DETERMINACIÓN DE CREATININA

I. INTRODUCCIÓN

La creatinina es una molécula de deshecho que se genera a partir del metabolismo muscular. La
creatinina proviene de la creatina, una molécula muy importante para la producción de energía
muscular. Aproximadamente el 2% de la creatina del cuerpo se convierte en creatinina cada día.
La creatinina se transporta desde los músculos por medio de la sangre hacia el riñón. Los riñones
filtran la mayoría de la creatinina y la eliminan en la orina.

Aunque es una sustancia de deshecho, la creatinina es una prueba diagnóstica esencial, ya que
se ha observado que su concentración en sangre indica con bastante fiabilidad el estado de la
función renal. Si los riñones no funcionan bien, no eliminan bien la creatinina y por lo tanto ésta
se acumula en la sangre. Por esto la creatinina puede avisar de una posible disfunción o
insuficiencia renal, incluso antes de que se presenten síntomas. Por eso la creatinina suele
figurar en los análisis de sangre que se realizan comúnmente.

II. MARCO TEÓRICO

Creatinina (Instituto de Cirugía Urológica Avanzada (2002))

La creatinina es una molécula de deshecho que se genera a partir del metabolismo muscular. La
creatinina proviene de la creatina, una molécula muy importante para la producción de energía
muscular. Aproximadamente el 2% de la creatina del cuerpo se convierte en creatinina cada día.
La creatinina se transporta desde los músculos por medio de la sangre hacia el riñón. Los riñones
filtran la mayoría de la creatinina y la eliminan en la orina.

Aunque es una sustancia de deshecho, la creatinina es una prueba diagnóstica esencial, ya que
se ha observado que su concentración en sangre indica con bastante fiabilidad el estado de la
función renal. Si los riñones no funcionan bien, no eliminan bien la creatinina y por lo tanto ésta
se acumula en la sangre. Por esto la creatinina puede avisar de una posible disfunción o
insuficiencia renal, incluso antes de que se presenten síntomas. Por eso la creatinina suele
figurar en los análisis de sangre que se realizan comúnmente.

DETERMINACIÓN DE CREATININA
“El mejor parámetro bioquímico sanguíneo de la función renal es la creatinina. En principio,
cuanto mayor es el descenso de la función renal, tanto más elevado es el valor de la creatinina
sérica… Las técnicas analíticas de determinación de la creatinina se resumen en el método
colorimétrico de Jaffé y en el método enzimático de la creatininasa. En la reacción de Jaffé, el
ácido pícrico en medio alcalino forma con la creatinina un tautómero de picrato de creatinina de
color naranja rojizo brillante que se mide a 500nm…La disminución de absorbancia a 340nm es
directamente proporcional al nivel de creatinina de la muestra” (Portillo et. al. 1997)

SOLUBILIZACIÓN Y PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS POR SALES

“Las sales neutras afectan la solubilidad de las proteínas globulares: a bajas concentraciones,
las sales incrementan la solubilidad de las proteínas ya que se induce la ionización de los grupos
R disociables de la proteína. Por otra parte, conforme aumenta la fuerza iónica, se puede
precipitar una proteína, ya que la concentración elevada de sales puede eliminar agua de
hidratación de las moléculas de proteína”. (Grajales, 2005)

III. RESULTADOS Y DISCUSIONES

3.1 RESULTADOS
Resultado de las respectivas absorbancias
BLANCO ESTÁNDAR MUESTRA

0.0680 0.228 0.126

0.055 0.206 0.123 no lo tomamos

0.094 0.157 0.166

0.065 0.186 0.115

3.1.1. REACCIÓN DE COLOR: (Reacción de JAFFÉ)

TUBO
BLANCO ESTÁNDAR MUESTRA
REACTIVO

Sol. estándar de
3,0 mL
creatinina

Muestra
clarificada 3,0 mL
(filtrado)

H2O destilada 3,0 mL

Sol. de pocrato
alcalino 1:1
1,5 mL 1,5 mL 1,5 mL
(preparado en el
momento)
 Mezclar y agitar por inversión: dejar reposar por 10 minutos y leer a 520 nm

Con los resultados de la práctica, hallamos su promedio y obtenemos:

BLANCO ESTÁNDAR MUESTRA

ABSORBANCIA 0.0705 0.1943 0.1213

Creatinina + Picrato Na -------- Ác. Picrínico + Picrato

(Amarillo) (Rojo- Naranja) (amarillo)
React. en exceso

Landa óptimo 𝜆= 520mm

NaOH + Ac. Pícrico ------- Picrato

3ml 3ml 6ml.

- Solución Stock. 100 mg%

100 mg ------- 100 ml
0.6 mg ------- 0.6 ml
0.6 mg ------- 100 ml (sol. stock)
1.8 x 10-2 mg ----- 3 ml
1.8 x 10-2 mg ----- 4.5 ml
18/45 x 10-2 mg ----- 1 ml (T. standar)

Cm = (Cst/Ast)*Am

- hallamos la concentración de creatinina

Cst = 18/45 x 10-2 mg/ml

Ast = 𝐴𝑆𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟 − 𝐴𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 = 0.1943 - 0.0705 = 0.1238
Am = 𝐴𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 − 𝐴𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 = 0.1213 - 0.0705 = 0.0508
Reemplazando los datos:
Cm = (18/45 x 10-2 mg/ml)/ 0.1238 * 0.0508 =
0.01013 mg/ml

0.0013mg ------ 1 ml
5.85 * 10-3 mg------- 4.5 ml
5.85 * 10-3 mg ------- 3ml Lfil
0.039 mg -------- 20 ml Lfil
0.039 mg -------- 2ml de sangre
X --------- 100ml de sangre

x= 1.95 mg/ dL

Concentración de creatinina en vacas

(Según Fasano, etol) La creatinina es un buen indicador del funcionamiento renal que varía
visiblemente en ovinos lecheros. En ciertos casos los promedios de creatinina en animales
jóvenes son un poco más elevados que en los adultos. ,ovinos de un año de edad (2,7 ± 0,3
mg/100 ml), comparado con el promedio de los adultos (5 años) de la misma raza (2,3 ± 0,5
mg/100 ml), cuya diferencia fue significativa (P<0,05).
Un estudio en Venezuela por Di Michele de Rosa , proporcionó valores promedios entre 1,59 y
1,72 mg/100 ml.
- Nuestra concentración de creatinina en sangre es mucho mayor a lo indicado por los
indicado por lo autores mencionados, aunque puede presentarse casos con
concentraciones fuera del rango, ya que depende de otros factores. (Rosa, etol) puede
ser resultado de un diferente manejo de los animales y/o de condiciones ambientales.
También puede haber algún manejo del equipo o una falla en el procedimiento.

Concentración de creatinina en sangre de humanos

La creatinina es el resultado de la degradación de la creatina, elaborado por el riñón y el hígado
y almacenado por el músculo donde se utiliza como energía celular . debido a que el mayor
productor de creatinina es el músculo hay una relación con la edad y el género, pero puede
alterarse por una dieta de alto consumo de carne
Los valores normales en los hombres adultos son entre 0,7 y 1,3 mg por decilitro. En las mujeres
adultas entre 0,5 y 1,2 mg por decilitro En los niños pequeños se aceptan valores de 0,2 y 1
mg/dl. Los valores más altos de 4 mg/dl se deben a un fallo renal importante.
- Si nuestra muestra hubiera sido de un hombre, no pertenece al promedio normal de
creatinina, pero la variación no es mucha, por lo tanto no presenta una enfermedad sino
que puede deberse a la concentración en ese momento, que no haya cumplido con el
estado de ayuna requerido u otros factores momentáneos.

IV. CONCLUSIONES
❖ La creatinina al ser un líquido biológico es incoloro por ello formamos de un compuesto
coloreado, un líquido con coloración para poder determinar la absorbancia de la
 creatinina. Usamos la ley de Lambert y Beer para determinar la concentración en la
sangre.

V. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA:
● Díaz. Aspectos básicos de bioquímica clínica.Ediciones Díaz de Santos, España,
1997
● DI MICHELE DE ROSA, S. Valores de N-ureico, Creatinina, Fosfatasa alcalina,
Transaminasas (GOT y GPT), Glucosa y Colesterol en Bovinos, OvInos, Caprinos,
Caballos y Perros. Valores de Fosfatasa alcalina, GOT y GPT en Ratas, Hamster,
Ratones, Cobayos y Conejos. Rev. Med. Vet. y Paras. 24, 87-102
● Palma Fasano de Magnífico, Edgar Otaiza V. y Vicente Cumare. Concentración de
Hemoglobina Ureico y Creatinina en Bovinos Lecheros de la Zona Centroccidental
de Venezuela.Cátedra de Bioquímica. Facultad de Ciencias Veterinarias.
Universidad Central de Venezuela.
(http://sian.inia.gob.ve/repositorio/revistas_ci/Agronomia%20Tropical/at2903/arti/fa
sano_p.htm )
● Di Michele de Rosa, Silvana; Otaiza V., Edgar y Valeri S., Humbert. Valores
Hematológicos y de la Química Sanguínea en Bovinos de los Estados Carabobo y
Guárico. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Bioquímica. Venezuela.
(http://sian.inia.gob.ve/repositorio/revistas_ci/Agronomia%20Tropical/at2803/arti/mi
chele_s.htm)
● Dvorkin, Cardinali, Iermoli, Mario A. Dvorkin, Daniel P. Cardinali. Bases Fisiologicas
de la Práctica Médica. Editorial Médica Panamericana.Pág. 549-551
● Grajales Muñiz, Ofelia. 2005. Bioquímica vegetal: Bases para su aplicación
fisiológica. UNAM. México. Página 40.
● Portillo, M. Fernández del Barrio y Paredes Salido. Aspectos Básicos de
BIOQUÍMICA CLÍNICA. Editorial Díaz de Santos, S.A. España. Página 83-84.

VI. PROBLEMAS ENCARGADOS

6.1. Una suspensión aislada de E. coli da una absorbancia de 0.793 a 260 nm

1%
en una celda de 1 cm a pH 4,5. Si el E1ml es 197, calcular la concentración en mg/mL.

A=e.l.c
0.7930 = 197 cm-1 . M-1 . 1cm . c
c = 0.00403 mg/mL

6.2. Calcule el coeficiente de extinción molar a 361 nm para la acuocobalamina en

tampón fosfato 0,1M a pH 7,0 a partir de los siguientes datos obtenidos en una celda
de 1 cm.

SOLUCIÓN CONC. x 10-5 M Io I

 A 2,23 93,1 27,4

B 1,90 94,2 32,8

Nota.- Halle el coeficiente de extinción molar para cada solución y luego el promedio
de estos valores.

● Solución A:

Log (IO / I ) = .b.c

Log (93.1 / 27.4 ) = A . 1 . 2.3 . 10-5

A = 2.3821 x 104 cm-1. M-1

● Solución B:

Log (IO / I ) = .b.c

Log (94.2 / 32.8 ) = B . 1 x 1.9 . 10-5

B = 2.4115 x 104 cm-1. M-1

● Promedio:

=A + B

= 2.3821 x 104 cm-1. M-1 + 2.4115 x 104 cm-1. M-1

= 2.3968 x 104 cm-1. M-1

6.3. En una determinación de glucosa se obtuvieron los siguientes resultados:

Glucosa (mg%) 50 75 100 125 150 175 200 250

 Transmitacia 92,9 89,9 86,3 84,3 81,3 78,7 73,8 70,5

ABSORBANCIA 0,032 0,046 0,064 0,074 0,09 0,104 0,132 0‘,15

Hallar el factor de calibración promedio, y la concentración de dos muestras de

suero que resultaron con una transmitancia de 88,3 y 85,1.

● Fc1 = 0.50 mg/ 0.032 = 15.625 mg

● Fc2 = 0.70 mg/ 0.046 = 15.217 mg
● Fc3 = 1.00 mg/ 0.064 = 15.625 mg
● Fc4 = 1.25 mg/ 0.074 = 16.892 mg
● Fc5 = 1.50 mg/ 0.090 = 16.667 mg
● Fc6 = 1.75 mg/ 0.104 = 16.827 mg
● Fc7 = 2.00 mg/ 0.132 = 15.152 mg
● Fc8 = 2.50 mg/ 0.152 = 16.447 mg
B

Cálculo de la concentración:

Amp = 2 - T%
Amp1 = 0.054
Amp2 = 0.070

Cmp = Fc x Amp
Cmp1 = 16.0565 x 0.0540 = 0.8611 mg/mL
Cmp2 = 16.0565 x 0.0700 = 1.1239 mg/mL

6.4. Para evaluar un metabolito “X”, una muestra fue sometida a dilución tomando
una parte de ella con 4 partes de agua y luego fue comparada
espectrofotométricamente con un estándar de 10 mg/mL obteniéndose las
siguientes lecturas de absorbancias: blanco = 0,023, estándar 0,357, y muestra
0,677. Calcule la concentración de la muestra en mg%.

● Ablanco = 0.023
● AST = 0.357
● AM = 0.677
● [st] = 10 mg/mL
● [M] = 0.25 mg / mL

Ast corregido = Ast - Ablanco = 0.357 - 0.023 = 0.334

Amp corregido = Amp - Ablanco = 0.677 - 0.023 = 0.654
volumen = 0.2
Cmp = Cst x Amp /Ast = 10 mg/mL x (0.654/0.334) = 19.5808 mg/mL
6.5. ¿Qué es el factor de dilución? Explique mediante un ejemplo.

El factor de dilución es el número total de volúmenes al que se lleva un volumen dado de

muestra original, o parte alícuota. En otros términos, el factor de dilución también
corresponde a la división de la concentración de la muestra original sobre la concentración
de la muestra diluida.

Ejemplo: Cuando un volumen de una solución A de concentración 0,1 M se diluye con un

volumen de agua destilada, haciendo un total de 2 volúmenes de solución diluida, se habla
de una dilución 1:2 (también expresada como ½), y la concentración B teórica así lograda es
0.05 M. Si la dilución buscada es 1:10, se tomaría un volumen de la solución 0,1M y se
añadirían 9 volúmenes de disolvente, con lo que la concentración teórica lograda sería 0,01
M.

En las diluciones en serie es fácil usar factores de dilución muy grandes como 1:1000 o
1:10.000, que se hacen mediante sucesivas diluciones consecutivas de factor 1:10

6.6. ¿Qué es el factor de calibración? Explique mediante un ejemplo.

Es un término que relaciona la concentración de una sustancia con su absorbancia, dicho

de otro modo relaciona la intensidad de luz que absorbe una sustancia de concentración
conocida.

6.7. Explique la preparación de la muestra problema (sangre) para la determinación

de creatinina.

En un tubo de prueba de 50 ml de capacidad colocar 2 ml de sangre oxalatada (con

anticoagulante). Adicionar 14 ml de agua destilada, 2 ml tungstato 10%. Agitar el tubo
después de cada adición. Observar la precipitación de proteínas de la sangre por formación
de un precipitado marrón chocolate por formación de metahemoglobina oxidada. Filtrar a
través de papel de filtro rápido. Desechar el precipitado y reservar al líquido filtrado como
muestra clarificada.

6.8. Diferencias entre una solución stock, solución estándar y solución trabajo.
Una solución stock es una solución concentrada que se diluye en cierta inferior
concentrada para el uso real. Las soluciones stock se utilizan para ahorrar tiempo
de preparación, la conservación de materiales, reducir el espacio de
almacenamiento, y de la que se puede diluir en una concentración de trabajo.
 La solución estándar o solución de trabajo es una solución que contiene una
concentración conocida de un elemento o sustancias conocidas, y por ende sus
propiedades como el pH también se conocen. Se usan como punto de comparación,
o referencia cuando se va a hacer una estandarización o valoración de alguna otra
sustancia.

6.9. ¿Qué función bioquímica cumple la creatinina? Escriba su fórmula.

El mejor parámetro bioquímico sanguíneo de la función renal es la creatinina. En

principio, cuanto mayor es el descenso de la función renal, tanto más elevado es el
valor de la creatinina sérica.
La creatinina es el anhídrido de la creatina, la cual una vez que pasa a sangre no
vuelve a ser utilizada y se excreta de forma constante por la orina.
La técnicas analíticas de determinación de la creatinina se resumen en el método
colorimétrico de Jaffé y en el método enzimático de la creatininasa. (Díaz,1997)

Fórmula de la Creatinina:

6.10. ¿Qué papel cumplen los siguientes reactivos en la cuantificación de

creatinina?
● Tungstato de sodio
● Ácido sulfúrico
● Ácido pícrico
El tungstato de sodio junto con el ácido sulfúrico sirven para formar ácido túngstico
que funciona como agente desproteinizante que ayudará a obtener la muestra
clarificada. Mientras que el ácido pícrico reacciona con la creatinina en medio
alcalino formando picrámico, siendo este el compuesto que absorba luz junto con el
picrato. Sin el ácido pícrico no podríamos saber la concentración de creatinina.

6.11. El coeficiente de extinción molar de un complejo yodo - glucógeno a 450 nm

es 0,20. Calcule la concentración del glucógeno en una solución de complejo en
yodo que tiene una absorbancia de 0,36, medida en una cubeta de 3 cm.