UNIVERSIDAD CATOLICA “LOS ÁNGELES DE CHIMBOTE” CURSO: FARMACOGNOSIA Y FITOQUÍMICA

ESCUELA DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA DOCENTE: Q.F. MARIA I. PALACIOS PALACIOS

TEMA 04

METABOLITOS PRIMARIOS Y SECUNDARIOS

Contenidos:
Clasificación, fundamento químico de marchas fitoquímicas y
reacciones de identificación.

I. Clasificación
Los principios activos son sustancias que se encuentran en las distintas partes
u órganos de las plantas y que alteran o modifican el funcionamiento de
órganos y sistemas del cuerpo humano y animal. La investigación científica ha
permitido descubrir una variada gama de principios activos, de los cuales los
más importantes desde el punto de vista de la salud, son los aceites
esenciales, los alcaloides, los glucósidos o heterósidos, los mucílagos y gomas,
y los taninos. Existen en las plantas otros principios activos relevantes
denominados nutrientes esenciales, como las vitaminas, minerales,
aminoácidos, carbohidratos y fibras, azúcares diversos, ácidos orgánicos,
lípidos y los antibióticos.
1.1 Metabolitos primarios:
Son comunes a todas las células y son necesarios para el funcionamiento
adecuado de las células y organismos.
• Glúcidos:
Drogas con oligósidos (caña de azúcar, remolacha azucarera).
Drogas con polisacáridos elaborados por microorganismos (dextrano).
Drogas con Polisacáridos aislados de algas (ácido algínico,
carragenanos, otras).
• Polisacáridos de los vegetales superiores:
Polisacáridos homogénos: Almidón, celulosa, fibras alimentarias, inulina,
otras.
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• Polisacáridos heterogéneos:
Gomas (goma karaya, otras)
Mucílagos (goma de algarrobo, zaragatonas, otras).
Pectinas.
Metabolismo Primario
El metabolismo primario comprende los procesos químicos que cada planta
debe realizar cada día para sobrevivir y reproducirse:
• Fotosíntesis
• Glicólisis
• Ciclo del ácido cítrico
• Síntesis de aminoácidos
• Transaminación
• Síntesis de proteínas y enzimas
• Síntesis de coenzimas
• Síntesis de materiales estructurales
• Duplicación de material genético
• Reproducción celular (crecimiento)
• Absorción de nutrientes

1.2 Metabolitos secundarios:

Son moléculas orgánicas que no cumplen ningún rol fisiológico en los vegetales
en su crecimiento y el desarrollo.
Generalmente se encuentran en cantidades relativamente pequeñas y su
producción puede ser extendida o restringida a familias, géneros, o especies
particulares.
• Compuestos fenólicos: flavonoides, leucoantocianos, cumarinas,
antocianinas, taninos y antraquinonas.
• Terpenos y esteroides: triterpenos, esteroles, saponinas
• Alcaloides: alcaloides
Metabolismo Secundario
• El metabolismo secundario comprende los procesos químicos que son
únicos para una planta dada, y no son universales.
• El metabolismo secundario representa el conjunto de las reacciones
químicas que da lugar a la formación de un producto natural.
• Partes de estas reacciones químicas son comunes a un cierto número
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de diferentes plantas o familias de plantas, pero el resultado obtenido

(producto natural) generalmente es diferente de una planta a otra.
• Precursores químicos comunes pueden producir resultados diferentes.
• Los metabolitos secundarios no parecen ser necesarios (en la mayor
parte de los casos) para la supervivencia de la planta, pero pueden
conferirle una ventaja competitiva.

II. Fundamento químico de marchas fitoquímicas

Tamizaje Fitoquímico:
El tamizaje fitoquímico o screening fitoquímico es una de las etapas iniciales de
la investigación fitoquímica, que permite determinar cualitativamente los
principales grupos químicos presentes en una planta y a partir de allí, orientar
la extracción y/o fraccionamiento de los extractos para el aislamiento de los
grupos de mayor interés.
El tamizaje fitoquímico consiste en la extracción de la planta con solventes
apropiados y la aplicación de reacción de color y precipitación. Debe de permitir
la evaluación rápida, con reacciones sensibles, reproducibles y de bajo costo.
Los resultados del tamizaje fitoquímico constituyen únicamente en una
orientación y debe de interpretarse en conjunto con los resultados del screening
farmacológico.
Así cuando una planta revela acción sobre el sistema nervioso central durante
el tamizaje farmacológico y presencia de alcaloides en el tamizaje fitoquímico,
es bastante probable que la acción farmacológica se deba a la fracción
alcaloidal. De la misma manera, el hecho de evidenciarse acción
antiinflamatoria en el tamizaje farmacológico y la presencia de flavonoides en el
tamizaje fitoquímico, puede dar lugar a procesos de aislamiento y sometimiento
a pruebas más especificas de estos compuestos. Efectos catárticos pueden ser
asociados a las antraquinonas. La presencia de glicósidos cianogénicos
durante la marcha fitoquímica puede dar lugar a la descartación de la planta
por su alta toxicidad.
La confirmación de la actividad farmacológica o antimicrobiana justifica la
continuación de los estudios. El screening fitoquímico proporciona datos
preeliminares sobre los constituyentes químicos de la planta que, junto con los
resultados del tamizaje farmacológico, pueden orientar la continuación de los
estudios. Diversos métodos de tamizaje fitoquímico están descritos en la
literatura.
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Algunos evalúan pocos grupos de sustancias, en compensación, otros evalúan

la presencia de compuestos de poco interés, como ácidos grasos, azucares
reductores, polisacáridos y mucílagos. La cantidad de material vegetal para
realizar las pruebas varia de 5 g a 200 g.

Ejemplos 01:
La planta completa de Arenaria erinacea Boiss. (1), seca y pulverizada (100 g)
fue extraída exhaustivamente con etanol 95% (v/v). Una vez obtenido el
extracto etanólico se procedió a su purificación siguiendo la metodología de
extracción líquido-líquido. El residuo se disolvió en (2x) 8 ml de DCM y se lavó
con (x2) 8 ml de agua. Las fases acuosas se reunieron y se procedió a lavar
con (4x) 10 ml de n-butanol. La fase orgánica se seca con sulfato de magnesio
(MgSO4). El extracto n-butanólico fue concentrado a sequedad en el rotavapor
(Büchi R-200). Posteriormente, este residuo (60 mg) se purificó mediante
cromatografía preparativa en columna tipo flash con relleno de silica gel 60
(Merck) y eluido con la mezcla acetato de etilo-hexano (1:7). Todo el proceso
de purificación se siguió por TLC (Silicagel 60 F254).Se obtuvieron 2 mg de
producto puro. La fracción resultante de la elución de la columna, tras su
desecado, se intentó caracterizar por sus propiedades espectroscópicas de
Resonancia Magnética Nuclear de Protón (1H RMN). Para ello, la muestra se
disolvió en metanol deuterado (CD3OD) pero debido a la escasa cantidad de
muestra obtenida no se pudo caracterizar de forma fehaciente ningún
compuesto o estructura conocida.
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EJEMPLO 02:

METODOS DE SCREENING FITOQUIMICO

Material vegetal

hexano

Marco
Extracto hexá
hexánico Diclorometano

Grasas, Pigmentos
Marco
Extracto DCM:
EtOAc
Terpenoides

Fenoles metoxilados Marco

Extracto EtOAc
Alcaloides MeOH
Geninas de Flavonoides

Heterosidos
Marco
Alcaloides
Extracto MeOH H2O
Fenoles,Heterosidos

Extracto Acuoso Residuo

Polisacaridos

Polifenoles
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EJEMPLO 03:

5 mg de Extracto
+
MARCHA V gotas de reactivo
para:
FITOQUÍMICA
Rx. de la Gelatina Rx. de la Ninhidrina

Taninos Aminoácidos

Rx. del Tricloruro Rx. de Nitrato de

de Hierro Cerio Amoniacal

Compuestos fenólicos Alcoholes

Rx. de Shinoda Rx. de Dragendorff

Flavonoides típicos Alcaloides

Rx. de Mayer Rx. de Borntranger

Alcaloides Antraquinonas

Rx. de Molish Rx. de Vainillina-H2SO4

Heterósidos Heterósidos

A M Rx. de Aurona Rx. de la Hidroxilamina

Heterósidos Compuestos carbonílicos

Rx. de las Hidrazinas Rx. de Lieberman

Compuestos carbonílicos Esteroides y/o terpenoides

Rx. de la Prueba
de la espuma

Saponinas

III. Ensayos fisicoquímicos cualitativos:

Los principios activos suelen encontrarse en la droga en muy bajas
concentraciones, por lo que tendremos que realizar una perfecta extracción de
los mismos, ya que si ésta es deficiente, podemos dar como negativo un
resultado que es positivo.
3.1 Reacciones de identificación:
Estos métodos comprenden coloración, de precipitación, fluorescencia,
microsublimación, que permiten detectar sustancias químicas características de
una planta.
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3.1.1 Coloración o precipitación:

• Se pueden considerar como ensayos rápidos complementarios que forman
parte del amplio esquema a realizar en el control de una planta.
• Se realizan sobre un extracto de la planta, siendo el extracto alcohólico el más
utilizado para detectar los principios activos más importantes.
3.1.2 Fluorescencia:
Se utilizan longitudes de onda corta (espectro ultravioleta), produciendo
fluorescencia de color amarillo hasta celeste, Ejemplo cumarinas, polifenoles y
flavonoides.
Drogas que contienen alcaloides tropánicos: Atropa belladona (Belladona) tiene
una cumarina que da fluorescencia azul, mientras que Hyoscyamus niger L.
(Beleño) y la Datura stramonium L. (Estramonio) no la tienen.
3.1.3 Microsublimación:
Este ensayo suele realizarse con drogas con principios fácilmente sublimables
(antraquinonas, alcaloides).
La determinación del punto de fusión o la producción de determinadas
reacciones coloreadas características de los cristales formados sirven para la
identificación de la droga.

3.2 Análisis cromatográfico:

Permite separar los diferentes componentes de una especie determinada.
3.2.1 Cromatografía de adsorción:
Depende de la diferente polaridad que presentan los distintos productos, así
como de su configuración molecular.
Entre los adsorbentes más empleados se encuentran diversas sustancias,
siendo el Silicagel G, la alúmina, caolín las más empleadas.
Es válido en el aislamiento y purificación de vitaminas, hormonas, diversos
alcaloides, heterosidos, cardiotónicos, antraquinonas, etc.
• Cromatografía de partición:
La separación de los componentes de una mezcla va a depender de los
diferentes coeficientes de reparto, que ellos presentan entre dos fases: una
fase acuosa y una fase orgánica no miscible; por tanto la separación se basa
en la diferencia de solubilidad entre dos fases líquidas, pudiendo modificarse
esta solubilidad por cambios de fuerza iónica o el pH de cada una de estas
fases.
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• Cromatografía en papel (CP) y capa fina (CCF)

Son técnicas analíticas simples, donde la separación de las sustancias viene
determinada por un conjunto complejo de propiedades físicas: velocidad de
difusión, solubilidad del soluto y naturaleza del disolvente, capacidad de
adsorción, intercambio iónico, etc.
De las dos, la más utilizada es la CCF, porque se utiliza menores cantidades de
muestra.
La CCF, debido a su bajo costo y porque puede realizarse con poca muestra,
es una técnica ampliamente usada en los controles de toda clase de productos
naturales y se ha establecido como un método analítico muy importante en las
modernas farmacopeas, permitiendo identificar de forma rápida el número de
componentes presentes en un material vegetal.
Se usa como ensayo semicuantitativo, comparando las intensidades de las
manchas cromatográficos visualizados con patrones adecuados, lo que permite
eliminar drogas de baja calidad o adulteradas.

CCF Unidimensional Reveladores:

•Universales:
I2, Br2, H2SO4,
• l
Luz UV
•Específicos:
Dragendorff
(alcaloides),
Lieberman
(terpenos y/o
esteroides

CCF Bidimensional o Preparativa

Placa 20x20
90º

Elucidación
Recuperar y Filtrar Estructural: UV,
con MeOH Cristalizar
IR, RMN, EM
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3.2.2 Cromatografía gaseosa (CG)

Esta técnica es utilizada principalmente en el estudio de las drogas con
composiciones volátiles. La CG permite identificar aceites esenciales, alcanfor,
ácidos vegetales, algunos alcaloides como del opio (Papaver somniferum L.) y
tabaco (Nicotiana sp.), resinas del cannabis (Cannabis sativa L.) y compuestos
esteroides como sapogeninas y heterosidos cardiotónicos.
Otra aplicación es la detección y determinación de cocaína y sus metabolitos
en el organismo humano, de gran importancia en el campo forense.

11H.
H.Perforatum
Perforatum22muestra
muestracomercial
comercial
T1
T1 hypericina T2rutina clorogenicohyperosido
hypericina T2rutina clorogenico hyperosidoisoclorogenico
isoclorogenico

Piperita
Piperitayyjaponesa
japonesa
mentofurano
mentofurano

Menta
Mentapiperita
piperitayycrespa
crespa
Mentol carvona
Mentol carvona

Menta Hiperico

3.2.3 Cromatografía líquida de alta resolución (CLAR)

Es una técnica muy sencilla y muy sensible, que se puede realizar
directamente sobre el extracto acuoso o alcohólico de una droga, sin necesidad
de etapas previas de purificación.
Permite la separación de moléculas muy parecidas, incluso isómeros. Se
puede aplicar a una amplia gama de compuestos fijos no volátiles, tales como
alcaloides, heterosidos, lípidos, esteroides, glúcidos, proteínas, vitaminas, etc.
3.2.4 Electroforesis
Este ensayo se basa en el transporte de sustancias cargadas en un campo
eléctrico. Se impregna un soporte (papel, gelatina, sephadex…) en un
electrolito que lo hace conductor; en el centro del mismo se coloca la sustancia
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problema y se somete a diferencia de potencial generada por dos electrodos.

El paso de la corriente eléctrica determina la separación de la sustancia en
función de la naturaleza, carga, masa del electrolito y concentración de iones
del mismo diferencial de potencial aplicado.
Se aplica para separar alcaloides.