Universidad Industrial de Santander

Facultad de Salud
Escuela de Microbiologia
Programa de Microbiología y Bioanálisis
Hematología II
Guía de Laboratorio

Cecilia Salamanca Ojeda

Docentes Martha Lucia Sánchez
Nataly Cruz
Ruth Stella Sánchez

HEMOCLASIFICACIÓN

Conceptos Básicos:

 Grupos sanguíneos eritrocitarios: Los grupos sanguíneos son el producto directo o indirecto de los
genes reconocidos por anticuerpos específicos y situados en la membrana eritrocitica.

 Antígenos eritrocitarios: Los antígenos presentes en la membrana de las diversas células de la

sangre constituyen los grupos sanguíneos, que se agrupan siguiendo una condición fundamental: la
transmisión hereditaria independiente. Todos los antígenos se definen serológicamente por un mismo
principio: la reacción con su anticuerpo específico. En general cuando se habla de grupos
sanguíneos se hace referencia a los eritrocitos, porque fueron los primeros conocidos y son los más
importantes en la transfusión sanguínea1.

 Sistema ABO: El fenotipo ABO corresponde a los antígenos de este sistema expresados sobre la
superficie eritrocitaria. Los fenotipos mas comunes son: A1, A2, B, O, A1B, y A2B. Existen varios alelos
para el fenotipo A, los cuales se diferencian por titulos de expresion del antigeno sobre la membrana
eritrocitaria, los más comunes son el A1 y A2. Todos reaccionan igualmente con el anticuerpo anti-A
pero se diferencian por su aglutinación con la lectinas.

 Sistema Rh: Los anticuerpos del sistema Rh son, por lo general, inmunes; es decir no existen en los
individuos que carecen del antígeno correspondiente, a no ser que haya habido una sensibilización
previa.

El antígeno D del sistema Rh tiene en este sentido una especial relevancia, ya que es el más
inmunogeno de todos los antígenos de grupo sanguíneo. La inmunización fetomaterna es otro factor
que contribuye a subrayar la importancia de este antígeno1.

MÉTODOS PARA LA DETERMINACIÓN DE LOS PRINCIPALES GRUPOS SANGUÍNEOS

Debido a la presencia en el plasma normal de anticuerpos contra grupos sanguíneos (aglutininas

naturales) y en los eritrocitos de antígenos de grupo, es posible determinar el grupo sanguíneo a partir de
eritrocitos (prueba directa) o a través de aglutininas plasmáticas (prueba inversa).

Para la determinación de los grupos sanguíneos pueden emplearse el metodo en placa o en tubo. El
procedimiento en placa es algo menos preciso que el del tubo, pero es muy utilizado cuando es
necesario conocer urgentemente el grupo sanguíneo.

El procedimiento en tubo y otros en gel y con columna de microesferas de vidrio, se emplean para la
determinación de los antígenos de grupos sanguíneos, detección e investigación de anticuerpos
irregulares o realización de las pruebas de antiglobulina directa e indirecta.
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DETERMINACIÓN DEL GRUPO ABO Y Rh

1. HEMOCLASIFICACION DIRECTA

Fundamento: consiste en hacer aglutinar los antígenos presentes en la membrana de los glóbulos rojos
del paciente con anticuerpos obtenidos comercialmente.

1.1 MÉTODO EN PLACA

Materiales:

 Suero anti-A  Palillos

 Suero anti-B  Lámpara
 Suero anti-D policlonal  Muestra de sangre total en tubo tapa lila
 Lamina Portaobjetos (EDTA)
 Pipetas Pasteur

Procedimiento:

Alistar el material a utilizar

Mezclar la muestra a utilizar varias veces para homogeneizarla

Sobre una lámina portaobjetos colocar tres gotas de sangre total con una pipeta pasteur separadas una de la
otra

A cada una de las tres gotas Adicionar al lado de la gota de sangre con EDTA
una gota de anti-A, anti-B, anti D respectivamente

Mezclar las gotas con la ayuda de un palillo

Mover la lámina lentamente con movimientos circulares durante 2 minutos aproximadamente sobre una lámpara
para promover la aglutinación. Siempre mezclar con el palillo para evitar desecación de la muestra y obtener
falsos positivos

Observar la presencia de aglutinación.

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Hemoclasificación Directa en Lámina o placa:

A B Rh

Grupo B

Rh Positivo
A B Rh

1.2 METODO EN TUBO

Materiales:

 Suero anti-A
 Suero anti-B
 Suero anti-D
 Suero anti-C
 Suero anti-E
 Lámpara
 Muestra de sangre total en tubo tapa lila (EDTA)
 Siete tubos de ensayo largos
 Albumina
 Serófuga
 Glóbulos rojos lavados

Procedimiento:

Tomar cuatro tubos y marcarlos con A, B, D, y control

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Lavar los glóbulos rojos hasta obtener una solución del 3-5%
sangre con EDTA tres a cinco gotas
solución salina agregar hasta las ¾ partes del tubo
centrifugar A 3.500 rpm durante 2 minutos.
descartar el sobrenadante
solución salina agregar nuevamente
Repetir el procedimiento anterior tres veces más.
Después de repetir el anterior proceso tres veces descartar el sobrenadante y agregar nuevamente solución salina
hasta que se observe un color salmón (concentración de 3-5%).

Reactivos y A B D CONTROL
muestras
Glóbulos rojos 3-5% 1 gota 1 gota 1 gota 1 gota
anti-A 1 gota ------ ------ ------
anti-B ------ 1 gota ----- -----
anti-D ------ ----- 1 gota
Albumina ------ ----- ------ 1 gota

Centrifugar a 3.500 RPM por 2 minutos ó en serófuga a 3500 rpm por 30 segundos, para facilitar la reacción
antígeno-anticuerpo

Observar después de centrifugar la reacción de aglutinación o no aglutinación sobre la lámpara.

Si el paciente es Rh Negativo realizar el fenotipo en tubo así

Reactivos y muestras C D E
Glóbulos rojos 3-5% 1 gota 1 gota 1 gota
Anti C 1 gota ------ ------
Anti D ------ 1 gota -----
Anti E ------ ----- 1 gota

Centrifugar a 3.500 RPM por 2 minutos ó en serófuga a 3500 rpm por 30 segundos, para facilitar la reacción
antígeno-anticuerpo y observar la aglutinación
Interpretación de resultados:
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Se observará la aglutinación y se determinará el grupo según el cuadro siguiente tanto para el método en
placa como el método en tubo.

 Para los tubos marcados con A y B:

ANTI A ANTI B INTERPRETACIÓN

0 0 GRUPO 0
+ 0 GRUPO A
0 + GRUPO B
+ + GRUPO AB

 Para los tubos marcados como C, D y E:

ANTI C INTERPRETACIÓN ANTI E INTERPRETACIÓN

+ Antígeno C presente + Antígeno E presente
0 Antígeno C negativo 0 Antígeno E negativo

 Para los tubos marcados con D y Control:

ANTI D ALBUMINA INTERPRETACIÓN

+ 0 Rh Positivo
0 0 Rh Negativo

2. HEMOCLASIFICACION INVERSA

Fundamento: consiste en observar aglutinación colocando a interactuar los anticuerpos presentes en el

suero o plasma de la muestra con los antígenos que se encuentran en la membrana de glóbulos rojos
conocidos.

Materiales:

 Tres tubos de ensayo largos

 Muestra con EDTA
 Pipeta Pasteur
 Suspensión de células A
 Suspensión de células B
 Suspensión de células O
 Serófuga
 Lámpara
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PROCEDIMIENTO

Lavar células A, B y O hasta obtener una solución del 3-5%. Caducidad de 3 días si se fabrican a
partir de glóbulos rojos

Marcar los tres tubos con: A, B y O (control).

Muestra y reactivos Tubo A Tubo B Tubo O

Suero o plasma paciente Dos gotas Dos gotas (100 lambdas)
(100 lambdas) (100 lambdas)
suspensión de células A una gota ------ ------
suspensión de células B ------ una gota -----
suspensión de células O ------- --------- una gota

Centrifugar 3.500 RPM por 2 minutos ó en serófuga a 3500 rpm por 30 segundos, para facilitar la reacción
antígeno-anticuerpo

Determinar la presencia o ausencia de aglutinación sobre la lámpara

Interpretación de resultados:

CÉLULAS O CÉLULAS A CÉLULAS B INTERPRETACIÓN

0 + + GRUPO O
0 0 + GRUPO A
0 + 0 GRUPO B
0 0 0 GRUPO AB
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3. TECNICA DE HEMOCLASIFICACION EN GEL O EN MICROESFERAS

Fundamento: El principio del método se basa en la técnica de gel para la detección de reacciones de
aglutinación de los hematíes. La aglutinación se produce al entrar en contacto los eritrocitos con los
anticuerpos correspondientes. La tecnología de micro tipificación en gel se basa en la separación por
tamaño de los eritrocitos aglutinados, durante un proceso de centrifugación en un gel poroso. Los
eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los aglutinados grandes quedan
atrapados en la zona superior y los pequeños quedan distribuidos a lo largo de la columna.

Procedimiento:

Tanto el gel como las microesferas de vidrio vienen suministrados por la casa comercial en unas cámaras
especiales.

Los eritrocitos y el suero se colocarán en la parte superior de la cámara de la siguiente forma:

Se agregará la misma cantidad de células A y

Agregar los eritrocitos lavados, para hacer la B conocidas y suero de la muestra (cantidad
hemoclasificación directa según casa comercial). Con estos pozos se
obtiene la hemoclasificación inversa

Centrifugar el tiempo que indique la casa comercial y leer.

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Interpretación de resultados:

Un resultado negativo se dará cuando los eritrocitos aparezcan sedimentados en el fondo de la cámara y
uno positivo se dará cuando los eritrocitos sensibilizados permanezcan en la parte alta de la cámara.
Según la intensidad de la reacción los eritrocitos se distribuirán por el gel o las microesferas.

NOTA: Al ser técnicas que vienen preparadas comercialmente, tendrán que seguirse las instrucciones del
fabricante.

BIBLIOGRAFIA

1. Joan l. Vives Corrons, Josep L. Aguilar Bascompte. MANUAL DE TECNICAS DE LABORATORIO EN

HEMATOLOGIA. Tercera Edición. Editorial ELSEVIER MASSON. Barcelona - España. 2006
2. Instructivo de Hemoclasificacion Directa e Inversa (BMS-I-02). Hospital Universitario de Santander.
2010.