Informe6 Suelos

UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS - ESPE
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y DE LA
AGRICULTURA
MICROBIOLOGÍA II
INFORME DE LABORATORIO 6
GRUPO IV
Integrantes: Abad Myriam, Flores David, Ortega Soledad, Quishpe Jean Pierre
Fecha: 09/08/2018 Práctica N°: 6
NRC: 4287
1. Tema: Aislamiento de bacterias de suelos contaminados con hidrocarburos.

2. Palabras clave: fenantreno, HAPs, microorganismos biorremediadores
3. Resumen
4. Introducción
4.1 Antecedentes
Muchos trabajos anteriores se han enfocado en descubrir, o buscar microorganismos que
sean capaces de desgradar distintos tipos de hidrocarburos, entre ellos aquellos
pertenecientes a los HAPs, con este fin, se propusieron distintos métodos para su
búsqueda y aislamiento. Por ejemplo, (Wong, y otros, 2017) en su trabajo “
Degradación de Fenantreno por bacterias del género Burkholderia y Rhizobium aisladas
de nódulos de mimosas” proponen métodos para identificar microorganismos en las
plantas conocidas como mimosas que sean capaces de degradar el fenantreno, para con
ello saber si eran útiles para biorremediación de suelos contaminados con este
compuesto.
4.2 Justificación
Los hidrocarburos, aunque útiles en distintas aplicaciones, al ser derramados en la
naturaleza son nocivos para los organismos vivientes que ahí se encuentren. Para lograr
mitigar sus efectos se emplean distintas técnicas de remediación, entre ellas el uso de
microorganismos. Se sabe que naturalmente en algunos suelos hay presencia de
microorganismos degradadores de ciertos hidrocarburos como por ejemplo el
fenantreno por lo que lograr identificarlos, estudiarlos y saber cómo actúan es
importante para poder usarlos en biorremediación de suelos o agua.
4.3 Marco teórico:
Según (Echeverri, Manjarrez, & Cabrera, 2011) hay bacterias que utilizan petróleo para
lograr crecer y desarrollarse. Entre los géneros capaces de lograrlos se han encontrado
Pseudomonas, Mycobacterias, Mycromycetes. De igual manera se están estudiando
distintos géneros para medir su capacidad de degradación, también podemos encontrar a
Burkholderia y Rhizobium las cuales se han analizado para degradación de fenantreno.
El fenantreno es un tipo de hidrocarburo perteneciente al grupo de HAPs (hidrocarburos
aromáticos policíclicos), su unidad estructural es el benceno por lo que consta de tres
anillos fusionados de benceno (Guerrero & Rodríguez, 2009). De acuerdo con (Torres,
2018) existen distintas maneras de obtener fenantreno, entre las que se destaca el
derrame de petróleo o de algunos de sus derivados. Además, la IARC lo ha estipulado
como no carcinógeno, pero podría tener efectos no deseables en la salud.
5. Objetivo General:
6. Objetivos Específicos
7. Hipótesis
8. Materiales y Métodos
Se tomó una muestra de suelo de una vulcanizadora en un frasco estéril y se la llevó al
laboratorio para su análisis. La muestra fue homogeneizada agitándola varias veces en
el mismo frasco, posteriormente se pesó 10 gr de la muestra junto al mechero y se
colocó en solución salina 0,9%. Esta mezcla fue llevada a agitación durante 30 minutos
y luego se la dejó reposar 30 minutos más para que decante. Luego del sobrenadante se
tomó alícuotas de 100 mL y se las sembró en medio mineral basal que contenía como
única fuente de carbono: fenantreno. Las cajas Petri fueron dejadas en incubación a
36ºC durante 5-7 días. Pasado este tiempo se observó resultados y se realizó tinción
Gram.
9. Resultados
En ambas cajas Petri se obtuvo crecimiento masivo sin embargo en una de las cajas el
crecimiento fue blanquecino mientras que en la otra fue amarillo opaco (ver figura Nº1).
Caja 1 Caja 2
Figura N°01: Crecimiento en medio mineral basal con fenantreno tras 6 días de
incubación a 36ºC.
Las microorganismos observados en la caja 1 fueron cocos, diplococos y estreptococos
Gram (-), mientras que en los de la caja 2 se vio cocos tanto Gram (-) como Gram (+)
(ver figura Nº02).
Caja 1 Caja 2
Figura N°02: Tinción Gram de los crecimientos previamente obtenidos del medio
mineral basal.
10. Discusión
Existen bacterias capaces de utilizar petróleo para su crecimiento y mantenimiento,
conocidas como bacterias degradadoras de hidrocarburos, dentro de las cuales se
encuentran diversos géneros que por su versatilidad metabólica son capaces de convertir
sustratos habitualmente no degradables en metabolitos fácilmente asimilables o

susceptibles de ser catalizados enzimáticamente (Echeverri, Manjarrez, & Cabrera,
2010). El crecimiento masivo en el medio enriquecido con petróleo confirma que la
muestra de suelo contenía bacterias degradadoras de hidrocarburos que pueden servir
para biorremediación.
Desde un punto de vista ambiental, las bacterias son muy importantes, pues tienen la
capacidad de transformar una gran variedad de contaminantes orgánicos e inorgánicos a
sustancias inocuas, que pueden ser reciclados al medio ambiente y también de aquellas
bacterias que tienen la capacidad de oxidar una gran cantidad de compuestos orgánicos
producidos y utilizados industrialmente (Goez, 1999). Se estima que, de todos los
microorganismos presentes en el suelo, las bacterias son aquellas que se presentan en un
mayor número y también las más importantes en la degradación de hidrocarburos,
verificando su presencia mediante las diferentes pruebas.
11. Conclusiones
Se logró aislar microorganismos degradadores de petróleo, lo cual se evidenció con el
crecimiento masivo que hubo en los medios de cultivo con petróleo a partir de muestras
de suelo contaminado con combustible. También se pudo determinar que estas bacterias
están presentes de manera natural en el suelo debido al crecimiento obtenido de la
muestra de suelo no contaminado.
Diferenciamos las morfologías de Cocos sp y Baillus ps Gram negativos en las colonias
de las baterías que degradaron el petróleo a través de tinción Gram.
12. Bibliografía
Echeverri, G., Manjarrez, G., & Cabrera, M. (2010). Aislamiento de bacterias
potencialmente degradadoras de petróleo en hábitats de ecosistemas costeros en
la Bahía de Cartagena, Colombia. NOVA - Publicación Científica EN CIENCIAS
BIOMÉDICAS 8 (13), 76-86.
Echeverri, G., Manjarrez, G., & Cabrera, M. (6 de Junio de 2011). Aislamiento de
bacterias potencialmente degradadoras de petróleo en hábitats de ecosistemas
costeros en la Bahía de Cartagena, Colombia. Obtenido de
http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/NOVA/NOVA13_ARTORIG7.pdf
Goez, M. (1999). Determinación y diferenciación de E. Coli y Coliformes Totales
usando un mismo sustrato cromogénico. . CEPIS.
Guerrero, A., & Rodríguez, A. (2009). Efecto de la presencia de fenantreno sobre la
expresión de proteínas y la actividad enzimática radical de Cyperus
hermaphroditus. Obtenido de Scielo:
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1405-
27682009000100007
Torres, L. (2018). Fenantreno: Estructura Química, Propiedades y Usos. Obtenido de
Lifeder: https://www.lifeder.com/fenantreno/
Wong, A., Mendez, E., Hernández, E., Yáñez, G., Giácoman, G., Ramírez, S., y otros.
(2017). Degradación de Fenantreno por bacterias del género Burkholderia y
Rhizobium aisladas de nódulos de mimosas. Obtenido de Scielo:
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2007-
07052017000200291
13. Anexos
Anexo N°01: Recolección de la muestra de suelo de una vulcanizadora

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1. Tema: Aislamiento de bacterias de suelos contaminados con hidrocarburos.

Muchos trabajos anteriores se han enfocado en descubrir, o buscar microorganismos que

sean capaces de desgradar distintos tipos de hidrocarburos, entre ellos aquellos

búsqueda y aislamiento. Por ejemplo, (Wong, y otros, 2017) en su trabajo “

Degradación de Fenantreno por bacterias del género Burkholderia y Rhizobium aisladas

de nódulos de mimosas” proponen métodos para identificar microorganismos en las

microorganismos. Se sabe que naturalmente en algunos suelos hay presencia de

microorganismos degradadores de ciertos hidrocarburos como por ejemplo el

fenantreno por lo que lograr identificarlos, estudiarlos y saber cómo actúan es

importante para poder usarlos en biorremediación de suelos o agua.

4.3 Marco teórico:

Pseudomonas, Mycobacterias, Mycromycetes. De igual manera se están estudiando

distintos géneros para medir su capacidad de degradación, también podemos encontrar a

Burkholderia y Rhizobium las cuales se han analizado para degradación de fenantreno.

El fenantreno es un tipo de hidrocarburo perteneciente al grupo de HAPs (hidrocarburos

aromáticos policíclicos), su unidad estructural es el benceno por lo que consta de tres

derrame de petróleo o de algunos de sus derivados. Además, la IARC lo ha estipulado

como no carcinógeno, pero podría tener efectos no deseables en la salud.

laboratorio para su análisis. La muestra fue homogeneizada agitándola varias veces en

el mismo frasco, posteriormente se pesó 10 gr de la muestra junto al mechero y se

Las microorganismos observados en la caja 1 fueron cocos, diplococos y estreptococos

(ver figura Nº02).

Existen bacterias capaces de utilizar petróleo para su crecimiento y mantenimiento,

conocidas como bacterias degradadoras de hidrocarburos, dentro de las cuales se

sustratos habitualmente no degradables en metabolitos fácilmente asimilables o

2010). El crecimiento masivo en el medio enriquecido con petróleo confirma que la

muestra de suelo contenía bacterias degradadoras de hidrocarburos que pueden servir

capacidad de transformar una gran variedad de contaminantes orgánicos e inorgánicos a

producidos y utilizados industrialmente (Goez, 1999). Se estima que, de todos los

microorganismos presentes en el suelo, las bacterias son aquellas que se presentan en un

mayor número y también las más importantes en la degradación de hidrocarburos,

verificando su presencia mediante las diferentes pruebas.

Se logró aislar microorganismos degradadores de petróleo, lo cual se evidenció con el

están presentes de manera natural en el suelo debido al crecimiento obtenido de la

muestra de suelo no contaminado.

Diferenciamos las morfologías de Cocos sp y Baillus ps Gram negativos en las colonias

de las baterías que degradaron el petróleo a través de tinción Gram.

Anexo N°01: Recolección de la muestra de suelo de una vulcanizadora

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