HPLC

DETERMINACION DEL CONTENIDO DE CAFEINA EN DIFERENTES
MUESTRAS COMERCIALES MEDIANTE CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE

ALTA EFICACIA (HPLC)
Tatiana Peña Velasco; Fernando Bonilla.

Facultad de Ciencias Básicas, Programa de Química, Universidad Santiago de Cali
[email protected]; [email protected]
Junio 08 de 2016
RESULTADOS
Tabla 1. Tiempos de Retención.

MUESTRA CONCENTRACIÓN (ppm) TIEMPO DE RETENCION (min)
S1 4,00 2,556
S2 12,00 2,555
S3 24,00 2,555
S4 36,00 2,553
S5 48,00 2,551
M1 - 2,554
M2 - 2,550
M3 - 2,550
Tabla 2. Áreas de picos.

MUESTRA CONCENTRACION (ppm) AREA DE PICO
S1 4,00 133906
S2 12,00 379296
S3 24,00 738808
S4 36,00 1126313
S5 48,00 1487224
M1 - 725027
M2 - 1606632
M3 - 3133078
Tabla 3. Datos de Curva de Calibración.
MUESTRA CONCENTRACION (ppm) RESPUESTA (Área de Pico)
S1 4,00 133906
S2 12,00 379296
S3 24,00 738808
S4 36,00 1126313
S5 48,00 1487224
Grafico 1. Curva de Calibración.

Area de Pico y = 30843x + 8199.7
R² = 0.9999
1650000
1500000 1487224
1350000
Respuesta (area de pico)
1200000
1126313
1050000
900000
750000 738808
Area de Pico
600000
450000
379296
300000
150000 133906
0
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52
Concentración (ppm)
Gráfico 2. Cromatograma de estándares y muestras.

Se utilizó la ecuación de la recta para determinar la concentración de las muestras
(M1= Coca Cola, M2= Café Entero, M3= Medicamento con Cafeína) de acuerdo a
las áreas de pico obtenidas en la tabla 2.
CALCULOS DE RESULTADOS
Se determinará la concentración en curva de la cafeína contenida en distintas

muestras, donde y será la señal media leída y x la concentración en ppm, la
pendiente y el intercepto se tomarán de la ecuación de la recta obtenida en la
gráfica 1, mientras que las respuestas se tomarán de la tabla 2.
Muestra 1: Coca Cola
𝑦 = 𝑚. 𝑥 + 𝑏
725027 = (30843). 𝑥 + 8199,7
(725027 − 8199.7)
𝑥=
30843
𝑥 = 23,24 𝑝𝑝𝑚
Para determinar la concentración en la Coca Cola se aplica un factor de dilución.
50 𝑚𝐿
23,24 𝑝𝑝𝑚 𝑥 = 77,47 𝑝𝑝𝑚 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑏𝑒𝑏𝑖𝑑𝑎.
15 𝑚𝐿
Muestra 2: Café Entero
𝑦 = 𝑚. 𝑥 + 𝑏
1606632 = (30843). 𝑥 + 8199,7
(1606632 − 8199.7)
𝑥=
30843
𝑥 = 51,82 𝑝𝑝𝑚
Para la determinación de cafeína en el café comercial se aplica un factor de
dilución:
51,82 𝑚𝑔
100 𝑚𝐿 𝑥 = 5,18 𝑚𝑔 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑝𝑜𝑟𝑐𝑖ó𝑛 𝑎 𝑑𝑖𝑙𝑢í𝑟 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (0,1𝑔).
1000 𝑚𝐿
Donde, cada 1,00 g de café entero comercial contienen 51,8 mg de cafeína.

51.8 𝑚𝑔
𝑥 100 = 5,18% de cafeína en café entero
1000 𝑚𝑔
Muestra 1: Medicamento con cafeína
𝑦 = 𝑚. 𝑥 + 𝑏
3133078 = (30843). 𝑥 + 8199,7
(3133078 − 8199.7)
𝑥=
30843
𝑥 = 101,32 𝑝𝑝𝑚
Para determinar la concentración en el medicamento se aplica un factor de

dilución.
101,32 𝑚𝑔
100 𝑚𝐿 𝑥 = 10,32 𝑚𝑔 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑝𝑜𝑟𝑐𝑖ó𝑛 𝑡𝑜𝑚𝑎𝑑𝑎 𝑝𝑎𝑟𝑎 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛.
1000 𝑚𝐿
Se tomó un total de 3 pastillas (con contenido promedio de cafeína de 50 mg) y se

pesaron 112,3 mg para la preparación de la solución, el peso promedio de las
pastillas fue 429,53 mg.
429,53 mg
x 10,32 mg = 39,47 mg de cafeína en pastilla
112,3 mg
ANALISIS DE RESULTADOS
La cuantificación de contenido de cafeína mediante HPLC arroja resultados muy

precisos y confiables de la cantidad real contenida en muestras. Se puede ver, por
ejemplo, que el café entero posee nomas un 5% de cafeína y que la coca cola tiene un
contenido alto de este compuesto, presentando más de 70 ppm de cafeína.
El equipo de HPLC es muy sensible a variaciones de concentración de muestras y

estándares, lo que permite cuantificar desde trazas hasta cantidades potentes de alguna
especie de interés.
El medicamento (ibuprofeno con cafeína comercial) anuncia 50 mg de cafeína por

pastilla, en el ensayo experimental se encontró un promedio de 3 pastillas con cerca de
40 mg, esto demuestra que el contenido varía de lote a lote y por pastilla, teniendo unas
más del contenido anunciado y otras menos.
CONCLUSIONES
 La HPLC es una técnica eficaz en la determinación, identificación o

separación de especies de interés y su capacidad de cuantificar mediante
incremento de áreas permite evaluar el comportamiento a distintas
condiciones.
 La curva de calibración es el método matemático más importante a la hora
de cuantificar mediante la técnica que se utilice y su veracidad depende de
el uso apropiado de estándares bien preparados y un instrumento bien
calibrado.
REFERENCIAS
 Castillo, J. Guías de laboratorio de Análisis Instrumental. 2016

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MUESTRAS COMERCIALES MEDIANTE CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE

Tatiana Peña Velasco; Fernando Bonilla.

Tabla 1. Tiempos de Retención.

Tabla 2. Áreas de picos.

Grafico 1. Curva de Calibración.

Gráfico 2. Cromatograma de estándares y muestras.

Se determinará la concentración en curva de la cafeína contenida en distintas

Muestra 1: Coca Cola

725027 = (30843). 𝑥 + 8199,7

Para determinar la concentración en la Coca Cola se aplica un factor de dilución.

Muestra 2: Café Entero

1606632 = (30843). 𝑥 + 8199,7

Donde, cada 1,00 g de café entero comercial contienen 51,8 mg de cafeína.

Muestra 1: Medicamento con cafeína

3133078 = (30843). 𝑥 + 8199,7

Para determinar la concentración en el medicamento se aplica un factor de

Se tomó un total de 3 pastillas (con contenido promedio de cafeína de 50 mg) y se

La cuantificación de contenido de cafeína mediante HPLC arroja resultados muy

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