Informe N 16 de Cumarinas

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN
MARCOS
Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y

BIOQUÍMICA
“TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL”
Grupo: LATOQUIL
INFORME N° 16
CUMARINAS
AUTORES:
Laura Mabel Edith MAUCAILLE ROJAS

Eddy PALOMINO SUÁREZ
Xiomara Alisson RIVERA PUMA
Magaly Ljubisa SALVADOR VILLANUEVA
LABORATORIO LUNES 10-2 p.m.
Fecha de realización de práctica: 27 de mayo del 2018

Fecha de entrega: 04 de Junio del 2018
Lima, Perú
2018
CUMARINAS
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL:
Identificar la presencia de cumarinas en una muestra de orina mediante cromatografía de capa
fina.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
 Conocer el método de identificación de cumarinas por cromatografía en capa fina.
 Identificar la presencia de cumarinas en muestra de orina.
FUNDAMENTO TEÓRICO
La cumarina (5,6 – benzopirona) es un compuesto químico orgánico perteneciente a la familia
de las benzopironas, de origen natural o sintético. Se producen de forma natural en plantas y
microorganismos. 1
A la estructura base de la cumarina se pueden introducir sustituyentes de distinta naturaleza,

lo que lleva a que existan cumarinas que pueden ser utilizadas, según el tipo de sustituyentes
que poseen, con diversas finalidades: aditivos alimentarios, perfumes, cosméticos, productos
agroquímicos o bien como fármacos con la finalidad de estudiar, mejorar y ampliar el espectro
de su actividad terapéutica. Presentan interés farmacológico como anticoagulante,
antioxidante, antiviral, inhibidor enzimático y antibacteriano. 1
Las cumarinas deprimen la síntesis hepática de los factores esenciales para la coagulación
sanguínea dependientes de vitamina K (II (protrombina), VII, IX y X). El efecto antiprotrombina
es el más conocido y proporciona la base para detectar y evaluar un envenenamiento clínico.
Estos agentes también aumentan la permeabilidad de los capilares a través del cuerpo,
predisponiendo a una hemorragia interna masiva. 2
METODOLOGÍA Y RESULTADOS
METODOLOGÍA
1. MATERIALES
Reactivos
 Etanol
 Sistema de Solventes (Diclorometano: Éter etílico)
 FeCl3 al 1%
Instrumentos
 Placas de sílica gel
Equipo
 Luz UV (274 nm)
Muestra biológica: Orina
2. FUNDAMENTO (Identificación mediante cromatografía en Capa Fina)

La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una lámina que previamente ha sido
recubierta de una fina capa de adsorbente (fase estacionaria). La lámina se coloca en una
cubeta cerrada que contiene una mezcla de disolventes (fase móvil). A medida que la mezcla
de disolventes asciende por capilaridad a través del adsorbente, se produce un reparto
diferencial de los productos presentes en la muestra entre el disolvente y el adsorbente.
Las cumarinas presentan un espectro ultravioleta (UV) característico, que es fuertemente
influenciado por sus sustituyentes. Presentan fluorescencia de coloraciones entre azul, amarillo
o morado y que se intensifican en presencia de vapores de amoníaco. Aquellos compuestos
con fluorescencia al ultravioleta luego de la aplicación del reactivo revelador son considerados
cumarinas.
3. TÉCNICA OPERATORIA
R1 (Tóxicos Neutros)
Evaporar a sequedad
Reconstituir: Agregar 10 gotas de etanol
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

• SISTEMA DE SOLVENTES: Diclorometano: Éter etílico (1:1)
ROCIAR REVELADOR
• Revelador: FeCl3 al 1%
Manchas azul verdosas
LUZ UV (274 nm)

• Incrementar coloración de manchas
RESULTADOS
Determinación de cumarinas por cromatografía en capa fina
DST DMP
Ds (cm) Rf
(cm) (cm)
ST 14 11,5 - 0,82
MP 14 - 12 0,85
Ds: Recorrido del solvente

D ST: Recorrido del estándar
D MP: Recorrido de la muestra problema
Placa cromatográfica Revelado con FeCl3 1% Revelado con luz UV

DISCUSIÓN
Las cumarinas son compuestos derivados de la α- benzopirona. Dado que en su estructura
presentan un gran número de instauraciones, estos compuestos exhiben una fuerte
fluorescencia azul o verde al ser irradiados con luz ultravioleta, propiedad que se aprovecha
para su detección.3
En la práctica se identificó la presencia de cumarinas mediante cromatografía en capa fina en

una muestra de orina previamente tratada por el método de curry para la extracción de tóxicos
orgánicos fijos. Se empleó un sistema de solventes apolar Diclorometano: Éter etílico (1:1) con
una fase adsorbente polar. A medida que la mezcla de disolventes asciende a través del
adsorbente, se produce un reparto diferencial de los productos presentes en la muestra entre
el disolvente y el adsorbente. El proceso de adsorción se debe a interacciones intermoleculares
de tipo dipolo ‐dipolo o enlaces de hidrógeno entre el soluto y el adsorbente.4 Una vez eluída la
placa, se procedió a revelar con una solución de FeCl3 al 1% y se observó a lus UV.
La relación entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente desde el origen de la
placa se conoce como Rf, y tiene un valor constante para cada compuesto en unas condiciones
cromatográficas determinada. El Rf de la muestra de orina (0,85) fue similar al Rf del estándar
(0,82), lo que demuestra la presencia de cumarinas en la muestra analizada.
Existen otras formas de revelar cumarinas en una cromatografía en capa fina como la reacción
del hidroxamato férrico que es una reacción específica para lactonas, estructura que se
encuentra presente en cumarinas. Esta reacción consiste en asperjar la placa con una mezcla
de volúmenes iguales de clorhidrato de hidroxilamina al 2% en etanol y NAOH 2N, calentar por
5 – 10 min a 100º C y, al cabo de este tiempo, dejar enfriar y asperjar con volúmenes iguales
de HCL 2N y FeCl3 al 1% en etanol. Aquellos compuestos con fluorescencia al ultravioleta que
luego de la aplicación del reactivo revelador exhiben coloración anaranjada al visible son
considerados cumarinas. 3
CONCLUSIÓN
 Es posible la identificación de cumarinas mediante cromatografía en capa fina debido a
su reparto diferencial entre disolvente y adsorbente; y cuya estructura puede revelarse
al exhibir una fuerte fluorescencia azul o verde con luz ultravioleta.
 Se identificó la presencia de cumarinas en la muestra de orina (Rf = 0,85) mediante
cromatografía en capa fina, al comparar con la muestra estándar (Rf = 0,82)
RECOMENDACIONES
- Se debe procurar que el halo al puntear la placa sea pequeño, y dejar secar la gota en
cada punteada.
- Realizar el revelado de la placa en la campana extractora debido a la toxicidad de la
mezcla de solventes y revelador.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Pinto M. Cumarinas: Versatilidad estructural y aplicaciones en Química Farmacéutica.
Universidad de Santiago de Compostela. 2013
2. Capítulo 17. Rodenticidas. (Citado 03 junio del 2018). Disponible en:
https://espanol.epa.gov/sites/production-es/files/2015-09/documents/spch17.pdf
3. Carvajal L, Hata Y, Sierra N, Rueda D. Análisis fitoquímico preliminar de hojas, tallos y
semillas de cupatá (Strychnos schultesiana krukoff). Revista Colombia Forestal.
Diciembre 2009. Vol. 12: 161-170
4. Cromatografía en placa fina. (Citado 03 junio del 2018). Disponible en:
https://www.uam.es/docencia/jppid/documentos/practicas/actuales/guion-p6.pdf

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LABORATORIO LUNES 10-2 p.m.

Fecha de realización de práctica: 27 de mayo del 2018

A la estructura base de la cumarina se pueden introducir sustituyentes de distinta naturaleza,

2. FUNDAMENTO (Identificación mediante cromatografía en Capa Fina)

Reconstituir: Agregar 10 gotas de etanol

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Manchas azul verdosas

LUZ UV (274 nm)

Ds: Recorrido del solvente

Placa cromatográfica Revelado con FeCl3 1% Revelado con luz UV

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