D0075201 PDF

UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID
FACULTAD DE MEDICINA
HOSPITAL UNIVERSITARIO “DOCE DE OCTUBRE”
DEPARTAMENTO DE ANATOMíA PATOLOGICA
SECCION DE NEUROPATOLOGíA
Efectos del ácido vaiproico sobre el
metabolismo de la carnitina: Estudio
bioquímico y morfológico en la rata
Tesis Doctoral
Santiago Madero García
Director:
Prof. J. R. Ricoy Campo
Madrid, Septiembre 1992

D. JULIAN SANZ ESPONERA. CATEDRATICO DE ANATOMIA
PATOLOGICA Y DIRECTOR DEL DEPARTAMENTO DE ANATOMíA
PATOLOGICA DE LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSIDAD
COMPLUTENSE DE MADRID,
INFORMA Que el trabajo EFECTOS DEL ACIDO VALPROICO

SOBRE EL METABOLISMO DE LA CARNITINA. ESTUDIO BIOQUIMICO
Y MORFOLOGICO EN LA RATA ha sido realizado por D.
Santiago Madero García bajo la dirección del Prof. D.
José Ramón Ricov Campo.
Se trata de un trabajo cuyo planteamiento, desarrollo y
exposición de resultados y conclusiones tienen
características adecuadas, por lo Que me es grato emitir
este informe favorable como Director del Departamento
para Que sea defendido para optar al grado de Doctor.
Lo aue firmo en Madrid a 24 de Septiembre de 1992
Prof. Julián Sanz Esponera

D. JOSÉ RAMON RICOY CAMPO, PROFESOR TIULAR DE ANATOMíA
PATOLOGICA DE LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSIDAD
COMPLUTENSE DE MADRID
CERTIFICA Que D. Santiago Madero García ha realizado en
este Departamento, y bajo mi dirección, el trabajo
titulado Efectos del ácido valproico sobre el
metabolismo de la carnitina. Estudio bioquímico y
morfológico en la rata, y que dicho trabajo reúne las
condiciones necesarias para ser leido como Tesis Doctoral
con objeto de optar al grado de Doctor.
A petición del interesado, y para que conste donde
proceda, firmo el presente certificado en Madrid a die2
y seis de Septiembre de 1992.
Prof. José Ramón Ricoy Campo

i
INDICE
Página
Agradecimientos 1
Abreviaturas 3
Indice de figuras 5
INTRODUCCION 6
1. Carnitina 8
II. Acido vaiproico 10
HIPOTESIS Y OBJETIVOS 20
MATERIAL Y METODOS
1. Material 22
II. Métodos 23
TEA. Desarrollo de la fase

experimental 23
II.B. Metodología del estudio
bioquímico 25
11.0. Metodología del estudio
anatomopatológico 26
11.0.1. Microscopia 6ptica 26
11.0.2. Microscopia electrónica ... 29
11.0.3. Morfometria 30
II.D. Metodología del estudio

estadístico 32
ILE. Metodología del estudio
bibliográfico y
características de edición 35
u
RESULTADOS
1. Desarrollo de la fase experimental 37
II. Peso corporal 37
III. Resultados del estudio bioquímico 38
III.A. Plasma 39
III.B. Hígado 46
111.0. Músculo sóleo 54
IV. Resultados del estudio óptico 60
IV.A. Músculo esquelético 60
IV.B. Hígado 66
IV.C. Corazón 67
V. Resultados del estudio ultraestructural . 67
V.A. Area mitocondrial 67
V.B. Grosor de la banda 2 70
DISCUSION
1. Desarrollo de la fase experimental 72
II. Peso corporal 73
III. Estudio bioquímico 75
IV. Estudio con microscopIa óptica 82
V. Estudio con microscopia electrónica 87
CONCLUSIONES 90
FIGURAS 92
RESUMEN 101
iii
ANEXO 1
1. Características del músculo

esquelético en relación con
el metabolismo lipidico 105
II. Carnitina lío
II.A. Características generales 110
II.B. Metabolismo 111
11.0. Mecanismo de acción 119
II.D. Síndromes por deficiencia de

127
carnitina
II.E. Utilización clínica y
136
experimental
III. Acido vaiproico 153
III .A. Características generales 153
III.B. Mecanismo de acción 154
111.0. Farmacocinética 158
III.D. Utilización clínica y

experimental 169
III.E. Toxicidad y efectos secundarios -. 175
ANEXO 2
1. Técnicas bioquinicas 183
II. Técnicas histoquimicas 186
ANEXO 3
1. Datos del peso corporal 190
II. Datos bioquímicos 191
III. Datos de morfometria óptica 192
IV. Datos de morfometria ultraestructural. 193
BIBLIOGRAFíA 196
1
AGRADECIMIENTOS
En la realización de este trabajo ha participado, de uno

u otro modo, un buen número de personas cuya contribución
ha sido importante para la finalización del mismo.
El Prof. Dr. U. José Ramón Ricoy Campo, director de esta

Tesis, diseñó el estudio y me animó constantemente a
llevarlo a cabo durante su larga fase de realización.
El Prof. Dr. U. Julián Sanz Esponera informó

favorablemente para que fuera leido como Tesis Doctoral.
El Prof. Dr. U. Pedro García Barreno facilitó la

utilización del animalario donde se llevó a cabo la tase
experimental.
El Prof. Dr. O. Francisco J. Martinez Tello, Jete del

Opto. de Anatomía Patológica del Hospital Doce de
Octubre, y los demás compañeros del Upto. aportaron sus
ideas y su disponibilidad.
La Dra. Oña. Ana Cabello Fernández, Jefe de la Sección de

Neuropatología del Hospital Doce de Octubre, facilitó la
utilización de todo el material necesario para el estudio
de los aspectos óptico, ultraestructural y morfométrico
de este trabajo. Aportó también ideas sobre aspectos
metodológicos basadas en su dilatada experiencia en el
estudio anatomopatológico del sistema nervioso
periférico.
2
Dña. María Jesús Torres, Don Salvador Romero y Uña. María

Teresa Martinez, ATS de la Sección de Neuropatología,
realizaron toda la parte técnica del estudio
anatomopatológico.
El Dr. D. Juan Manuel Oñate Cuchet participó activamente

en el desarrollo de la fase experimental.
El Dr. U. Julio Ferrero Arias facilitó la utilización del

programa estadístico SPSS y contribuyó de forma
inestimable al análisis estadístico de los resultados.
El Dr. D. Joaquín Arenas Barbero permitió la utilización

del material necesario para el estudio de los aspectos
bioquímicos de este trabajo. Su gran experiencia fué
esencial para el análisis de los resultados bioquímicos.
El Fondo de Investigaciones Sanitarias de la Seguridad

Social ayudó económicamente de forma apreciable.
Finalmente, Maril, Gon, Acho y Popi aportaron tiempo,

amistad y cariño, y su contribución para la realización
de esta Tesis tué decisiva.
A todos ellos, mi más sincero agradecimiento.

3
ABREVIATURAS
AC Acil carnitina
AC/CL Cociente acil carnitina/carnitina
libre
AMP Adenosin monotosf ato
ANOVA Análisis de la varianza
ATP Adenosin tritosfato
ATPasa Adenosintritosfatasa
BHE Barrera hematoencefálica
CAT Carnitina acetil transterasa
CD-ROM Compact Disk—Read Only Memory
CK-MB Creatinquinasa MB
CL Carnitina libre
CoA Coenzima A
CPT Carnitina palmitoil transferasa
CTA Carnitina acetil transterasa
CTOT Carnitina total
DE Desviación estándar
EEM Error estándar de la media
ELD Músculo extensor largo de los dedos
FFA Acidos grasos libres
CABA Acido T-aminobutirico
HDL Lipoproteina de alta densidad
HE Hematoxilina y eosina
IC 95% Intervalo de confianza de la media
del 95%
IV Intravenosa
LCAC Aci carnitina de cadena larga
LCFA Acido graso de cadena larga
LCR Liquido cefalorraquideo
MPTP Metil—tenil-tetrahidropiridina
NADH Nicotinamida adenina dinucleótido
4
NCP Proteína no colágena

PAZ Acido peryódico de Schitf
PC Ordenador personal
SCAC Acil carnitina de cadena corta
SDC Síndrome por deficiencia en
carnitina
SDH Succinico deshidrogenasa
SNC Sistema nervioso central
SPSS Paquete estadístico para ciencias
sociales
VPA Acido valproico
VPS Valproato sódico
5
INDICE DE FIGURAS
Página
Figura 1.- Peso corporal al inicio y al final

de la fase experimental 93
Figura 2.- Niveles medios de CL, SCAC y LCAC

en plasma 94
Figura 3.— Niveles medios de CL, SCAC y LCAC

en hígado 95
Figura 4.— Niveles medios de CL, SCAC y LCAC

en músculo sóleo 96
Figura 5.— Diámetro medio de las fibras tipo 1

y tipo II en el músculo sóleo 97
Figura 6.— Diámetro medio de las fibras tipo 1

y tipo II en el músculo ELD 98
Figura 7.— Densidad de volumen mitocondrial en

los músculos sóleo y ELD 99
Figura 8.— Grosor de la banda Z en los músculos

sóleo y ELD .100
Introducción 6
INTRODUCCION
La carnitina es un cofactor esencial en el metabolismo de

los ácidos grasos cuya acción a distintos niveles permite
la entrada de ácidos grasos de cadena larga al interior
de la mitocondria así como el mantenimiento de un
cociente CoA/acil—CoA intramitocondrial adecuado (Bremer
J, 1983), de manera que dos de los trastornos clínicos
producidos por la deficiencia de carnitina de cualquier
causa son la miopatia lipidica y la hepatotoxicidad en
torna de crisis de insuficiencia hepática aguda de tipo
Reye (Engel AG, 1986b; Coulter DL, 1991)
El mecanismo patogénico más probable en la miopatia

lipidica secundaria a deficiencia de carnitina es la
acumulación de lípidos en el sarcoplasma debido a la
imposibilidad que tienen los LCFA para atravesar la
membrana mitocondrial e introducirse en la cascada de la
B—oxidación de los ácidos grasos, mientras que en lo
relativo a los cuadros agudos de hepatotoxicidad el
mecanismo patogénico posible es la acumulación
intramitocondrial de grupos acil—CoA de carácter tóxico
para cadena respiratoria y otros procesos mitocondriales
(Engel AG, 198Gb>.
Por otra parte, la administración de carnitina exógena a

los pacientes con deficiencia de carnitina es capaz de
revertir estos efectos debido a que al reestablecer los
depósitos intramitocondriales de carnitina puede seguir
ejerciendo su acción de tamponamiento de los grupos acil—
CoA y puede seguir introduciendo los LOFA hacia el
interior de la mitocondria <Ohtani Y et al, 1982).
Introducción 7
El ácido valproico (VPA) es un ácido graso de cadena

corta muy utilizado en clinica como fármaco
antiepiléptico, y uno de cuyos efectos secundarios es la
producción de deficiencia plasmática de carnitina con
carácter dependiente de la dosis (Ohtani Y et al, 1982).
El mecanismo bioquímico más probable para explicar el
efecto del VPA sobre el metabolismo de la carnitina es la
producción excesiva de grupos acil—CoA de cadena corta
intramitocondriales, principalmente acetil—CoA y
valproil-CoA, que son eliminados de la mitocondria por
acción de la carnitina, produciendose secundariamente una
deficiencia de la misma a niveles plasmático y tisular
(Bohan TP et al, 1984).
En clínica humana, el VPA ha inducido la aparición de

crisis de insuficiencia hepática aguda de tipo Reye
(Sackellares JC et al, 1979; Sugimoto St’ et al, 1983;
Coulter DL, 1984; Triggs WJ et al, 1990) y de cuadros de
miopatia lipidica (Shapira Y et al, 1991), efectos que
han sido atribuidos a deficiencia de carnitina en plasma
y que frecuentemente han revertido o mejorado tras la
administración de carnitina exógena.
En el plano experimental, en los escasos estudios

llevados a cabo a este respecto, el VPA ha dado lugar a
alteraciones en el metabolismo de la carnitina tanto en
plasma como en hígado, músculo esqulético y otros
tejidos, aunque con resultados no siempre coincidentes.
Pese a que, a nivel plasmático parece bien establecida la

relación entre administración de VPA y aparición de
deficiencia en carnitina, son muy escasos los datos que
existen a este respecto en otros tejidos, y prácticamente
inexistentes los relativos a la traducción morfológica de
Introducción E
estos efectos bioquímicos.
1. Carnitina y síndromes por deficiencia

de carnitina
El ácido 3—hidroxi—4-N-trimetil—aminobutirico (3—

hidroxibutirobetaina 1—carnitina) es un cotactor
esencial en el metabolismo de los ácidos grasos, cuyas
dos principales funciones son la transferencia de ácidos
grasos de cadena larga a través de la membrana interna
mitocondrial y la modulación del cociente CoA/acil—CoA
intramitocondrial (Bremer J, 1983). Posteriormente, se ha
señalado que otra importante acción de la carnitina es la
eliminación de residuos acil de cadena corta producidos
en la mitocondria y de origen exógeno como los ácidos
benzáico y vaiproico (Siliprandi N et al, 1990>.
En clínica se reconocen dos formas de síndrome por

deficiencia en carnitina (SDC>, la forma miopática y la
sistémica (Engel AG, 1986b).
La forma miopática fué identificada por primera vez por

Engel y Angelini en 1973, en una paciente que presentaba
debilidad muscular, deficiencia de carnitina en músculo
esquelético y miopatia lipidica (Engel AG et al, 1973),
que constituyen precisamente las características
principales del SDC miopático. Por otra parte, la
deficiencia de carnitina constituye la causa más
frecuente, aunque no la única, de miopatia lipídica
(Brownell AKW et al, 1978), cuadro que se caracteriza a
nivel anatomopatológico por la acumulación de lípido
(principalmente triglicéridos) en el músculo esquelético
Introducción 9
en forma de corpúsculos no revestidos de membrana

situados en filas paralelas entre las miofibrillas o en
la zona subsarcolemal, acompañado frecuentemente por
alteraciones mitocondriales consistentes en incremento en
el número o tamaño de las mitocondrias, presencia de
inclusiones cristalinas o paracristalinas
intramitocondriales y borramiento de las crestas (Engel
AG, 1986b)
El SDC sistémico fué identificado en primer lugar por

Karpati y colaboradores en 1915 (Rarpati G et al, 1915).
Esta forma de SUC cursa con episodios de insuficiencia
hepática aguda de tipo Reye con estupor progresivo, coma,
hipoglucemia e hiperamonieniia. Los pacientes presentan
también debilidad muscular, hipocarnitinemia, deficiencia
de carnitina en músculo y otros tejidos, y miopatia
lipidica. A nivel morfológico, se observa la acumulación
de lípido neutro en diversos tejidos, principalmente
hígado, músculo esquelético y miocardio, así como un
aumento de tamaño de las mitocondrias en asociación con
el incremento del número y tamaño de los glóbulos
lipidicos en varios tejidos como hígado y SNC (Kimura et
al, 1990).
La mayor parte de los SDC, tanto miopáticos como

sistémicos, son secundarios a defectos genéticos del
metabolismo intermedio o bién a otros procesos que pueden
cursar con deficiencia nutricional de carnitina,
disminución en su biosíntesis, alteraciones en el control
renal de la carnitina o trastornos en el transporte
activo de la carnitina en células y tejidos; no obstante,
el mecanismo patogénico más frecuente en los SUC es la
eliminación excesiva de ésteres de carnitina por la
acumulación intramitocondrial de acil—CoA de diferente
Introducción 10
origen, de manera que la formación excesiva de

acilcarnitinas y su eliminación por orina provocarían la
deficiencia de carnitina (Engel AG, 1986b).
Con respecto al tratamiento de los SUC, la mayor parte de

los pacientes ha respondido en mayor o menor medida a la
administración de carnitina exógena (Karpati O et al,
1975; Chapoy PP et al, 1980; Prockop LD et al, 1983;
DiDonato 5 et al, 1984), aunque en un cierto número de
casos no se ha obtenido respuesta (Carroll JE et al,
1980) con este tratamiento. En términos generales, la
dosis de mantenimiento ha oscilado entre 2 y 4 g/dia, por
vía intramuscular.
II. El ácido valproico y sus efectos sobre

el. metabolismo de la carnitina
El ácido 2—propilpentanoico (ácido valproico, VPA) es un

ácido graso de cadena corta (isómero del ácido octanoico)
que está comercializado en forma de sal sódica y que se
utiliza en clínica fundamentalmente como fármaco
antiepiléptico.
Constituye uno de los agentes anticomiciales de primera

linea para crisis generalizadas y parciales, y en 1988 se
calculaba que lo estaban tomando más de 1.000.000 de
pacientes en todo el mundo (Binek J et al, 1991); se
administra por vía oral a dosis que oscilan entre 15 y 30
mg/kg para alcanzar niveles plasmáticos terapéuticos.
Su metabolismo se realiza en el hígado mediante

Introducción 11
glucuronidación, B—oxidación mitocondrial y ~-oxidación

microsomal, principalmente a través de la primera vía
para dosis terapéuticas (Chapman A et al, 1982).
En lo relativo a la 13—oxidación, se dirige mediante

difusión desde el citosol hasta la matriz mitocondrial,
donde es activado por la acil—CoA sintetasa
correspondiente para formar 2—propilpentanoil--CoA
(valproil-CoA) que se introduce en la secuencia oxidativa
(Ontko JA, 1986>.
A nivel clínico, su principal efecto secundario es la

hepatotoxicidad, que se manifiesta fundamentalmente en
forma de elevaciones asintomáticas de las transaminasas
y en forma de cuadros de insuficiencia hepática aguda de
tipo Reye con estupor, coma e hiperamoniemia, cuya
incidencia se ha estimado en aproximadamente 1 caso por
cada 7.000 pacientes que reciben VPA (Powell—Jackson PR
et al, 1984).
Los cuadros de tipo Reye asociados al tratamiento con VPA

fueron observados inicialmente en los años 1979 y 1980
(Sackellares JC et al, 1979; Geber N et al, 1979; Young
RSK et al, 1980; Coulter DL et al, 1980).
En 1981, Coulter y Alíen observaron que los pacientes

tratados con VPA podían presentar hiperamoniemia incluso
sin signos bioquímicos de disfunción hepática,
atribuyendo esta alteración a un incremento en los
niveles de propionato con inhibición secundaria de la
enzima intramitocondrial del ciclo de la urea carbamil—
fosfato sintetasa (Coulter DL et al, 1981).
Introducción 12
No obstante, Coude y colaboradores, en un estudio

experimental efectuado ese mismo año, administraron VPA
a ratas y observaron hiperamoniemia con niveles normales
de carbainil-fosf ato sintetasa, ornitina transcarbamilasa
y N—acetilglutamato sintetasa, proponiendo que la causa
de la hiperamoniemia podía ser una reducción de N—acetil
glutamato en el hígado con la consiguiente disminución de
la citrulinogénesis (Coude FX et al, 1981).
En 1982, Ohtani y colaboradores realizaron por primera

vez la medición de los niveles de carnitina en plasma en
relación con los niveles de amoniaco en pacientes
tratados con VPA. Este grupo de investigación observó que
las concentraciones plasmáticas de carnitina libre y
total aparecían significativamente reducidas en pacientes
tratados con VPA, en comparación con las observadas en
pacientes epilépticos tratados con otras medicaciones
anticomiciales y también en comparación con las
concentraciones del grupo control, de manera que en estos
dos últimos grupos las concentraciones de carnitina
fueron practicamente similares. No obstante, el cociente
carnitina libre/carnitina total no presentó diferencias
en los tres grupos de estudio.
Se observó también una correlación inversa significativa

entre la concentración plasmática de carnitina y la dosis
de VPA. Por otra parte, las concentraciones séricas de
amoniaco en los pacientes tratados con VRA fueron
significativamente mayores que en los pacientes de los
otros dos grupos. Estas concentraciones se
correlacionaron con la dosis de VPA y presentaron una
relación inversa significativa con las concentraciones
plasmáticas de carnitina.
Introducción 13
Tras la administración oral de carnitina a los pacientes

tratados con VPA se normalizaron los niveles sanguíneos
de amoniaco y las concentraciones plasmáticas de
carnitina.
Los autores de este estudio atribuyeron la
hipocarnitinemia a un efecto adverso dosis—dependiente
del VPA, aunque señalaron que “... en el momento presente
no existen datos para explicar la deficiencia de
carnitina en los pacientes tratados con VPA.” (Ohtani Y
et al, 1982).
También en 1982 aparecen las primeras referencias que

relacionan al VPA con la aparición de cuadros de tipo
Reye y con la presencia de hipocarnitinemia (Bóhíes H et
al, 1982>.
Stumpf y colaboradores señalaron en 1983 que la toxicidad

del VPA puede ser debida a la acumulación de metabolitos
acil—CoA que inhiben el ciclo del citrato y otros
sistemas enzimáticos. La carnitina podría disminuir este
efecto al transformar los acil—CoA tóxicos en compuestos
acil—carnitina de carácter menos tóxico, sugiriendo la
formación de valproil-carnitina (Stumpf DA et al, 1983).
Esta hipótesis se vió corroborada posteriormente por
Veitch y colaboradores que incubaron mitocondrias de
hígado de rata con VPA concluyendo que la inhibición que
produce este ácido graso de cadena ramificada sobre la 13—
oxidación nitocondrial puede ser debida al secuestro de
CoA en forma de valproil-CoA (Veitch 1< et al, 1990).
En 1983, Thurston y colaboradores señalaron que la

administración crónica de valproato disminuye la
cetogénesis en ayunas en los niños, proponiendo que la
toxicidad hepática del VPA está en relación con la
Introducción 14
hipocetonemia y no con los niveles de carnitina (Thurston

JH et al, 1983). No obstante, DiDonato y colaboradores
ya habían observado en 1980 la importancia de los niveles
hepáticos de carnitina para la activación de la
cetogénesis (DiDonato 5 et al, 1980).
David L. Coulter propuso en 1984 que el mecanismo de la

hepatotoxicidad del VPA es la deficiencia de carnitina en
plasma e hígado a que da lugar, con la consiguiente
alteración en el metabolismo de los SCFA—LCFA y su
relación con los cuadros clinicos de tipo Peye <Coulter
DL, 1984). Murphy ¿TV y colaboradores apoyaron esta
posibilidad tras el estudio de las concentraciones
plasmáticas de carnitina libre en un grupo de 13 niños
tratados con VPA (Murphy ¿TV et al, 1985).
En este mismo año de 1984, Bohan y colaboradores de la

Duke University y el NIH estadounidenses identificaron un
nuevo metabolito del ácido valproico: la valproil—
carnitina (Bohan TP et al, 1984). La detección de
valproil—carnitina en la orina de los pacientes tratados
con VrA sugierió a estos investigadores que el ácido
valproico, un isómero del ácido octanoico, podía
constituir el substrato para alguna de las carnitina
aciltransferasas y que la conjugación y eliminación de
valproil—carnitina podría dar lugar a deficiencia de
carnitina en pacientes que reciben VPA de forma crónica.
La técnica utilizada para la caracterización de valproil—
carnitina fué la combinación de fast atom bombardment—
mass spectrometry con thermospray high penformance liquid
chromatography-mass spectrometry (Millington DS et al,
1985)
Introducción 15
El descubrimiento de la valproil—carnitina tiene una gran

importancia debido a que, con excepción del glucurónido,
constituye el único conjugado conocido del ácido
valproico. Además, constituye la primera forma conocida
de conjugación de la carnitina con un fármaco.
Probablemente, la valproil-carnitina se sintetiza por la

acción de una o más de las carnitina—aciltransferasas
(muy posiblemente la carnitina—octanoiltransferasa) sobre
el metabolito intermedio activado valproil—CoA, en base
fundamentalmente a la similitud estructural del ácido
valproico con otros ácidos de cadena ramificada que
forman acilcarnitinas (Millington DS et al, 1985).
No obstante, estos investigadores contemplaron también la

posibilidad de que la hipocarnitinemia fuera debida a una
eliminación excesiva de acetil—carnitina, la
acilcarnitina predominante en la orina de sus pacientes,
dado que la valproil-carnitina constituía menos del 10%
de la acilcarnitina (Bohan TP et al, 1984).
En los últimos años se han realizado varios ensayos

clínicos y experimentales en relación con los efectos del
VPA sobre el metabolismo de la carnitina y la posible
reversión de los mismos por la administración de
carnitina exógena.
En clínica humana se ha estudiado casi exclusivamente la

respuesta de los niveles plasmáticos de CL y AC frente a
la administración de VPA a pacientes epilépticos, de
manera que en casi todas las series se ha observado una
disminución en la concentración plasmática de CL y un
incremento en la de AC (Laub N et al, 1986; Triggs WJ et
al, 1990; Melegh B et al, 1990; Beghi E et al, 1990;
Introducción 16
Matsumoto 1< et al, 1990; Opala G et al, 1991; Riva R et

al, 1991; Shapira Y et al, 1991).
Unicamente en el último de los estudios citados se hace

referencia a la respuesta de los niveles tisulares de CL
frente a la administración de VPA, concretamente en
músculo esquelético donde los autores observan una
disminución de la concentración de carnitina libre en 6
de un grupo de 7 pacientes tratados con VPA (Shapira Y et
al, 1991). Es también esta serie la única en la que se ha
estudiado anatomopatológicamente el músculo esquelético
de pacientes en tratamiento con VPA, demostrándose la
presencia de las características ultraestructurales de la
miopatia lipidica en 3 de Los pacientes (Ehapira Y et al,
1991)
En general, los pacientes tratados con VPA no presentan

sintomatología clínica por la deficiencia de carnitina,
aunque en algunos casos la hipocarnitinemia ha dado lugar
crisis de tipo Reye indistinguibles de las que se
observan en los síndromes por deficiencia sistémica de
carnitina (Coulter DL, 1991), y en otros casos los
pacientes han presentado cuadros de debilidad muscular
e hipotonia generalizada con las alteraciones
anatomopatológicas de la miopatia lipidica (Shapira Y et
al, 1991).
La administración de carnitina exógena a pacientes

tratados con VPA ha permitido corregir en la mayor parte
de los casos las alteraciones plasmáticas en los niveles
de CL yAC (Ohtani Y et al, 1982; Melegh B et al, 1990).
Desde el punto de vista experimental, sólaznente han

planteado el problema de los efectos del VPA sobre el
Introducción 17
metabolismo de la carnitina los grupos de investigación

de Sugimoto en la Kansai Medical University de Osaka
(Sugimoto T et al, 1987a; Sugimoto T et al, 1987b;
Nishida N et al, 1987; Murakami K et al, 1990), y de
Rodriguez Segade de la Universidad de Santiago de
Compostela (Rozas 1 et al, 1990; Camiña MF et al, 1991a;
Camiña MF et al, 1991b).
En la rata Wistar, el VPA ha producido una disminución

significativa de CL con incremento de AC en plasma y
músculo esquelético, aunque no en hígado (Sugimoto T et
al, 1987a; Sugimoto T et al, 1987b; Nishida N et al,
1987; Murakami 1< et al, 1990). En el ratón Swiss albino,
se ha observado que el VPA disminuye de forma no
significativa la concentración de CL en plasma, hígado,
riñón y corazón cuando se administra en forma de dosis
única (Rozas 1 et al, 1990; Camiña MF et al, lSYla>,
mientras que sólo disminuye de forma significativa los
niveles de CL plasmáticos cuando se administra de forma
más prolongada (Camifia MF et al, 1991b).
Con respecto a las posibles alteraciones morfológicas

inducidas en los tejidos por la administración de VPA, la
información que existe en la literatura médica es muy
escasa puesto que únicamente en dos de los modelos
experimentales citados se ha estudiado desde el punto de
vista anatomopatológico el higado de ratas Wistar
tratadas con VPA , observándose en ambos un incremento en
la superficie de las mitocondrias en este tejido
(Sugimoto T et al, 1987a; Murakami K et al, 1990). No
existe en el momento actual ningún estudio experimental
en el que se hayan estudiado de forma sistemática las
características morfológicas del músculo esquelético,
hígado y corazón en pacientes o animales de
Introducción 18
experimentación tratados con VPA.
La modificación de los efectos que produce el VPA sobre

el metabolismo de la carnitina por la administración de
carnitina exógena a animales de experimentación sólo ha
sido estudiada por el equipo de Tateo Sugimoto, que ha
observado una reversión de los mismos (Nishida N et al,
1987; Sugimoto T et al, 1987b).
Como resumen de lo expuesto se puede destacar que:
1. En la actualidad se acepta que el ácido valproico

produce alteraciones en el metabolismo de la carnitina,
con aparición de deficiencia de carnitina en plasma en la
mayor parte de los pacientes y animales de
experimentación que lo reciben; que este efecto puede
tener un carácter dependiente de la dosis de VPA
utilizada, y que la administración de carnitina exógena
puede revertir los efectos del VPA sobre el metabolismo
de la carnitina.
2. Son muy escasamente conocidos los efectos que puede

producir el VPA sobre el metabolismo de la carnitina a
nivel tisular, así como las posibles modificaciones que
en los mismos podría dar lugar la administración de
carnítina exógena.
3. Son muy escasos los estudios anatomopatológicos

efectuados sobre las alteraciones que la deficiencia de
carnitina secundaria a la administración de VPA puede
producir sobre los tejidos de pacientes o
animales de experimentación tratados con este fármaco
antiepiléptico, así como las posibles modificaciones que
Introducción 19
en las mismas podría dar lugar la administración de

carnitina exógena.
Por todo ello, hemos diseñado un modelo experimental

sobre rata Wistar para conocer los efectos del VrA sobre
el metabolismo de la carnitina y sus repercusiones sobre
los niveles plasmáticos, hepáticos y musculares de CL y
AC; para estudiar la posible traducción morfológica de
estos efectos del VPA, y para comprobar las
modificaciones que introduce en los mismos la
Hipótesis y Objetivos 20
NIPOTESIS Y OBJETIVOS
La hipótesis planteada en este trabajo es la de que si el

ácido vaiproico produce deficiencia de carnitina, y la
deficiencia de carnitina produce acumulación de lípido en
los tejidos, entonces la administración de carnitina
exógena puede revertir el ambos efectos, directo e
indirecto, del ácido vaiproico.
El objetivo general del presente trabajo es el de

comprobar en un modelo experimental las alteraciones que
puede producir el ácido valproico sobre el metabolismo de
la carnitina, la posible traducción morfológica de estas
alteraciones, y la posible reversión de las mismas por la
Este objetivo general se plasma en los siguientes

objetivos concretos:
1. Conocer el efecto producido por el ácido valproico

sobre el peso y la evolución de los animales tratados con
el mismo.
2. Conocer el efecto producido por el ácido valproico

sobre los niveles plasmáticos, musculares y hepáticos de
carnitina libre, acilcarnitina de cadenas larga y corta,
y carnitina total, y sobre el cociente
acilcarnitina/carnitina libre en los tres compartimentos.
3. Conocer el efecto producido por el VPA sobre las

características generales, diámetro de las fibras y
densidad de volumen mitocondrial en el músculo
esquelético, así como la posible aparición de depósito
lipidico en músculo esquelético, hígado y corazón.
Hipótesis y Objetivos 21
4. Conocer si los efectos que puede producir el ácido

valproico sobre el metabolismo de la carnitina tienen
carácter dependiente de la dosis.
5. Conocer las modificaciones que la administración

de carnitina exógena puede producir sobre los efectos que
el ácido valproico puede inducir en el metabolismo de la
carnitina.
Material y Métodos 22
MAflRIAL Y METODOS
1. Material
Se utilizaron 30 ratas Wistar hembra de una cepa

procedente de Panlab SL (Madrid), criadas en el
Departamento de Medicina Experimental del Hospital
“Gregorio Marañón” de Madrid, libres de ecto y
endoparásitos, micoplasmas y pasteurella, con un peso
inicial comprendido entre 160 g y 180 q, y con una edad
comprendida entre 49 dias y 52 dias.
Durante el periodo de experimentación, los animales

permanecieron en cubetas de Makrolon de 40 X 25 X 15 cm,
sobre una base de serrín, en grupos de cinco, con
alimentación y bebida ad libitum a base de pienso
comercial para animales de laboratorio (LetikaR) y agua
corriente no tratada. Las cubetas se mantuvieron en una
habitación con temperatura y humedad relativa constantes
de 22 tC y 55+10% respectivamente, y con un fotoperiodo
de 12 horas (7,30 AM a 7,30 PM).
Las líneas de actuación que se han seguido en cuanto a

habitáculos y accesorios de los animales, alimentación,
manejo, vigilancia, control sanitario, saneamiento
ambiental y comportamiento ético con los animales se han
ajustado a las normas recomendadas por la ICLAS
(International Council for Laboratory Animal Science) y
por la Asamblea Parlamentaria del Consejo de Europa sobre
“La utilización de los animales vivos con fines
experimentales o industriales” celebrada en Septiembre
de 1982 en Estrasburgo (Francia> (Saiz Moreno L et al,
1983)
II. Métodos
II.A. Desarrollo de la fase exnerimental
La fase experimental se desarrolló durante 90 dias, desde

el 17 de Febrero de 1991 hasta el 17 de Abril de 1991,
periodo durante el cual los animales recibieron la
medicación diariamente en una sola toma (a las 8 AM) y en
intervalos de 6 dias, con un dia de descanso al final de
cada uno de estos intervalos. Es decir, no recibieron la
medicación los dias 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63,
70, 77, y 84 del periodo de experimentación, por lo que
en conjunto fueron tratadas farmacologicamente durante un
total acumulado de 78 dias.
La carnitina se administró mediante inyección

intramuscular en la masa glútea de la extremidad
posterior derecha. La solución administrada de esta forma
se preparaba inmediatamente antes de la inyección
disolviendo en 45 ml de agua destilada los 5 ml de una
ampolla de carnicorR <Sigma—Tau España) que contienen 1
g de 1—carnitina, de forma que cada ml de la solución
contenía 20 mg de 1—carnitina.
El ácido valproico se administró por via oral utilizando

una cánula de 0.2 cm de calibre y 5.5 cm de longitud que
se introduce fácilmente a través de la cavidad oral y el
esófago hasta el estómago de la rata dado que este animal
carece de reflejo del vómito de origen faríngeo. La
solución se preparaba inmediatamente antes de su
administración disolviendo en 47,5 ml de agua destilada
2.5 ml de DepakineR (Labaz, España) que contiene 20 g/100
ml de vaiproato sódico, de forma que cada ml de la
solución resultante contenía 10 mg de valproato sódico.
Las ratas fueron distribuidas de forma aleatoria y

equilibrada según los pesos en 6 grupos de 5 animales
cada uno, y las características de tratamiento y
dosificación de cada grupo fueron las siguientes:
Grupo 1: Considerado como grupo control, no recibió

ninguna de las dos medicaciones.
Grupo 2: Recibió 15 mg/dia de valproato sádico (1,5

R
mí/dia de la solución de Depakine) por via oral.
Grupo 3: Recibió 25 mg/dia de valproato sádico (2,5

mí/dia de la solución de Depakine R ).
Grupo 4: Recibió 15 mg/dia de valproato sódico por

via oral más 10 mg/dia de carnitina (0,5 mí/dia de
la solución de CarnicorR> por via intramuscular.
Grupo 5: Recibió 25 mg/dia de valproato sódico por

via oral más 10 mg/dia de carnitina por via
intramuscular.
Grupo 6: Recibió 10 mg/dia de carnitina por via

intramuscular.
Se efectuó el pesaje de los animales al inicio de la fase

experimental, a los cinco dias de iniciada la misma, y
posteriormente cada siete dias (dias 17—2, 22—2, 29—2,
07—3, 14—3, 21—3, 28—3, 11—4, 18—4, 25—4 y 02—5 de 1991).
El peso medio de las 30 ratas al inicio de la fase
experimental fué de 171,7 g, lo que hace que en este
momento la dosis de VPA de 15 mg/día correspondiera a
87,36 mg/kg/día y la de 25 mg/día a 145,6 mg/kg/día,
mientras que al final de la fase experimental (con un
peso medio de las 30 ratas de 266 g) estas

correspondencias fueron de 56,4 mg/kg/día y 94,0
mg/kg/día, respectivamente.
La carnitina se administró a una dosis de 10 mg/día, que

corresponden a 58,24 mg/kg/día al inicio de la fase
experimental, y a 37,6 mg/kg/día al final de la fase
experimental.
Durante los 90 dias de la fase de experimentación no se

detectaron incidencias ni se produjo el fallecimiento de
animales.
El dia 90 del periodo experimental las ratas fueron

sacrificadas mediante fractura cervical previa anestesia
con tiopental sódico (Pentotal sódico, Laboratorios
Abbott) por via intraperitoneal a una dosis de 3 mg/kg.
De forma inmediata, se realizó la disección de la
extremidad posterior izquierda para aislar y extraer los
músculos sóleo y extensor largo de los dedos (ELD). De
forma practicamente simultánea se realizó la autopsia
reglada a cada animal, incluyendo el sistema nervioso
central.
Durante la autopsia, y después de exponer el contenido de

la cavidad torácica tras incision cutánea y sección
costal, se efectuó la punción del ventrículo izquierdo
con extracción de un volumen de sangre intracardiaca que
osciló entre 1,5 y 3,2 ml.
II.B. Metodolocia del estudio bioquímico
El estudio bioquímico se efectuó sobre muestras de

músculo sóleo, higado y plasma. El músculo y el hígado se

congelaron directamente en nitrógeno liquido tras el
sacrificio de las ratas, y el plasma se obtuvo mediante
centrifugación de la sangre intracardiaca.
Se realizó la determinación de los niveles de carnitina

libre (CL), ésteres acil-carnitina de corta cadena (SCAC)
y ésteres acil—carnitina de larga cadena (LCAC) en
homogenados de músculo sóleo, plasma e hígado de cada
rata, siguiendo básicamente el método radioenzimático
descrito por DiDonato y colaboradores (DiDonato S et al,
1984)
II.C. Netodoloctia del estudio anatomonatolóctico
II.C.l. Microscopia óptica
En cada rata, se efectuó el estudio microscópico óptico

de muestras de los músculos sóleo y ELD, hígado y
corazon.
Todas las preparaciones para microscopia óptica fueron

estudiadas con un microscopio Laborlux 11 de LeitzR
II.C.l.a. Músculo esquelético
Se eligieron los músculos sóleo y ELD debido a que sus

características han sido bién estudiadas en la rata y a
que están compuestos por poblaciones de fibras muy
diferentes: el sóleo presenta aproximadamente un 87% de
fibras tipo 1 <contracción lenta, oxidativas), y el ELD
aproximadamente un 97% de fibras tipo II (contracción
rápida, glucoliticas> (Anustrong RE et al, 1984).
Tras su extracción del miembro posterior izquierdo de

cada rata, se efectuaron varios cortes transversales en
la parte central de los vientres de ambos músculos. Estos
cortes transversales fueron orientados, montados en medio
acuoso (Tissue Tek OCTR, Miles 4583>, congelados durante
2 minutos en isopentano (2-metil—butano, Fluka Chemie AG
59075R> previamente enfriado hasta aproximadamente —150’C

por contacto a través de cristal con nitrógeno liquido,
y conservados posteriormente inmersos en nitrógeno
liquido a una temperatura similar a la indicada. En una
fase posterior, los músculos congelados de esta forma
fueron cortados en criostato a —20’C, obteniendose cortes
seriados de aproximadamente 6 ji de grosor que fueron
colocados sobre portaobjetos y conservados en congelador
a —20C hasta la relización de las técnicas de
histoquimica.
En cada músculo, sóleo y ELD, de cada rata se efectuaron

las siguientes tinciones y técnicas de histoquirnica:
1) Hematoxilina—eosina (HE)
2) Acido peryódico de Schiff (PAS) para demostración de

glucógeno
3) }iADH-deshidrogenasa (Nachías MM et al, 1958)
4) ATPasa con preincubación a pH 9,4 (ATP—asa A) (~ound

JM et al, 1980)
5) ATPasa con preincubación a pH 4,6 (ATP—asa B) (Round

JM et al, 1980)
6) ATPasa con preincubación a pH 4,2 (ATP-asa O) (Round

JM et al, 1980)
7) SDH (succínico deshidrogenasa) para demostración de

enzimas oxidativas intramitocondriales
8) Sudán Rojo para demostración de lípidos neutros
II.C.l.b. Hígado
Tras la extracción del paquete visceral en la autopsia,

de cada rata se tomaron dos cuñas de tejido hepático de
un tamaño aproximado de 2 X 1 X 0.5 cm. Una de estas
muestras fué congelada de forma directa a —70 C para su
estudio bioquímico. La otra muestra fué fijada en
formaldehido al 10% tamponado y posteriormente dividida
en dos fragmentos de tamaño similar.
tino de estos fragmentos fué incluido en bloques de

parafina de donde se realizaron cortes de 7 ji de espesor.
Sobre estos cortes se realizaron técnicas de HE, PAS,
tricrómico de Masson y reticulina. El otro fragmento
fijado en formalina fué congelado, realizándose cortes de
6 ji de grosor sobre el bloque congelado. Estos cortes
fueron teñidos con la técnica de Sudán Rojo descrita en
el apartado anterior.
II.C.1.c. Corazón
Tras la extracción del paquete visceral en la autopsia,

se extrajo la víscera cardiaca íntegra que se fijó en
formaldehido al 10% tamponado. Posteriormente se
realizaron dos secciones transversales a través de la
parte superior de los ventrículos. Una de estas secciones

fué incluida en bloques de parafina de donde se relizaron
cortes de 7 ji de espesor que fueron teñidos con HE. La
otra sección fué congelada a —70’ 0, realizandose cortes
de 6 ji de grosor sobre el bloque congelado. Estos cortes
fueron teñidos con la técnica de Sudán Rojo descrita
anteriormente.
II.C.2. MicroscopIa electrónica
El estudio ultraestructural se realizó sobre muestras de

músculo sóleo y músculo ELD.
Inmediatamente tras su disección, y antes de congelarlos
en isopentano, se cortaron pequeños fragmentos
longitudinales de los músculos sóleo y ELD, fragmentos
que fueron fijados en glutaraldehido al 5% tamponado con
buffer de cacodilato 0.1 M a 4’ 0. Al cabo de 2 horas de
la fijación los fragmentos de músculo fueron lavados en
tres pases de buffer de cacodilato 0,1 M durante 7 dias.
Posteriormente se realizó la postfijación de los mismos
con tetróxido de osmio al 2% en buffer de cacodilato 0,1
M durante 3 horas, deshidratandolos con etanol a
concentraciones crecientes e incluyendolos en resma
EponR , orientados para secciones longitudinales.
Se realizaron cortes semifinos de 0.5 ji teflidos con azul
de toluidina en los que se seleccionaron las áreas mejor
orientadas y conservadas. Por último, se efectuaron
cortes ultrafinos de estas áreas, tiñendolos con acetato
de uranilo y citrato de plomo y examinandolos y
fotografiandolos en un microscopio electrónico Hitachi
H 2 JA.
Para el estudio ultraestructural, se incluyeron en

conjunto los músculos sóleo y ELD de los animales de cada

grupo de tratamiento, de manera que la microscopia
electrónica se realizó sobre 12 casos, constituido cada
uno de ellos por la mezcla de los cinco músculos sóleo o
de los cinco músculos ELD de cada grupo de tratamiento.
Se asumió que los cinco músculos, sóleo y ELD, de cada
grupo ultraestructural presentaban características
homogéneas y que las fibras observadas en el estudio
ultraestructural corresponderían con mayor probabilidad
a las predominantes en cada músculo, es decir, tipo 1 en
el sóleo y tipo II en el ELD; de todas formas, el estudio
morfométrico realizado sobre la densidad de volumen
mitocondrial y sobre el grosor de la banda 2 nos permitió
confirmar esta suposición.
Además del estudio mediante visión directa de estos doce

casos, se realizaron seis fotograf las ultraestructurales
(de la parte central de las fibras, alejadas de la zona
subsarcolemal) de cada uno de ellos a 12.200 aumentos, lo
que hace que las copias fotográficas muestren una imagen
aumentada 38.400 veces sobre una superficie para cada
copia fotográfica de 29 g2. Las tres fotografías más
representativas de cada caso fueron utilizadas para el
estudio morfométrico del área mitocondrial y del grosor
de la banda Z, según se detalla en el apartado de
Morfometria.
II.C.3. Morfometria
El estudio morfométrico se ha efectuado mediante métodos

estereológicos basados en los principios de probabilidad
geométrica que permiten cuantificar estructuras
tridimensionales a partir del estudio de cortes
bidimensionales de las mismas (Engel AG, 1986a).
Se ha realizado el estudio morfométrico de las muestras

de músculo esquelético, tanto a nivel óptico como
ultraestructural.
En lo relativo a la microscopia óptica, en cada músculo

(sóleo y ELD) de cada animal se midieron los diámetros de
las fibras completas incluidas en un total de 4 campos de
400 aumentos, escogiendo los campos menos artefactados y
mejor orientados. Los diámetros medidos correspondieron
al “mayor perpendicular al mayor” (Brooke MM et al,
1969) . Las mediciones se efectuaron sobre las
preparaciones de ATPasa A y ATPasa B, clasificando las
fibras en tipo 1 y tipo II.
Con respecto a la microscopia electrónica, se midió la

anchura de 30 de las bandas Z de las fibras elegidas, así
como el número y área ocupada por las mitocondrias
completas incluidas en las tres fotografías
ultraestructurales (superficie total de 87 ji2> más
representativas de las seis realizadas por cada caso. En
el estudio del área mitocondrial se incluyó la densidad
de volumen mitocondrial en aplicación del principio de
Delesse, que señala que la densidad de volumen de un
componente en una estructura tridimensional es igual a la
densidad de área de ese componente en un plano que corta
la estructura tridimensional (Engel AG, 1986a).
Como instrumento de medición, almacenamiento de datos,

cálculo de la estadística descriptiva y realización de
histogramas de frecuencia de las mediciones efectuadas
con microscopia óptica y electrónica se utilizó un equipo
básico de análisis de imagen constituido por hardware
MOP-Videoplan (CP/M 2.2) como soporte del programa de

morfometria Rontron V5.42, acoplado a una videocámara y
un monitor de vídeo, y como periférico interactivo un
tablero de digitalización electromagnética con pluma,
según especificaciones convencionales (Marchevsky Aid et
al, 1987).
II.D. Metodología del estudio estadístico
El análisis estadístico se ha efectuado por separado para

las muestras estudiadas mediante bioquímica, morfometria
óptica y morfometría ultraestructural.
Las tablas correspondientes a la estadística descriptiva

se refieren a cada una de las variables analizadas e
incluyen el grupo, la media aritmética, la desviación
estándar (DE), el error estándar de la media (EEM) y el
intervalo de confianza del 95% de la media (lO 95%>.
En cada uno de estos tres grupos de análisis estadístico

se ha realizado inicialmente un análisis de la varianza
para dos factores (twoway ALNOVA> para verificar la
existencia o inexistencia de relación matemática entre
los dos factores analizados (VPA y 1-carnitina) y los
efectos producidos por los distintos tratamientos.
De esta forma, comprobamos la homo o heterogeneidad de

los grupos de tratamiento y, en el caso de heterogeneidad
(varianza explicada, pc0,05), conocemos si las
diferencias entre los grupos se pueden explicar por la
interacción de los dos factores (p<0,OS) o bién por la
acción de uno de ellos. En los casos de varianza
explicada significativa (pcO,05> y ausencia de
interacción entre los dos factores analizados (p>0,0S),

se ha realizado el análisis de la varianza para un sólo
factor (oneway ANOVA) que nos permite comprobar de nuevo
el grado de homogeneidad de los grupos de tratamiento así
como el de las propias varianzas mediante los tests de
Cochrans y de Bartlett—Box. En los casos en los que la
probabilidad de estos dos test no ha ido en contra de la
homogeneidad de las varianzas, se ha realizado la
comparación de los valores medios de cada grupo con los
de todos los demás mediante la prueba de contraste de
medias a posteriori de Scheff e aceptando niveles de
significación a partir de pcO,05. En los casos en los que
el análisis de la varianza para dos factores ha señalado
la presencia de interacción significativa entre ambos, se
ha analizado los valores medios y los IC 95% para
comprobar la existencia o inexistencia de significación
en las diferencias.
En cada variable se ha comprobado el ajuste de la

distribución de los datos a la distribución normal
(p>0,OS) mediante la prueba de Kolmogorov—Smirnov, con
objeto de poder aplicar las pruebas paramétricas que
acabamos de señalar.
En lo relativo al peso inicial y final de los diferentes

grupos de ratas (debido a la escasa dispersión de los
valores medios) y en lo relativo a la morfometria
ultraestructural sobre las mitocondrias (debido al número
diferente de mediciones en cada grupo), se ha efectuado
la prueba de comparación de múltiples medias de Newman—
Keuls. Esta prueba se basa en una estimación global de la
varianza de la población a la que pertenecerían todas las
muestras en la hipótesis de igualdad de medias y en el
cálculo, a partir de ella, de la máxima diferencia
permisible entre medias en esa hipótesis, asumiendo una

distribución normal.
Las variables consideradas en cada grupo de estudio

(bioquímico, óptico y ultraestructural) serán
especificadas a propósito de los resultados.
En todos los casos, se ha asumido un riesgo a bilateral

igual a 0,05, aceptando significación estadística cuando
la hipótesis planteada se podía asumir en más del 95% de
las comprobaciones (riesgo máximo aceptado para rechazar
la hipótesis nula menor del 5%, Pc0,05). De esta forma,
el término ‘estadisticamente significativo’ se ha
considerado equiparable a ‘rechazo de la hipótesis nula’
(es decir, indica que la variación en el muestreo
constituye un explicación improbable de la discrepancia
existente entre los valores de la hipótesis nula y Los de
la muestra).
El análisis de la varianza se ha llevado a cabo mediante

el programa SPSS/PC+R (Statistical Package for Social
Sciences) V4.0 (Norusis MJ, 1990) sobre un ordenador IBM
R R
PS/2 con microprocesador INTEL 386.
La prueba de Newman—Keuls se ha llevado a cabo mediante

el programa Presta PC V2.2 de Procesamientos Estadísticos
(Abraira y et al, Fondo de Investigaciones Sanitarias de
la Seguridad Social, 1992) sobre un ordenador personal
portatil AT Toshiba TlOOOLE.
La bibliografía utilizada para el estudio estadístico

corresponde a Milton y Tsokos (Milton JS y Tsokos JO,
1987), Colton (Colton T, 1979) y Norusis MJ <Norusis MJ,
1990)
II.E. Metodología del estudio bibliográfico y
características de edición
La búsqueda y recuperaci6n de las referencias

bibliográficas relativas al ácido valproico y a la
carnitina se ha efectuado a través de la base de datos
bibliográfica en CD-ROM (Compact Disc-Read Only Memory)
COMPREHENSIVE MEDLINE <MEDLARS, Medical Literature
Analysis and Retrieval System Online) que contiene la
base de datos de la National Library of Medicine
(Bethesda, EEUU), con referencias bibliográficas y
resúmenes (en el 70% de los casos) de trabajos publicados
en aproximadamente 3400 revistas de todo el mundo y cuya
versión impresa es el Index Medicus <Vila Donat E, 1992).
Se rastrearon los CD-ROM hasta Diciembre de 1991,
utilizando las palabras clave ‘valproic acid’ y
‘carnitine’. Los ficheros obtenidos de esta manera fueron
exportados a un programa de tratamiento de textos
(WordperfectR V5.0, Wordperfect Corporation, 1988) donde
se realizó la selección de las citas bibliográficas más
adecuadas a los objetivos de este trabajo. La ordenación
alfabética de la lista bibliográfica definitiva en base
al apellido del primer autor de cada cita bibliográfica
se efectuó mediante una base de datos para PC (dBASE III
PLUS~ V1.0, Ashton-Tate, 1987) trasladándose
posteriormente este fichero ordenado a un fichero
Wordperfect para su impresión.
Para la edición de este trabajo se han tenido en cuenta

las recomendaciones del Comité Internacional de Editores
de Revistas Médicas (International Commitee of Medical
Journals Editors, 1991).
Los gráficos que se incluyen han sido realizados mediante

los propios programas estadísticos (Kontron V5.42,

SPSS/PC V4.0) y mediante el programa Harvard Graphics
V2.l0 soportado en un PC AT convencional.
La impresión de los gráficos y del resto de este trabajo

se ha llevado a cabo en una impresora Hewlett~PackardR
LaserJet IIP plus.
Resultados 37
RESULTADOS
1. Desarrollo de la fase experimental
Todos los animales sobrevivieron a la fase experimental.

En ninguno de ellos se observaron signos de disfunción
orgánica, estupor, coma, debilidad muscular, hipotonia o
dificultades para el movimiento, ni tampoco otro tipo de
alteraciones dignas de mención.
II. Peso corporal
II.A. Inicio de la fase experimental
Al inciarse la fase experimental, la descripción de los

pesos fué la siguiente:
n Media DE EEM lO 95%
Grp 1 5 170,0 7,07 3,16 162,10 a 177,90

Grp 2 5 170,0 7,07 3,16 162,10 a 177,90
Grp 3 5 172,0 4,47 2,00 161,00 a 177,00
Grp 4 5 176,0 8,94 4,00 166,00 a 186,00
Grp 5 5 178,0 8,37 3,74 168,65 a 187,35
Grp 6 5 174,0 5,48 2,45 167,87 a 180,12
Total 30 171,7 6,38 2,60 165,17 a 178,17
No existieron diferencias significativas para un nivel de

0,05 entre los pesos medios de los grupos de tratamiento
al inicio de la fase experimental (Newman-Keuls, 24
grados de libertad).
Resultados 38
fl.B. Final de la fase experimental
A los 90 días de tratamiento, y poco antes de ser

sacrificadas, los pesos de las ratas fueron los
siguientes:
n Media DE EEM IC 95%

Grp 1 5 254,0 8,94 4,00 244,00 a 264,00
Grp 2 5 264,0 15,17 6,78 247,05 a 280,95
Grp 3 5 268,0 13,04 5,83 253,42 a 282,57
Grp 4 5 258,0 13,04 5,83 243,42 a 272,57
Grp 5 5 274,0 11,40 5,10 261,25 a 286,75
Grp 6 5 278,0 19,24 8,60 256,50 a 299,50
Total 30 266,0 9,21 3,76 256,60 a 275,40
En este caso, tampoco se observaron diferencias

significativas para un nivel de 0,05 entre los pesos
medios de los grupos de tratamiento al final de la fase
experimental <Newman-Keuls, 24 grados de libertad).
Las comparacion conjunta de los pesos medios iniciales y
finales de todos los grupos demuestra que, para cada
grupo de tratamiento, existe una diferencia
estadisticamente significativa <p<0,05> entre el peso
medio al inicio de la tase y el peso medio al final de la
misma (Newman-Keuls, 48 grados de libertad>.
III. Resultados bioquímicos
El estudio bioquímico se llevó a cabo sobre muestras de

plasma, hígado y músculo esquelético obtenidas
inmediatamente tras la muerte de los animales, y en cada
Resultados 39
uno de estos tres compartimentos se determinaron tres

parámetros directos (concentraciones de CL, SCAC y LCAC)
y dos parámetros derivados <CTOT y AC/CL).
III.A. Plasma
A continuación se incluyen los resultados descriptivos e

inferenciales relativos a las concentraciones plasmáticas
de CL, SCAC, LCAC y CTOT, así como los correspondientes
al indice AC/CL.
ITI.A.l. Concentración de CL en plasma
El histograma de frecuencias de las concentraciones de CL

en el plasma de los animales de todos los grupos de
tratamiento fué el siguiente:
n Punto medio
1 7,5
2 9,0
1 10,5
3 12,0
1 13,5
1 15,0
0 16,5
3 18,0
3 19,5
3 21,0
3 22,5
1 24,0
3 25,5
2 27,0
o 28,5
3 30,0
0 31,5
1
o 1 2 3 4 5
Resultados 40
Las concentraciones medias de CL en plasma se transcriben

a continuación:
Grp n Media DE EEM IC 95%
Grp 1 5 23,6000 4,0447 1,8089 18,5779 a 28,6221

Grp 2 5 14,3800 2,6119 1,1681 11,1370 a 17,6230
Grp 3 5 9,9000 1,6733 0,7483 7,8223 a 11,9777
Grp 4 5 23,1200 4,1973 1,8771 17,9085 a 28,3315
Grp 5 5 20,9800 3,3589 1,5021 16,8095 a 25,1505
Grp 6 5 26,4400 3,4990 1,5648 22,0955 a 30,7845
Total 30 19,7367 6,5916 1,2035 17,2753 a 22,1980
El análisis de la varianza de la variable dependiente CL

en plasma con respecto a las variables independientes VRA
y carnitina indica que existe una fuerte interacción
entre estas últimas (p=O,031) por lo que no es posible
valorar la influencia de cada una de ellas en el
resultado.
A pesar de ello, la observación de la tabla de

estadística descriptiva indica que el VRA disminuye
significativamente el nivel plasmático de CL de forma
dependiente de la dosis, efecto que es revertido por la
carnitina exógena.
III.A.2. Concentración de SCAC en plasma
La distribución de las frecuencias de las concentraciones

plasmáticas de SCAC queda reflejada mediante su
histograma:
Resultados 41
n Punto medio
1
2 4 —
5 ______________
6 6
1 7
o 8
1 9
o 10
3 11
1 12
1 13
2 14 _____________
1 15
3 16
1 17
1 18
4 19
2 20 ___________
0 2 4 6 8 10
Las concentraciones plasmáticas medias de SCAC en los

distintos grupos de tratamiento fueron las siguientes:
Grp n Media DE EEM lO 95%

Grp 1 5 5,7000 0,3033 4,8579 a 6,5421
0,6782
Grp 2 2,5832 1,1552 8,4326 a 14,8474
5 11,6400
Grp 3 5 14,5800 3,2206 1,4403 10,5812 a 18,5788
Grp 4 5 16,5000 2,4474 1,0945 13,4611 a 19,5389
Grp 5 5 18,6600 1, 5323 0,6853 16,7574 a 20,5626
Grp 6 5 5,7000 0,9274 0,4147 4,5485 a 6,8515
Total 30 12,1300 5,4462 0,9943 10,0964 a 14,1636
Al igual que en el caso anterior, el análisis de la

varianza de la variable dependiente SCAC en plasma con
respecto a las variables independientes VPA y carnitina
indica que existe una fuerte interacción (p=0,036) entre
estas últimas, lo que imposibilita conocer la influencia
de cada una de ellas en el resultado.
Resultados 42
Los valores medios en los diferentes grupos de

tratamiento señalan que el VrA aumenta significativamente
la concentración de SCAC en plasma de forma dependiente
de la dosis, y que la administración de carnitina exógena
potencia este efecto.
III.A.3. Concentración de LCAC en plasma
El histograma que se incluye a continuación indica la

distribución de frecuencias de las concentraciones de
LCAC en el plasma.
n Punto medio
o 0,2
1 0,7
5 1,2
5 1,7
8 2,2
1 2,7
o 3,2
5 3,7
1 4,2
1 4,7
o 5,2
0 5,7
o 6,2
1 6,7
1 7,2
1 7,7
o 8,2
0 2 4 6 8 10
La tabla de estadística descriptiva correspondiente a las

concentraciones plasmáticas medias de LCAC es la
siguiente:
Resultados 43
Grp 1 5 1,7520 0,6015 0,2690 1,0052 a 2,4988

Grp 2 5 3,9800 0,3564 0,1594 3,5375 a 4,4225
Grp 3 5 5,8600 1,8636 0,8334 3,5461 a 8,1739
Grp 4 5 1,5160 0,6777 0,3031 0,6745 a 2,3575
Grp 5 5 1,9100 0,4930 0,2205 1,2979 a 2,5221
Grp 6 5 1,9000 0,3162 0,1414 1,5074 a 2,2926
Total 30 2,8197 1,8058 0,3297 2,1454 a 3,4940
En el análisis de la varianza de la variable dependiente

LCAC en plasma respecto a las variables independientes
VPA y carnitina se observa que la interacción entre estas
últimas es muy intensa <p=0,001).
La observación de la tabla descriptiva señala que el VPA

aumenta significativamente, y con carácter dependiente de
la dosis, el nivel de LCAC en plasma, y que la carnitina
revierte este efecto.
III.A.4. Concentración de CTOT en plasma
La distribución de las frecuencias de las concentraciones

de CTOT en plasma refleja la tendencia observada en las
distribuciones de frecuencias relativas a las
concentraciones de CL, SCAC y LCAC, al ser la CTOT un
parámetro derivado de las mismas. Su histograma es el
siguiente:
Resultados 44
n Punto medio
o 23,5
o 25,0
2 26,5
4 28,0
2 29,5
1 31,0
6 32,5
3 34,0
1 35,5
o 37,0
3 38,5
2 40,0
2 41,5
1 43,0
3 44,5
o 46,0
o 47,5
1, , , , +, ,
o 2 4 6 8 10
Los valores medios observados en cada grupo se

transcriben a continuación:
Grp 1 5 31,0520 3,8297 1, 7 127 26,2969 a 35,8071

Grp 2 5 30,0000 3,0174 1,3494 26, 2 534 a 33,7466
Grp 3 5 30,3400 2,7245 1,2184 26,9571 a 33,7229
Grp 4 5 41,1360 4,0412 1, 8 073 36, 1182 a 46,1538
Grp 5 5 41,5500 2,0000 0,8944 39,0667 a 44,0333
Grp 6 5 34,0400 3,7885 1,6943 29,3360 a 38,7440
Total 30 34,6863 5,8115 1,0610 32,5163 a 36, 8564
Al igual que en lo relativo al anál isis de las varianzas

de los parámetros directos de los que se deriva, en el
caso de la CTOT la interacción entre las variables
independientes VPA y carnitina es lo suficientemente
fuerte (p=O,014) como para que no se pueda valorar la
influencia de cada una de ellas en el resultado.
Resultados 45
En la estadística descriptiva se puede observar que el

VPA no modifica significativamente la concentración de
CTOT en plasma.
III.A.5. Cociente AC/CL en plasma
El histograma corresponde a la distribución de

frecuencias del indice AC/CL en los animales incluidos en
el estudio.
n Punto medio
2 0,20
7 0,35
2 0,50
1 0,65
3 0,80
3 0,95
5 1,10
1 1,25
o 1,40
1 1,55
1 1,70
1 1,85
o 2,00
1 2,15
1 2,30
1 2,45
o 2,60
0 2 4 6 8 10
Los valores medios obtenidos en cada grupo de tratamiento

quedan reflejados en la tabla siguiente:
Resultados 46

Grp 1 5 0,3254 0,0717 0,0321 0,2364 a 0,4144
Grp 2 5 1,1202 0,2938 0,1314 0, 7554 a 1,4850
Grp 3 5 2,1016 0,3189 0,1426 1,7056 a 2,4976
Grp 4 5 0,8030 0,2027 0,0907 0,5513 a 1,0547
Grp 5 5 1,0064 0,2038 0,0911 0,7534 a 1,2594
Grp 6 5 0,2904 0,0355 0,0159 0,2463 a 0,3345
Total 30 0,9412 0,6468 0,1181 0,6997 a 1,1827
El análisis de las varianzas de la variable dependiente

AC/CL respecto a las variables independientes VPA y
carnitina indica la existencia de una muy fuerte
interacción entre estas últimas (p=O,001).
La consideración de los valores medios e lIC 95% nos

indica que el VPA incrementa significativamente el
cociente AC/CL plasmático, que este efecto depende de la
dosis, y que la carnitina exógena revierte el mismo.
III.B. Hicado
Al igual que en el plasma, en el hígado de todos los

animales incluidos en el estudio se determinaron las
concentraciones de CL, SCAC, LCAC y CTOT, así como el
cociente AC/CL.
III.B.l. Concentración de CL en hígado
Las concentraciones hepáticas de Cl presentaron la

siguiente distribución de frecuencias:
Resultados 47
n Punto medio
2 2,4
1 2,8
o 3,2
2 3,6
3 4,0
2 4,4
2 4,8
4 5,2
4 5,6
2 6,0
2 6,4
1 6,8
3 7,2
1 7,6
o 8,0
o 8,4
1 8,8
,, + , , ,,I, ,,
o 1 2 3 4 5
La descripción de las concentraciones medias observadas

en cada grupo de tratamiento es la siguiente:
n Media DE EEM lIC 95%
Grp 1 5 6,2200 1,0710 0,4790 4,8902 a 7,5498

Grp 2 5 4,6000 0,7649 0,3421 3,650 a 5,5497
Grp 3 5 3,1200 0,7727 0,3455 2,1606 a 4,0794
Grp 4 5 6,4600 1,5900 0,7111 4,4858 a 8,4342
Grp 5 5 5,1000 0,7141 0,3194 4,2133 a 5,9867
Grp 6 5 6,3400 0,9423 0, 42 14 5,1700 a 7,5100
Total 30 5,3067 1,5290 0,2792 4,7357 a 5,8776
A diferencia de lo observado en los parámetros

plasmáticos, el análisis de las varianzas de la variable
dependiente CL en hígado indica ausencia de interacción
entre las variables independientes y carnitina VPA
(p=0,095), y una fuerte influencia de cada una de ellas
sobre el resultado (VPA, p=0,00í; carnitina, p=0,0O2).
Resultados 48
La prueba de contraste de medias de Schef fe aplicada a

las concentraciones hepáticas de CL señala el siguiente
resultado (los asteriscos indican significación
estadística en la diferencia):
GGGGGG
rrrrrr
pppppp
Media Grupo 325164
3,1200 Grp 3
4,6000 Grp 2
5,1000 Grp 5
6,2200 Grp 1 *
6,3400 Grp 6 *
6,4600 Grp 4 *
Este resultado indica que el VPA disminuye de forma

significativa la concentración de CL en tejido hepático,
efecto que depende de la dosis de VPA administrada. La
carnitina exógena normaliza el nivel de CL alterado por
el VPA.
III.B.2. Concentración de SCAC en hígado
Con respecto a los ésteres de cadena corta de carntina,

la distribución de las frecuencias queda reflejada en su
histograma:
Resultados 49
n Punto medio
o 1,25
1 1,40
3 1,55
1 1,70
4 1,85
5 2,00
6 2,15
o 2,30
3 2,45
1 2,60
2 2,75
1 2,90
o 3,05
1 3,20
1 3,35
1 3,50
O 3,65
II,, , , ,
0 2 4 6 8 lo
La tabla que se incluye a continuación refleja las

concentraciones hepáticas medias de SCAC en los grupos de
tratamiento:
Grp 1 5 2,4400 0, 6841 0,3059 1,5906 a 3,2894

Grp 2 5 2,1800 0,3493 0,1562 1, 7463 a 2,6137
Grp 3 5 2,0200 0, 4 025 0,1800 1,5202 a 2,5198
Grp 4 5 2,3800 0,6419 0,2871 1,5830 a 3,1770
Grp 5 5 1,9400 0,1949 0,0872 1,6980 a 2,1820
Grp 6 5 2,4200 0,7950 0,3555 1,4329 a 3,4071
Total 30 2,2300 0,5415 0,0989 2,0278 a 2,4322
El análisis de la varianza en este caso indica que los

grupos no pertenecen a poblaciones diferentes (varianza
explicada, p=0,585), es decir, que no existen diferencias
significativas entre sus valores medios.
Resultados 50
III.B.3. Concentración de LCAC en hígado
El histograma de frecuencias de las concentraciones de

LCAC en hígado es el siguiente:
n Punto medio
o 0,00
3 0,25
16 0,50
1 0,75
O 1,00
o 1,25
1 1,50
1 1,75
1 2,00
1 2,25
2 2,50
o 2,75
1 3,00
2 3,25
o 3,50
1 3,75
o 4,00
0 4 8 12 16 20
Las concentraciones medias de LCAC hepáticos en cada

grupo fueron las siguientes:
Grp 1 5 0,4520 0,1612 0,0721 0,2519 a 0, 6521

Grp 2 5 2,3200 0,6760 0, 3023 1,480 a 3, 1594
Grp 3 5 2,8400 0,7403 0,3311 1,9208 a 3, 7592
Grp 4 5 0,4600 0,1782 0,0797 0, 2 388 a 0, 6812
Grp 5 5 0,4800 0,0997 0,0446 0,3561 a 0, 6039
Grp 6 5 0,5140 0,0699 0,0312 0,4273 a 0, 6007
Total 30 1,1777 1,0906 0,1991 0,7704 a 1,5849

Resultados 51
En el análisis de la varianza se puede observar que las

variables consideradas independientes, VPA y carnitina,
muestran un coeficiente de interacción muy elevado
(p=0,00l), por lo que no podemos conocer la influencia de
cada una de ellas por separado en el resultado de las
concentraciones hepáticas de LCAC.
La observación de los datos descriptivos nos indica

claramente que el VPA disminuye de forma significativa la
concentración de ésteres de cadena larga de carnitina
(LCAC> de una forma independiente de la dosis. La
carnitina exógena revierte este efecto del VPA.
III.B.4. Concentración de CTOT en hígado
Con respecto a las comcentraciones hepáticas de CTOT, la

distribución de las mismas se refleja en el histograma:
n Punto medio
1 6,1
1 6,5
3 6,9
3 7.3
4 7,7
4 8,1
2 8,5
1 8,9
1 9,3
1 9,7
1 10,1
4 10,5
2 10,9
1 11,3
0 11,7
0 12,1
1 12,5
0 1 2 3 4 5
Resultados 52
La tabla descriptiva de los valores medios de estas

concentraciones en cada grupo de tratamiento se incluye
a continuación:
Grp 1 5 9,1120 1, 5941 0,7129 7,1327 a 11,0913

Grp 2 5 9,1000 1,6628 0,7436 7,0354 a 11,1646
Grp 3 5 7,9800 1,6438 0, 73 51 5,9390 a 10,0210
Grp 4 5 9,3000 2,2201 0,9928 6,5435 a 12,0565
Grp 5 5 7,5200 0, 7293 0,3262 6,6144 a 8,4256
Grp 6 5 9,2740 1,6001 0,7156 7,2873 a 11,2607
Total 30 8,7143 1,6480 0,3009 8,0990 a 9,3297
El análisis de la varianza indica que las concentraciones

medias de CTOT en los grupos de tratamiento no pertenecen
a poblaciones distintas <varianza explicada, p=0,388),
por lo que no presentan diferencias significativas entre
si.
III.B.5. Concentración de AC/CL en hígado
El histograma de frecuencias correspondiente a la

distribución de los cocientes AC/CL hepáticos de los
animales estudiados es el siguiente:
Resultados 53
n Punto medio
o 0,3
8 0,4
9 0,5
3 0,6
o 0,7
1 0,8
1 0,9
1 1,0 a
2 1,1
o 1,2
1 1,3
o 1,4
1 1,5 a
2 1,6
o lfl
o 1,8
1 1,9 a
0 2 4 6 8 10
La tabla que se incluye a continuación corresponde a la

descripción de los valores medios de los cocientes AC/CL
hepáticos en cada grupo de tratamiento:
Grp 1 5 0,4658 0,0689 0,0308 0,3803 a 0,5513

Grp 2 5 0,9768 0,1159 0,0519 0,8328 a 1,1208
Grp 3 5 1,5848 0, 2 362 0,1056 1,2915 a 1,8781
Grp 4 5 0,4420 0,0430 0,0192 0,3886 a 0,4954
Grp 5 5 0,4822 0,0736 0,0329 0,3909 a 0,5735
Grp 6 5 0,4594 0,0847 0,0379 0,3542 a 0,5646
Total 30 0,7352 0,4452 0,0813 0,5689 a 0,9014

AC/CL en hígado respecto a las variables independientes
VPA y carnitina indica que existe una muy importante
interacción entre estas últimas <p=0,001).
En la tabla descriptiva se puede observar que el VPA
aumenta significativamente, y con carácter dependiente de
la dosis, el cociente AC/CL en tejido hepático, mientras
que la administración de carnitina exógena revierte este
efecto.
Resultados 54
111.0. Músculo sóleo
La tercera parte del estudio bioquímico se llevó a cabo

sobre músculo esqulético, concretamente sobre músculo
sóleo, en el que de nuevo se determinaron las
concentraciones de CL, SCAC, LCAC y CTOT, así como los
indices AC/CL, en todos los animales incluidos en el
estudio.
111.0.1. concentración de CL en músculo sóleo
La distribución de frecuencias de las concentraciones de

CL observadas en el músculo sóleo queda reflejada en el
histograma siguiente:
n Punto medio
0 8,5
4 9,0
2 9,5
3 10,0
5 10,5
7 11,0
1 11,5 —
4 12,0
1 12,5
0 13,0
0 13,5
1 14,0
0 14,5
0 15,0
1 15,5
1 16,0
0 16,5
0 2 4 6 8 10
Las características descriptivas de las concentraciones

musculares de CL se incluyen en la tabla:
Resultados 55
Grp 1 5 11, 5000 1,8987 0, 8491 9, 142 a 13,8575

Grp 2 5 10, 0800 0,8585 0,3839 9,0141 a 11, 1459
Grp 3 5 10, 2200 1,2696 0,5678 8,643 a 11,7964
Grp 4 5 11, 0400 0, 89 61 0,4007 9,9274 a 12,1526
Grp 5 5 10, 8800 0,5933 0,2653 10, 1433 a 11,6167
Grp 6 5 12, 8200 2,9141 1,3032 9,2017 a 16,4383
Total 30 11,0900 1,7353 0,3168 10,4420 a 11,7380
El análisis de la varianza indica que estas

concentraciones medias no pertenecen a poblaciones
distintas <varianza explicada, p=O,129), por lo que no
existen diferencias estadisticamente significativas entre
las mismas.
111.0.2. Concentración de SOAC en músculo sóleo
Las frecuencias de las concentraciones de SCAC en músculo

sóleo se distribuyeron de la siguiente forma:
n Punto medio
1 2,2
1 2,4
3 2,6
1 2,8
1 3,0
1 3,2
4 3,4
2 3,6
5 3,8
4 4,0
3 4,2
1 4,4
1 4.6
o 4,8
o 5,0
1 5,2
1 5,4 +
~ ¿p +, , , ¡FI,, ¿pl +~ , ,,,,
o 1 2 3 4 5
Resultados 56
Los resultados medios en cada grupo de tratamiento se

reflejan en la tabla:
Grp 1 5 3,3000 0,7176 0,3209 2,4090 a 4,1910

Grp 2 5 3,5800 0,8258 0,3693 2, 5546 a 4,6054
Grp 3 5 4,3200 0,6535 0,2922 3,5086 a 5,1314
Grp 4 5 3,4800 0,5167 0,2311 2,8384 a 4,1216
Grp 5 5 4,1400 0,8234 0,3682 3,1176 a 5,1624
Grp 6 5 3,2600 0,7403 0, 33 11 2,3408 a 4,1792
Total 30 3,6800 0,7752 0,1415 3,3905 a 3,9695
El análisis de la varianza indica que los las

concentraciones medias de SOAC en el músculo sóleo de los
grupos de tratamiento no pertenecen a clases distintas
(varianza explicada, p=O,l3O), por lo que no existen
diferencias significativas entre las mismas.
111.0.3. Concentración de LCAC en músculo sóleo
Con respecto a los LCAC en músculo sóleo, el histograma

de frecuencias correspondiente a sus concentraciones en
los animales estudiados es el siguiente:
n Punto medio
2 0,8
o 1,0
4 1,2
2 1,4
6 1,6
5 1,8
1 2,0
4 2,2
1 2,4
o 2,6
2 2,8
o 3,0
2 3,2
o 3,4
o 3,6
o 3,8
1 4,0
1, ,+, , ,Ig , , ,+, , , tít , E E E • +, 1, +,
0 2 4 6 8 10
Resultados 57
Las concentraciones medias en cada grupo de tratamiento

fueron las siguientes:
Grp 1 5 1,2800 0,3834 0,1715 0,8039 a 1,7561

Grp 2 5 2,3020 0,5756 0,2574 1,5874 a 3,0166
Grp 3 5 3,0260 0,6261 0,2800 2,2486 a 3,8034
Grp 4 5 1,7080 0,1385 0,0619 1,5361 a 1,8799
Grp 5 5 1,7600 0,3286 0,1470 1,3520 a 2,1680
Grp 6 5 1,3800 0,4438 0,1985 0,8289 a 1,9311
Total 30 1,9093 0,7306 0,1334 1,6365 a 2,1820
En el análisis de la varianza de la variable dependiente

LCAC en músculo sóleo con respecto a las variables
independientes VPA y carnitina indica que existe una
fuerte interacción entre estas últimas (p=0,008) de
manera que no es posible conocer el efecto de cada una de
ellas sobre el resultado.
La tabla de estadística descriptiva muestra que el VPA

incrementa de forma significativa, y dependiente de la
dosis, la concentración de LCAC en músculo esquelético.
La administración de carnitina exógena revierte este
efecto del VPA.
III.C.4. Concentración de CTOT en músculo sóleo
Las concentraciones de carnitina total en el músculo

sóleo presentaron la siguiente distribución de
frecuencias:
Resultados 58
n Punto medio
o 11,50
o 12,25
o 13,00
4 13,75
2 14,50
2 15,25
5 16,00
5 16,75
4 17,50
3 18,25
3 19,00
1 19,75
o 20,50
o 21,25
1 22,00
o 22,75
o 23,50
1 ¿pl ~ E + E’E ¿pIE j’¿p E E ~ j’¿p ,~¡F l’~ ~ ,,+,, ~ EI¿p E ¿p ,+~ E ~
o 1 2 3 4 5
En relación con los grupos de tratamiento, los niveles

musculares medios de CTOT fueron los siguientes:
Grp 1 5 16,0800 2,0897 0,9346 13,4853 a 18,6747

Grp 2 5 15,9620 1,6628 0,7436 13,897 a 18E0266
Grp 3 5 17,5660 1,7381 0,7773 15,407 a 19,7241
Grp 4 5 16,2280 1,1503 0,5144 14,7997 a 17,6563
Grp 5 5 16,7800 1,2931 0,5783 15,1745 a 18,3855
Grp 6 5 17,4600 3,4428 1,5397 13,1852 a 21,7348
Total 30 16,6793 1E9689 0,3595 15,9441 a 17,4145
El análisis de la varianza indica que estas

concentraciones medias no pertenecen a poblaciones
distintas (varianza explicada, p=0, 703) lo que indica
ausencia de significación estadística en las diferencias
entre las mismas.
Resultados 59
III.C.5. Cociente AC/CL en músculo sóleo
En lo relativo a los cocientes AC/CL en el músculo sóleo,

la distribución de frecuencias queda reflejada en el
siguiente histograma:
n Punto medio
o 0,22
2 0,26
1 0,30
1 0,34
1 0,38
5 0,42
2 0,46
4 0,50
5 0,54
1 0,58
2 0,62
2 0,66
2 0,70
1 0,74
o 0,78
o 0,82
1 0,86
E ¿p +‘ E ¿p EI¿p E, + ¡F E ¿p ¿pIE E •+ E ¿p 1 ,I, , , ,+, , , ,I, , , , E 1
O 1 2 3 4 5
A continuación, se incluye la descripción de los

cocientes musculares AC/CL medios en cada grupo de
tratamiento:
Grp 1 5 0,4058 0,0906 0,0405 0,2933 a 0,5183

Grp 2 5 0,5832 0,0894 0,0400 0,4722 a 0,6942
Grp 3 5 0,7246 0,0803 0,0359 0,6249 a 0, 8243
Grp 4 5 0,4712 0,0445 0,0199 0,4159 a 0,5265
Grp 5 5 0,5414 0,0494 0,0221 0,4801 a 0,6027
Grp 6 5 0,3718 0,1031 0,0461 0,2438 a 0,4998
Total 30 0,5163 0,1401 0,0256 0,4640 a 0,5686

Resultados 60
El análisis de la varianza de la variable dependiente

AC/CL en músculo sóleo con respecto a las variables
independientes VPA y carnitina indica que no existe
interacción entre éstas, y que ambos fármacos tienen una
gran influencia sobre el resultado (VPA, p=0,0Ol;
carnitina, p=0,001).
La prueba de contraste de medias de Scheffe da el

siguiente resultado (los asteriscos indican significación
estadística en la diferencia):
GGGGGG
rrrrrr
pppppp
Media Grupo 614523
0,3718 Grp 6
0,4058 Grp 1
0,4712 Grp 4
0,5414 Grp 5
0,5832 Grp 2 *
0,7246 Grp 3 * * * *
Este resultado indica que el VPA incrementa

significativamente el cociente AC/CL en músculo sóleo con
carácter dependiente de la dosis, y que la carnitina
exógena normaliza este cociente alterado por el VPA.
IV. Resultados del estudio óptico
IV.A. Músculo esquelético
En el examen morfológico convencional del músculo

esqulético efectuado en nuestro estudio no se han
Resultados 61
demostrado alteraciones relevantes en el músculo sóleo ni

en el músculo ELD de ninguna de las 30 ratas distribuidas
en los 6 grupos de tratamiento. En concreto, no se ha
detectado depósito de material lipidico, atrofia de
fibras, agrupamiento de tipos, imágenes de inversión de
tipo, presencia de células inflamatorias, necrosis,
regeneración ni incremento del tejido conectivo
endomisial.
Desde el punto de vista morfométrico, dado el elevado
número de mediciones de diámetro efectuadas para cada
tipo de fibra, el estudio estadístico descriptivo e
inferencial se realizó sobre los valores medios de las
mediciones efectuadas para cada tipo de fibra en cada
músculo de cada animal.
IV.A.l. Diámetro de las fibras tipo 1 en músculo

sóleo
En el músculo sóleo, la distribución de frecuencias de

los diámetros medios en las ratas incluidas en el estudio
fué la siguiente:
n Punto medio
o 39.5
o 41,0
1 42,5
0 44,0
1 45,5
1 47,0
7 48,5
8 50,0
3 51,5
3 53,0
3 54,5
0 56,0
2 57,5
o 59,0
1 60,5
0 62,0
0 63,5
1, E +, E E
1’ E +, E E +~ E E E +, E .1, E E 1
0 2 4 6 8 10
Resultados 62
A continuación, la tabla descriptiva de los diámetros

medios de las fibras tipo 1 en el músculo sóleo de cada
grupo de tratamiento:
n Media DE EEM XC 95%
Grp 1 5 48,8800 2,3019 1,0295 46,0218 a 51,7382

Grp 2 5 51,2380 2,3503 1,0511 48,3197 a 54,1563
Grp 3 5 55,9260 3,7907 1,6952 51,2194 a 60,6326
Grp 4 5 51,9400 2,1069 0,9422 49,3239 a 54,5561
Grp 5 5 48,4580 3,6718 1,6421 43,8989 a 53,0171
Grp 6 5 48,3760 1,5534 0,6947 46,4472 a 50,3048
Total 30 50,8030 3,6961 0,6748 49,4228 a 52,1832
El análisis de la varianza indica una importante

interacción entre las variables independientes VPA y
carnitina (p=O,OOG) por lo que no es posible valorar la
influencia de cada una de ellas en el resultado.
El estudio de la tabla de estadística descriptiva señala

que el VPA aumenta de forma significativa el diámetro de
las fibras de tipo 1 del músculo sóleo, aunque únicamente
cuando se administra a dosis muy elevadas (grupo 3)
puesto que este efecto no se observa al administrar dosis
menores de VRA (grupo 2). La carnitina exógena revierte
el efecto de las dosis elevadas de VPA sobre el diámetro
de las fibras tipo 1 del sóleo.
IV.A.2. Diámetro de las fibras tipo II en músculo

sóleo
En este caso, la distribución de frecuencias de los

diámetros medios se reflejó en el siguiente histograma:
Resultados 63
n Punto medio
1 23
o 25
o 27
1 29
2 31
o 33
1 35
2 37
3 39
2 41
2 43
2 45
8 47
2 49
2 51
1 53
1 55
0 2 4 6 8 10
Dentro de cada grupo de tratamiento, los diámetros medios

de estas fibras fueron los siguientes:
n Media DE EEH lO 95%
Grp 1 5 42,0340 6,0784 2,7183 34,4868 a 49,5812

Grp 2 5 40,8700 8,0059 3,5804 30,9295 a 50,8105
Grp 3 5 40,3260 9,1955 4,1123 28,9085 a 51,7435
Grp 4 5 41,6380 12,1834 5,4486 26,5106 a 56,7654
Grp 5 5 45,1220 5,2568 2 E 3509 38,5950 a 51,6490
Grp 6 5 47,4280 1,1965 0,5351 45,9424 a 48,9136
Total 30 42,9030 7,5316 1,3751 40,0906 a 45,7154
El análisis de la varianza indica que los diámetros

medios de las fibras tipo II de cada grupo de tratamiento
no pertenecen a clases distintas (varianza explicada,
p=0,674) por lo que no existen diferencias
estadisticamente significativas entre los mismos.
Resultados 64
IV.A.3. Diámetro de las fibras tipo 1 en músculo ELD
En lo concerniente al músculo extensor largo de los

dedos, el histograma de la distribución de frecuencias de
los diámetros medios de las fibras de tipo 1 fué el
siguiente:
n Punto medio
1
24
5 25
4 26
2 27
3
28
3
29
4 30
3
31
1
32
1
33
o 34
2 35
o 36
o 37
o 38
1
39
o 40 1~’¿pE +
EEEE EE~E
1 + 1 ¡FEE¡F + •E¡FE
,
o 1 2 3 4 5
En la tabla que se incluye a continuación, se describen

los diámetros medios observados en cada grupo de
tratamiento:
Grp 1 5 28, 6340 4,6320 2,0715 22, 8828 a 34,3852

Grp 2 5 29, 6960 4,2892 1,9182 24 E 3703 a 35,0217
Grp 3 5 28, 9820 2 E 0387 0,9117 26, 4507 a 31,5133
Grp 4 5 30, 1940 ~E 4169 2 E 4225 23, 4682 a 36,9198
Grp 5 5 30, 4280 1,3385 0,5986 28 E 7660 a 32,0900
Grp 6 5 25, 6000 0,8345 0,3732 24, 5639 a 26,6361
Total 30 28,9223 3,6265 0,6621 27,5682 a 30,2765

Resultados 65
El análisis de la varianza indica que los diámetros

medios de las fibras tipo 1 en el músculo ELD de cada
grupo de tratamiento no
pertenecen a poblaciones
distintas (varianza explicada, p=O.324), y no presentan
diferencias estadisticamente significativas entre los
mismos.
IV.A.4. Diámetro de las fibras tipo II en músculo

ELD
El diámetro de las fibras tipo II del músculo ELD

presentó la distribución de frecuencias que se refleja en
el histograma:
n Punto medio
0 36
1 37 ___________
1 38 ___________
2 39 _______________________
2 40 _______________________
2 41 ______________________
2 42 _______________________
4 43
3 44 __________________________________
4 45
2 46 ______________________
1 47
3 48 ________________________________
1 49 ___________
1 50 ___________
1 51. ___________
0 52
0 1 2 3 4 5
Los diámetros medios en cada grupo quedan reflejados en

la tabla:
Resultados 66
Grp 1 5 44,0180 2,8140 1,2585 40,5240 a 47,5120

Grp 2 5 41,7520 3,8879 1,7387 36,9246 a 46,5794
Grp 3 5 40,4280 2,2257 0,9953 37,6645 a 43,1915
Grp 4 5 47,0900 3,1293 1,3995 43,2045 a 50,9755
Grp 5 5 44,9380 2,0171 0,9021 42,4334 a 47,4426
Grp 6 5 45,3820 3,5224 1,5753 41,0084 a 49,7556
Total 30 43,9347 3,5606 0,6501 42,6051 a 45,2642

con respecto a las variables independientes VPA y
carnitina indica que no existe interacción entre éstas,
y que únicamente la carnitina produce un efecto
significativo sobre el resultado (VPA, p=0,286;
carnitina, p=0,002).
Aunque los diámetros medios de la fibras tipo II de cada

grupo pertenecen a clases distintas (varianza explicada,
p=0,020), en la prueba de contraste de medias de Scheffe
se observa que ninguna diferencia entre grupos presenta
significación estadística para un nivel de 0,05.
IV.B. Hígado
El estudio con microscopia óptica convencional de los

cortes histológicos de hígado tomados en las 30 ratas
distribuidas en los 6 grupos de tratamiento no demuestra
la presencia de alteraciones relevantes en ninguno de
ellos. En concreto, no se ha observado esteatosis con
vacuolas de tamaño pequeño o grande, fibrosis, presencia
de células inflamatorias, hialina de Mallory, cuerpos de
Councilman o acúmulo de pigmento biliar.
Resultados 67
IV.C. Corazón
El estudio con microscopia óptica convencional de los

cortes histológicos de coraz6n tomados en las 30 ratas
distribuidas en los 6 grupos de tratamiento no demuestra
la presencia de alteraciones relevantes en ninguno de
ellos. En concreto no se ha observado acúmulo de material
lipidico, necrosis de fibras, fibrosis o presencia de
células inflamatorias.
V. Resultados del estudio ultraestructural
No se han observado diferencias cuantitativas valorables

mediante visión directa en el número y superficie total
ocupada por el material lipidico entre los distintos
grupos de tratamiento E tanto en lo relativo al músculo
sóleo como en lo relativo al músculo ELD. Tampoco se ha
observado mediante visión directa la presencia de
inclusiones cristalinas o paracristalinas en el interior
de las mitocondrias de los músculos sóleo y ELD de
ninguno de los grupos de tratamiento, ni imágenes de
borramiento de crestas mitocondriales.
V.A. Area mitocondrial
El área mitocondrial se midió morfométricamente en los

músculos sóleo y ELD de cada grupo de tratamiento.
Todas las mediciones relativas al área mitocondrial

incluidas en las tablas están expresadas en micras
cuadradas (u 2 ). La densidad de volumen mitocondrial
constituye el porcentaje de la fibra muscular ocupado por
Resultados 68
mitocondrias, según el principio de Delesse (Engel AG,

1986a) -
V.A.1. Superficie mitocondrial en músculo sóleo
La descripción de las áreas mitocondriales medias y de la

DVM media en el músculo sóleo de cada grupo de
tratamiento es la siguiente:
n Media DE EEM DVM
Grp 1 68 0,0951 0,0853 0,0102 7,43

Grp 2 70 OE 0848 0,0404 0,0049 6,82
Grp 3 120 0,0364 0,0183 0,0017 5,02
Grp 4 44 0,0628 0,0545 0,0082 3,18
Grp 5 53 0,0530 0,0423 0,0058 3,23
Grp 6 66 0,0791 0,0791 0,0059 6,00
Total 421 0,0685 0,0218 0,0089 5,52
Con relación a las áreas medias, la prueba de comparación

de múltiples medias de Newman-Keuls con 415 grados de
libertad da lugar a los siguientes resultados (los
asteriscos indican significación estadística, pc0,05):
GGGGGG
rrrrrr
pppppp
Media Grupo 35462 1
0,0364 Grp 3
0,0530 Grp 5 *
0,0628 Grp 4 *
0,0791 Grp 6 * *
0,0848 Grp 2 * * *
0,0951 Grp 1 * * *
Resultados 69
Este resultado indica que el área mitocondrial media en

las fibras del músculo sóleo (fibras tipo 1) es
significativamente menor en el grupo tratado con VPA
dosis mayor sin carnitina (grupo 3> que en el resto de
los grupos de tratamiento <grupos 1, 2, 4, 5 y 6).
A su vez, las áreas mitocondriales medias de los grupos

tratados con VPA dosis mayor más carnitina (grupo 5) y
con VPA dosis menor más carnitina (grupo 4) son
significativamente menores que las del grupo control
(grupo 1) y que las del grupo tratado con VPA dosis menor
sin carnitina (grupo 2).
No obstante, al considerar la DVM, los grupos tratados

con VPA a cualquier dosis más carnitina (grupos 4 y 5)
presentaron una densidad significativamente menor que la
del resto de los grupos (grupos 1, 2, 3 y 6).
V.A.2. Superficie mitocondrial en músculo ELD
Los resultados correspondientes al área mitocondrial

media y a la DVM media en el músculo ELD fueron los
siguientes:
n Media DE EEM DVM
Grp 1 60 0,0433 0,0333 0,0043 2,99

Grp 2 37 0,1075 0,0989 0,0163 4,57
Grp 3 44 0,0831 0,0580 0,0087 4,20
Grp 4 61 0,0409 0,0209 0,0027 2,87
Grp 5 21 0,0519 0,0358 0,0080 1,25
Grp 6 27 0,0484 0,0283 0,0056 1,39
Total 250 0,0625 0,0268 0,0109 2,99

Resultados 70
La prueba de Newman—Keuls con 244 grados de libertad

ofrece el siguiente resultado:
GGGGGG
rrrrrr
pppppp
Media Grupo 416532
0,0409 Grp 4
0,0433 Grp 1
0,0484 Grp 6
0,0519 Grp 5
0,0831 Grp 3
0,1075 Grp 2
El área mitocondrial media en las fibras del músculo ELD

(fibras tipo II) es significativamente mayor en los
grupos tratados con VPA sin carnitina (grupos 2 y 3> que
en el resto de los grupos (grupos 1, 4, 5 y 6). Además,
la del grupo 2 también es significativamente mayor que la
del grupo 3.
Con respecto a la DVM, también las de los grupos tratados

con VPA sin carnitina (grupos 2 y 3) es
significativamente mayor que la del resto de los grupos
(grupos 1, 4, 5 y 6).
V.B. Grosor de la banda 2
El grosor o anchura de la banda Z fué cuantificado

morfométricamente en los músculos sóleo y ELD. Todas las
mediciones relativas a la banda 2 están expresadas en
nanóxnetros (mg).
Resultados 71
V.B.1. Grosor de la banda Z en músculo sóleo
La descripción de los grosores medios de la banda 2 en el

músculo sóleo de los grupos de tratamiento fué la
siguiente:
Grp 1 30 126,0000 13,7966 2,5189 120,8483 a 131,1517

Grp 2 30 129,0000 11,5520 2,1091 124,6864 a 133,3136
Grp 3 30 123 E 3333 13,4762 2,4604 118,3012 a 128,3654
Grp 4 30 146,3333 15,1960 2,7744 140,6590 a 152,0016
Grp 5 30 145, 0000 12,7982 2,3366 140,2211 a 149,7789
Grp 6 30 152,0000 18,2700 3,3356 145,1779 a 158,8221
Total 180 136,9444 18,0346 1,3442 134,2919 a 139,5970
V.B.2. Grosor de la banda Z en músculo ELD
Con respecto al músculo ELD, las anchuras medias medias

de la banda Z se recogen en la siguiente tabla:
Grp 1 30 73,0000 13,6836 2,4983 67,8905 a 78,1095

Grp 2 30 83 E 6667 12,4522 2,2735 79,0169 a 88,3164
Grp 3 30 102,3333 13,3089 2,4299 97, 3 637 a 107,3030
Grp 4 30 76,3333 8,5029 1, 5524 73,1583 a 79,5084
Grp 5 30 88,3333 9,8553 1,7993 84,6533 a 92,0134
Grp 6 30 99,3333 12,2990 2,2455 94,7408 a 103,9258
Total 180 87,1667 15,9705 1,1904 84,8177 a 89,5156
Para cada grupo de tratamiento, el grosor de la banda Z

fué significativamente mayor en las fibras del músculo
sóleo (fibras tipo 1) que en las del músculo ELD (fibras
tipo II) (Newman-Keuls, 348 grados de libertad).
Discusión 72
DISCUSION
La discusión se estructurará siguiendo la misma línea de

exposición que en el apartado Resultados.
1. Desarrollo de la fase experimental
Las dosis de VPA utilizadas en nuestro estudio fueron de

15 mg/dla y 25 mg/día, correspondientes a 87,36 mg/kg/día
y 145,6 mg/kg/día al inicio de la fase experimental, y a
56,4 mg/kg/día y 94,0 mg/kg/día al final de la misma.
Tanto al inicio como al final de la fase experimental, la

dosis de VPA administrada a los grupos de animales
tratados con este fármaco es muy superior a la
recomendada en clínica, que oscila entre 15 y 30
mg/kg/día (dependiendo de la edad) para conseguir niveles
plasmáticos terapéuticos de 40 mg/mL como mínimo.
En modelos experimentales publicados en la literatura en

relación con los efectos del VPA sobre las
concentraciones de carnitina se han utilizado dosis de
VPA de 100 mg/kg de forma aguda (Coude FX et al, 1981),
500 mg/kg/día durante 7 días con y sin 200 mg/kg/día de
carnitina (Sugimoto T et al, 1987a; Sugioto T et al,
1987b; Nishida N et al, 1987), 50 mg/kg de forma aguda
<Rozas 1 et al, 1990; Camiña MF et al, 1991a), 150
mg/kg/día durante 7 días (Camiña MF et al, 1991b) y 50
mg/kg/día durante 7 y 28 días (Murakami K et al, 1990).
Con respecto a la carnitina exógena, en nuestro estudio

se administró una dosis de 10 mg/día, que corresponden a
58,24 mg/kg/día al inicio de la fase experimental, y a
Discusión 73
37,6 mg/kg/día al final de la fase experimental. Estas

dosis son relativamente similares a las que se utilizan
en clínica y que oscilan entre 14,3 mg/kg/día y 71,4
mg/kg/día, según la indicación.
En nuestro estudio, todos los animales sobrevivieron a la

fase experimental. En ningún caso se observaron signos de
estupor, coma, debilidad, hipotonia o dificultades para
el movimiento en los animales de los distintos grupos de
tratamiento, signos que, aunque se pueden detectar en los
casos de SDC miopático y sistémico en el ser humano,
tampoco han sido observados en los modelos experimentales
citados (Coude FX et al, 1981; Sugimoto T et al, 1987a;
Sugimito T et al, 1987b; Nishida N et al, 1987; Murakami
1< et al, 1990; Camiña F et al, 1991).
II. Peso corporal
El peso final medio de toda la muestra corresponde al

peso esperado en ratas Wistar con una edad similar a la
de nuestra muestra, y no difiere significativamente del
peso medio de nuestro grupo control (grupo 1), por lo que
se puede afirmar que el tratamiento con VP?. y/o carnitina
no indujo modificaciones importantes en los pesos de las
ratas.
La diferencia significativa que existe entre el peso

inicial medio y el peso final medio dentro de cada grupo
de tratamiento está en relación con la curva de
crecimiento de la rata Wistar <Lindboe CF et al, 1985).
La ausencia de significación estadística en la

comparación de los pesos medios de cada grupo de
Discusión 74
tratamiento al final de la fase experimental tiene

relevancia debido a que en el ser humano se ha observado
que la administración de VPA puede dar lugar, como efecto
secundario significativo que requiere en ocasiones la
interrupción del tratamiento, a un incremento importante
del peso corporal (Egger J et al, 1981).
En un estudio sobre 63 pacientes epilépticos tratados con

VPA, Dinesen y colaboradores observaron que el 57%
aumentó su peso corporal en una media de 7,5 kg durante
el tratamiento mientras que el 43% restante permaneció
estable o bién incrementó su peso menos de 4 kg. Entre
ambos grupos no existieron diferencias importantes en
cuanto al apetito, sed y predisposición familiar a la
obesidad y la diabetes, ni tampoco en cuanto a edad,
sexo, duración del tratamiento, dosis de VPA ni
concentraciones séricas de valproato. Ningún paciente
presentó signos de retención hidrica.Los autores
concluyen señalando que el VPA parece aumentar el peso
debido a un incremento en el tejido adiposo de causa
desconocida <Dinesen H et al, 1984).
No obstante, Nishida y colaboradores, y Murakami y

colaboradores, en modelos experimentales sobre rata
Wistar con diseños muy similares al del nuestro, tampoco
observaron diferencias significativas en el peso medio
entre los grupos de tratamiento que recibieron VPA y los
que no lo recibieron <Sugimoto T et al, 1987a; Sugimoto
T et al, 1987b; Nishida N et al, 1987; Murakami K et al,
1990). Tampoco las observaron Camilla y colaboradores en
un modelo también similar al nuestro aunque sobre ratón
Swiss albino (Camiña MF et al, 1991b>.
En lo relativo a la carnitina, aunque parece poseer un

Discusión 75
efecto trófico sobre diversos tejidos como músculo

esquelético (Spagnoli LG et al, 1990), hígado (Blaha y et
al, 1990) y nervio periférico (Fernandez E et al, 1990),
no se ha observado que produzca modificaciones en el peso
corporal en el ser humano ni en animales de
experimentación (Sugimoto T et al, 1987a; Sugimoto T et
al, 1987b; Nishida N et al, 1987)
III. Estudio bioquímico
El estudio bioquímico llevado a cabo se ha efectuado

sobre plasma, hígado y músculo sóleo, debido a que
constituyen tres compartimentos donde es probable que la
administración de VPA refleje la aparición de
modificaciones en el metabolismo lipidico relacionado con
la carnitina.
III.A. Plasma
En conjunto, la interacción estadística observada en el

análisis de la varianza entre el VPA y la carnitina en el
plasma ha sido muy intensa en los cinco parámetros
estudiados por lo que las diferencias observadas entre
los grupos de tratamiento, aún siendo estadisticamente
significativas en lo relativo a cuatro de los parámetros,
no pueden ser atribuidas a la acción independiente de
ninguno de los dos fármacos sino a la interacción entre
ambos.
Los resultados obtenidos en nuestro estudio indican que,

a nivel plasmático, el VPA disminuyó de forma
significativa la concentración de CL y aumentó la de
ésteres de carnitina de cadenas larga (LCAC) y corta
Discusión 76
(SCAC) E y que ambos efectos fueron dependientes de la

dosis. La administración de carnitina exógena produjo una
reversión de los efectos del VPA sobre la CL y los LCAC,
así como un incremento del efecto del VPA sobre los SCAC.
Por otra parte, el VPA incrementó el cociente AC/CL de

una forma dependiente de la dosis, y este efecto también
fué contrarrestado por la carnitina exógena, posiblemente
porque el efecto de ésta tuvo mayor intensidad sobre los
LCAC que sobre los SCAC.
En lo que respecta a la concentración plasmática de CTOT,

el VPA no produjo modificaciones significativas en las
ratas que recibieron esta medicación.
La mayor parte de los autores que han estudiado estas

modificaciones en pacientes tratados con VPA han
observado disminución de la concentración plasmática de
CL, incremento en la de AC y en el cociente AC/CL, y
disminución del nivel de CTOT (Ohtani Y et al, 1982; Laub
14 et al, 1986; MeleghB et al, 1990; Beghi E et al, 1990;
Shapira Y et al, 1991; Opala G et al, 1991; Riva R et al,
1991). En la serie de Ohtani y colaboradores, el efecto
del VP?. tuvo un carácter dependiente de la dosis <Ohtani
Y et al, 1982). En tres de estas series de estudio, las
modificaciones producidas por el VPA sobre los niveles
plasmáticos de CL y AC fueron totalmente revertidas por
la administración de carnitina (Ohtani Y et al, 1982;
Melegh B et al, 1990; Shapira Y et al, 1991).
A nivel experimental, se han realizado varios estudios a

este respecto <Sugimoto T et al, 1987a; Sugimoto T et al,
1987b; Nishida N et al, 1987; Murakami 1< et al, 1990;
Camiña MF et al, 1991a; Camiña MF et al, 1991b)
Discusión 77
Nishida y colaboradores estudiaron en la rata Wistar el

efecto producido por la administración de VrA (500
mg/kg/día) y de VPA (500 mg/kg/día) más 1—carnitina (200
mg/kg/día) durante 7 días sobre los niveles de CL y AC en
plasma, hígado, músculo esquelético, orina y hematíes.
Con respecto al grupo control, las ratas tratadas con VP?.
presentaron disminución en las concentraciónes de CL y de
CTOT, y aumento en la concentración de AC y en el
cociente AC/CL en plasma. En el grupo tratado con VPA más
carnitina se invirtieron estas alteraciones de manera que
los niveles de plasmáticos de CL, AC y CTOT fueron
significativamente mayores que en el grupo control,
mientras que el cociente AC/CL fué significativamente
menor (Nishida 14 et al, 1987; Sugimoto T et al, 1987a;
Sugimoto T et al, 1987b>.
Este mismo grupo de investigación estudió posteriormente,

también en la rata Wistar, el efecto producido por la
administración de VPA (50 mg/kg/día) durante 7 y 28 días,
sobre los niveles de CL y AC en plasma, hígado, músculo
esqulético, orina y hematíes. A los 7 días no se
observaron diferencias significativas en los niveles
plasmáticos de AC y CL, ni tampoco en los valores de CTOT
y AC/CL, entre el grupo control y el grupo tratado con
VPA. No obstante, a los 28 días de tratamiento, en este
último grupo se observaron niveles plasmáticos
significativamente menores de CL y mayores de AC, así
como un cociente AC/CL también significativamente mayor,
con respecto al grupo control (Murakami K et al, 1990).
Camiña y colaboradores estudiaron en el ratón Swiss

albino los efectos producidos por la administración de
VPA (150 mg/kg/día) durante 7 días sobre los niveles de
CL, AC y CTOT, y sobre el cociente AC/CL, en plasma,
Discusión 78
hígado, músculo esquelético, corazón, riñón y orina. En

plasma, y con respecto al grupo control, el VPA produjo
disminución de la CL y la CTOT, y aumento en el nivel de
AC y en el cociente AC/CL, aunque en todos los casos sin
significación estadística (Camiña MF et al, 1991a).
Posteriormente, los mismos investigadores estudiaron la

evolución en el ratón Swiss albino de las concentraciones
de CL y AC en plasma, hígado, músculo esquelético,
corazón y rilión tras la administración de una unica dosis
terapéutica de VPA. A nivel plasmático, el VP?. dió lugar
a una disminución significativa de la concentración de CL
y de AC (Camiña MF et al, 1991b).
El mecanismo más probable para explicar los efectos del

VPA sobre las concentraciones plasmáticas de CL es el
incremento en el requerimiento intramitocondrial de
carnitina para tamponar el exceso de residuos acil—CoA de
cadena corta <acetil—CoA, valproil—CoA) producido por la
entrada del VPA en la mitocondria (Stumpf DA et al,
1985>, así como la inhibición en la reabsorción tubular
renal de carnitina libre producida por el VPA (Engel AG
et al, 1981).
En la matriz mitocondrial se formarían grandes cantidades
de SCAC, principalmente acetil-carnitina y valproil—
carnitina (Bohan TP et al, 1984), que abandonarían la
mitocondria por acción de la acilcarnitina translocasa
alcanzando el plasma e incrementando los niveles de AC en
este compartimento, a pesar de que el VPA inhibe la
reabsorción tubular renal de AC (Ohtani Y et al, 1984).
La inhibición de la 3—oxidación mitocondrial inducida por

el VPA (Haas R et al, 1981) daría lugar también a una
acumulación de residuos acil—Co?. de cadena larga que
Discusión 79
serian eliminados de la mitocondria hacia el plasma en

forma de LCAC.
Estos efectos dependerían de la dosis de VP?. administrada

debido a que al aumentar la cantidad de este ácido que
alcanza la mitocondria se incrementarían de forma
cuantitativa los mecanismos que acabamos de señalar.
Con respecto a la 1—carnitina exógena, su administración

incrementa las reservas de carnitina en todos los
compartimentos, por lo que aumenta la concentración
plasmática de CL. Por otra parte, el aumento de carnitina
en la mitocondria facilita la eliminación de SCAC hacia
el plasma y disminuye la concentración plasmática de LCAC
al facilitar su entrada en la propia mitocondria y
dirigirlos hacia la 3-oxidación.
III.B. Hictado
En nuestro estudio, el VPA disminuyó el nivel de CL en

hígado de una forma dependiente de la dosis, y la
carnitina exógena revirtió este efecto.
Con respecto a las acilcarnitinas, el VPA incrementó

significativamente la concentración de LCAC en hígado,
efecto que fué independiente de la dosis administrada y
que desapareció al administrar carnitina exógena. Por
otra parte, el VPA no modificó significativamente los
niveles hepáticos de SCAC ni de CTOT.
En lo relativo al cociente AC/CL en tejido hepático, el

VPA dió lugar a un incremento significativo del mismo,
efecto que tuvo un carácter dependiente de la dosis y que
Discusión 80
desapareció al administrar carnitina exógena.
A nivel clínico no existen estudios sobre las

concentraciones hepáticas de CL y AC en pacientes
tratados con VPA.
A nivel experimental, en la rata Wistar, Nishida y
colaboradores no observaron diferencias significativas
entre las concentraciones hepáticas de CL, AC y CTOT del
grupo control y las del grupo tratado con VPA ( 500
mg/kg/día, 7 días) (Nishida 14 et al, 1987>, así como
tampoco Murakami y colaboradores en un modelo
experimental similar con duraciones de tratamiento
distintas (VPA 50 mg/kg/día, 7 y 28 días).
Camiña y colaboradores observaron unos niveles hepáticos

de CL y CTOT significativamente mayores en ratones
tratados con VPA (150 mg/kg/día, 7 días) que en el grupo
control, sin diferencias significativas en lo relativo a
los niveles de AC y al cociente AC/CL. Los autores
señalan que la disminución de CL en plasma puede inducir
un incremento en la síntesis hepática de carnitina
(Camiña MF et al, 1991b).
El metabolismo completo de los residuos acil requiere su

procesamiento hepático, de manera que son transportados
desde los tejidos hasta el hígado en forma de AC donde
son reconvertidos en acil—Co?. y metabolizados <Stunpf DA
et al, 1985). Además E existe un flujo activo de carnitina
libre desde el músculo y otros tejidos hacia el hígado
(Stumpf DA et al, 1985). Por ello, es poco probable que
se pueda producir deficiencia de carnitina en hígado. Por
otra parte, el hígado puede incrementar la síntesis de
carnitina a partir de r-butirobetaina (Rebouche CJ et al,
1980a)
Discusión 81
En nuestro caso, el VPA a dosis mayor (25 mg/día) produjo

una disminución significativa en la concentración
hepática de CL, lo que constituye posiblemente la
ratificación estadística de la tendencia observada en los
modelos de Nishida y Murakami <Nishida N et al, 1987;
Murakami 1< et al, 1990), con la diferencia de que en
nuestro estudio la duración del tratamiento fué de 90
días.
El mecanismo más probable es el agotamiento de la

carnitina intramitocondrial por el incremento de residuos
acil de cadena corta, de una forma similar a la comentada
previamente en el compartimento plasmático.
111.0. Músculo sóleo
Nuestros resultados señalan que el VPA aumentó

significativamente y de forma dependiente de la dosis la
concentración de LCAC y el cociente AC/CL en músculo
sóleo, y que este efecto fué revertido por la
administración de carnitina exógena en ambos casos.
Con respecto a los demás parámetros estudiados en músculo

sóleo <CL, SCAC y CTOT), no existieron diferencias
significativas entre los grupos de tratamiento.
A nivel clínico, el único estudio en el que se han

recogido los niveles intramusculares de carnitina en
pacientes tratados con VPA es el de Shapira y
colaboradores, que observaron disminución en la CTOT
muscular (vasto lateral) en 6 de un grupo de 7 pacientes
(Shapira Y et al, 1991).
Discusión 82
A nivel experimental, Nishida y colaboradores observaron

una disminución significativa de la CL y la CTOT
intramusculares, y un incremento significativo de AC y
AC/CL en ratas Wistar tratadas con VPA (500 mg/kg/día, 7
días) respecto al grupo control (Nishida N et al, 1987)
Murakami y colaboradores, en ratas Wistar tratadas con

VrA ~ mg/kg/día, 7 y 28 días) observaron una
disminución significativa de CL y un incremento
significativo de AC intramusculares únicamente en el
grupo tratado durante 28 días (Murakami XC et al, 1990>.
Camiña y colaboradores, en su modelo experimental

comentado previamente, no encuentraron diferencias
significativas en las concentraciones intramusculares de
CL, AC y CTOT, ni en el cociente AC/CL, entre el grupo
tratado con VPA (150 mg/kg/día, 7 días) y el grupo
control (Camiña MF et al, 1991b).
El mecanismo más probable para explicar el incremento

intramuscular en los LCAC, y en consecuencia en el
cociente AC/CL, en nuestro estudio puede ser la
inhibición de la 13-oxidación producida por el VPA, que
daría lugar a una acumulación intramitocondrial de
residuos acil—CoA de cadena larga, que serian eliminados
hacia el sarcoplasma en forma de LCAC.
IV. Estudio con microscopLa óptica
TWA. Músculo esquelético
En el estudio morfológico convencional del músculo

esquelético, el dato más relevante de nuestro trabajo ha
Discusión 83
sido la ausencia de depósito de material lipidico en las

fibras musculares de las ratas tratadas con VPA, lo que
quiere decir que el VPA no indujo el cuadro histológico
de miopatia lipidica en ninguno de los animales que lo
recibieron, incluso los incluidos en el grupo tratado con
VPA dosis mayor sin carnitina <grupo 3).
La deficiencia de carnitina, tanto miopática como

sistémica, constituye la causa más frecuente de miopatia
lipidica (Engel AG, 1986b). El mecanismo patogénico
consiste en que la ausencia de carnitina impide la
entrada de LCFA en la mitocondria, de forma que se
acumulan en el espacio intermiofibrilar, en las
proximidades de las mitocondrias, en forma de material
lipídico visible con microscopia óptica mediante la
tinción de Sudán Rojo <Engel AG, 1986b).
En lo relativo al estudio morfométrico del músculo

esquelético, las fibras de los mamíferos maduros se
pueden clasificar en tipo 1 (rojas) y tipo II <blancas)
mediante métodos bioquímicos, fisiológicos e
histoquimicos. A su vez, las fibras tipo II se pueden
subclasificar histoquimicamente en tipos líA, lIB y lIC
mediante la tinción para demostración de ATPasa con
preincubación a pH 4,6 (4,5 para la rata) y 4,3 (Okada 5
et al, 1984)
Las fibras de tipo 1 presentan una contracción lenta y

mantenida, y su metabolismo es oxidativo. A nivel
histoquimico presentan una coloración clara con la ATPasa
a pH 9,4 y oscura para los pH 4,5 y 4,3. A nivel
morfológico presentan una mayor dotación de mitocondrias
y lipido neutro que las fibras tipo II (Dubowitz V,
1985)
Discusión 84
Las fibras de tipo II se contraen de forma rápida y su

metabolismo es glucolitico. El subtipo IIA comparte con
las fibras tipo 1 algunas características oxidativas en
su metabolismo, mientras que el subtipo lIB tiene un
metabolismo exclusivamente glucolitico. Desde el punto de
vista histoquimico, las fibras de tipo TIA presentan una
coloración intermedia con la ATPasa a pH 4,6 y las fibras
de tipo lIB una coloración clara con la misma técnica
(Dubowitz V, 1985).
La proporción de los dos tipos básicos de fibras, 1 y II,

en cada músculo es muy variable y depende de la acción
fisiológica del mismo (Ariano MA et al, 1973).
En nuestro estudio, elegimos los músculos sóleo (soleus)

y ELD (extensor digitorum longus) E de la extremidad
inferior de la rata, debido a que son músculos totalmente
diferentes en cuanto a sus características fisiológicas
y su composición de tipos de fibras musculares. En la
rata, el sóleo está formado muy mayoritariamente por
fibras de tipo 1 (87%), mientras que el ELD lo está por
fibras tipo II (98%) (Armstrong RB et al, 1984).
Nuestros resultados señalan en el músculo sóleo del grupo

control una proporción de fibras tipo 1 del 89,45% y de
fibras tipo II del 10,55%, mientras que en el ELD las
proporciones en el grupo control han sido del 13,48% y
del 86,52%, respectivamente. Estas proporciones se
mantuvieron con escasas variaciones en los restantes
grupos de tratamiento, lo que indica que ni el VPA ni la
carnitina exógena produjeron efectos a este respecto.
En los músculos sóleo de todos los grupos, las fibras

tipo 1 han presentado un diámetro significativamente
Discusión 85
mayor que el de las fibras tipo II, excepto en el grupo

tratado únicamente con carnitina en el que la diferencia
no ha presentado significación estadística. En los
músculos ELD de todos los grupos de tratamiento, las
fibras de tipo II han presentado un diámetro
significativamente mayor que las fibras de tipo 1.
Con respecto al músculo sóleo, el VP?. produjo un

incremento significativo en el diámetro de las fibras
tipo 1, efecto que tuvo un carácter independiente de la
dosis y que únicamente se manifestó en las ratas tratadas
con la dosis mayor de VPA. La administración de carnitina
exógena eliminó este efecto del VPA.
En este mismo músculo, no existieron diferencias

significativas entre los diámetros de las fibras de tipo
II de los distintos grupos de tratamiento.
En el músculo ELD, no han existido diferencias

significativas en los diámetros de las fibras tipo 1 ni
en los de las fibras tipo II de los distintos grupos de
tratamiento.
Aunque a nivel morfométrico la deficiencia de carnitina

de cualquier causa puede dar lugar a atrofia de fibras
tipo 1 (Engel AG et al, 1973), no existen publicaciones
en la literatura médica sobre el efecto que puede
producir el VPA en los diámetros de los distintos tipos
de fibras. Con respecto a la carnitina, si se ha
observado un efecto trófico selectivo sobre las fibras de
tipo 1 en pacientes con deficiencia de carnitina
secundaria a hemodiálisis (Spagnoli LG et al, 1990),
efecto que no ha sido demostrado en nuestro estudio.
Discusión 86
IV.B. Hiaado
El dato más relevante obtenido en nuestro estudio con

relación al hígado es la ausencia de alteraciones
vacuolares en los hepatocitos y de depósito de material
lipídico en los mismos con la técnica de Sudán Rojo sobre
corte congelados.
En la literatura médica no existen estudios clínicos ni

experimentales sobre los posibles efectos morfológicos
hepáticos que puede dar lugar la administración de VP?.,
excepto en los casos mortales de deficiencia sistémica de
carnitina secundaria al VPA con cuadros de insuficiencia
hepática aguda de tipo Reye, en los que se ha observado
histológicamente una esteatosis microvacuolar con
predominio pericentral en el hígado de los pacientes
(Zimmerman H et al, 1982).
IV.C. Corazón
El dato más relevante obtenido en nuestro estudio con

relación al corazón es la ausencia de alteraciones
vacuolares en los miocitos y de depósito de material
lipidico en los mismos con la técnica de Sudán Rojo sobre
cortes congelados.
No existen datos morfológicos en la literatura médica

sobre el estado del corazón en los pacientes fallecidos
por deficiencia sistémica de carnitina con insuficiencia
hepática aguda secundaria al tratamiento con VP?., aunque
en las deficiencias sistémicas de carnitina de otros
orígenes se ha demostrado en la autopsia la acumulación
de material lipidico en miocardio (Boudin G et al, 1976;
Ware AJ et al, 1978).
Discusión 87
V. Estudio con microscopia electrónica
Aunque la clasificación original de las fibras musculares

en fibras tipo 1 y II se realizó sobre bases
histoquimicas, se ha intentado repetidas veces
correlacionar estas características histoquimicas con las
características ultraestructurales de las fibras, tanto
en animales de experimentación (Schiaffino 5V et al,
1970) como en el ser humano (Cullen MJ et al, 1975), de
manera que, en términos generales, en los animales
vertebrados como la rata se acepta que a nivel
ultraestructural las fibras tipo 1 presentan mayor DVM,
mayor cantidad de lípidos y bandas Z más anchas que las
fibras tipo II (Cullen MJ et al, 1975).
En nuestro estudio, la DVM y la anchura de la banda Z

fueron significativamente mayores en las muestras para
estudio ultraestructural tomadas de los músculos sóleo
que en las tomadas de los músculos ELD, lo que indica que
las primeras correspondían a fibras tipo 1 y las segundas
a fibras tipo II.
En el examen convencional con microscopia electrónica no

hemos observado diferencias sustanciales en la dotación
lipidica de los músculos sóleo y ELD entre los distintos
grupos de tratamiento, ni tampoco entre ambos tipos de
músculo en los grupos control.
Shapira y colaboradores observaron tres casos de miopatia

lipidica ultraestructural en pacientes tratados con VPA,
en lo que parece constituir la primera observación de
este tipo fuera del contexto de la hepatotoxicidad aguda
de tipo Reye producida ocasionalmente por el VP?. (Shapira
Y et al, 1991).
Discusión 88
En el estudio ultraestructural del músculo esqulético en

los casos de miopatia lipídica producida por deficiencia
de carnitina de cualquier causa se ha detectado en las
fibras tipo 1 un incremento importante en el número y
superficie ocupada por glóbulos lipidicos no revestidos
de membrana que se sitúan a nivel intermiofibrilar, en
las proximidades de las mitocondrias <Engel AG, 1986b),
y esta misma alteración, con afectación exclusiva de las
fibras tipo 1, también ha sido observada en un modelo
experimental de miopatia lipidica no secundaria a
deficiencia de carnitina, en ratas alimentadas con aceite
vegetal bromado (Brownell AXW et al, 1978).
En nuestro estudio, el VP?. produjo un incremento

significativo de la DVM en las fibras del músculo ELD
(fibras tipo II), efecto con carácter no dependiente de
la dosis y que desapareció tras la administración de
carnitina exógena. En las fibras del músculo sóleo
(fibras tipo 1), el VP?. no dió lugar a la aparición de
variaciones significativas en la DVM, aunque si produjo
una disminución de la superficie mitocondrial media E
efecto dependiente de la dosis y no reversible por la
administración de carnitina.
En los cuadros de deficiencia de carnitina, tanto

sistémicos como miopáticos, es frecuente que las fibras
de tipo 1 presenten un aumento en la superficie
mitocondrial media y en la DVM, así como abundantes
inclusiones cristalinas y paracristalinas
intramitocondriales , sin afectación significativa de las
fibras tipo II <Morgan-Hughes JA, 1986).
A nivel experimental, Murakami y colaboradores observaron

en la rata Wistar tratada con VP?. (50 mg/kg/día, 28 días)
Discusión 89
un incremento en la superficie mitocondrial media de los

hepatocitos con respecto al grupo control, efecto que no
fué observado cuando el tratamiento tuvo una duración de
7 días (Murakami XC et al, 1990). En los modelos
experimentales de Sugimoto y colaboradores, también sobre
rata Wistar, el VP?. (500 mg/kg/día, 7 días) produjo
alteraciones similares en las mitocondrias de los
hepatocitos, mientras que la carnitina exógena
(200/mg/kg/día, 7 días) normalizó el aspecto
ultraestructural de las mitocondrias hepatocitarias
(Sugimoto T et al, 1987a; Sugimoto T et al, 1987b).
No existen en la literatura médica datos sobre la

superficie mitocondrial media o la DVM en el músculo
esquelético de pacientes tratados con VP?..
Conclusiones 90
CONCLUSIONES
1. En nuestro estudio sobre rata Wistar, el ácido

valproico no ha dado lugar a la aparición de crisis de
insuficiencia hepática aguda de tipo Reye ni a cuadros de
miopatia lipidica.
2a. El ácido valproico ha producido en plasma disminución

de la concentración de carnitina libre e incremento de la
concentración de acilcarnitina de cadenas larga y corta.
2b. En tejido hepático, el ácido valproico ha disminuido

la concentración de carnitina libre y ha incrementado la
de acilcarnitina de cadena larga.
2c. En el músculo sóleo, el ácido valproico ha dado lugar

a un aumento de la concentración de acilcarnitina de
cadena larga.
2d. Con excepción del incremento de la acilcarnitina de

cadena larga en hígado, todas las modificaciones
producidas por el ácido valproico sobre las
concentraciones de carnitina libre y acilcarnitina en
plasma, hígado y músculo sóleo han tenido un carácter
dependiente de la dosis.
2e. La carnitina exógena ha revertido todas las

alteraciones producidas por el ácido valproico sobre las
concentraciones de carnitina libre y acilcarnitina de
cadena larga en plasma, hígado y músculo, mientras que ha
potenciado el efecto del ácido valproico sobre el nivel
plasmático de acilcarnitina de cadena corta.
Conclusiones 91
3a. El ácido valproico no ha producido alteraciones

relevantes ni depósito de material lipidico en hígado,
corazón ni músculo esquelético.
3b. El ácido valproico ha dado lugar a un incremento en

el diámetro de las fibras tipo 1 del músculo sóleo, y en
la densidad de volumen mitocondrial del músculo ELD
<fibras tipo II), efectos que han sido independientes de
la dosis y que han desaparecido tras la administración de
carnitina.
92
FIGURAS
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Resumen 101
RESUMEN
En el ser humano y en animales de experimentación se ha

señalado que el ácido vaiproico produce disminución de
las concentraciones de carnitina libre en plasma y en
diversos tejidos, y que este efecto tiene un carácter
dependiente de la dosis. Asimismo, se ha propuesto que
estos efectos pueden ser revertidos por la administración
de carnitina exógena.
Debido a que la deficiencia de carnitina de cualquier

causa puede producir clinicamente crisis de insuficiencia
hepática aguda de tipo Reye y cuadros de miopatia
lipidica, procesos que se traducen morfológicamente al
menos por el incremento de material lipidico en distintos
tejidos, se ha desarrollado un modelo experimental sobre
rata Wistar para conocer los efectos bioquímicos y/o
morfológicos producidos en plasma, hígado y músculo
esqulético por la administración de ácido valproico, así
como las modificaciones introducidas en estos efectos por
la administración de carnitina ex6gena a los animales
tratados con ácido valproico.
Se establecieron seis grupos de estudio, cada uno con

cinco animales. Uno de los grupos no recibió ninguna
medicación y sirvió de control. Dos de los grupos
recibieron únicamente ácido valproico, a dosis de 15
mg/día y 25 mg/día por vía oral, respectivamente. Otros
dos grupos recibieron estas mismas dosis de ácido
valproico más 10 mg/día de 1-carnitina por vía
intramuscular. Por último, el sexto grupo recibió
únicamente 1—carnitina, a una dosis de 10 mg/día por vía
intramuscular.
Resumen 102
La fase experimental tuvo una duración de 90 días.
Los resultados más destacables obtenidos tras el estudio

bioquímico y/o morfológico de las muestras de plasma,
hígado, músculo esquelético y corazón han sido los
siguientes:
1. El ácido valproico no ha producido crisis de

insuficiencia hepática aguda de tipo Reye ni cuadros de
miopatia lipidica.
2. Desde el punto de vista bioquímico, el ácido valproico

ha disminuido la concentración de carnitina libre en
plasma e hígado, sin modificar estos niveles en músculo.
Por otra parte, en los tres compartimentos ha
incrementado la concentración de acilcarnitina de cadena
larga y el cociente acilcarnitina/carnitina libre, aunque
sólo en plasma ha producido aumento del nivel de
acilcarnitina de cadena corta. El ácido vaiproico no ha
modificado las concentraciones de carnitina total en
plasma, hígado ni músculo.
Con excepción de la acilcarnitina de cadena larga en
hígado, las alteraciones bioquímicas secundarias al
efecto del ácido valproico sobre el metabolismo de la
carnitina han tenido un carácter dependiente de la dosis.
Todas las alteraciones bioquímicas producidas por el

ácido valproico sobre las concentraciones de carnitina
libre y acilcarnitina en plasma, hígado y músculo sóleo
han sido revertidas por la administración de carnitina
exógena, excepto en lo relativo a la acilcarnitina de
cadena corta en plasma.
Resumen 103
3. Desde el punto de vista anatomopatológico con

microscopia óptica, el ácido valproico no ha producido
alteraciones relevantes ni depósito de material lipidico
en hígado, corazón ni músculo esquelético. A nivel
morfométrico, el ácido vaiproico ha dado lugar a un
incremento en el diámetro de las fibras tipo 1 del
músculo sóleo, efecto que ha sido independiente de la
dosis y que ha desaparecido tras la administración de
carnitina exógena.
4. Desde el punto de vista anatomopatológico con

microscopia electrónica, el ácido valproico no ha
producido alteraciones relevantes ni depósito de material
lipidico en los músculos sóleo y extensor largo de los
dedos. A nivel morfonétrico, el ácido valproico ha dado
lugar a un incremento de la densidad de volumen
mitocondrial en el músculo extensor largo de los dedos
(fibras tipo II), mientras que no ha modificado este
parámetro en el músculo sóleo (fibras tipo 1). El efecto
sobre el músculo extensor largo de los dedos ha sido
independiente de la dosis y ha sido revertido por la
Las conclusiones más destacables del estudio se pueden

resumir señalando que el ácido valproico produjo, con
carácter dependiente de la dosis, una disminución
significativa en los niveles de carnitina libre en plasma
e hígado, sin modificar de forma importante estos niveles
en el músculo sóleo; que estas alteraciones bioquímicas
no se tradujeron morfológicamente en acumulación de
material lipidico en hígado, músculo esquelético ni
corazón, y que la administración de carnitina exógena
Resumen 104
permitió revertir la mayor parte de los efectos que

produjo el ácido valproico sobre el metabolismo de la
carnitina.
Anexo 1 105
LIIEXO 1
1. características del músculo esquelético

en relación con el metabolismo lipídico
El metabolismo de los lípidos tiene una importancia

decisiva para el funcionamiento adecuado de los sistemas
musculares debido a que los lípidos constituyen el
principal sustrato para la producción de energía tanto en
reposo como durante la contracción. Además, los lípidos
constituyen componentes esenciales de las estructuras de
membrana celulares y subcelulares cuya integridad es
esencial para el funcionamiento normal (Ontko JA, 1986).
El metabolismo celular de los lípidos está en íntima

relación con el de los carbohidratos, proteínas y ácidos
nucleicos, junto con minerales, vitaminas y otras muchas
moléculas de bajo peso molecular, de forma que la
modificación o alteración de cualquiera de los múltiples
procesos implicados va a dar lugar a efectos secundarios
a diferentes niveles. En este contexto, los cuerpos
cetónicos (acetoacetato y beta-hidroxibutirato) son
considerados como lípidos debido a que estos compuestos
altamente energéticos constituyen el producto final de la
oxidación de los ácidos grasos en el hígado y se
introducen en la circulación para alcanzar los tejidos
extrahepáticos donde son eficazmente utilizados (Ontko
JA, 1986)
I.A. Comt,osición lipidica del músculo
Aproximadamente, el músculo esquelético constituye el 42%

Anexo 1 106
del peso del cuerpo humano, superando con mucho al

segundo tejido en cuanto a peso, el tejido adiposo, que
normalmente constituye un 18%.
La composición general del músculo esquelético incluye un

20% de proteínas, un 5% de lípidos, un 1% de
carbohidratos, un 2% de otros constituyentes orgánicos e
inorgánicos, y un 72% de agua.
El componente lipidico del músculo esquelético está

representado por los lípidos neutros y por los
fosfolípidos.
Los lípidos neutros en este órgano están constituidos por

triglicéridos (80%), colesterol (15%) y una parte menor
(5%) de diglicéridos, monoglicéridos y otros compuestos
lipídicos. Unicamente el 10% del colesterol está en forma
esterificada, mientras que la mayor parte (90%) lo está
en forma libre. Los fosfolípidos se localizan
predominantemente en las estructuras de membrana. Los
principales tosfolipidos que se encuentran en el músculo
esquelético son, por este orden, fosfatidilcolina,
fosfatidi letanolamina, fosfatidilinositol y
fosfatidilgijoerol. También existen cantidades
relativamente importantes de colina y etanolamina,
mientras que son mucho menores las cantidades de
fostatidilserina, esfingonielina, lisofosfatidilcolina,
ácido fosfatidico y fosfatidilglicerol. Los ácidos grasos
más abundantes en los fosfolipidos del músculo
esquelético son palmítico, esteárico, oléico, linoléico
y araquidónico. No obstante, son los ácidos grasos de los
triglicéridos (palmítico, oléico y linoléico) los que
mejor reflejan la composición plasmática de ácidos grasos
libres (FFA) así como el contenido de ácidos grasos de la
Anexo 1 107
dieta, que representan los precursores del contenido

intracelular de FFA en el músculo esquelético.
I.B. Cantación de unidos nor el músculo

esquelético
Las moléculas procedentes del plasma se introducen en las

células musculares atravesando las propias células
endoteliales o bien filtrándose a través de los poros que
existen entre estas células y difundiendo hasta el
liquido intersticial que rodea a las fibras musculares.
Los lípidos, que son muy solubles en la bicapa de las
estructuras de membrana, utilizan preferentemente la
primera vía mientras que las moléculas hidrosolubles de
bajo peso molecular, como los cuerpos cetónicos, utilizan
principalmente la segunda. Parece claro que la célula
endotelial participa activamente en el transporte de los
FFA al interior de las células musculares, teniendo en
cuenta la afinidad de los mismos por las membranas
bicapa, su escasa hidrosolubilidad y su rápida
desaparición de la circulación (Spector A, 1971).
Los lípidos atraviesan la membrana plasmática mediante 7

posibles mecanismos:
1. Difusión simple: Utilizada como mecanismo único por

los ácidos grasos de cadenas media (6-10 0) y corta (2-
4 0), y también por los cuerpos cetónicos. Los LOFA
pueden atravesar la membrana plasmática mediante difusión
aunque no como mecanismo único.
Anexo 1 108
2. Transferencia por colisión: Mecanismo importante para

la introducción del colesterol de las lipoproteinas
(Miller KM et al, 1983)
3. Difusión lateral en las membranas: Utilizada por los

LOFA (Scow RO, 1980).
4. catálisis enzimática en la membrana plasmática con

difusión de los productos de reacción: La reacción
clásica es la hidrólisis que produce la lipoproteina
lipasa sobre los triglicéridos de las lipoproteinas de
densidad baja y muy baja, hidrólisis que da lugar a la
liberación de FFA y glicerol. Los LOFA difunden
posteriormente a través de la membrana plasmática
muscular (Nilsson-Ehle P et al, 1980).
5. Transferencia mediada por receptor de un factor

ligador unido a una proteína plasmática transportadora:
Mecanismo utilizado por los LOFA unidos a albúmina
(Weisiger R et al, 1981).
6. Fijación a receptor y endocitosis de macromoléculas:

Mecanismo importante para las lipoproteinas de baja
densidad y que permite la captación por el músculo de
colesterol procedente del hígado (Goldstein JL et al,
1983)
7. Endocitosis inespecifica: Posiblemente es un mecanismo

de muy poca operatividad en la captación intracelular de
lipidos.
Anexo 1 109
1.0. Metabolismo lipídico en el músculo
Los procesos básicos del metabolismo lipidico

intracelular son <1) activación de los ácidos grasos y
cuerpos cetónicos; (2) oxidación de los ácidos grasos y
cuerpos cetónicos; (3) síntesis de triglicéridos,
fosfolipidos y otros ésteres de ácidos grasos, y (4)
hidrólisis de estos ésteres lipidicos.
La activación de los LOFA es imprescindible para el

metabolismo de los ácidos grasos; los acil—CoA
resultantes de esta activación sufren oxidación en la
mitocondria y producen la energía necesaria para la
contracción muscular. Los procesos intramitocondriales a
este respecto son la beta—oxidación de los acil—CoA de
ácidos grasos hacia acetil—CoA, la activación y
conversión de los cuerpos cetónicos en acetil—CoA, y la
combustión completa de los grupos acetilo en el ciclo del
ácido cítrico de Krebs. La mayor parte de la energía
celular procede de estos procesos metabólicos.
Por otra parte, las reacciones de esterificación dan

lugar a la síntesis de triglicéridos, que son almacenados
en forma de glóbulos lipidicos en el citosol, y de
fosfolípidos de membrana. La proporción de FFA que es
esterificada es mínima en comparación con la que sufre
oxidación. No obstante, la, esterificación de ácidos
grasos es vital para la función energética celular y para
la biogénesis de membranas. Por un lado, los
triglicéridos actúan como reservorio de ácidos grasos que
pueden ser utilizados en su momento para la producción de
energía a través de la oxidación. Por otro, la síntesis
de triglicéridos permite eliminar el exceso de FFA y de
acil—CoA de cadena larga, compuestos que tienen caracter
Anexo 1 110
tóxico cuando se acumulan. La síntesis de fosfolipidos,

por su parte, es esencial para el mantenimiento de las
estructuras de membrana celulares (Belí PM et al, 1981).
II. Carnitina
n.A. Características aenerales
El ácido 3—hidroxi-4—N-trimetil-aminobutirico (1-

carnitina) es un cofactor esencial del metabolismo de los
ácidos grasos que fué descubierto en el músculo
esquelético en 1905 y cuya fórmula fué establecida en
1927. La acción que desempeña permaneció en el terreno de
lo desconocido hasta que Fraenkel observó que la
carnitina era acetilada enzimaticamente por el acetil—
CoA, y Fritz demostró que la carnitina estimulaba la
oxidación de los ácidos grasos por homogenados de hígado
(citado por Enqel AG, 198Gb). Posteriormente se
estableció que la carnitina actúa como transportador de
grupos acilo—graso de cadena larga hacia el interior de
la mitocondria donde sufren beta—oxidación.
En los tejidos humanos y de animales superiores, la

carnitina se encuentra como isómero 1 metabólicamente
activo, y procede de sintesis endógena y de aporte
nutricional.
Su fórmula química estructural es la siguiente:
CH3
~1
OH--CH--CH2-N--CH3
CH2 CH3
coO
Anexo 1 111
En España está comercializada como 1-carnitina (Carnicor,

Laboratorios Sigma-Tau> en forma de ampollas inyectables
por vía intramuscular, solución al 30% y viables
bebibles, recomendando el fabricante la administración de
una dosis para el adulto de 1 a 5 g/dia según la
indicación.
La determinación de las distintas formas de carnitina

(libre, esterificada y total) en plasma, tejidos y orina
se realizó inicialmente mediante la técnica radioinétrica
enzimática descrita por Cederbíad y Lindstedt en 1972
(Cederbíad G et al, 1972), técnica que fué modificada
posteriormente en 1976 (McGarry JD et al, 1976). Más
tarde se introdujeron las técnicas de croxnatograf la en
columnas y de espectrometria de masas (Bieber L et al,
1986)- Muy recientemente se ha propuesto un método de
tipo radio-enzimático para la determinación de 1
carnitina y acilcarnitinas cuya sensibilidad alcanza los
10 mgmol/L utilizando 10 microlitros de plasma u orina,
o bién una muestra tisular de 10 mg (De Sousa O et al,
1990)
II.B. Metabolismo de la carnitina
II.B.l. Síntesis endógena
La 1—carnitina se sintetiza endógenamente a partir de la

lisina y la metionina, a través de los productos
intermedios epsilon-N-trimetil-lisina, beta-hidroxi—
epsilon-N-trimetil-lisina, gamma-trimetil—
aminobutiraldehido y gamma-butirobetaina o
desoxicarnitina (Rebouche CJ et al, 1980a).
-
Anexo 1 112
El proceso sintético se inicia con la metilación de la

lisina unida a proteínas dando lugar a epsilon—N—
trimetil—lisina. Las enzimas biosintéticas son
citosólicas con excepción de la epsilon—N—trimetil—lisina
hidroxilasa que es mitocondrial (Rebouche CJ et al,
1980b>. En el ser humano, la reacción final del proceso
sintético es la hidroxilación de la desoxicarnitina por
la gamina—butirobetaina hidroxilasa, reacción que tiene
lugar en hígado, riñón y cerebro pero no en músculo
cardiaco ni esquelético (Rebouche CJ et al, 192Da). A
diferencia del ser humano, en el rifx6n de la rata no
existen las enzimas necesarias para la síntesis de
carnitina a partir de N-trimetil-lisina (Guder WC et al,
1990)
Con respecto al resto de los tejidos, existe un mecanismo

de transporte intertisular de los precursores de la
carnitina de manera que, por ejemplo, la epsilon—N—
trimetil-lisina liberada por el músculo (el órgano que
posee mayor cantidad de este precursor de la carnitina)
hacia el torrente sanguíneo es captada en su mayor parte
por el riñón y convertida en gamma—butirobetaina y
carnitina mediante actividad de beta—hidroxilasa, aunque
parte de la desoxicarnitina sintetizada en el riñón es
transportada al hígado y convertida en carnitina en este
órgano. Por último, la carnitina sintetizada en estos
órganos es enviada de nuevo al plasma de donde la captan
los músculos mediante un proceso de difusión—intercambio
con desoxicarnitina (Siliprandi N et al, 1989).
En el momento actual no existen datos precisos sobre las

concentraciones de desoxicarnitina en los diferentes
tejidos, sangre y orina, aunque recientemente se ha
introducido un nuevo método que permite valorar
Anexo 1 113
cantidades en picomoles (Noel H et al, 1984).
Para la actividad óptima de la epsilon-N-trimetil—lisina

hidroxilasa y la gamma—butirobetaina hidroxilasa son
importantes el ácido ascórbico, el Fe2~, el 02 y el ácido
alfacetoglutárico (Lindstedt O et al, 1970) - A su vez, la
piridoxina es cofactor de la aldolasa que fragmenta la
epsilon—N-trimetil—lisina en gamma—trimetil—
aminobutiraldehido y glicina (Dunn WA et al, 1982>, y en
la rata se ha demostrado que es necesaria para la
biosíntesis endógena de la carnitina (Cho YO et al,
1990). No obstante, al menos en la rata, la trimetil—
lisina no parece ser imprescindible para la biosíntesis
de carnitina (Davis AT, 1990).
En el ser humano, la síntesis de carnitina es de 100—200
pmol/día (Engel AG et al, 1984).
En la rata y el ser humano no existen datos que indiquen

la existencia de degradación intracelular de carnitina
(Rebouche CJ et al, 1984a y b).
II.B.2. Aporte exógeno y farmacocinética
En relación al aporte exógeno de carnitina, los productos

cárnicos, especialmente las carnes rojas, y los productos
lácteos constituyen la principal fuente nutricional de 1
carnitina (Rudman D et al, 1977). La dieta normal
proporciona 300-400 umol/dia de carnitina (Guarnieri G et
al, 1987).
Aunque hasta el momento presente no se han establecido

las contribuciones relativas de la síntesis endógena y el
aporte exógeno en relación al mantenimiento de los
-
Anexo 1 114
depósitos tisulares de carnitina, probablemente el aporte

nutricional es importante en el lactante debido a que los
niveles tisulares relativamente bajos de gamma—
butirobetaina hidroxilasa que se observan de forma
fisiológica durante esta fase de la vida limitan la
biosíntesis endógena de carnitina (Rebouche CJ et al,
1980a)
En un estudio efectuado en 1986 en voluntarios sanos, se

observó que existe una relación significativa entre la
cantidad de carnitina ingerida y la concentración total
de carnitina en plasma, mientras que no parece existir
esta relación entre la carnitina de la dieta y la
concentración de carnitina en músculo esquelético (Lennon
DLF et al, 1986).
II.B.2.a. Absorción y biodisponibilidad
Tras la ingestión oral de 1—carnitina exógena se produce

su absorción en yeyuno e íleon mediante un mecanismo
activo saturable dependiente de la bomba sodio—potasio y
contra gradiente de concentración; también se absorbe en
el colon, aunque en este caso a través de difusión pasiva
(Hamilton ¿1W et al, 1986>. No obstante, recientemente se
ha postulado por el mismo grupo de investigación la
inexistencia de un mecanismo activo de transporte de la
carnitina en la membrana del enterocito al observar
únicamente difusión pasiva de la misma a través del borde
en cepillo de las células yeyunales en la rata (Li BU et
al, 1990>. Además, parece que la difusión pasiva a través
del componente lipidico de la barrera intestinal es más
rápida para los ésteres de la carnitina (Marciani P et
al, 1991)
Anexo 1 115
Parte de la carnitina administrada por vía oral sufre

degradación bacteriana en el sistema gastrointestinal y
algunos de los productos de degradación son absorbidos y
eliminados a través de orina y heces (Rebouche CJ et al,
1991)
La absorción intestinal de la 1-carnitina y su aparición

en sangre son procesos muy lentos, lo que ha sido
explicado por el parecido estructural de la 1—carnitina
con los sustratos del transportador de aminoácidos, por
su posible unión a membranas intracelulares, y por el
hecho de que la mayor parte de la carnitina absorbida por
el intestino se acumula en el hígado liberándose
posteriormente de forma lenta hacia la circulación
(Gudjonsson H et al, 1985).
El mismo mecanismo de captación activa contra gradiente

de concentración y de carácter saturable observado en los
enterocitos ha sido demostrado en otras muchas células y
tejidos, incluyendo miocardio, músculo esquelético,
fibroblastos, nefronas y hepatocitos (Shaw RD et al,
1983)
Este mecanismo activo puede ser útil para prevenir las

pérdidas de carnitina en los estados de ayuno y también
para la absorción de las dosis farmacológicas que se
administran en los distintos estados de deficiencia de
carnitina; además, tiene un denominador común en Las
distintos tejidos donde actúa: su actividad es óptima
para concentraciones plasmáticas de carnitina de orden
fisiológico (Herrera—Carranza ¿1 et al, 1989).
Anexo 1 116
II.B.2.b. Distribución
El volumen de distribución aparente de la 1-carnitina

administrada por vía intravenosa es del 26% expresado
como porcentaje del peso corporal (Cederbíad G, 1984).
Existe una redistribución continua de la carnitina entre

el plasma y los eritrocitos, de manera que el porcentaje
aproximado de carnitina total en los hematíes es el 37+9%
del total de carnitina en la sangre (Borun PR, 1987). No
obstante, la cantidad del precursor de la carnitina
trimetil—lisina en los eritrocitos es en la rata 10 veces
mayor que en el resto de los tejidos (Mizobuchi M et al,
1990)
La cantidad total de carnitina en un adulto de 70 kg de

peso es aproximadamente de 100 mmol. El 98% de esta
cantidad se localiza en el músculo esquelético y
cardiaco, el 0,6% en el liquido extracelular y el 1,6% en
los tejidos renal y hepático <Engel AG, 1986b).
Los niveles normales de carnitina libre y total en

plasma, músculo esquelético e hígado en un adulto normal
son los siguientes (Rebauche CJ et al, 1983>:
Anexo 1 117
Carnitina libre Carnitina total
Plasma (nmol/mL)
Varón 46,8±10,0 59,3±11,9

Mujer 40,1±9,5 51,5+11 6
Músculo esquelético (nmol/mg NCP)
Varón 18,0±8,1 20,5±8,4

Mujer 17,3±5,3 20,1±5,3
Hígado (nmol/mg NCP)
varón y mujer 7,3 10,2
No obstante, los niveles de carnitina en plasma, tejidos

y orina varian en relación con la edad, de manera que los
valores más bajos los presentan los niños (Deufel T,
1990>
En la rata, los niveles circulantes de carnitina se

correlacionan fuertemente con las concentraciones de
carnitina en músculo esquelético y cardiaco, aunque
únicamente para niveles de 26—69 pM y no para
concentraciones superiores de carnitina en plasma. Por su
parte, los niveles de carnitina en higado y riñón sS.
Anexo 1 118
presentan una correlación mantenida con los plasmáticos

para cualquier valor de estos últimos (Rebouche CJ,
1990)
De todas formas, los niveles plasmáticos y la

distribución de la carnitina están influidos por diversos
factores hormonales. Existe una relación inversa entre la
concentración de estradiol y la concentración plasmática
de carnitina sin que se modifiquen los niveles de esta
última en los eritrocitos (Boruin PR, 1980>. Se ha
demostrado que la insulina y el glucagón influyen en los
niveles plasmáticos de carnitina debido a que, para
niveles adecuados de glucagón, se produce un incremento
en la retención de carnitina por parte del hígado
mientras que la insulina invierte este efecto aumentando
la concentración plasmática de carnitina (Kispal G et al,
1987)
Por su parte, los glucocorticoides también influyen sobre

la distribución de la carnitina de manera que incrementan
las concentraciones intracelulares de la misma, debido
probablemente a que aumentan el número de transportadores
de la carnitina a nivel de la membrana citoplásmica
(Molstad P et al, 1979).
La vida media de la 1—carnitina observada en voluntarios

sanos y en pacientes con coronariopatia oscila entre 2 y
15 horas tras la adinistración de una dósis única oral o
intravenosa de 0.5-2 g de 1-carnitina (Cederbíad G,
1984)
Anexo 1 119
II.B.2.c. Metabolismo y eliminación
Como ya hemos señalado, la carnitina no es metabolizada

a nivel intracelular por lo que se elimina en forma de
carnitina libre y de ésteres de la carnitina a través de
la orina y las heces «1%). En el estado fisiológico, el
umbral de excreción urinaria para ambas formas de
carnitina está muy próximo al nivel sérico de carnitina
(aproximadamente 50 gM), lo que sugiere que este umbral
es el mecanismo que regula el nivel sérico de la
carnitina <Engel. AG et al, 1981). La eliminación de
carnitina libre y esterificada está equilibrada de manera
que existe una correlación negativa de carácter
exponencial entre el cociente de ambas formas de
carnitina en el suero y el observado en el aclaramiento
urinario de las mismas <Ohtani Y et al, 1984). En adultos
normales la cantidad diaria de carnitina total eliminada
diariamente por orina oscila entre 100 y 400 umol,
dependiendo de la ingesta; la fracción de carnitina libre
eliminada a través de orina en un adulto normal oscila
entre 175±80,7 pinol/ala y 172,3±23,4 pinol/día según el
método utilizado, espectrofotométrico o radioquimico,
respectivamente (Herrera—Carranza ¿1 et al, 1989).
Recientemente se ha demostrado en la rata la eliminación

de carnitina libre y esterificada a través de la bilis,
posiblemente menos del 1% de carnitina total al día
(Hamilton JJ et al, 1987).
11.0. Mecanismo de acción
Las dos funciones principales de la 1—carnitina son la

transferencia de LCFA a través de la ineinbrana interna
Anexo 1 120
mitocondrial y la modulación del cociente CoA/acil—CoA a

nivel intramitocondrial <Bremer ¿1, 1983). otra función
importante de la carnitina en el metabolismo lipidico es
la eliininación de residuos acil de cadena corta
producidos en la mitocondria y de compuestos tóxicos
exógenos como los ácidos benzóico, piválico y valproico
(Siliprandi N et al, 1990).
Los LOFA constituyen el principal sustrato para la

oxidación intramitocondrial en el músculo esquelético
tanto en reposo como en ejercicio. La mayor parte de los
LOFA que se introducen en la fibra muscular sufren
oxidación en la matriz mitocondrial aunque una pequeña de
los mismos es esterificada produciendose triglicéridos y
lípidos estructurales (Rahkila P et al, 1980).
La mitocondria constituye autenticamente la “planta” de

producción energética de la célula. A este respecto, su
función básica es la de producir ATP para la contracción
muscular y para otras funciones esenciales como el
transporte iónico y los procesos de biosíntesis (Ontko
JA, 1986)
La mitocondria presenta cuatro compartimentos bien

diferenciados y caracterizados, es decir, la membrana
externa, el espacio intermembrana, la membrana interna y
la matriz.
La membrana externa es permeable para las moléculas de

pequeño tamaño como los sustratos oxidables, nucleótidos
como la coenzima A y el ATP, y otras pequeñas moléculas
esenciales como la carnitina y diversos iones
inorgánicos.
Anexo 1 121
Por otra parte, la membrana interna presenta

permeabilidad de barrera, por lo que la captación de
sustratos oxidables por parte de la mitocondria se
efectúa mediante dos mecanismos:
- Difusión simple: Mecanismo utilizado por los

ácidos grasos de cadenas corta y media, y por los
cuerpos cetónicos. Es un transporte dependiente de
gradiente de concentración, gradiente aportado por el
grado de utilización de estos sustratos en la matriz
mitocondrial.
— Transporte mediado por proteínas transportadoras

específicas: Es el mecanismo utilizado por los LOFA
para atravesar la membrana interna mitocondrial y
alcanzar la matriz.
El transporte de los LOFA a través de la membrana interna

mitocondrial se efectúa en cuatro pasos:
11.0.1. Activación de los LCFA
Se realiza mediante la acil—CoA sintetasa, enzima situada

en la membrana externa mitocondrial y que cataliza la
conversión del LOFA en acil—CoA que queda situado en el
espacio intermembrana de la mitocondria. En la reacción
se utiliza 1 ATP y se libera AMP y pirofosfato (Tanaka T
et al, 1979).
La reacción queda representada por la siguiente ecuación:
CH3(CH2)~COO + ATP + CoASH
CH3(CH2)~C=O + AMP + PP.
5-CoA
Anexo 1 122
La acil-CoA sintetasa ha sido estudiada intensamente en

el hígado, tanto en el retículo endoplásmico del
hepatocito, en donde los acil—CoA producidos se destinan
a la síntesis de triglicéridos y fostolipidos, como en la
membrana externa de las mitocondrias, donde los acil—CoA
constituyen el sustrato para la formación de
acilcarnitina. Se ha considerado razonable asumir que la
acil—CoA sintetasa del retículo endoplásmico es idéntica
a la de la membrana externa de la mitocondria (Tanaka T
et al, 1979>, y que esta enzima debe existir también en
el músculo esquelético <Ontko JA, 1986>.
La acil-CoA sintetasa presenta especificidad en relación

con la longitud de la cadena del ácido graso. La máxima
actividad se obtiene con el ácido palmítico; en segundo
lugar, y en orden descendente de actividad, se sitúan los
ácidos grasos mirístico, laurico, palmitoleico,
linolénico, oléico, decanáico, esteárico, araquidónico,
linoléico y araquidico (Tanaka T et al, 1979).
II.C.2. Formación de acilcarnitina
La mitocondria posee tres aciltransterasas, las carnitina

palmitoiltransferasas 1 y II (CPT 1 y II) y la carnitina
acetiltransferasa <CAT)I.
La CPT 1 está situada en la superficie externa de la

membrana interna mitocondrial y cataliza la conversión de
acil-CoA en acilcarnitina utilizando una molécula de
carnitina y desprendiendo CoA.
La reacción queda representada por la siguiente ecuación:

Anexo 1 123
CH3<CH2)~C=O + carnitina
5- CoA
CH3<CH2)~CO + CoASH
carnitina
Los grupos de acilcarnitina quedan situados en el espacio

intermembrana a la espera del siguiente paso.
La determinación de la especificidad de longitud de

cadena en la CPT 1 es compleja debido a su inhibición por
el sustrato, inhibición que es mayor a medida que se
incrementa la longitud de la cadena carbonada del grupo
acil. No obstante, la inhibición de la CPT 1 por el
sustrato puede ser un mecanismo útil para impedir la
transferencia excesiva de grupos acil al interior de la
mitocondria cuando existe un aflujo elevado de EPA hacia
la célula, evitando de esta forma el acúmulo de grupos
acil—CoA de larga cadena en el interior de la matriz
mitocondrial (Bremer J, 1983). Este tipo de acúmulo daría
lugar a una disminución en la cantidad de CoA libre
disponible para la beta-oxidación, la oxidación del
piruvato y la formación de succinil—CoA, produciendo
además un efecto inhibidor por su acción detergente
(Bremer ¿1, 1983>.
La CPT 1 también es inhibida por el malonil—CoA (McGarry

JD et al, 1978; Bremer ¿1, 1990; Kashfi K et al, 1991),
aunque en el músculo no se ha determinado la importancia
de esta inhibición debido a que la síntesis de ácidos
grasos es escasa en este órgano, a diferencia del hígado
(Mccarry JD et al, 1980).
Por otra parte, los esteroides anabolizantes estimulan la

Anexo 1 124
CPT 1 en la rata (Guzman M et al, 1991).
11.0.3. Transiocación de la acilcarnitina
La evidencia de que existe una transiocasa específica que

transporta la acilcarnitina a través de la membrana
interna jaitocondrial fué obtenida en 1975 (Pande 5V,
1975; Ramsay RR et al, 1975).
La acilcarnitina producida por la acción de la CPT 1 y

situada en el espacio intermembrana es transportada al
interior de la matriz mitocondrial por acción de la
acilcarnitina transiocasa, intercambiandose por carnitina
de la matriz. La afinidad de fijación de la translocasa
es mayor para la acilcarnitina que para la carnitina
libre. Su Km disminuye a medida que aumenta la longitud
de la cadena del grupo acil por lo que esta enzima
transporta preferencialmente las acilcarnitinas de larga
cadena (Pande SV et al, 1976).
Hasta el momento no existe evidencia de que la

acetilcarnitina sea transportada por una translocasa
diferente por lo que la acilarnitina translocasa también
puede estar implicada en le eliminación de
acetilcarnitina de la matriz mitocondrial en condiciones
de aumento del nivel de acetil—CoA en la matriz.
II.C.4. Formación de grupos acil—CoA de cadena larga
Una vez en la matriz mitocondrial, la acilcarnitina de

cadena larga es convertida en el correspondiente acil—
CoA por la CPT II que se localiza en la supeficie interna
Anexo 1 125
de la membrana interna de la mitocondria.
Todavía no ha sido establecido si las enzimas CPT 1 y CPT

II constituyen la misma proteína o bien son diferentes
proteínas. A este respecto se han obtenido datos
contradictorios debido probablemente a que las proteínas
de membrana son muy dificilmente aislables (Bergstrbm JD
et al, 1980) - No obstante recientemente se ha señalado
que, en cada tejido concreto, ambas enzimas son
diferentes (MoGarry JD et al, 1991).
II.C.5. Formación de acetil-carnitina
Parte del acetil—CoA que se introduce en el ciclo de

Krebs procede del reservorio citosólico de grupos
acetilo, que se introducen en la mitocondria en forma de
acetilcarnitina (Kispal O et al, 1991). La reacción está
mediada por la CAT, un monómero de 60.5 kDa que presenta
actividad máxiina en presencia de propionil—CoA y para un
pH de 8.7 (Bloisi W et al, 1990>.
En resumen, la carnitina, junto con las carnitina

aciltransferasas y la carnitina—acilcarnitina
translocasa, desempeña un papel clave en la producción de
energía en el músculo esquelético y otros órganos porque
es imprescindible para que los LCFA, que constituyen con
mucho el principal sustrato lipidico oxidable por la
mitocondria, atraviesen la membrana interna mitocondrial
y puedan alcanzar la matriz para introducirse en la
secuencia de la beta—oxidación y generar acetil—CoA para
su utilización en el ciclo del ácido cítrico con la
consiguiente producción de ATP. En última instancia, la
carnitina permite la regulación de la concentración de
Anexo 1 126
CoA intramitocondrial y el control del cociente CoA/acil—

CoA en el interior de la mitocondria (Engel AG, 198Gb).
Existen otros dos mecanismos extramitocondriales para la

oxidación de los ácidos grasos en los que no es necesaria
la participación de la carnitina:
a. Los ácidos grasos de cadena muy larga son oxidados

exclusivamente, al menos en sus fases iniciales, en los
peroxisoinas (Jakobs BS et al, 1991). Los peroxisomas
pueden captar grupos acil—CoA de ácidos grasos de cadena
muy larga (C22 a 0=6> produciendose la beta—oxidación de
los mismos con formación de acetil—CoA.
La existencia de este mecanismo de oxidación en el

músculo no ha sido establecida y, además, no se observa
un cuadro de miopatia lipidica en las dos enfermedades en
las que existe un trastorno de la oxidación peroxisomal
de los ácidos grasos, es decir, el síndrome de Zellweger
y la adrenoleucodistrofia (Moser AE et al, 1984). No
obstante, a través de la carnitina octanoiltransferasa
peroxisosomal, la carnitina puede desempeñar un papel en
este mecanismo extramitocondrial de oxidación lipidica
debido a que realiza la transferencia de grupos acil—
ácido graso de cadena acortada por la beta—oxidación
peroxisosomal desde el interior al exterior de los
peroxisomas hepáticos, de manera que su oxidación pueda
ser completada posteriormente por la mitocondria (Bremer
¿1, 1983>.
Recientemente, se ha sugerido que los peroxisomas oxidan

los ácidos grasos de cadena media a través de un
mecanismo independiente de la carnitina pero que la
oxidación de los ácidos grasos de cadena larga si
Anexo 1 127
requiere la participación de la misma (Buechíer KF et al,

1990)
b. En el hígado, las enzimas microsomales catalizan la

omega—hidroxilación de diversos ácidos grasos que son
oxidados posteriormente hacia ácidos dicarboxílicos
mediante enzimas solubles o microsomales (Bj~rkhem 1 et
al, 1970).
11.0. Síndromes nor deficiencia de carnitina
Los síndromes por deficiencia de carnitina (500) se

definen como las situaciones clínicas en las que el nivel
intracelular de carnitina libre es insuficiente para que
la carnitina pueda llevar a cabo sus dos principales
funciones, es decir, el transporte de los LOFA a través
de la membrana interna de la mitocondria y la modulación
del cociente intramitocondrial CoA/acil—CoA (Engel AG,
1986b)
11.0.1. Mecanismos patogénicos de la deficiencia de

carnitina en los SDC:
a. Degradación excesiva de carnitina: Como ya hemos

señalado, no existe evidencia convincente del la
degradación intracelular de la carnitina en personas
sanas ni tampoco en pacientes con SDC.
b. Deficiencia nutricional de carnitina: Se acepta

habitualmente que la deficiencia nutricional de
carnitina, por si misma, no da lugar a un SDC a menos
que esté comprometido el metabolismo de la carnitina
Anexo 1 128
por algún otro mecanismo, como la disminución de la

biosíntesis hepática de carnitina en la cirrosis
(Rudman D et al, 1977> o en el prematuro (por
inmadurez hepática) (Schmidt—Sommerfeld E et al,
1982>. No obstante, la administración de dietas
hipocalór itas a pacientes obesos ha producido
hipocarnitinemia (Davis AT et al, 1990).
c. Disminución de la biosíntesis de carnitina:

No es un mecanisino patogénico que haya sido claramente
demostrado en pacientes con SDC, aunque ha sido
propuesta en algunos casos la disminución en la
síntesis de carnitina a partir de epsilon—N-trimetil—
lisina (Coates PM et al, 1984>.
d. Alteración en el control renal de la carnitina:

Aunque diversos pacientes pueden presentar pérdidas
excesivas de carnitina por orina junto con algún otro
trastorno del metabolismo de la carnitina, con excepción
del síndrome de Fanconi renal (Netzloff ML et al, 1981>,
no se acepta que la eliminación excesiva de carnitina
por orina, por sí misma, pueda ser causa de un SDC.
e. Eliminación excesiva de ésteres de carnitina de

células y tejidos: La salida excesiva de ésteres de
carnitina de células musculares y hepáticas constituye
un importante mecanismo de depleción de carnitina en
las acidurias orgánicas. Esta alteración se debe al
acúmulo intramitocondrial de diferentes acil—CoA, lo
que incrementa la formación de acilcarnitinas que
salen de la mitocondria y la célula y son eliminadas
por el riñón. Mientras que el aporte de carnitina
libre es adecuado, los acil—CoA t6xicos son eliminados
en forma de ésteres de carnitina, permaneciendo
Anexo 1 129
constante el nivel de CoA y el cociente CoA/ acil—CoA

intramitocondrial. No obstante, cuando se hacen
insuficientes los mecanismos compensadores se acumulan
los acil—OoA y se compromete todavía inás el
metabolismo energético porque la depleción de
carnitina impide el transporte de LOFA al interior de
la nxitocondria para la beta-oxidación.
f. Alteración en el transporte activo de la carnitina en

células y tejidos: Comentado previamente a propósito del
primer caso descrito de SDC miopático (Treem WR et al,
1989; Stanley CA et al, 1991>.
II.D.2. Formas clínicas de los SDC
II.D.2.a. SDC miopático
El primer SDC miopático fué identificado en 1973 cuando

Engel y Angelini observaron que los homogenados de
músculo esquelético de una paciente con debilidad
muscular progresiva y miopatía lipidica oxidaban los LOFA
con una lentitud excesiva, lentitud que se corregía al
añadir carnitina (Engel AG et al, 1973>. En estudios
posteriores realizados en esta paciente se detectó una
alteración en el mecanismo de transporte de la carnitina
al interior del músculo esquelético <Rebouche CJ et al,
1984a). Desde entonces se han publicado más de un
centenar de pacientes con esta forma restringida de SDC.
Todos los pacientes presentan debilidad muscular,
deficiencia de carnitina en el músculo esquelético y
miopatía lipidica.
La miopatia lipidica se define a nivel anatomopatológico

Anexo 1 130
por la presencia de un incremento en la cantidad de

lípido que presenta el músculo, incremento que constituye
la alteración morfológica predominante y que se puede
observar claramente con microscopia óptica utilizando la
tinción de Sudán Rojo para lípidos neutro. El acúmulo de
lípido se correlaciona con la capacidad oxidativa de las
fibras musculares, de forma que es más intenso en las
fibras tipo 1, menor en las de tipo hA y escaso en las
de tipo lIC. No se observan en las biopsias de estos
pacientes fibras necróticas ni en regeneración a menos
que se haya producido recientemente una crisis de
mioglobinuria.
A nivel ultraestructural, los glóbulos lipidicos
presentan un tamaño que oscila entre una y varias micras,
no están revestidos por membrana y se acumulan en filas
paralelas entre las miofibrillas o bién a nivel
subsarcolemal. También con microscopia electrónica se
pueden observar alteraciones mitocondriales consistentes
en un incremento de su número o tamaño, presencia de
inclusiones intramitocondriales y borramiento de crestas.
A nivel bioquímico, los glóbulos lipidicos están
compuestos predominantemente por triglicéridos.
La mayor parte de las miopatías lipidicas observadas
hasta el momento se han asociado a un trastorno del
metabolismo de la carnitina con la consiguiente
alteración en la beta—oxidación de los ácidos grasos,
aunque se han detectado alg~anos casos secundarios a
alteraciones mitocondriales sin relación con la
carnitina; cuadros de ictiosis congénita autosómica
recesiva con depósito de lípido neutro en músculo
esquelético y otros muchos órganos (enfermedad de
Chanarin) cuya etiopatogenia es desconocida y no parece
estar relacionada con una deficiencia de carnitina; casos
de iniopatia lipidica autosóinico doininante sin
Anexo 1 131
alteraciones en el metabolismo de la carnitina (Askanas

51 et al, 1985), y cuadros experimentales de miopatia
lipidica tras la administración de aceite bromado
(Brownell AKW et al, 1978).
Otras alteraciones clínicas que pueden presentar los

pacientes con SDC miopático son incremento en los niveles
plasmáticos de enziinas musculares (50%>, cardiomiopatia
(21%>, crisis recidivantes de mioglobinuria <12%),
debilidad y inialgias al realizar ejercicio <12%).
A nivel bioquímico, la mayor parte de estos pacientes

presentan niveles normales de carnitina en suero y en
hígado, y disininución de la carnitina en el músculo
esquelético.
A este respecto, se ha descrito un cuadro de miopatia

lipídica con deficiencia de carnitina en músculo
esquelético asociada a cardiomiopatia hipertrófica de
carácter familiar (Bautista ¿1 et al, 1990).
También se observado casos de miopatia lipidica

han
asociada a deficiencia de carnitina y a trastornos del
metabolismo del glucógeno (Sugie H et al, 1988; Verity
MA, 1991)
II.D.2.b. SDC sistémico
En 1975 se describió por primera vez un SDC de carácter

sistémico <Karpati O et al, 1975> y desde entonces se han
descrito en la literatura médica al menos una treintena
de casos.
Anexo 1 132
Clinicamente, las alteraciones más frecuentes son la

aparición de crisis de tipo Reye (Sugiyama N et al, 1991>
y la debilidad muscular.
Las crisis agudas del SDC sistémico cursan con estupor
progresivo y coma, aumento en los niveles séricos de
enzimas hepáticas, hepatomegalia, hipoglucemia,
hipoprotrombinemia e hiperamonemia. Estos cuadros se
producen en todos los SDC sistémicos asociados a
acidurias orgánicas y también en defciencias sistémicas
de carnitina no asociadas a otros trastornos metabólicos,
por lo que la deficiencia de carnitina puede, por si
misma, desencadenar este tipo de crisis metabólica.
Desde el punto de vista metabólico, la deficiencia de

carinitina limita la entrada de LOFA en la mitocondria,
lo que da lugar a una menor formación de acetil—CoA y de
cuerpos cetónicos con disminución en la producción de
energía. En esta situación, la célula incrementa la
utilización de aminoácidos de cadena ramificada y de
cuerpos cetónicos como fuentes de energía para aumentar
la gluconeogénesis. De esta forma, aumenta la
concentración intramitocondrial de acil-CoA y disminuye
el cociente CoA/acil—CoA. En condiciones normales la
carnitina mantiene este cociente en equilibrio, con
niveles adecuados de CoA libre, formando ésteres
acilcarnitina que son intercambiados por carnitina
citosólica mediante el sistema de la carnitina—
acilcarnitina translocasa. Los acil—CoA que se acumulan
inhiben múltiples vías metabólicas y su perfil en orina
nos permite conocer el punto del blgueo metabólico
(Stumpf DA et al, 1985).
A nivel anatomopatológico todos los pacientes presentan

miopatia lipidica y, en las autopsia que se han
Anexo 1 133
realizado, se han observado importantes acúmulos de

lípido en músculo, hígado, corazón y riñón (Boudin O et
al, 1976; Ware AJ et al, 1978).
Bioquimicamente, los pacientes presentan disminución de

los niveles de carnitina en músculo esquelético, plasma,
hígado y corazón.
II.D.2.c. Otras formas de SDC
A partir de 1981 se comenzaron a publicar en la

literatura médica casos de SDC asociados a hemodialisis
crónica, caquexia, miopatías crónicas, kwashiorkor y
otras situaciones clínicas que expondremos a
continuaci6n.
II.D.3. Formas etiopatogénicas de SDC
La clasificación más aceptada de los procesos que pueden

cursar con un SDC es la siguiente:
a. SDC secundario a defectos genéticos del metabolismo

intermedio (Rebouche CJ, 1983>
1. Deficiencia de acil-CoA deshidrogenasas
<acidurias orgánicas)
— Deficiencia de acil—COA de cadena larga deshidrogenasa
— Deficiencia de acil—CoA de cadena media deshidrogenasa
— Deficiencia de acil—CoA de cadena corta deshidrogenasa
— Deficiencia de múltiples acil—CoA deshidrogenasas
— Deficiencia de isovaleril—CoA deshidrogenasa
2. Deficiencia de propionil-CoA carboxilasa
3. Deficiencia de metilmalonil—CoA mutasa
4. Deficiencia de beta—hidroxi-beta—metilglutárico liasa
Anexo 1 134
5. Bloqueo de la cadena respiratoria mitocondrial a nivel de

la NADH-ubiquinona reductasa
6. Bloqueo de la cadena respiratoria mitocondrial a nivel de
la succinato—citocroiuo c reductasa
7. Deficiencia de citocromo c oxidasa
8. Deficiencia de ATPasa mitocondrial
9. Deficiencia de carnitina octanoiltransterasa
10. Deficiencia de inetilenetetrahidrofolato reductasa
11. Síndrome de Kearns—Sayre
b. SDC secundario a otros procesos (modificado de Engel AG,

1986>
1. síndrome de Reye idiopático
2. Síndrome de Fanconi renal
3. Insuficiencia renal crónica tratada con
hemodiálisis
4. Nutrición parenteral total en lactantes
prematuros
5. Kwashiorkor
6. Miopatías crónicas de grado intenso
7. Mixedema, hipopituitarismo e insuficiencia
suprarrenal
8. Embarazo
9. Tratamiento con ácido valproico
10. Tratamiento con benzoato sódico
11. Tratamiento con pivampicilina
12. Cirrosis con caquexia (Rudman O et al, 1977)
11.0.4. Diagnóstico y tratamiento de los SDC
Se debe sospechar un SDC, miopático o sistémico, en

cualquier paciente que presente una miopatía lipidica.
Además, se debe descartar este diagnóstico en un paciente
Anexo 1 135
que presente cardiomiopatia hipertrófica con ondas T

picudas en derivaciones precordiales, crisis agudas
recidivantes de tipo síndrome de Reye o bién un
diagnóstico establecido de aciduria orgánica (Brandt NJ,
1984)
Para el diagnóstico de un SDC es esencial la medición

precisa de los niveles de carnitina total y de
acilcarnitinas en tejidas y líquidos tisulares.
Con respecto al tratamiento, a nivel teórico el

tratamiento sustitutivo con carnitina debería ser eficaz
en todos los casos de SDC. No obstante, las respuestas
clínicas y tisulares frente a la administración de
carnitina son divergentes debido a la importante
heterogeneidad clínica y bioquímica de los SDC.
De todas formas, en todos los casos de deficiencia de
carnitina se debe evitar el ayuno, administrar comidas
frecuentes con elevado contenido en carbohidratos y bajo
contenido en grasa, y administrar carnitina.
Las crisis agudas se deben tratar por vía intravenosa
para corregir o prevenir la hipoglucemia con una dosis
inicial de 100 mg/kg de ¡—carnitina seguida de 25 mg/kg
cada 4 a 6 horas (Stumpf DA et al, 1985>. El tratamiento
de mantenimiento consiste en 100 mg/kg/día para lactantes
y niños, y 2 a 4 g/dia para adultos.
La mayor parte de los pacientes con SDC de cualquier tipo

y secundario a cualquier trastorno mejoran clínica y
bioquimicamente al ser tratados con 1—carnitina <Avigan
¿1 et al, 1983; Matsuishi T et al, 1985; Di Donato 5 et
al, 1984b; Chapoy PF et al, 1980; Tripp ME et al, 1981;
Angelini C et al, 1978; Angelini C et al, 1976; Scarlato
G et al, 1977; Prockop LD et al, 1983; Karpati O et al,
Anexo 1 136
1975; Bautista ¿1 et al, 1990)
Hasta el momento no se han observado efectos secundarios

importantes por el tratamiento con 1—carnitina.
II.E. Utilización clínica y experimental de la

carnitina exógena. sus derivados y precursores
II.E.l. En los SDC (Goa Kl et al, 1987)
II.E.1.a. Defectos genéticos del metabolismo intermedio:
En los pacientes con acidurias orgánicas como la

propiónica, metilmalónica e isovalérica, el acúmulo de
acil—CoA de cadena corta en el interior de las
mitocondrias da lugar a un cuadro clínico de debilidad e
incoordinación muscular junto con retraso del crecimiento
(Roe CR et al, 1984). Las concentraciones de carnitina
libre y de acilcarnitina de cadena corta aparecen
disininuidas en el plasma y la orina de estos pacientes
(Di Donato 5 et al, 1984a), por lo que la 1—carnitina
exógena puede disminuir la cantidad de acil—CoA
intramitocondrial al activar la CAT y permitir la salida
de acilcarnitina de la mitocondria.
La administración de 1—carnitina a estos pacientes ha
permitido incrementar las fracciones de acilcarnitina de
cadena corta en plasma y orina con mejoría clínica
significativa (Chalmers RA et al, 1984; Di Donato 5 et
al, 1984a; Roe CR et al, 1983; Roe CR et al, 1984;
Pintos—Morelí G et al, 1990; Mori T et al, 1990;
Matsuishi T et al, 1985; Bernsen PL et al, 1991>, aunque
no en todos los casos (Carroll JE et al, 1980; Seccombe
DW et al, 1982; Seccombe DW et al, 1986).
Anexo 1 137
II.E.l.b. Hemodiálisis
En los pacientes con insuficiencia renal crónica

sometidos a diálisis intermitente prolongada se observa
una disminución del 30%—90% de las concentraciones
séricas de carnitina, con respecto a los controles,
debido tanto a la disminución en la síntesis de carnitina
por parte del riñón como a la pérdida de carnitina en el
liquido de dializado (Rodriguez-Segade 5 et al, 1986).
En el músculo esquelético de pacientes dializados,

incluso pacientes con concentraciones plasmáticas de
carnitina normales, se han detectado bajos niveles de la
inisma relacionados con síntomas de tipo calambres y
astenia (Bohmer T et al, 1978). Por otra parte, la
hiperlípoproteinemia e hipertrigliceridemia que presentan
estos pacientes puede estar en relación con la
hipocarnitinemia, dado el papel que desempeña la
carnitina en el metabolismo de los ácidos grasos en los
tejidos (Borum PR et al, 1986).
La administración oral o IV de 1—carnitina a estos
pacientes eleva las concentraciones musculares de
carnitina hasta niveles normales o superiores a los
normales con atenuación importante de la sintomatología
de tipo muscular e incremento de la activida
electromiográfica (Vacha GM et al, 1985>. No obstante,
otros investigadores no han observado signos objetivos de
mejoría en la fuerza, resistencia o actividad metabólica
del músculo, ni tampoco en la velocidad de conducción
nerviosa, en pacientes en hemodiálisis tratados con 1
carnitina <2 g/día, durante 6 semanas>, a pesar del
aumento del 60% en la concentración muscular de carnitina
(Fagher B et al, 1985>.
—
Anexo 1 138
De todas formas, aunque parece demostrado el valor de la

1—carnitina para la normalización de la homeostasis de la
carnitina en los pacientes sometidos a diálisis (Siami O
et al, 1991), se ha llamado la atención para no utilizar
dosis excesivas, recomendándose la utilización de 15
mg/kg/día (Wanner C et al, 1990).
Con respecto a la hipertrigliceridemia, en diversos

estudios se ha observado la disminución en los niveles de
triglicéridos en los pacientes hemodializados tratados
con 1—carnitina (Vacha GM et al, 1983>, aunque en otros
no se han detectado variaciones y en otros se han
observado incluso aumentos en los niveles de
triglicéridos (Weschler A et al, 1984>.
En los niños sometidos a diálisis peritoneal ambulatoria
no se ha observado deficiencia de carnitina, y la
administración de 1—carnitina no ha dado lugar a la
resolución de la hipertrigliceridemia (Warady BA et al,
1990)
Otro aspecto terapéutico de la 1—carnitina exógena en los

pacientes urémicos sometidos a hemodiálisis crónica se
refiere al incremento en el hematócrito, entre el 23% y
el 32%, lo que ha sido atribuido al aumento en la
actividad de la Na/IC—ATPasa que eliminaría el acúmulo
de ésteres acilcarnitina de cadena larga en el interior
del eritrocito (Bellinghieri G et al, 1983). Algunos
autores han observado una correlación positiva entre los
niveles séricos de carnitina y la respuesta a la
eritropoyetina recombinante humana en pacientes con
anemia secundaria a nefropatía terminal (Kooistra MP et
al, 1991).
Anexo 1 139
II.E.1.c. Nutrición parenteral total
Durante la nutrición parenteral total intravenosa a

recién nacidos prematuros y a enfermos graves o
malnutridos se ha observado una importante disminución en
los niveles de carnitina en plasma y orina (Schmidt—
Sominerfeldt E et al, 1983>.
Durante la vida intrauterina el feto presenta un

increinento progresivo en sus depósitos de carnitina a
través de la madre; tras la interrupción de la unidad
materno—fetal, el recién nacido prematuro depende
exclusivamente del aporte exógeno de carnitina para
mantener sus niveles normales debido a que su inmadurez
hepática no le permite la biosíntesis adecuada de
carnitina, por lo que se ha recomendado el aporte
suplementario en estos casos <Dahlstrom KA et al, 1990).
Al cabo de 2—3 semanas de permanecer ingresados en una
Uví y con nutrición parenteral total, 19 pacientes
presentaron una disminución del 30%—60% en los niveles de
carnitina libre y total, niveles que volvieron
rápidamnete a la normalidad tan pronto como los pacientes
reasumieron la alimentación oral (Schafer J et al, 1990>.
Esta hipocarnitinemia podría contribuir a la alteración
del metabolismo graso que pueden presentar estos
pacientes (Phillips CD et al, 1982).
En las deficiencias nutricionales de carnitina, el riñón
puede conservar la carnitina libre y las acilcarnitinas
de cadena corta, aunque existe una excreción renal
obligatoria de otros ésteres de carnitina que contribuye
a la hipocarnitinemia <Schmidt—Sommerfeldt E et al,
1990)
La adición de 1—carnitina a las soluciones de nutrición

Anexo 1 140
parenteral total facilita el metabolismo lipidico al

aumentar la utilización de la emulsión lipidica y de la
grasa endógena, así como la conservación de las proteínas
corporales (Tao RC et al, 1980).
II.E.l.d. Tratamiento con benzoato sódico
Los pacientes con trastorno primario del metabolismo del

amoniaco tratados con benzoato sódico presentan
hipocarnitinemia que revierte tras la administración de
carnitina (Michalak A et al, 1990; Sakuma T, 1991).
II.E.1.e. Tratamiento con pivaxapicilina
Los antibióticos que contienen ácido pivalinico producen

deficiencia de carnitina (Melegh B et al, 1990b).
II.E.1.f. Cirrosis hepática
Aunque en literatura médica se ha aceptado que la

cirrosis hepática, independientemente de su etiología,
produce deficiencia de carnitina (Rudman D et al, 1977;
Engel AG, 1986b), se ha publicado recientemente un
estudio sobre las concentraciones de carnitina libre,
ésteres de carnitina y carnitina total en plasma de 167
alcohólicos crónicos utilizando como control un grupo de
49 voluntarios sanos; en este estudio se demuestra que
los pacientes cirróticos presentan niveles de carnitina
libre y de ésteres de carnitina significativamente
superiores a los de las personas normales, mientras que
los alcohólicos no cirróticos muestran hipocarnitinemia
Anexo 1 141
con frecuencia <Alonso—de—la—Pena C et al, 1990>. Estos

datos han sido refrendados en un estudio posterior
(Amodio P et al, 1990).
No obstante, la administración de carnitina previene la

toxicidad aguda por amoniaco (Ohtsuka Y et al, 1991) y
aumenta la eliminación del mismo en forma de urea y
glutainina, atenuando además los efectos tóxicos del
amoniaco mediados por peroxidación lipidica, de manera
que se ha propuesto su utilización en el tratainiento de
los síndromes hiperamoniémicos (O’Connor JE et al, 1991>
como la propia cirrosis hepática o los trastornos del
ciclo de la urea como la deficiencia de ornitina
transcarbamilasa (Mayatepek E et al, 1991> o la
deficiencia de carbamil-fosfato sintetasa (Sakuma T,
1991)
De esta forma, la administración de 1—carnitina a
pacientes cirróticos da lugar a la obtención de mejores
resultados en la prueba de tolerancia al amoníaco y en
las pruebas psicométricas, lo que ha hecho que se
proponga su evaluación como tratamiento de la
encefalopatía establecida (Del Olmo JA et al, 1991>.
II.E. i.g. Fenilcetonuria
En la fenilcetonuria se han identificado varios casos de

hipocarnitinemia que ha sido atribuida a la deficiencia
de hierro, que constituye un cofactor esencial para la
síntesis de carnitina, y también a la deficiencia de
carnitina en la dieta hipoproteica estricta que siguen
estos pacientes, recomendándose la inclusión de carnitina
exógena en estas dietas <Bohíes H et al, 1991>.
Anexo 1 142
II.E.2. En otros procesos y contextos
II.E.2.a. Cardiotoxicidad inducida por antraciclinas
En animales de experimentación, la 1—carnitina protege a

las células cardiacas frente a los efectos tóxicos de la
doxorrubicina (adriamicina) (De Leonardis 51 et al, 1985).
La doxorrubicina inhibe diversas fases del metabolismo
cardíaco, como la captación de oxigeno, la concentración
de ATP y la síntesis proteica. El resultado es que, para
dosis acumulativas superiores a los 500 mg/m2 aparecen
con frecuencia cuadros de cardiomiopatia congestiva
tardía. En diversos estudios con pacientes se ha
observado que la 1—carnitina disminuye las
concentraciones enzimáticas de CK—MB y mejora diversos
parámetros de la actividad cardiaca (Neri B et al, 1983>.
II.E.2.b. Ejercicio físico
La utilización de suplementos de -carnitina por parte de

atletas se ha hecho muy popular durante los últimos años
incluso aunque no existen hasta el momento resultados
inequívocos en el ser humano que apoyen esta actitud
<Cerretelli P et al, 1990).
En un estudio experiinental con rata realizando ejercicio

físico efectuado en 1987 se observó que las ratas
entrenadas presentaban disminución de los niveles
plasmáticos de carnitina libre e incremento de los de
SCAC (Ji LL et al, 1987).
Teóricamente, la administración de 1—carnitina podría

incrementar el metabolismo lipidico en el músculo en
Anexo 1 143
ejercicio permitiendo un ahorro de glucógeno y, en

consecuencia, un mayor rendimiento físico; además, podría
contribuir a la homeostasis de la carnitina libre y
esterificada en plasma y músculo, teniendo en cuenta que
durante la realización de esfuerzos importantes y
repetitivos podrían disminuir los niveles de estos
compuestos.
En uno de los pocos estudios realizados a este respecto,
la administración de 4 g/dia de 1—carnitina ha producido
un increinento de la potencia aerobia máxima (VO=x> en
corredores de fondo (Angelini C et al, 1986).
Para ejercicios de intensidad máxima, la administración
de 1—carnitina incrementa la captación máxima de oxigeno
al favorecer los procesos aeróbicos, dando lugar a un
mayor rendimiento (Vecchiet L et al, 1990).
Por otra parte, esta misma dosis ha dado lugar a un
aumento estadisticamente significativo en la distancia
recorrida sobre cinta rodante por pacientes con
claudicación intermitente (Brevetti G et al, 1986).
En un estudio experimental realizado con rata en
ejercicio, la admistración de 1-carnitina incremento la
oxidación de ácidos grasos aunque no disminuyó la
cantidad de glucógeno metabolizado durante el ejercicio
tísico (Decombaz JE et al, 1990>. En otro estudio en el
que se utilizó el mismo modelo experimental, la
administración de 1—carnitina no incrementó la capacidad
de ejercicio de los animales ni tampoco la glucogenolisis
muscular o hepática; además, la hipocarnitinemia inducida
por la administración de d-carnitina no produjo efectos
sobre el metabolismo energético durante el ejercicio
hasta que no se alcanzó el rango de SDC «20 mpmol/L>
(Smi B et al, 1990).
La administración de 2 g de 1-carnitina por vía oral
antes del inicio de una sesión de ejercicio máximo por
Anexo 1 144
parte de personas moderadamente entrenadas da lugar a

disminuciones importantes en los niveles plasmáticos de
lactato y piruvato con incremento en los de
acetilcarnitina, probablemente por estimulación de la
piruvato deshidrogenasa, lo que hace que el piruvato se
dirija hacia la formación de acetilcarnitina y no de
lactato (Siliprandi N et al, 1990).
En el perro, la administración de 1—carnitina incrementa
la fuerza muscular del dorsal ancho en un 34%, lo que es
atribuido a una facilitación de la oxidación de los
ácidos grasos en las células endoteliales (Dubelaar ML et
al, 1991)
Recientemente, Arenas y colaboradores han observado que

los atletas entrenados pueden presentar disininución en
los niveles de carnitina libre tanto en plasma como en
músculo esquelético, efecto que parece deberse al
incremento en las pérdidas de acilcarnitina de cadena
corta por orina, y que puede revertirse por la
administración de 1—carnitina exógena (Arenas ¿1 et al,
1991)
II.E.2.c. Hiperlipidemia
La 1—carnitina a una dosis de 3—4 g/dia permite disminuir

de forma significativa las concentraciones séricas de
colesterol total y/o triglicéridos, aumentando las de
HDl—colesterol <Rossi CS et al, 1982>. Este patrón de
modificación del perfil lipidico ha sido observado
también en alcohólicos <Adamo 5 et al, 1986).
Anexo 1 145
II.E.2.d. Cardiopatía isquémica
La observación de que la concentración de 1—carnitina

libre en las areas infartadas de pacientes fallecidos por
infarto de miocardio es muy inferior a la observada en el
tejido cardiaco de pacientes fallecidos por otras causas
ha sugerido la posibilidad de que la 1—carnitina pueda
desempeñar algún papel en la limitación de la zona de
necrosis (Spagnoli LG et al, 1982; Goa KL et al, 1987).
La 1—carnitina tiene un efecto protector sobre el

miocardio isquémico y reperfundido al impedir la acción
del Pi como depresor de la fosforilización oxidativa y
como inhibidor de la actividad de la translocasa ADP/ATP
(Duan JM et al, 1990).
En el corazón, los ácidos grasos constituyen el sustrato
primario de la energía utilizada por el músculo cardiaco.
La inhibición del transporte de ATP secundaria al acúniulo
de acil—CoA de cadena larga disminuye el rendimiento
energético y, además, la inhibición de la pirúvico
deshidrogenasa puede dar lugar a una mayor producción de
ácido láctico que parece contribuir a la isquemia. Ambos
efectos pueden ser revertidos por la 1—carnitina <Liedtke
AJ, 1987).
Se ha observado también que el miocardio de los pacientes

con insuficiencia cardiaca avanzada sometidos a
trasplante de corazón presenta una disminución importante
en los niveles de carnitina libre y total, mientras que
en el plasma de estos pacientes existe hipercarnitinemia
<Regitz et al, 1990).
Se ha comprobado el efecto beneficioso de la 1—carnitina
en pacientes con angina de pecho (Kamikawa T et al,
1984), infarto de miocardio (Chiarello M et al, 1986) y
Anexo 1 146
arritmia asociada a procesos isquémicos.
Por su parte, las acilcarnitinas de cadena larga como la

palmitoilcarnitina han demostrado a nivel experimental
que pueden producir un efecto vasodilatador de intensidad
comparable a la de otros vasodilatadores aplicados en
clínica humana, aunque con una mayor duración del efecto
<Criddle DN et al, 1990).
Por otra parte, la propionilcarnitina demuestra a nivel

experimental un efecto protector sobre las células
endoteliales de corazón y vasos de la lesión de
peroxidación que se produce durante la isquemia y
reperfusión debido a que disminuye la producción de
productos reactivos de oxidación por parte de las
membranas endoteliales <Bertelli A et al, 1991; Carbonin
PU et al, 1991), quizá en relación con su propiedad para
disminuir el nivel citoplásmico de calcio en las células
endoteliales (van Hinsbergh 51W et al, 1991); se ha
propuesto a este respecto que el efecto protector de la
propionilcarnitina frente a la isquemia se debe a que
estimula el ciclo de lso ácidos tricarboxilicos a través
de la síntesis de succinato (Siliprandi N et al, 1991);
la propionilcarnitina también protege a nivel
experimental de la toxicidad producida por oxigeno
hiperbárico <Bertelli A et al, 1991).
En ratas diabéticas se ha comprobado un efecto protector

de la 1—carnitina sobre la lesión miocárdica producida
por este proceso (Rodrigues B et al, 1990).
Para un estudio global de los efectos beneficiosos de la

1—carnitina en los trastornos cardiovasculares véase la
revisión de Pepine <Pepine CJ, 1990).
Anexo 1 147
II.E.2.e. Potenciador de la absorción nasal
En la rata, la palmitoil-dí-carnitina ha sido utilizada

con éxito para incrementar la absorción nasal de hormona
de crecimiento biosintética humana debido probablemente
a un mecanismo de fluidificación de membranas o a un
efecto vasodilatador (O’Hagan DT et al, 1990).
TI.E..2.f. Cicatrización de úlceras en piernas
Efecto observado en tres casos (Harrelí HL Jr, 1990>.
II.E.2.g. Aumento del surfactante pulmonar
En la rata, la administración de 1-carnitina a la madre

gestante estimula de forma significativa la síntesis de
fosfolipidos en los neumocitos tipo II del pulmón fetal,
incrementándose de esta forma el contenido de
dipaliaitoil-fosfatidilcolina <la principal fracción
fosfocolínica del surfactante) en este órgano (Lohninger
A et al, 1990>.
En el modelo de trasplante pulmonar en el perro, la 1
carnitina también incrementa de forma significativa el
contenido de dipalmitoil-fosfatidilcolina en el lavado
brocoalveolar mejorando la función del pulmón injertado,
lo que se ha atribuido a un amortiguamiento del efecto
isquémico sobre el metabolismo de los neumocitos tipo II
(Klepetko W et al, 1990)
II.E.2.h. Efecto trófico sobre el músculo esquelético
—
Anexo 1 148
La administración de 2 g/dia de 1-carnitina por vía IV

durante 12 meses a pacientes en hemodiálisis crónica ha
producido un importante incremento en los niveles de
carnitina en plasma y músculo además de hipertrofia y
predominio de fibras tipo 1, sin modificaciones en las
fibras tipo II; los autores de este estudio utilizan
parámetros morfométricos y sugieren que la 1—carnitina
presenta un efecto trófico especifico sobre las fibras
musculares de tipo 1 caracterizadas por su metabolismo
oxidativo (Spagnoli LO et al, 1990>.
II.E.2.i. Efecto protector frente a la toxicidad por

MPTP
La adición de 1-carnitina a cultivos de hepatocitos

tratados con 1—metil—4—fenil-1, 2,3, 6-tetrahidropiridina
(MPTP) impide la depleción celular de ATP producida por
este compuesto tóxico, probablemente porque su toxicidad
está mediada por alteraciones en el metabolismo de los
ácidos grasos (Snyder 3W et al, 1990).
II.E. 2. j. 1-acetilcarnitina
En el contexto clínico—experimental, el derivado de la

carnitina que ha sido estudiado con mayor intensidad en
los últimos años es la 1—acetilcarnitina.
La 1—acetilcarnitina es un precursor de la acetilcolina

porque los grupos acetil—CoA citoplásmicos constituyen el
sustrato de la colina acetiltransferasa, lo que explica
la utilidad de la 1—acetilcarnitina en los déficit
colinérgicos (White HL et al, 1990).
Anexo 1 149
La acetilcarnitina facilita la liberación de acetilcolina

por receptores muscarinicos M3 en el hipocampo de la
rata, receptores implicados en el proceso de
envejecimiento <Imperato A et al, 1991).
La 1—aceticarnitina incrementa la cantidad de RNA

mensajero para la subunidad 1 de la citocromo—oxidasa
estimulando de esta forma la trascripción mitocondrial
(Cadaleta MN et al, 1990>.
Este éster de la carnitina ha sido utilizado con buenos

resultados:
— En la depresión y el síndrome cerebral orgánico del

anciano (Sinforiani E et al, 1990; Bella R et al, 1991),
—En el tratamiento de los déficit cognitivos que produce

el alcoholismo crónico (Tempesta E et al, 1990),
—En la demencia de tipo Alzheimer especialmente por su

efecto beneficioso sobre las alteraciones de la memoria
reciente,
—En la demencia que acompaña a la enfermedad de

Huntington (Goety CG et al, 1990),
—En la potenciación de los efectos regenerativos del

nervio ciático tras su sección y reparación (Fernandez E
et al, 1990),
—En los déficit cognitivos asociados al envejecimiento en

ratas (Markowska AL et al, 1990; Blokland A et al, 1990)
debido probablemente a que la 1—acetilcarnitina normaliza
el incremento en los niveles de colesterol libre y
Anexo 1 150
esterificado que presenta la rata de edad avanzada

<Ruggiero FM et al, 1990) o bien porque disminuye la
formación de lipofuscina en el cerebro (Maccari F et al,
1990); también en la rata, la 1-acetilcarnitina aumenta
la longevidad neuronal (Fariello RG, 1990) y posee
actividad plástica sobre sinapsis interneuronales
GABAergicas (Laschi R et al, 1990>.
— En los patrones de sueño nocturno en la enfermedad de

Parkinson (Puca FM et al, 1990>,
— En los tiempos de reacción de los pacientes con

insuficiencia cerebrovascular (Arrigo A et al, 1990)
debido probablemente a que incrementa el flujo sanguíneo
cerebral <Postiglione A et al, 1990>,
— Potenciando la inhibición recurrente de los pacientes

con paraparesia espástica (Mazzocchio R et al, 1990),
—En el shock circulatorio de origen séptico, cardiaco o

traumático por su capacidad para reestablecer la
actividad enzimática inhibida por la hipoxia actuando
como donante de grupos acetilo (Gasparetto A et al,
1991)
—En las disfunciones retinianas con vulnerabilidad

selectiva para las frecuencias espaciales de tipo medio—
alto debido a su efecto excitador sobre la transmisión
colinérgica (Falsini B et al, 1991),
—En la reinervación muscular tras denervación <Pettorossi

VE et al, 1991),
—En primates, la acetil—l—carnitina impide la aparición

Anexo 1 151
de parkinsonismo y de las alteraciones típicas de la

deficiencia dopaminérgica en animales tratados con MPTP,
posiblemente debido a su efecto sobre la respiración
mitocondrial (Bodis-Wollner 1 et al, 1991).
II.E.2.k. Embarazo y lactancia
Se ha observado deficiencia de carnitina en el embarazo

<Soholte HR et al, 1978), y algunos autores sugieren que
la carnitina es un nutriente realmente esencial en
situaciones de requerimientos energéticos especiales como
el embarazo y la lactancia (Giovannini M et al, 1991).
II.E.2. 1. Butirobetaina
La butirobetaina o desoxicarnitina es un precursor de la

carnitina en la síntesis endógena de ésta, a través de la
butirobetaina hidroxilasa. En la rata, la administración
exógena de butirobetaina produce el mismo incremento en
los niveles de 1—carnitina que la administración de 1
carnitina, por lo que se debe considerar como agente
terapéutico potencial en los casos en los que sea
necesario el aporte suplementario de carnitina (Sandor A,
1991)
II.E.2.m. Síndrome óculo—cerebro—renal de Lowe
En el sidrome óculo—cerebro—renal de Lowe se produce un

deterioro glomerular renal progresivo acompañado de
disfunción tubular precoz que da lugar a pérdidas
importantes de carnitina que requieren la administración
—
Anexo 1 152
exógena de la misma (Chamas LP et al, 1991).
II.E.2.n. Efecto trófico sobre el hígado
En ratas Wistar parcialmente hepatectomizadas, la 1—

carnitina produce un efecto estimulante y dependiente de
la dosis sobre la regeneración hepática <Blaha 51 et al,
1990>
II.F. Toxicidad y efectos colaterales
La 1—carnitina se tolera muy bien y no presenta

practicamente toxicidad. Para dosis muy elevadas, hasta
15 g/día, se han observado casos esporádicos de episodios
diarréicos (Snyder TM et al, 1982>. Las dosis más
habituales de 2 g/dia por vía oral pueden dar lugar a
gastralgia, náuseas y diarrea en un 2%-6% de pacientes.
La administración de dí—carnitina a pacientes urémicos ha
dado lugar a cuadros de tipo miastenia gravis, lo que no
se ha observado nunca en los tratamientos con 1
camnitina, y que se ha atribuido al acúmulo del isómero
d de la camnitina en los pacientes con insuficiencia
renal, acúmulo que podría dar lugar a un bloqueo de tipo
hemicolinico <Bazzato G et al, 1981>.
No se ha observado toxicidad discernible por 1—carnitina
ni siquiera tras la administración de dosis elevadas por
via IV para el tratamiento de cuadros de acidurias
orgánicas (Roe CR et al, 1990).
—
Anexo 1 153
III. Acido vaiproico
III.A. Caracteristicas generales
El ácido 2-propilpentanoico (ácido vaiproico, VPA) es un

fármaco antiepiléptico que fue sintetizado por primera
vez por Burton en 1881.
Sus propiedades anticonvulsivantes fueron descubiertas de

forma casual en 1962 cuando Meunier, utilizando ácido
valproico como disolvente orgánico de medicamentos
cumarínicos, observó que los animales inyectados quedaban
protegidos de las crisis convulsivas que desencadena el
pentametilentetrazol.
Su estructura química difiere de la de cualquier otro

fármaco antiepiléptico conocido. Es un ácido graso de
cadena corta, abierta y ramificada que carece de grupos
heterociclicos aromáticos y que no presenta en su
estructura ningún átomo de nitrógeno.
En España se comercializa en forma de propilpentanoato

sódico (valproato de sodio, Depakine, Labaz) que es la
sal sódica del ácido valproico y cuyas fórmulas son:
Empírica: CE HíS 02 Na
Estructural: CH3—CH2-CH2 \
CH-C=O
CH3—CH2—CH2 / ¡
O
Na
Anexo 1 154
En su forma física, el valproato sódico es un polvo

blanco, inodoro, higroscópico, microcristalino y con un
sabor ligeramente picante. Muy soluble en agua y
alcoholes como metanol y etanol, y escasamente soluble en
disolventes orgánicos menos polares. Su peso molecular es
de 166,2 y su pKa de 4,95.
En EE.UU. se comercializa en forma de sodio—hidrógeno

bis (2—propilpentanoato> <divalproex sódico, Depakote,
Abbott), que es un compuesto estable formado por
valproato sódico y ácido valproico en relación 1:1 molar,
y que tiene un peso molecular de 310,41.
III.B. Mecanismo de acción
Entre los mecanismos de acción posibles de los farmacos

anticonvulsivos se incluyen la facilitación de la acción
inhibidora sináptica, la debilitación de la transmisión
excitadora y la disminución de la tendencia de las
neuronas a excitarse en ráfagas.
La acción del ácido valproico como medicación
antiepiléptica parece estar mediada por el incremento que
produce en los niveles de ácido r-aminobutirico (CABA> a
nivel cerebral.
El CABA es un aminoácido no proteico (amina biógena),

producto de la decarboxilación del ácido glutámico, que
existe normalmente en concentraciones elevadas en el
cerebro y que actúa como neurotransmisor para neuronas
inhibidoras y como bloqueante de sinapsis.
Su fórmula estructural es:

Anexo 1 155
CH2-0H2—COOH
NH2
Además, el GABA se encuentra intercalado en una ruta

secundaria del ciclo del citrato: en el cerebro,
practicamente todo el ácido alfa-cetoglutárico se
transforma en ácido glutámico que es decarboxilado a
CABA, que posteriormente sufre transaminación hacia
hemialdehido succinico siendo este, a su vez, oxidado a

ácido succinico que se reintroduce en el ciclo de Krebs.
Aunque de forma predominante en el sistema límbico

(Nagaki S et al, 1990), el VPA incrementa los niveles de
CABA en diversas regiones del sistema nervioso central
(SNC> a través de la:
- Activación de la glutámico descarboxilasa

(Schmutz M et al, 1979>
- Inhibición de la alfa—cetoglutarato
deshidrogenasa, lo que incrementa el aporte
de alfa—cetoglutarato hacia la formación de
CABA inhibiendo el ciclo del ácido cítrico
<Luder et al, 1990).
— Activaci6n de la glutaminasa, lo que

incrementa la disponibilidad de ácido
glutámico al ser ésta la enzima que cataliza
la hidrólisis de la glutamina en ácido
glutámico y NH4+ (Martin et al, 1990).
Además, el VPA potencia la acción del GABA mediante:

Anexo 1 156
— Inhibición de la recaptación de GABA hacia el

extremo presináptico (Nilsson et al, 1990)
— Inhibición de su degradación: Inhibe la CABA—

transaminasa y la succinilsemialdehido
deshidrogenasa (Schmutz et al, 1979).
— Potenciación de los efectos postsinápticos

del GABA actuando sobre los locus receptores
postsinápticos u otras estructuras de
membrana con el fin de mimetizar o favorecer
la acción inhibidora del GABA (Chapman et
al, 1982).
Otros mecanismos de acción del VPA en relación con su

actividad anticonvulsiva son (Chapman et al, 1982):
— Incremento en la duración de los potenciales

de acción postsinápticos inhibidores y
disminución de la excitación repetitiva
inducida por las corrientes de
despolarización producidas por N-metil—D-
aspartato <Zeise et al, 1991)
— Disminución del ácido aspártico en el cerebro

(Castro—Cago M et al, 1990).
— Acción sobre otros aminoácidos excitadores y

sobre el metabolismo monoamino.
— Disminución de la conductancia de los canales

de potasio con incremento del umbral del
potencial de acción y, por tanto, prevención
de las despolarizaciones excesivas del nervio
Anexo 1 157
durante las crisis (van Erp et al, 1990).
- Disminución de las corrientes de entrada del

sodio en neuronas del neocortex (Zona C et
al, 1990>
— Disminución selectiva de la corriente de

calcio de bajo umbral (Kelly et al, 1990).
— Disminución de los niveles de somatostatina

en SNC (Nagaki 5 et al, 1990).
— Acumulación de valproil—CoA (2—propilpentanoil-

CoA, un metabolito del VPA identificado
previamente en el hígado) en el SNC, metabolito
que contribuiría a la actividad antiepiléptica del
VPA estimulando la actividad de la Na+, K+-ATPasa
cuando la concentración cerebral de ATP es baja
<Friel P, 1990)
Al igual que en lo relativo a otros fármacos

anticonvulsivantes que incrementan la transmisión GABA—
érgica, se ha supuesto que la sustancia negra podría
constituir en lugar de acción del VPA, aunque se ha
demostrado que la destrucción de este núcleo pigmentado
no disminuye los efectos anticonvulsivantes del VPA en
ratas estimuladas <Wahnschaff e U et al, 1990). No
obstante, se ha sugerido que el VPA produce efectos
inhibitorios especificamente en neocortex cerebral y en
hipocampo (Kubota T et al, 1990>. Además, mediante
autorradiografia, se ha observado el depósito
practicamente selectivo de VPA marcado con 14C en las
porciones medial y dorsal <fundamentalmente en la capa
glomerular) del bulbo olfatorio de la rata (Hoeppner TJ,
Anexo 1 158
1990)
III. C. Farmacocinética
III.C.l. Absorción y biodisponibilidad
El VPA es rápidamente absorbido a través del tracto

gastrointestinal. La rapidez de la absorción es menor en
las formulaciones recubiertas no entéricas que en el caso
de los comprimidos no recubiertos o el jarabe,
formulaciones estas últimas que no dependen del indice
del vaciado gástrico. En cualquier caso, la absorción del
valproato sódico (VPS) es practicamente completa, con una
biodisponibilidad próxima al 100% <Levy RH et al, 1980).
No obstante, en un estudio sobre farmacocinética del VPA
tras administración de dosis única en personas sanas se
ha observado que la biodisponibilidad de los comprimidos
con cubierta entérica es significativamente menor <del
52%) (Bano G et al, 1990). Recientemente, se han
observado tambien características de absorción y
biodisponibilidad muy adecuadas al administrar una nueva
formulación de divalproex sódico en forma de partículas
con cubierta entérica (Depakote Sprinkle, Abbott
Laboratories, North Chicago, IL) (Carrigan PJ et al,
1990)
Independientemente de la formulación utilizada, la
administración de VPS junto con alimentos retrasa su
absorción debido a que en esta situación se modifica el
entorno de pH óptimo para su desintegración y disolución
(Chun AHC et al, 1980>.
Anexo 1 159
III.C.2. Distribución y fijación a proteinas
Una vez absorbido, el VPA se une parcialmente a proteinas

mientras que otra parte circula en forma libre.
Unicamente se metaboliza la forma libre, de manera que

probablemente los efectos antiepilépticos y tóxicos del
VPA están en relación con la concentración de la fracción
libre del mismo (Scheyer RD et al, 1990). Por esta razón,
para el ajuste de dosis en pacientes se prefiere utilizar
el cociente nivel plasmático libre de VPA/dosis al
cociente nivel plasmático total de VPA/dosis (Abadin JA
et al, 1991>
Existe una fuerte correlación positiva entre la dosis de

VPA (mg/kg/dia) y los niveles séricos total y libre de
VPA hasta el límite de 15 mg/kg/dia, a partir del cual
ambos niveles de VPA no aumentan proporcionalmente a la
dosis administrada (Ieiri 1 et al, 1990). El porcentaje
de fracción libre para concentraciones totales elevadas
presenta una amplia variabilidad inter e intra individual
<Cramer JA et al, 1986; Jager—Roman E et al, 1982>. Otros
factores que influyen en las concentraciones total y
libre de VPA en plasma son la concentración de albúmina,
el nivel de transaminasa glutámico oxalacética y la
administración simultánea de carbanacepina o fenitoina
que disminuyen el cociente nivel/dosis del VPA <Ieiri 1
et al, 1990).
El VPS se fija abundantemente a proteinas plasmáticas,

principalmente albúmina, de una forma no lineal a dosis
farmacológicas <Semines RL et al, 1990).P a r a
concentraciones plasmáticas totales de VPA de 40—100
mg/L, el grado de fijación a proteinas oscila
Anexo 1 160
habitualmente entre el 85% y el 94% en personas con

funciones hepática y renal normales que no están
recibiendo ninguna otra medicación (Loscher W, 1978).
La fijación del VPA a proteinas plasmáticas depende de la

concentración plasmática de las mismas y de la dosis de
VPA administrada, y presenta tambien variaciones
circadianas debido a las fluctuaciones en los niveles de
ácidos grasos libres dado que estos tienen la capacidad
de desplazar al valproato de sus puntos de fijación
(Bowdle TA et al, 1982). En este sentido, se ha propuesto
que la obesidad que se observa en algunos casos como
complicación del tratamiento con VPS podría ser debida al
incremento en los niveles de ácidos grasos de cadena
larga, incremento secundario a la fijación competitiva
del VPS con las proteinas plasmáticas (Brodersen R et al,
1990>
Tambien disminuye la fijación a proteinas en ciertos

estados fisiológicos como el envejecimiento (Bauer LA et
al, 1985), la época neonatal (Cal P et al, 1988), y el
embarazo (Nau H et al, 1986>; y en algunos estados
patológicos como la insuficiencia renal (Orr 3M et al,
1983) , la hemodiálisis (Bruni ¿1 et al, 1980) , la
insuficiencia hepática (Klotz U et al, 1978 y la diabetes
mellitus (Gatti G et al, 1987>. La disminución del
porcentaje de VPA unido a proteínas en estos estados
fisiológicos y patológicos hace que en todos ellos se
incremente de forma proporcional el nivel de valproato
libre con la consiguiente posibilidad de toxicidad. Por
ello, se recomienda en estos pacientes la monitorización
del cociente nivel de valproato libre/ dosis.
El volumen aparente de distribución del VPS, determinado

Anexo 1 161
en relación con la concentración total en plasma, es de

0,1—0,41 L/Kg <Hall 1< et al, 1988) lo que constituye un
pequeño volumen de distribución de 8 a 10 L y sugiere que
la distribución del fármaco está restringida a la
circulación sistémica y al medio acuoso extracelular
intercambiable rápidamente; esta posibilidad está en
consonancia con las propiedades fisicoquímicas del
valproato <pKa=4,95).
Como ocurre con los fármacos cuya biodisponibilidad oral

es practicamente completa, el volumen de distribución al
administrar valproato por via intravenosa es del mismo
orden que por via oral <Perucca E et al, 1978).
El volumen de distribución de la forma libre en plasma

es de aproximadamente 1 L/Kg, mucho mayor que el obtenido
en relación a la concentración total en plasma, lo que
indica que debe existir fijación tisular (Gugler R et al,
1977>
El tejido donde se fija preferencialmente el valproato es

el SNC, donde se han observado concentraciones del 6,8%—
27,9% de los niveles plasmáticos totales (p\0.O5) en
pacientes tratados desde 72 horas antes de una
craneotomia (Vajda FJE et al, 1981). No obstante, en otro
estudio no se observó correlación entre los niveles
detectados en parénquima cerebral y los medidos en
liquido cefalorraquideo <LCR) y en plasma 180 minutos
después de administrar una sola dosis de valproato antes
de la craneotomia (Hanigan W et al, 1985).
Tras su administración por via oral a pacientes

neurológicos, los niveles de valproato en LCR son muy
similares a los niveles de valproato libre en plasma
Anexo 1 162
<Rapeport WC et al, 1983). En los tratamientos de

mantenimiento en niños epilépticos se ha demostrado
tambien una correlación significativa entre los niveles
de VPS en LCR y los niveles de la forma libre del mismo
en plasma, aunque en este caso los niveles en LCR son
significativamente menores que los plasmáticos (forma
libre>, lo que sugiere un mecanismo asimétrico de
transporte a través de la barrera hemato—encefálica (BHE)
para el valproato (Loscher W et al, 1988). Se ha
propuesto que el VPA atraviesa la EHE mediante un sistema
transportador especifico para ácidos monocarboxilicos
situado en la BHE y dependiente del pH (Kang YS et al,
1990)
El VPS se excreta escasamente por la saliva debido a su

bajo pKa, por lo que sus niveles en este medio no
reflejan probablemente su concentración libre en plasma
(Knott C et al, 1984). En el semen de voluntarios sanos,
los niveles de VPS son bajos con relación a los niveles
de la forma libre en plasma <Swanson BN et al, 1978). La
concentración de VPS en la leche materna es baja, entre
el 1% y el 10% de la concentración plasmática total de la
madre (Alexander FW et al, 1979).
El VPS atraviesa la placenta humana. En las fases

iniciales del embarazo los niveles totales de VPS en el
feto son menores que los detectados en la madre, debido
a que el grado de fijación a proteínas es mucho menor en
el primero que en la segunda (Nau H et al, 1984>. En el
momento del nacimiento, los niveles séricos de VPS en el
cordón umbilical son superiores a los observados en la
sangre de la madre, lo que se atribuye al incrmento de
las concentraciones séricas maternas de ácidos grasos en
el momento del nacimiento, lo que da como resultado un
Anexo 1 163
desplazamiento parcial del valproato de los puntos de

fijación maternos; el mayor grado de fijación protéica en
el feto en este momento favorece la transferencia
placentaria adicional con acumulación del fármaco en el
feto (Albani F et al, 1979).
En el ratón se ha propuesto que el VPA atraviesa la
barrera placentaria debido a gradientes de pH (Srivastava
M et al, 1991).
111.0.3. Eliminación
II.C.3.a. Aclaramiento plasmático
El aclaramiento plasmático total es el producto del flujo

de sangre hepático y la proporción de extracción
hepática. Para el valproato, la prporción de extracción
hepática es baja, más baja incluso que la fracción libre,
lo que indica que su aclaramiento plasmático es de tipo
restrictivo limitándose unicamente a la fracción libre,
y que este aclaramiento es independiente del flujo
sanguineo hepático (Klotz U et al, 1977>.
En voluntarios sanos, el aclaramiento plasmático de
valproato oscila entre 7 y 11 mL/hr/kg y, al igual que el
volumen de distribución, es independiente de lLa via de
administración y mayor en niños que en adultos (Hall K et
al, 1985; Levy PH et al, 1982).
II.C.3.b. Vida media de eliminación
La vida media de eliminación del valproato es de 8 a 20

horas, tanto en tratamientos crónicos como en estudios de
dosis única, lo que sugiere que en el metabolismo del
Anexo 1 164
valproato no se produce saturación ni autoinducción (Hall

K et al, 1985). Recientemente se ha observado que, al
menos en la rata, el VPA si produce una autoinducción de
su metabolismo en tratamientos crónicos (Fisher JE et al,
1991)
En neonatos y ancianos, la vida media de eliminación es
más larga, mientras que la administración simultánea de
fármacos antiepilépticos con capacidad de inducción
enzimática está considerablemente disminuida (Cramer JA
et al, 1986).
II.C.3.c. Aclaramiento renal
Dado que el valproato se metaboliza de forma casi

completa en el hígado, su eliminación por orina en forma
inalterada es muy pequeña, correpondiendo al 1.8% de la
dosis oral única y al 3,2% de la dosis en situación de
nivel estable <steady state) <Gugler R et al, 1977>.
El aclaramiento renal de la forma libre de valproato es

muy pequeño en comparación con la tasa de filtración
glomerular, lo que sugiere que se reabsorbe de forma
importante (Levy PH et al, 1982).
En cuanto a la eliminación renal de los metabolitos del
valproato sódico, se ha observado en ratas la eliminación
en la orina de las primeras 24 horas del 40—50% de la
dosis única administrada, principalmente en forma de VPA
conjugado y de productos de la omega—oxidación (5—OH-VPA,
ácido 2—propil—glutárico); en tratamientos crónicos le
eliminación renal de los metabolitos se aproxima al 75%,
fundamentalmente en forma de productos de la
glucuronidación y de la beta-oxidacón del VPA (sin
modificación o incluso disminución de los productos de la
Anexo 1 165
omega-oxidación), lo que sugiere que, al menos en la

rata, el VPA da lugar a una inducción de su propio
metabolismo en tratamientos prolongados (Fisher JE et al,
1991>
En pacientes con insuficiencia renal se observa un
aumento del volumen de distribución y del aclaramiento
plasmático total, posiblemente como resultado de la
menor fijación a proteinas con el consiguiente incremento
en la proporción de valproato libre (Robson Rl-! et al,
1980; Orr 3M et al, 1983).
Se ha observado una buena correlación entre el
porcentaje de valproato libre y el nivel de creatinina en
suero, el aclaramiento de creatinina, el nivel de
nitrógeno y ácido úrico en sangre en pacientes con
insuficiencia renal no sometidos a diálisis <Gugler R et
al, 1978). No obstante, no parece existir esta
correlación con el nivel total de proteinas ni con la
concentración de albúmina en plasma. La disminución de la
unión a proteínas en estos casos no parece estar en
relación con la concentración total de éstas sino con el
posible incremento en los niveles de inhibidores
endógenos de la fijación observados en pacientes con
insuficiencia renal (Bruni ¿1 et al, 1980>.
La hemodiálisis disminuye de forma más importante la

fijación a proteínas debido a que la heparina
administrada durante la misma activa la lipoprotein—
lipasa, produciendo como resultado un importante
incremento de ácidos grasos libres en suero, ácidos
grasos que compiten con el valproato por los puntos de
fijación a la albúmina (Bruni ¿1 et al, 1980). De todas
formas, ni la diálisis peritoneal ni la hemodiálisis dan
lugar a una eliminación significativa de valproato para
concentraciones plasmáticas terapéuticas del mismo
Anexo 1 166
<Marbury ‘rC et al, 1980; Kandrotas RJ et al, 1990)

aunque para concentraciones muy elevadas <p. ej., en
casos de sobredosis> con niveles muy altos de la forma
libre, la hemodiálisis permite una eliminación importante
de valproato <Pedersen B, 1982; Roodhooft AM et al,
1990)
II.C.4. Metabolismo
A pesar de la sencillez de su molécula, el valproato

tiene un metabolismo complejo y, como ya hemos comentado
previamente, unicamente es eliminado en forma inalterada
por orina el l%-3% de la dosis administrada (Gugler R et
al, 1977)
Se metaboliza casi completamente en el hígado a través de

cuatro vías principales:
- Glucuronidación
- Beta-oxidación
— Omega—oxidación
- Omegal-oxidación
La beta—oxidación mitocondrial del VPA incluye su

transformación en 2-propilpentanoil—CoA (valproil-CoA>,
que es deshidroqenado a 2-propil-2-pentenoil-CoA por La
2—metil—cadena ramificada acil-CoA deshidrogenasa, e
hidratado a 3-OH-2-propilpentanoil—CoA por la enoil—CoA
hidratasa <Li J et al, 1991).
Con respecto a las acil—CoA deshidrogenasas, en la

actualidad se conocen 5 tipos distintos, las acil—CoA
deshidrogenasas de cadenas corta, media y larga, la
Anexo 1 167
isovaleril—CoA deshidrogenasa y la 2—metil—cadena

ramificada acil-CoA deshidrogenasa. El valproil—CoA es
deshidrogenado unicamente por la última de ellas (Ito M
et al, 1990)
Las oxidaciones omegal y omega se realizan en los

microsomas y dan lugar en primer lugar a la aparición de
metabolitos insaturados (ácidos 2—propil—3-pentanoico y
3—propil—4—pentanoico, respectivamente), que
posteriormente son hidroxilados a ácido 2—propil—4—
hidroxipentanoico y ácido 2—propil-5-hidroxipentanoico,
respectivamente (Pollack GM et al, 1986>.
Para dosis muy bajas, la vía metabólica principal para el

valproato es la beta—oxidación mitocondrial (Granneman GR
et al, 1984) Para dosis mayores aumenta la proporción de
.
fármaco metabolizada a través de omega— y omegal—

oxidación microsomal, y para las dosis del rango
terapéutico la vía metabólica principal es la
glucuronización (Chapman A et al, 1982), de manera que en
la orina de las primeras 24 horas se elimina en forma de
glucurónido el 70% de la dosis administrada (Cugler R et
al, 1980).
En relación a las proporciones relativas de oxidación

mitocondrial (beta) y microsomal (omega y omegal), se ha
observado un patrón invertido en al menos un estudio
experimental sobre rata en el que, tras la administración
de 200 mg/kg/a hr mediante inyección intraperitoneal
durante 6 semanas, los autores detectan un incremento
importante en la eliminación renal de metabolitos
procedentes de la beta—oxidación con disminución relativa
en la eliminación de los procedentes de las oxidaciones
microsomales, lo que atribuyen a una autoinducción del
Anexo 1 168
VPA sobre su propio metabolismo en tratamientos

prolongados (Fisher JE et al, 1991>.
El patrón de los metabolitos del valproato en suero en

condiciones normales parece ser estable en tratamientos
a largo plazo <Pedersen B et al, 1984), aunque puede
estar influido por la edad (Shen DD et al, 1984> y la
administración simultánea de otros fármacos que estimulan
la oxidación microsomal del valproato <Chapman A et al,
1982).
Los metabolitos de todas las vías metabólicas del VPA

presentan algún tipo de actividad antiepiléptica aunque,
en base a la molaridad de los mismos, son menos potentes
que el valproato (Loscher W et al, 1981>. No obstante,
los estudios efectuados en animales de experimentación
utilizando 2—en VPA demuestran que este metabolito es más
potente que el fármaco inicial cuando en los cálculos se
toman en cuenta factores como la fijación a proteinas y
la distribución tisular del VPA y el 2-en VPA, por lo que
la actividad antiepiléptica de los metabolitos en
tratamientos prolongados puede ser significativamente
mayor que la calculada a partir de sus concentraciones en
plasma (Loscher W et al, 1983; Keane PE et al, 1985).
Además, el 2—en VPA parece desempeñar un papel

predominante en los cuadros de toxicidad neurológica por
sobredosis de VPA (Dupuis RE et al, 1990>. A pesar de
ello, los niveles de metabolitos del valproato observados
en el LCR de niños epilépticos tratados de forma crónica
son muy bajos <Loscher W et al, 1988).
La farmacocinética de los metabolitos ha sido estudiada

por Pollack CM et al <1986). Uno de los principales
Anexo 1 169
metabolitos moninsaturados cerebrales con actividad

farmacológica, el 2—en VPA, presenta características
farmacocinéticas muy similares a las del fármaco
original, VPA (Singh K et al, 1990>. En términos
generales, los metabolitos insaturados (2—en VPA, 3—en
VPA, 4—en VPA) presentan una mayor fijación a proteínas
que el VPA, posiblemente porque la presencia de un doble
enlace en su esqueleto carbonado incrementa su afinidad
por la albúmina. Por otra parte, las vidas medias de
aclaramiento son más largas para todos los metabolitos en
comparación con la que presenta el compuesto inicial,
fundamentalmente los metabolitos no saturados, que se
eliminan más lentamente que los hidroxilados (Pollack CM
et al, 1986).
III.D. Utilización clínica
III.D.l. Como antiepiléptico
En la actualidad, se considera que el tratamiento inicial

de la epilepsia debe efectuarse mediante monoterapia con
algún agente antiepiléptico de primera línea como
fenitoina, fenobarbital, primidona, carbamazepina,
etosuximida, benzodiacepinas, acetazolamida o ácido
valproico <Pugh CB et al, 1991).
El valproato fué utilizado inicialmente como tratamiento

de apoyo en pacientes con cuadros epilépticos
refractarios a otros fármacos (Simon D et al, 1975>.
Posteriormente, en distintas series de estudio sobre
pacientes se ha demostrado que el valproato es muy
efectivo en epilepsias generalizadas primarias,
especialmente en ausencias y crisis miocónicas, y que, al
Anexo 1 170
igual que otros antiepilépticos, es menos eficaz en las

crisis parciales (Dulac O et al, 1984).
En 1988 lo estaban recibiendo más de 1.000.000 de

pacientes en todo el mundo para el tratamiento de cuadros
convulsivos (Binek ¿1 et al, 1991).
En los estudios comparativos de la monoterapia de

valproato con la administración de otros fármacos
antiepilépticos como clonazepam (Shakir RA et al, 1979),
etosuximida <Sato 5 et al, 1982; Callaghan N et al,
1982), fenitoina (Wilder BJ et al, 1983> y carbamazepina
(Loiseau P, 1984), el valproato ha presentado una
eficacia al menos similar a la de los otros fármacos.
En un estudio efectuado en 1987 se concluye que el

valproato es un agente monoterapéutico tan eficaz como la
carbamazepina y la fenitoina en el tratamiento de las
crisis generalizadas primarias y secundarias, y de las
crisis parciales (Chadwick DW, 1987>.
Numerosos autores señalan que en el control y el

pronostico de las crisis, y además del fármaco
antiepiléptico utilizado, desempeñan un papel fundamental
otros factores como son el tipo de crisis, la edad de
comienzo del cuadro, la frecuencia de las crisis, la
historia previa prolongada de crisis y la presencia de
sintomas neurológicos o psiquiátricos asociados (Turnbull
DM et al, 1985; Oallaghan N et al, 1985).
En España, el laboratorio fabricante del valproato sódico

recomienda la dosis de 30 mg/kg en neonatos, 20-30 mg/kg
para adolescentes y adultos, y 15—20 mg/kg para alcanzar
niveles plasmáticos suficientes <habitualmente, 40 mg/L
Anexo 1 171
como limite mínimo> para conseguir actividad

antiepiléptica.
El valproato tiene éxito habitualmente en los siguientes

tipos específicos de crisis:
III.D.l.a. Crisis de ausencia
La monoterapia con valproato constituye un tratamiento de

primera línea para todas las formas de crisis de
ausencia, fundamentalmente las simples (petit mal> y las
complejas; en las ausencias mioclónicas es más eficaz
cuando se administra junto a etosuximida (Dulac O et al,
1984; Rowan AJ et al, 1983; Covanis A et al, 1982;
Jeavons PM et al, 1977). También se ha utilizado en los
estados de ausencia (Sander 3W et al, 1990>.
III.D.l.b. Crisis mioclónicas
Fundamentalmente la epilepsia mioclónica juvenil, en la

que la monoterapia con valproato permite un control
adecuado o total de las crisis mientras que los demás
fármacos antiepilépticos son ineficaces <Chadwick DW,
1988; Clement MJ et al, 1988).
III.D.l.c. Crisis tónico—clónicas
El valproato en monoterapia controla un 70% de las crisis

(Turnbull DM et al, 1985; Miller JW et al, 1990>.
III.D.l.d. Epilepsia fotosensible:

Anexo 1 172
La monoterapia con valproato permite conseguir un control

adecuado en el 57% de los casos (Jeavons PM et al, 1986).
III.D.1.e. Epilepsia parcial
Incluye los cuadros de crisis parciales simples, crisis

parciales complejas y crisis tónico—clónicas
secundariamente generalizadas. Aunque el valproato es más
eficaz en las parciales simples y en las tónico—clónicas
generalizadas, tomando en conjunto todas las crisis
parciales se obtiene una desaparición de las crisis a
largo plazo en el 43% de los pacientes tratados con este
fármaco en forma de monoterapia (Dean SC et al, 1988;
Dulac O et al, 1986).
III.D.l.f. Síndrome de West
El valproato permite controlar la frecuencia de las

crisis en un 70% de los pacientes y hace desaparecer el
cuadro en aproximadamente un 30% de los mismos (Kotlarek
F et al, 1987; Dulac O et al, 1986; Prats 3M et al,
1991>. En un estudio sobre 13 pacientes, la
administración de valproato junto con vitamina B6 dió
lugar a la aparición de un número significativamente
menor de crisis que la administración aislada de
valproato ( Ita M et al, 1991). Además, en el tratamiento
de este síndrome es al menos igual de eficaz que la
adrenocorticotropina (ACTH) sin producir efectos adversos
tan importantes (Dyken PR et al, 1985).
Anexo 1 173
III.D.1.g. Síndrome de Lennox—Gastaut
Es una de las epilepsias de más dificil tratamiento. Aún

así, la monoterapia con valproato permite la disminución
del 80% de las crisis <Covanis A et al, 1982).
III.D.2. En el tratamiento de otros procesos:
a. En niños con retraso mental y trastornos afectivos

(Kastner T et al, 1990>.
b. Como alternativa al carbonato de litio en los

pacientes con psicosis maniaco—depresiva resistentes a
este tratamiento (Post PM, 1990; Mauri MC et al, 1990;
Shliselberg N et al, 1990; Calabrese JR et al 1990>.
c. Actividad antiulcerogénica en ratas, al igual que el

N—ftaloil CABA (Bhowmick 5 et al, 1990).
d. En el tratamiento de la corea de Sydenham, a dosis de

15—20 mg/kg/dia (Daoud AS et al, 1990).
e. Efectos ansioliticos en diferentes pruebas de conducta

animal (ratas>, asX. como otros agonistas CABA como
muscimol y baclofen (Shephard RA et al, 1990>.
f. Atenúa el desarrollo de hipertensión en ratas con

hipertensión espontánea, al igual que el agonista del
receptor GABA muscimol (Sasaki 5 et al, 1990).
g. En trastornos fóbicos (Primeau F et al, 1990>
h. En el tratamiento de la incontinencia anal de grado

Anexo 1 174
leve en pacientes sometidos a anastomosis ileo—anal

(Kusunoki M et al, 1990).
i. En el tratamiento de los cuadros coreiformes asociados

al envejecimiento (Hoffman AS et al, 1990)
j. En la toxicidad aguda por cocaína disminuye de forma

notable el cuadro convulsivo (Derlet RW et al, 1990>.
k. En el tratamiento de la epilepsia postraumática

(Fesler FA, 1991>.
1. Para el control rápido de los cuadros de manía aguda

<Mitchell P et al, 1991; Chou JC, 1991>, incluso en el
contexto del síndrome de Down (Sovner R, 1991), y en las
formas de manía del anciano (McFarland BH et al, 1990>.
in. En hamsters dtsz mutantes atenúa los movimientos

distónicos (Fredow G et al, 1991).
n. En la profilaxis de la cefalea recidivante crónica

(Mathew NT et al, 1991).
ñ. En el tratamiento de la enfermedad de Cushing de

origen hipotaláinico por su acción inhibidora de la
hormona liberadora de corticotropina (CRI) (Beckers A et
al, 1990; García—Rojas JF et al, 1991).
o. En el tratamiento de la mioclonia espinal (Jimenez EJ

et al, 1991).
p. En el control de las mioclonias en la enfermedad de

Huntington (Vogel CM et al, 1991).
Anexo 1 175
q. En el tratamiento de la esquizofrenia, asociado a

neurolépticos (Moriñigo A et al, 1989>.
r. En la estabilización a largo plazo de los cuadros de

migraña (Raskin NH, 1990).
III.E. Toxicidad y efectos secundarios
III.E.1. Efectos hepáticos
El mecanismo responsable de la hepatotoxicidad del ácido

valproico no ha sido completamente aclarado aunque parece
de tipo idiosincrásico, no relacionado con la dosis, y
relacionado con alguna alteración metabólica que da lugar
a la aprición de metabolitos tóxicos (Ziinmerman HJ et al,
1982; Lenn NJ et al, 1990). Se ha propuesto que la
hepatotoxicidad del valproato puede representar las
consecuencias de una sobrecarga del mismo debido a una
capacidad limitada de la beta—oxidación mitocondrial del
valproato, fundamentalmente en la fase catalizada por las
acil—CoA deshidrogenasas de ácidos grasos, con el
consiguiente acúmulo de algún producto tóxico procedente
del metabolismo de los aminoácidos de cadena ramificada
(Eadie MJ et al, 1990) y la subsiguiente alteración en el
metaboUsmo de los ácidos grasos (Appleton RE et al,
1990>
La toxicidad hepática se manifiesta en forma de cuadros

de insuficiencia hepática aguda de tipo Reye y de
caracter mortal, y en forma de elevación asintomática de
transaminasas. Esta última suele tener carácter
transitorio, responde a la disminución de la dosis y su
Anexo 1 176
incidencia en pacientes que reciben tratamientos

prolongados es de aproximadamente el 11% (Powell—Jackson
PR et al, 1984).
Los cuadros de insuficiencia hepática grave son mucho

menos frecuentes, del arden de 1 caso por cada 7,000
pacientes que reciben valproato, y aparecen claramente
relacionados con varios factores de riesgo:
a. Alteraciones metabólicas congénitas,

fundamentalmente las relacionadas con el ciclo de la urea
(deficiencia de ornitina—carbamiltransferasa) (Hjelm M et
al, 1986; Kay JDS et al, 1986) y la deficiencia de
carnitina (Coulter DL, 1984).
b. Enfermedad cerebral orgánica asociada a crisis

graves, retraso mental u otras enfermedades neurológicas
(Dreifuss FE et al, 1987).
c. Politerapia: La administración simultánea de
fenobarbital, fenitoina o carbamazepina, que tienen
capacidad inductora sobre el citocromo P—450, hace
posible la producción de metabolitos tóxicos del
valproato a traves de la w—oxidación <Rettie AE et al,
1987), posiblemente 2—en—propilglutarato (Ruhara T et al,
1990)
d. La edad menor de 2 años aumenta significativamente
el riesgo de esta complicación, riesgo que disminuye
paulatinamente al aumentar la edad del paciente que toma
el fármaco <Dreifuss FE et al, 1987>.
Los síntomas prodrómicos específicos de la toxicidad

hepática aguda son vómitos, anorexia, aletargamiento,
debilidad, somnolencia, edema, ictericia y pérdida del
control de las crisis (Jeavons PM, 1984).
Anexo 1 177
La identificación de los pacientes de riesgo elevado ha

dado lugar a una disminución ostensible en la frecuencia
de aparición de los cuadros de insuficiencia hepática
aguda de caracter mortal (Dreifuss FE et al, 1988;
Willmore U et al, 1991).
Aunque en algunos casos la supresión del fármaco ha dado

lugar a la recuperación del paciente (Thygesen ¿1 et al,
1982>, en otros ha progresado hacia un coma irreversible
a pesar de la interrupción en la administración de
valproato.
III.E.2. Efectos pancreáticos
Se han descrito cuadros de hiperamilasemia asintomática

y cuadros de pancreatitis aguda. Los primeros suelen ser
de naturaleza transitoria (Bale JE et al, 1982). En
relación con la pancreatitis aguda, su incidencia es
escasa en los pacientes en tratamiento con valproato, y
no parece ser un efecto relacionado con la dosis
(Williams LHP et al, 1983). Se inicia con náusea, dolor
abdominal agudo y vómitos y puede dar lugar a una
pancreatitis hemorrágica (Wyllie E et al, 1984>. Al menos
en un caso ha presentado una evolución mortal en
asociación con insuficiencia hepática aguda (Bouget J et
al, 1990).
III.E.3. Efectos metabólicos
El efecto metabólico del valproato que tiene mayor

repercusión en clínica es la hiperamonemia.
Se ha propuesto que la hiperamonemia es fundamentalmente

Anexo 1 178
de origen renal: los riñones liberan hacia el torrente

circulatorio una cantidad de amoniaco superior a la
normal debido, posiblemente, a un incremento del
catabolismo de la glutamina o a una disminución en la
síntesis de la misma <Warter 3M et al, 1983). Además, el
hígado del paciente que está tomando valproato presenta
una alteración el los procesos mitocondriales del ciclo
de la urea, lo que da lugar a una disminución en la
eliminación hepática del amoniaco de la sangre <Marini AM
et al, 1988; Castro-Gago M et al, 1990). Los defectos
enzimáticos del ciclo de la urea, especialmente las
deficiencias de carbamilfosfatosintetasa y de ornitina
carbamiltransferasa han dado lugar a algunos cuadros de
hiperaxuonemia en pacientes tratados con valproato
(Batshaw ML et al, 1982; Kay JDS et al, 1986). Otros
casos de hiperamonemia en estos pacientes han sido
atribuidos a deficiencia de carnitina (Ohtani Y et al,
1982)
La hiperanioneinia sintomática cursa con vómitos, ataxia o

confusión, y su incidencia es más elevada en los
pacientes tratados simultaneamente con otros fármacos
antiepilépticos, fundamentalmente fenobarbital, fenitoina
o ambos (Zaccara G et al, 1987>.
Otros factores que aumentan la incidencia de

hiperamonemia en pacientes que reciben valproato son la
ingesta de carbohidratos y proteinas (Laub MC, 1986> y el
ejercicio físico (Zaret BS et al, 1985).
III.E.4. Efectos hematológicos
El efecto hematológico principal del valproato es la

Anexo 1 179
trombocitopenia, que es infrecuente y que habitualmente

responde a la supresión o a la disminución de la dosis
del fármaco. La normalidad del componente
megacariocitario en la médula ósea de los pacientes que
han presentado esta complicación sugiere que la
trombocitopenia se debe a un consumo excesivo de
plaquetas <Morris N et al, 1981>.
También se ha propuesto un mecanismo inmunológico para la

trombocitopenia debido a la observación de anticuerpos
IgM circulantes o fijados a plaquetas <Sandíer Rl,! et al,
1979)
Otras alteraciones hematológicas menos frecuentes

observadas en pacientes tratados con valproato son
a. Anomalías en la agregación plaquetaria <von Voss H et
al, 1976>.
b. Prolongación del tiempo de hemorragia <Sussman HM et
al, 1979).
c. Prolongación en los tiempos de protrombina y parcial
de tromboplastina con disminución de uno o más
factores de la coagulación <Brandí U et al, 1986), y
con aparición de cuadros de enfermedad de von
Willebrand (Kreuz W et al, 1990>.
d. Disminución en los niveles de fibrinógeno <Sackellares
JC et al, 1980).
e. Leucopenia <Barr RD et al,. 1982)
f. Supresión de médula ósea en casos aislados con
desaparición del cuadro al suprimir el valproato
<Smith FR et al, 1980).
g. Síndrome mielodisplásico <Canick DJ et al, 1990).
Anexo 1 180
III.E.5. Efectos neurológicos
A nivel neurológico, el ácido valproico puede producir un

temblor con características similares al temblor
esencial, con una incidencia que ha oscilado entre el 1%
y el 11.7% en diferentes estudios <Covanis A et al,
1982). El mecanismo patogénico del temblor en estos
pacientes es desconocido aunque se ha propuesto que el
valproato podría interaccionar con cualquiera de los
neurotransmisores implicados en la producción de temblor
<Karas EJ et al, 1982).
En un estudio se ha considerado al valproato como
causante de asterixis (Bodensteiner JB et al, 1981>.
Independientemente de la hiperamonemia, el valproato
puede dar lugar a cuadros de estupor, confusión y coma en
pacientes aislados, posiblemente por una acción sedante
intrinseca del valproato a nivel cerebral <Sackellares JO
et al, 1979; Marescaux O et al, 1982).
El efecto más frecuente del valproato sobre la función

cognitiva es un aumento en el nivel de alerta que, aunque
suele tener un efecto beneficioso, en casos aislados ha
dado lugar a deterioro del comportamiento, hiperactividad
y agresividad <Covanis A et al, 1982; Thompson PJ et al,
1982; Bellinan Mii et al, 1977; Smith DB, 1991>.
III.E.6. Otros efectos
a. Gastrointestinales: Su incidencia es muy variable,

oscilando entre el 6% y el 45%, y consisten en pirosis,
nauseas, vómitos, diarrea y anorexia (Covanis A et al,
1982). Su incidencia disminuyó en gran medida al
sustituir la formulación ácida (ácido valproico) por la
Anexo 1 181
sal sódica correspondiente (valproato sódico) (Sherard ES

et al, 1980>. La introducción de grageas con
recubrimiento entérico ha eliminad en la práctica los
efectos secundarios gástricos <Schmidt D, 1984).
b. Endocrinológicos: Se han publicado casos aislados

de amenorrea secundaria relacionada con la adminstración
de valproato, aunque en la mayor parte de los casos el
cuadro amenorréico despareció al cabo de varios meses sin
necesidad de modificar la dosificación de este
medicamento (Margraf 3W et al, 1981>.
Posiblemente, el efecto adverso más frecuente producido

por la administración de valproato es el aumento de peso
de los pacientes, aumento que está en relación con el
aumento del apetito, el incremento en el depósito de
grasa y el edema que aparece e ocasiones en este tipo de
pacientes (Egger J et al, 1981; Dinesen E et al, 1984).
c. Dermatológicos: Los más frecuentes son los cambios

en la neturaleza del cabello, cuya incidencia oscila
entre el 2.6% y el 11%, y qu consisten en adelgazamiento
y ondulación del mismo (Gupta AR, 1988). En ocasiones se
produce alopecia transitoria (Hassan MN et al, 1976).
Se han descrito también casos muy aislados de erupciones
cutáneas de caracter inespecifico y evolución
autolimitada (Bruni ¿1 et al, 1983), así como un caso de
porfiria cutánea tarda <Flueckiger F et al, 1991> y de
vasculitis cutánea <Kamper AM et al, 1991).
d. Teratogénicos: Los efectos teratogénicos

producidos por el valproato son bien conocidos (Martinez—
Frias ML, 1990) y los más frecuentes son los defectos del
tubo neural, de forma que una mujer epiléptica que tome
Anexo 1 182
vaiproato durante el embarazo tiene un riesgo próximo al

1.2% de tener un hijo con esta complicación (Robert E et
al, 1983>. En embriones de ratón se ha demostrado un
acúmulo selectivo del valproato en el neuroepitelio
(Dencker L et al, 1990).
Se ha descrito también un “síndrome valproico fetal” de
caracter dismórfico que incluye aplasia radial bilateral,
focomelia proximal unilateral en miembro superior,
hipoplasia renal y atrofia cerebral (Verloes A et al,
1990)
e. Sobredosis: La sobredosis accidental o voluntaria

produce depresión grave del SNO y dificultad respiratoria
con fallecimiento para concentraciones plasmáticas 20
veces superiores a los niveles terapéuticos (Schnabel E
et al, 1984).
A nivel sistémico, la sobredosis de valproato produce
hiperamonemia, trombocitopenia y pancreatitis (Bigler D,
1985). A nivel bioquímico, se han observado
hiperamilasemia, hipocalcemia, hipernatremia e
hiperglucemia <Janssen E et al, 1985).
f. Misceláneos: Se han observado casos aislados de

hiperpJ.asia gingival (Behari M et al, 1991).
Al menos, se han descrito dos casos de lupus eritematoso
sistémico atribuido a la administración de valproato
(Bleck TP et al, 1990).
En animales de experimentación tratados con valproato se
han observado patrones de inhibición de la copulación
similares a los producidos por otros inhibidores de la
GABA transaminasa (Agmo A et al, 1991).
Anexo 3 183
ANEXO 2
1. Técnicas bioquímicas
Técnica radioenzimática de Di Donato para determinación de

carnitina libre y ésteres de carnitina en músculo
esquelético, hígado y plasma <Di Donato 5 et al, 1984).
La técnica incluye los siguientes pasos:
1. Desproteinización y separación de las clases de carnitina:
- 1700 uL de ácido perclórico (POA) 0,5 N +

300 uL de plasma, o bien
10 mg de hígado (+ 1 mL Ii~O desionizada), o bien
15-20 mg de músculo (+ 2 mL H20 desionizada>
- Agitar y dejar en hielo 10 minutos
— Oentrifugar 1,5 minutos a 8000 rpm
— Se decanta el sobrenadante, que contiene CL y SOAC
— El precipitado se lava dos veces con 1000 uL de
PCA 0,3 N centrifugándose cada vez 1,5 minutos
a 8000 rpm
2. Dosificación diferencial de carnitina y ésteres de cadena

corta <C2—C8):
- Se pipetean 1200 uL de sobrenadante

— Se añade una gota de Rojo fenol
— Seañaden lOOuLdeHepesKOHO,5MapHS,5
— Se deja 20 minutos en hielo
— Se neutraliza en el pH—metro con CO3HK a pH 6,6-
6,9
— Llevamos a 1500 uL con el tampón (1 gota=l0 uL)
Anexo 3 184
— Se divide en
Fracción A
— 500 uL de sobrenadante
- 20 uL de tampón Hepes KOH 0,5 M a pH 7
— 140 uL de 1<01 0,6 N <para ver la fuerza del
medio)
— Obtenemos carnitina libre
Fracción E
— 500 uL de sobrenadante
— 100 uL de tampón Hepes 1 N (se produce la
hidrólisis de carnitina libre y 02-Cia>
— Se incuba 45 minutos a 37 0
— Se neutraliza con HOl 2 N (aprox, 3 gotas)
utilizando pH—metro
- Añadir 20 uL de Hepes KOH 0,5 M a pH 7
— Obtenemos ésteres de cadena corta
3. Obtención de ésteres de cadena larga (012-020):

-Al precipitado lavado con PCA se le añaden 400 uL
de H20
— 1 gota de Rojo Fenol
— Se sonica
— Se añaden 30 uL de 1<11003 3M <neutralización>
— Se incuba 90 minutos a 56 * 0
- Reneutralizamos con HOL 2N <precipitación de prot,
4 a 6 gotas) hasta que coge un color naranja—
mandarina, Si nos pasamos en el pH añadimos 1—2
gotas de KOH hasta que el pH alcanza 6,6—6,9
— Añadir 20 uL de Hepes KOH a pH 7
4. Mezcla de incubación
2 muestras
— Acetil CoA 14o diluido 1,33/7,84 n11 1500 uL

Anexo 3 185
— Acetil OoA frio 1 uM/mL <100 nM> 100 uL

- NEM 3 mM (3,8 mg/lmL) 100 uL
- Hepes EDTA KOH 0,5 M pH 7 500 uL
5. Preparación de la curva standar: Mezcla standar

- 100 uL de Hepes KOH a pH 8,5
— Gota de Rojo Fenol
- 1000 uL de PCA
- 1000 uL de 1-carnitina 25 uM
- 380-400 uL de CO3HK hasta pH 7 <con pH—metro)
Cuando se neutraliza queda limpio

— Agitar y 20 minutos en hielo (para precipitar>
— Hacemos las siguientes fracciones
Fracciones H20 Mezcla standar
Blanco 500 uL —-
400 400 uL 100 uL

800 300 uL 200 uL
1600 100 uL 400 uL
- Añadir a cada fracción 20 uL de Hepes 1<011 a pH 7
6. Dosificación radioquimica
— 100 uL de muestras (por duplicado)

— 100 uL de mezcla de incubación
— 20 uL de CAT (diluida al 1/10)
— Agitar y dejar 30 minutos a temperatura ambiente
- Añadir 300 uL de resma Dowex 400 mientras se agita
- Agitar y 5 minutos en hielo (3 veces)
- Centrifugar 2 minutos a 8000 rpm
— Coger 300 uL de sobrenadante
— Añadir 3 mL de liquido de centelleo
Anexo 3 186
— Agitar bien
— Esperar 24 h
— Leer en contador
II. Técnicas histoquimicas
A. NADH—deshidroczenasa (Nachías MM et al, 1958)
a) Incubación 30 mm, a 37’C en una solución a pH

7,4 con:
- Buffer tris 0,2 M (pH 7,4>
(Sigma T—1503 R ) lOmí
— Nitroazul de Tetrazolio (Sigma 6876R)~• 10 mg
— NADH (DPNH) <Sigma 340~125R) 8 mg
b) Pases sucesivos por acetona al 30%, 60%, 90%, 60%
y 30%
c) Agua destilada
d) Montaje en medio acuoso (Gurr uvinert 36118R)
B. ATP—asa con Dreincubación a DH 9.4 (ATP—asa A)

<Round 3M et al, 1980>
a) Incubación a temperatura ambiente durante 15

minutos en una solución a pH 9,4 con:
— Buffer barbital-acetato 0,1 M 2 ml
— Cloruro cálcico 0,18 M 2 ml
— Agua destilada 6 ml
b) Incubación a temperatura ambiente durante 45
minutos en una solución a pH 9,4 con:
— Buffer barbital—acetato 0,1 M 2 ml
Anexo 3 187
— Cloruro cálcico 0,18 M 1 ml

— Agua destilada 7 ml
— ATP, sal sódica <Sigma A3127> 25 mg
c> Lavado en tres baños de cloruro cálcico al 1%
durante un total de 10 minutos
d) Lavado en cloruro de cobalto (Merck 2539> al 2%
durante 3 minutos
e) Lavado en ocho baños de buffer barbital—acetato
0,01 M
f) Lavado en agua corriente durante 60 segundos
g) Lavado en solución de sulfuro de amonio <Merck
5442) al 1% durante 30 segundos
h) Lavado con agua destilada
i) Deshidratación en etanoles de 96’ y 100’
j) Pase por xilol
k) Montaje en DPX <BDH Chemicals 36029)
C. ATP—asa con Dreincubación a oH 4.6 (ATP-asa B)

<Round 3M et al, 1980)
a) Incubación a temperatura ambiente en buffer
barbital-acetato a pH 4,6 durante 5 minutos
b) Lavado con la solución del paso a) de la técnica
n 4 durante 30 segundos
c) Posteriormente se siguen los mismos pasos que los
descritos en la técnica n 4 a partir del b)
inclusive
D. ATP—asa con oreincubación a oH 4.2 (ATP—asa O)

(Round 3M et al, 1980)
a> Incubación en buffer barbital—acetato a pH 4,2
durante 5 minutos
b) Lavado con la solución del paso a) de la técnica
4 durante 30 segundos
c) Posteriormente se siguen los mismos pasos que los
descritos en la técnica n’ 4 a partir del b)
Anexo 3 188
inclusive
El buffer barbital-acetato utilizado en las técnicas

de histoquimica para demostración de ATP-asa (A, B y
O) se prepara de la siguiente manera:
a> Solución de:
— Acetato sódico 1/7 M (Merck 6267R) .. 19,43 g
— Barbital sódico (Merck 6318R) 29,43 g
— Agua destilada 1 1
b> El buffer se prepara con 50 ml de esta solución,
20 inI de cloruro sódico al 8,5% y ácido
clorhídrico 0,1 N <1 ml para la ATP-asa A, 101,5
ml para la ATP-asa B y 117,5 ml para la ATP—asa
completando con agua destilada hasta 250 ml.
E. SDH <succinico deshidrogenasa’

a) Incubación a 37’ 0 durante 30 minutos en una
solución a pH 7,0 con:
— Succinato sódico (Ferosa 5—0645 R > .... 100 mg
R
— Nitroazul de tetrazolio (Sigma 6876 ) 10 mg
— Buffer tris 0,1 M (Sigma TlSO3R) lo mí
b) Pases sucesivos por acetona al 30%, 60%, 90%, 60%
y 30%
c) Lavado en agua destilada
R
d) Montaje en medio acuoso <Gurr Uvinert 36118
F. Sudán Roio
a) Sudán Rojo III filtrado 30 mm
b) Lavado en agua corriente
c) Etanol de 30’ 5 mm
d) Lavado en agua corriente
e) Hematoxilina de Cooley 15 mm
f) Lavado en agua corriente
R
g) Montaje en medio acuoso <Gurr Uvinert 36118
Anexo 3 189
La solución de Sudán Rojo III se prepara disolviendo

1 g de sudán III en 100 ml de etanol caliente e
incubando esta solución a 57 C durante 18 horas
Anexo 3 190
ANEXO 3
1. Datos crudos del peso corporal
La evolución temporal (dia—mes) de los pesos (en gramos) de

cada animal de los distintos grupos de tratamiento a lo largo
de toda la fase de experimentación fué la siguiente:
Fecha de pesaje
Grp n 17—2 22—2 29—2 7—3 14—3 21—3 28—3 11—4 18—4 25—4 2—5
1 1 170 190 200 220 230 230 230 240 240 250 260
1 2 170 190 210 220 230 230 240 240 250 250 260
1 3 170 190 200 210 220 230 240 240 250 250 250
1 4 180 190 210 220 240 240 240 240 250 250 260
1 5 160 170 190 200 220 230 230 230 240 240 240
2 6 170 180 200 220 230 230 240 250 260 270 270
2 7 180 190 220 230 240 240 250 259 260 260 270
2 8 160 170 180 180 200 210 220 230 230 240 240
2 9 170 200 190 210 230 240 250 250 260 270 280
2 10 170 190 200 210 230 230 240 250 260 260 260
3 11 170 190 190 200 220 220 220 230 250 250 250
3 12 170 200 200 220 240 250 260 260 260 260 260
3 13 180 180 200 220 220 220 240 250 270 280 280
3 14 170 200 200 220 240 250 250 250 260 270 270
3 15 170 190 200 210 230 250 250 260 280 280 280
4 16 170 190 200 210 220 220 230 240 240 250 250
4 17 190 210 220 230 250 250 260 270 280 280 280
4 18 170 190 200 210 220 220 230 240 240 250 250
4 19 180 190 200 220 220 240 240 250 260 260 260
4 20 170 180 190 210 210 230 230 240 240 250 250
5 21 180 200 210 230 250 250 260 280 280 280 280
5 22 170 180 200 220 240 250 250 260 260 270 270
5 23 190 200 220 230 250 250 250 270 290 290 290
5 24 180 190 210 230 240 240 250 260 270 270 270
5 25 170 190 190 200 210 220 240 250 250 260 260
6 26 180 190 200 220 240 240 250 260 270 270 270
6 27 180 190 230 250 270 280 280 280 290 290 290
6 28 170 190 220 240 260 260 280 280 290 300 300
6 29 170 180 200 220 240 240 240 250 270 280 280
6 30 170 180 190 200 220 220 220 230 240 250 250
Anexo 3 191
II. Datos crudos del estudio bioquímico
Los valores de musculo e higado están expresados en nmol/mg NCP

Los valores plasmaticos lo están en nmol/ml
Plasma Hígado Músculo
Gr n CL SCAC LCAC CL SCAC LCAC CL SCAC LCAC
1 1 20,5 4,7 2,61 6,5 2,2 0,21 10,1 2,8 1,10

1 2 18,2 5,8 2,10 4,8 1,6 0,62 9,7 3,3 0,80
1 3 26,1 6,4 1,10 5,5 2,2 0,55 14,2 2,4 1,50
1 4 25,5 6,2 1,40 7,5 2,8 0,50 10,8 3,9 1,80
1 5 27,7 5,4 1,55 6,8 3,4 0,38 12,7 4,1 1,20
2 6 12,2 15,5 3,70 4,2 2,0 1,50 9,1 2,2 2,25

2 7 15,5 12,8 3,70 3,6 1,8 1,80 9,2 3,8 2,15
2 8 18,2 10,6 4,20 4,5 2,5 2,50 10,8 3,5 2,31
2 9 14,2 8,8 4,50 5,2 2,0 2,60 10,5 4,2 3,20
2 10 11,8 10,5 3,80 5,5 2,6 3,20 10,8 4,2 1,60
3 11 8,2 16,8 3,80 2,6 2,2 2,00 9,0 3,5 3,30

3 12 10,4 18,8 3,90 2,4 1,6 2,20 8,8 4,6 2,81
3 13 8,8 11,9 7,70 2,7 2,2 3,00 10,5 3,9 2,77
3 14 12,5 14,2 6,80 3,8 1,6 3,20 11,6 4,4 3,95
3 15 9,6 11,2 7,10 4,1 2,5 3,80 11,2 5,2 2,30
4 16 22,8 19,2 2,28 5,2 2,2 0,20 10,2 2,6 1,81

4 17 20,5 18,8 2,20 4,9 1,8 0,45 10,5 3,9 1,60
4 18 22,6 16,2 0,80 6,2 1,8 0,60 10,5 3,8 1,55
4 19 19,5 14,5 1,10 7,2 2,9 0,65 11,8 3,6 1,88
4 20 30,2 13,8 1,20 8,8 3,2 0,40 12,2 3,5 1,70
5 21 20,5 19,9 1,80 4,6 2,0 0,35 10,8 3,4 2,20

5 22 18,8 19,2 2,30 4,2 1,8 0,55 10,2 4,2 1,60
5 23 20,2 19,8 2,25 5,5 2,0 0,60 10,6 3,6 1,40
5 24 18,6 18,2 2,10 6,0 1,7 0,48 11,0 4,0 2,00
5 25 26,8 16,2 1,10 5,2 2,2 0,42 11,8 5,5 1,60
6 26 22,6 4,2 2,40 7,2 2,8 0,48 11,2 2,6 0,90

6 27 24,5 6,0 2,00 5,2 1,4 0,55 9,4 3,0 1,10
6 28 24,8 6,2 1,70 5,5 2,0 0,46 15,5 2,6 1,20
6 29 29,8 6,6 1,60 7,2 2,4 0,62 11,8 4,1 1,90
6 30 30,5 5,5 1,80 6,6 3,5 0,46 16,2 4,0 1,80
Anexo 3 192
III. Datos crudos de la morfometría óptica
Dado el elevado número de mediciones a continuación se

incluyen las cifras medias del diámetro de las fibras
tipo 1 y tipo II de cada músculo de cada animal, en j¿. La
cifra entre paréntesis corresponde al número de fibras
medidas.
Sóleo ELD
Grp n Tipo 1 Tipo II Tipo 1 Tipo II
1 1 51,93(238) 37,75< 5) 29,00 (40) 42,19(196>

1 2 49,91(248) 52, 51(34) 24,53 42,74 (223)
1 3 47,96<203) 39,46(21) 23,96 (52) 42, 51< 173>
1 4 45, 72 <2 01) 38,42(45) 30,43 (16) 43,70(211)
1 5 48,80(222) 42,03(26) 35,25 (20) 48,95(237>
2 6 54, 10(215) 47,15(56) 24,95 (29> 37,43 (202)

2 7 52,58<185) 35,33(77> 26,37 (49) 39,43 (232>
2 8 47,88(243) 39,67<22> 32,65 (23) 43,36 (238)
2 9 51,30(217) 50, 71< 42> 29,24 (41) 41,02 <234)
2 10 50,33(256) 31,49< 1) 35,27 <16) 47,52 (197)
3 11 57,05(243) 30,82< 1> 30,57(36) 38,44 (221>

3 12 60,95<234) 46,23 (34) 26,40<38) 39,87 (219)
3 13 51,10(213) 45, 46 (51) 28,24 (39) 40,77(214)
3 14 53,42(188> 49,19<46) 28,21<27) 38, 98 (234)
3 15 57,11<235) 29,93( 1) 31,49(52> 44, 08 (2 14)
4 16 50,54(265) 22,55< 1) 26, 59 43,05 ~

4 17 54,42(220) 41,64 <13> 25,48(38> 45, 51< 272)
4 18 50,05(277) 46,99<19) 39,23 (27) 51,41<245)
4 19 54,04(233) 41,21(30) 29,48<39) 48,39(248>
4 20 50,65(270) 55,80< 1> 30,19(37) 47,09(280)
5 21 52,25<217) 51,88 (~~> 32,01 (26) 42,49(286)

5 22 49,43<247> 43,05<70) 30,43 (19) 44,94<267>
5 23 48,07(267> 45,12(37) 30,94 (30) 44,25(273)
5 24 50,07(245) 47,76( 6) 28,33 ( 2) 48,07(242)
5 25 42,47 (302) 37,80<35> 30,43 (19) 44,94 (267)
6 26 46,27(267) 46,63 <27) 26, 91< 23) 49,83 <242)

6 27 50,41(268) 47,43 (36) 25,27(32> 46,32 (266)
6 28 48,08(235) 49,37 (60) 24,62(26) 40,00 (299)
6 29 49,24(234) 46,28 (21) 25,60(27) 45,38 (269>
6 30 47,88(273) 47,43 <36) 25,60<27) 45,38 (269)
Anexo 3 193
IV. Datos crudos de la morfometria
ultraestructural
A. Area mitocondrial
Las mediciones de la superficie mitocondrial (en jA)

efectuadas en el músculo sóleo (fibras tipo 1) de cada
grupo de tratamiento fueron las siguientes (la cifra entre
paréntesis indica el número de mediciones realizadas):
SOLEO
Grpl Grp2 Grp3 Grp4 Grp5 Grp6
0,02< 1> 0,02< 1> 0,01< 5) 0,01< 3) 0,0l( 4> 0,01( 1)

0,03( 6> 0,03( 2> 0,02(31) 0,02( 5) 0,02< 8) 0,02< 1)
0,04< 9) 0,04< ~> 0,03(33) 0,03< 3) 0,03< 9> 0,03( 7)
0,05<11> 0,05< 9) 0,04(20) 0,04( ~> 0,04< 2) 0,04< ~>
0,06< 5) 0,06< 9) 0,05(10) 0,05(10) 0,05(14) 0,05( 4)
0,07< 8) 0,07< 6) 0,06(14> 0,06( 1> 0,06< 6) 0,06( 7)
0,08< 4) 0,08( 6) 0,07< ~> 0,07( 2) 0,07< 2) 0,07< 5)
0,09( 3) 0,09( ~> 0,08< 2) 0,08< 4) 0,08( 1> 0,08(10)
0,l1( ~> 0,10< 4) 0,10< 1) 0,09< 1> 0,09< 1) 0,09< 4>
0,13< 3) 0,1l( 4) 0,11< 1) 0,10< 2) 0,1l( 1) 0,10< ~>
0,14< 3) 0,12( 3) 0,12< 2) 0,13< 2) 0,11< 3)
0,15< 2> 0,13< 2> 0,16< 2> 0,14< 2) 0,12< 2)
0,17< 1> 0,14< 1) 0,33< 1) 0,25< 1) 0,13< 3)
0,19< 1> 0,15( 4) 0,16< 1>
0,20( 1> 0,16< 1) 0,19< 1)
0,21< 1) 0,17< 3) 0,22< 2)
0,23< 1) 0,20< 1) 0,25< 1)
0,26< 1>
0,37< 1)
0,56< 1)
Anexo 3 194
Con respecto al músculo ELD <fibras tipo II), las áreas

mitocondriales medidas (en p~> fueron las siguientes <entre
paréntesis el número de mediciones):
ELD
Grp 1 Grp 2 Crp 3 Grp 4 Grp 5 Grp 6
0,01(12) 0,02< ~> 0,03( 3) 0,01< 1> 0,02< 4) 0,01< 1>

0,02< 8) 0,03< 4) 0,04< 3) 0,02< 8) 0,03< 6) 0,02< 5)
0,03(11) 0,04( 2) 0,05< 9> 0,03(18) 0,04< 4) 0,03< 6)
0,04< 9> 0,05< 3) 0,06< 7) 0,04(18) 0,05< 1) 0,04< 3)
0,05( 5) 0,06< 7) 0,07< 7) 0,05< 5> 0,08< 2) 0,05< 4)
0,06< 4) 0,07< 1> 0,08< 1) 0,06< 1>
0,07< 2) 0,08< 1) 0,09< 2) 0,07< 3> 0,10< 2) 0,07< 3)
0,08< 2) 0,09< 2> 0,10( 3) 0,08< 1) 0,16< 1> 0,08< 1)
0,10< 3) 0,11< 1> 0,12< 2) 0,09< 1> 0,10< 1>
0,1l( 2) 0,12< 1) 0,13< 2) 0,15< 1) 0,11< 1>
0,13< 1) 0,13< 2> 0,14< 2> 0,12( 1)
0,16< 1) 0,14< 2> 0,16< 1>
0,18( 2) 0,25< 1)
0,19< 2> 0,34< 1)
0,21< 1)
0,23< 1)
0,43< i)
0,44< 1)
B. Grosor de la banda Z
A continuación se incluyen las mediciones del grosor de la

banda 2, en ni», de los músculos sóleo (fibras tipo 1> y ELD
(fibras tipo II) en cada grupo de tratamiento:
Anexo 3 195
Sóleo ELD
1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6
130 120 130 130 140 160 070 090 090 070 100 100
140 120 150 150 130 160 070 080 120 060 100 080
130 150 130 120 140 190 080 110 100 070 080 090
120 120 150 110 160 170 080 090 110 070 090 090
140 130 120 140 130 130 080 090 100 080 070 090
150 110 120 170 160 150 060 110 090 080 080 3.00
110 130 120 150 130 160 090 090 110 080 090 080
130 140 120 150 160 140 070 060 100 070 070 090
120 140 130 140 130 140 070 100 110 070 080 100
140 120 140 140 140 170 080 080 100 060 070 130
130 120 110 130 140 160 070 080 070 090 100 090
130 120 110 140 150 150 080 090 090 080 090 090
130 120 120 140 160 150 060 080 110 060 090 110
120 110 120 160 150 190 080 090 090 080 100 090
140 120 110 120 160 180 080 080 120 080 090 120
140 140 110 140 140 150 070 060 110 080 090 110
110 130 100 160 150 120 070 070 100 090 090 100
130 140 110 150 140 130 080 080 090 070 090 120
120 130 110 160 130 130 070 080 090 070 100 100
140 140 140 160 130 150 080 090 100 080 100 100
120 110 130 150 140 140 080 090 100 070 loo 090
120 130 130 150 160 130 070 090 100 080 080 080
110 140 120 150 130 170 070 070 120 080 100 100
100 150 130 170 170 170 080 090 110 070 090 110
120 130 130 170 130 160 080 090 130 080 080 100
100 130 140 130 150 160 080 090 130 080 090 090
140 130 120 140 130 140 080 060 110 080 100 100
110 120 140 160 160 140 080 080 100 090 080 110
110 130 100 150 150 130 100 070 080 090 080 090
150 150 110 160 160 140 070 080 100 080 080 100
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Neuroloav 33: 1348—1350, 1983
Thygesen J, Boesen F
Two cases of reversible liver lesion induced by
valproate
Treem WR
Pnimary carnitine deficiency due to a failure of
cannitine transport in kidney, muscle, and fibroblasts
N Enal 5 Med 319: 1331—1336, 1989
Tniggs VIS, Bohan TP, Lin SN, VIjílmore LS

Valpnoate—induced coma witb ketosis and cannitine
insufficiency
Arcb Neunol 47: 1131—1133, 1990
Tripp ME, Katcher NL, Peters HA

Systemic carnitine deficiency presenting as familial
endocardial fibroelastosis
N Enal 5 Med 305: 385—389, 1981
Tunnbull DM, Howel D, Rawlins MD, Chadwick DPI

Wich drug for the adult epileptic patient: Phenytoin or
valproate?
Br Med 5 290: 815—819, 1985
Vacha OM, Corsi 14, Giorcelli O, D’iddio 5, Maccani F

Serum and muscle 1—carnitine Leveis in hemodialyzed
patients duning and after long—term 1-carnitine
treatment
Cunrent Tber Res 37: 505—516, 1985
Vacha GM, Giorcelli O, Siliprandi N, Corsi M

Favorable effects of 1—cannitine treatment on
bypertniglycenidemia in hemodialysis patients: Decisive
role of low levels of high-density
lipoprotein-cholestenol
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Vajda EJE, Donnan GA, Phillips 3, Bladin PP

Human brain, plasma and cenebrospinal fluid
concentration of sadiuxa vaiproate af ter 72 hours of
therapy
Neunoloc¿v 31: 486—487, 1981
Van Erp MG, Van Dongen AM, Van den Beng RS

Voltage-dependent action of valpnoate on potassium
channeis in frog nade of Ranvier
Eur 5 Pharmacol 184: 151—161, 1990
Van Hinsbengh VW, Scheffer MA

Ef fect of prapionyl-1-carnitine on human endothelial
celís
Candiovasc Drucis Ther 5 (Suppl 1>: 97-105, 1991
Vecchiet L, Di Lisa F, Pienalisi O, Ripani P, Menaba R,

Giamberandino MA, Silipnandi N
Influence of 1—carnitine administration on maximal
physical exercise
Eur 5 AntA Phvsiol 61: 486—490, 1990
Veitcb XC, Van Hoof F

In vitro effects of eight-carban fatty acids on
oxidations in nat liver mitochondria
Biochem Phanmnacol 40: 2153—2159, 1990
Verity MA
Infantile Pompe’s disease, lipid stonage, and partial
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Verloes A, Fnikiche A, Oremillet C, Paquay T, Decortis

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Recuperación y utilización posterior de la información
contenida en una base documental mediante un programa
informatico
Med Clin 98: 637, 1992
Bibliognaf la 245
Vogel CM, Druny 1, Terry LO, Young AB

Myoclonus in adult IIuntington’s diasease
Ann Neunol 29: 213—215, 1991
Von Voss H, Petnicb C, XCancb ¡3, Schulz H—U, Oobel U

Sodium valpnoate and platelet funetion
Br Med 5 2: 179, 1976
VIabnscbaffe U, Loscher W
Ef fect of selective bilateral destruction of the
substantia nigra on antiepileptic drug actions in
kindled rats
Eur 5 Pharmacol 186: 157—167, 1990
VIanner O, ‘Wackenle B, Boeckie H, Schollmeyer P, Honí VIII

Plasma and red blood celí carnitine and cannitine
esters duning 1—carnitine therapy in hemodialysis
patients
Am 5 Clin Nutr 51: 407—410, 1990
VIarady EA, Boruxa P, Stall O, Millspaugh 5, Taggant E,

Lum O
Cannitine status of pediatnic patients on continuous
ambulatony peritoneal dialysis
Am 5 Nenhnol 10: 109—114, 1990
PIare AS, Bunton CVI, McOanny JD

Systemic carnitine deficiency: Report of a fatal case
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Weisiger R, Gollan 5, Ocknen R

Receptor for albumin on the liver celí surface may
mediate uptake of fatty acids and other albumin—bound
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Science 211: 1048—1052, 1981
Bibliognaf la 246
Weschler A, Aviraxa M, Levin M, Better OS, Brook JO

High dose of 1—carnitine increases platelet aggnegation
and plasma tniglycenide leveis in uremic patients on
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White LIL, Scates PW

Acetyl-l—cannitine as a precursor of acetylcholine
Neurochexa Res 15: 597—601, 1990
Wilden ES, Ramsay E, Murphy ¿5V, ¡Caras BS, Marquarot 1<,

Hammond ES
Companison of valproic acid and phenytoin in newly
diagnosed tonic—clonic seizures
Neurolocsv 33: 1474—1476, 1983
Williams LHP, Reynalds RP, Exneny SL

Pancreatitis during sodiuxa valproate treatment
Arch Dis Child 58: 543—547, 1983
Willmore LS, Tniggs VIS, Pellock SM

Vaiproate toxicity: nisk—screening strategies
(editorial)
5 Ohild Neunol 6: 3-6, 1991
Wyllie E, Wyllie R, Cruse RP, Erenberg G, Rothner Al)

Pancreatitis associated with valproic acid therapy
Am 5 Dis Child 138: 912—914, 1984
Young RS, Bergman 1, Gang DL

Fatal Reye—like syndrome associated witb valproic acid
Ann Neural 7: 389, 1980
Zaccana G, Campostrini R, Paganini 14, Messori A,

Valenza T, Annetoli O, Zappoli R
Long-term treatment with sodium valproate: monitoning
of venaus amaaonia concentrations and adverse effects
Then Drucz Monit 9: 34-40, 1987
Zanet ES, Marini AM

Standanization in VPA—induced hyperaxmnonemia (letter to
the editor)
Neuroloav 35: 136—131, 1985
Bibliografía 247
Zeise Mt, Kasparow S, Zieglgansberger VI

Valproate supresses N—methyl—D—aspartate-evoked,
transient depolanizations in the rat neocortex in vitro
Brain Res 544: 345—348, 1991
Zixaxaerman HS, Isbak KG

Valproate—induced hepatic injur>’: analyses of 23 fatal
cases
Henatoloav 2: 591—597, 1982
Zona O, Avoli 14
Effects induced by the antiepileptic drug valpnoic acid
upon the ionic currents recorded in nat neocontical
neunons in ceil culture
Exn Brain Res 81: 313—317, 1990

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UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID

HOSPITAL UNIVERSITARIO “DOCE DE OCTUBRE”

DEPARTAMENTO DE ANATOMíA PATOLOGICA

Efectos del ácido vaiproico sobre el

metabolismo de la carnitina: Estudio

bioquímico y morfológico en la rata

Madrid, Septiembre 1992

PATOLOGICA Y DIRECTOR DEL DEPARTAMENTO DE ANATOMíA

PATOLOGICA DE LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSIDAD

INFORMA Que el trabajo EFECTOS DEL ACIDO VALPROICO

Y MORFOLOGICO EN LA RATA ha sido realizado por D.

Santiago Madero García bajo la dirección del Prof. D.

José Ramón Ricov Campo.

Se trata de un trabajo cuyo planteamiento, desarrollo y

exposición de resultados y conclusiones tienen

características adecuadas, por lo Que me es grato emitir

este informe favorable como Director del Departamento

para Que sea defendido para optar al grado de Doctor.

Lo aue firmo en Madrid a 24 de Septiembre de 1992

Prof. Julián Sanz Esponera

PATOLOGICA DE LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSIDAD

CERTIFICA Que D. Santiago Madero García ha realizado en

este Departamento, y bajo mi dirección, el trabajo

titulado Efectos del ácido valproico sobre el

metabolismo de la carnitina. Estudio bioquímico y

morfológico en la rata, y que dicho trabajo reúne las

condiciones necesarias para ser leido como Tesis Doctoral

con objeto de optar al grado de Doctor.

A petición del interesado, y para que conste donde

proceda, firmo el presente certificado en Madrid a die2

y seis de Septiembre de 1992.

Prof. José Ramón Ricoy Campo

II. Acido vaiproico 10

TEA. Desarrollo de la fase

11.0.2. Microscopia electrónica ... 29

II.D. Metodología del estudio

1. Desarrollo de la fase experimental 37

II. Peso corporal 37

III. Resultados del estudio bioquímico 38

111.0. Músculo sóleo 54

IV. Resultados del estudio óptico 60

IV.A. Músculo esquelético 60

V. Resultados del estudio ultraestructural . 67

V.A. Area mitocondrial 67

V.B. Grosor de la banda 2 70

1. Desarrollo de la fase experimental 72

II. Peso corporal 73

III. Estudio bioquímico 75

IV. Estudio con microscopIa óptica 82

V. Estudio con microscopia electrónica 87

1. Características del músculo

II.A. Características generales 110

II.B. Metabolismo 111

11.0. Mecanismo de acción 119

II.D. Síndromes por deficiencia de

III .A. Características generales 153

III.B. Mecanismo de acción 154

111.0. Farmacocinética 158

III.D. Utilización clínica y