Apuntes Sem II Fisio

Apuntes seminario II fisio
• El Retardo de Crecimiento Intrauterino (RCIU) es una condición clínica que afecta

alrededor del 3-10% de los embarazos a nivel mundial y en la cual el feto no alcanza el
potencial de crecimiento esperado para su edad gestacional, presentando como resultado
final un aumento de 10 veces en los índices de morbilidad y mortalidad perinatal.
• Se ha demostrado que óxido nítrico (NO), un coproducto del metabolismo de L-arginina a
L-citrulina a través de la sintasa del óxido nítrico (NOS)
• La capacidad del endotelio para sintetizar NO está determinada por los niveles de
expresión de la sintasa del óxido nítrico endotelial (eNOS) y la regulación de la eficiencia
catalítica de esta enzima vía Ca+2/calmodulina, la disponibilidad de cofactores esenciales,
y el substrato L-arginina.
• En células endoteliales provenientes de fetos que han sufrido retardo del crecimiento
intrauterino se observa un aumento en la actividad del transporte de L-arginina y la síntesis
de NO (ie. ruta L-arginina/NO), mientras que en células endoteliales de individuos
normales sometidas a hipoxia se aprecia una disminución en el trasporte de arginina.
• El aumento de la actividad de la ruta L-arginina/NO observado en células del endotelio fetal
con RCIU nos lleva a pensar que la hipoxia crónica a la cual es sometido, activa un
mecanismo de adaptación, aumentando el transporte de este aminoácido precursor de
óxido nítrico.
• Hipoxia y RCIU, ambas condiciones se relacionan con una alteración en la capacidad del
endotelio de regular el tono vascular.
• Muestras de sangre obtenida de la vena umbilical de fetos con RCIU muestran signos de
hipoxia crónica y disminución en los niveles plasmáticos de algunos aminoácidos
esenciales y glucosa.
• RCIU e hipoxia han sido relacionados con alteraciones de la función de células vasculares
(endotelio y músculo liso esencialmente) llevando a una disminución del flujo sanguíneo y
comprometiendo seriamente el desarrollo del feto.
• RCIU e hipoxia han sido relacionados con alteraciones de la función de células vasculares
(endotelio y músculo liso esencialmente) llevando a una disminución del flujo sanguíneo y
comprometiendo seriamente el desarrollo del feto. Así, la pregunta inicial que nos induce a
formular esta proposición de investigación es: ¿cuáles son los mecanismos celulares
asociados a las alteraciones vasculares presentes en RCIU?
• el endotelio aislado de vena umbilical humana de sujetos normales, expresa la enzima
sintasa de óxido nítrico (NO) endotelial (eNOS) y las isoformas CAT-1 (baja afinidad y alta
capacidad) y CAT-2B (una variante de alta afinidad del transportador CAT-2A de baja
afinidad y alta capacidad) para el transporte de aminoácidos catiónicos (Flores et al.,
2001).
• Estos estudios han corroborado que la activación de PKC (a, b, e) está asociada a una
translocación desde el citosol a las fracciones membranosas, un proceso celular que es
previo a la activación de eNOS. Se ha descrito también que la activación del transporte de
L-arginina a través de CAT-1 en células endoteliales por Diabetes mellitus e hiperglicemia
involucra a proteínas kinasas activadas por agentes mitógenos (MAPK, Montecinos et al.,
2000), aumentando la fosforilación de p42/44mapk. Las MAPK necesitan ser fosfoliladas para
activarse mediante la MAPK kinasa (MEK1/2). Esta etapa es importante en cuanto se
considera necesaria para la activación de factores de transcripción tales como SP-1, c-Jun,
c-Fos, SAP-1 y ELK-1, entre otros
• sintasa de óxido nítrico (NO) endotelial (eNOS)
• El óxido nítrico debe ser considerado el nitrovasodilatador endógeno, acción que
mimetizan los compuestos utilizados por la clínica por más de 100 años. En el tejido
vascular existe una utilización continua de L-arginina que aumenta la producción de
ácido nítrico, al mismo tiempo que tiene un papel fundamental en la regulación de la
presión arterial. Se ha demostrado que el óxido nítrico inhibe la agregación
plaquetaria, así como que se opone a la adhesión de plaquetas a fibras de colágeno
y a otras proteínas adhesivas, asimismo, el óxido nítrico producido por macrófagos
actúa como un radical libre y es citotóxico para ciertos microorganismos y células
tumorales.
• La expresión de eNOS es inducida por hipoxia (Arnet et al., 1996) y otros factores, tales
como ‘shear stress’ (Ranjan et al., 1995; Nadaud et al., 1996; Xiao et al., 1997), ejercicio
(Sessa et al., 1994), estrógenos (Weiner et al., 1994), lisofosfatidilcolina (Cieslik et al.,
1998), lipoproteína de baja densidad (Hirata et al., 1995), insulina (Sobrevia et al., 1996,
1998), adenosina (Sobrevia et al., 1997), D-glucosa (Sobrevia et al., 1996; Cosentino et al.,
1997; Mann et al., 1998; Montecinos et al., 2000) y diabetes (Aguayo et al., 2001). Al
someter células del endotelio de arteria pulmonar a hipoxia (0% O2) se observó una caída
en la actividad de eNOS pero no en la cantidad de proteína (Su & Block 2000). Por otra
parte McQuillan et al. (1994) demostraron que la síntesis de NO en células endoteliales
humanas expuestas a hipoxia se encuentra disminuída. Estos resultados fueron paralelos
a una disminución de ~ 50 % los niveles de mRNA para eNOS debido a una disminución
en la transcripción de eNOS así como a una menor estabilidad del mensajaro. Este efecto
inhibitorio en la producción de eNOS es posterior a 24 horas de hipoxia y fue mantenido
por al menos 48 hrs. Cieslik et al. (1998) demostraron que la activación de la transcripción
de eNOS inducida por lisofosfolípidos requiere de sitios de ligamen para los activadores de
transcripción Sp1 y PEA3 en regiones promotoras del gen eNOS. La defosforilación de Sp1
por fosfatasas de proteína 2A aumenta el ligamen de Sp1 a sitios de transcripción
(Armstrong et al., 1997) e induce la expresión de eNOS. De esta manera, estos factores de
transcripción podrían estar involucrados en la regulación de la expresión de eNOS en
hipoxia.
Proteína kinasa C (PKC). En nuestro laboratorio determinamos que la estimulación de células

endoteliales humanas con ésteres de forbol disminuye el transporte de adenosina en una
proporción similar a lo determinado en endotelio expuesto a hiperglicemia (Montecinos et al., 2000;
Guijarro et al., 2001, en prensa), o endotelio de pacientes diabéticos (Sobrevia et al., 1994). Estos
resultados son similares a los obtenidos en células cromafines (Delicado et al., 1991). Sin
embargo, los resultados en endotelio humano contrastan con nuestros estudios en endotelio de
médula adrenal de bovino en donde el transporte de adenosina no se ve afectado por activación
de PKC o PKA (Sen et al., 1996). Endotelio humano expresa PKC a, g, z, e y b1 (Mattila et al.,
1994; Yamamura et al., 1996) de los cuales PKC a, e, z (Ross & Joyner, 1997) y b1 (Deisher et al.,
1993) son las que han sido detectadas en endotelio de vena umbilical humana. Así, las isoformas
sensibles a ésteres de forbol (PKC a, e y b1) (Kobayashi et al., 1989; Mattila et al., 1994; Li et al.,
1998), podrían estar envueltas en la regulación del transporte de L-arginina y la síntesis de NO en
endotelio humano.
Inicialmente, Koroma & de Juan (1995) publicaron que la actividad de PKC-d no se encontraría
alterada por hipoxia en células endoteliales de retinal de bovino. Sin embargo, estudios posteriores
informan que hipoxia disminuye la actividad de la isoforma PKC delta en HUVEC y en la línea de
endotelio humano ECV 304 mediante un mecanismo que no involucra la participación de eNOS
(Shizukuda et al., 1999). Estos autores sugieren que la inhibición de PKC delta por hipoxia podría
ser un mecanismo de defensa contra muerte celular. Estos resultados son similares a lo propuesto
por Li et al (1998, 1999) en células endoteliales de arteria coronaria humana, en las cuales la
activación de PKC por estimulación de las células por TNF-a lleva a apoptosis. Otro estudio
sugiere que hipoxia induce la actividad de PKC asociado a un aumento en la expresión de mRNA
para angiopoyetina-2 y neovascularización en células endoteliales microvasculares de bovino (Oh
et al., 1999). En endotelio de arteria cerebral de cerdo se ha sugerido que hipoxia aumenta la
actividad de PKC, posiblemente debido a una activación de receptores A1 para adenosina (Fischer
et al., 1997).
COMENTARIO FINAL
La condición clínica de Retardo del Crecimiento Intrauterino (RCIU) ha sido motivo de muy
escasos estudios a nivel celular. Clínicamente, RCIU se asocia a un estado de hipoxia fetal
crónica debido a una alteración en la regulación del tono vascular fetal por el endotelio,
sugiriéndose que este estado patológico podría jugar un papel determinante en el crecimiento
fetal. Estudios en hipoxia experimental demuestran que la actividad de la ruta L-arginina/NO
endotelial se encuentra alterada debido a modificaciones de las rutas de señalización celular que
la regulan. De esta manera, creemos importante abordar el estudio de los mecanismos de
regulación de la ruta L-arginina/NO en endotelio de feto humano afectado por RCIU y/o hipoxia.
Este proyecto propone establecer además una correlación entre el estado de hipoxia y la actividad
de la ruta L-arginina/NO endotelial como un posible mecanismo asociado a las alteraciones
vasculares fetales en RCIU.

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