Informe Lípidos

Universidad Nacional Autónoma de México
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Carrera de Química Farmacéutico-Biológica
Laboratorio de Bioquímica Celular y de los
Tejidos I
Informe Extracción, análisis de lípidos y
cromatografía en capa fina de yema de huevo
Asesor: Leonor Aguilar Santelises
Integrantes del grupo 1401 y equipo #5:

García Solano Irving
Cruz Alatorre Karla Nayeli
González González Tania Karen
Martínez Sánchez Alex Eduardo
Fecha: lunes 02 de octubre del 2017
Objetivos:
 Analizar las propiedades de los lípidos.

 Extraer los lípidos de la yema de huevo.
 Cuantificar fosfatos de lípidos fosforilados y no fosforilados.
 Analizar la importancia biológica de los lípidos presentes en la yema de huevo.
 Identificar los lípidos de la yema de huevo, por medio de la técnica de
cromatografía en capa fina.
 Estudiar los fundamentos de la cromatografía en capa fina.
 Identificar los lípidos de la yema de huevo, por medio de la técnica de
cromatografía en capa fina
Resultados
Tabla 1.- Datos obtenidos tras medir la absorbancia con el espectrofotómetro y µg de

P calculados de cada muestra .
mL de solución
Muestra Absorbancia µg de P
patrón
Blanco ---- 0 0.00
1 0.2 0.015 2.00
2 0.6 0.053 6.01
3 1.0 0.080 10.02
4 2.0 0.153 20.04
5 3.0 0.316 30.06
Calculo de los µg de P que contienen las muestras de la curva estándar.
A la solución estándar se le agrego 0.4394 g de KH2PO4 en 1000 mL por lo que en u1

mL hay 4.394x10-4 al diluir 1:10 se tiene que
(0.0004394𝑔)(1 𝑚𝐿)
𝐶1𝑉1 = 𝐶2𝑉2 ⇒ = 0.00004394 𝑔 = 43.94 µg KH2PO4
10 𝑚𝐿
Después utilizando una relación entre los pesos moleculares del KH2PO4 y P sabiendo
que el compuesto solo contiene 1 P
43.94 µgKH2PO4 pesan 136g

XµgP pesan 31g
(31𝑔)(43.94µg)
𝑥= = 10.02µgP
136𝑔
Nuevamente hacemos uso de una relación matemática para obtener los µgP que están
en cada muestra de la curva estándar
10.02µgP en 1.0 mL
𝑋1 µgP = 2.0 µgP en 0.2 mL
𝑋2 µgP = 6.01 µgP en 0.6 mL
𝑋3 µgP = 20.04 µgP en 2.0 mL
𝑋4 µgP = 30.06 µgP en 3.0 mL
𝑋µgP = (10.02µgP)(mL de solucion estandar)
Imagen 1.- Curva estándar de absorbancia vs µGp LINEA DE

TENDENCIA
Curva estandar
0.35
F
0.3
F
0.25
0.2
Absorbania
E y = 0.01x - 0.0105
0.15 R² = 0.9671
0.1 D
0.05 C
B
0 A
0 5 10 15 20 25 30 35
-0.05
µg de P
Tabla.2 Coordenadas de la curva estándar.
mL de solución
Punto Absorbancia µg de P
patrón
A BLANCO 0 0.00
B 0.2 0.015 2.00
C 0.6 0.053 6.01
D 1.0 0.080 10.02
E 2.0 0.153 20.04
F 3.0 0.316 30.06
Para el cálculo
De los µg de P en las muestras de fosforilados y no fosforilados se interpolo con ayuda

de la absorbancia de cada muestra mediante un método matemático ya que el grafico
era más erróneo
Muestra Absorbancia Concentración en µg

NO fosforilados (NF) 0.006 1.65
Fosforilados (F) 0.055 6.55
Tabla 3.- Absorbancia y concentración de las muestras trabajadas.
Usando la ecuación de la recta obtenida por los datos.
𝑌 = 0.01𝑥 − 0.0105
Siendo Y la absorbancia
Siendo X la concentración en µg
Se despejo x de la ecuación
𝑌 + 0.0105
𝑥=
0.01
Y sustituyendo se obtuvieron los valores de concentración señalados en la tabla 3.
Lo que sigue es aplicar el factor de dilución que es de 50(La dilución que se hizo a la
muestra)
Obteniendo:
1.65 µg X 50 = 82.5 µg de P obtenido en las muestras de no fosforilados
6.55 µg X50 = 327.5 µg de P obtenido en las muestras de fosforilados
 La lecitina es el lípido fosforilado más abundante en la yema de huevo por lo

que se calcula el contenido de fosforo teórico en base a la licitina
820 µg de lecitina contienen 31 µg de fosforo
10000 µg de muestra contienen X µg de fosforo
X=378 µg de fosforo
 Lípidos fosforilados
378 µg de fosforo son el 100 %
Por lo que 327.5 µg de fosforo corresponden al 86.7 %
 Lípidos no fosforilados
378 µg de fosforo son el 100 %
Por lo que 82.5 µg de fosforo corresponden al 21.%
Análisis de resultados
Los resultados obtenidos fueron satisfactorios ya que al hacer la separación de

fosfolípidos y lípidos no fosforilados no hubo mayor problema. Por otra parte al hacer
la determinación del contenido de fosforo en los fosfolípidos y lípidos no fosforilados
tuvimos inconveniente al hacer la digestión por el método de kjeldahl, ya que la
reacción al agregar el ácido sulfúrico fue violenta y hubo un problema con el
catalizador porque no se encontraba en el laboratorio, por ello la reacción tardo más
en efectuarse ya que adicionamos el catalizador mucho tiempo después de haber
adicionado el ácido sulfúrico, a pesar de estos inconvenientes logramos concluir la
digestión hasta que ambos líquidos se tornaron incoloros. Después de esto
proseguimos sin problemas.
Al hacer las lecturas en el espectrofotómetro estas no salieron del todo bien ya que el
espectrofotómetro que teníamos no funcionaba bien pues al hacer las lecturas estas
no eran precisas y cambiaban constantemente, así que decidimos hacer únicamente
las lecturas del blanco de papel y las de las muestras de fosfolipidos y lípidos no
fosforilados en otro espectrofotómetro. A pesar de que las absorbancias de la muestra
patrón de fosfatos salieron como se esperaba y las absorbancias de las muestras
problemas también salieron correctas, por los inconvenientes antes mencionados se
pudo afectar el resultado de las lecturas y a la hora de hacer la curva estándar de
fosforo esta no haya quedado como se esperaba.
Por otra parte al hacer el análisis e identificación de lípidos de la yema de huevo por
cromatografía en capa fina, en la preparación de placas no hubo inconveniente,
cuando aplicamos las muestras notamos que los lípidos no fosforilados no se podían
aplicar ya que el éter se había evaporado y no eran del todo líquidos así que tuvimos
que adicionar un poco más de éter y disolverlos nuevamente.
En la cromatografía se hizo la comparación de las cuatro placas:

Placa con yodo: El yodo se adiciona a los dobles enlaces, indicando mediante una
coloración amarilla la presencia de estos. En la placa el yodo indica la presencia de
lípidos con insaturaciones, fosfatidiletanolamina, fosfatidilinisitol, fosfatidilserina,
fosfatidilcolina, esfingomielina y lisolecitina ya que éstos presentan dobles enlaces en
sus estructuras.
Placa con ninhidrina: Este reactivo indica la presencia de lipidos con grupos amino
primario y secundario, en consecuencia la fosfatidiletanolamina y fosfatidilserina
muestran una coloración roja muy intensa, debido a que cuentan con un grupo amino.
La fosfatidilcolina muestra una coloración muy tenue, que puede ser provocada porque
contiene un grupo amida.
Placa con bismuto: Este reactivo revela la presencia de lípidos con colina, la
fosfatidilcolina muestra una coloración café característica de esta reacción, la
lisolecitina tiene una coloración muy tenue.
Placa con molibdato: Esta reacción indica la presencia de lípidos fosforilados. La
fosfatidilserina, fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina muestran un color azul intenso
indicando la presencia de fosfato en sus estructuras, también, se logra observar que la
lisofosfatidilcolina, esfingomielina y fosfatidilinisitol contiene fosfato, pero muestran una
coloración muy tenue.
Conclusiones
Se cumplieron los objetivos de la práctica ya que se extrajo satisfactoriamente los

lípidos fosforilados y no fosforilados presentes en la yema de huevo y mediante la
curva estándar se cuantifico la cantidad de fosfato presente en los fosfolípidos.
La cromatografía en capa fina al separar cada uno de los componentes permitió la

observación clara y definida de cada uno de los lípidos contenidos en la yema de
huevo mediante los 4 tipos de reveladores que se utilizaron que fueron el yodo,
molibdato, nihidrina y bismuto.

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Integrantes del grupo 1401 y equipo #5:

 Analizar las propiedades de los lípidos.

Tabla 1.- Datos obtenidos tras medir la absorbancia con el espectrofotómetro y µg de

Calculo de los µg de P que contienen las muestras de la curva estándar.

A la solución estándar se le agrego 0.4394 g de KH2PO4 en 1000 mL por lo que en u1

43.94 µgKH2PO4 pesan 136g

𝑋µgP = (10.02µgP)(mL de solucion estandar)

Imagen 1.- Curva estándar de absorbancia vs µGp LINEA DE

Tabla.2 Coordenadas de la curva estándar.

De los µg de P en las muestras de fosforilados y no fosforilados se interpolo con ayuda

Muestra Absorbancia Concentración en µg

Usando la ecuación de la recta obtenida por los datos.

Y sustituyendo se obtuvieron los valores de concentración señalados en la tabla 3.

1.65 µg X 50 = 82.5 µg de P obtenido en las muestras de no fosforilados

6.55 µg X50 = 327.5 µg de P obtenido en las muestras de fosforilados

 La lecitina es el lípido fosforilado más abundante en la yema de huevo por lo

820 µg de lecitina contienen 31 µg de fosforo

10000 µg de muestra contienen X µg de fosforo

Por lo que 327.5 µg de fosforo corresponden al 86.7 %

378 µg de fosforo son el 100 %

Por lo que 82.5 µg de fosforo corresponden al 21.%

Los resultados obtenidos fueron satisfactorios ya que al hacer la separación de

En la cromatografía se hizo la comparación de las cuatro placas:

Se cumplieron los objetivos de la práctica ya que se extrajo satisfactoriamente los

La cromatografía en capa fina al separar cada uno de los componentes permitió la

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