EJERCICIOS DEL TEMA DE CATALISIS ENZIMATICA

Preguntas de repaso
1 ¿Cómo aumenta un catalizador la velocidad de reacción?
2 ¿Cuáles son las características de un catalizador?
3 Se sabe que cierta reacción procede lentamente a temperatura ambiente. ¿Es posible hacer que la
reacción, ocurra con mayor velocidad sin cambiar la temperatura
4 Indique la diferencia entre catálisis homogénea y catálisis heterogénea.
5 Mediante un esquema describe cuales son los pasos mediante los cuales se lleva a cabo la catálisis
heterogénea
6¿Las reacciones catalizadas por enzimas son ejemplo de catálisis homogénea o de catálisis heterogénea
Explique.
7. La concentración de las enzimas en las células por lo general es muy pequeña ¿Cuál es la importancia
biológica de este hecho?
8. cuál es la diferencia entre un cofactor y una coenzima?
9. Qué significa la Km?
10. Qué es un inhibidor en la catálisis enzimática?
11. Explica cómo se afecta la Vmax y La ks cuando ocurre inhibición competitiva, no competitiva y
acompetitiva.

Problemas
1. Una enzima con Km de 2.4X10-4 M se ensayó a las siguientes concentraciones de sustrato:
a) 1.8 X 10-7 M
b) 5.8 X 10-5 M
c) 10.24 M
d) 1.8 X 10-3 M
e) 0.07 M
La velocidad observada a 0.05 M fue de 190 nmol/L·min. Calcula las velocidades iniciales en las otras
concentraciones de sustrato.

2. Las velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato para una reacción catalizada por un enzima
son las que se muestran en la tabla, cuando la concentración total de la enzima fue de 3x10-1 M
[S] (moles/l) V (μmoles/min)
5x10-2 0.25
5x10-3 0.25
5x10-4 0.25
5x10-5 0.20
5x10-6 0.071
5x10-7 0.0096
a) ¿Cuál es la velocidad máxima y la Km de la enzima para esta reacción?
b) Calcular la velocidad inicial para [S]=1x10-6 y [S]=1x10-1
c) ¿Cuál es la concentración de enzima libre para una [S] de 5x10-4 M?
e) Calcular la velocidad de formación de producto para una concentración de sustrato 2x10-3 M
f) ¿Por qué la velocidad inicial permanece constante a una [S] mayor de
5x10-3 M

ET = E + ES, E= ES(Km/S), ES = ET/(1+(Km/S))

Vmax= K2*ET , dP/dt = K2*ES

3. Una enzima se ensayó a una concentración inicial de sustrato de 2 X 10 -5 M. En 6 minutos, se ha
utilizado la mitad del sustrato. La Km para el sustrato es 5 X 10-5 M.
a) Calcula Vmax
V max
b) Calcula K, si se asume que k 
Km
4. Un extracto enzimático crudo contenía 20 mg de proteína por mililitro. 10 l de ese extracto se
adicionaron a un volumen total de reacción de 0.5 ml, lo que catalizó la formación de 30 nmoles de
producto en 1 minuto de reacción bajo las condiciones de ensayo óptimas (pH y temperatura óptimos,
concentraciones saturantes de las enzimas, sustratos, cofactores, etc). Expresa la velocidad de reacción
en términos de:
a. nmoles/ml·min
b. nmoles/l·min
c. moles/l·min
d. M/min
e. Cuál sería el valor de V si se utilizan los mismos 10 l de extracto pero el volumen final de reacción
es de 1 ml?
f. ¿Cuál es la concentración de la enzima en la mezcla de ensayo?
g. ¿Cuál es la actividad específica de la preparación?

5. Los siguientes datos se obtuvieron de una enzima que cataliza la reacción S  P, determina los
valores de Km y Vmax, justifica la elección del método que emplees.
Sustrato (M) V(nmoles L-1 min-1)
7.33 x10 -6 13.8
0.98 x10-5 16.0
1.38 x10-5 18.0
1.54 x10-5 22.6
1.95 x10-5 26.1
2.43 x10-5 30.1
3.40 x10-5 35.3
3.87 x10-5 40.0
4.25 x10-5 44.8
5.89 x10-5 47.5
8.23x10-5 53.4
112 x10-4 57.7
2.07 x10-4 65.7

6. Se listan los datos de velocidad inicial para la hidrólisis de 4-nitrofenil metil carbonato a 30ºC, pH 8.1
producidos por un anticuerpo catalítico. La concentración del anticuerpo fue de 1 µM. Para comparación
se incluyen los datos de la hidrólisis del etil ester de bensoil-L-tirosina por tripsina a 30°C, pH 7.5. La
concentración de la enzima fue 3. 4 mM, de la cual un 70% corresponde a enzima activa. Se reportan las
velocidades iniciales de concentración de producto por minuto. Determine los valores de la constante
catalítica y km para el anticuerpo catalítico y la tripsina.

Anticuerpo Tripsina
Sss S (µM) Vo (µM/min) S (µM) Vo (µM/min)
210 15.0 20 315
110 13.3 15 298
85 10.80 10 254
64 8.84 5.0 220
42 7.67 2.5 109
7. Los siguientes datos se obtuvieron al monitorear una reacción biológica catalizada por una enzima:

[S] v
(M) (nmoles*L-1*min-1)
6.25 X 10-6 14.0
7.50 X 10-6 55.25
1.00 X 10-4 62.0
1.00 X 10-3 76.9
1.00 X 10-2 74

a. Calcula los valores de Km y Vmax

b. Calcula el valor de la velocidad cuando [S] = 2.5 X 10-5 M y cuando [S] = 5 X 10-5 M.
c. ¿Cuál será la velocidad si [S] = 5 X 10-5 M y la cantidad de enzima se duplica?

8. El tejido de hígado de embriones contiene una enzima que cataliza la reacción S  P. El hígado
adulto también muestra dicha actividad. A continuación se muestran algunos datos cinéticos. ¿Qué
conclusiones puedes tener respecto a la identidad de las dos enzimas?

Velocidad inicial observada

[S] (mol/ mg de proteína · min)
(M) Extracto de hígado adulto Extracto de Hígado de embrión (E2)
(E1)
1.67 X 10-5 1.15 5.45
2.5 X 10-5 1.70 6.10
3.33 X 10-5 2.08 7.89
5.0 X 10-5 2.96 10.00
7.0 X 10-5 3.98 11.43
1.0 X 10-4 4.98 13.03
1.5 X 10-4 6.93 14.75
1.67 X 10-4 7.45 15.05
2.0 X 10-4 8.00 15.89
3.0 X 10-4 10.50 17.45

9. Durante daño severo en el hígado, una enzima (E1 del problema anterior) es liberada en el torrente
sanguíneo. Después de ejercicio severo, una enzima muscular, E3, que cataliza la misma reacción que
E1 también es liberada al torrente sanguíneo. E1 y E3 pueden diferenciarse fácilmente, debido a que
tienen distintos valores de Km (el Km de la enzima muscular es 2X10-5 M). Un ensayo de una muestra de
sangre tomada de un paciente inconsciente se muestra en la siguiente tabla. Este paciente tiene una
enfermedad del riñón o simplemente se sobre ejercitó?

[S] v
4.80 X 10-5 45
5 X 10-5 98
1 X 10-4 157
1.5 X10-4 278
2.8X10-4 387
6.0X10-4 435
8.0 X10-4 453
157
10. Una enzima tiene una Km = 4.7 X 10-5 M. Si la Vmax de la preparación es de 22 moles/l·min, ¿qué
velocidad se observará cuando se tiene 2 X 10-4 M de sustrato y 5 X 10-4 M de un inhibidor. En todos
los casos, Ki = 3 X 10-4 M

a. Competitivo
b. No competitivo
c. Acompetitivo

11. La actividad de una aminoácido descarboxilasa puede ensayarse manométricamente siguiendo el

desprendimiento de CO2. En un experimento realizado con esta enzima en presencia o ausencia de un
hidroxiácido (0,05 M) se obtuvieron los siguientes resultados:

aminoácido (mM) 12,5 16,67 25 50 100

V (mmol/l H) -Hidroxiácido 13,3 17,2 22,2 33,3 40

+Hidroxiácido - 4,6 6,4 11,8 20,0

Indica el tipo de inhibición que ejerce el hidroxiácido en la reacción enzimática

12. La siguiente tabla indica las velocidades a las cuales un sustrato reacciona al ser catalizado por una
enzima que sigue el mecanismo de Michaelis-Menten: (1) en ausencia de inhibidor; (2) y (3) ante la
presencia de una concentración 10 mM de dos diferentes inhibidores. Asumiendo que [E T] es la misma
para todas las reacciones.

S (mM) Vo (μM/seg)
1 2 3
1 2.5 1.17 0.77
2 4 2.1 1.25
5 6.3 4.0 2.00
10 7.6 5.7 2.50
20 9.0 7.2 2.86

a. Calcula los valores de Km y Vmax de la enzima.

b. Para cada inhibidor, determina el tipo de inhibición que este ejerce sobre la enzima y calcula el valor
de Ki

13. Un microorganismo marino contiene una enzima que hidroliza la glucosa-6-sulfato (S). El ensayo se
basa en la velocidad de formación de glucosa. En un extracto celular, la enzima tiene las constantes
cinéticas Km = 6.7 X 10-4 M y Vmax = 300 nmoles/l·min. Por otra parte, la galactosa-6-sulfato es un
inhibidor competitivo de esta enzima (I). Si se tiene 10-5 M de galactosa-6-sulfato y 2 X 10-5 M de glucosa-
6-fosfato, y V es de 1.5 nmol/l·min. Calcula el valor de Ki para el inhibidor.
 ECUACIONES

Michaeles Menten
𝑉𝑚𝑎𝑥 𝑆
𝑉𝑚𝑎𝑥 =
𝐾𝑚 + 𝑆

Inhibición competitiva

𝑉𝑚𝑎𝑥 𝑆
𝑉= 𝐼
𝑆 + 𝐾𝑚 (1 + )
𝐾𝑖

Inhibición incompetitiva

𝑉𝑚𝑎𝑥 𝑆
𝐼
(1+ )
𝐾𝑖
𝑉= 𝐼
𝑆 + 𝐾𝑚 (1 + )
𝐾𝑖

Inhibición no competitiva
𝑉𝑚𝑎𝑥 𝑆 1
𝑉𝑚𝑎𝑥 = ( 𝐼 )
𝐾𝑚 + 𝑆 1 +
𝐾𝑖