10 200 A.

Introduccin
El trmino '' plancton '' se refiere a aquellas formas acuticas microscpicas
que tienen poca o ninguna resistencia a las corrientes y viven libre flotando y
suspendidos en las aguas naturales. Plantas planctnicas, '' fitoplancton, '' y los
animales planctnicos, '' zooplancton, '' se tratan en esta seccin. Los
fitoplancton (algas microscpicas) acontecen como formas unicelulares,
coloniales o filamentosos. Muchos son fotosintticos y paste sobre por el
zooplancton y otros organismos acuticos. Otros organismos que se producen
en el mismo entorno se tratan en otro lugar: hongos zoosporic en Seccin
9610F; hifomicetos acuticas en la Seccin 9610G; y bacterias en 9000. La
Parte zooplancton en agua dulce comprende principalmente protozoos,
rotferos, cladceros y coppodos; una mayor variedad de organismos se
produce en las aguas marinas.
1. Importancia
Plancton, especialmente fitoplancton, han sido utilizados como indicadores de
la calidad del agua.
Algunas especies florecen en aguas altamente eutrficos, mientras que otros
son muy sensibles a orgnico y / o desechos qumicos. Algunas especies se
desarrollan floraciones nocivas, a veces creando sabores ofensivos y olores o
condiciones anxicas o txicos que resultan en muertes de animales o las
enfermedades humanas. Las especies ensamblaje de fitoplancton y
zooplancton tambin puede ser til en la evaluacin de la calidad del agua.
A causa de sus ciclos de vida cortos, plankters responden rpidamente a los
cambios ambientales, y por lo tanto, su cosecha de pie y composicin de las
especies son ms propensos a indicar la calidad de la masa de agua en el que
se encuentran. Ellos influyen fuertemente en ciertos aspectos no biolgicos de
la calidad del agua (por ejemplo, pH, color, sabor y olor), y en un sentido muy
prctico, que son una parte de calidad del agua. Certain taxa a menudo son
tiles para determinar el origen o la historia reciente de un dado masa de
agua. Debido a su naturaleza transitoria, y la distribucin a menudo irregular,
sin embargo, la utilidad de plankters como indicadores de la calidad del agua
puede ser limitada. Informacin sobre el plancton como indicadores
esinterpretado mejor en conjunto con recogida simultneamente, fisicoqumica
y otra biolgica datos.
Organismos planctnicos predominan en estanques, lagos y ocanos.
Potamoplankton desarrollarse en grandes ros con aguas de movimiento lento
que se acercan a las condiciones lnticas. Debido a que su origen puede ser
incierto y la duracin de su exposicin a los contaminantes desconocidos,
plankters generalmente son menos valiosos como indicadores de la calidad del
agua en lticos que en ambientes lnticos.

10200 B. Recogida de muestras

1. Consideraciones generales
La frecuencia y la ubicacin de muestreo es dictado por el propsito de la
estudio.1 Localizar muestreo de estaciones lo ms cerca posible a los
seleccionados para la qumica y bacteriolgica de muestreo para asegurar la
mxima correlacin de los hallazgos. Establecer un nmero suficiente de
estaciones en hasta lugares como sea necesario para definir adecuadamente
los tipos y cantidades de plancton en las aguas estudi. La naturaleza fsica del
agua (de pie, que fluye, o de las mareas) influir en gran medida la seleccin
de estaciones de muestreo. El uso de los sitios de muestreo seleccionado por
los investigadores anteriores generalmente asegurar la disponibilidad de
datos histricos que nos llevar a una mejor comprensin de resultados
actuales y proporcionan continuidad en el estudio de un rea.
En la corriente y el trabajo ro, estaciones aguas arriba y aguas abajo de
sospecha de contaminacin localizar las fuentes y los principales afluentes y
los intervalos en apropiados a lo largo del alcance bajo investigacin. Si es
posible, busque estaciones en ambos lados del ro, porque mezcla lateral del
ro agua puede no ocurrir por grandes distancias aguas abajo. De una manera
similar, investigar afluente flujos sospechosos de estar contaminados, pero se
ocupan en la interpretacin de los datos de un pequeo arroyo porque gran
parte del plancton puede haber perifticas en su origen, que surge de fregar de
los recursos naturales sustratos por el agua que fluye. Contribuciones de
plancton desde adyacente lagos, embalses, y zonas de remanso, as como los
organismos del suelo llevaron a la corriente por la escorrenta, tambin pueden
influir Interpretacin de datos. La profundidad de que el agua se descarga de
los embalses aguas arriba estratificadas tambin puede afectar a la naturaleza
del plancton.
Dado que el agua de los ros y arroyos por lo general es bien mezclado vertical,
toma de muestras del subsuelo, es decir, el metro superior o un compuesto de
dos o ms estratos, a menudo es adecuado para la recogida de una ejemplo
representativo. Puede haber problemas causados por la estratificacin debido a
las descargas trmicas o la mezcla de las aguas ms clidas o ms fras de
afluentes y embalses. Siempre probar en el principal canal de un ro y evitar
pantanos, reas de entradas o de remanso que reflejan los hbitats locales en
lugar que las condiciones del ro. En los ros que se mezclan en vertical y
horizontal, mida el plancton poblaciones mediante el examen de muestras

peridicas recogidas en medio de la corriente de 0,5 a 1 m por debajo de la

superficie.
Si se puede determinar o correctamente asumido que la distribucin es
uniforme y plancton normales, utilizar un esquema de muestreo aleatorio para
acomodar las pruebas estadsticas. Incluya tanto al azar la seleccin de sitios
de muestreo y transectos, as como la coleccin al azar de las muestras en
cada sitio seleccionado. Por otro lado, si se sabe o se supone que la distribucin
de plancton es variable o irregular, incluir sitios de muestreo adicionales,
recoger muestras compuestas, y aumentar la muestra replicacin. Utilice las
pruebas estadsticas apropiadas para determinar la variabilidad de la
poblacin.
En el muestreo de un lago o embalse utilizar una red o transectos rejilla lneas
en combinacin con procedimientos aleatorios. Tome un nmero suficiente de
muestras para hacer que los datos significativos. Muestra una cuenca del lago
circular en puntos estratgicos a lo largo de un mnimo de dos transectos
perpendiculares que se extiende de costa a costa; incluir el punto ms
profundo de la cuenca. Pruebe una larga, estrecha en la cuenca varios puntos a
lo largo de un mnimo de tres transectos paralelos espaciados regularmente
que son perpendiculares al eje largo de la cuenca, con la primera cerca de la
entrada y la ltima cerca de la salida. Muestra una gran baha a lo largo de
varios transectos paralelos originan cerca de la costa y que se extienden hasta
el lago adecuada.
Debido a que se requieren muchas muestras para evaluar completamente el
conjunto de plancton, puede ser necesario restringir el muestreo de puntos
estratgicos, como la proximidad de tomas de agua y vertidos, constricciones
dentro de la masa de agua, y las principales bahas que pueden influir en la
principal cuenca.
En los lagos, embalses y estuarios donde las poblaciones de plancton pueden
variar con la profundidad, recoger muestras de las principales zonas de
profundidad o masas de agua. Las profundidades de muestreo sern
determinados por la profundidad del agua en la estacin, la profundidad de la
termoclina o un isohalina, u otros factores. En zonas poco profundas de 2 a 3 m
de profundidad, las muestras del subsuelo recogidos en el 0,5 hasta 1 m
pueden ser adecuados. En zonas ms profundas, recogen muestras a intervalos
regulares de profundidad. En estuarios muestra arriba y por debajo de la
pyncocline. Intervalos de profundidad de muestreo varan para los estuarios de
diferentes tamaos y profundidades, pero su uso profundidades representativa
del rango vertical. Muestreo Compuesto por encima y por debajo de la
pyncocline a menudo se utiliza. En el muestreo marino, la intencin y el
alcance del estudio determinarn la coleccin medida.

Sobre la plataforma continental, tomar muestras en las estaciones de

aproximadamente equidistantes desde la orilla hacia el mar. Tome una serie
vertical desde la superficie hasta cerca del fondo en cada estacin, aadiendo
poco a poco ms estaciones a travs de la plataforma. Es importante
muestrear todo el rango vertical sobre una placa continental. Muestras al azar
bentnicos pueden tomarse para recoger clulas de descanso latentes o
quistes.
Ms all de la plataforma en aguas pelgicas, la muestra en la zona ftica
desde la superficie hasta la termoclina de fitoplancton y de profundidades ms
profundas para el zooplancton. Profundidades de muestreo varan, pero a
menudo se encuentran en
10 a intervalos de 25 m por encima de la termoclina, a continuacin, a
intervalos de 100 a 200 m por debajo de la termoclina a 1000 m, y despus a
intervalos de 500 a 1000-M.
Las muestras generalmente se conocen como '' superficial '' o (subsuelo)
muestras '' profundidad ''. Estos ltimos son muestras tomadas de cierta
profundidad indicada, mientras que las muestras de superficie pueden ser
interpretados como muestras recogido como cerca de la superficie del agua
como sea posible. A '' desnatada '' muestra de la pelcula superficial plancton
(neuston) 2 puede ser reveladora; sin embargo, normalmente no incluyen una
desproporcionada cantidad de pelcula superficial en una muestra de la
superficie debido a un flora3 neustonic as como el plancton a menudo estn
atrapados en la parte superior o en la pelcula de la superficie junto con el
polen, el polvo y otros detritos. Varios mtodos han sido utilizados para los
organismos de la superficie de muestreo. La frecuencia de muestreo depende
de la intencin del estudio, as como la gama de estacional fluctuaciones, las
condiciones meteorolgicas inmediatas, adecuacin de equipos y la
disponibilidad de personal. Seleccione una frecuencia de muestreo en algn
intervalo ms corto que el volumen de negocios de la comunidad hora. Esto
requiere la consideracin de la longitud del ciclo de vida, la competencia, la
depredacin, rubor, y desplazamiento actual. Muestreo de plancton frecuente
es deseable debido a temporal normal la variabilidad y el carcter migratorio
de la comunidad planctnica. Migraciones verticales diarias ocurren en de
respuesta a la luz solar, y al azar migraciones horizontales o derivas son
producidos por los vientos, cambiando corrientes y mareas. Lo ideal es recoger
muestras diarias y, cuando sea posible, la muestra en diferentes momentos
durante el da y en diferentes profundidades. Cuando esto no es posible,
semanal, quincenal, mensual o incluso el muestreo trimestral todava puede
ser til para determinar cambios importantes de poblacin.
En ro, arroyo, y las regiones de estuarios sometidos a la influencia de las
mareas, de contar con fluctuaciones en composicin plancton durante un ciclo

de marea. Un patrn tpico de muestreo en una estacin dentro de un estuario

incluye una serie vertical de las muestras tomadas de la superficie, a travs de
la pyncocline, hasta cerca abajo, recogi a intervalos de 3 h, durante al menos
dos ciclos de marea completos. Una vez que una caracterstica patrn se
reconoce la rutina de muestreo puede ser modificado.
Una serie til de monografas sobre metodologa oceanogrfica ha sido
published.4-7 Referencias taxonmicas representativos para estuarios y
fitoplancton marino incluyen diatomeas, dinoflagelados 8-11, 12-14, 15 y
cocolitofridos cyanophyceae16 (cianobacterias).
2. Procedimientos de muestreo
Una vez que el muestreo de lugares, profundidades, y la frecuencia se han
determinado, se preparan para el campo de muestreo. Contenedores de
muestras de etiquetas con informacin suficiente para evitar confusin o error.
En el etiqueta indicar la fecha, el nmero de crucero, estacin de muestreo,
zona de estudio (ro, lago, embalse), el tipo de de la muestra, y la profundidad.
Utilice las etiquetas a prueba de agua. Cuando sea posible, incluya recipientes
de recogida en un envase protector para evitar roturas. Si las muestras deben
ser preservados inmediatamente despus coleccin, aadir conservante a un
recipiente antes del muestreo. Tamao de la muestra depende del tipo y
nmero de determinaciones que se har; el nmero de repeticiones depende
de diseo estadstico del estudio y anlisis estadsticos seleccionados para la
interpretacin de datos. Siempre hay que disear un estudio en torno a un
objetivo con un enfoque estadstico en lugar de anlisis estadsticos de ajuste a
los datos ya recogidos.
En un lugar de la muestra cuaderno registro de campo, profundidad, tipo,
tiempo, condiciones meteorolgicas, turbidez, temperatura del agua, salinidad,
y otras observaciones importantes. Campo de Ingeniero cuadernos con papel
resistente al agua son muy adecuados. Los datos de campo son muy valiosos
cuando analtica
Los resultados se interpretan y con frecuencia ayudan a explicar los cambios
inusuales causados por el carcter variable de del medio acutico. Recoger
muestras coincidentes para los anlisis qumicos para ayudar a definir
variaciones ambientales que tienen un efecto potencial sobre el plancton.

a. Fitoplancton: En aguas oligotrficas o donde se espera que las

densidades de fitoplancton ser baja recoger una muestra de hasta 6 L. Para
ms rica, aguas eutrficas recogen una muestra de 0,5 a 1 L.
Debido a su pequeo tamao, nanoplancton y picoplancton pueden pasar a
travs de la coleccin redes, por lo que las redes no aptas para la mayora de
muestreo fitoplancton.

Para las evaluaciones cualitativas y cuantitativas recoger toda el agua (sin

filtrar y sin colar) muestras con una botella de recogida de agua que consiste
en un tubo cilndrico con tapones en cada extremo y un dispositivo de cierre.
Baje el sampler abierto a la profundidad deseada y cerca al dejar caer una
peso, llamado un mensajero, que se desliza por el cable de alambre o de apoyo
y dispara el cierre mecanismo. Si es posible, obtener muestras compuestas de
varias profundidades o muestras de la piscina de un profundidad de varios
moldes. Las muestras ms comnmente utilizadas que operan en este principio
son los (Kemmerer, 17 Van Dorn18 (Figura 10 200: 1), samplers Niskin y
Nansen.)
Debido a que estos dechados recogen muestras de agua enteros, todas las
clases de talla de fitoplancton son recogido. Diferentes categoras de tamao
de fitoplancton se pueden separar mediante el filtrado posteriormente estas
muestras de agua enteros a travs de la compensacin de la luz de malla
apropiada. Seleccione malla apropiada tamaos para concentrar las distintas
categoras de tamao de fitoplancton tpicos del sistema acutico bajo
study.19,20
El Van Dorn generalmente es el sampler preferido para los cultivos, la
productividad primaria de pie, y otras determinaciones cuantitativas, ya que su
diseo ofrece ninguna inhibicin al libre flujo de agua a travs del cilindro. En
situaciones de aguas profundas, se prefiere la botella Niskin. Tiene el mismo
diseo que el muestreador Van Dorn, excepto que el muestreador Niskin se
puede convertir en una serie en una sola lnea de muestreo simultneo en
mltiples profundidades con el uso de mensajeros auxiliares. Porque los
mecanismos de activacin de estas muestras son muy sensibles, evite el
manejo brusco. Siempre menor la toma de muestras en el agua; no lo deje
caer. Kemmerer y Van Dorn samplers tienen capacidades de 0,5L o ms.
Dispositivos de polietileno o cloruro de polivinilo de muestreo son preferibles a
los muestreadores de metal porque este ltimo liberar a los iones metlicos
que puedan contaminar la muestra. Utilice polietileno o botellas de
almacenamiento de muestras de vidrio. Contaminacin de iones metlicos
puede dar lugar a errores significativos cuando las algas se realizan ensayos o
mediciones de productividad.
Para las aguas superficiales utilizar el muestreador Jenkins barro superficie, 21
uno de los muestreadores de botella modificado para que se mantiene en
posicin horizontal, 22 o un sampler.23 bacteriolgica apropiado
Para una mayor velocidad de la recoleccin y de obtener grandes cantidades,
medidos con precisin de organismos, utilice una bomba. El diafragma y
bombas peristlticas son menos perjudiciales para los organismos que
pumps.24 impulsores de la bomba centrfuga centrfugas pueden daar
organismos como lata paso a travsla hose.25 bajar una manguera ponderada,

unido a una bomba de succin, hasta la profundidad deseada, y la bomba de

agua a la superficie. La bomba es ventajoso ya que proporciona una muestra
homognea de una profundidad dada o una muestra integrada desde la
superficie hasta una profundidad particular. Si una bomba centrfuga se utiliza,
extraer muestras de la lnea antes de que alcancen el impulsor. Para las
muestras a analizar para los compuestos organoclorados utilizar tubos TFE.
Para examinar muestras vivas llenan recipientes parcialmente y se guardan en
un refrigerador o hielo en el pecho oscuro, o preferiblemente, mantenga a la
temperatura ambiente. Examine las muestras inmediatamente despus de
coleccin.
Si no es posible examinar material vivo o si el fitoplancton se contarn ms
tarde, preservar la muestra. Para una muestra que se conserva, llenar
completamente el contenedor. El ms fitoplancton conservante adecuado es la
solucin de Lugol, que se puede utilizar para la mayora de formas incluyendo
los flagelados desnudos. Desafortunadamente, la solucin (o formalina) cidos
de Lugol disuelve la cocolitos de cocolitforos, que son comunes en las aguas
estuarinas y marinas.
Solucin de Lugol: Para conservar las muestras con solucin de Lugol aadir la
solucin de 0,3 ml de Lugol 100 ml de muestra y almacenar en la oscuridad.
Para el almacenamiento a largo plazo agregar solucin de 0,7 ml Lugol por 100
ml de muestra y formaldehdo tamponado a un mnimo de concentracin final
2,5% despus de 1 h.
Preparar la solucin de Lugol por disolucin de 20 g de yoduro de potasio (KI) y
10 g de cristales de yodo en 200 ml de agua destilada que contiene 20 ml de
modificacin Utermohl's27 acid.26 actico glacial de Lugol resultados de la
solucin en una solucin neutra o ligeramente alcalino. Preprese modificado
solucin de Lugol por disolviendo 10 g KI y 5 g de cristales de yodo en 20 ml de
agua destilada, a continuacin, la adicin de 50 ml destilada agua en la que 5 g
de acetato de sodio anhidro se ha disuelto. Esto permite preservacin de
Cocolitofridos, pero sera menos eficaz para otros flagelados.
Otros conservantes aceptables son:
Formol: Para preservar muestras con formalina, aadir 40 ml de formalina
tamponada (20 g de sodio borato, Na2B2O4, + 1 L 37% de formaldehdo) a 1 L
de la muestra inmediatamente despus de la recogida. En estuarios y
colecciones marinas, ajustar el pH de al menos 7,5 con borato de sodio para las
muestras contiene cocolitforos.
Merthiolate: Para preservar muestras con mertiolato aaden 36 ml solucin de
mertiolato a 1 l de muestra y tienda en la oscuridad. Prepare la solucin de
mertiolato disolviendo 1,0 g mertiolato, 1,5 g borato de sodio, y una solucin

de 1,0 ml Lugol en 1 L de agua destilada. Muestras Mertiolato-conservado no

son estriles, pero se puede mantener con eficacia para 1 ao, despus de lo
cual formalina tiempo debe ser added.28 '' M3 '' fijador: Preparar disolviendo 5
g de KI, 10 g de yodo, cido actico glacial 50 ml, y 250 ml de formalina en 1 L
de agua destilada (disolver el yoduro en una pequea cantidad de agua para
ayudar en la solucin del yodo). Aadir 20 ml de fijador a 1 l de muestra y
almacenar en la oscuridad.
Glutaraldehdo: Preservar las muestras mediante la adicin de glutaraldehdo
neutralizado para producir una final concentracin de 1 a 2%.
Otros conservantes usados comnmente incluyen 95% de alcohol, y 6-3-1
conservante, (6 partes agua, 3 partes de 95% de alcohol y 1 parte de
formalina). Utilice volmenes iguales de conservante y la muestra.
Para conservar el color en el plancton conservado, almacenar las muestras en
la oscuridad o aadir 1 ml de cobre saturado sulfato (CuSO4) solucin / L.
La mayora de los conservantes distorsionan y perturban ciertas clulas, 29,30
en especial los de formas delicadas tales como Euglena, Cryptomonas, Synura,
Chromulina, y Mallamonas. Solucin de yodo de Lugol por lo general es menos
perjudicial para estos fitoflagelados. Para familiarizarse con especmenes vivos
y distorsiones de conservacin-causado, utilizan coleccin de referencia de las
casas de suministro de biolgicos o consultar los compaeros de trabajo con
experiencia.

b. Zooplancton: La eleccin de sampler depende del tipo del zooplancton, el

tipo de estudio (distribucin, productividad, etc.) y el cuerpo de agua que se
investigaron. El zooplancton poblaciones invariablemente se distribuyen de una
manera irregular, por lo que tanto el muestreo y datos difcil interpretacin.
Para recoger microzooplancton (20 a 200 mm), tales como protozoos, rotferos,
e inmaduros microcrustacea, utilice los muestreadores de botellas descritas
para el fitoplancton. Los pequeos zooplancton por lo general son
suficientemente abundantes para producir muestras adecuadas en 5 a botellas
de 10-L; sin embargo,
Se recomiendan muestras compuestas ms de profundidad y el tiempo.
Muestreadores de botellas de agua son adecuados especialmente para
muestras discretas de profundidad. Si se desean muestras de profundidad
integrado, utilice bombas o redes.
Los microzooplankters ms grandes y robustos (por ejemplo, formas loricate y
crustceos) pueden ser se concentr al pasar todo el agua a travs de una red
de malla 20 mm. Si las estimaciones cuantitativas de otra nonloricate, se

requieren formas delicadas, no la pantalla. Fijar 0,5 a 5 L de agua para toda

enumeracin de estas formas.
Muestreadores Botella generalmente no son adecuados para la recogida de
mayor zooplancton, tales como madura microcrustacea, que, a diferencia de
las formas ms pequeas, son mucho menos numerosos y son lo
suficientemente giles para evitar su captura. Aunque los volmenes de agua
relativamente grandes, y por consiguiente adecuada nmero de
microcrustacea, se pueden degustar con una bomba, evitar por ms grande,
ms gil zooplancton en el cabezal de la bomba pueden causar el error de
muestreo. En consecuencia, ms grandes o muestreadores trampa las redes
son los mtodos de recoleccin preferidos.
El Juday trap31 opera sobre el mismo principio que los muestreadores botella
de agua, pero es generalmente ms grande (10 L). El mayor tamao hace la
trampa Juday ms adecuados para la recogida de zooplancton, coppodos
especialmente grandes. Sin embargo, es incmodo de usar y su capacidad de
10-L es inadecuada para lagos oligotrficos u otros cuerpos de agua con pocas
zooplancton. Debido a que est construida en metal que no es adecuado si se
requieren anlisis de metales pesados.
El trap32 Schindler-Patalas (Figura 10 200: 2) por lo general se prefiere la
trampa Juday porque est construida de plstico acrlico transparente y es
transparente. Se puede bajar en el agua con una perturbacin mnima y es
adecuado para la recogida de zooplancton ms grandes. Modelos de 10 a 12 Lcapacidad estn disponibles, pero se prefiere el tamao 30-L. No tiene ningn
mecanismo de cierre mecnico y por lo tanto es conveniente para el muestreo
de clima fro cuando los dispositivos mecnicos tienden a funcionar mal. Como
la trampa Juday, puede estar equipado con redes de distintos tamaos de
malla, pero se utiliza la red de malla N 20 ms amenudo.
Redes de plancton se prefieren a las botellas y trampas para el muestreo
donde plankters son pocos o donde hace falta un nico datos cualitativos o una
gran biomasa para su anlisis. Debido a que fueron diseados originalmente
para el muestreo cualitativo, se requieren modificaciones para el trabajo
cuantitativo.
El tamao de la malla, tipo de material, tamao del orificio, la longitud, el
mtodo de arrastre, tipo de remolque, y el volumen la muestra depender de
las necesidades particulares de la study.33,34 Tipo de malla y malla de tamao
determinar la eficiencia de la filtracin, las tendencias de obstruccin, la
velocidad, la friccin, y la condicin de la la muestra despus de la recoleccin.
Seda, anteriormente el material de malla comn en redes de plancton, no es
se recomienda debido a la contraccin de las aberturas de la malla y la
podredumbre con la edad. Nylon monofilamento de malla es preferido debido a

su tamao de malla exactitud y durabilidad. Redes de nylon de malla diferente

tamaos todava estn etiquetados por el sistema de calificacin de la seda:
caractersticas del plancton nylon comnmente usado redes se enumeran en la
Tabla 10 200: I. Finer malla tamaos obstruyen con ms facilidad que la malla
ms gruesa; la compromiso debe ser hecha entre tamao de malla lo
suficientemente pequeo como para retener los organismos deseados eficaz y
un tamao lo suficientemente grande como para evitar un problema de
obstruccin grave. Si la obstruccin se produce, reducir sus efectos por la
disminucin de la longitud del remolque.
El volumen mximo, VM, de agua que puede ser filtrada a travs de una red
durante un arrastre vertical, puede ser estimado con la frmula

Dnde:
r = radio del orificio de red y
d = profundidad a la que neta se reduce.
Este volumen es un mximo, ya que la obstruccin de las mallas de la red por
el fitoplancton y otros partculas y, por fina malla, incluso la propia red puede
causar un poco de agua que se desva de la path.35,36 de red Mantenga
distancia neta de remolque tan corto como sea posible para aliviar la
obstruccin. Si la red tiene color verde o marrn pronunciada despus de
remolque, obstruccin probablemente ha ocurrido.
Para estimar el volumen de muestreo, VA, un montaje de la mitad del medidor
de flujo calibrado entre la red llantas y centro de la boca (el medidor se monta
fuera del centro para evitar la reduccin de flujo asociado con la brida de
remolque) 0.37 Equipo metros con mecanismos de bloqueo para evitar que se
convierta en reversa o mientras en aire. Lecturas del medidor de flujo de
registro antes y despus de recoger la muestra. calcular la filtracin eficiencia,
E, a partir de:

Si E es menor que aproximadamente 0,8, se ha producido la obstruccin

sustancial. Tomar medidas para incrementar la eficiencia.
Obstruccin no slo disminuye el volumen filtrado, sino que tambin conduce a
muestras parcial porque eficiencia de filtracin no es uniforme durante el
tow.34

Varios tipos de redes de plancton se muestran en la Figura 10 200: 3. Redes

cnicas simples han sido utilizado durante muchos aos con pocas
modificaciones en el diseo o mejora en la precisin. Su mayorfuente de error
es que las caractersticas de filtracin de redes cnicas por lo general son
desconocidos. Filtracin la eficiencia en el nmero 20 redes de cono de malla
oscila entre 40 y 77%. Para mejorar la eficiencia, coloque una collar de cilindro
poroso o no poroso en tronco de cono frontal de la parte cnica de la red. Los
Neto Juday ejemplifica una red de uso general con un cono truncado. Para una
buena filtracin caractersticas la relacin del rea de filtrado de red para el
rea del orificio debe ser de al menos 3: 1. Cabezadas fijacin de la red a la
lnea de remolque tambin influya adversamente en la eficiencia de filtracin y
el aumento turbulencia en frente de la red, aumentando as el potencial para la
evitacin neta por mayor zooplancton. El tndem, diseo neta Bongo (Figura 10
200: 3) reduce estas influencias y permisos duplican muestras que deben
recogerse de forma simultnea.
Se utilizan tres tipos de remolques: vertical, horizontal y oblicua. Estopas
verticales se preferan obtener una muestra de la columna de agua integrado.
Para hacer un remolque vertical, baje la red lastrada a un dada la profundidad,
luego subir verticalmente a una velocidad constante de 0,5 m / s.
En los cuerpos de agua pequeos transportar la mano neta sobre la mano con
un movimiento pausado constante la aproximacin de la velocidad de 0,5 m /
s. En grandes cuerpos donde lances netas largas y deriva recipiente son era de
esperar, utilizar un pescante, rueda de metro, indicador de ngulo, y el
cabrestante. Adjuntar un 3 a 5 kg de peso para sostener el down red.
Determinar la profundidad de la red multiplicando la longitud del alambre
extendido por el coseno del ngulo del cable con la direccin vertical. Mantener
ngulo del cable lo ms cerca a la vertical como sea posible mediante el
control de la velocidad nula del barco contra la deriva del viento, o siempre que
sea posible, hacer lances verticales desde un barco anclado.
Vertical y arrastres oblicuos recogen una muestra compuesta, mientras que los
arrastres horizontales Recolecta muestra a una profundidad discreto. Arrastres
oblicuos generalmente son preferibles a los arrastres verticales en aguas poco
profundas o donde se requiere un remolque neta larga. Para arrastres oblicuos,
bajar por la red o muestreador hasta cierto predeterminado de profundidad y
luego subir a un ritmo constante a medida que el barco se mueve hacia
adelante. Arrastres oblicuos hacer no necesariamente muestrear un ngulo
verdadero de la parte inferior a la superficie. Bajo las condiciones de la mejores
patrn es algo sigmoide debido a la aceleracin barco y holgura en la lnea de
remolque.
Arrastres horizontales generalmente se utilizan para obtener informacin
detallada sobre la distribucin del zooplancton.

Aunque una variedad de muestras horizontales est disponible (ver la figura

10200: 4), utilice el
Clarke-Bumpus sampler38 para la recoleccin cuantitativa de zooplancton
debido a su base de medidor de flujo y dispositivo de apertura-cierre. Para
arrastres horizontales utilizan un barco equipado como anteriormente y
determinar la profundidad de muestras como anteriormente. Baja muestreador
hasta la profundidad preseleccionada, abierto, remolque a esa profundidad
durante 5 a 10 minutos, a continuacin, cierre y elevarla.
Una variedad de mtodos de muestreo de zooplancton se puede utilizar en el
agua que fluye. El mtodo de la eleccin depende en gran medida de la
velocidad del flujo. Correctamente ponderada botellas, las trampas y las
mangueras de la bomba, y las redes se pueden utilizar en medio y lento-que
fluye aguas. En turbulentas aguas, bien mezclados, recoger las aguas
superficiales por cubo y filtrarla a travs de la luz de malla apropiada.
Seleccione el tamao de la muestra basada en la concentracin de
zooplancton.
Dar redes de plancton cuidado y mantenimiento. No deje que partculas de
materia seca en la red ya que puede reducir significativamente el tamao de
aberturas de malla y aumentar la frecuencia de obstruccin.
Lave neta a fondo con agua despus de cada uso. Limpie peridicamente con
una solucin jabonosa tibia.
Debido a que el material red de nylon es susceptible al deterioro de la abrasin
y la luz del sol, guardia contra el desgaste innecesario y tienda en la oscuridad.
Trampas y redes no funcionan bien en reas de poca profundidad con
crecimientos de vegetacin acutica. A obtener una muestra integrada de la
columna de agua todo en esas zonas, utilice una longitud de peso ligero
caucho o tubo de polietileno con malla de red sujetada sobre un extremo y una
cuerda en el other.39
Fije la compensacin por cintas o bandas de goma que se quedarn en el lugar
en el agua, pero se puede quitar fcilmente despus del muestreo. Utilice
tubos de 5 a 10 cm de dimetro y el tiempo suficiente para llegar desde la
superficie hasta el fondo. Baje el extremo abierto (el extremo con la cuerda
adjunta) hasta que casi toque el fondo.
A continuacin, tire este fin utilizando la cuerda y mantener el extremo
cubierto por encima de la superficie del agua. Cuando el extremo abierto est
fuera del agua, deje que el extremo con la red volver a caer en el agua, tire de
la tubera en el barco, extremo abierto primero, y dejar que el agua en el tubo
de drenaje a travs de la red. Cuando el zooplancton se ha concentrado en un

pequeo volumen, justo por encima de la red, retirar la malla sobre un

recipiente y coger la muestra concentrada. Lavar la compensacin y al final de
la tubera en el contenedor para asegurar que todo el zooplancton se recoge.
Este mtodo no se limita a las zonas con vegetacin acutica. Proporciona un
excelente mtodo de obtencin de una muestra integrada de cualquier zona
poco profunda. En las aguas de pie, recoger muestras de remolque mediante el
filtrado de 1 a 5 m3 de agua.
Preservar muestras de zooplancton con etanol al 70% o 5% de formalina
tamponada. Etanol conservante se prefiere para los materiales que se tien en
montajes permanentes o almacenados. La formalina podr ser utilizado para la
primera 48 h de conservacin con la subsiguiente transferencia a etanol al
70%. Formol conservante puede provocar una distorsin de las formas
pleomrficas como protozoos y rotferos. Hacer de formalina en agua saturada
de sacarosa para minimizar la distorsin de caparazn y la prdida de huevos
en crustceos, especialmente cladocerans.40 fijador de Bouin produce
resultados razonables para microzooplankton.41 de cuerpo blando Este fijador
es cido pcrico saturado en calcio carbonato-formaldehdo tamponado que
contiene 5% (v / v) de cido actico. Diluir Bouin del fijador uno y diecinueve
con la muestra. Debido a la fijacin rpida es necesario, verter la muestra
sobre el fijador o inyectar fijador rpidamente en la muestra.
Use un agente de narcotizante como agua carbonatada, agua mentol-saturado,
o neosinefrina para prevenir o reducir la contraccin o la distorsin de los
organismos, en particular rotferos, cladceros, y muchos invertebrates.42,43
marina Aadir unas gotas de detergente evita la formacin de grumos de
conserva organismos. Preservar las muestras tan pronto como la mayor
movimiento de los animales ha cesado, por lo general dentro de un medio hora
de narcotizacin. Para evitar la evaporacin, aadir 5% de glicerina a la
muestra concentrada. En muestras turbias, se diferencian de los animales y
material detrtico mediante la adicin de 0,04% de rosa de bengala mancha,
que tie intensamente el caparazn (concha) de zooplancton y es una buena
citoplasmtica generales mancha

10200 H. Clorofila
Concentraciones de pigmentos fotosintticos son ampliamente utilizadas para
estimar la biomasa de fitoplancton. Todas las plantas verdes contienen clorofila
a, que constituye aproximadamente el 1 a 2% del peso seco de las algas
planctnicas. Otros pigmentos presentes en el fitoplancton incluyen a las
clorofilas b y c, xantofilas, ficobilinas y carotenos. Los productos importantes de
degradacin de la clorofila que se encuentran en el medio ambiente acutico
son clorofilidos, feoforbidos y feofitinas. Se utiliza la presencia o ausencia de
diversos pigmentos fotosintticos, entre otras caractersticas, para identificar
los principales grupos de algas.

Los tres mtodos para determinar la clorofila a en el fitoplancton son: el

espectrofotomtrico, el fluoromtrico, y la cromatogrficas liquida de alta
resolucin (HPLC). La Fluorometra es ms sensible que la espectrofotometra,
requiere menos de la muestra, y se puede utilizar para mediciones in-vivo.
Estos mtodos pticos pueden significativamente sub o sobreestimar las
concentraciones de clorofila a, debido en parte a la superposicin de las
bandas de absorcin y de fluorescencia de pigmentos accesorios coexistentes y
productos de degradacin de la clorofila.
Feofrbido a y feofitina a, dos productos frecuentes procedentes de la
degradacin de la clorofila a, pueden interferir con la determinacin de la
clorofila a, ya que absorben la luz y producen fluorescencia en la misma regin
del espectro que la clorofila a. Si estos feopigmentos estn presentes,
resultaran errores significativos en los valores de clorofila a. Los feopigmentos
se pueden medir ya sea a travs espectrofotometra o fluorimetra, pero en
ambientes marinos y de agua dulce el mtodo fluoromtrico no es fiable
cuando aparece la clorofila b simultneamente, a menos que se utiliza un
mtodo sin acidificacin (mtodo EPA 445.0). En la acidificacin de la clorofila
b, la emisin de fluorescencia resultante de feofitina b, coincidente con la de la
feofitina a, causando una subestimacin y la sobreestimacin de la clorofila A y
feopigmentos, respectivamente. El mtodo sin acidificacin tiene las siguientes
ventajas: datos de clorofila ms precisos, menos mano de obra intensiva,
menos recursos necesarios, y es muy sensibles.
HPLC es un mtodo til para la cuantificacin de los pigmentos fotosintticos,
incluyendo clorofila a, pigmentos accesorios (por ejemplo, clorofilas b y c), y
productos de degradacin de la clorofila (clorofilidos, feoforbidos y feofitina). La
distribucin del pigmento es til para la evaluacin cuantitativa de la
composicin de la comunidad de fitoplancton y actividad de alimentaria del
zooplancton.

1. Pigmento Extraccin
Filtros de fibra de vidrio son los preferidos para extraer las algas del agua. Las
fibras de vidrio ayudan a romper las clulas durante la molienda, grandes
volmenes de agua se pueden filtrar, y no se forma un precipitado despus de
la acidificacin. Filtros de membrana inertes, tales como filtros de polister, se
pueden utilizar cuando estos factores son irrelevantes. Filtros tomadas de agua
con pH superior a 6 pueden ser colocados en bolsas de plstico
hermticamente cerrados y almacenados congelados durante 28 das. Las
muestras de agua naturalmente cida con un pH de menos de 6 se deben
procesar prontitud despus de la filtracin para evitar la posible degradacin
de la clorofila de agua cida residual en el filtro. (Agua naturalmente cida

tiene un pH inferior a 6 debido al cido hmico o al contenido de las clulas

senescentes, no preservadas.)
La clorofila se puede extraer de clulas, recogidas tpicamente en un filtro, con
varios disolventes (por ejemplo, acetona, etanol y metanol). El procedimiento
descrito aqu utiliza acetona. Llevar a cabo este procedimiento con extractos
de clorofila en la luz tenue para evitar la degradacin. Utilice recipientes
opacos o envolver con papel de aluminio. Los pigmentos se extraen del
concentrado de plancton con acetona acuosa y la absorbancia del extracto
(densidad ptica) se determina mediante un espectrofotmetro. La facilidad
con que las clorofilas se retiran de las clulas vara considerablemente con
diferentes algas. Para extraer completamente pigmentos consistentemente,
romper las clulas mecnicamente con un triturador de tejidos.
a. Equipo y reactivos:
1) Triturador de tejidos: * # (2) puede ser difcil el amacerar con xito los filtros
de fibra de vidrio en morteros de forma cnica para tejidos, con mano de vidrio.
Es preferible emplear tubos de fondo redondo con mano mano de mortero
coincidente con ranuras en la punta TFE.
2) Equipo centrfuga.
3) Tubos centrfuga graduados de 15 ml, con tapn de rosca.
4) Equipo para la filtracin, los filtros de fibra de vidrio, # (3) o membrana
(0,45 mm de porosidad, 47-mm diam); bomba de vaco ;conjunto de filtro
resistente a los disolventes (por ejemplo, un aparato de soporte del filtro
completamente de vidrio que se puede limpiar con agua y disolventes
orgnicos), 1,0 um de tamao de poro resistentes al disolvente de 10 ml
jeringa.
5) Una solucin Saturada de carbonato de magnesio: Aadir 1,0 g MgCO3
finamente en polvo a 100 ml agua destilada.
6) solucin acuosa de acetona: Mezclar 90 partes de acetona (reactivo de
grado BP 56 C) con 10 partes solucin saturada de carbonato de magnesio.
Para el anlisis de HPLC pigmento, mezclar 90 partes de grado HPLC acetona
con 10 partes de agua destilada.
b. Procedimiento de extraccin:
1) Concentrar la muestra por centrifugacin o filtracin tan pronto como sea
posible despus de la obtencin. Si procesamiento debe ser retrasado,
mantenga muestras en hielo o a 4 C y proteger de la exposicin a la luz.

Utilice botellas opacas porque incluso una breve exposicin a la luz durante el
almacenamiento alterar los valores de clorofila.
Enjuague recipiente de almacenamiento de la muestra con aproximadamente
20 ml agua de laboratorio libre de organismos (cual tambin es pasado a
travs del mismo filtro de muestra para asegurarse de que todas las clulas se
recogen).
Utilice cristalera y cubetas que son limpios y libres de cido. Aadir unos 2 ml
de solucin de MgCO3 a la muestra justo antes de que se complete el proceso
de filtrado. La solucin MgCO3 acta como un tampn de pH para conservar la
clorofila de degradantes.
2) Colocar la muestra en un triturador de tejidos, cubrir con 2 a 3 ml de la
solucin de acetona acuosa al 90% y macerar a 500 rpm durante 1 min. Utilice
amoladora de TFE / vidrio para un filtro de fibra de vidrio y amoladora vidrio /
vidrio por un filtro de membrana.
3) Transfiera la muestra a un tubo de centrfuga con tapn de rosca, enjuague
la amoladora con unos pocos mililitros de acetona acuosa al 90%, y aadir el
enjuague a la suspensin de extraccin. Ajustar volumen total de 10 ml, con
acetona acuosa al 90% (tcnicas adicionales se utilizan para el anlisis HPLC,
ver 10200H.4). Utilice solvente con moderacin y evitar la dilucin excesiva de
pigmentos. Muestras escarpadas mantngase al menos 2 horas a 4 C en la
oscuridad. Filtros de fibra de vidrio de 25 y 47-mm de dimetro (Whatman GF / F, o equivalente) tienen volmenes de desplazamiento secas de 0.03 y 0.10
ml, respectivamente, e introducen errores de alrededor de 0,3 y 1,0% si se
utiliza un volumen de extraccin 10-mL.
4) Aclarar filtrando a travs de un filtro desechable resistente a los disolventes
[por ejemplo, un um PTFE 13 mm filtro de jeringa de 0,45um (para minimizar la
retencin de extracto en el filtro y soporte de filtro, hgase pasar de 1 a 2 ml
de aire a travs del filtro despus de que el extracto)] o por centrifugacin en
tubos cerrados durante 20 min a 500 g o 3.000 rpm [g = (0.00001118r) (rpm),
donde r = radio centrifuge's]. Decantar el extracto claro en un tubo centrfuga
limpio calibrado de 15 ml, con tapn de rosca y medir volumen total. Proceda
como en 10200H. 2, 3, 4, o 5 a continuacin.

2. Determinacin espectrofotomtrica de Clorofila

a. Equipo y reactivos:
1) Espectrofotmetro, con una banda (paso) de amplitud reducida (0,5 a 2.0
nm) debido a que la pico de absorcin de la clorofila es relativamente
estrecha. En un ancho de banda espectral de 20 nm de la concentracin de
clorofila (a) puede ser subestimado hasta en un 40%.
2) Cubetas, con 1, 4, y 10 cm de longitudes de trayecto.
3) Pipetas, de 0,1 y 5,0 ml.
4) El cido clorhdrico, HCl, 0,1N.

b. Determinacin de clorofila (a) en presencia de un feofitina (a):

La clorofila a puede ser sobreestimado incluyendo feopigmentos que absorben
cerca de la misma longitud de onda que la clorofila a. La adicin de cido a la
clorofila a resulta en la prdida del tomo de magnesio, y su conversin a
feofitina a. Acidifquese cuidadosamente a una molaridad final de no ms de 3
10-3 M para prevenir ciertos pigmentos secundarios cambien su absorbancia
en la misma longitud de onda que la feofitina a. Cuando una solucin de
clorofila a pura se convierte a feofitina a por acidificacin, la relacin del pico
de absorcin (absorbancia 664 / absorbancia 665) de 1,70 se utiliza para
corregir la concentracin aparente de la clorofila a para feofitina (a).
Las muestras con una relacin (absorbancia 664 antes / absorbancia 665
despus de la acidificacin), (664b / 665a) de 1.70, se considera que no
contienen feofitina a y estan en excelente estado fisiolgico. Las soluciones de
feofitina pura no muestran muestran ninguna reduccin en la absorbancia 665
tras la acidificacin y tienen una relacin 664b / 665A de 1,0. Por lo tanto, las
mezclas de clorofila a y feofitina a tienen relaciones del pico de absorcin
que oscilan entre 1,0 y 1,7. Estas relaciones se basan en el uso de 90% de
acetona como disolvente. El uso de 100% de acetona como disolvente se
obtiene una relacin de clorofila a antes-a-despus de la acidificacin de
aproximadamente 2,0.
Espectrofotomtrico procedimiento de transferencia de 3 ml de extracto
clarificado a una cubeta de 1 cm y lase la absorbancia a 750 y 664 nm. Se
acidifica el extracto en la cubeta con 0,1 ml de HCl 0,1N. Agitar suavemente el
extracto acidificado y, 90 segundos
despus de la acidificacin, lee la
absorbancia a 750 y 665 nm. Los volmenes de extracto y el cido y el tiempo

despus de la acidificacin son crticos para obtener resultados precisos y

consistentes.
La absorbancia 664 antes de la acidificacin debe estar entre 0,1 y 1,0. Por
extractos muy diluidas emplease cubetas con un recorrido ms largo. Si celda
ms grande aadir un volumen proporcionalmente mayor de cido. Corrjase la
absorbancia obtenida con cubetas ms grandes a 1 cm antes de hacer
clculos.
Reste el valor de absorbancia de 750 nm de las lecturas hechas antes
(absorbancia 664 nm) y despus de la acidificacin (absorbancia 665 nm).
Usando los valores corregidos calclese la clorofila (a) y feofitina (a) por metro
cbico de la siguiente manera:

Dnde:
V1 = volumen de extracto, L,
V2 = volumen de la muestra, m3,
L = longitud de recorrido de la luz o la anchura de la cubeta, cm, y
664b, 665A = densidad ptica del extracto de acetona 90% antes y despus de
la acidificacin, respectivamente.
El valor de 26,7 es la correccin de absorcin y es igual a A K
Dnde:
A = coeficiente de absorbancia para la clorofila A en 664 nm = 11,0, y
K = relacin expresar correccin para la acidificacin.

c. Determinacin de la clorofila a, b, y c (mtodo tricromtica):

Procedimiento espectrofotomtrico: trasferir el extracto a una cubeta de 1 cm y
medir la absorbancia a 750, 664, 647 y 630 nm. Elige una longitud de
trayectoria o dilucin para dar OD664 entre 0,1 y 1,0.
Use las lecturas de absorbancias a 664, 647, y 630 nm para determinar la
clorofila a, b, y C, respectivamente. La lectura de absorbancia a 750 nm es una
correccin para la turbidez. Restar esta lectura de cada uno de los valores de
absorbancia del pigmento de las otras longitudes de onda antes de usarlos en
las ecuaciones de abajo. Debido a que la absorbancia del extracto a 750 nm es
muy sensible a los cambios en las proporciones acetona-agua, sgase
estrictamente la formula de 90 partes de acetona por 10 partes de agua (v / v)
para la extraccin de pigmentos. La turbidez se puede retirar fcilmente
mediante filtracin a travs de un filtro desechable, resistente a los
disolventes, fijado a una jeringa o por centrifugacin durante 20 min a 500 g.
Calcular las concentraciones de clorofila a, b, y c en el extracto mediante la
insercin de las densidades pticas corregido en las ecuaciones siguientes:
a) Ca = 11,85 (OD664) - 1.54 (OD647) - 0.08 (OD630)
b) Cb = 21,03 (OD647) - 5.43 (OD664) - 2.66 (OD630)
c) Cc = 24,52 (OD630) - 7.60 (OD647) - 1.67 (OD664)
Dnde:
Ca, Cb, y Cc = concentraciones de clorofila a, b, y C, respectivamente, mg / L, y
OD664, OD647, y OD630 densidad ptica corregida (con una trayectoria de luz
de 1 cm) en la respectiva longitudes de onda.

Despus de determinar la concentracin de pigmento en el extracto, el clculo

de la cantidad de pigmentar por unidad de volumen de la siguiente manera:

3. Determinacin de la clorofila fluoromtrico

El mtodo fluoromtrico para la clorofila a es ms sensible que el
espectrofotomtrico mtodo y muestras as ms pequeos pueden ser
utilizados. Calibrar el fluormetro espectrofotometra con una muestra de la
misma fuente para lograr resultados aceptables. Sensibilidad ptima para
clorofila a mediciones de extracto se obtiene a una longitud de onda de
excitacin de 430 nm y una longitud de onda de emisin de 663 nm. Un
mtodo para la medicin continua de la clorofila in vivo una est disponible,
pero se informa que es menos eficiente que el mtodo in vitro dan aqu, dando
sobre una dcima parte tanto de fluorescencia por unidad de peso que la
misma cantidad de solucin. feofitina un fluorometrically.24 tambin se puede
determinar
a. Equipo y reactivos:
Adems de los enumerados en 1a y 2a ms arriba:
Fluormetro, i # (6) equipado con un F4T.5 lmpara azul de alta intensidad,
tubo fotomultiplicador
R-446 (rojo y minsculas), correderas orificios de ventana 1 , 3 , 10 y 30
, y filtros para la emisin de luz (CS-2-64) y excitacin (CS-5-60). Una puerta
de alta sensibilidad es preferible.
b. Procedimiento de extraccin:
Prepare la muestra como se indica en 1b arriba.
1) Calibrar fluormetro con una solucin de clorofila de concentracin conocida
como sigue:
Preparar el extracto de clorofila y analizar espectrofotomtricamente. Preparar
diluciones seriadas de la extraer para proporcionar concentraciones de
aproximadamente 2, 6, 20, y 60 mg de clorofila a / L. Hacer lecturas
fluoromtricas para cada solucin en cada ajuste de sensibilidad (correderas
ventana orificio): 1 , 3 , 10 y 30 . Utilizando los valores obtenidos,

obtener los factores de calibracin para convertir fluoromtrico lecturas en

cada nivel de sensibilidad a las concentraciones de clorofila a, como sigue:

Dnde:
Fs = factor de calibracin para ajuste de sensibilidad S,
Rs = fluormetro lectura para establecer S sensibilidad y,
C a = concentracin de clorofila a espectrofotometra determinado, mg / L.
2) la fluorescencia de la muestra Medir en los ajustes de sensibilidad que
proporcionar una lectura de gama media.
(Evite el uso de la ventana 1 debido a los efectos de temple.) Convertir
lecturas de fluorescencia de concentraciones de clorofila a por multiplicar las
lecturas por el factor de calibracin adecuada.
c. Determinacin de la clorofila A en la presencia de un feofitina: Este mtodo
es normalmente no aplicable al agua dulce muestras. Vase la discusin en la
Seccin 10200H y 2b arriba.
1) El equipo y reactivos-Adems de los enumerados en 1a y 2a arriba, pura
clorofila a ## (7) (o un extracto de la clorofila plancton con una
espectrofotomtrico antes y despus relacin de la acidificacin de los 1,70
que no contiene clorofila b).
2) Fluorometric fluormetro procedimiento de calibracin como se indica en
3b1). Determinar extracto fluorescencia a cada ajuste antes y despus
acifidication sensibilidad. Calcular los factores de calibracin
(Fs) y antes y despus de la relacin de fluorescencia de la acidificacin
dividiendo la lectura de fluorescencia obtenido antes de la acidificacin por la
lectura obtenida despus de la acidificacin. Evite lecturas en la 1 escala y
los que estn fuera del rango de 20 a 80 unidades fluoromtricas.
3) Clculos-Determinar la '' corregido '' clorofila ay feofitina una en la muestra
extractos con las siguientes ecuaciones:

Dnde:
Fs = factor de conversin para ajustar la sensibilidad S (ver 2b, arriba),
Rb = fluorescencia del extracto antes de la acidificacin,
Ra = fluorescencia del extracto despus de la acidificacin,
r = Rb / Ra, determinado con la clorofila pura una para el instrumento (vuelve a
determinar r
y Fs si se cambian los filtros o fuente de luz),
Ve = volumen de extracto, y
Vs = volumen de la muestra.
d. La extraccin de agua de todo, las muestras no filtradas: Por otra parte, para
evitar la lisis celular durante filtracin, extraer la muestra toda el agua.
1) El equipo y reactivos Fluormetro equipado con un R928 de alta sensibilidad
fototubo ** # (8) con la impedancia de salida de 36 mA / W a 675 nm y una
puerta de alta sensibilidad. Lugar
Filtro de densidad neutra (40-60N) en la trayectoria de la luz trasera, # (9)
seleccionado para permitir reactivo de supresin de la escala de sensibilidad
ms alta.
2) Extraccin procedimiento Decantar 1,5 ml de muestra en el tubo de ensayo
con tapn de rosca y aadir 8,5 ml 100% de acetona. Mezclar con vrtex y
mantener en la oscuridad durante 6 horas a temperatura ambiente. Filtro a
travs del filtro de fibra de vidrio # (10) o centrfuga. Medir la fluorescencia
como se describe en la Seccin 10200H.3 y las concentraciones de estimacin
como en 3c . Debido a que las sustancias hmicas interfieren, si estn
presente filtro de una porcin de la muestra (vase la Seccin 10200H.1b) y
filtrado de proceso con la muestra.
Restar filtrado (en blanco) de fluorescencia de la de la muestra.

DICCIONARIO
cidos hmicos: son unos de los principales componentes de las sustancias hmicas, las cuales son
los constituyentes principales del humus, materia orgnica del suelo. Contribuyen a la calidad fsicoqumicas del mismo y tambin son precursores de combustibles fsiles.
Las sustancias hmicas son una parte importante de materia oscura del humus y consisten en mezclas
heterogneas de molculas de pequeo tamao que se forman a partir de la transformacin biolgica de
clulas muertas y se asocian mutuamente en estructuras supramoleculares, que pueden separarse en
sus componentes de menor tamao por fraccionamiento qumico. Las molculas hmicas se asocian
entre ellas en conformaciones supramoleculares mediante interacciones hidrofobicas dbiles a pH
alcalino o neutro y tambin mediante puentes de hidrgeno a pH bajos.

Senescencia celular: es el proceso iniciado como respuesta al estrs y dao ocurrido en una clula, y
constituye una ruta alternativa de respuesta a la muerte celular programada y es de vital importancia
para suprimir la formacin de clulas cancergenas. Tambin est asociada a la reparacin de tejidos e
inflamacin de los mismos, procesos asociados al crecimiento de tumores. De esta manera, la
senescencia celular est asociada a los procesos de supresin y promocin de tumores
simultneamente, al igual que en el envejecimiento y reparacin de tejidos, roles que son
diametralmente opuestos.
A pero de seguir el comportamiento in vitro, este proceso podra considerarse un ejemplo
de pleiotropa antagonstica, donde un gen puede tener un impacto de adaptacin positivo en algunos
rasgos y simultneamente un impacto negativo sobre otros.