Medios de cultivo de microorganismos:

Uno de los sistemas ms importantes para la

identificacin de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales
preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en
el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el
Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de
cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de
oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante.

La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en

composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn
otros ingredientes.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de

cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al
enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de
las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.

La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes
bacterias provocan su licuacin. En los diferentes medios de cultivo se encuentran
numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre
completa, bilis, etc.
Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar
el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de
fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El
suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento
de los microorganismos menos resistentes.

Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para

detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del
crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa
como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo en pH cido.
La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el
crecimiento de la mayoria de las bacterias Grampositivas).

Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado

por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por
completo al propio medio.

1- disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,
como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas.
En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del
crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de
donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne,
extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de estas
sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la prdida de los
factores nutritivos lbiles.
Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar
peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de nitrgeno y carbn
ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las
protenas naturales, tienen capacidad de atacar los aminocidos y otros compuestos ms
simples de nitrgeno presentes en la peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a muchos
medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente pueden ser
necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio,
manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de
naturaleza vitamnica. Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes,
bien como indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de
ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

2- consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos
como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o
slido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de
fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad,
pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est ampliamente
extendido en el laboratorio.

3- presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno
normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero los
microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una
atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias
(tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

4- condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas
de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la
humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el
medio.
5- Luz ambiental
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.
5- pH

La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de

los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar
que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento
bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos
normales.

6- Temperatura

Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43C.

Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o incluso a temperaturas
superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos humanos crecen en
rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saproftos tienen
rangos ms amplios.

7- Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin
de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento
microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios. El sistema
clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a
presin como agente esterilizante).

Tipos bsicos de medios de cultivo

Atendiendo A Su Estado Fsico:

Medios de cultivo: Slido y Lquido

Una forma muy til de poder aislar, identificar y conservar los microorganismos
es mediante el uso de medios de cultivo, inicialmente ideados por Pasteur (que como ya
sabemos se considera el padre de la microbiologa), quien se dio cuenta que los
microorganismos podan crecer en soluciones que tuvieran azcar y una fuente de
nitrgeno.
De ese tiempo hasta ac, ha pasado mucha agua debajo del puente y actualmente existen
medios muy especializados para microorganismos muy exigentes. La forma ms
sencilla de clasificar los medios de cultivo es por su consistenciaentonces aparecen
los medios de cultivo slidos y los medios de cultivo lquidos o tambin llamados
caldos. En ambos medios debe haber una buena cantidad de nutrientes que faciliten el
crecimiento bacteriano y entonces cual es la diferencia?.pues la diferencia radica
en la presencia de una sustancia que se llama Agar o Agar-Agar y que es la encargada
de darle la solidez y consistencia al medio. Esta sustancia proviene, principalmente, de
un alga llamada Gelidium, aunque muchos otros gneros pueden servir como fuente de
este polisacrido (es decir, un azcar grande formado por la unin de azcares
pequeos). Y como se obtiene del alga?Se toman sus semillas, se lavan, se secan, se
realizan procesos de extraccin, filtracin, purificacin y desecacin para que queden
hojuelas o polvo y luego si adicionarla al medio de cultivo.
Fue, Robert Koch, mdico alemn dedicado al estudio de los microorganismos y
considerado uno de los autores de la teora microbiana, quien empez a cultivar y
aislar microorganismos. Koch, buscando mejorar la tcnica utilizada hasta ese
momento, decidi solidificar los medios de cultivo aadindoles gelatina. Sin embargo,
y a sugerencia de una ayudante, introdujo el agar.
Tiene alguna ventaja el uno sobre el otro? Pues la ventaja fundamental de usar un medio
de cultivo lquido, es que permite que crezcan bacterias que se encuentran en muy poca
cantidad, es decir, cuya concentracin es muy baja en la muestra que estemos
analizando. Para el caso del medio de cultivo slido, la ventaja radica en que permite
detectar los diferentes tipos de bacterias que puedan encontrarse en una sola
muestra...entonces el usar uno u otro medio de cultivo depender de lo que
busquemos o queramos: aislar una bacteria que se encuentre en cantidades muy
pequeas (medio lquido) o todas las bacterias que puedan haber en una muestra (medio
slido)

Medios semislidos

Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a stos un agente solidificante en

una proporcin menor que para preparar medios slidos. Uno de sus usos es la
investigacin de la movilidad de las bacterias.

Segn Su Utilizacin:
1) Medios comunes:
Son aquellos que poseen los componentes mnimos para que pueda crecimiento de
bacterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio ms conocido de agar
nutritivo o agar comn, que resulta de la adicin de agar al caldo nutritivo. Otros
representantes grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc.

2) Medios de enriquecimiento:
Son aquellos que, adems de las sustancias nutritivas normales, serie de factores
indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento
hace por adicin de sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo,
bilis, dichos factores. En ocasiones es posible aadir suplementos artificiales a los
enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc).
El gonococo, por ejemplo, necesita para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas
por la sangre calentada adicionada al medio chocolate).
3) Medios selectivos:
Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias una poblacin
polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente de
una poblacin microbiana especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo
selenito, que favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de
enterobacterias.

4) Medios inhibidores:
Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo impiden tot de una poblacin
microbiana, se denomina inhibidor. Los medios inhibido es podran considerarse
variante ms restrictiva de los medios selectivos. Lo medios inhibidores se consiguen
habitualmente de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba
completamente el desarrollo de determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que
permite el crecimiento de los grmenes impide el crecimiento de los Gram positivos.

5) Medios diferenciales:
Se utilizan para poner en evidencia caractersticas bioqumicas y diferenciar gneros o
especies. La adicin de un azcar fermentable o un sustrato metabolizable es para este
fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los
grmenes lactosa de aquellos que no lo hacen. Tambin lo son el C.L.E.D. (lactosa
+/lactosa hemlisis), el SS (que es doblemente diferencial), etc.

6) Medios de identificacin:
Son los destinados a comprobar alguna cualidad especfica que para reconocer la
identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos asegurar el
crecimiento de los microorganismos, el sustrato especfico que vaya a ser metabolizado
que nos muestre el resultado. El agar Kligler, el medio de Simmons y en general,
cualquier medio haya aadido un elemento diferencial de un microorganismo, son
medios utilizados. Actualmente estn apareciendo en el mercado una gran cantidad de
medios especficos de identificacin para ciertos microorganismos, con lo cual se
consigue simultneamente abaratar el costo y reducir identificacin. Son ejemplos de
esto ltimo los medios CPS ID3 o Uriline ID(Biomerieux), sirven para identificar los
grmenes urinarios ms importantes a partir de la placa de cultivo gracias a sustratos
cromognicos especficos.

7) Medios de multiplicacin:
Sirven para obtener una gran cantidad de clulas a partir de un microorganismo aislado.
Seemplean en la obtencin de vacunas, en la investigacin y en la industria. Los medios
para la multiplicacin suelen ser lquidos. El caldo infusin cerebro-corazn (BHI), es
uno de los medios.

8) Medios de conservacin:
Se utilizan para conservar una cepa que, por diversas razones se debe mantener.
Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos en el
Laboratorio de Microbiologa. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres
formas:
a) haciendo pases peridicos de placa a placa,
b) mediante liofilizacin de una suspensin bacteriana, y
c) congelando las cepas en leche descremada estril al 0,1%.

9) Medios de transporte:
Se usan para el transporte de muestras clnicas que no pueden realizarse
inmediatamente. Su utilizacin debe hacerse introduciendo la torunda con la que se
obtuvo hacia el interior del medio (generalmente en un tubo). Son ejemplos tpicos de
este grupo los medios Amies,Cary-Blair, etc.

Atendiendo A Su Composicin:
Segn las sustancias que entren a formar parte en su composicin, los medios de cultivo
pueden ser clasificados en:
1) Medios complejos:
Fueron los primeros utilizados, y los ms empleados se preparan a partir de tejidos
animales, y ms raramente de vegetales. Su composicin no es exactamente definida, y
por consiguiente no es rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos
inconvenientes en condiciones experimentales, donde la reproductibilidad no podr ser
exacta. En la prctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los ms
empleados.

2) Medios sintticos:
Son aquellos que contienen en su composicin exclusivamente sustancias qumicas
conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas, resultando un
medio de composicin perfectamente definida.

3) Medios semisintticos:
El gran nmero de factores de crecimiento exigidos para ciertos grmenes hace que la
fabricacin de un medio sinttico para estos grmenes sea imposible o demasiado cara.
En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto
orgnico complejo (extracto de levadura, extracto de tejidos, etc.).Ciertos grmenes no
crecen en ningn medio por muy enriquecido que est ste, hacindolo exclusivamente
en clulas vivas con unas caractersticas determinadas. Ejemplos de este tipo son, aparte
de los virus, las Chlamydias, Rickettsias, etc.

Segn Su Origen:
a) NATURALES:
son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser
extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce
exactamente.
b) SINTTICOS:
son los medios que contienen una composicin qumica definida cuali y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.

c) SEMISINTTICOS:
son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento bajo una forma de un
extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.

Referencia bibliografica:
URLs de paginas web:

1
Titulo: Los medios de cultivo en microbiologa
url: http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm
2
Titulo: Medios de cultivo: Slido y Lquido.
url: https://claudiazambrano.wordpress.com/2011/05/25/medios-de-cultivo-
solido-y-liquido/
3
Titulo: Medios de cultivo en un laboratorio de microbiologia.
url: https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo-en-
un-laboratorio-de-microbiologc3ada.pdf