Determinación cualitativa de carbohidratos

I._INTRODUCCION:

Los carbohidratos son polihidroxialdehidos y polihidroxicetonas derivados de

alcoholes. Se clasifican de acuerdo al número de carbonos que contiene la cadena
(triosas, tetrosas, pentosas, etc.) y de acuerdo al número de monómeros que posee la
molécula (monosacáridos, disacáridos, polisacáridos, etc.). Los carbohidratos
conocidos generalmente como azucares, son de los compuestos orgánicos más
abundantes en la naturaleza, la mayoría de ellos proceden de las plantas y solo unos
cuantos son de origen animal. Las propiedades químicas y físicas de los carbohidratos
varían de acuerdo a su composición, por lo que se han diseñado pruebas específicas
para su detención y cuantificación, además de reconocer si un compuesto pertenece a
la familia de los carbohidratos, es necesario diferenciar si se trata de un monosacárido
tipo aldosa o cetosa, si es fácilmente oxidable o no, es decir si es AZUCAR
REDUCTOR o no lo es, si es de cinco átomos de carbono( pentosa) o de seis átomos
de carbono(hexosa), si es disacárido o polisacárido.

Químicamente, los carbohidratos son derivados aldehídicos o cetónicos de alcoholes

superiores polivalentes o compuestos que por hidrólisis dan estos derivados. Se
clasifican en cuatro grandes grupos: Monosacáridos, disacáridos, oligosacáridos y
polisacáridos. Tiene diferentes propiedades físicas y químicas, y en base a ellas
existen métodos que nos permiten diferenciarlos, lo que constituye el objetivo de esta
práctica.
II._OBJETIVOS:

2.1. Reconocer los diferentes tipos de carbohidratos

2.2. Identificar la presencia de azúcares reductores provenientes de la hidrólisis

ácida de muestras de carbohidratos.

III. EQUIPOS MATERIALES Y REACTIVOS:

3.1 EQUIPOS:

3.1.1 Balanza

3.1.2 Baño maría

3.2 MATERIALES Y REACTIVO PROPORCIONADO POR EL ALUMNO:

3.2.1 Una papa

3.2.2 5 gr de almidón por grupo de trabajo

PROPORCIONADO POR EL LABORATORIO

3.2.3 Solución de glucosa 1 %

3.2.4 Solución de sacarosa 1 %

3.2.5 Solución de maltosa 1 %

3.2.6 Solución de almidón 1 %

3.2.7 Solución de fructosa %

3.2.8 Solución alcohólica de Alfa naftol 5 %

3.2.9 Ácido sulfúrico Q.P.

3.2.10 Reactivo de Selivanoff

3.2.11 Reactivo de Bradford

3.2.12 Ácido clorhídrico 1,5 %

3.2.13 Solución de Hidróxido de potasio 1 %

3.2.14 Solución de Fehling “A”

3.2.15 Solución de Fehling “B”

3.2.16 Tubos de ensayo

3.2.17 Pipetas de 1, 5 y 10 ml
IV.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

4.1 ACCION DE LOS ACIDOS OXIDANTES

4.1.1. REACCIÓN DE MOLISH.- Es una reacción general de los carbohidratos que

sirve para detectar su presencia en una sustancia problema. Una reacción negativa es
una buena evidencia de la ausencia de azúcares, mientras que una prueba positiva es
simplemente indicadora de la posibilidad de su existencia y requiere una mayor
investigación.

TUBOS (ml) I II III IV

Sol. Glucosa 1% 2 …. …. ….
Sol. Sacarosa 1% …. 2 ….
Sol. Maltosa 1% …. …. 2 ….
Sol. Almidón 1% …. …. …. 2
Sol. Alfa naftol 5% (gotas) 02 02 02 02
Mezclar bien agitando el tubo, agregar lentamente por las paredes
Ácido sulfúrico 2 2 2 2

Observar en la interface la aparición de un anillo rojo violeta oscuro, lo cual indica una
reacción positiva. Esta reacción es debida a la condensación de los furfurales
formados por la acción del ácido con el alfa naftol.

4.1.2. REACCION DE SELIVANOFF.- Esta es una reacción específica para azúcares con
grupo funcional cetónico.

TUBOS (ml) I II III

Sol. Fructuosa 1% 1 …. ….
Sol. Glucosa 1% …. 1 ….
Sol. Sacarosa 1% …. …. 1
Rx. Selivanoff 5 5 5

Mezclar bien y someter a baño maría hirviente. Observar lo que sucede en los tubos, a
intervalos de 3 minutos, durante 15 minutos. La reacción es positiva cuando se
observa una coloración rojo – cereza.

4.1.3. REACCION DE BARFOED.- Esta prueba se utilizar para diferenciar

monosacáridos de disacáridos.

TUBOS (ml) I II III IV

Sol. Glucosa 1% 1 …. …. ….
Sol. Fructosa 1% …. 1 …. ….
Sol. Sacarosa 1% …. …. 1 ….
Sol. Maltosa 1% …. …. …. 1
Rx Barfoed 5 5 5 5
Mezclar bien y someter a baño maría hirviente por espacio de 5 minutos, controlar el
tiempo en que aparecen las reacciones positivas (precipitado rojo naranja) en los
diferentes tubos. Interpretar los resultados.

4.1.4. ACCION DE LOS ALCALIS SOBRE LOS CARBOHIDRATOS

Las aldosas y cetosas, como los carbohidratos compuestos que contienen un grupo
azúcar libre, presentan el fenómeno de la tautomerización cuando son sometidos a la
acción de los álcalis dando origen a las formas enólicas que se comportan como
ácidos débiles y tiene la capacidad de unirse al álcali dando lugar a sales enólicas que
tienen propiedades reductoras.

De estas propiedades se valen los métodos para la identificación y cuantificación de

muchos azúcares (Reacción de Benedict, Fehling, etc.). En la práctica se hará una
hidrólisis ácida de un polisacárido y luego se procederá a identificar el azúcar reductor
correspondiente.

PROCEDIMIENTO:

.Triturar en un mortero una papa sin cáscara

.Agregar 5 – 10 ml de agua destilada, mezclar y decantar el sobrenadante en un vaso

de precipitación.

.En un tubo de ensayo medir 2 ml del sobrenadante anterior, y en otro tubo de ensayo
medir 2 ml de solución de almidón previamente preparado

.Añadir 2 ml de HCl 1,5 % a cada uno de los tubos

.Calentar los tubos de ensayo en baño maría hasta que hierva durante 15 minutos;
enfriar, adicionar 5 gotas de KOH 1%

.Añadir a los tubos anteriores 1 ml de las soluciones de Fehling “A” y “B”, luego
someterlos a ebullición entre 3 y 5 minutos. Observar los que sucede

V.- RESULTADOS Y DISCUSION:

5.1. Los resultados de cada prueba indicarlos en un cuadro como el que sigue:

REACCIÓN DE MOLISH:
TUBO I II III IV
TIEMPO DE X X X X
CALENTAMIENTO
COLORACION X X X X
REACCION DE SELIVANOFF:
TUBO I II III
TIEMPO DE 4 min 4 min 4 min
CALENTAMIENTO
COLORACION Cereza claro Cereza claro Rojo ladrillo
oscuro

REACCION DE BARFOED:
TUBO I II III IV
TIEMPO DE 7 min 5 min 5 min 5 min
CALENTAMIENTO
- En el fondo -En el fondo Turquesa Turquesa
rojo ladrillo el rojo ladrillo el
COLORACION (No sufrió (No sufrió
resto turquesa resto turquesa
cambios) cambios)

ACCION DE LOS ALCALIS SOBRE LOS CARBOHIDRATOS:

TUBO I II
TIEMPO DE 5 min 5 min
CALENTAMIENTO
COLORACION Rojo ladrillo Turquesa (no
sufrió cambios)
Según Muñoz (2006) dice que el almidón en contacto con el lugol toma un color azul-
violeta característico se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la
molécula de almidon.No es una verdadera reacción química, sino que se forma un
compuesto de inclusión que modifica las propiedades físicas de esta molécula,
apareciendo una coloración azul- violeta.

E l almidón se encuentra compuesto de amilosa y amilopectina.La amilosa es un

polisacárido helicoidal no ramificado con enlaces alfa 1-4. Por su Parte el lugol está
formado por yodo en cual queda impregnado en el centro de las hélices de la amilasa.
VI. CONCLUSIONES:

Las identificaciones de azucares reductores y no reductores se las comprobó por el

método de fehling A y B, en donde salieron reductores la sacarosa, glucosa y
lactosareductores porque tienen un grupo aldehído libre en su forma aciclica.Mientras
que el único no reductor es la fructuosa ya que este no poseen un carbono anomerico
libre.

Al momento de la hidrolisis del almidón que está formado por amilasa y amilopectina,
en la práctica formo un color morado por el lugol que contiene yodo este queda
adherido en las hélices de amilosa dando positivo.

A pesar de que la glucosa, fructuosa son de composiciones similares no muestran las

mismas reacciones como el color al rato de identificarlas.

Monosacáridos como la glucosa y disacáridos como la maltosa a excepción de la

sacarosa son azucares reductores.

En la reacción con el ácido sulfúrico los disacáridos y polisacáridos se hidrolizan

logrando la identificación de los monosacáridos que los componen.

Entonces la cetosa deshidratada reacciona con el resorcinol para producir un color

rojo. Es posible que las aldosas reaccionen produciendo un leve color rosa.

Se reconoció los diferentes tipos de carbohidratos.

VII. CUESTIONARIO:

7.1 ¿Cuál de las pruebas permite diferenciar aldosas de cetosas? Fundamente

su respuesta.

La prueba de Seliwanoff es una prueba química que se usa para distinguir entre
aldosas y cetosas. Los azúcares son distinguidos a través de su función
como cetona o aldehído. Si el azúcar contiene un grupo cetona, es una cetosa, y si
contienen un grupo aldehído, es una aldosa. Esta prueba está basada en el hecho de
que, al calentarlas, las cetosas son deshidratadas más rápido que las aldosas.

7.2 ¿El almidón ingerido por el ser humano sufre el mismo tipo de hidrólisis
ácida realizada en la práctica? ¿Cómo se hidroliza?

En la hidrólisis ácida se produce un rompimiento total de los enlaces que mantienen

unido a los monómeros del almidón y se forma glucosa, maltosa, isomaltosa. Cuando
el ser humano ingiere almidón nuestras enzimas especializadas rompen los enlaces
que permite obtener lo necesario para nuestro cuerpo cosa que los animales no
pueden hacer no cuentan con dichas enzimas.
7.3 Cuales son las unidades monoméricas de:

- Lactosa: formada por galactosa y glucosa.

- Sacarosa: formada por alfa - glucosa y beta - fructosa.

- Maltosa: dada por dos unidades de alfa glucosa.

- Celulosa: unidad monomerica es la glucosa.

7.4 Representa la unión de moléculas en la formación del almidón, glucógeno, y celulosa

El almidón, el glucógeno y la celulosa. Miles de unidades de glucosa se unen

para formar estos compuestos.

7.5 De los siguientes azúcares, ¿Cuál no es reductor? ¿Por qué?

- Glucosa - Sacarosa - Lactosa - Fructosa

.sacarosa: La razón por la que la sacarosa es una azúcar no reductora es que no

tiene ningún aldehído libre o un grupo acetona. Además, su carbono manométrico no
está libre y no se puede abrir fácilmente su estructura para reaccionar con otras
moléculas.
.fructosa: La fructosa reduce el reactivo de Tollens, aunque no contiene un grupo
aldehído. La reducción ocurre porque la fructosa se isomeriza con rapidez a una
aldosa en solución básica mediante una serie de desplazamientos tautoméricosceto-
enólicos.

VIII.- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

8.1. Bohinski, R. 1978. Bioquímica 2da edición. Fondo Educativo Latinoamericano S.A.

8.2. Morrison, R. y Boyd. 1985. Química orgánica. 2da edición. Fondo Educativo
Latinoamericano S.A. México.

8.3. Villavicencio, M. 1993. Bioquímica. A&B S.A. Editores, Lima – Perú.