Práctica 05 Fisiologia
Práctica 05 Fisiologia
Práctica 05 Fisiologia
PRCTICA 05
PRUEBAS INMUNOLGICAS
I. INTRODUCCIN:
Gran parte de los progresos alcanzados por la biologa moderna se deben al
perfeccionamiento de los mtodos analticos de medida. La introduccin de los
procedimientos basados en las reacciones inmunolgicas ha representado un importante
avance en el anlisis de sustancias de inters
en biologa animal y vegetal difciles de medir
empleando los mtodos bioqumicos
habituales. Dentro de los procedimientos
inmunolgicos, los ms tiles y prcticos son
aquellos que se basan en la especificidad de la
unin Ag-Ac. La propiedad que tienen las Igs
de unirse a un Ag, la especificidad de esta
unin y el hecho de que pueda ser visualizable
por los fenmenos de precipitacin,
aglutinacin y otros mecanismos indirectos
(marcaje con fluorescena, con radioistopos o
con enzimas) hacen que estos mtodos se
empleen ampliamente. Existen diversos mtodos basados en procedimientos distintos
para visualizar la unin Ag-Ac. As tenemos:
1. Tcnicas de aglutinacin. Cuando el antgenos e encuentra unido o formando parte
de clulas, bacterias o partculas, la reaccin Ag-Ac se puede detectar y cuantificar por
el aglutinado celular o bacteriano formado.
2. Tcnicas de fluorescencia y citometra de flujo. Para la realizacin de estas tcnicas
el anticuerpo se marca con un fluorocromo detectndose la formacin del complejo Ag-
Ac por la fluorescencia emitida.
3. Tcnicas de radioinmunoensayo. En estas tcnicas al anticuerpo se une un istopo
radiactivo siendo posible la cuantificacin del complejo Ag-Ac a travs de la
radiactividad emitida.
4. Cromatografa de afinidad. La especificidad de la unin Ag-Ac puede utilizarse para
obtener Acs y Ags puros.
5. Inmunoprecipitacin e inmunoblotting. Permite detectar la presencia y cantidad de
antgenos y anticuerpos especficos.
TCNICAS DE PRECIPITACIN
Para la realizacin de estas tcnicas se requiere que tanto el Ac como el Ag se
encuentren en un medio fluido en el que sea posible la precipitacin del complejo Ag-
Ac. Existen diferentes modalidades siendo las principales:
1. Tcnica de precipitacin propiamente dicha.
2. Tcnica de difusin radial de Ouchterlony.
3. Tcnica de inmunoelectroforesis.
4. Tcnica de difusin radial simple de Mancini.
TCNICAS DE AGLUTINACIN:
En estas tcnicas se hacen visibles los complejos Ag-Ac por la aglutinacin que
producen los anticuerpos cuando el Ag forma parte o se ha unido artificialmente a la
superficie de glbulos rojos, plaquetas, leucocitos, partculas de ltex, etc. Normalmente
se utilizan glbulos rojos (hemaglutinacin) o partculas de ltex.
TCNICAS DE INMUNOFLUORESCENCIA:
La fluorescencia es una propiedad de ciertas molculas que, al ser irradiadas con
energa electromagntica de longitud de onda adecuada, emiten radiacin de longitud de
onda caracterstica permitiendo su cuantificacin. Las molculas de un colorante
fluorescente absorben luz en una longitud de onda y convierten la luz absorbida de alta
energa (longitud de onda ms corta) en luz de menor energa (longitud de onda ms
larga). Cada fluorocromo tiene un espectro de emisin y excitacin caractersticos; si se
utilizan dos con el mismo espectro de excitacin pero distinto espectro de emisin, se
pueden medir dos caractersticas al mismo tiempo (fluorescencia de dos colores) La
inmunofluorescencia se utiliza esencialmente en la deteccin de autoanticuerpos y
anticuerpos contra antgenos de superficie de clulas y tejidos. Para ello se emplean
anticuerpos preparados frente a la protena que se desea detectar marcados con
molculas fluorescentes. Se aprecia si hubo unin del anticuerpo con el antgeno por la
fluorescencia emitida, que se observa bajo microscopio de luz ultravioleta. Este
procedimiento (Inmunofluorescencia directa) tiene la limitacin del marcaje con un
fluorocromo de cada uno de los anticuerpos necesarios para cada una de las sustancias a
investigar. Para evitar esto, lo que se hace es tratar el tejido o clulas con antisueros
anti-antgeno producidos, por ejemplo, en conejo y secundariamente anti-
inmunoglobulinas marcadas con un fluorocromo (Inmunofluorescencia indirecta).
Objetivos:
II.2. PROCEDIMIENTO:
MTODOS SEROLGICOS EN EL DIAGNSTICO DE SALMONELOSIS:
Principios generales:
CONCLUSIONES:
No se logr fundamento prctico de los principales mtodos inmunolgicos basados en
la reaccin antgeno anticuerpo; es decir reconocer la Salmonella que constituye el
complemento necesario para el diagnstico de la fiebre tifoidea ejecutando algunas
pruebas de uso comercial ya que los reactivos estaban vencidos.
Ya que si esta reaccin antgeno-anticuerpo se hubiese podido observar la
neutralizacin del efecto txico de una toxina bacteriana o a la inhibicin de la
multiplicacin de un virus, tambin se hubiese podido observar directamente como la
formacin de un precipitado o la aglutinacin celular, a la vez puede presentar
reacciones biolgicas subsiguientes a las anteriores (lisis bacteriana)