UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

LABORATORIO DE TOXICOLOGIA Y QUIMICA

CURSO: TOXICOLOGIA Y QUIMICA LEGAL

PROFESOR: JOSE ANTONIO LLAHUYLLA QUEA

PRACTICA N 3

TITULO:

ENSAYOS PRELIMINARES O INMEDIATOS

GRUPO: 2 + 2

INTEGRANTES:

CORDOVA MAMANI ,
ANGEL.
GARCIA PRRAGA , JOSETH.
SALAZAR AGERO ,
KATHERINE.

HORARIO DE PRACTICAS:
DIA : MARTES
HORA: 10 12 PM

FECHA DE REALIZACION DE LA PRACTICA:

28/03/2017
 ENSAYOS PRELIMINARES O INMEDIATOS

MARCO TEORICO

El anlisis qumico toxicolgico comprende una serie de aplicaciones como son

la clnica, la pericia forense, el anlisis de alimentos o destinado a la evaluacin
de un riesgo asociado a la exposicin humana a las sustancias qumicas. A
travs el tiempo, el anlisis qumico toxicolgico ha ido evolucionando desde
primitivas estrategias de identificacin, orientadas por grupos de sustancias,
mediante metodologas sencillas, hasta las disponibles hoy por medio de
instrumental de alta complejidad.
Frente a la demanda de anlisis qumico toxicolgico, de por s variados y
tcnicamente complejos, resulta imprescindible que el laboratorio cuente con
una capacidad de respuesta apropiada. Para ello el proceso analtico deber
cumplir con un elevado criterio de calidad, considerando disponibilidad,
confiabilidad, especificidad y sensibilidad del mtodo elegido. La
obtencin de la muestra constituye el primer eslabn de ese proceso
y es el que condicionar las etapas siguientes del anlisis hasta llegar
al resultado, por lo que establecer pautas claras en esta etapa crtica no debe
ser pasado por alto. En nuestro medio el anlisis qumico toxicolgico viene
siendo realizado por distintos profesionales y los laboratorios aplican protocolos
de diversas procedencias o bien se sigue un criterio personal siguiendo los
principios de la Qumica Analtica

I. OBJETIVOS

Conocer el procedimiento del anlisis del toxico en la muestra de

contenido gstrico.
Detectar que compuestos se encuentran en la muestra de
contenido gstrico.

II. FUNDAMENTO TEORICO

LOS ENSAYOS PRELIMINARES

2
 ENSAYOS PRELIMINARES O INMEDIATOS
Son tcnicas de carcter orientativo que realizan. Por ejemplo un screening de
los analitos de inters presentes en la muestra. Sus principales ventajas son
la sencillez y la rapidez. Entre sus inconvenientes podemos citar su falta de
especificidad y que estn desarrolladas para un nmero limitado de analitos.
En la actualidad los ms utilizados son los inmunoensayos (basados en
distintos principios fsico-qumicos). Otros ensayos aplicables seran las
reacciones coloreadas y la cromatografa en capa fina.
En los casos con historial de intoxicacin por drogas teraputicas
(medicamentos) el anlisis preliminar se realiza utilizando cromatografa
lquida con detector UV o PDA. Esto permite la identificacin preliminar antes
de proceder a la confirmacin y cuantificacin.
En el anlisis para drogas cidas se utiliza la metodologa de TOXI-LAB
(Cromatografa de capa fina). Es una tcnica donde se extrae y se concentra la
droga.

Una de las muestras ms utilizadas para los diversos ensayos en occisos es el

contenido estomacal, estas pueden incluir: vmito, aspirado gstrico o lavado
estomacal. Es importante obtener la primera muestra del lavado, mientras que
la ltima puede contener escasa cantidad del toxico. Se requiere al menos un
volumen de 20ml sin agregado de preservadores para realizar un amplio rango
de ensayos. Las muestras de contenido estomacal pueden ser muy variables y
requieren procedimientos adicionales como puede ser filtracin y/o
centrifugacin para realizar los anlisis. En general, cuando han transcurrido
ms de una hora de la ingestin de muestra carece de utilidad debido al
vaciado natural del estomago

Contenido estomacal y residuos de la escena

Algunos colores caractersticos en el contenido estomacal estn asociados a
sustancias particulares como la ingesta hdrica elevada (incoloro), nitrobenceno
o fenoles (marrn o negro), warfarina (rojo vino), etc.
Muchos otros compuestos (por ejemplo, salicilato de metilo, paraldehdo)
presentan olores caractersticos. Tabla 1. El pH muy bajo o muy alto puede
indicar la ingestin de cidos o lcalis respectivamente. Los grnulos de
almidn usados como relleno en algunos comprimidos y cpsula se identifican
mejor por microscopia. En el caso que hayan sido ingeridos cpsulas, tabletas o
plantas stas deben examinarse separadamente.

OLOR CAUSA POSIBLE

Almendras amargas Cianuro
Licores de frutas Etanol, esteres
Ajo Arsnico, fosforo

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NaftalinaENSAYOS PRELIMINARES O INMEDIATOS
Alcanfor
Peras Cloral
Petrleo Destilados de gasolina
Fenoles Desinfectantes, fenoles
Tabaco rancio Nicotina
Lustre de Zapatos Nitrobenceno
Dulce Hidrocarburos halogenados, cloroformo

III. MATERIALES , METODOS

1) Sulfato de cobre
2) Resina de Guayaco
3) Solucin acuosa de iodo-iodorado
4) Solucin de almidn 1%
5) Solucin de cloruro de paladio
6) Solucin de trtaro emtico al 10%
7) Solucin acuosa de acetato de plomo al 10%
8) Solucin acuosa de hidrxido de sodio al 2%
9) Sulfato ferroso
10) Solucin acuosa de Acido Pcrico
11) Contenido Gstrico
12) Bao Mara
13) Tiras reactivas

PROCEDIMIENTO

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 5
posibles intoxicaciones que el paciente puede estar padeciendo o
El ensayo de papel simple es un ensayo pre eliminar que nos orienta a
sensible Ensayo de papel
DE REACCION MECANISMOS IV.
Papel sensible de grignard: se embebece las tiras de papel filtro con una solucin acuosa de
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cido pcrico y se deja escurrir el exceso.
Papel sensible alcalino: se humedeci una tira de papel con una gota de hidrxido de sodio y se 6
coloc expuesto en un frasco que contiene la muestra problema con 100mg de cido tartrico, se
calent en bao mara durante 5 minutos y luego se aadi una gota de sulfato ferroso y una gota
de cido clorhdrico concentrado
Papel sensible de acetato de plomo: se humedeci una tira de papel con una gota de acetato 5
de plomo y se coloc expuesto en un frasco que contiene la muestra problema con 100mg de
cido tartrico, se calent a bao mara durante 5 minutos
Papel sensible de trtaro emtico: se humedeci una tira de papel con una gota de trtaro 4
emtico al 10% y colocarlo expuesto en un frasco que contiene la muestra problema con 100mg
de cido tartrico, se calent a bao mara durante 5min
Papel sensible de cloruro de paladio: Humedecer una tira de papel con una gota de cloruro de 3
paladio y se coloc expuesto en un frasco que contiene la muestra problema con 100mg de cido
tartrico, calentar a bao Mara durante 5 minutos.
Papel Sensible de iodo almidonado: Se embebe una franja de papel filtro con una gota de 2
solucin de almidn dejando escurrir el exceso. Luego se embebe con una gota de solucin acuosa
de iodo-yodurado.
Papel Sensible de Schombein: se embebe una franja del papel filtro en una solucin de SO4Cu 1
al 10% dejando escurrir el exceso. Luego se embebe en una solucin alcohlica de resina de
guayaco al 10% de recipiente de preparacin.
ENSAYOS PRELIMINARES O INMEDIATOS
 ENSAYOS
muestras PRELIMINARES
contaminadas, se O INMEDIATOS
basa en reacciones qumicas entre el
indicador y la muestra procedente del paciente (orina, sangre, muestra
contaminada).
Las pruebas de papel sensible son ensayos sensibles pero inespecficos
generalmente son 8, entre ellas tenemos a schombem, iodo almidn,
grignard, nitrato de plata, cloruro de paladio, tartaroemetico, acetato de
plomo, alcalino.

papel sensible de schombem

Objetivo: Es un ensayo sensible pero inespecifico, se peude reocnocer
hasta 0.25 gr de acido cianhidrico.
Fundamento: el ensayo se fundamenta en el aumento del potencial de
oxidacion de sales cupricas al pasar a sales cuprosas insolubles o pocas
disociadas. El ensayo es identificativo dado que al Cu(II) cianuro se
acopla un compuesto reductor, resina de guayaco, que por oxidacion
origina un derivado coloreado (color castao vira a color azul).
Tcnica operatoria: se coloca 1 gota de CuSO 4 10%, 1 gota de resina
del guayaco 10%, se cola en la parte superior del frasco que contiene la
muestra, se lleva a bao Mara por 5 minutos y se procede a revelar.
Mecanismo de accin:

Balanceo de la reaccin:

papel sensible iodo almidn

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Objetivo:ENSAYOS PRELIMINARES
Es un ensayo sensible peroO inespecifico,
INMEDIATOSse peude reocnocer hasta 1
gr reconoce acido cianhidrico, y sulfuro de hidrogeno.

Fundamento: el ensayo se fundamenta en el ioduro de potasio forma un

anion tioduro al combinarse con el yodo elemental. A diferencia del yodo, los
triioduros son solubles en agua, por lo que el ioduro de potasio aumenta
considerablemente la solubilidad en agua del yodo elemental.

El ion iodo (II) puede reducirse a ion ioduro (I) , por accion de un agente
reductor que puede ser un acido sulfurico o un acido cianurico, con lo tal el
yodo se consume, por ende se produce la decolarion del del color azul, es
conocido como valoracion de yodometria.

Tcnica operatoria: se coloca 1 gota iodo iodurado, 1 gota de almidn 1%, se

cola en la parte superior del frasco que contiene la muestra, se lleva a bao
Mara por 5 minutos y se procede a revelar.

Mecanismo de accin:

Balanceo de la reaccin:

7
 ENSAYOS
papel sensible PRELIMINARES O INMEDIATOS
de Grignard

Objetivo: Es un ensayo poco sensible pero inespecifico, que necesita 5

minutos para evidenciarla, se peude reocnocer hasta 0.25 gr reconoce acido
cianhidrico.

Fundamento: el ensayo se fundamenta en base a la presencia de acido pirico

frente al HCN, liberado de la muestra acida, forma isopurpurato alcalino que
pasa del color rojo a naranja en paso de los 5 minutos.

Tcnica operatoria: se coloca 1 gota NaOH 10%, 1 gota de cido prico 1%,
se cola en la parte superior del frasco que contiene la muestra, se lleva a bao
Mara por 5 minutos y se procede a revelar.

Mecanismo de accin:

Balanceo de la reaccin:

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 ENSAYOS
papel sensible PRELIMINARES
de nitrato de plata O INMEDIATOS

Objetivo: Es un ensayo poco sensible a poco reactivo al reaccionar, reconoce

ASH3, SbH3, P0, H2S.

Fundamento: el ensayo se fundamenta se basa en la formacion de acido

sulfurico ( en forma de sulfuro argentico) ademas de arsina y fosforo blanco, se
reconoce por la formacion de una colarion negra.

Tcnica operatoria: se coloca 1 gota de nitrato de plata 10%, se cola en la

parte superior del frasco que contiene la muestra, se lleva a bao Mara por 5
minutos y se procede a revelar.

Mecanismo de accin:

Balanceo de reaccin:

Otras reacciones:

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 ENSAYOS
papel sensible PRELIMINARES
de cloruro de paladio O INMEDIATOS

Objetivo: Es un ensayo sensible con papel sensible de cloruro de paladio

(10%), reconoce el monoxido de carbono que se libera de la muestra.

Fundamento: el paladio metalico producido da esa coloracion grisacia oscura,

el cloruro de pladio reacciona con el monoxido de carbono presente en la
muestra produciendo el paladio metalico y la precipitacion de dioxido de
carbono, ademas de acidificar el medio y se reconoce por un cambio de viraje
del papel a color negro.

Tcnica operatoria: se coloca 1 gota de cloruro de paladio 10%, se cola en la

parte superior del frasco que contiene la muestra, se lleva a bao Mara por 5
minutos y se procede a revelar.

Mecanismo de accin:

Balanceo de reaccin:

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 ENSAYOS
papel sensible PRELIMINARES
de tartrato emetico O INMEDIATOS

Objetivo: Es un ensayo sensible con papel sensible de tartaroemetico 10%,

reconoce acido sulfurico que se libera de la muestra.

Fundamento: el tartaroemetico al entrar al contacto con el acido sufhidrico

precipita en sulfuro de antimonio.

Tcnica operatoria: se coloca 1 gota de tartaroemetico 10%, se cola en la

parte superior del frasco que contiene la muestra, se lleva a bao Mara por 5
minutos y se procede a revelar.

Mecanismo de accin:

Balanceo de reaccin:

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 ENSAYOS
papel sensible PRELIMINARES
de acetato de plomo O INMEDIATOS

Objetivo: Es un ensayo sensible con papel sensible de acetato de plomo

(10%), reconoce el acido sulfhidrico que se libera de la muestra.

Fundamento: el acetato de plomo reacciona con el acido sulfhidrico, el cual

hace que se precipite sulfuro de plomo, el cual se reconoce en el papel un color
negruzco.

Tcnica operatoria: se coloca 1 gota de acetato de plomo 10%, se cola en la

parte superior del frasco que contiene la muestra, se lleva a bao Mara por 5
minutos y se procede a revelar.

Mecanismo de accin y reaccin qumica balanceada:

papel sensible de alcalina

Objetivo: Es un ensayo sensible con papel sensible de alcalimno (1 gota de

NaOH (10%), posteriormente se agrega FeSO 4,1gota de Hcl concentrado),
reconoce el cianuro que se libera de la muestra.

Fundamento: se basa en la formacion de un complejo azulado de prusia.

Tcnica operatoria: se coloca 1 gota de NaOH 10% lo que genera que

alcalina el medio, posteriormente se agrega 1 gota de FeSO4 y una gota de HCl
concentrado, se cola en la parte superior del frasco que contiene la muestra, se
lleva a bao Mara por 5 minutos y se procede a revelar.

Mecanismo de accin:

Reaccin balanceada:

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 V. ENSAYOS PRELIMINARES O INMEDIATOS
RESULTADOS

1 2 1
3 4 5 6 7

N 1 2 3 4 5 6 7
REACCION Schonbei Yodo Cloruro Trtaro Acetato Alcalino grignar
n de emtico de d
paladio plomo
REACCION Cambio Cambio Cambio Cambio Cambio Cambio
POSITIVA de color de color de color de color de color de color
a azul o a gris a a gris a azul a rojo
verde anaranj brillant
ado e

TIRA REACTIVA RESULTADO INDICA

Papel Sensible de Positivo Presencia de CN-

Schonbein
Papel Sensible de Yodo Negativo No presencia de cido
almidonado cianhdrico e hidrogeno
sulfurado.
Papel Sensible de Negativo No presencia de xido
Cloruro de Paladio de carbono
Papel Sensible de Negativo No presencia de
Trtaro emtico hidrogeno sulfurado.
Papel Sensible de Negativo No presencia de
Acetato de plomo Hidrogeno sulfurado y
fosforo blanco
Papel Sensible Alcalino Negativo No presencia de cido
cianhdrico
Papel Sensible de Negativo No presencia de cido
Gignard cianhdrico

13
 ENSAYOS PRELIMINARES O INMEDIATOS

VI. DISCUSION DE RESULTADOS:

La investigacin de componentes txicos en determinadas muestras
biolgicas, requieren un monitoreo adecuado a lo largo de todo el
anlisis toxicolgico a realizar. Es sabido que una de las muestras de
obtencin para un anlisis toxicolgico es el contenido estomacal, si bien
puede obtenerse de manera adecuada puede resultar susceptible a una
rpida contaminacin ambiental relacionado al tiempo de exposicin. Es
por ello que los resultados obtenidos en esta prctica pueden tener un
rango de error probablemente debido a un intervalo de tiempo no
adecuado, un ambiente no asptico, entre otros.

En el anlisis toxicolgico realizado se pudo identificar la presencia de

ciertos componentes voltiles txicos, con el empleo de los ensayos
inmediatos, que son tcnicas que se realizan en la atmsfera del
recipiente que contiene la muestra mediante el empleo de los llamados
papeles sensibles, donde se utilizan papeles impregnados en diferentes
reactivos.8

La reaccin de los papeles sensibles de Yodo almidonado, Alcalino y

Grinard resultaron negativo sin embargo esta reaccin resulta ser
positiva ya que estara indicando una posible presencia de cianuros en la
muestra de contenido estomacal utilizada en el anlisis qumico
toxicolgico. La reaccin de Schonbein resulto positiva al reconocer
cianuro, por lo tanto se puede ver una contradiccin con las reacciones
que dieron positivas al reconocimiento de cianuros . Como se sabe la
reaccin de Schonbein se basa en el potencial de xido reduccin de las
sales cuprosas al pasar a sales cpricas, donde el sulfato de cobre al
reaccionar con el cido cianhdrico produce ozono que es detectado por
la resina de guayaco. Este ensayo es sensible pero inespecfico que
reconoce a partir de 0.25 ug de cianuro. 11 Por lo tanto se puede deducir
que probablemente el impregnamiento con la muestra problema no fue
lo suficiente.

El ensayo de yodo almidonado resulto negativo es un ensayo muy

sensible pero que se vio afectado debido a que la muestra fue el
contenido estomacal ya que probablemente existiria una interferencia
del sulfhdrico por su carcter reductor. El ensayo de Grinard es
diferencial y complementario cuando existe pequesimas cantidades de
cianuro, siendo su fundamento la formacin del isopurpurato alcalino.
Segn Guatelli, un anlisis decisivo que indica o no la presencia de cido
cianhdrico en un organismo vivo es el ensayo en papel alcalino, el cual
nos descarta la sospecha de una intoxicacin cianhdrica.

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 ENSAYOS PRELIMINARES O INMEDIATOS
La reaccin de los papeles sensibles de nitrato de plata, acetato de
plomo, cloruro de paladio y trtaro emtico resultaron negativo, ya que
el papel sensible resulto de color blanco. En el ensayo con el papel
reactivo al nitrato de plata, no se present modificacin alguna en el
aspecto de la parte suspendida del papel, luego de estar en bao mara
a 50-60 C, se puede concluir que no existe determinado grupo de
venenos voltiles que afectan al catin argntico, ni tampoco presencia
de compuestos voltiles reductores. La reaccin de acetato de plata
result negativa descartando la presencia de cido sulfhdrico en la
muestra de orina, lo cual confirma el resultado obtenido con el papel
reactivo al nitrato de plata, estas dos reacciones podran descartar que
el animal sufri una intoxicacin debido a la produccin de cido
sulfhdrico. Adems el cido sulfhdrico en concentraciones toxicas, se
percibe inmediatamente por el olfato y la intensidad del olor, y esta
cualidad estuvo ausente en la muestra de orina, ya que esta presentaba
un olor caracterstico. Al igual que en la reaccin con el papel sensible de
trtaro emtico, que debido a la ausencia de cido sulfhdrico en la
muestra de orina no se form el precipitado de sulfuro de antimonio, por
ende el papel sensible no vir a una coloracin naranja tenue. 9 La accin
del cido sulfhidrico sobre los cationes se debe principalmente al
carcter precipitante del in S2. El que el S2 precipite unos u otros
cationes depende fundamentalmente de la acidez de la disolucin y del
producto de solubilidad del correspondiente sulfuro metlico. 10
Finalmente la reaccin de cloruro de paladio result negativa indicando
la ausencia del monxido de carbono, ya que no se observa una
coloracin plateada que se manifiesta cuando el monxido de carbono
reduce diversas sales metlicas oxidantes, como lo es el paladio II
(Pd+2).

Segn los resultados obtenidos es muy probable que el organismo del

cual se obtuvo la muestra haya estado intoxicado con cianuro, que es un
componente qumico altamente reactivo y muy toxico, que figura en la
lista Hazardous Substance List segn OSHAS. Esta molcula es
relativamente pequea y se puede absorber por tracto gastrointestinal
inhalatoria, drmica, conjuntival y parenteral. 11

Probablemente la intoxicacin se debi al consumo de un raticida, ya

que se emplea el cido cianhdrico para desinfeccin como raticida. El
mecanismo de accin txica lo ejerce inhibiendo la citocromooxidasa
bloqueando de este modo la respiracin celular generando hipoxia o
anoxia citotxica. Tambin inhibe protenas que posean hierro en su
mximo estado de oxidacin (+3) como es la metahemoglobina. 8

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 En ENSAYOS
humanos yPRELIMINARES O INMEDIATOS
animales, la ruta de mayor eliminacin de cianuro como
tiocianato es la va urinaria, pero en pequeas cantidades tambin se
elimina por las vas respiratoria y digestiva. Una porcin de cianuro libre
se excreta inalterado con la respiracin, saliva, sudor, y orina.

VII. CONCLUSIONES:
El procedimiento de anlisis del toxico en la muestra de contenido
gstrico realizado en la prctica se hizo mediante reacciones en
papeles sensibles y estos reaccionaron con los vapores que emiti
la muestra puesta en bao mara, donde el cambio de coloracin
indic la presencia de compuestos presentes en la muestra.
En la muestra de contenido gstrico dio positivo para la reaccin
de schombein, detectndose la presencia de compuesto CN- ;
mientras que las otras reacciones fueron negativas descartando
en la muestra la presencia de compuestos de cido cianhdrico e
hidrogeno sulfurado, oxido de carbono , fosforo blanco,
arsenonamina, estibamina.

VIII. FUENTES DE INFORMACION

1. Stewart, C. P. and Stolman, A. (1960) Toxicology. Mechanisms And

Analytical Methods. Academic Press, New York and London.
Volumen I y II
2. Sunshine, Irving. (1987) Methodology For Analytical Toxicology.
CRC Press, Inc. Boca Raton, Florida, USA. Volumen I, II y III
3. Ctedra de Toxicologa y Qumica Legal-UBA (2005) Gua de
Trabajos Prcticos de la Ctedra de Toxicologa y Qumica Legal de
la UBA
4. Walllace Hayes A. (2001). Principles and Methods of Toxicology. 4
th edicin. Ed:Taylor & Francis. USA
5. R.J. Flanagan; R.A. Braithwaite; S.S. Brown; B. Widdop and F.A. de
Wolff. Basic Analytical Toxicology. UNITED NATIONS ENVIRONMENT
PROGRAMME INTERNATIONAL LABOUR ORGANISATION WORLD
HEALTH ORGANIZATION. INTERNATIONAL PROGRAMME ON
CHEMICAL SAFETY Geneva, 1
6. Compendio de toxicologia general y particular. Pedro Mata.
Madrid. Encontrado en: https://books.google.com/books?

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ENSAYOS PRELIMINARES O INMEDIATOS
id=Cx12xYACD1IC&printsec=frontcover&hl=es&source=gbs_ge_s
ummary_r&cad=0#v=onepage&q&f=false.
7. ENSAYOS PRELIMINARES DE ORIENTACION DIPONIBLE EN:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_medicina/Docu
mentos/materialinstruccionalescuelasycatedras/bioanalisis/lab.toxi
cologia/contenidos/introduccion/ensayos-toxicologico.html.
8. Grupos yimg. Identificacion y dosaje de acido cianhidrico en
medios biolgicos.
9. Manual Practico de Quimica Toxicologica. Guatelli Manuel. Editorial
Universitaria. Buenos Aires, 1958.
10.Gonzlez C. Anlisis cualitativo inorgnico. Disponible en:
http://ocw.usal.es/ciencias-experimentales/quimica-
analitica/contenidos/CONTENIDOS/12.%20CONCEPTOS
%20TEORICOS.pdf
11.Ramirez . Toxicidad del cianuro. Investigacin bibliogrfica de sus
efectos en animales y en el hombre Cyanide toxicity. Bibliography
research of its effects in animals and man. An Fac med.
2010;71(1):54-61.

17