-tiamina agregue las cantidades detalladas en el

cuadro a ¾ de litro de agua desmineralizada y finalmente enrace a 1 Lt.

Cuadro No. 1 Componentes de los medios de cultivo

Solución (g/Lt) Compuesto MS MS + KC1 KC2 KC3 Coco-

Hormonas Tiamina
Macronutrientes NH4NO3 16.5000 16.5000
KNO3 19.0000 19.0000
MgSO4.7H2O 3.7000 3.7000 5.0000 0.2500 0.2500
KH2PO4 1.7000 1.7000 5.0000 0.2500 0.2500
(NH4)2 SO4 10.0000 0.5000 0.5000

Calcio CaCl2.2H2O 4.4000 4.4000

Ca(NO3)2 * H2O 20.0000
Ca(NO3)2 *4 H2O 1.0000 1.0000

Micronutrientes H3BO3 3. 1000 3. 1000

MnSO4.4H2O 11.1500 11.1500 0.1500 0.0075 0.0057
ZnSO4.7H2O 4.3000 4.3000
KI 0.4150 0.4150
NaMoO4.2H2O 0.1250 0.1250
CuSO4.5H2O 0.0125 0.0125
CoCl2.6H2O 0.0125 0.0125

Hierro Titriplex III 3.7250 3.7250 3.7250

(Na2EDTA.2H2O)
FeSO4.7H2O 2.7850 2.7850 2.7850 0.0250 0.0250

Vitaminas Myo-inositol 10.0000 10.0000 10.0000

Glicina 0.2000 0.2000 0.2000
Ácido Nicotínico 0.0500 0.0500 0.0500
Piridoxina-HCl 0.0500 0.0500 0.0500
Tiamina-HCl 0.0100 0.0100 0.0100
 Ácido 1- 0.0001
naftalenacético
Ácido giberélico 0.0005

Otros
sacarosa 30 30 20 20 20
Bayfolán 2.5 ml
Agua de coco 250 ml
Clorhidrato de 0.2 gr
tiamina
Carbón activado 2 gr

3.5.1 Medio MS (Murashige & Skoog, 1962)

Para preparar 1 Litro de Medio MS:

Coloque un beaker sobre una plancha agitadora y active la agitación. Agregue las siguientes
cantidades de soluciones:

a. 100 ml de solución de Macronutrientes.

b. 100 ml de solución de Calcio.
c. 2 ml de solución de Micronutrientes.
d. 10 ml de solución de Hierro.
e. 10 ml de solución de Vitaminas.
f. 30 g. de Sacarosa.
g. Enrace a 1 litro con agua destilada.
h. Ajuste el pH y llévelo a 5.8 agregando Hidróxido de Sodio (NaOH) o Ácido Clorhídrico (HCl)
o Ácido Sulfúrico (H2SO4).
i. Agregue 7 g de agar, agite y lleve a ebullición.
j. Sirva en recipientes a utilizar y póngalos en autoclave por 25-30 minutos.

3.5.2 ½ Medio MS (Murashige y Skoog, 1962):

Para preparar 1 Litro de ½ Medio MS:

Coloque un beaker sobre una plancha agitadora y enciéndala. Agregue las siguientes cantidades de
soluciones:

a. 50 ml de solución de Macronutrientes.
b. 50 ml de solución de Calcio.
c. 1 ml de solución de Micronutrientes.
d. 5 ml de solución de Hierro.
e. 5 ml de solución de Vitaminas.
f. 15 g. de Sacarosa.
 g. Enrace a 1 litro con agua destilada.
h. Lleve el pH de la solución a 5.8 con Hidróxido de Sodio (NaOH) o Ácido Clorhídrico (HCl) o
Ácido Sulfúrico (H2SO4).
i. Agregue 7 g de Agar, agite y lleve a ebullición.
j. Sirva en recipientes a utilizar y ponga en autoclave por 25-30 minutos.

3.5.3 Medio MS modificado con ANA y GA3 (Murashige y Skoog, 1962) (Ávila y Salgado-
Garciglia, 2006):

Prepare 1 litro de solución siguiendo las instrucciones del inciso 3.5.1 Después de agregar las
vitaminas, añada 0.1 mg de ácido 1-naftalenacético y 0.5 mg de ácido giberélico. Prosiga con el
mismo procedimiento de la preparación del MS.

3.5.4 Medio para crecimiento de orquídeas de Coco-tiamina (Archila, E. s.p.):

Coloque un beaker de 2 lt en una plancha agitadora y agregue:

a. 2.5 ml de Bayfolan (Bayer)

b. 250 ml de agua de coco filtrada
c. 1 cápsula de Supertiamina (Laboratorios Ancalmo) o 0.2 de clorhidrato de tiamina
d. 2 g. de carbón activado
e. Enrace a un litro con agua destilada
f. Ajuste el pH a 5.8 con Hidróxido de Sodio (NaOH) o Ácido Clorhídrico (HCl) o Ácido
Sulfúrico (H2SO4).
g. Agregue 7 g. de Agar, agite y lleve a ebullición.
h. Sirva en recipientes a utilizar y ponga en autoclave por 25-30 minutos.

3.5.5 Medio Knudson C1 (Rizal Technological University, 2010):

Para preparar 1 Litro de Medio Knudson C1:

Agregue las siguientes soluciones en beaker sobre plato agitador

1. 50 ml de solución de Sulfato de Amonio.

2. 50 ml de solución de Nitrato de Calcio monohidratado.
3. 50 ml de solución de Fosfato de Potasio
4. 50 ml de solución de Sulfato de Magnesio heptahidratado.
5. 50 ml de solución de Sulfato de Manganeso heptahidratado.
6. 10 ml de solución de Hierro.
7. 10 ml de solución de Vitaminas.
8. Agregue 20 g de Sacarosa.
9. Enrace a 1 litro con agua destilada.
 10. Ajuste pH a 5.6 con Hidróxido de Sodio (NaOH) o Ácido Clorhídrico (HCl) o Ácido Sulfúrico
(H2SO4).
11. Agregue 7 g de Agar, agite y lleve a ebullición.
12. Sirva en recipientes y ponga en autoclave por 25-30 minutos.

3.5.6 Medio Knudson C2 (Damon A. et al, 2004):

Para preparar 1 Litro de Medio Knudson C2:

En 900 ml de agua destilada agregar cada uno de los siguientes reactivos y mantener una agitación
constante:

1. 1 g de Nitrato de Calcio tetrahidratado.

2. 0.25 g de Sulfato de Magnesio heptahidratado.
3. 0.25 g de Fosfato de Potasio.
4. 0.5 g de Sulfato de Amonio.
5. 0.0075 g de Sulfato de Manganeso tetrahidratado.
6. 0.025 g de Sulfato de Hierro heptahidratado.
7. 20 g de Sacarosa.
8. Enrazar a 1 litro con agua destilada.
9. Ajustar el pH a 5.6 con Hidróxido de Sodio (NaOH) o Ácido Clorhídrico (HCl) o Ácido
Sulfúrico (H2SO4).
10. Agregar 7 g de Agar, agitar y calentar hasta ebullición.
11. Servir en recipientes y autoclavear por 25-30 minutos.

3.5.7 Medio Knudson C3 (Mayo A. et al., 2010):

Para preparar 1 Litro de Medio Knudson C3:

En 900 ml de agua destilada agregue cada uno de los siguientes reactivos y mantenga en
constante agitación:

1. 1 g de Nitrato de Calcio tetrahidratado.

2. 0.25 g de Sulfato de Magnesio heptahidratado.
3. 0.25 g de Fosfato de Potasio.
4. 0.5 g de Sulfato de Amonio.
5. 0.0057g de Sulfato de Manganeso tetrahidratado.
6. 0.0250 g de Sulfato de Hierro heptahidratado.
7. 20 g de Sacarosa.
8. Enrace a 1 litro con agua destilada.
 9. Ajuste el pH a 5.6 con Hidróxido de Sodio (NaOH) o Ácido Clorhídrico (HCl) o Ácido
Sulfúrico (H2SO4).
10. Agregue 7 g de Agar, agite y caliente hasta ebullición.
11. Sirva en recipientes y ponga en autoclave por 25-30 minutos.

4. Resultados de la germinación y desarrollo crecimiento de algunas

especies de orquídeas

El crecimiento de varias especies de orquídeas en diferentes medios de cultivo in vitro ha sido

tema de investigación planteado dentro del marco de la línea de de Biotecnología del Iarna/URL.
Dicha investigación está diseñada para cumplir con el objetivo de Desarrollar conocimientos que
apoyen a la conservación ex situ de especies de flora nativas, endémicas y/o amenazadas de
Guatemala, planteado dentro del Programa.

Los resultados obtenidos después de 2 años de iniciada la investigación se comparten a

continuación con la finalidad de difundir información que contribuya a la propagación de 24
especies con distribución en el país.

Barkeria skinneri: Prueba de siembras en dos

concentraciones distintas del medio MS. Los
resultados de la germinación son positivos en
ambos medios, el promedio de germinación es
de 25 días. El desarrollo después de la
germinación es lento en ambos medios. El
crecimiento reportado después de 18 meses
de germinación es de 2 cmts

Catasetum intergerrinum: Siembras en dos

concentraciones diferentes del medio MS. La
germinación se observó a los 7.5 meses de
haberse sembrado. El crecimiento de las
plantas es rápido en ½ MS. La aclimatación de
las plantas se hizo 6 meses después de
observarse la germinación cuando las plantas
alcanzaron un pseudobulbo de 1.5 cmts.
Comparettia falcata: Siembras en dos
concentraciones diferentes del medio MS. Se
observa germinación mínima a los 6 meses de
siembra y muy bajo crecimiento de plantas al
año y 3 meses de haber germinado (menos de
1 cmt).
Epidendrum arbuscula: Siembra en medio MS
con hormonas adicionales. Presenta
germinación después de 2 meses de siembra.
No se observa desarrollo después de 7 meses
de germinación.

Epidendrum sp: Siembra en medio MS y ½ MS.

Presenta germinación después de 1 mes de
siembra. Germinación adecuada en MS y buen
desarrollo en ½ MS.

Epidendrum macdougalli: Siembra en medio

MS. Germina 12 días después de sembrarse y
se observa buen desarrollo. Mejor desarrollo
en 1/2MS. Se observa crecimiento de 4 cmts
después de 1 año de haber germinado. La
aclimatación se hizo con plantas de 4 cmts.
Epidendrum radicans: Siembra en medio MS y
½ MS. Germinación se observa después de 1
mes de siembra. Buen desarrollo en MS y ½
MS.

Epidendrum poliantum Siembra en MS.

Germina 14 días después de la siembra. Pobre
desarrollo en MS y en MS + hormonas. Buen
desarrollo en Coco-Tiamina y en ½ MS. Alcanza
5 cmts de altura después de 2 años de haber
germinado.
Epidendrum ciliare Siembra en ½ MS. Germina
2 meses y 8 días después de la siembra. Se
observa 1 cmt de crecimiento después de 5
meses de haber germinado.
Encyclia cordigera Siembra en MS y ½ MS.
Buena germinación en ambos medios y pobre
desarrollo en MS. Pruebas de desarrollo en
KC1, KC2, KC3 y Coco-tiamina negativos. Sólo se
observa desarrollo en ½ MS. Alcanza talla de 5
cmt después de 10 meses de haber germinado.
Encyclia cordigera Siembra en MS y ½ MS.
Buena germinación en ambos medios y pobre
desarrollo en MS. Pruebas de desarrollo en
KC1, KC2, KC3 y Coco-tiamina negativos. Sólo se
 observa desarrollo en ½ MS. Alcanza talla de 5
cmt después de 10 meses de haber germinado.

Encyclia cochleata Siembra en ½ MS. Germina

34 días después de la siembra. Diez meses
después de la germinación se observan 2 cmt
de crecimiento.

Encyclia fragans Siembra en medio ½ MS. Se

observa germinación después de 82 días a
partir de la siembra. El crecimiento observado
es de 0.5 cmt después de 10 meses a partir de
la germinación.

El Cuadro 1 presenta los resultados parciales obtenidos a la fecha de dicha investigación y puede
usarse como guía para decidir en qué medio sembrará sus semillas de orquídeas.

Cuadro 1. Germinación y desarrollo de especies de orquídeas por medio de cultivo

Género/Especie MS MS + H ½ MS K C1 KC2 K C3 Coco- Observaciones

tiamina
Barkeria Skinneri G,d G, d Buena germinación en MS
y ½ MS. Lento desarrollo
en ambos
Catasetum sp. G D Buena germinación en MS
y excelente desarrollo en ½
MS
Comparettia falcata g g Pobre germinación en
ambos medios y desarrollo
muy lento
Epidendrum arbusculum G Buena germinación en ½
MS
Epidendrum sp. Gd D Buena germinación en MS
y buen desarrollo en ½ MS
Epidendrum macdougallii G, d D Buena germinación en MS.
Buen desarrollo en MS y
mejor desarrollo en ½ MS.
Epidendrum radicans G, D D Buena germinación en MS
y buen desarrollo en MS y
en ½ MS
Epidendrum polyanthum Gd d D D Buena germinación en MS
y pobre desarrollo en el
mismo. Buen desarrollo en
½ MS y coco-tiamina
Epidendrum ciliare G Buena germinación en ½
MS
Encyclia cordigera G d G,D d d d d Buena germinación en MS
y ½ MS. No hay desarrollo
adecuado en medios MS, ½
MS, K1. Demás medios en
evaluación
Encyclia cochleata Gd Buena terminación en ½
MS. Desarrollo lento en ½
MS
Encyclia fragans G
Guarianthe aurantiaca G d G, d D Buena germinación en MS
 y MS+H. Desarrollo en
estos medios es lento y se
marchitan hojas.
El desarrollo más rápido se
observa en Coco-tiamina
G. guatemalensis G GD Buena germinación en
ambos medios. Desarrollo
más acelerado en ½ MS
Laelia sp. G, D Buena germinación y buen
desarrollo en ½ MS
Lycaste sp. G
Lycaste cochleata G
Lycaste ipala G,D Buena germinación y
desarrollo en ½ MS
Oncidium sp. G Buena germinación en ½
MS
Prosthechea ochracea G, D Buena germinación y buen
desarrollo en ½ MS
Ryincholaelia digbyana G Germinación en ½ MS
Sobralia macrantha Germinación en ½ MS
G
Stanhopea sp. G, D Buena germinación y buen
desarrollo en ½ MS
Trichocentrum G Buena germinación en MS
cavendishianum
Fuente: Investigación del Programa de Biotecnología del Iarna/URL.

M: Murashige & Skoog; ½ MS Mitad de Murashige & Skoog; MS+H Medio Murashige & Skoog con hormonas; KC1 Medio
Knudson receta 1; KC2 Medio Knudson receta 2; KC3 Medio Knudson receta 3.

G: Buena Germinación; D: Buen desarrollo de plántula; g: germinación pobre/lenta; d: desarrollo pobre/lento.

5. Cuidado de orquídeas in vitro

Los recipientes con cultivo pueden permanecer en sitios sin luz directa hasta el momento de
germinar. Al observar el primer indicio de germinación, deben tener acceso a luz directa 14 horas
diarias. Coloque estos recipientes en áreas de acceso restringido para evitar su exposición a
agentes contaminantes y de preferencia fumigue el ambiente cada 6 meses contra ácaros. Esta
área de crecimiento debe permanecer a temperatura constante o con cambios de temperatura
muy leves. La temperatura a la que se mantenga debe corresponder a la del hábitat de las plantas
que se trabajan.

El primer crecimiento será abundante por lo que necesitará reubicar a las plantas en otros
recipientes, a este paso se le conoce como trasferencia. Antes de sacar las plantas al aire libre,
planee trasladarlas una vez al mes o al menos una vez cada dos meses previo a su trasplante ex
vitro.

6. Traslado de plantas al invernadero

Las plantas que presentan raíces, tallos, hojas y pseudobulbo, para ciertas especies, están listas
para salir del vidrio y comenzar su aclimatación al medio natural.

Saque a las plantas del recipiente y lávelas con suficiente agua corriente para quitar todo el medio
que pueda haber quedado adherido en las raíces. Sumérjalas completamente y sólo por unos
segundos en una solución fungicida.

Transfiera las plantas a medios con materiales que permitan buena filtración de agua y aireado de
raíces. Piedra pómez, carbón, corteza de pino, cáscara de coco y pashte son algunos materiales
recomendados para hacer los medios externos. Recuerde que éstos deben proporcionar
principalmente soporte a la planta y a la vez deben retener poca agua y permitir la aireación de las
raíces.

Las primeras semanas después de haberlas extraído del vidrio, cúbralas con una tela agrícola
húmeda y/o rocíe las plantas con un aspersor de gota fina. Recuerde que cada especie tiene
preferencias de humedad, luz y temperatura. Infórmese sobre las condiciones climáticas de la
región de donde proviene la especie y sobre su hábito (litófito, epífito o terrestre) para hacer su
aclimatación.

Glosario

AGAR: Polisacárido en polvo que proviene de algas y que se usa como gelificantes de medios de
cultivo. Por lo general se usa a concentraciones de 6-12g/L.

AUTOCLAVE: Máquina que alcanza elevada temperatura a alta presión y que se utiliza para
esterilizar equipo y líquidos.

AUXINAS: Grupo de reguladores del crecimiento de callos, división celular, alargamiento celular,
iniciación de raíces adventicias, dominancia apical, mantenimiento de dicha dominancia y
embriogénesis somática.

CAMARA DE FLUJO LAMINAR: Area de trabajo que tiene un flujo de aire estéril circulando. El aire
se mueve con velocidad uniforme y en flujos paralelos. La unidad tiene un filtro HEPA (alta
eficiencia de partículas aéreas) que remueve partículas mínimas que vuelan en el aire.

GIBERELINA: Regulador del crecimiento que influye sobre el alargamiento de células, promueve el
crecimiento intermodal y saca a algunas semillas de la dormancia.

HORMONAS: Reguladores del crecimiento y desarrollo de plantas que ocurren naturalmente en

concentraciones muy pequeñas (citoquininas, auxinas y giberelinas) Pueden producirse dentro de
la planta o añadirse de forma exógena.
In VITRO: Crecer dentro de vidrio. Propagación de plantas en un ambiente artificial controlado
usando recipientes de vidrio o plástico, técnicas asépticas y un medio de crecimiento.

MACRONUTRIENTES: Elementos que constituyen más del 90% de un medio de crecimiento de

plantas. Dentro de éstos se incluyen el nitrógeno (N), fósforo (P), potasio (K) y algunos secundarios
como calcio (Ca), magnesio (Mg) y azufre (S).

MICRONUTRIENTES: Elementos que son esenciales para el crecimiento de la planta y que se

requieren en cantidades mínimas. Dentro de éstos se encuentran el boro (B), cloro (Cl), cobalto
(Co), cobre (Cu), hierro (Fe), yodo (I), molibdeno (Mo), manganeso (Mn), sodio (Na) y zinc (Zn).

SOLUCIONES STOCK: Composiciones concentradas de nutrientes formuladas por sales minerales,

que se hacen anticipadamente para hacer varios lotes de medios.

7. Referencias

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Guatemalan Orchids. En: Biodiversidad de Guatemala. Cano, E (Ed). Guatemala: Universidad del
Valle de Guatemala.

Dix, M.W. 2013.Ecólogo y especialista en orquídeas. Entrevista personal.

Fonseca, J. 2013. Asociación Guatemalteca de Orquideología. Entrevista personal.

Macz, O.E. 1995. Manual para la Propagación de Orquídeas in Vitro. Guatemala: Universidad
Rafael Landívar.

Maldonado, M.R. 1984. El Cultivo y Propagación de Orquídeas en Guatemala: Cuidados Culturales.

Tesis para optar al título de Fitotecnista Especializado en Cultivos otorgado por la Universidad
Rafael Landívar. Guatemala: URL.

Mayo, A. et al. 2010. Germinación in vitro de semillas y desarrollo de plántulas de orquídeas

silvestres de Tabasco. Tabasco, México: Universidad Juárez Autónoma de Tabasco.

McKendrik, S. 2000. Manual para la Germinación In Vitro de Orquídeas. Ecuador: Ceiba Foundation
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Menchaca, R. 2011. Manual para la Propagación de Orquídeas. México: Comisión Nacional

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Instituto de Agricultura Recursos Naturales y Ambiente/Universidad Rafael Landívar IARNA/URL.
2013. Programa de Investigación: Biotecnología. IARNA: Serie Documentos de Trabajo 01/2013.
Guatemala: autor

Instituto de Agricultura Recursos Naturales y Ambiente/Universidad Rafael Landívar IARNA/URL.

2012. Perfil Ambiental de Guatemala2010-2012: Vulnerabilidad local y creciente construcción de
riesgo. Guatemala: autor

The Plant Biotechnology Project. 2010. A Guide Book in Orchid Micropropagation. Philippines:
Rizal Technology University.

Veliz, M. 2008. Diversidad florística de Guatemala. En: Guatemala y su Biodiversidad: Un enfoque

histórico, cultural, biológico y económico. CONAP (Ed). Guatemala: CONAP.