Bioseparaciones 1C 2016 Parte I Alumnos

Bioseparaciones
(Downstream Processing)
Bioseparaciones - introducción
Agente biológico Medio de cultivo
Obtención Formulación
Inóculo Esterilización UP
STREAM
Reactor biológico
Recuperación
Purificación
DOWN
Tratamiento de efluentes STREAM
Producto
• Los procesos de bioseparación, involucran la

recuperación y purificación de productos
provenientes del biorreactor
• Comprenden todos los tratamientos que

requiere el caldo de cultivo para la obtención
del producto en las condiciones de pureza y
actividad deseadas.
Particularidades:
Bajas concentraciones de producto
Gran número de impurezas
Termolabilidad de bioproductos
Sensibilidad al esfuerzo cortante de bioproductos
Inestabilidad de bioproductos en solventes orgánicos
Porcentaje de pureza
Ausencia de impurezas específicas
Estrictos requerimientos de calidad
Un proceso ideal de bioseparación debe combinar alta capacidad con alta

selectividad, y debe asegurar estabilidad del producto
Clasificación de los productos
Naturaleza Química Sustancias Simples : Alcoholes , ácidos orgánicos

Proteínas
Sustancias con actividad terapéutica ( antibióticos
, hormonas, etc.
Volumen de producción y concentración del producto en el cultivo
Commodities ( etanol , acido cítrico, etc.) t/año
kg/año
Agentes terapéuticos: hormonas, factores de coagulación
Aspectos Económicos
Categoría Proteína Producción Precio Aproximado

Anual (t) (£/t)
Nutricional Harina de soya > 2·107 130
Funcional Aislado de soya > 105 1500
Funcional Proteína de suero de leche 500 3000 - 6000
Reactivo Amilasas 600 15000-30000
Reactivo Renina 60 108
Salud Hormona de crecimiento 20 kg 1010
Salud Anticuerpo monoclonal 10 kg 3·109
En un proceso dado, la parte correspondiente a las bioseparaciones
puede representar hasta un 60% del costo total de producción
Parámetros en los procesos de separación
Pureza
Factor de purificación
Rendimiento
Rendimiento Global
Proteína de interés en cada paso

Rendimiento G =
Proteína de interés inicial
Etapa Proteínas Enzima Fracción de Factor de Rendimiento Rendimiento
totales totales enzima o purificación por paso Global
(mg) (mg) AE
Rompimiento
celular
1200 0,08
Precipitación 1800 0,06
Intercambio
0,240 0,048
iónico
Cromatografía
0,036 0,036
en gel
Etapas de un procesos de separación
REACTOR
SEPARACION SOLIDO-LIQUIDO
EXTRACELULAR INTRACELULAR
RUPTURA CELULAR
SEPARAR RESTOS CELULARES
CONCENTRACION DEL PRODUCTO
PURIFICACION
Filtración
SEPARACION SOLIDO-LIQUIDO Centrifugación
Micro filtración
Físicos ( mecánico y no mecánicos)

RUPTURA CELULAR Químicos
Enzimáticos
Filtración
SEPARAR RESTOS CELULARES Centrifugación
Micro filtración
Ultrafiltración
Precipitación
CONCENTRACION DEL PRODUCTO Extracción
( 60- 70 g/l proteínas ) Cromatografía exclusión molecular
PURIFICACION
Cromatografías
Estrategias para un diseño de sistema de separación
Conocer propiedades físico químicas básicas de los compuestos
involucrados
Definir parámetros de partida y pureza deseada
Traza diferentes esquemas y analizar el optimo

Reglas heurísticas
1) Separar primero los contaminantes que se encuentran en
mayor proporción.
2) Disminuir al mínimo el número de etapas de la secuencia de

purificación.
Reglas heurísticas
Reglas heurísticas
3) Elegir operaciones que exploten las mayores diferencias entre las
propiedades fisicoquímicas del producto y sus contaminantes
4) Elegir etapas de purificación basadas en diferentes propiedades
fisicoquímicas
Densidad Tamaño
Solubilidad
PM
Punto
isoeléctrico
Tamaño
PM
Punto
isoeléctrico
5- A igualdad de resolución elegir los métodos de menor costo.
6- Dejar los métodos más complejos para el final.

Separación sol-liq
Separación sol-liq:
• Filtración
• Microfiltración
• Centrifugación
Separación sol-liq
Factores de los que depende la selección:
• Tamaño de la partícula
• Densidad de la partícula
• Forma de la partícula (compresibilidad)
• Densidad del medio líquido
• Viscosidad del medio líquido
Separación sol-liq
Pretratamiento: mejora las propiedades del caldo

para facilitar la separación.
Concentración: permite una mejor separación de
sólidos, disminuyendo el volumen a manejar y
los costos globales.
Separación de sólidos: donde se obtiene la mayor
parte del sólido.
Postratamiento: lavado o secado de acuerdo con
los requerimientos del proceso.
Separación sol-liq
Pretratamiento de caldos
Térmico: el calentamiento reduce el volumen, la
viscosidad y rompe la estructura gelatinosa que
dificultan las operaciones posteriores.
Coagulación y floculación: mejora la sedimentación de
las partículas pequeñas por el agregado de agentes
químicos.
Uso de coadyuvante: actúan como absorbentes de las
partículas coloidales, mejorando el tamaño,
incompresibilidad y permeabilidad de los sólidos,
facilitando la filtración.
Bioseparaciones-Filtración
Filtro de marcos y placas:
Filtro Rotatorio
https://www.youtube.com/watch?v=29FGhBp
7juQ
Los filtros rotatorios se utilizan principalmente en los tratamientos primarios, o donde se

requiera remover sólidos grandes o gruesos, de manera rápida y a un bajo costo de
operación. Estos filtros son muy útiles en diferentes industrias como, azucarera, vinícola,
ganadera, alimenticia, minería, cementera, bebidas y plantas de tratamiento de aguas
residuales.
Ventajas:
• Modelo de cálculo conocido
• Facilidad de escalado
Limitaciones:
• Mantenimiento de la esterilidad
• Presencia de coadyuvante
Bioseparaciones-Centrifugación
Centrifugación:
Separación de células de caldos biológicos
Remoción de desechos celulares de caldos de células que

han sido sujetas a rompimiento
Separación de precipitados proteicos
Recuperación de productos insolubles

• Tipos de centrífuga según tamaño de

partículas
Ventajas:
• Modelo de cálculo conocido
Limitaciones:
• Dificultad de escalado (radio – rpm)
• Elevación de temperatura
• Formación de aerosoles
• Stress celular
Bioseparaciones-Filtración tangencial
• Separación por Membranas

• Separación por Membranas

Permiten concentrar insolubles
Los medios filtrantes o membranas son delgadas y microporosas
Los poros son pequeños, lo cual produce:

• Baja permeabilidad
• Alta resistencia
Requieren de una limpieza periódica.

Filtración por membrana – Filtración Tangencial
Filtración Tangencial
Bioseparaciones-Microfiltración
Micro y Ultrafiltración (MF-UF)
Se utilizan para:
• Concentrar
• Eliminar contaminantes de alta masa molecular
• Cambios de buffer
• Separar macromoléculas de pequeñas
Esquema de flujo para proceso de purificación.
Inicio
fin
La fuerza motriz es un gradiente de
concentración que hace que los solutos fluyan
a la solución de lavado
Ventajas:
• No requiere coadyuvantes
• Facilidad de escalado
Limitaciones:
• Elevada concentración de sólidos (célula)
• Sensibilidad de membrana (pH, DP,
sanitizantes, solventes)
• Ensuciamiento

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Bioseparaciones

• Los procesos de bioseparación, involucran la

• Comprenden todos los tratamientos que

Gran número de impurezas

Sensibilidad al esfuerzo cortante de bioproductos

Inestabilidad de bioproductos en solventes orgánicos

Ausencia de impurezas específicas

Estrictos requerimientos de calidad

Un proceso ideal de bioseparación debe combinar alta capacidad con alta

Naturaleza Química Sustancias Simples : Alcoholes , ácidos orgánicos

Volumen de producción y concentración del producto en el cultivo

Commodities ( etanol , acido cítrico, etc.) t/año

Categoría Proteína Producción Precio Aproximado

Proteína de interés en cada paso

SEPARAR RESTOS CELULARES

CONCENTRACION DEL PRODUCTO

Físicos ( mecánico y no mecánicos)

Definir parámetros de partida y pureza deseada

Traza diferentes esquemas y analizar el optimo

2) Disminuir al mínimo el número de etapas de la secuencia de

5- A igualdad de resolución elegir los métodos de menor costo.

6- Dejar los métodos más complejos para el final.

Factores de los que depende la selección:

Pretratamiento: mejora las propiedades del caldo

Los filtros rotatorios se utilizan principalmente en los tratamientos primarios, o donde se

Separación de células de caldos biológicos

Remoción de desechos celulares de caldos de células que

Separación de precipitados proteicos

Recuperación de productos insolubles

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• Separación por Membranas

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Los medios filtrantes o membranas son delgadas y microporosas

Los poros son pequeños, lo cual produce:

Requieren de una limpieza periódica.

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