Streptococcus pneumoniae

G. Rodríguez, L.Pardo

ESTREPTOCOCOS DEL GRUPO VIRIDANS O GRUPO ALFA HEMOL ÍTICO

Los Streptococcus del grupo viridans constituyen un grupo heterogéneo compuesto por mas
de 20 especies diferentes con diversos nichos ecológicos y patogenicidad. Dentro de este
grupo se encuentra Streptococcus pneumoniae, el cual por su importancia médica se
considerará aparte.

Exceptuando entonces a S. pneumoniae los estreptococos del grupo viridans son

organismos que forman parte de la flora normal del tracto respiratorio y digestivo, pueden
bajo determinadas circunstancias, invadir sitios estériles pudiendo provocar enfermedades
graves.

Comparten las características generales del género y se caracterizan por producir un halo de
alfa-hemólisis alrededor de sus colonias. Tienen requerimientos nutricionales variables y
desde el punto de vista de sus requerimientos atmosféricos la mayoría son anaerobios
facultativos, existiendo algunas cepas capnófilas y otras microaerófilas.

Aunque algunos aislamientos pueden reaccionar con los antisueros de Lancefield, son no
agrupables. Se distinguen varias especies en este grupo, requiriendo su identificación de
una variedad de pruebas bioquímicas.

Dentro de sus factores de virulencia se destacan:

 la presencia de ácido lipoteicoico que favorece la adherencia del microorganismo

(importante en la adherencia a las válvulas cardíacas cuando ocasiona endocarditis);
 la producción de abundantes polisacáridos extracelulares (limo), que interviene en
los mecanismos patogénicos de producción de caries y les brinda adherencia entre
ellos, mecanismo importante en endocarditis. Los estreptococos de este grupo se
aíslan de diferentes procesos patológicos: caries dental, infecciones quirúrgicas,
bacteriemias, endocarditis (de la cual es responsable del 50-75% de los casos sobre
válvulas nativas), abscesos profundos, etc.

La mayoría de Streptococcus del grupo viridans son susceptibles a la penicilina G; pero se

están reportando recientemente cepas moderada y altamente resistentes en algunas áreas del
mundo. También se han descrito algunas cepas que presentan el fenómeno de tolerancia, en
el cual los microorganismos pueden ser inhibidos por concentraciones bajas del
antimicrobiano, pero se requiere un nivel 32 veces mayor para lograr la actividad
bactericida.
S. PNEUMONIAE

Si bien Streptococcus pneumoniae taxonómicamente se ubica dentro de los streptococos del

grupo viridans presenta algunos aspectos particulares que ameritan su estudio separado de
los demás integrantes del grupo.

S. pneumoniae es un importante patógeno humano, agente etiológico reconocido de

neumonía, meningitis, sinusitis y otitis media; y en menor frecuencia también de
endocarditis, artritis, y peritonitis.

Caracteres microbiológicos

Es un coco Gram positivo que se agrupa formando cadenas en medio líquido. Es catalasa
negativo, exigente desde el punto de vista nutricional, y requiere para su óptimo desarrollo
de una atmósfera enriquecida con 5-10% de CO2. Posee una alfahemolisina que degrada la
hemoglobina, dando un color verde alrededor de la colonia cuando se desarrolla en agar
sangre.

El peptidoglicano y los ácidos teicoicos son los constituyentes principales de la pared

celular. En la figura 17.2 se observa una representación esquemática de la cápsula, pared
celular y membrana celular. La integridad de la pared depende de la presencia de
numerosas cadenas peptídicas laterales, que están entrelazadas por enzimas (transpeptidasas
y carboxipeptidasas), siendo el sitio activo de estas enzimas el punto de unión de los
antibióticos betalactámicos. Un constituyente único de los neumococos es el polisacárido
C, un ácido teicoico compuesto por fosfato de colina covalentemente unido al
peptidoglicano en la capa externa de la pared celular. Por fuera de la pared se encuentra una
cápsula de naturaleza polisacárida presente en prácticamente todos los aislamientos
clínicos. Se reconocen aproximadamente 80 serotipos de S. pneumoniae en base a las
diferencias antigénicas en los polisacáridos capsulares.

Mecanismos patogénicos

La adherencia bacteriana es el primer paso en la producción de infección. Recientemente se

ha descubierto una adhesina en el neumococo que le permite unirse a receptores específicos
de las células epiteliales. La naturaleza química de estos adhesinas aún no ha sido
dilucidada. Una vez que la colonización ha tenido lugar, la infección resultará si los
microorganismos son llevados a sitios donde los mecanismos defensivos específicos e
inespecíficos del huésped, no los eliminen.

S. pneumoniae tiene la capacidad de producir enfermedad por su habilidad para escapar a la

fagocitosis, y la destrucción por las células fagocíticas del huésped. A diferencia de SgA el
S. pneumoniae produce pocas toxinas, de modo que produce enfermedad debido a su
capacidad de replicarse en los tejidos del huésped, y generar una respuesta inflamatoria
intensa. Los mecanismos patogénicos se describen a continuación.
 a) Evasión de la fagocitosis: los neumococos son pobremente ingeridos por las células
fagocíticas en ausencia de anticuerpos capsulares y complemento. Se ha observado
experimentalmente por transposición mutagénica, que la interrupción en la
producción de cápsula torna una cepa virulenta en avirulenta. Los mecanismos por
los cuales la cápsula inhibe la fagocitosis aún no están totalmente aclarados,
existiendo varias posibilidades como ser la ausencia de receptores en la célula
fagocítica que reconozcan los polisacáridos capsulares; la presencia de fuerzas
electroquímicas que repelen las células fagocíticas; y el enmascaramiento por
anticuerpos no específicos y complemento, que se depositan en la superficie
bacteriana y la tornan inaccesible a la fagocitosis.

b) Activación del complemento: la pared celular del neumococo parece activar la vía
alterna del complemento. La inyección de peptidoglicano o ácido teicoico
separadamente en el espacio subaracnoideo, causa una reacción inflamatoria con
características de meningitis bacteriana. Esta activación está asociada con la
liberación de C5a, que atrae gran cantidad de polimorfonucleares al medio.

c) Existen otros factores que contribuyen de forma secundaria en la producción de

enfermedad, entre ellos se encuentran:

- neumolisina: toxina que se inserta en la bicapa lipídica de las membranas celulares

mediante su interacción con el colesterol, y causa una gama de efectos citolíticos y
citotóxicos, por ejemplo inhibe la función bactericida de los leucocitos
polimorfonucleares y el barrido ciliar. Quizás más importante aún es que esta
sustancia produce una intensa inflamación al activar la vía clásica del complemento.

- otros: proteínas de superficie, autolisina (produce la desintegración de la pared

bacteriana liberando sustancias bacterianas en el foco), alfa-hemolisina, y
finalmente neuraminidasa, que podría contribuir a la adherencia bacteriana por
clivado del ácido siálico en las superficies mucosas.

Mecanismos defensivos del huésped

Existen amplias evidencias que la respuesta de anticuerpos anticapsulares otorga una

protección efectiva contra la infección neumocóccica, apareciendo anticuerpos
anticapsulares específicos a los 5-8 días de comenzada la infección, que es el tiempo en que
la fiebre desaparece cuando no media tratamiento antimicrobiano.

Factores que predisponen a infección neumocóccica

S. pneumoniae es el principal ejemplo de bacteria patógena extracelular. En estos

microorganismos las alteraciones en los principales elementos defensivos (factores
humorales como Ac, complemento y células antifagocíticas), llevarán a una predisposición
del huésped a infección repetida.

Presentación clínica
S. pneumoniae produce una gran variedad de cuadros clínicos, destacándose entre ellos por
su gravedad y frecuencia, la meningitis y la neumonía.

MENINGITIS

S. pneumoniae junto con N. meningitidis constituyen los agentes más frecuentes de

meningitis en el adulto. Ésta se produce como resultado de una bacteriemia o por extensión
de focos cercanos (senos paranasales, oído medio). La patogénesis de la meningitis se
reseña en otro capítulo.

NEUMONÍA

S. pneumoniae es el agente más frecuente de neumonía bacteriana de origen en la

comunidad. Es una patología muy frecuente que afecta todas las edades, su incidencia está
relacionada con la estación, y puede ser causa de muerte sobre todo en mayores de 65 años.
El diagnóstico es clínico, radiológico y microbiológico. En cuanto al último, el diagnóstico
es confirmado por la identificación de S. pneumoniae en las secreciones bronquiales o el
hemocultivo.

Susceptibilidad a los antimicrobianos

La penicilina ha sido el antibiótico de elección para el tratamiento de infecciones

neumocóccicas. En otras regiones se ha visto una disminución de la susceptibilidad reflejo
la selección de mutantes resistentes. Estos microorganismos requieren una concentración
mayor para saturar las proteínas fijadoras de penicilina (PBP) y efectuar su efecto
antibiótico. En S. pneumoniae existen hasta el momento 6 PBPs descritas, dependiendo del
número de PBP mutadas y de la magnitud de los cambios en secuencias de los genes que
las codifican determinan el perfil de resistencia a -lactámicos que presente la cepa en
estudio. Así puede encontrarse desde apenas una disminución en la sensibilidad a penicilina
y ampicilina, hasta resistencia conjunta a penicilina y ceftriaxona o solo resistencia a
ceftriaxona. La capacidad que tiene este microorganismo para adquirir material genético del
medio es la causa principal de variabilidad a este nivel. Sin embargo, los niveles de
resistencia que alcanza un microorganismo, pueden ser insuficientes para provocar un
fracaso terapéutico, dado que por ejemplo, el antibiótico puede alcanzar altas
concentraciones en el sitio de infección. En nuestro país, esto puede evidenciarse en
infecciones a nivel pulmonar donde para el caso de neumonías estreptocócicas el 100% de
las cepas aisladas hasta el momento son sensibles a penicilina. Este fenómeno es mas
marcado aún luego de la implementación de la vacunación universal contra S. pneumoniae,
ya que la vacuna cubre los serotipos que presentaban mayores niveles de resistencia.
Para el caso de meningitis la situación puede ser diferente, ya que el microorganismo debe
ser 66 veces mas sensible para obtener un éxito terapéutico, debido a que la concentración
de antibiótico alcanzada en LCR es menor.

A la hora de determinar los puntos de corte para definir cuándo una cepa de Streptococcus
pneumoniae es sensible o resistente, se tienen en cuenta las propiedades farmacocinéticas y
farmacodinámicas de los antibióticos, de modo que se definen dos categorías, una para
aislamientos meníngeos y otra para aislamientos extra meningeos.

Prevención

Se han desarrollado diversas vacunas contra S. pneumoniae. Existen dos tipos de

vacunas que están disponibles mundialmente y también en Uruguay: las conjugadas y las
no conjugadas. Las primeras, son efectivas en niños menores de dos años, mientras que las
no conjugadas pueden utilizarse para prevenir la enfermedad neumocóccica en niños
mayores y adultos. Las vacunas conjugadas contra la enfermedad neumocóccica se
incorporaron al programa ampliado de inmunizaciones del Uruguay desde 2007, al
comienzo utilizando una vacuna heptavalente, y más recientemente una 13-valente, que
cubre la mayoría de los serotipos de S. pneumoniae asociados a enfermedad invasiva en
niños. La vacuna actualmente disponible en el programa nacional de vacunación, previene
particularmente la infección grave por neumococo, incluyendo la meningitis neumocócica,
bacteriemia oculta y neumonia.

La vacuna no conjugada disponible es 23-valente (cubre 23 serotipos diferentes) es

especialmente útil para prevenir la enfermedad neumocóccica grave en grupos con riesgo
incrementado de infección neumocóccica: pacientes con enfermedad pulmonar crónica,
enfermedad cardiovascular avanzada, diabetes mellitus, cirrosis, insuficiencia renal crónica,
y aquellos individuos de más de 65 años de edad. Un segundo grupo de individuos estaría
integrado por personas que tengan un compromiso del sistema inmune: infección por VIH,
asplenia, linfoma, mieloma, enfermedad de Hodking, transplantados, etc. Además de en
adultos, también puede utilizarse en niños mayores de dos años. La vacuna está constituida
por los polisacáridos capsulares de los 23 serotipos más frecuentemente aislados de
infecciones. Un estudio reciente de efectividad de la vacuna, presentó datos
epidemiológicos que demostraron que el efecto protector de la misma persiste por 5 años en
personas jóvenes sanas, decreciendo más rápidamente a medida que aumenta la edad.

La inmunización pasiva con inmunoglobulina humana también protege contra la infección

neumocóccica, y se ha usado en niños portadores de infección por VIH y en adultos con
linfoma, en los cuales no se espera tener una respuesta de anticuerpos frente a la
vacunación.

GÉNERO STREPTOCOCCUS. PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO

Como ya mencionamos para el género Staphylococcus la identificación comienza con el

estudio de la morfología macroscópica y microscópica a partir de un cultivo puro. Sólo
haremos mención a aquellas especies más frecuentes en la práctica clínica.
En cuanto a los requerimientos nutricionales el género Streptococcus es exigente, y por lo
tanto debe ser cultivado en medios ricos que le aporten los nutrientes necesarios, por
ejemplo agar sangre ovina al 5%.

Dentro de las pruebas bioquímicas para la identificación, la primera luego de determinar

que se trata de cocos Gram positivos, es la prueba de la catalasa (ver capítulo 16, Género
Staphylococcus).

Luego de determinar que se trata de cocos Gram positivos, catalasa negativos, debemos
observar el efecto que producen las colonias de la cepa en estudio sobre placas de agar
sangre ovina al 5% (tipo de hemólisis). Así podemos clasificar este grupo de gérmenes en:

 beta-hemolíticos: son aquellos que producen una hemólisis total de los glóbulos
rojos, observándose como un halo transparente alrededor de las colonias.
 alfa-hemolíticos: son aquellos que producen hemólisis parcial, la cual se observa
como un halo con tonalidad verdosa alrededor de las colonias.
 gamma-hemolíticos: son aquellos que no producen hemólisis sobre el agar sangre.

Estreptococos beta hemolíticos

SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA

• Objetivo: separar el S. pyogenes de los demás estreptococos beta hemolíticos.

• Fundamento: el 99% de las cepas de S. pyogenes son sensible a bajas concentraciones de

bacitracina (discos con 0,04 U). Un 5% de las cepas de S. agalactiae son sensibles a la
bacitracina.

• Procedimiento: se realiza sembrando 3-4 colonias, tomadas con asa bacteriológica de un

cultivo puro, que se estrían sobre una placa de agar sangre en varias direcciones intentando
obtener un cultivo confluente. Luego se coloca el disco de bacitracina y se incuba 18-24
horas a 35-37ºC.

• Interpretación de los resultados: la aparición de cualquier halo de inhibición del

crecimiento alrededor del disco se considera una prueba positiva (no importa el diámetro
del halo).

HIDROLISIS DEL PYR

Objetivo: separar S. pyogenes y Enterococcus de los demás estreptococos. S. pyogenes y

Enterococcus poseen la capacidad de hidrolizar el substrato PYR (pirridonil ßnaftilamida)
debido a que poseen la enzima l-piroglutamil aminopeptidasa. Existen varias
configuraciones comerciales de este test por eso no detallaremos ninguna en particular. En
general siempre se revelan por un cambio de color. Este test es más específico y menos
laborioso que realizar el test de sensibilidad a la bacitracina, la bilis esculina y caldo salado
(se verán más adelante).
PRUEBA DE CAMP

• Objetivo: separar S. agalactiae de los demás estreptococos ß-hemolíticos.

• Fundamento: los estreptococos del grupo B producen una proteína extracelular difusible
llamada “factor CAMP” (iniciales de los autores que lo describieron); que actúa
sinérgicamente con la ß-lisina de S. aureus, potenciando la lisis de los eritrocitos.

• Procedimiento: se realiza estriando un cultivo del estreptococo ß-hemolítico en estudio

en forma perpendicular a una estría de un estafilococo productor de ßlisina, en placas de
agar sangre. Se incuban 18-24 horas a 37ºC.

• Interpretación de los resultados: la prueba positiva se evidencia por la presencia de una

zona de potenciación de la hemólisis en forma de punta de flecha en el lugar donde se
contactan las dos estrías.

Estreptococos alfa y gamma hemolíticos

Dentro de este grupo se incluyen S. pneumoniae, Streptococcus del grupo viridans y

Enterococcus (algunas cepas pueden presentar beta-hemólisis). Describiremos los ensayos
bioquímicos utilizados para su identificación.

BILIS ESCULINA

• Objetivo: separar los estreptococos del grupo D y Enterococcus de los demás grupos de
estreptococos.

• Fundamento: se basa en la capacidad de los estreptococos del grupo D y Enterococcus

para crecer en un medio de cultivo que contiene 40% de bilis, y de hidrolizar la esculina a
esculetina; ésta se combina con el citrato ferroso que posee el medio, dando un complejo de
color negro. La concentración de bilis es fundamental, ya que existen estreptococos del
grupo viridans que son capaces de crecer a concentraciones menores de bilis.

• Procedimiento: se realiza sembrando en superficie tubos de agar bilis esculina inclinado.

• Interpretación de resultados: una reacción positiva se evidencia como ennegrecimiento

del medio.

PRUEBA DE TOLERANCIA A LA SAL (CALDO SALADO )

• Objetivo: separar los enterococos capaces de crecer en caldo salado, de los demás
estreptococos del grupo D.

• Fundamento: se basa en la capacidad de los enterococos de crecer en una concentración

de 6,5% de NaCl. Se trata de un medio de cultivo líquido que contiene además de NaCl,
glucosa y un indicador de pH: púrpura de bromocresol.
• Procedimiento: se inocula el caldo salado con la cepa a estudiar y se incuba 18-24 horas
a 35ºC.

• Interpretación de los resultados: se considera la prueba positiva cuando aparece

turbidez con o sin acidificación del medio, que se observa como un viraje de color del
púrpura al amarillo. La no aparición de turbidez indica una prueba negativa.

PYR

La prueba de PYR se utiliza para la identificación del género Enterococcus, como ya fue
mencionado.

Para la identificación de especies dentro del género Enterococcus se realizan una serie de
pruebas bioquímicas basadas en la utilización de distintos azúcares y aminoácidos, entre
otras.

SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA

• Objetivo: diferenciar S. pneumoniae de otros estreptococos alfa hemolíticos.

• Fundamento: se basa en la sensibilidad de S. pneumoniae a una concentración menor o

igual a 5 µg/ml de hidroxicuprina (optoquina).

• Procedimiento: estriar un cuadrante de una placa de agar sangre en varias direcciones

con una suspensión Mc Farland 0,5. Colocar luego un disco de optoquina en el centro del
área estriada. Incubar 18-24 horas a 37ºC en 5-10% de CO2.

• Interpretación de resultados: halos de inhibición iguales o mayores a 14 mm; o iguales

o mayores a 16 mm con discos de optoquina de 6 y 10 mm de diámetro, respectivamente,
indican sensibilidad.

IDENTIFICACIÓN SEROLÓGICA

Muchos Streptococcus aislados de infecciones humanas poseen antígenos específicos de

naturaleza polisacárida (polisacárido C o ácidos teicoicos), que se encuentran en la pared
celular. La extracción del polisacárido C por diferentes técnicas y su posterior
enfrentamiento con antisueros específicos, definen una serie de grupos que se denominan
con letras mayúsculas a partir de la A. La utilidad de la extracción antigénica dependerá del
tipo de hemólisis. En los estreptococos ß-hemolíticos se ha confirmado como el mejor
método para su clasificación. En los no ß-hemolíticos, la extracción antigénica sólo es útil
para la identificación de los grupos D y B.

Existen diferentes métodos para la extracción enzimática que no detallaremos. Actualmente

se utilizan métodos de extracción rápida por medio de enzimas de extracción. Luego se
procede a la identificación del polisacárido por medio de técnicas de aglutinación con
partículas de látex, que tienen absorbido el antisuero específico. También existen en el
mercado kits comerciales que utilizan técnicas de coaglutinación.

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