Medios de Cultivo

Los medios de cultivo son las soluciones nutritivas que se usan en el laboratorio para el cultivo de los
microorganismos. En microbiologa, se usan dos tipos generales de medios de cultivo: los qumicamente definidos y
los complejos (o no complejos). Los medios definidos se preparan aadiendo cantidades precisas de compuestos
orgnicos o inorgnicos purificados a un volumen en agua destilada. Por tanto, se sabe la composicin qumica exacta
de un medio definido. Sin embargo, en muchos casos la composicin exacta de un medio no es importante. Los
medios complejos pueden ser entonces adecuados o incluso ventajosos por varias razones. A menudo, los medios
complejos emplean hidrolizados de casena (la protena de leche), carne, soja, levaduras u otras sustancias muy
nutritivas (pero sin embargo no definidas qumicamente). Tales hidrolizados estn disponibles comercialmente en
forma de polvo y pueden ser pesados con facilidad y disueltos en agua destilada para preparar un medio. Brock.
Biologia de los microorganismos Cap. 5 p: 107-111.

Definicin y Clasificacin de los medios de cultivos

a. Medios Lquidos: Se denominan caldos y se preparan en tubos o erlenmeyers. El medio lquido ms utilizado es el
llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza principalmente
cuando se pretende la obtencin de una suspensin bacteriana de una determinada concentracin.

MEDIOS DE CULTIVO EN TUBOS

CALDOS MEDIOS ANAEROBIOSCALDOS ENRIQUECIMIENTO

Tubos 12 x 120:y 13 x 100:

Agua Peptonada Tamponada
Agua Peptonada alcalina
Caldo Cerebro Corazn
Caldo Peptonado
Caldo Mueller Hinton
Caldo Soya Tripticase
Caldo Todd Hewitt
Caldo Todd Hewitt + Inhibidor
Medio Tioglicolato
Medio Conservacin Cepas
Medio Lquido Enriquecido
Medio Selenito
Medio TSA tendido

Tubos 16 x 160:
Agar Sabouraud Dextrosa 2%
Agua Peptonada Tamponada 9 ml
Agua Peptonada Tamponada 9,9 ml
Caldo EC Modificado
Caldo Selenito
Medio Lowenstein Jensen
Medio para Gram-positivos
Medio para hongos y levaduras
Salmonella ID
Listeria ID

b. Medios Slidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregndoles un agente glificante. Los ms
utilizados son la gelatina y el agar Gelatina: es una protena animal obtenida de los huesos. Tiene el
inconveniente que es hidrolizada por muchas bacterias, y adems est muy limitado por que su punto de funcin
 es muy bajo. El agar puede utilizarse para diferentes fines, aunque los ms importantes son: agar comercial para
la industria alimentaria, agar bacteriolgico y agares purificados.

PLACAS CON MEDIOS DE CULTIVO

PLACAS DE 10 CM.
Agar Bilis Esculina
Agar Bismuto Sulfito
Agar Chocolate + Suplemento
Medio Lactosado CLED
Agar Corn Meal
Medio CromoUTI
Agar DNAsa + Indicador
Agar Feniletilalcohol
Agar Hektoen
Medio LB + Ampicilina
Agar MacConkey
Agar MacConkey+MUG
Agar Manitol-Sal-Rojo Fenol
Medio Mueller Hinton (NCCLS)
Medio Mueller Hinton+Sangre
Agar Nutriente
Medio Sabouraud Dextrosa 4%+Inhib.
Medio Sabouraud Dextrosa 2%+Inhib.
Agar SS

PLACAS CON MEDIOS DE CULTIVO

PLACAS DE 5 CM.
Agar Chocolate + Suplemento
Medio CromoUTI
Agar DNAsa + Indicador
Medio Sabouraud Dextrosa 4%+Inhib.
Agar Sangre Cordero Base TSA
Medio Thayer Martin
Medio Brettanonomyces /mostos
Medio Brettanomyces / vino
Medio MRS
Medio Cromocoli
Medio Wl Nutriente
Medio WL Diferencial
Medio Cromoaureus
Medio SFP
Medio Slanets & Bartley
Agar Triptosa Sulfito
Agar MFC + Ac.Roslico
Agar Green Yeast & Mold

PLACAS CON MEDIOS PARA SEMSIBILIDAD

PLACAS DE 15 CM
Mueller Hinton ( CLSI)
Mueller Hinton+Sangre
Medio HTM
Medio Casitona

c. Medios Nutritivos: EL agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de
bacteria. Es muy til porque permanece solido incluso a relativas altas temperaturas. Adems, el crecimiento
bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeas. En un
 caldo de nutrientes, la bacteria crece en el lquido, y aparece como una sustancia espesa, con colonias
difcilmente observables. El agar nutritivo contiene normalmente (w/v).

0.5 % Peptona
0.3 % extracto de carne/extracto de levadura
1.5 % agar
0.5% NaCl
Agua destilada
d. pH casi neutro (6.8) a 25 C.

e. Medios de enriquecidos: Estn compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le puede
agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre, suero, lquido asctico,
etc. Se utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.
Medio Liquido Enriquecido:
Tubos 12 x120 de 5ml por 30 unidades.
La base de este medio es el medio tioglicolato enriquecido con hemina , vitamina K y suero animal. Este medio antes
de ser sembrado debe regenerarse por lo menos 10 minutos en bao de agua hirviendo con el tapn muy suelto . Al
finalizar la regeneracin se le agrega Bicardonato de Sodio estril al fondo del tubo hasta una concentracin final de 1
mg por ml de medio con una pipeta Pasteur estril cuidando de no introducir aire al medio.
Se siembra depositando una gota del inculo al fondo del tubo cuidando de no incorporar aire al medio. Se incuba en
la jarra anaerbica por 48 hrs., despus de ese tiempo se ob-serva el desarrollo.
MEDIOS PARA ANAEROBIOS
Agar Sangre+Suplemento

Agar Sangre+ Suplemento+ Inhibidores (Medio CNA)

Agar Sangre Brucella

Agar SFP Clostridium Perfringens

Agar Clostridium Difficile

Medio E.Y.A. (Egg Yolk Agar)

Medio Lquido Enriquecido

Medio Tioglicolato con Indicador

f. Medios diferenciales: Son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre varios gneros y especies de
microorganismos. Por ejemplo si al medio se le ha aadido un carbohidrato y un indicador y la bacteria que se
cultiva es capaz de fermentar dicho carbohidrato, se produce una acidificacin del medio con el consiguiente viraje
de color del indicador por el cambio de pH. El citrato de Simmons es un medio cuya nica fuente de carbono es el
citrato sdico, entonces en l solo crecern las bacterias capaces de desarrollarse utilizando como nica fuente
de carbono ese componente. A menudo la separacin se basa en la diferencia de color de las colonias aisladas,
como en el agar con azul de metileno - eosina que permite diferenciar E. coli (colonias oscuras y de brillo
metlico) de Enterobacter aerogenes (colonias rosadas de centro azul sin brillo). Estos dos microorganismos en
agar nutritivo producen colonias de color gris blancuzco.
MEDIOS DIFERENCIALES
TUBOS 12 x 120 ; 13 x 100 y 75 x 100
Tubos 12 x 120 : 13 x 100
Medio TSI
Medio LIA
Medio MIO
Medio Citrato Simmons
Medio Urea de Christensen
Medio Kligler
Medio Bilis Esculina
Medio Agar Sal
Medio Manitol-Sal-Rojo Fenol
Medio Fenilalanina
Medio OF+glucosa
Medio CTA+azcares
Medio RM-Voges Proskauer

g. Medios selectivos: Son slidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones fsicas del medio
o aadiendo o suprimiendo componentes qumicos especficos con el fin de inhibir el crecimiento de especies
qumicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de medio slo permite el crecimiento de un grupo de
microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar microorganismos a partir de
poblaciones mixtas. Por ejemplo Agar salado-manitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos estafilococos).

PLACAS CON MEDIOS SELECTIVOS

Agar Regan Lowe (Bordetella)
Agar HTM (Haemophylus Test Media)
Medio Skirrow (Campylobacter)
Medio Oxford (Listeria)
Medio CIN ( Yersinia)
Medio Hb ( human Blood-Gardnerella)
Medio MRSA ( S.aureus Meticilina resis-tentes)
Medio CHAB ( Pisirikettzia salmonis)
Medio Dixon ( Malasezzia)
Agar VRE+Vancomicina 6ug/ml ( Ente-rococos Vancomicina resistentes)
h. Medios de transporte: son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin multiplicacin significativa de
los microorganismos desde el momento de su extraccin hasta su posterior estudio. Se utilizan generalmente
cuando las muestras deben ser enviadas de un laboratorio a otro. Se recomienda un lmite de dos horas desde la
recoleccin de las muestras y su estudio en el laboratorio, pero este lmite de tiempo es superado (frecuentemente
cuando se trata de muestras tomadas en un consultorio). Esta demora hace necesario el uso de medios de
transporte adecuados. Los medios de transporte ms frecuentemente utilizados son los de Stuart, Amies y Carey -
Blair. Existe una unidad descartable de cultivo de transporte llamada Culterette que consiste en un tapn estril de
 poliestireno y un ampolla en la parte inferior que se rompe cuando se ejerce presin liberando el medio de
transporte de Stuart alrededor del extremo del tapn impregnado en la muestra.

Caracterstica y uso de medio inoculado y sin inocular

MacConkey, Agar (Ph. Eur.)
Medio de cultivo utilizado en la investigacin de organismos coliformes.

Historia
Este medio se basa en la frmula original de MacConkey a base de sales biliares, rojo neutro y lactosa para el
aislamiento de bacilos entricos Gram-negativos.

Fundamento
Por la presencia de las sales biliares y el cristal violeta se inhibe el crecimiento de las bacterias Gram-positivas. Por la
presencia de la lactosa, las bacterias capaces de fermentarla acidifican el medio, cambiando el color del rojo neutro y
formando colonias rojas o rosadas, pudiendo presentar un halo turbio correspondiente al precipitado biliar. Las
bacterias lactosa-negativas dan colonias incoloras.

Formula (por litro)

Composicin (g/l)
Lactosa..10,0 g Peptona (carne y casena)..3,0 g
Sales biliares...1,5 g Peptona de Gelatina..17,0g
Rojo neutro..0,03 g Sodio Cloruro..5,0g
Violeta cristal.....0,001 g Agar.13,5 g
pH final: 7,1 0,2
Preparacin
Suspender 50 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121
Cdurante 15 minutos. Dejar enfriar hasta 45 C y distribuir en placas de Petri estriles con 20 ml en cada una. Dejar
solidificar las placas parcialmente destapadas.

La Farmacopea indica este medio para el control de E.coli.

Sembrar sobre MacConkey Agar muestra preenriquecida en TSB (413820) y posteriormente enriquecida en
MacConkey Caldo (413780). Incubacin de las placas inoculadas a 30-35C durante 18-72 horas. El crecimiento de
colonias sobre el medio indica presuncin de E.coli. Confirmar con tests identificativos.

Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino
Solubilidad: total
Color: beige-rosado
pH: 7,10,2

Control microbiolgico

Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 30-35
C y observados a las 18-72 horas.

Bibliografa
J. Hyg., 8: 322-334 (1908) Ph. Eur. suple. 6.5 (2009) USP 32 (2009)

Agar sangre

El agar sangre es un medio de aislamiento especialmente diseado parafacilitar el crecimiento de microorganismos

exigentes, bacterias Gram-positivasy todas las especies encontradas en muestras de origen clnico.

Contiene una mezcla de peptonas particularmente adaptada al cultivo de microorganismos exigentes (estreptococos,
Listeria...). La presencia de sangre permite la determinacin de la hemlisis, criterio bsico en la orientacin hacia la
identificacin bacteriana. Ejemplo de hemlisis caractersticas: Streptococcus pneumoniae: a-hemlisis, con una
coloracin verdosa alrededor de la colonia. Streptococcus pyogenes: -hemlisis, con una zona transparente
alrededor o debajo de la colonia. El agar sangre puede ser usado para hacer subcultivos y obtener cultivos puros.

Bibliografa
www.biomerieux.es

Agar Chocolate
Consiste en un agar sangre que antes de su solidificacin se lleva a 100C/1min., (llevar a ebullicin); as, se rompen
los globulos rojos t el medio toma un color caf. Se usa para el aislamiento Haemophilus spp., y Neisseria spp.

Bibliografa
Brock y Madigan. MIcrobiologia. Editorial. Prentince Hall Hispanoamrica. S.A. 6 edicin. Mxico 1993.

Baker, F. J., y Breach, M. R. 1990. Manual de tcnicas de Microbiologa Medica. Editorial Acribia.
Zaragoza, Espaa. 676p.
MADIGAN M. T. MARTINO J.M.; Parker J. Brock Biologa de los microorganismos, Editorial. Prentice Hall
Hispanoamericana S.A. 88 edicin. Madrid. 1998.
Castao-Zapata,J. y Del Rio Mendoza, L. 1997 Manual para el diagnstico de hongos, bacterias, virus y
nematodos fitopatgenos. Zamorano- Universidad de Caldas. 210 p.

SS, Agar
Aislamiento selectivo de Salmonella y Shigella
Contiene peptona, lactosa, bilis de buey desecada, citrato de sdico, que evidencia la fermentacin o no de lactosa.
Las colonias de microorganismos lactosa-negativos son incoloras y las de microorganismo lactosa-positivo son
rosadas hasta rojas.
El agar SS es un medio selectivo de aislamiento y diferenciacin recomendado para la deteccin de las
especies Salmonella y Shigella. Se inocula directamente a partir de heces, de una suspensin de heces o de caldos
de enriquecimiento.
El medio detecta las colonias fermentadoras de lactosa y las reductoras de tiosulfato (produccin de H2S). Los
microorganismos fermentadores de lactosa producen colonias rosas, el resto forman colonias incoloras. Los
microorganismos productores de H2S dan lugar a colonias con un centro negro.
Las colonias de Salmonella son incoloras o de color amarillo plido, con o sin un centro negro.
Las colonias de Shigella son incoloras o de color rosa plido o naranja sin centro negro.
La inhibicin de microorganismos Gram-positivos se obtiene por una mezcla de sales biliares y colorantes.

Bibliografa
www.biomerieux.es
Brock y Madigan. MIcrobiologia. Editorial. Prentince Hall Hispanoamrica. S.A. 6 edicin. Mxico 1993.

Baker, F. J., y Breach, M. R. 1990. Manual de tcnicas de Microbiologa Medica. Editorial Acribia.
Zaragoza, Espaa. 676p.

Sal y Manitol, Agar (Ph. Eur.)

Se emplea para el aislamiento selectivo y recuento de Estafilococos patgenos en productos lcteos,
crnicos, marinos y otros productos alimenticios. Tambin se emplea con el mismo fin en productos
farmacuticos y cosmticos.
Sinnimo
Chapman USP Medio.
Historia
La formulacin del medio se basa en la propiedad, ya enunciada por Koch, de que el crecimiento de los
Estafilococos no era inhibido por una concentracin de Sodio Cloruro del 7,5%, mientras que esto s
suceda con la mayora de las bacterias restantes. Chapman confirm esta experiencia aadiendo que
los Estafilococos patgenos crecan de forma abundante al tiempo que los no patgenos lo hacan en
pequeas colonias. La formulacin de este medio corresponde a las recomendaciones de la USP.

Fundamento
El efecto inhibidor se debe a la alta concentracin de Sodio Cloruro del medio. Con la fermentacin de la
D(-)-Manita se genera cido que ocasiona el viraje del rojo de fenol al amarillo, permitiendo as una
mayor claridad en el momento de establecer el diagnstico, ya que la mayora de los Estafilococos
patgenos fermentan este azcar.

Frmula (por litro)

Composicin (g/l):
Sodio Cloruro.................................................... 75,0
Extracto de Carne................................................ 1,0
Digerido Pptico de Tejido Animal........................ 5,0
Agar................................................................. 15,0
pH: 7,40,2

D(-)-Manita........................................................10,0
Digerido Pancretico de Casena...........................5,0
Rojo de Fenol...................................................0,025
Preparacin
Suspender 111 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto.
Distribuir y esterilizar a 121C durante 15 minutos.
Modo de empleo
Sembrar grandes inculos en la superficie del medio. Incubar a 30-35C de 18 a 72 horas. La adicin de
un 5% de Emulsin de yema de huevo (cd. 414722) permite detectar la actividad en Estafilococos. La
Farmacopea Europea y la USP lo indican para el control de S. aureus. La muestra preincubada en Soja
Triptona (TSB) Caldo (413820) a 30-35C durante 18-24 horas, se inocula sobre placa de Sal y Manitol
Agar. Despus de incubar las placas a 30-35C durante 18-72 horas, se observa la presencia o no de
crecimiento caracterstico de colonias amarillas rodeadas de halo amarillento que indica la posible
presencia de S. aureus. Se debern confirmar colonias sospechosas.
Bibliografa
J. Bact., 50: 201-203 (1945) USP 32 (2009) Ph. Eur. supl 6.5 (2009)

Transporte, Medios
Transport Medium
Transporte Amies sin Carbn, Medio
Amies Transport Medium without Charcoal
Cd.: 413734 Envase: 500 g
Transporte Cary-Blair, Medio
Cary-Blair Transport Medium
Cd.: 413778 Envase: 500 g
Transporte Stuart, Medio
Stuart Transport Medium
Cd.: 413813 Envase: 500 g
Se emplean para favorecer y conservar la viabilidad de los microorganismos mientras son transportados
al laboratorio.
Historia
Stuart y colaboradores fueron los primeros en formular medios que permitieran el transporte rutinario
de especmenes biolgicos. Cada uno de los medios empleados est pensado para un determinado
abanico de aplicaciones y permiten introducir modificaciones en funcin de las caractersticas de la
muestra a transportar. Amies, Cary y Blair establecieron la formulacin del medio que lleva su nombre.
Fundamento
Se trata de un medio no nutritivo, semislido y reductor que previene la destruccin de los grmenes y
los mantiene en estado estacionario. Su composicin salina permite conservar la muestra hasta su
entrega al laboratorio. En la formulacin del medio de Transporte Stuart, hay Azul de Metileno que acta
como indicador de la oxidacin del medio, cuando la mitad del medio contenido en un tubo presenta
color azulado, el medio no est en las condiciones adecuadas de transporte. Para restablecer la
anaerobiosis debe licuarse, de nuevo el medio. El medio de transporte Stuart se puede suplementar con
cido roslico a razn de 10 ml de Acido roslico al 10% por litro de medio.

Preparacin
Disolver 13 g del Medio de Transporte Amies sin Carbn, 13,2 del Medio de Transporte Cary-Blair, 14,1
del Medio de Transporte Stuart en 1 l de agua destilada. Distribuir en tubos o viales con tapn de rosca
llenndolos casi por completo y esterilizar en autoclave (121C de 10-15 minutos).
Dejar enfriar y solidificar en posicin vertical. Reapretar los tapones, si fuese necesario, cuando el medio
este fro. El Medio de Transporte Stuart es el que presenta menor concentracin de agente gelificante,
para el transporte es aconsejable aadir 7 g de Agar por litro de medio, antes de su esterilizacin.
Modo de empleo
La recogida del material se hace con un hisopo de algodn esterilizado. Este hisopo se introduce en el
tubo que contiene el medio de transporte, se cierra hermticamente y se conserva en fro hasta su
transporte.

Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a
temperatura de 37C y observados a las 24 horas.

Bibliografa
Glasgow Med. J., 27: 131-142 (1946)
Publ. Helth. Rep., 74: 431-438 (1959)
REFERENCIAS
Stuart . Toshach y Patsula (1954). Can. J .P.H. 45:73.
Agar Nutritivo
Medio recomendado para el cultivo de gran variedad de bacterias y para el recuento de organismos en
aguas, heces y otros materiales.
Historia
Se trata de uno de los primeros medios empleados en microbiologa para los fines de enriquecimiento.
Las primeras formulaciones se basaban en el empleo de infusin de carne, que posteriormente fue
sustituida por el extracto de carne de res.
Fundamento
Se trata de un medio muy simple que contiene los nutrientes necesarios para el desarrollo de la mayor
parte de los microorganismos no exigentes.
Frmula (por litro) del Agar
Extracto de Carne....................................... 3,0 g
Peptona de Gelatina................................... 5,0 g
Agar......................................................... 15,0 g
pH final: 6,8 0,2

Preparacin
Suspender 23 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullicin y disolucin total y hervir
durante 1 minuto. Esterilizar a 121C durante 15 minutos.
Modo de empleo
Utilizar segn los fines previstos. Incubar a 37C de 24 a 48 horas.
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 6,8 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a
temperatura de 35C 2C y observados a las 18-48 horas.
Bibliografa
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. APHA. (1980); Atlas R.M. & Parks L.C.,
Handbook of Microbiological Medica, 667 (1993).

Caldo infusion cerebro corazon

Medio de cultivo liquido de uso general formulado de acuerdo a las especificaciones del ISFN.
Formula en g/L
Extracto de corazn.5,0
Extracto de cerebro..12,5
Propteosa peptona.10,0
Dextrosa...2,0
Cloruro de sdico5,0
Fosfato disdico.2,5

pH del medio 7,3

Preparacin
Disolver 35 mg, de polvo en un litro de agua destilada, calentado si es necesario.distribuir en
recipientes y esterilizar al autoclave durante 15 minutos a 121C.
Descripcin

La infusin de corazn y cerebro es un medio de cultivo clsico muy utilizado en microbiologa clnica para el cultivo
de organismos patgenos. Ya que mantiene muy bien las caractersticas de antigenicidad, virulencia y toxicidad, y
adems est perfectamente adaptado para la adicin de sangre.

Sobre este medio se obtienen excelentes resultados en el cultivo de estreptococos, meningococos e incluso hongos
patoqencs. Sin embargo, como todos los medios cuya base nutritiva son infusiones, de composicin difcil de
establecer y problemas de reproductividad ha sido paulatinamente sustituido por otros medios de composicin ms
definida 0 por 10 menos con mayor facilidad de reproduccin como es el caldo de Tripticasa y Soja.
En general la infusi6n de corazn y cerebro se utiliza con diversas adiciones para adecuarla a distintas finalidades. As
por ejemplo, con un 10% de sangre desfibrinada se comporta como un excelente medio para el cultivo de hongos
patgenos como Histoplasma y con 20 uL de penicilina y 40 mcg. de estreptomicina por ml. es un buen medio de
cultivo para Coccidioides.

Con la adicin de un 1-2% de agar permite el crecimiento y propagacin de anaerobios aerotolerantes sin condiciones
especiales de cultivo.

Bibliografa
J. Bact., 62: 613 (1951)
Medios de Cultivo para Microbiologa.1981, Edita: ADSA=MICRO S.A. 149 p.

Mueller-Hinton, Agar
Se emplea para ensayos de sensibilidad de los microorganismos frente a antibiticos y sulfamidas.
Tambin en aislamiento primario de Gonococos y Meningococos.
Historia
Mueller y Hinton tomaron como punto de partida de sus estudios el medio complejo de Gordon y Hine
con el fin de encontrar un medio capaz de resistir el autoclavado. El primer paso fue sustituir la harina
de guisante por el almidn, que a su vez protega el medio de las toxinas que pudieran estar presentes.
Despus sustituyeron la peptona de carne por la de casena hidrolizada, que por ser ms fragmentada
favoreca ms los crecimientos. Finalmente ha sido reconocido como el ms indicado para los ensayos
de sensibilidad a antibiticos y sulfamidas por el procedimiento de los discos.
El Caldo MUELLER-HINTON es el ms utilizado en la determinacin de la concentracin mnima
inhibitoria (CMI) por la tcnica de diluciones seriadas.
Fundamento
En la preparacin de este medio es fundamental que las concentraciones de timina, timidina y cido 4-
aminobenzoico, sean lo suficiente bajas para no inhibir la actividad antibacteriana de antibiticos y
sulfamidas. Las dos primeras inhiben los antibiticos y el ltimo las sulfamidas. El ensayo de
sensibilidad de un microorganismo frente a un antibitico se puede realizar sobre placas de agar
Mueller-Hinton por procedimientos de difusin, por diluciones seriadas o por tcnicas turbidimtricas en
el Caldo Mueller-Hinton. En las tcnicas de difusin se mide el halo de inhibicin del crecimiento
confluente alrededor del depsito de antibitico (discos, torrecillas, etc.). El dimetro del crculo de
inhibicin es inversamente proporcional a la concentracin mnima inhibitoria (CMI) del agente
antibacteriano.

Frmula (por litro)

Composicin (g/l):
Almidn............................................................. 1,5 g
Infusin de Carne............................................... 2,0 g
Peptona de Casena Hidrolizada........................ 17,5 g
Agar................................................................. 17,0 g
pH: 7,40,2
Procedimiento
Suspender 38 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto.
Distribuir y esterilizar a 181-121C durante 15 minutos. Si se desea aadir sangre, dejar enfriar hasta
45C y aadir aspticamente sangre estril desfibrinada; la mezcla con sangre debe chocolatearse
calentando a 80C durante 10 minutos, si se desea obtener desarrollo de Neisseria. No sobrecalentar. Si
se precisa refundir el medio, calentar el menor tiempo posible.

Modo de empleo
El antibiograma debe ser efectuado sobre cultivos puros. En las tcnicas de difusin se inoculan las
placas de Agar para que formen un confluente. Los discos u otros contenedores del antibitico deben
apoyarse sobre el medio de manera que queden adheridos a l. Incubar a la temperatura ptima del
microorganismo durante 24 horas.
Control de Calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino
Solubilidad: ligeramente opalescente
Color: Beige
pH: 7,40,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a
temperatura de 352 C y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Amer. J. Clin. Pathol., 45: 493-496 (1966); J. Clin. Microbiol., 22: 369-374 (1985); Standardization of
Methods for Conducting Microbic Sensitivity Test. WHO. (1961)

Mueller-Hinton, Caldo
Se emplea para ensayos de sensibilidad de los microorganismos frente a antibiticos y sulfamidas.
Tambin en aislamiento primario de Gonococos y Meningococos.
Historia
Mueller y Hinton tomaron como punto de partida de sus estudios el medio complejo de Gordon y Hine
con el fin de encontrar un medio capaz de resistir el autoclavado. El primer paso fue sustituir la harina
de guisante por el almidn, que a su vez protega el medio de las toxinas que pudieran estar presentes.
Despus sustituyeron la peptona de carne por la de casena hidrolizada, que por ser ms fragmentada
favoreca ms los crecimientos. Finalmente ha sido reconocido como el ms indicado para los ensayos
de sensibilidad a antibiticos y sulfamidas por el procedimiento de los discos. El Caldo
MUELLER-HINTON es el ms utilizado en la determinacin de la concentracin mnima inhibitoria (CMI)
por la tcnica de diluciones seriadas.
Fundamento
En la preparacin de este medio es fundamental que las concentraciones de timina, timidina y cido 4-
aminobenzoico, sean lo suficiente bajas para no inhibir la actividad antibacteriana de antibiticos y
sulfamidas. Las dos primeras inhiben los antibiticos y el ltimo las sulfamidas. El ensayo de
sensibilidad de un microorganismo frente a un antibitico se puede realizar sobre placas de agar
Mueller-Hinton por procedimientos de difusin, por diluciones seriadas o por tcnicas turbidimtricas en
el Caldo Mueller-Hinton. En las tcnicas de difusin se mide el halo de inhibicin del crecimiento
confluente alrededor del depsito de antibitico (discos, torrecillas, etc.). El dimetro del crculo de
inhibicin es inversamente proporcional a la concentracin mnima inhibitoria (CMI) del agente
antibacteriano.
Frmula (por litro)
Composicin (g/l):
Almidn.............................................................. 1,5
Infusin de Carne................................................ 2,0
Peptona de Casena Hidrolizada......................... 17,5
pH: 7,40,2
Preparacin
Suspender 21 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto.
Distribuir y esterilizar entre 118-121C durante 15 minutos.
Modo de empleo
Inocular e incubar a 352C durante 18-24 horas
Bibliografa
J. Appl. Bact., 23, 130-135 (1960) J. Appl. Bact., 22, 329-340 (1959)