Proyecto: “Adaptación e implementación de cinco cepas de hongos

comestibles en diferentes subproductos agrícolas para mejorar la

productividad y competitividad de ASOFUNGICOL en el Huila”

PRODUCCIÓN DE SEMILLA
COMERCIAL DE HONGOS
COMESTIBLES Y
MEDICINALES

Producción de semilla comercial de

hongos comestibles y medicinales

Fotografía
Archivo Cenicafé
Archivo Proyecto
PROTOCOLOS
Diseño • Producción en botellas planas
Martha Liliana Araque Fonseca
• Producción de semilla primaria
Cenicafé
Versión preliminar • Producción de semilla comercial
• Tabla de problemas y soluciones
Copyright © FNC –Cenicafé 2006
Realizado por: Nelson Rodríguez Valencia
CON EL APOYO DE: Investigador Científico I. Cenicafé.
Martha Liliana Araque Fonseca
Servicios Profesionales. Cenicafé
Francenid Perdomo Perdomo.
Servicios Profesionales. Cenicafé
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PRESENTACIÓN LITERATURA CONSULTADA

RODRÍGUEZ V., N. Cultivo de hongos comestibles. Apuntes del trabajo en la-
El proyecto empresarial de innovación y desarrollo tecnológi- boratorio. Chinchiná, Cenicafé. Disciplina Química Industrial. 2001. 152 p.
co “Adaptación e implementación de 5 cepas de hongos co-
RODRÍGUEZ V., N; JARAMILLO L., C. Cultivo de hongos comestibles del géne-
mestibles en diferentes subproductos agrícolas para mejorar ro Pleurotus. Boletín Técnico Cenicafé N° 27: 1-56. 2005.
la productividad y competitividad de la Asociación de produc-
tores de hongos comestibles de Colombia ASOFUNGICOL”,
tuvo como propósito encontrar las mejores formulaciones de
sustrato, elaborados a partir de los subproductos agrícolas
más abundantes en el departamento del Huila e identificar
las cepas de hongos de mayor rendimiento, facilitadas por el
Centro Nacional de Investigaciones de Café (Cenicafé), de
forma que se mejore el proceso de cultivo de setas de los
asociados.

De igual manera, se busca transferir a la Asociación todos

los conocimientos relacionados con el manejo del material
biológico y la producción de semilla comercial, por ser éste
uno de los mayores obstáculos que han tenido los cultivado-
res.

El proyecto se realizó con la financiación del SENA, la Go-

bernación del Huila y la CAM, bajo la dirección técnica de
Cenicafé.

En su desarrollo se utilizaron los laboratorios del Centro

Agropecuario la Angostura perteneciente al SENA, Regional
Huila, para la obtención de la semilla de los hongos y para el
manejo postcosecha del cultivo.

La fase de campo se realizó en los cultivos de los asociados

en los Municipios de Rivera, Garzón, Tesalia y Teruel, en el
Departamento del Huila.
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PROBLEMAS, CAUSAS Y SOLUCIONES TABLA DE CONTENIDO

Página

PROBLEMAS CAUSAS SOLUCIONES

Metodologías básicas de laboratorio 4
Acumulación de polvo y • Limpieza constante
desinfestación deficiente • Rotación de desinfes- Producción en botellas planas 8
en el laboratorio tantes
Deficiencia en la esterili- • Lavar y desinfestar co- Producción de semilla primaria 10
zación del material rrectamente el material.
Contaminación de la semi- • Verificar temperaturas y Producción de semilla comercial 13
lla con microorganismos tiempos de esteriliza-
competidores. ción descritos en los
(hongos y bacterias) protocolos Equipos de laboratorio 16
Fuente del inóculo conta- Seleccionar un inóculo de
minado calidad, libre de contami- Tabla de problemas y soluciones 18
nación y fresco.
Humedad de la semilla en Mantener la humedad del
rango inadecuado. grano de cereal en el
rango entre 38 y el 42%.

Presencia de fungicidas Cambiar de proveedor

en el grano

Grano viejo y deteriorado Seleccionar grano de

calidad, que esté sano y
No se presenta crecimien- libre de contaminantes e
to micelial en los granos insectos.
de cereal Humedades demasiado Mantener la humedad del
altas o demasiado bajas. grano de cereal en el
rango entre 38 y 42%.
Temperaturas inadecua- Mantener la temperatura
das de incubación de incubación en el rango
entre 20 y 25°C.
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METODOLOGÍAS BÁSICAS DE LABORATORIO

DESTILADOR
El diseño del laboratorio, el manejo Este equipo proporciona el agua destilada,
de las técnicas y la destreza del ingrediente esencial en la preparación de medios
personal para la producción de se- de cultivo y en el análisis fisicoquímico de las
milla comercial debe apuntar princi- muestras.
palmente a evitar errores que oca-
sionen contaminación que deteriore
la calidad de la semilla y con ello la
productividad de los cultivos.

DESINFESTACIÓN PLANCHA CON AGITACION

MAGNETICA
DEL LABORATORIO En la preparación de los medios de cultivo se puede
emplear este equipo que proporciona temperatura y
Uno de los requisitos básicos para el éxito de la técnica de producción de semi- agitación magnética.
lla comercial es mantener los cultivos libres de microorganismos contaminantes.
Se debe, por tanto, iniciar la limpieza del área de cultivo con el retiro de sucie-
dades de mesones, pisos, paredes y ventanas para luego desinfestar las super-
ficies con una solución de hipoclorito al 10% y trapear con hipoclorito al 2%. Los
contaminantes más comunes en estas áreas son bacterias y esporas de hon-
gos que habitan en el ambiente. Se recomienda realizar una rotación diaria con
las siguientes soluciones desinfestantes: Timsen (1g timsen/500ml agua), Va- BALANZA ANALÍTICA
nodine (2.5 ml vanodine/500ml agua), Cloruro de benzalconio (2.5g de cloruro La precisión en los pesos de los materiales es
de benzalconio/500ml agua), con el fin de evitar que se desarrolle resistencia importante para la debida preparación de los
de los microorganismos a los desinfestantes. medios de cultivo y el ahorro de los mismos.

Para garantizar la pureza de los cultivos de los hongos comestibles y medicina-

les, la etapa de producción de semilla debe realizarse en una cámara de flujo
laminar, la cual se desinfesta con la solución de cloruro de benzalconio horas
antes de iniciar las siembras, y durante el procedimiento de inoculación se utili-
za alcohol al 70% para desinfestar constantemente la cabina y las manos del
técnico.

Periódicamente y durante la siembra deben realizarse controles del ambiente,

por precipitación, para establecer el nivel de contaminación del laboratorio y la
BALANZA HALÓGENA DE HUMEDAD
Esta balanza ofrece rapidez en la determinación
frecuencia de aplicación de los desinfestantes. Esta evaluación consiste en la
de la humedad, la cual utiliza luz U.V que permite
exposición de una caja de petri con un medio de cultivo, por 15 minutos al am-
exactitud y agilidad en los muestreos.
biente que luego se incuba a una temperatura de 25°C durante 5 días, si se
utiliza como EMA para evaluar hongos y levaduras, y a una temperatura de 37°
C por 24 horas cuando se utiliza como medio Agar plate count para evaluar
bacterias.
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EQUIPOS DE LABORATORIO LAVADO, SECADO Y ESTERILIZACIÓN

DEL MATERIAL DE LABORATORIO
CABINA DE FLUJO LAMINAR
Equipo que proporciona un área de trabajo estéril El material que se va a utilizar en la preparación de la semilla debe sumergirse
para la preparación de medios de cultivo y de un día para otro en una solución jabonosa compuesta por 10 g de detergen-
siembra en los mismos, al contar con filtros HEPA te en polvo y 20 ml de hipoclorito comercial, por cada litro de agua. Se lava con
y luz ultravioleta, que eliminan el 99.9% de los abundante agua asegurándose de no dejar restos de jabón que puedan afectar
microorganismos presentes en el ambiente de la el crecimiento micelial. Seguidamente, se seca y esteriliza el material de vidrio y
cabina. de acero inoxidable en la estufa por 3 horas a 160°C y se deja enfriar en un
sitio previamente desinfestado.

Para la esterilización del material con vapor se utiliza una autoclave a 121°C
AUTOCLAVE durante 30 minutos. La autoclave debe lavarse cada día de por medio, por fue-
La esterilización en una autoclave se basa en la ra y por dentro, cambiársele el agua (utilizar agua destilada) y engrasarse con
aplicación de temperatura y presión para eliminar vaselina cada dos esterilizaciones.
los microorganismos y las esporas que se
encuentren en el material. Este equipo utiliza
sensores y alarmas que alertan los cambios del
ciclo o anomalías en su funcionamiento. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo utilizados para la conservación y propagación de las ce-
pas son: Papa Dextrosa Agar (PDA), el Agar Extracto de Malta (EMA) y el Agar
Sabouraud Dextrosa (SDA), que son especialmente elaborados para el creci-
miento de hongos e inhiben la contaminación bacteriana gracias a su bajo pH.

INCUBADORAS Para garantizar la esterilidad en la preparación de los medios de cultivo se re-

Estos equipos que proporcionan a los cultivos la quiere agua destilada estéril (el agua debe esterilizarse en una autoclave a
temperatura óptima de crecimiento y a su vez los 121ºC durante 20 min). Utilizar materiales previamente esterilizados en autocla-
protege de los contaminantes del ambiente ve, y los medios se sirven en la cabina de flujo laminar previamente desinfesta-
externo. da.

Los medios de cultivo se preparan de acuerdo con las recomendaciones dadas

por el fabricante registrados en la etiqueta del empaque. En una probeta se
mide el agua destilada estéril necesaria, se transpasa a un erlenmeyer junto
con la cantidad de medio necesario y se coloca en la estufa agitando constan-
temente con la ayuda de una varilla de vidrio hasta que el medio hierva. Luego
BAÑO DE MARÍA se sirve en tubos, botellas planas o cajas de petri, junto a mecheros, de la
Este equipo utiliza la técnica de baño de María y siguiente manera:
tiene control de temperatura y tiempo, que
permite emplearse para la preparación de medios
de cultivo y/o para la incubación de tubos de
cultivos.
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• En la preparación de los tubos, se utilizan 5 ml del medio de cultivo para

tubos de 15x100 mm. Si se utilizan tubos de mayor dimensión se puede 11. Preparar los materiales para la siembra, desinfestar el área o cabina de
utilizar una relación lineal para el cálculo del volumen del medio que se flujo laminar y encender los mecheros.
debe adicionar. Los tubos se cierran suavemente y luego se esterilizan 12. Correr un patrón de ambiente para determinar la eficiencia de los proce-
dentro de beakers y al terminar el proceso, se retiran de la autoclave, se sos de desinfestación.
ajustan las tapas y se disponen de forma inclinada hasta que se solidifi- 13. Inocular la semilla comercial utilizando una cuchara estéril, previamente
quen, con el fin de incrementar el área de contacto, en una zona previa- flameada en los mecheros.
mente desinfestada. 15. Utilizar una tasa de inoculación del 7% (1 frasco de semilla cepa madre
• En la preparación de cajas de petri se coloca a esterilizar el medio de para 3 bolsas de semilla comercial).
cultivo en un erlenmeyer con tapón de algodón y se sirve caliente bajo 16. Agitar la bolsa, ya puesto el tapón de algodón, para favorecer la distribu-
cámara de flujo laminar, adicionando 15 ml de agar por caja de petri, las ción de los granos de cereal invadidos de micelio en los nuevos granos
cuales deben estar estériles y se colocan a enfriar en un área cerrada y de cereal.
previamente desinfestada. Si las cajas no se van a utilizar de inmediato, 17. Rotular las bolsas con el nombre de la cepa, la fecha de inoculación y la
tan pronto el agar solidifique, se sellan con papel vinilpel y se refrigeran, fuente de inóculo.
por un tiempo máximo de 15 días. 18. Recoger la basura del área de trabajo y limpiar y desinfestar después de
la siembra y colocar trampas con formol comercial al 5% en volumen.
• En la preparación de las botellas planas se utilizan 60 ml del medio de 19. Colocar a incubar las bolsas en un área oscura, cerrada y previamente
cultivo, se les coloca un tapón de algodón y se esterilizan, disponiéndo- desinfestada.
las en forma vertical y luego se enfrian horizontalmente. Es importante 20. Evaluar diariamente el crecimiento micelial de las bolsas, retirando el
colocar a esterilizar tapones de algodón dentro de una bolsa de polipro- material contaminado, el cual debe disponerse conforme a lo descrito en
pileno termoresistente, en caso de tener que reemplazar algún tapón de el presente documento para material de desecho.
las botellas que resulte impregnado de medio y que puede favorecer el 21. Cuando la invasión micelial del hongo esté entre el 95 y 100%, colocarle
asentamiento de microorganismos contaminantes. vinilpel a los tapones de algodón, desinfestar las bolsas y conservarlas
• Se debe incubar una caja, tubo o botella con medio nutritivo estéril y sin en refrigeración (4 a 6°C) por un tiempo no superior a 15 días.
sembrar para verificar la esterilidad del medio de cultivo, en lo que se
conoce como “control medio”.

DISPOSICIÓN DEL MATERIAL DE DESECHO

Para evitar la contaminación cruzada o afecciones respiratorias en el personal
del laboratorio, es necesario esterilizar el material contaminado antes de su
eliminación. Para ello los tubos, las cajas o las botellas planas con el microor-
ganismo contaminante se debe esterilizar en autoclave durante 1 hora a 121°C.
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PROTOCOLO
PRODUCTIVIDAD
1. Cuantificar el número de bolsas necesarias, tapones de algodón, anillos
de pvc y semilla cepa madre necesarios para la elaboración de la semilla
comercial.
2. Lavar y desinfestar el material de acuerdo a lo expuesto en las metodo-
logías básicas del laboratorio.
3. Desinfestar los anillos de PVC con jabón e hipoclorito al 2% y lavar con
abundante agua. Colocar luego en un beaker y asperjar con alcohol y
mantener así en el laboratorio hasta su uso. No esterilizar debido a la
deformación que sufre el PVC a las temperaturas de esterilización.
4. Limpiar y desinfestar el laboratorio de acuerdo con las metodologías
básicas del laboratorio.
5. Mantener cerrada la puerta del laboratorio. Mantener una bata limpia y
tapabocas al interior del laboratorio y una a la salida para el cambio.
6. Hidratar el grano de cereal, de forma que se obtenga una humedad final
aproximada entre el 38 y el 42%. Pesar el grano necesario, lavarlo con
abundante agua hasta que quede limpio (5 lavados, aproximadamente),
escurrir y adicionar al grano lavado 500 ml de agua/kg de grano seco y
colocarlo a hidratar en una olla con fondo ancho hasta que se consuma
el agua, revolviendo constantemente.
7. La olla con el grano hidratado se lleva al laboratorio y se extiende para
enfriarlo en una superficie previamente desinfestada y cubierta por plás-
tico, y se revuelve para darle homogeneidad. De esta forma se evita la
condensación de agua dentro de las bolsas de polipropileno, lo que favo-
recería la aparición de bacterias.
8. Empacar el grano hidratado en bolsas de polipropileno, a razón de 1 kg/ Carpóforos de Pleurotus pulmonarius cultivados sobre
bolsa y colocar en el extremo de las mismas un aro de PVC y un tapón residuos agrícolas
de algodón.
9. Esterilizar en una autoclave a 121ºC. Posteriormente, retirar el material
del autoclave y enfriarlo en un sitio cerrado y previamente desinfectado.
10. La semilla cepa madre que se utilizará como inóculo debe retirarse de la El éxito de la producción de semilla comercial radica
nevera 1 día antes, para permitir su aclimatación. en el seguimiento estricto de los protocolos que en este
documento se describen, lo cual ofrece garantías en la
calidad de la semilla que se verá reflejado en la
productividad del cultivo.
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PRODUCCIÓN EN BOTELLAS PLANAS PRODUCCIÓN DE SEMILLA COMERCIAL

Para la inoculación de los sustratos de cultivo se utiliza la semilla comercial, la
El primer paso en la elaboración de la semilla comercial de los hongos consiste cual se elabora a partir de la semilla cepa madre o inóculo primario.
en la propagación del micelio, la cual se realiza en cajas de petri o en botellas
planas.

Semilla comercial de hongos comestibles

Propagación del micelio de hongos en botellas planas

La semilla comercial se prepara utilizando bolsas de polipropileno, resistentes a
altas temperaturas.

Para iniciar con la producción de cepa madre se hace una propagación masiva Se recomienda utilizar bolsas con las siguientes dimensiones: 20cm de ancho x
del micelio en Agar Extracto de Malta, utilizando botellas planas y de esta ma- 50cm de largo y calibre 3, a las cuales se adiciona 1 Kg de grano de cereal
nera contar con mayor cantidad de inóculo. hidratado, tal como se describió para la semilla inóculo primario.

En esta etapa del proceso es importante la observación diaria de los cultivos Esta cantidad de material ocupa aproximadamente el 40% del volumen de la
miceliales con el fin de retirar el material contaminado y evitar de esta manera bolsa, permitiendo la formación de una cámara de aire, de aproximadamente el
que se pueda presentar enmascaramiento de los contaminantes que puedan 60% de su capacidad restante, dado que en el extremo de la bolsa se coloca un
ser invadidos por el micelio de las cepas de interés, lo que ocasionaría la pérdi- aro o anillo de PVC de 3/4” y de 0.5 cm de longitud que sirve de sostén a un
da de la semilla primaria. tapón de algodón que permite el intercambio gaseoso en el proceso de coloni-
zación del micelio sobre los granos de cereal.
En el momento en que el micelio invada toda la superficie del agar en la botella
plana y no se observe contaminación microbiana, se sella ésta con papel para- Las bolsas con el cereal hidratado se esterilizan y se inoculan a una tasa del
film o vinilpel y se conserva en refrigeración a 4°C durante un tiempo no supe- 10%, utilizando como inóculo la semilla cepa madre.
rior a los 3 meses.
Cuando la invasión del micelio está entre el 95 y el 100% el material se refrige-
ra, debiéndose utilizar máximo en los 15 días siguientes.
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15. Retirar el papel Kraft de los frascos y junto a los mecheros dividir el agar
de la botella plana en 8 pedazos con un asa espatulada, previamente PROTOCOLO
flameada y enfriada (para inocular 8 frascos) de semilla primaria.
16. Cortar cada pedazo de agar, nuevamente, en 7 a 10 trozos y adicionar- 1. Cuantificar el número de botellas planas, botellas de agua destilada es-
los sobre el grano de cereal de los frascos y tapar el mismo. téril, probetas, beakers, erlenmeyers y asas necesarias.
17. Agitar el frasco, ya tapado, para favorecer la distribución de los trozos de 2. Lavar y esterilizar el material de acuerdo a lo descrito anteriormente en
agar-micelio en los granos de cereal. las metodologías básicas de laboratorio.
18. Rotular los frascos con el nombre de la cepa, la fecha de inoculación y la 3. Realizar la limpieza y desinfestación del laboratorio (Ver metodologías
fuente de inóculo. básicas de laboratorio)
19. Recoger la basura del área de trabajo y limpiar y desinfestar después de 4. Mantener cerrada la puerta del laboratorio. Mantener una bata limpia,
la siembra y colocar trampas con formol comercial al 5% en volumen. cofía y tapabocas al interior del laboratorio y una a la salida para el cam-
20. Colocar a incubar los frascos en un área oscura, cerrada y previamente bio.
desinfestada. 5. Preparar los medios de cultivo utilizando el procedimiento referido ante-
21. Evaluar diariamente el crecimiento micelial de los frascos, retirando el riormente en este documento.
material contaminado, el cual debe disponerse conforme a lo descrito en 6. Retirar de la nevera el material de siembra y desinfestarlo con alcohol, 1
el presente documento para material de desecho. día antes de la siembra para permitir que se aclimate antes de utilizarlo.
22. Cuando la invasión micelial del hongo esté entre el 95 y 100%, colocarle 7. Desinfestar la cabina de flujo laminar o el área de trabajo, encender me-
vinilpel a los frascos, desinfestarlos y conservarlos en refrigeración (4 a cheros y mantener alcohol para la desinfestación constante durante el
6°C) por un tiempo no superior a 1 mes. proceso de siembra.
8. Utilizando un asa previamente flameada y fría, para no quemar el mice-
lio, trocear el micelio presente en los tubos de cultivo y adicionar un sólo
pedazo de inóculo en todo el centro de la botella plana. Con el micelio
contenido en un tubo de cultivo se pueden inocular 10 botellas planas.
9. Correr un patrón de ambiente en una caja de petri, expuesta sin tapa
durante 15’ en el mesón de trabajo y mantener un control de medio de
cultivo, que nos brinden información sobre la calidad de los ambientes y
la efectividad de la esterilización.
10. Rotular el material con la fecha de la siembra, el tipo de medio de culti-
vo, la especie del hongo y la fuente del inóculo.
11. Recoger la basura del área de trabajo y limpiar y desinfestar después de
la siembra y colocar trampas con formol comercial al 5% en volumen.
12. Colocar a incubar el material en un área oscura, cerrada y previamente
desinfestada.
13. Evaluar diariamente el crecimiento micelial, retirar el material contamina-
do y eliminarlo siguiendo la metodología indicada en el presente protoco-
Semilla primaria con invasión micelial completa
lo para el material de desecho.
14. Cuando la invasión del micelio del hongo este entre el 90 y 100%, colo-
carle vinilpel a los tapones de algodón de las botellas planas, desinfes-
tarlas y conservarlas en refrigeración entre 4 –6°C durante un tiempo no
superior a los 3 meses.
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PRODUCCIÓN DE SEMILLA PRIMARIA PROTOCOLO

Una vez se tenga el medio de cultivo de las botellas planas invadido del micelio
del hongo a cultivar, se inicia con la producción de la semilla primaria también 1. Cuantificar el número de frascos y botellas planas necesarias para la
conocida como cepa madre. elaboración de la semilla.
2. Lavar y esterilizar el material de acuerdo a las metodologías básicas del
En la elaboración de ésta semilla se utilizan granos de cereales tales como el laboratorio.
trigo, sorgo, cebada y millo. También se puede utilizar arroz y maíz triturado. 3. Limpiar y desinfestar el laboratorio y la cabina de flujo laminar o área de
siembra según las metodologías básicas del laboratorio.
4. Mantener cerrada la puerta del laboratorio. Mantener una bata limpia y
tapabocas al interior del laboratorio y una a la salida para el cambio.
5. Hidratar el grano de cereal de forma que se obtenga una humedad final
aproximada entre el 38 y el 42%.
6. Pesar el grano necesario, lavarlo con abundante agua hasta que quede
limpio (aproximadamente 5 lavados), escurrir y adicionar al grano lavado
500 ml de agua/kg de grano seco y colocarlo a hidratar en una olla de
fondo ancho.
7. Mantener el trigo al fuego hasta que se consuma el agua, revolviendo
constantemente para evitar que se queme.
8. Retirar la olla con el grano de cereal del fuego, una vez consumida el
agua, y extender, para enfriarlo, en una superficie previamente desin-
fectada cubierta por plástico.
9. Revolver para homogenizar y empacar en frascos de vidrio de boca
ancha, aproximadamente el 80% de su capacidad.
10. Tapar los frascos con una tapa metálica que tenga un agujero en la par-
te central tapado con algodón para facilitar el intercambio gaseoso du-
El primer paso en la elaboración de la semilla primaria consiste en lavar el gra- rante la fase de incubación del hongo y envolver, el conjunto, en papel
no del cereal lo suficiente para eliminar las impurezas, luego se someten a un Kraft .
proceso de hidratación con calor 11. Esterilizar los frascos con el trigo a una temperatura de 121°C y dejar
enfriar en una zona previamente desinfestada.
Es importante resaltar que el porcentaje de humedad del grano afectará el cre- 12. Retirar de la nevera las botellas planas que se utilizarán para la inocula-
cimiento micelial. Si queda muy seco el desarrollo del micelio es lento y aumen- ción, 1 día antes de la siembra para permitir que el inóculo se aclimate.
ta la posibilidad de contaminación por mohos y si la humedad es alta, las proba- 13. Preparar los materiales para la siembra, desinfestar el área o cabina de
bilidades de contaminación bacteriana aumenta. flujo laminar y encender los mecheros.
14. Correr un patrón de ambiente para evaluar la calidad del proceso de
Una vez que el grano hidratado alcanza la temperatura ambiente se envasa en desinfestación y mantener un control de esterilización para determinar la
frascos de conserva estériles y se somete a un proceso de esterilización. calidad de la misma.

Finalmente el material esterilizado se inocula con el micelio multiplicado en las

botellas planas.
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PRODUCCIÓN DE SEMILLA PRIMARIA PROTOCOLO

Una vez se tenga el medio de cultivo de las botellas planas invadido del micelio
del hongo a cultivar, se inicia con la producción de la semilla primaria también 1. Cuantificar el número de frascos y botellas planas necesarias para la
conocida como cepa madre. elaboración de la semilla.
2. Lavar y esterilizar el material de acuerdo a las metodologías básicas del
En la elaboración de ésta semilla se utilizan granos de cereales tales como el laboratorio.
trigo, sorgo, cebada y millo. También se puede utilizar arroz y maíz triturado. 3. Limpiar y desinfestar el laboratorio y la cabina de flujo laminar o área de
siembra según las metodologías básicas del laboratorio.
4. Mantener cerrada la puerta del laboratorio. Mantener una bata limpia y
tapabocas al interior del laboratorio y una a la salida para el cambio.
5. Hidratar el grano de cereal de forma que se obtenga una humedad final
aproximada entre el 38 y el 42%.
6. Pesar el grano necesario, lavarlo con abundante agua hasta que quede
limpio (aproximadamente 5 lavados), escurrir y adicionar al grano lavado
500 ml de agua/kg de grano seco y colocarlo a hidratar en una olla de
fondo ancho.
7. Mantener el trigo al fuego hasta que se consuma el agua, revolviendo
constantemente para evitar que se queme.
8. Retirar la olla con el grano de cereal del fuego, una vez consumida el
agua, y extender, para enfriarlo, en una superficie previamente desin-
fectada cubierta por plástico.
9. Revolver para homogenizar y empacar en frascos de vidrio de boca
ancha, aproximadamente el 80% de su capacidad.
10. Tapar los frascos con una tapa metálica que tenga un agujero en la par-
te central tapado con algodón para facilitar el intercambio gaseoso du-
El primer paso en la elaboración de la semilla primaria consiste en lavar el gra- rante la fase de incubación del hongo y envolver, el conjunto, en papel
no del cereal lo suficiente para eliminar las impurezas, luego se someten a un Kraft .
proceso de hidratación con calor 11. Esterilizar los frascos con el trigo a una temperatura de 121°C y dejar
enfriar en una zona previamente desinfestada.
Es importante resaltar que el porcentaje de humedad del grano afectará el cre- 12. Retirar de la nevera las botellas planas que se utilizarán para la inocula-
cimiento micelial. Si queda muy seco el desarrollo del micelio es lento y aumen- ción, 1 día antes de la siembra para permitir que el inóculo se aclimate.
ta la posibilidad de contaminación por mohos y si la humedad es alta, las proba- 13. Preparar los materiales para la siembra, desinfestar el área o cabina de
bilidades de contaminación bacteriana aumenta. flujo laminar y encender los mecheros.
14. Correr un patrón de ambiente para evaluar la calidad del proceso de
Una vez que el grano hidratado alcanza la temperatura ambiente se envasa en desinfestación y mantener un control de esterilización para determinar la
frascos de conserva estériles y se somete a un proceso de esterilización. calidad de la misma.

Finalmente el material esterilizado se inocula con el micelio multiplicado en las

botellas planas.
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15. Retirar el papel Kraft de los frascos y junto a los mecheros dividir el agar
de la botella plana en 8 pedazos con un asa espatulada, previamente PROTOCOLO
flameada y enfriada (para inocular 8 frascos) de semilla primaria.
16. Cortar cada pedazo de agar, nuevamente, en 7 a 10 trozos y adicionar- 1. Cuantificar el número de botellas planas, botellas de agua destilada es-
los sobre el grano de cereal de los frascos y tapar el mismo. téril, probetas, beakers, erlenmeyers y asas necesarias.
17. Agitar el frasco, ya tapado, para favorecer la distribución de los trozos de 2. Lavar y esterilizar el material de acuerdo a lo descrito anteriormente en
agar-micelio en los granos de cereal. las metodologías básicas de laboratorio.
18. Rotular los frascos con el nombre de la cepa, la fecha de inoculación y la 3. Realizar la limpieza y desinfestación del laboratorio (Ver metodologías
fuente de inóculo. básicas de laboratorio)
19. Recoger la basura del área de trabajo y limpiar y desinfestar después de 4. Mantener cerrada la puerta del laboratorio. Mantener una bata limpia,
la siembra y colocar trampas con formol comercial al 5% en volumen. cofía y tapabocas al interior del laboratorio y una a la salida para el cam-
20. Colocar a incubar los frascos en un área oscura, cerrada y previamente bio.
desinfestada. 5. Preparar los medios de cultivo utilizando el procedimiento referido ante-
21. Evaluar diariamente el crecimiento micelial de los frascos, retirando el riormente en este documento.
material contaminado, el cual debe disponerse conforme a lo descrito en 6. Retirar de la nevera el material de siembra y desinfestarlo con alcohol, 1
el presente documento para material de desecho. día antes de la siembra para permitir que se aclimate antes de utilizarlo.
22. Cuando la invasión micelial del hongo esté entre el 95 y 100%, colocarle 7. Desinfestar la cabina de flujo laminar o el área de trabajo, encender me-
vinilpel a los frascos, desinfestarlos y conservarlos en refrigeración (4 a cheros y mantener alcohol para la desinfestación constante durante el
6°C) por un tiempo no superior a 1 mes. proceso de siembra.
8. Utilizando un asa previamente flameada y fría, para no quemar el mice-
lio, trocear el micelio presente en los tubos de cultivo y adicionar un sólo
pedazo de inóculo en todo el centro de la botella plana. Con el micelio
contenido en un tubo de cultivo se pueden inocular 10 botellas planas.
9. Correr un patrón de ambiente en una caja de petri, expuesta sin tapa
durante 15’ en el mesón de trabajo y mantener un control de medio de
cultivo, que nos brinden información sobre la calidad de los ambientes y
la efectividad de la esterilización.
10. Rotular el material con la fecha de la siembra, el tipo de medio de culti-
vo, la especie del hongo y la fuente del inóculo.
11. Recoger la basura del área de trabajo y limpiar y desinfestar después de
la siembra y colocar trampas con formol comercial al 5% en volumen.
12. Colocar a incubar el material en un área oscura, cerrada y previamente
desinfestada.
13. Evaluar diariamente el crecimiento micelial, retirar el material contamina-
do y eliminarlo siguiendo la metodología indicada en el presente protoco-
Semilla primaria con invasión micelial completa
lo para el material de desecho.
14. Cuando la invasión del micelio del hongo este entre el 90 y 100%, colo-
carle vinilpel a los tapones de algodón de las botellas planas, desinfes-
tarlas y conservarlas en refrigeración entre 4 –6°C durante un tiempo no
superior a los 3 meses.
PÁGINA 8 PRODUCCIÓN DE SEMILLA COMERCIAL DE HONGOS COMESTIBLES Y MEDICINALES PRODUCCIÓN DE SEMILLA COMERCIAL DE HONGOS COMESTIBLES Y MEDICINALES PÁGINA 13

PRODUCCIÓN EN BOTELLAS PLANAS PRODUCCIÓN DE SEMILLA COMERCIAL

Para la inoculación de los sustratos de cultivo se utiliza la semilla comercial, la
El primer paso en la elaboración de la semilla comercial de los hongos consiste cual se elabora a partir de la semilla cepa madre o inóculo primario.
en la propagación del micelio, la cual se realiza en cajas de petri o en botellas
planas.

Semilla comercial de hongos comestibles

Propagación del micelio de hongos en botellas planas

La semilla comercial se prepara utilizando bolsas de polipropileno, resistentes a
altas temperaturas.

Para iniciar con la producción de cepa madre se hace una propagación masiva Se recomienda utilizar bolsas con las siguientes dimensiones: 20cm de ancho x
del micelio en Agar Extracto de Malta, utilizando botellas planas y de esta ma- 50cm de largo y calibre 3, a las cuales se adiciona 1 Kg de grano de cereal
nera contar con mayor cantidad de inóculo. hidratado, tal como se describió para la semilla inóculo primario.

En esta etapa del proceso es importante la observación diaria de los cultivos Esta cantidad de material ocupa aproximadamente el 40% del volumen de la
miceliales con el fin de retirar el material contaminado y evitar de esta manera bolsa, permitiendo la formación de una cámara de aire, de aproximadamente el
que se pueda presentar enmascaramiento de los contaminantes que puedan 60% de su capacidad restante, dado que en el extremo de la bolsa se coloca un
ser invadidos por el micelio de las cepas de interés, lo que ocasionaría la pérdi- aro o anillo de PVC de 3/4” y de 0.5 cm de longitud que sirve de sostén a un
da de la semilla primaria. tapón de algodón que permite el intercambio gaseoso en el proceso de coloni-
zación del micelio sobre los granos de cereal.
En el momento en que el micelio invada toda la superficie del agar en la botella
plana y no se observe contaminación microbiana, se sella ésta con papel para- Las bolsas con el cereal hidratado se esterilizan y se inoculan a una tasa del
film o vinilpel y se conserva en refrigeración a 4°C durante un tiempo no supe- 10%, utilizando como inóculo la semilla cepa madre.
rior a los 3 meses.
Cuando la invasión del micelio está entre el 95 y el 100% el material se refrige-
ra, debiéndose utilizar máximo en los 15 días siguientes.
PÁGINA 14 PRODUCCIÓN DE SEMILLA COMERCIAL DE HONGOS COMESTIBLES Y MEDICINALES PRODUCCIÓN DE SEMILLA COMERCIAL DE HONGOS COMESTIBLES Y MEDICINALES PÁGINA 7

PROTOCOLO
PRODUCTIVIDAD
1. Cuantificar el número de bolsas necesarias, tapones de algodón, anillos
de pvc y semilla cepa madre necesarios para la elaboración de la semilla
comercial.
2. Lavar y desinfestar el material de acuerdo a lo expuesto en las metodo-
logías básicas del laboratorio.
3. Desinfestar los anillos de PVC con jabón e hipoclorito al 2% y lavar con
abundante agua. Colocar luego en un beaker y asperjar con alcohol y
mantener así en el laboratorio hasta su uso. No esterilizar debido a la
deformación que sufre el PVC a las temperaturas de esterilización.
4. Limpiar y desinfestar el laboratorio de acuerdo con las metodologías
básicas del laboratorio.
5. Mantener cerrada la puerta del laboratorio. Mantener una bata limpia y
tapabocas al interior del laboratorio y una a la salida para el cambio.
6. Hidratar el grano de cereal, de forma que se obtenga una humedad final
aproximada entre el 38 y el 42%. Pesar el grano necesario, lavarlo con
abundante agua hasta que quede limpio (5 lavados, aproximadamente),
escurrir y adicionar al grano lavado 500 ml de agua/kg de grano seco y
colocarlo a hidratar en una olla con fondo ancho hasta que se consuma
el agua, revolviendo constantemente.
7. La olla con el grano hidratado se lleva al laboratorio y se extiende para
enfriarlo en una superficie previamente desinfestada y cubierta por plás-
tico, y se revuelve para darle homogeneidad. De esta forma se evita la
condensación de agua dentro de las bolsas de polipropileno, lo que favo-
recería la aparición de bacterias.
8. Empacar el grano hidratado en bolsas de polipropileno, a razón de 1 kg/ Carpóforos de Pleurotus pulmonarius cultivados sobre
bolsa y colocar en el extremo de las mismas un aro de PVC y un tapón residuos agrícolas
de algodón.
9. Esterilizar en una autoclave a 121ºC. Posteriormente, retirar el material
del autoclave y enfriarlo en un sitio cerrado y previamente desinfectado.
10. La semilla cepa madre que se utilizará como inóculo debe retirarse de la El éxito de la producción de semilla comercial radica
nevera 1 día antes, para permitir su aclimatación. en el seguimiento estricto de los protocolos que en este
documento se describen, lo cual ofrece garantías en la
calidad de la semilla que se verá reflejado en la
productividad del cultivo.
PÁGINA 6 PRODUCCIÓN DE SEMILLA COMERCIAL DE HONGOS COMESTIBLES Y MEDICINALES PRODUCCIÓN DE SEMILLA COMERCIAL DE HONGOS COMESTIBLES Y MEDICINALES PÁGINA 15

• En la preparación de los tubos, se utilizan 5 ml del medio de cultivo para

tubos de 15x100 mm. Si se utilizan tubos de mayor dimensión se puede 11. Preparar los materiales para la siembra, desinfestar el área o cabina de
utilizar una relación lineal para el cálculo del volumen del medio que se flujo laminar y encender los mecheros.
debe adicionar. Los tubos se cierran suavemente y luego se esterilizan 12. Correr un patrón de ambiente para determinar la eficiencia de los proce-
dentro de beakers y al terminar el proceso, se retiran de la autoclave, se sos de desinfestación.
ajustan las tapas y se disponen de forma inclinada hasta que se solidifi- 13. Inocular la semilla comercial utilizando una cuchara estéril, previamente
quen, con el fin de incrementar el área de contacto, en una zona previa- flameada en los mecheros.
mente desinfestada. 15. Utilizar una tasa de inoculación del 7% (1 frasco de semilla cepa madre
• En la preparación de cajas de petri se coloca a esterilizar el medio de para 3 bolsas de semilla comercial).
cultivo en un erlenmeyer con tapón de algodón y se sirve caliente bajo 16. Agitar la bolsa, ya puesto el tapón de algodón, para favorecer la distribu-
cámara de flujo laminar, adicionando 15 ml de agar por caja de petri, las ción de los granos de cereal invadidos de micelio en los nuevos granos
cuales deben estar estériles y se colocan a enfriar en un área cerrada y de cereal.
previamente desinfestada. Si las cajas no se van a utilizar de inmediato, 17. Rotular las bolsas con el nombre de la cepa, la fecha de inoculación y la
tan pronto el agar solidifique, se sellan con papel vinilpel y se refrigeran, fuente de inóculo.
por un tiempo máximo de 15 días. 18. Recoger la basura del área de trabajo y limpiar y desinfestar después de
la siembra y colocar trampas con formol comercial al 5% en volumen.
• En la preparación de las botellas planas se utilizan 60 ml del medio de 19. Colocar a incubar las bolsas en un área oscura, cerrada y previamente
cultivo, se les coloca un tapón de algodón y se esterilizan, disponiéndo- desinfestada.
las en forma vertical y luego se enfrian horizontalmente. Es importante 20. Evaluar diariamente el crecimiento micelial de las bolsas, retirando el
colocar a esterilizar tapones de algodón dentro de una bolsa de polipro- material contaminado, el cual debe disponerse conforme a lo descrito en
pileno termoresistente, en caso de tener que reemplazar algún tapón de el presente documento para material de desecho.
las botellas que resulte impregnado de medio y que puede favorecer el 21. Cuando la invasión micelial del hongo esté entre el 95 y 100%, colocarle
asentamiento de microorganismos contaminantes. vinilpel a los tapones de algodón, desinfestar las bolsas y conservarlas
• Se debe incubar una caja, tubo o botella con medio nutritivo estéril y sin en refrigeración (4 a 6°C) por un tiempo no superior a 15 días.
sembrar para verificar la esterilidad del medio de cultivo, en lo que se
conoce como “control medio”.

DISPOSICIÓN DEL MATERIAL DE DESECHO

Para evitar la contaminación cruzada o afecciones respiratorias en el personal
del laboratorio, es necesario esterilizar el material contaminado antes de su
eliminación. Para ello los tubos, las cajas o las botellas planas con el microor-
ganismo contaminante se debe esterilizar en autoclave durante 1 hora a 121°C.
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EQUIPOS DE LABORATORIO LAVADO, SECADO Y ESTERILIZACIÓN

DEL MATERIAL DE LABORATORIO
CABINA DE FLUJO LAMINAR
Equipo que proporciona un área de trabajo estéril El material que se va a utilizar en la preparación de la semilla debe sumergirse
para la preparación de medios de cultivo y de un día para otro en una solución jabonosa compuesta por 10 g de detergen-
siembra en los mismos, al contar con filtros HEPA te en polvo y 20 ml de hipoclorito comercial, por cada litro de agua. Se lava con
y luz ultravioleta, que eliminan el 99.9% de los abundante agua asegurándose de no dejar restos de jabón que puedan afectar
microorganismos presentes en el ambiente de la el crecimiento micelial. Seguidamente, se seca y esteriliza el material de vidrio y
cabina. de acero inoxidable en la estufa por 3 horas a 160°C y se deja enfriar en un
sitio previamente desinfestado.

Para la esterilización del material con vapor se utiliza una autoclave a 121°C
AUTOCLAVE durante 30 minutos. La autoclave debe lavarse cada día de por medio, por fue-
La esterilización en una autoclave se basa en la ra y por dentro, cambiársele el agua (utilizar agua destilada) y engrasarse con
aplicación de temperatura y presión para eliminar vaselina cada dos esterilizaciones.
los microorganismos y las esporas que se
encuentren en el material. Este equipo utiliza
sensores y alarmas que alertan los cambios del
ciclo o anomalías en su funcionamiento. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo utilizados para la conservación y propagación de las ce-
pas son: Papa Dextrosa Agar (PDA), el Agar Extracto de Malta (EMA) y el Agar
Sabouraud Dextrosa (SDA), que son especialmente elaborados para el creci-
miento de hongos e inhiben la contaminación bacteriana gracias a su bajo pH.

INCUBADORAS Para garantizar la esterilidad en la preparación de los medios de cultivo se re-

Estos equipos que proporcionan a los cultivos la quiere agua destilada estéril (el agua debe esterilizarse en una autoclave a
temperatura óptima de crecimiento y a su vez los 121ºC durante 20 min). Utilizar materiales previamente esterilizados en autocla-
protege de los contaminantes del ambiente ve, y los medios se sirven en la cabina de flujo laminar previamente desinfesta-
externo. da.

Los medios de cultivo se preparan de acuerdo con las recomendaciones dadas

por el fabricante registrados en la etiqueta del empaque. En una probeta se
mide el agua destilada estéril necesaria, se transpasa a un erlenmeyer junto
con la cantidad de medio necesario y se coloca en la estufa agitando constan-
temente con la ayuda de una varilla de vidrio hasta que el medio hierva. Luego
BAÑO DE MARÍA se sirve en tubos, botellas planas o cajas de petri, junto a mecheros, de la
Este equipo utiliza la técnica de baño de María y siguiente manera:
tiene control de temperatura y tiempo, que
permite emplearse para la preparación de medios
de cultivo y/o para la incubación de tubos de
cultivos.
PÁGINA 4 PRODUCCIÓN DE SEMILLA COMERCIAL DE HONGOS COMESTIBLES Y MEDICINALES PRODUCCIÓN DE SEMILLA COMERCIAL DE HONGOS COMESTIBLES Y MEDICINALES PÁGINA 17

METODOLOGÍAS BÁSICAS DE LABORATORIO

DESTILADOR
El diseño del laboratorio, el manejo Este equipo proporciona el agua destilada,
de las técnicas y la destreza del ingrediente esencial en la preparación de medios
personal para la producción de se- de cultivo y en el análisis fisicoquímico de las
milla comercial debe apuntar princi- muestras.
palmente a evitar errores que oca-
sionen contaminación que deteriore
la calidad de la semilla y con ello la
productividad de los cultivos.

DESINFESTACIÓN PLANCHA CON AGITACION

MAGNETICA
DEL LABORATORIO En la preparación de los medios de cultivo se puede
emplear este equipo que proporciona temperatura y
Uno de los requisitos básicos para el éxito de la técnica de producción de semi- agitación magnética.
lla comercial es mantener los cultivos libres de microorganismos contaminantes.
Se debe, por tanto, iniciar la limpieza del área de cultivo con el retiro de sucie-
dades de mesones, pisos, paredes y ventanas para luego desinfestar las super-
ficies con una solución de hipoclorito al 10% y trapear con hipoclorito al 2%. Los
contaminantes más comunes en estas áreas son bacterias y esporas de hon-
gos que habitan en el ambiente. Se recomienda realizar una rotación diaria con
las siguientes soluciones desinfestantes: Timsen (1g timsen/500ml agua), Va- BALANZA ANALÍTICA
nodine (2.5 ml vanodine/500ml agua), Cloruro de benzalconio (2.5g de cloruro La precisión en los pesos de los materiales es
de benzalconio/500ml agua), con el fin de evitar que se desarrolle resistencia importante para la debida preparación de los
de los microorganismos a los desinfestantes. medios de cultivo y el ahorro de los mismos.

Para garantizar la pureza de los cultivos de los hongos comestibles y medicina-

les, la etapa de producción de semilla debe realizarse en una cámara de flujo
laminar, la cual se desinfesta con la solución de cloruro de benzalconio horas
antes de iniciar las siembras, y durante el procedimiento de inoculación se utili-
za alcohol al 70% para desinfestar constantemente la cabina y las manos del
técnico.

Periódicamente y durante la siembra deben realizarse controles del ambiente,

por precipitación, para establecer el nivel de contaminación del laboratorio y la
BALANZA HALÓGENA DE HUMEDAD
Esta balanza ofrece rapidez en la determinación
frecuencia de aplicación de los desinfestantes. Esta evaluación consiste en la
de la humedad, la cual utiliza luz U.V que permite
exposición de una caja de petri con un medio de cultivo, por 15 minutos al am-
exactitud y agilidad en los muestreos.
biente que luego se incuba a una temperatura de 25°C durante 5 días, si se
utiliza como EMA para evaluar hongos y levaduras, y a una temperatura de 37°
C por 24 horas cuando se utiliza como medio Agar plate count para evaluar
bacterias.
PÁGINA 18 PRODUCCIÓN DE SEMILLA COMERCIAL DE HONGOS COMESTIBLES Y MEDICINALES PRODUCCIÓN DE SEMILLA COMERCIAL DE HONGOS COMESTIBLES Y MEDICINALES PÁGINA 3

PROBLEMAS, CAUSAS Y SOLUCIONES TABLA DE CONTENIDO

Página

PROBLEMAS CAUSAS SOLUCIONES

Metodologías básicas de laboratorio 4
Acumulación de polvo y • Limpieza constante
desinfestación deficiente • Rotación de desinfes- Producción en botellas planas 8
en el laboratorio tantes
Deficiencia en la esterili- • Lavar y desinfestar co- Producción de semilla primaria 10
zación del material rrectamente el material.
Contaminación de la semi- • Verificar temperaturas y Producción de semilla comercial 13
lla con microorganismos tiempos de esteriliza-
competidores. ción descritos en los
(hongos y bacterias) protocolos Equipos de laboratorio 16
Fuente del inóculo conta- Seleccionar un inóculo de
minado calidad, libre de contami- Tabla de problemas y soluciones 18
nación y fresco.
Humedad de la semilla en Mantener la humedad del
rango inadecuado. grano de cereal en el
rango entre 38 y el 42%.

Presencia de fungicidas Cambiar de proveedor

en el grano

Grano viejo y deteriorado Seleccionar grano de

calidad, que esté sano y
No se presenta crecimien- libre de contaminantes e
to micelial en los granos insectos.
de cereal Humedades demasiado Mantener la humedad del
altas o demasiado bajas. grano de cereal en el
rango entre 38 y 42%.
Temperaturas inadecua- Mantener la temperatura
das de incubación de incubación en el rango
entre 20 y 25°C.
PÁGINA 2 PRODUCCIÓN DE SEMILLA COMERCIAL DE HONGOS COMESTIBLES Y MEDICINALES PRODUCCIÓN DE SEMILLA COMERCIAL DE HONGOS COMESTIBLES Y MEDICINALES PÁGINA 19

PRESENTACIÓN LITERATURA CONSULTADA

RODRÍGUEZ V., N. Cultivo de hongos comestibles. Apuntes del trabajo en la-
El proyecto empresarial de innovación y desarrollo tecnológi- boratorio. Chinchiná, Cenicafé. Disciplina Química Industrial. 2001. 152 p.
co “Adaptación e implementación de 5 cepas de hongos co-
RODRÍGUEZ V., N; JARAMILLO L., C. Cultivo de hongos comestibles del géne-
mestibles en diferentes subproductos agrícolas para mejorar ro Pleurotus. Boletín Técnico Cenicafé N° 27: 1-56. 2005.
la productividad y competitividad de la Asociación de produc-
tores de hongos comestibles de Colombia ASOFUNGICOL”,
tuvo como propósito encontrar las mejores formulaciones de
sustrato, elaborados a partir de los subproductos agrícolas
más abundantes en el departamento del Huila e identificar
las cepas de hongos de mayor rendimiento, facilitadas por el
Centro Nacional de Investigaciones de Café (Cenicafé), de
forma que se mejore el proceso de cultivo de setas de los
asociados.

De igual manera, se busca transferir a la Asociación todos

los conocimientos relacionados con el manejo del material
biológico y la producción de semilla comercial, por ser éste
uno de los mayores obstáculos que han tenido los cultivado-
res.

El proyecto se realizó con la financiación del SENA, la Go-

bernación del Huila y la CAM, bajo la dirección técnica de
Cenicafé.

En su desarrollo se utilizaron los laboratorios del Centro

Agropecuario la Angostura perteneciente al SENA, Regional
Huila, para la obtención de la semilla de los hongos y para el
manejo postcosecha del cultivo.

La fase de campo se realizó en los cultivos de los asociados

en los Municipios de Rivera, Garzón, Tesalia y Teruel, en el
Departamento del Huila.
 Proyecto: “Adaptación e implementación de cinco cepas de hongos
comestibles en diferentes subproductos agrícolas para mejorar la
productividad y competitividad de ASOFUNGICOL en el Huila”

PRODUCCIÓN DE SEMILLA
COMERCIAL DE HONGOS
COMESTIBLES Y
MEDICINALES

Producción de semilla comercial de

hongos comestibles y medicinales

Fotografía
Archivo Cenicafé
Archivo Proyecto
PROTOCOLOS
Diseño • Producción en botellas planas
Martha Liliana Araque Fonseca
• Producción de semilla primaria
Cenicafé
Versión preliminar • Producción de semilla comercial
• Tabla de problemas y soluciones
Copyright © FNC –Cenicafé 2006
Realizado por: Nelson Rodríguez Valencia
CON EL APOYO DE: Investigador Científico I. Cenicafé.
Martha Liliana Araque Fonseca
Servicios Profesionales. Cenicafé
Francenid Perdomo Perdomo.
Servicios Profesionales. Cenicafé