METODOS PARA EVALUAR

RESPUESTA INMUNE

Dr. Edgar Matos Benavides

Inmunólogo Alergólogo
Presidente Del Capítulo Bolivariano - SLAAI
CENTRO DE REFERENCIA NACIONAL DE ALERGIA ASMA E
INMUNLOGIA
 INMUNODEFICIENCIAS
Grupo heterogéneo de enfermedades que comprometen el
desarrollo y las funciones
del sistema inmune

PRIMARIAS SECUNDARIAS
 INMUNODEFICIENCIAS
Secundarias o Adquiridas
*NO HIV *HIV SIDA
• Asociada a patología sistémica
Metabólicas (Diabetes)
Infecciosas
Enfermedades neoplásicas
• Secundarias acción terapéutica
Inmunosupresores
Corticoides
AINES
Otras Drogas (anticonvulsivantes)
• Combinadas
Trauma Cirugía
Estrés psíquico y depresión
(+ eje hipotálamo-hipofisario-adrenal y
citoquinas proinflamatorias: IL-1, IL-6, TNF-,
con desviación H2)
 Inmunodeficiencias Primarias

Las inmunodeficiencias son

desórdenes que afectan algún Inmunidad
innata
componente importante en la
respuesta inmunológica,
provocando una respuesta Sistema
inadecuada a infecciones por Inmune
diversos microorganismos y Inmunidad
susceptibilidad al desarrollo de adquirida
neoplasias

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 Tres Niveles de Defensa

Lisozima en
secreciones
Complemento
Integridad
de la piel Neutrófilo
DC
Ph bajo
Células T
estómago
Células NK
Presencia de Células B
comensales

Clearance ciliar y mucus de

las vías respiratorias

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 COMPARTIMIENTOS DEL SISTEMA INMUNE
INMUNIDAD INNATA INMUNIDAD ADAPTATIVA

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Que se necesita para establecer el
diagnóstico de una IDP

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SEÑALES DEE PELIGRO DE LAS INMUNODEFICENCIAS PRIMARIAS

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Que se necesita para establecer el diagnóstico
de una IDP
CITOMETRO DE
FLUJO

SECUENCIADOR
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 ANALISIS BASICO DE INMUNODEFICIENCIAS
LINFOCITOS B LINFOCITOS T COMPLEMENTO PMN NK

•Cuantificación de Recuento de Linfocitos •Det de CH50 •Neutrófilos Absolutos •Citometria de

Inmunoglobulinas Totales flujo CD!6
•Determinación C3 •NBT
•Determinación de subclases de Rx Tórax Lateral •CD56
IG •Determinación. C4 •123 DHR
Pruebas cutáneas de •Quimiotaxis •CD19
•Deter Linfocitos B hipersensibilidad •OTROS •Fenotipos
retardada leucocitarios
•anticuerpos específicos (CD11a/CD18)
(vacunación pre / post) Determinación de CD3,
anticuerpos Anti- CD4,CD8
diphteria/tetanus
 OTROS
•anticuerpos anti-polisacárido
de neumococo
•Isohemaglutininas
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 DEFECTOS EN LA RESPUESTA INMUNOLÓGICA
HUMORAL O DE LB
 Las deficiencias humorales inmunes típicamente son
causadas por el defecto en la habilidad de los LB para
producir Igs funcionales
 Los tipos de infecciones en defectos humorales,
involucran bacterias encapsuladas (H.influenza,
Pneumococcus spp, Streptococci spp, entre otros)

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 DETERMINACION DE INMUNOGLOGULINAS
•Existen 5 tipos de Igs: G,A,M,D e IgE •La combinación de deficiencia de IgA con
La mayoría de los Ac. son de la clase deficiencias de IgG2 e IgG4 se observa con
IgG:subclases :IgG1,G2,G3 e IgG4 frecuencia.
•Las subclases IgG1 e IgG3 son ricas en •Las deficiencias de IgG2 e IgG4 al igual que
Acs. contra proteínas como las toxinas
producidas por las bacterias de la las deficiencias de IgA e IgE ocurren también
difteria y tétanos, así como en asociación con Ataxia-Telangiectasia
anticuerpos contra proteínas virales.
•IgG2 forma Ac contra el • Subclase IgG:
revestimiento (cápsula) de
polisacáridos. neumococo y IgG1 489 mg//dl ( 381-884 )
Haemophilus influenzae IgG2 91 mg//dl ( 70-443 )
•Por lo tanto, una persona puede ser
susceptible a ciertas clases de IgG3 16 mg//dl ( 17-90 )
infecciones pero no a otras IgG4 7 mg//dl ( 1-116 )
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INMUNOGLOBULINAS

Javier F, Moore C, Sorensen R Ann Allergy Asthma. Immunol. 2000; 84:25-30

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VALORACION DE RESPUESTA INMUNE HUMORAL
Infecciones recidivantes de las vías
respiratorias superiores y/o inferiores, Los gérmenes
tales como: otitis, sinusitis, neumonía, capsulados de mayor
bronquitis. relevancia clínica son:
Infecciones severas: meningitis, sepsis Streptococcus
pneumoniae,
Haemophilus
influenzae, Neisseria
meningitidis
23 VALENTE
1,2,3,4,5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A,
11A, 12F,14, 15B, 17F, 18C,19A,
19F, 20, 22F, 23F y 33F Existen 90 serotipos identificados
por tipificación capsular: 10 - 12
son responsables del 80% de las
infecciones invasivas
CONJUGADA
4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23F + TT
o TD
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VALORACION DE RESPUESTA INMUNE HUMORAL

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VALORACION DE RESPUESTA INMUNE HUMORAL

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 DEFECTOS EN LA RESPUESTA INMUNE
CELULAR O DE LT
Son críticos en eliminar o matar organismos
intracelulares, los pacientes que tienen defectos
de LT, frecuentemente presentan infecciones
oportunistas e infecciones virales diseminadas.
Cryptococcus, Mycobacteria spp, Cándida spp, y
una variedad de virus (por ej. CMV, virus de
Epstein-Barr, adenovirus, varicela).
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 DEFECTOS EN LA RESPUESTA INMUNE
CELULAR O DE LT

Las pruebas cutáneas de

hipersensibilidad retardada
son otras herramientas
importantes en la
determinación de los
defectos funcionales de los
LT.
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 DEFECTOS EN LA RESPUESTA INMUNE
CELULAR O DE LT
Este tipo de pruebas son funcionalmente
informativas porque nos determinan la habilidad
de los LT para responder a los antígenos extraños
en las células presentadoras de antígenos
profesionales, produciendo induración de la piel y
eritema.

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 CITOMETRIA DE FLUJO
Es una poderosa tecnología
para la caracterización y
análisis de células. Mide y
analiza simultáneamente
Múltiples características
físicas de las células, cuando
estas se mueven en un flujo
a través de un haz de luz.

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[email protected]
[email protected]
[email protected]
 CASO CLINICO

• Niño, 10 años
• Infecciones recurrentes
desde los 2 años de edad
• 11 neumonías y 3 meningitis
bacterianas
• 2 Episodios de Otitis con
tratamiento ATB

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• IgG ↓, IgA ↓, IgM ↓
• Leucocito 9,800 cel /uL
• Linfocitos 970 cel /uL
Citometría
de flujo

[email protected]
 Citometría de flujo

Control Paciente
10 3 10 3

10 2 10 2

10 1 10 1

10 0 10 0
15.8% 0.39%

10 -1 10 -1
10 -1 10 0 10 1 10 2 10 3 10 -1 10 0 10 1 10 2 10 3
CD20
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 CASO CLINICO
• IgG ↓, IgA ↓, IgM ↓
• Linfocitos B ↓ Citometría
de flujo
• ¿Diagnóstico?
• Agammaglobulinemia
¿Ya tenemos el
diagnóstico?

[email protected]
 Agammaglobulinemias

[email protected]
 ¿Qué gen está
fallando en nuestro
paciente?

[email protected]
[email protected]
Diagnóstico:
• Agammaglobulinemia por mutación en
BTK [email protected]
 ¿El camino que
tomamos para
hacer el
diagnóstico fue el
más adecuado?
[email protected]
 CELULAS B

Son leucocitos de los cuales depende la inmunidad mediada por

anticuerpos
Constituyen 5 al 20% de los linfocitos totales en sangre periférica
Dan origen a las células plasmáticas encargadas de secretar
anticuerpos
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 CD 19: 0
Cel./uL

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 DETERMINACION DE BTK
POR CITOMETRIA DE FLUJO
CERENAAI -INSN

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 BTK
TESTIGO BTK
190612_ISO test.fcs…APC-A, SSC-A subset 190612_BTK eduardo.fcs…APC-A, SSC-A subset
4 4
10 10 100
0 10 94.4

3 3
80
10 10
GAMMA

BTK

% of Max
60
PE-A

PE-A
2 2
10 10

40

1
CD14 1
CD14
10 10
20

0 0 099 0 5.61
10 10 0
0 1 2 3 4
100 101 102 103 1004
10 101 102 103 104
10 10 10 10 10
APC-A APC-A PE-A
5.16
[email protected]
48.7
• Niño, 3 años
• Lesiones granulomatosas en
piel desde los 7 meses de
edad
• Serratia, Proteus
• 3 neumonías
• BK Negativo

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• IgG, IgA, IgM: normales
• Poblaciones linfocitarias: normales

• ¿Diagnóstico clínico? ¿Cómo confirmar

• Enfermedad granulomatosa crónica el diagnóstico?

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 Oxigeno Molecular O2
Radical superóxido O2-
H2O2
HOCl
OH-
Destrucción de Bacterias y hongos
fagocitado

¿Qué gen está

fallando en
nuestro
paciente?
[email protected]
 SECUENCIAMIENTO DHR MADRE
DHR PACIENTE [email protected]
PACIENTE PORTADORA
 ¿El camino que
tomamos para
hacer el
diagnóstico fue el
más adecuado?

[email protected]
 Muestra Normal

RESULTADOS:
PMN (Eventos contados) MFI
Muestra basal: 5000 225
Muestra con 1,2,3 DHR: 5000 29 955
Muestra con estimulo PMA: 5000 993 441

NOI (Indice Oxidativo de los Neutrofilos): 33

Epling, C. L., D. P. Stites, T. M. McHugh, H. O. Chong, L. L. Blackwood, and D. W. Wara. 1992. Neutrophil function
[email protected]
screening in patients with chronic granulomatous disease by a flow cytometric method. Cytometry13:615–620.
 Muestra de Paciente con
EGC

PMN (Eventos contados) MFI

Muestra Basal: 5000 1 151
Muestra con 1,2,3 DHR: 5000 8 214
Muestra con estimulo PMA: 5000 11 827
NOI (Indice Oxidativo de los Neutrofilos): 1.4

Epling, C. L., D. P. Stites, T. M. McHugh, H. O. Chong, L. L. Blackwood, and D. W. Wara. 1992. Neutrophil function screening
by a flow cytometric method. Cytometry13:615–620.
in patients with chronic granulomatous [email protected]
VALORES NORMALES
• NOI > 30 De acuerdo con un estado normal, no consistente con el
diagnostico de CGD.

• NOI < 5 Consistente con el diagnostico de CGD.

• NOI > 30 y NOI < 5 De acuerdo con un estado de portador de la ligada

al cromosoma X forma de CGD en una mujer si hay 2 poblaciones
claramente separadas de los granulocitos.

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• En la actualidad hay más de 300
mutaciones descritas en el gen CYBB y
se han registrado en la XCG Dbase
(http://bioinf.uta.fi/CYBBbase). 2015

[email protected]
 GRACIAS

[email protected]