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    Elisa Virtual

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    Matias Sabaj Soto
    Este documento describe los pasos realizados en un laboratorio virtual para detectar la presencia de anticuerpos anti-DNA en muestras de sangre de 3 pacientes usando la técnica ELISA. Se centrifugaron las muestras para obtener suero y realizar diluciones en buffer PBS. Luego se depositaron en una placa tratada con antígeno SLE y se añadieron soluciones de anticuerpos primarios y secundarios unidos a enzimas. Finalmente se añadió un sustrato para la enzima, el cual cambió de color para algunas mue

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    Matias Sabaj Soto
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    Este documento describe los pasos realizados en un laboratorio virtual para detectar la presencia de anticuerpos anti-DNA en muestras de sangre de 3 pacientes usando la técnica ELISA. Se centrifugaron las muestras para obtener suero y realizar diluciones en buffer PBS. Luego se depositaron en una placa tratada con antígeno SLE y se añadieron soluciones de anticuerpos primarios y secundarios unidos a enzimas. Finalmente se añadió un sustrato para la enzima, el cual cambió de color para algunas mue

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    Elisa method

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    Este documento describe los pasos realizados en un laboratorio virtual para detectar la presencia de anticuerpos anti-DNA en muestras de sangre de 3 pacientes usando la técnica ELISA. Se centrifugaron las muestras para obtener suero y realizar diluciones en buffer PBS. Luego se depositaron en una placa tratada con antígeno SLE y se añadieron soluciones de anticuerpos primarios y secundarios unidos a enzimas. Finalmente se añadió un sustrato para la enzima, el cual cambió de color para algunas mue

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    Este documento describe los pasos realizados en un laboratorio virtual para detectar la presencia de anticuerpos anti-DNA en muestras de sangre de 3 pacientes usando la técnica ELISA. Se centrifugaron las muestras para obtener suero y realizar diluciones en buffer PBS. Luego se depositaron en una placa tratada con antígeno SLE y se añadieron soluciones de anticuerpos primarios y secundarios unidos a enzimas. Finalmente se añadió un sustrato para la enzima, el cual cambió de color para algunas mue

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    MATERIALES PARA ELISA (Enzyme-Linked

    Inmunosorbent Assay)
    LABORATORIO VIRTUAL
    Para la realizacin de esta tcnica tuvimos que ingresar a la
    pgina
    web:
    http://www.hhmi.org/biointeractive/vlabs/immunology/index.html,
    en
    sta se realiz un laboratorio virtual en donde se nos solicit chequear la
    presencia de Lupus Eritematoso Sistmico (LES) en 3 distintos pacientes
    (A, B, C) utilizando muestras de sangre, en donde se analizara la
    existencia de anticuerpos anti-DNA. Para esto contbamos con todos los
    reactivos e insumos dentro del laboratorio y se detallan a continuacin.
    3 muestras de sangre de distintos pacientes.
    Guantes de ltex.
    6 tubos falcon.
    3 tubos eppendorf.
    Buffer PBS
    2 micropipetas
    1 incubadora.
    1 centrfuga.
    1 solucin de anticuerpos anti-DNA.
    1 solucin de anticuerpos secundarios anti-DNA unido a la enzima
    HPR.
    1 solucin de sustrato para la enzima HPR.

    PROCEDIMIENTO PARA ELISA (Enzyme-Linked

    Inmunosorbent Assay)
    LABORATORIO VIRTUAL

    Como medida de proteccin


    personal, fue necesario en
    primer lugar proceder a usar
    guantes de ltex.

    Las 3 muestras de sangre


    fueron centrifugadas por 15
    minutos para obtener el suero
    de estas.
    Se utiliz el suero del paciente
    A para la realizacin de 3
    diluciones en buffer PBS, las
    que en orden decreciente de
    concentracin correspondan a
    1:2, 1:10 y 1:100. Para esto se
    utiliz un tubo eppendorf en
    donde se deposit 1 ml de
    suero del paciente A y 1 ml de
    PBS, en un tubo falcon se
    deposit 1 ml de suero del
    paciente A y 9 ml de PBS, por
    ltimo en un tubo falcon se
    deposit 0,1 ml de suero del paciente A y 9,9 ml de PBS. Las
    3 diluciones fueron mezcladas.
    En una placa para test de ELISA se deposit 0,1 ml de cada
    una de las diferentes soluciones, en pocillos distintos. Esta
    placa fue tratada anteriormente con antgeno SLE (Lupus
    Eritematoso Sistmico).

    Todos los pasos anteriores


    tambin se aplicaron al suero
    del paciente B y C, como lo
    muestran las 2
    imgenes
    siguientes.

    A los pocillos para el control positivo, se aadi 0,1 ml de


    dilucin de anticuerpo primario
    anti-DNA, y a los pocillos para el
    control negativo, se aadi
    buffer PBS.

    Se incub la placa durante 15


    minutos a 37C.

    Con una micropipeta se removi


    todo el lquido sobrante de cada
    uno de los pocillos de la placa, y
    posteriormente se lavaron con
    0,1 ml de PBS.

    Se deposit en cada uno de los


    pocillos 0,1 ml de una solucin
    con un anticuerpo secundario, el
    cual reconoce el anticuerpo
    primario en el suero de los
    pacientes. Este anticuerpo se
    encontraba unido a una enzima
    (HRP) que interactuara con un
    sustrato.
    Se incub la placa por 15 minutos a 37C.

    Con una micropipeta se removi


    todo el lquido sobrante de cada
    uno de los pocillos de la placa, y
    posteriormente se lavaron con
    0,1 ml de PBS.

    Se adicion a cada pocillo 0,1


    ml de sustrato para la enzima
    HRP, de esta forma si hubieran
    anticuerpos humanos en el
    suero, el sustrato se tornara de
    un color amarillo.
    Luego se esper 15 minutos para
    visualizar los resultados.

    RESULTADOS TEST DE ELISA

    Figura 2. Esto demuestra que el


    paciente A es probable que tenga
    LES. El paciente C probablemente
    no tiene LES. Para verificar si el
    paciente B posee LES, es necesario
    realizar otras pruebas.

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