Universidad Francisco de Paula Santander. Facultad Ciencias Agrarias y del Ambiente.
Ingeniería Biotecnológica.
Resumen
El laboratorio de Biología Molecular es el espacio físico donde se ejecutan actividades propias
asociadas al tipo de investigación que se realice. Para que estas actividades se lleven a cabo sin
ningún contratiempo, se deben tener en cuenta las reglas mínimas para garantizar la integridad
física del investigador, alejándose de cualquier situación riesgos a que sea foco de eventos
perjudiciales. (Sandoval, 2013). El siguiente informe daremos a conocer algunas normas de
bioseguridad, normas basicas antes de entrar al laboratorio y el reconocimiento e identificación
de los equipos y algunos materiales utilizados basicos en el laboratorio de biología molecular
palabras claves: micropipetas, volúmenes, normas de bioseguridad.
Introducción
La bioseguridad comprende un conjunto de medidas preventivas, destinadas a mantener el
control de factores de riesgo laborales procedentes de agentes biológicos, físicos o químicos,
logrando la prevención de impactos nocivos, asegurando que el desarrollo o producto final de
dichos procedimientos no atenten contra la salud y seguridad de los estudiantes y todo el
personal que realice prácticas en el laboratorio. El nivel de bioseguridad asignado a un trabajo
dependerá de la evaluación del riesgo que represente la ejecución de dicho trabajo y estos
abarcan desde la utilización de agentes patógenos hasta el diseño y construcción de las
instalaciones. Además de velar por la seguridad del individuo, atienden a la precaución y cuidado
de los diferentes materiales que se utilicen dentro del área de trabajo. (Sandoval, 2013). El
reconociemiento del material y los equipos del laboratorio Tambien son indispensables para
poder hacer unas buenas practucas de laboratorio tanto para evitar cualquier accidente y para
haci tener unsa buenas practicas sobre el area de trabajo.
MATERIALES Y REACTIVOS
Cámara fotográfica o cellular para tomar imagen de los equipos
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EQUIPOS
Balanza analitica, marca PRECISA:
La balanza analítica es un instrumento utilizado en el laboratorio, que esta diseñada para medir
pequeñas masas, en un principio de un rango menor del miligramo (y que hoy día, las digitales,
llegan hasta la diezmilésima de gramo: [0,0001 g o 0,1 mg]). Su característica más importante es
que poseen muy poco margen de error, lo que las hace ideales para utilizarse en mediciones muy
precisas. están bastante desarrolladas de manera que no es necesaria la utilización de cuartos
especiales para la medida del peso. Aun así, el simple empleo de circuitos electrónicos no
elimina las interacciones del sistema con el ambiente. De estos, los efectos físicos son los más
importantes porque no pueden ser suprimidos. La balanza analítica, por otra parte, tiene los
mecanismos necesarios para contrarrestar la masa que está siendo medida sin necesidad de usar
masas reales. Para esto, debe tener los ajustes de calibración necesarios para compensar las
diferencias gravitacionales. En este sentido, se vale de un electroimán que genera la fuerza que compense la muestra que se esté midiendo. El resultado lo arroja midiendo la fuerza necesaria
que se haya requerido para equilibrar la balanza.
Fig1.Balanza analítica, marca PRECISA
Autoclave semiautomática, maraca STURDY
Es un recipiente de presión metálico de paredes gruesas con un cierre hermético que permite
trabajar a alta presión para realizar una reacción industrial, una cocción o
una esterilización con vapor de agua. Su construcción debe ser tal que resista la presión y
temperatura desarrollada en su interior. La presión elevada permite que el agua alcance
temperaturas superiores a los 100 °C. La acción conjunta de la temperatura y el vapor produce la
coagulación de las proteínas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la
reproducción de éstos, hecho que lleva a su destrucción. Las autoclaves son ampliamente
utilizadas en laboratorios, como una medida elemental de esterilización de material, obtiene una
presion interna 103kPa, lo cual provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados
Celsius a un tiempo tipico de 15-20 minutos.
Fig2. Autoclave semiautomática, maraca STURDY
Baño seco, marca LABNET
Los baños secos de Labnet Digital están disponibles en configuraciones solas, duales, y cuatro
del bloque y proporcionan una gama de temperaturas amplia hasta 150C, que lo hace útil para
una variedad de usos en los laboratorios de la biología molecular, de la histología, clínicos,
ambientales, e industriales. Se han diseñado para incorporar la mejor combinación de
características incluyendo capacidad del bloque, exhibiciones duales, y una punta de prueba
externa de la temperatura que da a investigadores de las ciencias de la vida la confianza y la
eficacia que necesitan al trabajar con las muestras preciosas.
Fig3. Autoclave semiautomática, maraca STURDY
Plancha de calentamiento con agitación, marca BERCHMARK
En el laboratorio, las placas calefactoras se utilizan generalmente para calentar el material de
vidrio o su contenido. Poseen un selector de potencia que permite ajustar la emisión térmica y el
tiempo necesario para calentar un determinado recipiente. Una placa analógica típica tiene unas
dimensiones aproximadas de 300 x 300 mm y una superficie de cerámica capaz de resistir el
ataque químico. Alcanzan temperaturas máximas en la superficie de hasta 450 °C, aunque por lo
general no se emplean temperaturas tan elevadas. Sus aplicaciones son muy variadas, aunque
predomina el calentamiento de recipientes con líquidos como vasos de precipitados, matraces de
fondo plano. Se deben cumplir las instruciones de uso y mantenimiento y cumplir los requisitos
de seguridad para evitar accidentes.
Fig4. Plancha de calentamiento con agitación, marca BERCHMARK
Centrifuga, marca HERMLE
La centrífuga se ha diseñado para utilizar la fuerza centrífuga para separar sólidos suspendidos
en un medio líquido por sedimentación o para separar líquidos de diversa densidad. Los
movimientos rotacionales permiten generar fuerzas mucho más grandes que la gravedad, en
periodos controlados de tiempo.
Fig5. Centrifuga, marca HERMLE
Micropipetas de (0.5-10ul;10-100uñ;100-1000ul), marcas BRAND Y LABNET
La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para succionar y transferir pequeños
volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas analíticas. Es de destacar
que el uso de micropipeta permite emplear distintos líquidos sin tener que lavar el aparato: para
ello, se emplean puntas desechables, de plástico, que habitualmente son estériles. Los volúmenes
captables por estos instrumentos varían según el modelo: los más habituales, denominados p20,
p200 y p1000, admiten un máximo de 20; 200 y 1000 μL, respectivamente.. Existen varios tipos
de puntas: por ejemplo, las amarillas para pipetear volúmenes pequeños (por ejemplo, 10 μL), y
las azules para pipetear volúmenes grandes (por ejemplo, 800 μL).
Fig6. Micropipetas de (0.5-10ul;10-100uñ;100-1000ul), marcas BRAND Y LABNET
Microcentriguga, marca HETTICH
Microcentrífuga es una máquina centrífuga especializada utilizada en el laboratorio clínico. Ésta
pone en rotación una muestra más pequeña para separar por fuerza rotatoria sus componentes o
fases (generalmente una sólida y una líquida), en función de su densidad.
Fig7. Microcentriguga, marca HETTICH
Transiluminador UV
El transiluminador es un equipo necesario que usa en principio luz UV con diferentes longitudes
de onda como recurso para observar, analizar y tomar fotografías de proteínas, aminoácidos,
péptidos, ácidos nucleicos en geles de agarosa con colorantes como el bromuro de etidio. Su
diseño especial emite longitudes de onda UV de intensidad de excitación unitaria o doble para la
retroiluminación de materiales fluorescentes transparentes. Los modos 254 nm, 312 nm (302
nm), 365 nm, 254 & 365 nm, 312 nm & 254 & (302 nm) están disponibles para diferentes
aplicaciones. Hay dos opciones de dimensiones de visualización de tamaño de filtro: 26 x 21 cm
y 21 x 21 cm para las diferentes necesidades del usuario. El modo de 365nm es ofrecido para
visualizar con facilidad los geles bajo onda larga durante largos períodos de tiempo, evitando
rasgar o dañar la foto. El modo de 254nnm se utiliza para irradiar las muestras. El modo 312nm(302nm) se sugiere para operación con geles generales. Los modos de longitud de onda
unitaria están equipados con un interruptor de alta intensidad / baja intensidad
Fig8. Transiluminador UV
Camara de Elecctroforesis, horizontal(pequeña, contaminada con BrEt)marca THERMO
SCIENTIC, horizontal(pequeña), marca BIORAD, dual vertical(minigeles),
vertical(grande), marca CLEAVER, horizontal(mediana),marca BIORAD, horizontal,
marca THERMO SCIENTIFIC
La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de un campo
eléctrico. La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido, a
través de una matriz porosa (electrophoresis en gel), o bien en disolución (electroforesis libre).
Dependiendo de la técnica que se use, la separación obedece en (electrophoresis en gel), o bien
en disolución (electroforesis libre). Dependiendo de la técnica que se use, la separación obedece
en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa.
Fig9. Camara de electrophoresis horizontal, marca THERMO SCIENTIC y BIORAD
Fig10. Camara de electrophoresis vertical, marca CLEAVER
Vortex, marca HEIDOLPH
Es un dispositivo simple que se usa comúnmente en los laboratorios para agitar pequeños tubos,
En los laboratorios de cultivos celulares y de microbiología se pueden utilizar para suspender las
células.
Fig11. Vortex, marca HEIDOLPH
Cabina de flujo laminar
Cámara de flujo laminar o campana de flujo laminar es un recinto que emplea un ventilador para
forzar el paso de aire a través de un filtro HEPA o ULPA y proporcionar aire limpio a la zona de
trabajo libre de partículas de hasta 0.1 micras. Estas cabinas están diseñadas para proporcionar
un aire limpio y constante a una velocidad de paso de aire de 0.30 a 0.50 metros por segundo.
Fig12. Cabina de flujo laminar
Termociclador, marca RESEARCH
Un termociclador, también conocido como máquina de PCR o reciclador térmico de PCR es un
aparato usado en Biología Molecular que permite realizar los ciclos de temperaturas necesarios
para una reacción en cadena de la polimerasa de amplificación de ADN o para reacciones de
secuencia con el método de Sanger. El modelo más común consiste en un bloque de resistencia
eléctrica que distribuye a través de una placa una temperatura homogénea durante tiempos que
pueden ser programables, normalmente con rangos de temperatura de 4 °C a 96 °C.
Fig13. Termociclador, marca RESEARCH
Congelador de -80°C, marca Panasonic
Diseñado específicamente para uso clínico y de laboratorio, los congeladores de -80°c se
fabrican para cubrir todas las necesidades de almacenamiento a bajas temperaturas, para poder
guardar todo el material que se deba guardar a -80°C o a temperaturas minimas depende de lo
que se pueda utilizar este congelador.
Fig13. Congelador de -80°C, marca Panasonic
Incubadora digital, marca ESCO
Las incubadoras Esco CelCulture® CO₂ son ampliamente utilizadas en la investigación
científica para cultivar y mantener cultivos celulares. Los campos típicos de aplicación incluyen
la ingeniería de tejidos, fertilización in vitro, neurociencia, investigación del cáncer,
investigación con células madre, medicina regenerativa y otras investigaciones
Fig14. Incubadora digital, marca ESCO
Cuestionario
1. Consultar otras sustancias toxicas que se utilicen en el laboratorio de biología molecular
VA-044: En biología molecular se utiliza para la separación de las proteínas la
electroforesis en gel de poliacrilamida. Esta técnica conocida como PAGE por sus siglas
en inglés, polyacrylamide gel electrophoresis, se basa en que las diferentes proteínas
migrarán a una velocidad distinta en un medio cargado eléctricamente.
TAPS: Otro buffer comercializado por Wako es el ácido N-[tris(hidroximetil)metil]-3-
aminopropanosulfónico (TAPS). El TAPS tiene capacidad reguladora entre pH 7.7 y 9.1.
Puede ser usado para electroforesis capilar de ADN, como fase móvil para cromatografía
y en otras técnicas de biología molecular.
HEPES: El HEPES (4-(2-hidroxietil)-1-piperazínetanosulfónico) es uno de los tampones
zwitteriónicos más usados en experimentos biológicos. Tiene capacidad reguladora entre
los valores de pH de 6.8 y 8.2.
Bis-Tris: Bis-Tris es la forma abreviada de llamar al bis(2-hidroxietil)amino-
tris(hidroximetil)metano usado en biología molecular para gran cantidad de ensayos. En
su estructura química se encuentra una amina terciaria que es la encargada de mantener el
equilibrio ácido base que le confiere capacidad reguladora a esta sustancia en el rango de
pH de 5.8 a 7.3. Puede ser usado en el ensayo de la creatina quinasa, como medio
protector de biomoléculas refrigeradas y en la biosíntesis de muchas otras moléculas de
interés en la investigación biomédica.
Target mRNA Cloning Kit Wako: Este reactivo de laboratorio es útil para la
amplificación del ARN mensajero cuando se cuenta con pocas moléculas de este. Puede
ser usado para cuantificar la cantidad de ARN etiquetado que está presente en un cultivo. PIPES: El nombre común del PIPES es ácido piperazín-N,N′-bis(2-etanosulfónico) y se
usa también como tampón en ensayos biológicos. Es uno de los buffers estudiados por
Good y colaboradores en la década de los 60. Este tampón ácido tiene una constante de
equilibrio cercana al pH fisiológico por lo que es muy útil en experimentos que precisan
del cultivo de células, resiste el paso por la autoclave, lo que le confiere una ventaja
adicional para ser seleccionado como tampón ácido en estudios que requieren la fijación
de células. ACES: ACES o ácido N-(2-acetamido)-2-aminoetanosulfónico es un tampón
zwiteriónico con capacidad reguladora en el rango de pH entre 6.4 y 7.4, Es útil para la
separación de proteínas por electroforesis de enfoque isoeléctrico (IEF) en dos
dimensiones ADA: El ácido N-(Carbamoilmetil)iminodiacético o ADA es un tampón biológico útil en
el rango de pH entre 6.4 y 7.4, usado para la preparación de gradientes de pH con
sustratos inmovilizados, por ejemplo en una columna capilar monolítica.
BES: El tampón conocido como BES es el ácido N,N-Bis(2-hidroxietil)-
2aminoetanosulfónico, este buffer biológico tiene utilidad en mucho procesos
dependientes del pH, entre los que se encuentra la separación por electroforesis capilar. TES: El ácido N-[tris(hidroximetil)metil]-2-aminoetanosulfónico, conocido como TES
que es usado, entre otras aplicaciones, para el crecimiento de células epidérmicas a pH
entre 7.4 y 7.9. Es también un buffer de Good.
Bicine: El bicine, nombre con el que se conoce a la N,N-bis(2-hidroxietil)glicina es un
tampón recomendado para ensayos bioquímicos que se realicen a bajas temperaturas.
Tiene un pKa de 8.35 y ha sido usado en ensayos de cristalografía, determinación
cuantitativa de biomoléculas y muchos otros experimentos de biología molecular.
MES: El buffer preparado con MES (ácido 4-morfolínetanosulfónico) es útil para el
cultivo celular de plantas en el rango de pH entre 5.8 y 6.5. Es usado como fase móvil
para aislar la tubulina de cerebro por cromatografía de gel.
CAP: Se conoce como CAPS al ácido 3-(ciclohexilamino)-1-propanosulfónico, buffer
utilizado en experimentos de biología molecular, de naturaleza zwiteriónica, que puede
usarse en el rango de pH entre 7.9 y 11.1. Entre otras aplicaciones se encuentra el secado
de proteínas, la secuenciación y análisis de aminoácidos y todos aquellos experimentos
donde la glicina puede actuar como interferente.
2. Consultar el uso de los siguientes equipos y menciónelos: termociclador de tiempo real, foto
documentador de geles, secuenciador automático y micro arreglos.
TERMOCICLADOR DE TIEMPO REAL:
La PCR a tiempo real permite cuantificar de forma relativa la expresión de nuestro gen de interés
en determinadas condiciones. Principio: utilizar un gen de referencia cuya expresión es constante
durante las condiciones del experimento (gen constitutivo). El proceso consta de dos partes: La
expresión del gen de interés será normalizada con la expresión del gen constitutivo. interés en las
condiciones
Fig15. Termociclador de tiempo real
FOTO DOCUMENTADOR DE GELES:
El equipo ChemiDoc XRS+ de Bio-Rad es un fotodocumentador que combina la tecnología de la
documentación de geles con la capacidad de detectar una señal quimioluminiscente mediante una
cámara CCD super-enfriada el ChemiDoc XRS+ le permite documentar geles de proteínas
teñidos con colorantes fluorescentes (p.e. Flamingo) y visibles (p.e. Coomasie) así como geles de
ácidos nucleicos. Fig16.Foto documentador de geles
SECUENCIADOR AUTOMATICO:
En otras palabras, pueden determinar el orden de las bases de nucleótidos en cualquier molécula
dada. La secuenciación de la molécula de ADN puede ser el primero de una serie de pasos
necesarios para averiguar cómo los nucleótidos específicos en una molécula de ADN interactúan
unos con otros y codifican características diferentes en un organismo.
Fig17. Secuenciador automatic
MICROARREGLOS:
Microarray es una superficie sólida a la cual se une una colección de fragmentos de ADN. Los chips de ADN se usan para analizar la expresión diferencial de genes, y se monitorean de manera simultánea los niveles de miles de ellos. Su funcionamiento consiste, básicamente, en medir el nivel de hibridación entre la sonda específica (probe, en inglés), y la molécula diana (target). Fig15. Termociclador de tiempo real
Fig18. Microarreglos 3. consultar acerca de las señales que se deben en el laboratorio de genética y biología molecular.
Tabla de señalización y etiquetado. (Maria elisa Baelo Alvarez, 2013)
Conclusione
El conocimiento adecuado de las normas de la bioseguraidad ayudan a tener un concepto basico
de todos los tipos de riesgos que pueden suceder en el laboratorio de biologia molecular y de el
buen manejo de practicas de laboratorio, es muy importante recalcar el uso de todos los
implementos basicos de laboratorio y el conocimiento de las sustancias u reactivos que se
utilizan en cada practica de laboratorio, fue importate conocer todos los diferentes equipos que
estan presentes en el laboratorio para tener un concepto basico y carcateristicas del mismo.
