Marco Teórico

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Qué es la celulosa
La celulosa es una sustancia química simple pero altamente estable. Es un
homopolímero de residuos de glucosa con enlaces β-1,4. Es lineal y sin
ramificar. Debido a un giro de 180° entre residuos de glucosa vecinos, la
unidad de repetición es celobiosa (dos residuos de glucosa). Las moléculas
de celulosa se sintetizan en hebras paralelas. que sufren auto-ensamblaje
por fuertes fuerzas de unión, con puentes de protones inter e intrahilos y
Fuerzas de apilamiento, e inmediatamente forman un cristal. Natural La
celulosa es así cristalina y completamente insoluble en agua. Estos cristales,
llamados microfibrillas (3 nm de espesor), se alinean en las paredes
celulares secundarias de las plantas Para formar fibras más grandes que
están incrustadas en una matriz de hemicelulosa y lignina, que a su vez son
extremadamente heterogéneas. Las paredes celulares secundarias de las
plantas son por lo tanto son sustratos extremadamente recalcitrantes para
digestión enzimática, el complejo hemicelulosa-lignina tiene que ser
eliminado primero por la cooperación de un gran número de diferentes
enzimas para dar acceso a las celulasas a la celulosa cristalina. Los cristales
de sustrato son insolubles y se encuentran muy compactos, no presentan
moléculas que podrían ser captados por el sitio activo de las enzimas. Los
cristales de celulosa no son perfectos. y contienen regiones amorfas,
aproximadamente cada 30 nm, y también bordes y extremos, donde las
enzimas podrían acceder y "extraer" moléculas individuales para que se
ajusten a ellas en sus sitios activos. (Schwarz, 2002)
Hidrólisis enzimática
La reacción de hidrólisis enzimática de celulosa es catalizada por las

enzimas celulasas, las cuales son altamente específicas. El producto del
hidrólisis de celulosa son usualmente azúcares reductores, incluyendo la
glucosa. La reacción se lleva a cabo bajo condiciones suaves (PH:4.8, T °C:
45 50). Al contrario de los catalizadores comunes, las enzimas presentan
una elevada especificidad con respecto al sustrato, y su uso reduce la
obtención de subproductos indeseables. La reacción de hidrólisis enzimática
se caracteriza por un sustrato insoluble (celulosa) y un catalizador soluble
(enzimas). Así, las características estructurales de la celulosa y el modo de
acción de las enzimas influencian la tasa de reacción. La susceptibilidad de
la celulosa al ataque enzimático es determinada por la accesibilidad de los
sitios de enlace para la celulasa lo que determina la subsecuente adsorción
de la enzima sobre el sustrato sólido A pesar de las reservas presentadas
por algunos autores, relacionadas con la especificidad de las diferentes
celulasas y su modo de acción, se reconoce la existencia de tres tipos de
celulasas en los sistemas completos: endoglucanasa, exoglucanasa o
celobiohidrolasa y β-glucosidasa o celobiasa. Las moléculas de celulosa son
lineales y se asocian unas con otras formando ejes fibrosos que presentan
zonas cristalinas y amorfas. Las endoglucanasas hidrolizan
preferencialmente los enlaces internos en el polímero de celulosa, en
regiones amorfas o en la superficie de las microfibrillas, produciendo
oligosacáridos de menor peso molecular, celodextrinas y celobiosa. Las
exoglucanasas o celobiohidrolasas inician la hidrólisis en los extremos de la
cadena y las β-glucosidasas completan la hidrólisis catalizando la hidrólisis
de celobiosa a glucosa. La figura 1 muestra una representación esquemática
de la acción de endoglucanasa, exoglucanasa y β-glucosidasa provenientes
del hongo celulítico T reseei. El efecto del complejo enzimático celulasa se
expresa por la acción sinérgica de las tres enzimas anteriores. En la medida
que la concentración de celobiosa y glucosa aumentan en el medio
reaccional, la actividad de la exoglucanasas y celobiasas es inhibida por
estos productos, resultando en la disminución en la tasa de rendimiento del
proceso de sacarificación. La celobiosa presenta un poder de inhibición
mayor que el de la glucosa. La no linealidad observada cuando se grafica
conversión de azúcares vs Tiempo de hidrólisis dada una concentración
inicial de enzima, indica que la velocidad de reacción desciende y a menudo
para antes que todo el sustrato sea consumido. Hay varios factores que
llevan al decrecimiento de la velocidad de hidrólisis conforme la reacción la
progresa entre ellos inhibición por producto final, baja reactividad del
sustrato (alta cristalinidad, alto contenido de lignina, baja accesibilidad),
inactivación de las enzimas y pérdida de enzima debido a absorción
irreversible. Se ha encontrado que la pérdida de reactividad del sustrato no
es la principal causa del descenso en la velocidad de reacción. Resultados
similares se reportan para la inhibición por producto final, a diferencia de la
inactivación de enzimas por absorción irreversible sobre el sustrato y la
formación de enlaces improductivos que se han catalogado como la principal
causa en el descenso de la velocidad de hidrólisis. (Quíroga, 2007)
Modelos cinéticos para la reacción de hidrólisis enzimática
Los modelos para la reacción de hidrólisis enzimática se pueden clasificar

dentro de dos categorías: tipo de modelo (empírico o mecanístico) y tipo de
sustrato (puro o impuro). La mayoría de los modelos mecanísticos para la
reacción de hidrólisis enzimática son o modelos Michaelis-Menten con algún
tipo de inhibición o modelos más detallados con múltiples reacciones. Esos
modelos generalmente consideran múltiples reacciones debido a la acción
de diferentes tipos de enzimas o diferentes sustratos (cristalino y amorfo) o
una combinación de los dos. Los modelos más simplificados incluyen una
sola expresión de velocidad de reacción para la hidrólisis, mientras 20 que
los modelos que consideran múltiples reacciones usan varias expresiones
de velocidad y muchos parámetros. Ghose y Das, (1971) usaron una
expresión cinética de primer orden para describir la hidrólisis de cascarilla
de arroz, pero encontraron que un modelo Michaelis-Menten describe muy
bien la hidrólisis de flóculos de solka. Dwividi y Ghose, (1979) estudiaron la
hidrólisis de bagazo pretratado con álcali, por la enzima trichoderma reseei.
Ellos concluyeron que los datos seguían un modelo cinético Michaelis-
Menten con inhibición competitiva. Otros estudios que usaron modelos
cinéticos Michaelis-Menten con inhibición competitiva son Brown y
Waliuzzaman, (1977), Ohmine; (1983) y González., (1989) Usando flóculos
de solka bajo la acción de celulasa trichoderma viride, Howell y Stuck, (1975)
encontraron que un modelo cinético Michaelis-Menten con inhibición
competitiva es aplicable. Camina et al., (1985) también usaron un modelo
cinético Michaelis-Menten. Ellos encontraron que la inhibición por glucosa
fue competitiva, pero no pudieron distinguir entre inhibición competitiva y no
competitiva para celobiosa. Huang, (1975) modeló la hidrólisis de celulosa
por trichoderma viride usando un modelo cinético Michaelis-Menten con
inhibición competitiva pero también incluyó un paso de absorción modelado
como una isoterma tipo Langmuir. El modelo propuesto por Beltrame y
Carniti (1984), describe un mecanismo para la hidrólisis de materiales
celulósicos catalizados por un sistema multienzimático en el cual se tiene en
cuenta que inhibición acompetitiva y competitiva por glucosa se presentan
para dos tipos de enzimas. Uno de los últimos modelos propuestos es el
HCH −1 (Holtzapple., 1984). El modelo HCH −1 es esencialmente el
mecanismo cinético Michaelis-Menten con un paso de absorción e inhibición
no competitiva por glucosa y celobiosa. 21 Una posible explicación para la
diversidad de resultados reportados con respecto al tipo de inhibición es
presentada por Holtzapple, (1984). Dependiendo del sustrato usado, la
velocidad de difusión enzimática puede llegar a ser un factor determinante.
Entonces, para velocidades de difusión bajas, la inhibición podría ser no
competitiva mientras que, para velocidades de difusión altas, la inhibición
podría ser competitiva. (Quíroga, 2007)
Enzimas Celulasas
Las celulasas son una mezcla de varias enzimas, los grupos principales son:
endogluconasa, exogluconasa o celobiohidrolasa y b-glucosidasa.
Específicamente, los tres tipos de enzimas que incluye una celulasa son: la
endo- b -1,4-glucanasa o 1,4- b-D-glucan glucanhidrolasa; la exo- b-1,4
glucanasa o 1,4- b-D-glucan celobiohidrolasa y la B-1,4-glucosidasa o b-D-

glucósido glucohidrolasa. Para la producción de celulasas se utilizan
microorganismos como bacterias y hongos aérobicos o anaeróbicos,
mesófilos o termófilos, aunque solo algunos de ellos producen la enzima
celulasa capaz de hidrolizar la celulosa. El Trichoderma reesei, un hongo
filamentoso ha sido el más estudiado y sus mutaciones son utilizadas para
la producción comercial de hemicelulasas y celulasas (León Henry, 2015)

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