Manual de Bacter

M.
en A Olga Gonzlez Rangel
Jessica Janette Saucedo Maltos 247464

2014
0
INDICE
Prctica No. 1 NALISIS DE CEPAS DE REFERENCIA RELACIONADAS A
INFECCIONES DEL TRACTO GASTROINTESTINAL
Prctica No. 2 COPROCULTIVO
INFECCIONES DEL TRACTO URINARIO
Prctica No. 4 UROCULTIVO
Prctica No. 5 NALISIS DE CEPAS DE REFERENCIA REALCIONADAS A
INFECCIONES DEL TRACTO GENITAL Y DIAGNSTICO DE INFECCIONES DE
TRANSMISIN SEXUAL
INFECCIONES DEL TRACTO RESPIRATORIO
Prctica No. 7 DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE INFECCIONES DE VAS
RESPIRATORIAS ALTAS: FARINGE, NASOFARINGE, CONJUNTIVA Y ODOS
Prctica No. 8 DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE INFECCIONES DE VAS
RESPIRATORIAS BAJAS: DIAGNSTICO DE TUBERCULOSIS
INFECCIONES DE LA PIEL Y DE CEPA DE REFERENCIA RELACIONADA A
SEPTICEMIA
Prctica No. 10 DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE INFECCIONES
EN HERIDAS
Prctica No. 11 HEMOCULTIVO
Control de calidad en el laboratorio de microbiologa
Enfermedades nosocomiales
Anexos
NOM 045 SSA2 2005
Gua Prctica Prevencin de Enfermedades Nosocomiales OMS
M en A. Olga Gonzlez Rangel
PRCTICA 1
ENFERMEDADES DEL APARATO GASTROINTESTINAL
Jessica Saucedo, Marcela Salazar y Guadalupe Santos. |

2
RESUMEN
En est practica se nos proporcionaron cepas de referencia de bacilos Gram negativos,
(Salmonella enteritidis, Salmonella typhi, Shigella sonnei, Yersinia enterocolitica y Vibrio
cholerae), las cuales se sembraron en distintos agares como se relata en la metodologa, los
agares que se utilizaron fueron Mac Conkey, XLD, SS, SB, TCBS.
En cada agar se observ la morfologa macroscpica, luego se procedi a realizar la tincin de
Gram de cada uno de los microorganismos y por ultimo las pruebs bioquimicas, todo est con
el fin de observar las caratersticas propias de cada bacteria.
INTRODUCCIN
Salmonella enteritidis, se puede encontrar dentro de huevos en apariencia normales, pero
que si se comen crudos o insuficientemente cocidos, pueden causar enfermedad. Los
consumidores deben estar al tanto de la enfermedad y conocer las medidas para minimizar el
riesgo. Varias cepas de Salmonella habitan el intestino de animales y aves y son transmitidas a
los humanos por alimentos de origen animal.
La contaminacin del huevo con deposiciones de la gallina y/o la rotura facilita la infeccin.
Este mecanismo en otros pases se ha controlado casi totalmente por medio de la inspeccin
cuidadosa de los huevos y tcnicas de aseo.
Esta bacteria tambin se puede encontrar en las heces de animales domsticos. La mayora de
las personas infectadas desarollan diarrea, fiebre y calambres abdominales.
Los ancianos, bebs y personas inmunodeprimidas son ms propensas a tener una
enfermedad ms severa.
La fiebre tifoidea es una infeccin bacteriana caracterizada por diarrea, enfermedad sistmica
y erupcin cutnea, causada por la bacteria Salmonella typhi.
La Salmonella typhi se propaga por alimentos, agua y bebidas contaminadas, despus de su
ingestin, la bacteria se propaga desde el intestino hasta los ganglios linfticos del intestino,
hgado y bazo por la sangre donde se multiplica, puede extenderse a todo el cuerpo por el
torrente sanguneo.
Los sntomas iniciales son fiebre, malestar general y dolor abdominal, a medida que avanza la
enfermedad la fiebre aumenta y la diarrea se hace ms frecuente. Commente aparece una
erupcin ctanea caracterstica de la tifoidea llamada mancha rosa. No siempre ocurre la
diarrea, pero generalmente hay ulceracin. S. typhi se multiplica en el epitelio de la
submucosa, despus de lo cual entra el torrente circulatorio y se disemina por el cuerpo. La
multiplicacin ocurre otra vez en el bazo y en el hgado, para que despus la bacteria sea
liberada en grandes cantidades al torrente sanguneo. Esta septicemia o invasin generalizada
puede confirmarse por el cultivo de la bacteria de la sangre, lo cual refleja una bacteremia.
Este estadio de la infeccin, que puede durar 2 a 3 semanas, se caracteriza por una tos seca,
fiebre alta, e intenso dolor de cabeza. La fiebre puede ser cclica, es decir, la temperatura
puede incrementarse por las tardes, acompaada de escalofros, convulsiones y delirio. De
hecho, el nombre de la enfermedad proviene del griego typhus, o "neblina o humo", que
probablemente se us para describir enfermedades febriles que causan alteraciones mentales.
Desenlaces fatales por tifoidea ocurren primordialmente por la ruptura de bazo, ocurriendo un
choque sptico ocasionado por el LPS, que estimula la liberacin de agentes mediadores de la
respuesta inmune como las citocinas. Alternativamente, el 10% de los individuos afectados
pueden desarrollar el sndrome de portador sano, excretando continuamente las bacterias del
bazo. La hepatitis por S. typhi ha sido documentada.El estudio de los mecanismos por los
cuales una bacteria como Salmonella typhi puede causar la fiebre tifoidea en el humano,
implica comprender cmo este patgeno invade las clulas, se multiplica y evade la respuesta
inmune en el hospedante y, a su vez, cmo el humano responde a esta infeccin.. Todo ello,
no slo provee informacin bsica sobre procesos biolgicos fundamentales a nivel molecular
y celular, sino que puede aportar herramientas para el diseo de mejores mtodos de
diagnstico y prevencin de esta y otras enfermedades de origen bacteriano.
Caractersticas morfolgicas y bioqumicas del gnero Salmonella

Mviles por flagelos petitricos
No capsulados
Lactosa Agar Mac Conkey
Agar BS crecimiento diferencial entre S.typhi (crece) y S. enteritidis.
Manitol +
Shigella sonnei, conocida como Shigella del Grupo D, ocasiona infecciones que pueden
contraerse por comer alimentos contaminados con aspecto y olor normales. La shigelosis es
una enfermedad infecciosa ocasionada por Shigella.
La mayoria de las personas infectadas, contraen diarrea, fiebre y calambres estomacales
apartir de un dia o dos despus de su exposicin a la bacteria. La diarrea es a menudo
sanguinolenta. Shigella alcanza la submucosa del colon y es capaz de ulcerar esos tejidos, pero
slo produce bacteriemia en casos absolutamente excepcionales. Sin embargo, al causar
afectacin colnica provoca una reaccin inflamatoria intensa con moco y pus, pudiendo
formarse lceras sangrantes Los brotes de shigelosis estn asociados con condiciones
sanitarias deficientes, agua y alimentos contaminados, al igual que condiciones de vida en
hacinamiento.
Un pequeo [inculo] (10 a 200 microorganismos) es suficiente para causar la infeccin.
El periodo de incubacin es de 12 h hasta 6 das, normalmente entre 2 y 4 das.
Caractersticas morfolgicas y bioqumicas del gnero Shigella
Bacilos Gram
No utilizan lactosa Mac Conkey
No producen cido
Inmviles
No esporulados
Utilizan Manitol y Ornitina
La bacteria Yersinia causa la Yersiniosis, que es una infeccin que se contrae a travs del
consumo de productos de carne poco cocinados, agua contaminada o leche no
pasteurizada. Los sntomas incluyen fiebre, dolor del estmago y diarrea sangrienta.
Las Yersinias son bacilos del tipo gramnegativos aerobios y anaerobios facultativos;
son mtiles a 22C, pero no a 37C, por flagelos anfitricos, o peritricos, forman pilis, y
fimbrias. No forman cpsulas de gran espesor ni esporas.
Todas las Yersinia posseen lipopolisacridos con
actividad endotxica y antgenos de envoltura celular bacteriana llamda fraccin I,
unaprotena que se produce a 37C, tiene propiedades antifagocitaria y activa
el complemento. El antgeno V-W es producido por las cepas virulentas de Y. pesti y
codificado por genes plasmdicos Y. pesti tambin produce catalasa a baja temperaturas
(28C y no 35C), endotoxinas bloqueadores beta adrenrgicos y cadriotxicos en

animales, y bacteriocina, una pesticina que lisa bacterias de otras especies.
Caractersticas morfolgicas y bioqumicas del gnero Yersinia
Cocobacilos Gram anaerobios facultativos
Mviles a 25 grados, inmviles a 37 grados
Crecen desde medios simples a medios enriquecidos
Vibrio Parahaemolyticus es un bacilo que pertenece al tipo gram negativo, es mvil y no
presenta cpsula ni espora. Tolera la sal comn por lo que se desarrolla en el agua del mar y
puede crecer a pH 9 en medios ligeramente bsicos. Est asociado al consumo de mariscos y
en algunos lugares como en Japn hay que tener especial cuidado con l. Es capaz de
causar gastroenteritis.
La patognesis de la gastroenteritis producida por el V. parahaemolyticus an no es clara. El
perodo de incubacin de la infeccin gastrointestinal es de 4-96 horas despus de la ingestin,
con un promedio de 15 horas. La rapidez con la que se presenta el cuadro clnico sugiere la
participacin de una enterotoxina an por identificar. La virulencia del vibrio ha sido asociada
a la produccin de hemolisina termoestable directa, la cual es responsable de la beta-hemlisis
producida sobre eritrocitos humanos in vitro, sin embargo, se han descrito en el ltimo tiempo
cepas patognicas que no producen la hemolisina.
La intoxicacin por Vibrio parahaemolyticus causa tres entidades clnicas reconocidas:
gastroenteritis, septicemia e infeccin de heridas.
El cuadro intestinal es el ms frecuente, caracterizado por diarrea acuosa y clicos
abdominales, que pueden acompaarse de nuseas, vmitos, fiebre y cefalea. Generalmente
es autolimitado, la persona se recupera luego de un perodo de aproximadamente 3 das, que
puede variar entre 1 a 7 das, tiempo que no depende del tratamiento con antibiticos. En los
casos ms severos puede producirse un sndrome disentrico, caracterizado por heces
sanguinolientas y fiebre alta.
La septicemia primaria es causada por la entrada del microorganismo al torrente sanguneo a
travs de la vena porta o del sistema linftico intestinal, los primeros sntomas incluyen fiebre,
hipotensin, compromiso del estado general, calofros y ocasionalmente nusea, vmitos,
diarrea y dolor abdominal. Su incidencia es baja, pero su severidad y su mortalidad es alta. Los
estudios muestran que los individuos sanos tienen bajo riesgo de desarrollar septicemia.
Factores de riesgo importantes incluyen enfermedades crnicas hepticas, renales, diabetes,
neoplasias o aclorhidria.
Caractersticas morfolgicas y bioqumicas del gnero Vibrio Parahaemolyticus
Nuseas
Vmitos
Clicos abdominales
Tolera sal Normal
Crece en PH ligeramente bsico
Bacilos cortos y curvados
Mviles por un flagelo polar
Gram -, anaerobio facultativo
No fermenta lactosa ni sacarosa
No presenta cpsula ni esporas
OBJETIVO
Observar caractersticas microscpicas, macroscpicas y bioqumicas caractersticas de bacilos
Gram negativos. Con las cules podemos llegar a diferenciar las unas de otras.
MATERIAL
-Cajas de petri
-Gradilla
-Portaobjetos
Tubos de ensaye
-Cubreobjetos
-Mecheros
-Asa de nicromio
-Microscpio
-Incubadora
Reactivos: cristal Violeta, Alcohol acetona, Safranina, Rojo de Metilo, Aceite de inmersi,
Agua destilada, solucin salina, KOH 40%, alfa naftol, FeCl3, Reactivo de Kovacs
CEPAS DE REFERENCIA
1. Salmonella enteritidis
2. Salmonella typhi
3. Shigella sonnei
4. Yersinia enterocolitica
5. Vibrio Parahaemolyticus
METODOLOGIA
*Sembrar las cepas en los distintos agares basndose en los nmeros de las cepas de
referencia y los mostrados en las cajas petri.
Agar SS
Agar Mck
1
2
SB
TCBS
3
2
XLD
5
2
*Incubar por 24 hrs a 37 grados y realizar morfologa macro y microscpica y pruebas

bioqumicas.
*Realizar tincin de GRAM

* Leer pruebas Bioqumicas
RESULTADOS
Morfologa Macroscpica
Salmonella tiphy
Mac Conkey
XLD
SS
SB
tamao
Chico
chico
chico
chico
forma
ovalado
redondo
redondo
redondo
color
transparente
negra
negra
Negra
Borde
Entero
entero
entero
entero
Elevacin
cncavo
cncavo
cncavo
cncavo
Consistencia
cremosa
cremosa
cremosa
cremosa
Lactosa
Mac Conkey
SB
SS
XLD
Salmonella
enteritidis
tamao
Chico
chico
chico
chico
forma
amorfo
redondo
redondo
redondo
color
transparente
negra
Metlico plata
Negra
Borde
Entero
entero
completo
entero
Elevacin
cncavo
cncavo
cncavo
cncavo
Consistencia
cremosa
cremosa
cremosa
cremosa
Lactosa
Mac Conkey
SS
XLD
SB
Shigella sonnei
tamao
medio
chico
medio
chico
forma
redondo
redondo
pleomorfico
redondo
color
transparente
blanco
transparente
transparente
Borde
Entero
completo
completo
entero
Elevacin
cnvexa
cncavo
cncavo
cncavo
Consistencia
cremoso
cremoso
cremoso
cremoso
Lactosa
Yersinia enterocolitica
XLD
Mac Conkey
SS
Tamao
Chico
chico
Chico
Forma
redondo
Redondo
irregular
Color
amarillo
transparente
transparente
Borde
entero
Medio
Entero
Elevacin
Cncava
convexo
Convexa
Consistencia
dura
Butrico
Dura
Lactosa
Vibrio
TCBS
Parahaemolyticus
Tamao
mediana
Forma
redonda
Color
incolora
Borde
entero
Elevacin
Convexa
Consistencia
dura
Lactosa
Sacarosa
S.tiphy: Bacilos GramS. enteritidis: Bacilos medianos GramShigella sonnei: Bacilos cortos GramYersinia enterocolitica: Bacilos Grambipolares
Vibrio Parahaemolyticus: Bacilos Gramalargados en forma de coma
Pruebas Bioqumicas:
Salmonella tiphy
Medio
TSI
Pruebas
Glu
Lac
Resultado
+
-
Referencia
100
1
LIA
Sac
H2S
Gas
+
+
1
97
96
Decar Li
98
Deamin Li
H2S
0
97
Gas
96
Citrato
RM
Produccin de cido
100
VP
Acetoina
Caldo Urea
ureasa
MIO
Movilidad
97
Ornitina
indol
Caldo Malonato
Salmonella enteritidis
Medio
TSI
Pruebas
Glu
Lac
Sac
H2S
Gas
Resultado
+
+
+
Referencia
+
+
+
LIA
Decar Li
Deamin Li
H2S
Gas
Citrato
RM
Produccin de cido
VP
Acetoina
Caldo Urea
ureasa
MIO
Movilidad
Ornitina
indol
Caldo Malonato
Shigella sonnei
Medio
TSI
LIA
Pruebas
Glu
Lac
Sac
Resultado
+
+
+
Referencia
100
0
0
H2S
Gas
0
0
Decar Li
Deamin Li
H2S
0
0
Gas
Citrato
RM
Produccin de cido
99
VP
Acetoina
Caldo Urea
ureasa
MIO
Movilidad
Ornitina
indol
45
Caldo Malonato
Yersinia enterocolitica
Medio
TSI
Pruebas
Glu
Lac
Sac
H2S
Gas
Resultado
+
-
Referencia
+
-
LIA
Decar Li
Deamin Li
H2S
Gas
Citrato
RM
Produccin de cido
VP
Acetoina
Caldo Urea
ureasa
MIO
Movilidad
+ a 25C
+ a 25C
Ornitina
indol
10
SIM
H2S
+
-
Indol
Movilidad
+ a 25C
+ a 25C
Caldo Malonato
Vibrio Parahaemolyticus
Medio
TSI
Pruebas
Glu
Lac
Sac
H2S
Gas
Resultado
-
Referencia
-
LIA
Decar Li
Deamin Li
H2S
Gas
Citrato
RM
Produccin de cido
VP
Acetoina
Caldo Urea
ureasa
MIO
Movilidad
Ornitina
indol
Caldo Malonato
CONCLUSION:
En esta prctica se observo que las cepas de las bacterias que nos proporcionaron cumplieron
con las caractersticas morfolgicas macroscpicas y microscpicas, no obstante las
metablicas fueron un poco mas disparejas a las que se encuentran en la bibliografa, por lo
cual se puede pensar que hubo problemas al momento de manipular las cepas.
La identificacin correcta de estas cepas por medio de estas pruebas, nos abre las puertas para
ayudar en el diagnostico de enfermedades y su tratamiento.
DISCUSION:
El mal manejo de las cepas a la hora de sembrarlas en los agares nos dio como resultado muy
pocas colonias aisladas para trabajar, adems de que algunos medios se nos contaminaron por
la gran cantidad de muestra que fue sembrada en el agar.
11
En las pruebas bioqumicas surgieron muchas diferencias con respecto a lo que se esperaba
segn la bibliografa recopilada. Esto puedo darse por un mal manipuleo de las muestras,
talvez a la hora de inocular o a la hora de adicionar los reactivos que requieren algunas de las
pruebas adecuadamente.
BIBLIOGRAFIA:
1. C. Solano, B. Sesma, M. lvarez, I. Dorronsorro, R.Daz, E.Urdaneta, C. Gamazo (2007).
Diferenciacin de cepas virulentas de Salmonella enteritidis, aplicacin al diagnstico
clinico y al control sanitario.
http://www.cfnavarra.es/salud/anales/textos/vol22/suple3/suple12.html
2. DrTango, Inc (2007). Fiebre tifoidea.
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/001332.htML
12
PRCTICA
COPROCULTIVO

13
RESUMEN
Las infecciones del tracto gastrointestinal son unas de las enfermedades ms frecuentes en
Amrica latina y en Mxico, para realizar el diagnstico, es necesaria la obtencin de una
muestra fecal del paciente, a partir dela cual se realiz un coprocultivo en los medios McK y SS,
adems de una tincin con azul de metileno para detectar la presencia de bacterias
enteroinvasivas, tambin fue necesaria la inoculacin el caldo nutritivo de selenito y la siembra
en el agar sulfito de bismuto para descartar la presencia de salmonella, posterior a la
incubacin por 24hrs a 37C, se obtuvo una sola cepa, a la cual se le realizaron las
correspondientes pruebas bioqumicas, dando como resultado, una similitud del 90% con
E.coli.
INTRODUCCIN
El tubo digestivo representa un largo conducto que con modificaciones notables,
especialmente en su tnica mucosa y muscular, se extiende desde la boca hasta el ano. A lo
largo de este conducto ocurre la incorporacin de los alimentos y la preparacin del bolo
alimenticio (cavidad bucal), la digestin de ellos y la
formacin del quimo (estmago), la absorcin de
nutrientes (intestino delgado) y de agua y electrolitos
(intestino grueso) y la eliminacin de desechos (recto).
Una pequea extensin proximal de este tubo se ubica en
la regin ceflica del sujeto, incluyendo a la cavidad bucal,
la faringe y el esfago, que en su conjunto miden
aproximadamente 40 cm. de longitud. En cambio, la mayor
parte del tubo digestivo se ubica en la cavidad abdominoplvica incluyendo al estmago, intestino delgado,
intestino grueso y al recto. Estas estructuras en conjunto
miden aproximadamente 4 mts. A lo largo del tubo
digestivo se observa una disposicin estratificada con una
tnica mucosa, una capa muscular que en algunas zonas,
Ilustracin 1. rganos del aparato digestivo, se
muestra boca, faringe, esfago, estmago,
intestino delgado, intestino grueso, recto, ano y
glndulas accesorias.
como en el estmago, es compleja y una adventicia o

una capa serosa, como se observa en la zona del tubo
digestivo ubicado en la cavidad abdomino-plvica.
El intestino delgado est dividido en dos partes: el duodeno y el leon. Desde el duodeno al
leon, el pH se hace progresivamente menos cido y aumenta el nmero de bacterias en el
colon . La microbiota del intestino humano es una de las comunidades ms densamente
pobladas, y en sta regin se produce la fermentacin. Alrededor del 50% de la masa fecal est
constituida por bacterias. Esta poblacin se compone de trillones de microorganismos
pertenecientes, en esencia, a cuatro fila: Firmicutes, Bacteroidetes, Actinobacteria y
Proteobacteria, con un predomino de las dos primeras (90%). Las caractersticas de la dieta
junto con los factores genticos influyen en el predominio de unos microorganismos sobre
otros.
14
Las infecciones agudas del tracto gastrointestinal figuran entre las enfermedades infecciosas
ms frecuentes. Aunque muchas veces se trata de un ligero contratiempo en los adultos sanos,
un desequilibrio electroltico puede provocar una deshidratacin en las personas muy
enfermas y en nios y ancianos. A nivel mundial, las infecciones gastrointestinales siguen
siendo una de las causas ms importantes de morbilidad y mortalidad entre los lactantes y los
nios. Las manifestaciones clnicas ms destacadas de las gastroenteritis son fiebre, vmitos,
dolor abdominal y diarrea moderada a intensa. La diarrea es un dato central y su presencia y
naturaleza constituyen la base para la clasificacin de las infecciones gastrointestinales en dos
sndromes: diarrea acuosa o secretora y diarrea invasiva o disentera. La participacin de los
distintos microorganismos difiere de unas reas geogrficas a otras y tambin depende del
grupo de poblacin, en cuanto al predominio estacional hay mayor incidencia de
gastroenteritis vrica en otoo-invierno mientras que las bacterias afectan preferentemente en
primavera-verano.
Las enfermedades infecciosas que se pueden presentar son las siguientes:
Salmonelosis: (salmonella entrica cuadros de gastroenteritis y salmonella tiphy

febriles).
Diarrea por Campylobacter.- Campylobacter jejuni causa diarrea.
Shigellosis: (S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii) o disenteria bacilar.
Diarrea por Escherichia coli: ( cuadros diarreicos)
Diarrea por Yersinia: (diarrea acuosa y sanguinolenta de breve duracin).
Diarrea por Aeromonas.- Aeromonas hidrophila ( cuadros diarreicos, fiebre y dolor

abdominal, en ocasiones puede ser asintomtica)
Diarrea por Vibrio (Vibrio cholerae causal de la clera, enfermedad diarreico aguda ).
Diarrea por Staphylococcus aureus.
Diarrea por Plesiomonas (no se conoce la va de contagio y mecanismo de accin)
Diarrea por Clostridium difficile ( por dos toxinas (verotoxina y citotoxina)

Para realizar el diagnstico de
infecciones causadas por bacterias
es necesario el uso del coprocultivo
para aislar al agente causal, el
primer paso es la recoleccin de la
muestra, se le dar al paciente las
instrucciones necesarias para lograr
la obtencin de una muestra de
calidad,
sin
alguna
otra
contaminacin, posteriormente se
procesa la muestra en el
Ilustracin 2 Tabla de bacterias que causan diferentes sntomas.
15
laboratorio. Para iniciar con la identificacin es til realizar primero una tincin con azul de
metileno para identificar la forma de la bacteria y si hay presencia de leucocitos o no, lo cual
nos ayudar a seleccionar el medio de cultivo ms adecuado para la identificacin, al tratarse
de una bacteria enteroinvasiva o no, mediante la siembra en diferentes medios de cultivo,
selectivos y diferenciales como: Agar MacConkey (McK), Agar Salmonella-Shigella (SS), Agar
Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD), Agar Sulfito de Bismuto (SB) y Caldo de tetrationato, asi como
de pruebas bioqumicas comunes, se identifica al agente causal de la infeccin intestinal.
Procedimiento para toma de muestra
PRECAUCIONES:
-
Lavarse las manos antes y despus del procedimiento.
Evitar que la evacuacin se mezcle con orina.
Que el cmodo este perfectamente limpio.
El paciente no debe estar en tratamiento con antibiticos
1. Lavarse las manos.

2. Preparar el equipo y llevarlo a la unidad del paciente.
3. se debe colocar un recipiente estril receptor de heces y solicitar al paciente que evacue.
En caso necesario (como en nios), es preferible realizar un hisopado rectal, que debe ser
tomado por el personal entrenado.
4. Una vez recogidas las heces, impregne con las mismas el hisopo suministrado, prefiriendo
las partes que contengan moco, sangre y restos celulares. Introduzca el hisopo hasta el fondo
del tubo con el medio gelatinoso, dejndolo dentro del tubo. Tpelo inmediatamente y
mantngalo en ambiente fresco (nunca en nevera) y llvelo lo ms pronto posible al
laboratorio.
6. Membretar el frasco.
7. Enviar la muestra al laboratorio.
Temperatura de conservacin: 4C para evitar la proliferacin bacteriana.
METODOLOGA
*La identificacin se realiz a partir de una muestra donada, la cual estuvo en un
medio de transporte especializado.
A partir de la muestra se realiz una tincin con azul de metileno, para obtener un diagnstico
presuntivo e identificar la presencia de leucocitos y la morfologa microscpica,
16
posteriormente se realiz la inoculacin de una porcin de materia fecal en el caldo nutritivo

de Selenito, para realizar el posible aislamiento de salmonella, el caldo se incub por 6 horas a
una temperatura de 37C, posteriormente se sembr en el agar sulfito de bismuto.
Luego se procedi a realizar la siembra en los medios de cultivo Mac Conkey y Salmonellashigella, se coloc el inculo y con el asa se procedi a realizar el estriado propio de la tcnica
de cultivo puro. Los cultivos fueron incubados por un tiempo de 24 horas a 37C.
Pasado el tiempo de incubacin se realiz la observacin de las diferentes colonias obtenidas,
a travs de la tincin de Gram para identificar si eran bacterias gram negativas y la morfologa,
a partir de stas observaciones se realizaron pruebas bioqumicas de las colonias aisladas
seleccionadas como posibles agentes etiolgicos para el diagnstico. Las pruebas bioqumicas
realizadas fueron: Rojo de Metilo (RM), Voges Proskauer (VP), Fenilalanina deaminasa (FEA),
Medio Citrato de Simmons, Lisina Hierro Agar (LIA),Medio Movilidad, produccin de Indol,
descarboxilacin de Ornitina (MIO), Caldo de Urea, Medio de Malonato, Medio Reduccin de
Azufre, produccin de Indol, Movilidad (SIM, por sus siglas en ingls), Medio Triple Azcar
Hierro (TSI), Caldo de Nitratos; fueron incubadas a 37C por 24 horas, una vez pasado ste
tiempo de incubacin se procedi a realizar la identificacin de las bacterias aisladas, y
finalmente se report la bacteria correspondiente a los resultados obtenidos de las pruebas
bioqumicas.
RESULTADOS
Morfologa macroscpica
Medio de cultivo
McK
S-S
Agar sulfito de
bismuto
Forma
Tamao
Color
Elevacin
Borde
Luz reflejada
Luz transmitida
Consistencia
Sustrato
redonda
grande
rosadas
convexa
Entero
No
no
cremosa
Lactosa positivo
Redonda
Mediano
Rosadas
Convexa
Entero
Si
No
Cremosa
Lactosa positivo
No se obtuvo
crecimiento
Se observa en el agar SS, la

presencia de colonias rosadas
lactosa positivas.
17
Morfologa microscpica
Cultivo
Mck
S-S
Forma
Arreglo
Tincin gram
bacilo
diplobacilos
Gram negativos
Bacilo
diplobacilos
Gram negativos
Tincin con azul de metileno: Bacilos gram negativos, ausencia de leucocitos y son bacterias
extracelulares.
Morfologa de las colonias del McK
Morfologa obtenida de las colonias del agar SS
Por la morfologa microscpica similar obtenida, se seleccion una nica colonia para realizar
las pruebas bioqumicas.
Pruebas bioqumicas
Prueba
TSI
LIA
Agar Citrato
Caldo Rojo de metilo
Caldo Vogues Proskauer
Caldo Malonato
Caldo Ureasa
MIO
Resultado
Gas : positivo
Lactosa: positivo
Sacarosa: positivo
Glucosa: positivo
Sin H2S
Deaminacin: negativa
Decarboxilacin: negativa
Utilizacin de citrato: negativo
Fermentacin: positiva
Fermentacin 2-3 butanediol: negativo
Utilizacin de malonato: negativo
Utilizacin de ureasa: negativo
Movilidad: positiva
Decarboxilacin de Ornitina: negativa
Indol: positiva
Coincide con: Escherichia coli.
18
CONCLUSIN
De acuerdo a los resultados obtenidos con las pruebas bioqumicas, se determin que
coinciden en un 90% con las caractersticas bioqumicas de Escherichia coli, en un estado
inactivo. De acuerdo a lo revisado en la bibliografa (2008, Murray) E. coli tambin posee una
morfologa microscpica de bacilo y es lactosa positiva por lo que concuerda con el resultado
obtenido en el agar Mck y SS. El diagnstico microbiolgico de los procesos enterocolticos
causados por los diferentes grupos de E. coli diarreagnicas se ve complicado por el hecho de
que esta especie es un componente fundamental de la microbiota intestinal del ser humano.
Actualmente se aceptan cinco grupos de E. coli como causantes de gastroenteritis: 1) E. coli
enterotoxignica (ECET) cuyas cepas pueden ser productoras de una o ambas toxinas, la toxina
termolbil (TL), y la toxina termoestable (TE). Ambas toxinas producen una elevada secrecin
de electrolitos y agua. Este grupo es causa frecuente de diarrea del viajero y de diarrea en
nios con edad inferior a 5 aos en pases en vas de desarrollo; 2) E. coli enteropatgena
(ECEP), este grupo se adhiere al epitelio intestinal ocasionando un acortamiento de las
microvellosidades. El locus LEE, que codifica una serie de protenas asociados con la
adherencia y destruccin de las microvellosidades; 3) E. coli enterohemorrgica (ECEH)
tambin llamada verotoxignica pues puede producir dos citotoxinas denominadas toxinas
Shiga-like (Stx1 y Stx2), shigatoxinas o verotoxinas. Los cuadros clnicos que produce van desde
una infeccin asintomtica a diarrea acuosa o colitis hemorrgica, que a veces se acompaa de
un sndrome urmico-hemoltico; 4) E. coli enteroinvasiva (ECEI), los cuales son capaces de
invadir la mucosa intestinal; y 5) E. coli enteroagregativa (ECEA) que es tambin una causa
frecuente de diarrea del viajero y de diarrea crnica en pases en vas de desarrollo (2008,
Cercenado). Para realizar un diagnstico ms especfico del grupo de E. coli, es necesario
conocer las caractersticas de las heces de la muestra obtenida, asi como la sintomatologa del
paciente, en tanto no se observaron eritrocitos, por lo que podramos descartar la presencia
de eritrocitos ni leucocitos. Por lo que el diagnstico apuntara hacia el grupo ECET, ya que no
se tienen a la mano el manejo de tcnicas moleculares para diferenciar e identificar el grupo
presente de E. coli en la muestra.
BILBIOGRAFA
Brito Evaldo y cols., 2009, La deteccin de bacterias enteropatgenas y
enteroparasitarias en los pacientes con diarrea aguda en Brasil, Rev Pan-Amaz Saude
2009; 1(N Esp):143-148.
Murray R. Patrick, 2008, Microbiologa mdica,5ta edicin, Editorial ELSEVIER,Pg. 323.
Cercenado Emilia, 2008, Diagnstico microbiolgico de las infecciones
gastrointestinales.
Viramontes y Portillo, 2008, metabolismo microbiano, 1 edicin, Editirial textos
universitarios.
http://escuela.med.puc.cl/paginas/Departamentos/Anatomia/PortalKineNut/html/dig
digest/gen_digestivo.html.
http://digestive.niddk.nih.gov/spanish/pubs/yrdd/.
19
PRCTICA
NALISIS DE CEPAS DE REFERENCIA RELACIONADAS A

INFECCIONES DEL TRACTO URINARIO

20
RESUMEN
En esta prctica se realiz la observacin de las caractersticas morfolgicas microscpicas
tanto macroscpicas de las cepas de referencia que nos proporcion la maestra en estas se
encontraban 4 bacilos gram negativos y un coco gram positivo (Enterococcus faecalis), se le
hicieron pruebas bioqumicas para observar sus metabolismos y poder tener una pequea idea
de cmo poder identificar y diferenciar una de la otra pues todas las cepas son de suma
importancia.
INTRODUCCIN
Las bacterias son microorganismos procariotas, es decir, unos microorganismos unicelulares
sencillos, sin membrana nuclear, mitocondrias, aparato de Golgi ni retculo endoplsmico que
se reproducen por divisin asexual. La pared celular es compleja, y existen dos formas bsicas:
una pared celular grampositiva con una gruesa capa de peptidoglucano y una pared celular
gramnegativa con una delgada capa de peptidoglucano, as como una membrana externa.
El humano debe de tener cuidado con el contacto de ciertas bacterias ya seria en unos casos
que son beneficiarias y en otros casos son patgenas.
Escherichia coli
El gnero Escherichia se compone de cinco especies, de las que E. coli es la ms frecuente y la
ms relevante desde el punto de vista clnico. Este microorganismo se asocia a una gran
variedad de enfermedades, como septicemia, TAU, meningitis y gastroenteritis. Como era de
esperar, la multitud de cepas capaces de producir enfermedad se encuentra reflejada en la
diversidad antignica de esta especie. La mayora de los bacilos gramnegativos que producen
IAU se originan en el colon, contaminan la uretra, ascienden hasta la vejiga y pueden migrar
hasta el rion o la prstata. Aunque la mayora de las cepas de E. coli puede producir IAU, la
enfermedad se relaciona con mayor frecuencia a ciertos serogrupos especficos. Estas
bacterias son especialmente virulentas por su capacidad para producir adhesinas
(principalmente pili P, AAF/I, AAF/H y Dr), las cuales se unen a las clulas que recu- bren la
vejiga y el aparato urinario superior (evitando la eliminacin de las bacterias durante la
miccin), y hemolisina HlyA, que lisa los hemates y otros tipos celulares (llevando a la
liberacin de citocinas y a la estimulacin de la respuesta inflamatoria).
Enterobacter aerogenes
El gnero Enterobacter incluye 12 especies de las cuales Enterobacter cloacae y Enterobacter
aerogenes, seguido por Enterobacter sakazakii son las especies frecuentemente aisladas
causantes de enfermedades humanas.
La endotoxina de esta bacteria es conocida por jugar un rol mayor en la patogenia de sepsis y
sus complicaciones. Causan frecuentemente infecciones nosocomiales tales como las IVU. La
fuente de infeccin puede ser endogena o exgena, de la cual las infecciones de Enterobacter
endogena, se originan en la piel, tracto gastrointestinal y vas urinarias colonizado por la
bacteria.
21
Proteus mirabilis
Las especies de Proteus, miembros de la familia enterobacteriaceae (Penner 1984) son
distinguibles de muchos otros gneros por su abolidas de esparcirse en la superficie del agar.
Estos organismos estn ampliamente distribuidos en el ambiente y se encuentran en el tracto
intestinal de los humanos y mamferos.
La colonizacin del tracto intestinal permite a Proteus a establecer reservorios para la
transmisin en vas urinarias por colonizacin intermitente de la regin periuretral. Para
facilitar la adherencia de P. mirabilis a las superficies epiteliales, debe ser capaz de producir
una variedad de factores de adherencia tales como las fimbrias y hemaglutininas, que juegan
un papel importante en en establecimiento durante las IVU. Las especies de Proteus han
demostrado la produccin de varias fimbrias y hemaglutininas que se encuentran involucradas
en la colonizacin de las vas urinarias incluyendo fimbrias parecidas a Proteus/manosaresistente(MR/P), hemaglutinina parecida a klebsiella/manosa-resistente (MR/K), fimbrias no
aglutinantes/adhesina uroepitelial celular (UCA/NAF), fimbrias Proteus mirabilis (PMF) y
fimbrias temperatura ambiente (ATF), que tambin se relacionan con la adhesin a superficies
como los catteres cuando se refiere a infecciones de vas urinarias interhospitalarias.
Pseudomona aeruginosa
Las especies pertenecientes al gnero Pseudomonas (tambin llamadas pseudomonas) son
microorganismos ubicuos que se encuentran en la tierra, en la materia orgnica en
descomposicin, en la vegetacin y en el agua.
P. aeruginosa tiene muchos factores de virulencia, entre los que se encuentran componentes
estructurales, toxinas y enzimas, sin embargo, es difcil definir el papel que cada factor
desempea en la enfermedad, y la mayora de los expertos en este campo cree que su
virulencia es multifactorial. La adherencia de P. aeruginosa a las clulas del organismo anfitrin
est mediada por los pili y por adhesinas de estructura diferente a la de estos. Los pilis
desempean una importante funcin en la unin a las clulas epiteliales, y tienen una
estructura semejante a la de los pili caractersticos de Neisseria gonorrhoeae. Pseudomonas
aeruginosa produce tambin neuraminidasa, que elimina los residuos de cido silico del
receptor de los pili, aumentando as la adherencia de las bacterias a las clulas epiteliales. La
infeccin del aparato urinario aparece principalmente en los pacientes con sondas urinarias de
larga duracin. Generalmente estos pacientes reciben mltiples pautas de antibiticos, lo que
tiende a seleccionar cepas ms resistentes de bacterias como Pseudomonas.
Enterococcus faecalis
En el ao 1984, los enterococos se clasificaron en el nuevo gnero Enterococcus, el cual consta
actualmente de 29 especies. Las especies que se aislan con una mayor frecuencia y que son
clnicamente las ms importantes son Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium. En
consecuencia, por lo general se considera que estas bacterias poseen una limitada capacidad
patgena, aunque las enfermedades potencialmente mortales, en especial en sujetos
hospitalizados, se han convertido en un grave problema. Estas bacterias presentan adhesinas
de superficie que facilitan su unin a las clulas que tapizan los tejidos intestinales y vaginales
22
del organismo anfitrin humano, y secretan enzimas extracelulares con actividad hemoltica
(citolisinas) y proteoltica (p. ej., gelatinasa, serina proteasa). A pesar de la escasez de factores
de virulencia, se ha reconocido la capacidad de los enterococos de producir infecciones
potencialmente mortales. El aparato genitourinario, el peritoneo y el tejido cardaco son las
localizaciones que se ven afectadas con mayor frecuencia. Las infecciones enteroccicas son
especialmente frecuentes en los pacientes que han permanecido hospitalizados durante
perodos prolongados y han recibido antibiticos de amplio espectro.
METODOLOGA
*La identificacin se realiz a partir de cepas de referencia proporcionadas por la
maestra.
El primer da se nos dieron las cepas (E. coli 1, Proteus mirabilis 3, pseudomona
aeruginosa 4, enterobacter aerogenes 2, enterococcus faecalis 5) en los agar Mack
Conkey (1234), EMB (1234), cetrimida (4) , Sangre (5, 13)
Al segundo da se observ la morfologa macroscpica y microscpica y se inocularon
las pruebas bioqumicas
Al tercer da se leyeron los resultados de las pruebas bioqumicas y se observ las
diferencias.
RESULTADOS
E. coli
Medio de cultivo
Forma
Tamao
Color
McK
Redonda
Mediano
Rosadas
Elevacin
Borde
Luz reflejada
Luz transmitida
Consistencia
Sustrato
Convexa
Entero
No
No
Cremosa
Lactosa positivo
EMB
Sangre
Redonda
Hemolisis negativa
Mediano
Negras borde verde
metlico
Cncavo
Entero
Si
No
viscosa
Fermenta lactosa
23
Medio de cultivo
Forma
Tamao
Color
Elevacin
Borde
Luz reflejada
Luz transmitida
Consistencia
Sustrato
McK
Redonda
Grandes
Rosadas
Convexa
Rizoide
Si
Si
Viscosa/Cremosa
Lactosa positivo
EMB
Redonda
Chicas
Rosas transparentes
Cncavo
Rizoide
No
Si
Viscosa/Cremosa
Fermenta lactosa
Proteus mirabilis
Medio de cultivo
Forma
Tamao
Color
Elevacin
Borde
Luz reflejada
Luz transmitida
Consistencia
Sustrato
McK
Redonda
Grande
Ambar
Plana
Entero
No
Si
Cremosa
Lactosa negativo
EMB
Redonda
Chicas
Grisceas
Plana
Entero
No
Si
Cremosa
No fermenta lactosa
Sangre
Forma de olas
Grande
Lisas/incoloras
Convexo
Entero
Si
Si
Lechosa
Hemolisis negativo
Pseudomona Aeruginosa
Medio de cultivo
Forma
Tamao
Color
Elevacin
Borde
Luz reflejada
Luz transmitida
Consistencia
Sustrato
McK
Redonda
Mediana
Ambar
Convexa
Rizoide
No
Si
Cremosa/viscosa
Lactosa negativo
EMB
Redonda
Mediana
Grisceas
Convexa
Entero
No
No
Cremosa
No fermenta lactosa
Creatimida
Irregular
Medianas
Verde brillante
Plana
Entero
Si
Si
Espesa/cremosa
Pigmento verde.
Su indicador es
glicerol
24
Enterococcus faecalis.
Medio de cultivo
Forma
Tamao
Color
Elevacin
Borde
Luz reflejada
Luz transmitida
Consistencia
Sustrato
Sangre
Redonda
Chicas
Ambar
Convexo
Entero
Si
No
Cremosa
Sangre no hemoltico/
no movilidad.
Cepa
Forma
Arreglo
Tincin gram
E.coli
Bacilo
simples
-
Enterobacter
Bacilo
Simples
-
proteus
bacilos
simples
-
pseudomonas Enterococcus
Bacilos
Cocos
simples
Simples
+
Pruebas bioqumicas
Cepa de referencia
Prueba bioqumica
TSI
LIA
Agar citrato
FeA
Caldo RM
Caldo VP
Caldo urea
MIO
SIM
Cepa de referencia
Prueba bioqumica
TSI
LIA
Agar citrato
Proteus mirabilis
Resultado
Referencia
Glucosa (+) sacarosa (-)

Lactosa (-) Gas (+) H2S (+)
Deaminacin (+)
Decarboxilacin (-)
Glucosa (+) Sacarosa (-) Lactosa (-) Gas

(+) H2S (-)
Deaminacin (+) Decarboxilacin (-)
Negativo (-)
Positivo (+)
Positivo (+)
Negativo (-)
positivo (+)
65% positivo
positivo (+)
Positivo (+)
50% positivo
Positivo (+)
Movilidad (+) Indol (-)

Ornitina (+)
H2S (+) Indol (-) Movilidad
(+)
Movilidad: (+) Indol: (+) Ornitina: (+)
Resultado
H2S (+) Indol (+) Movilidad (+)
Referencia
Glucosa (-) sacarosa (-)

Lactosa (-) Gas (+) H2S (-)
utilizacin de peptonas
Deaminacin (-)
Decarboxilacin (+)
Glucosa (-) Sacarosa (-) Lactosa (-) Gas

(+) H2S (-)
Positivo (+)
Negativo (+)
Deaminacin (-) Decarboxilacin (+)
25
FeA
Caldo RM
Caldo VP
Caldo urea
MIO
SIM
Oxidasa
Reduccin de
nitratos
Cepa de
referencia
Prueba
bioqumica
TSI
LIA
Agar citrato
FeA
Caldo RM
Caldo VP
Caldo urea
MIO
SIM
Oxidasa
Reduccin de
nitratos
Cepa de
referencia
Prueba
bioqumica
TSI
LIA
Negativo (-)
Negativo (-)
Negativo (-)
Negativo (-)
Negativo (-)
Positivo (+)
Negativo (-)
Negativo (-)

Ornitina (+)
H2S (+) Indol (-) Movilidad
(+)
Positiva (+)
Positiva (+)
Movilidad: (+) Indol: (-) Ornitina: (+)

H2S (+) Indol (-) Movilidad (+)
Positiva (+)
Positiva (+)
E. coli
Resultado
Glucosa (+) sacarosa (+)
Lactosa (+) Gas (+) H2S (-)
Deaminacin (-)
Decarboxilacin (+)
Negativo (-)
Negativo (-)
Positivo (+)
Negativo (-)
Negativo (-)
Movilidad (+) Indol (+)
Ornitina (+)
H2S (-) Indol (+) Movilidad
(+)
Negativa (-)
Positiva (+)
Referencia
Glucosa (+) Sacarosa (50%e) Lactosa (+)
Gas (+) H2S (-)
Negativo (-)
Negativo (-)
Positivo (+)
Negativo (-)
Negativo (-)
Movilidad: (+) Indol: (+) Ornitina: (-)
H2S (-) Indol (+) Movilidad (+)
Negativa (-)
Positiva (+)
Resultado
Glucosa (+) sacarosa (+)
Lactosa (+) Gas (+) H2S (-)
Deaminacin (-)
Decarboxilacin (+)
dbilmente
Referencia
Glucosa (+) Sacarosa (+) Lactosa (+) Gas
(+) H2S (-)
26
Agar citrato
FeA
Caldo RM
Caldo VP
Caldo urea
MIO
SIM
Cepa de
referencia
Prueba
bioqumica
Caldo nutritivo
6.5% NaCl
Bilis esculina
Catalasa
Negativo (+)
Negativo (-)
Positivo (+) Dbilmente
Negativo (-)
Negativo (-)
Ornitina (+)
H2S (-) Indol (-) Movilidad
(+)
Negativo (+)
Negativo (-)
(+)
Positivo (+)
Negativo (-)
Movilidad: (+) Indol: (-) Ornitina: (+)
H2S (-) Indol (-) Movilidad (+)
Resultado
Referencia
Positivo (+)
Positivo (+)
Positivo (+)
Negativa (-)
Positivo (+)
Negativa (-)
CONCLUSIN
La determinacin de estos microorganismos es importante y que son patgenos del tracto
urinario y pueden causar problemas graves desde una bacteriuria asintomtica hasta una
pielonefritis, generalmente este microorganismo se contagia por que no existen las medidas
de higiene necesarias en la vida diaria, contener la orina por mucho tiempo, por lo cual es
recomendable no permanecer mucho tiempo sin orinar. Con respecto a la identificacin es
importante conocer las pruebas bioqumicas diferenciales entre cada organismo ya que esto
nos permite que se lleve a cabo un diagnstico adecuado y as el medico pueda tratar con el
medicamento adecuado.
BILBIOGRAFA
Echeverria, J. (2006) infeccin del tracto urinario y manejo antibitico. Facultad de medicina
UPCH. Pagina web http://www.scielo.org.pe/pdf/amp/v23n1/a06v23n1
Hospital universitario de Albacete, Espaa, pagina web
http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/pdf/Enterobacterias_medicine2010.pd
f
27
Gua de prctica clnica (diagnstico y tratamiento de la infeccin del tracto urinario bajo
durante el embarazo, en un primer nivel de atencin),(2009), secretaria de salud, Mxico,
pagina web
http://www.cenetec.salud.gob.mx/descargas/gpc/Catalogomaestro/078_GPC_IVUenelemb
1NA/IVU_E_RSS.pdf
Holt, J., Krieg, N. (1994), Bergeys Manual of determinative bacteriology 9 edicion Lippincott
Williams and wilkins, China.
Viramontes, S., Portillo, M. (2010). Identificacin de microorganismos 1 edicin textos
universitarios, Mxico.
28
PRCTICA
4
UROCULTIVO

29
RESUMEN
En est practica se nos proporcion una muestra de orina de una persona de 22 aos
de edad, se observ un examen fsico de sta, en la que se determin un PH de 6, un
color amarillo mbar y un olor a suigeneris. Se realiz un urocultivo en distintos
medios como Agar Sal manitol, Agar sangre, Agar Mckonkey y en un Chromoagar;
dentro de los resultados obtenidos, se pudo observar que no hubo crecimiento alguno.
La persona estaba libre de infeccin del tracto Urinario.
Para realizar la prueba del antibiograma se nos proporcion una cepa de E.coli propia
del laboratorio, los resultados en cuanto a los antibiticos utilizados fueron bastantes
convincentes, de los cuales el antibitico ciprofloxacina mostr mayor sensibilidad
otorgando un halo de inhibicin de 40 mm.
INTRODUCCIN
Las infecciones del tracto urinario (UTI) son unas de las infecciones ms comunes en
humanos. En general un limitado nmero de especies bacterianas son responsables de
la mayora de estas infecciones. La presencia de microorganismos en orina se
denomina bacteriuria, sean o no, causantes de infeccin. UTI puede ocurrir a toda
edad desde neonatos hasta ancianos, en personas sanas o comprometidas y
debilitadas. Es responsable por el aumento de los costos en programas de salud, como
en morbilidad, mortalidad y prdida de productividad.
El trmino UTI es un parte aguas que abarca una gran cantidad de sndromes clnicos,
cada uno de ellos con sus propios mecanismos patognicos, prognosis, pacientes
blanco, y requerimientos nicos para diagnstico y tratamiento. El signo unificador es
la presencia de microorganismos en orina, generalmente acompaado de una
respuesta inflamatoria aguda. Los diferentes sndromes que engloba la UTI difieren
con respecto al sitio y a la extensin de la infeccin dentro del tracto urinario; a la
intensidad de la respuesta inflamatoria, y al estado clnico del paciente.
BACTERIURIA ASINTOMTICA: se define como la presencia de bacterias en orina en
ausencia de sntomas. Su significado clnico se reduce a los nios con reflujo
vesiculouretral y a las mujeres embarazadas, en cualquier etapa de la gestacin y a
pacientes prximos a cirugas del tracto urinario.
CISTITIS: Es el trmino aplicado a la UTI confinado solamente a la vejiga. Sus sntomas
comprenden disuria, aumento de frecuencia, urgencia y dolor. Esta patologa es la ms
frecuente y la de mayor incidencia en mujeres de toda edad.
PIELONEFRITIS Y UTI FEBRIL: Son diagnsticos clnicos que comprometen infecciones
ms invasivas del tracto urinario. Se asume inflamacin del rion y de la pelvis renal, se
acompaan de sintomatologa como: dolor al costado del abdomen, respuesta
inflamatoria sistmica con fiebre, malestar, cefalea, nauseas. Pacientes con
alteraciones de sus mecanismos de defensa o malformaciones del tracto urinario
tienen un riesgo mayor, desarrollando serias secuelas y no responden al tratamiento.
30
El estado de salud y la edad influyen en las manifestaciones clnicas que acompaan a

UTI. Neonatos hasta de un mes de edad con UTI generalmente presentan sntomas y
signos vagos e inespecficos que incluyen bacteremia febril, vmitos, mala nutricin y
mal estado fsico. Despus del perodo neonatal y hasta los dos aos de edad, nios
con UTI generalmente presentan fiebre alta pero raramente presentan signos ms
especficos. Desde los dos aos de edad en adelante.
La estrategia primordial para el xito de un protocolo de urocultivo es aislar el
patgeno ms probable y diferenciarlo de los organismos contaminantes.
1. ORGANISMOS QUE SON UROPATOGENOS RECONOCIDOS Y CRECEN BIEN EN
MEDIOS DE RUTINA EN 24 HRS. Estos incluyen E.coli, Klebsiella pneumoniae,
Proteus mirabilis y Pseudomona aeruginosa. Estos patgenos constituyen la
causa del 80% de los bacilos gram negativos aislados. Enterobacter y
Citrobacter son tambin comnmente aislados, Enterococcus, Sthaphylococcus
saprophyticus, Sthaphyloccocus aureus y Streptoccocus agalactiae son los gram
positivos ms frecuentemente aislados.
2. ORGANISMOS QUE SON UROPATOGENOS RECONOCIDOS Y NO CRECEN EN
MEDIO DE RUTINA: Mycobacterium tuberculosis, es un patgeno infrecuente
que se asocia a altos recuentos de leucocitos. Chlamidia trachomatis se
desarolla solamente en cultivos celulares y se asocia a uretritis y salpingitis
pudiendo provocar UTI. Ureaplasma urealyticum, se asocia a otros
uropatgenos. Neisseriae gonorrhoeae se desarolla en Medio Thayer Martin.
3. ORGANISMOS QUE PUEDEN SER UROPATOGENOS, PUEDEN REQUERIR MEDIOS

ESPECIALES Y MS DE 24 HRS. Hay microorganismos pertenecientes a la flora
normal y que aislados en recuentos altos se han asociado a UTI entre ellos se
encuentran: Corynobacterium urealyticum, Corynebacterium seminale, ests
se desarollan en Agar sangre CNA; Haemophylus influenzae, H. parainfluenzae,
ests se desarollan en Agar chocolate.
Gardenella vaginalis en altos recuentos se ha asociado a UTI. Est se desarrolla
en Human Blood Agar. Todos ests medios especiales deben incubarse por 48
hrs en CO2.
4. ORGANISMOS QUE NO SON UROPATOGENOS, PERO PUEDEN AISLARSE DE
URETRA Y ORINA: Gran variedad de grmenes colonizan la uretra y el rea
genitourinariao, estos incluyen anerobios, Actinomyces spp, Lactobacillus,
Streptococcos alfa-hemoliticos, Staphylococcos coagnegativa, y pequeos
nmeros de gram negativos.
El recuento bacteriano de la muestra es la parte ms importante de urocultivo,
porque indica la presencia de bacteriuria clnicamente significativa. La muestra se
siembra con asa calibrada de 0,01ml y/o 0,001ml. Un recuento mayor de 100.000
UFC/ml es indicativo de UTI.
Recuentos entre 10.000 y 100.000 UFC/ml deben ser evaluados basados en la
informacin clnica, el tipo de muestra enviada y tiempo de obtencin de la muestra.
31
La gran mayora de los casos de cistitis y pielonefritis pueden ser correctamente

interpretados usando estos parmetros.
MATERIALES
-Asa de nicromio
-Asa calibrada
-Portaobjetos y cubreobjetos
-Mecheros
-Cubre bocas
-Tubos
-Gradilla
-Guantes
-Agar Mck, Sal matinol, Sangre y Chromoagar.
METODOLOGIA
HHHHH
Da 1:Homogenizar la
orina, se realiz el examen
fsico.
Da 1: Se sumergi verticalmente el
asa calibrada de 0.1ml y se inocul
en el chromoagar, primero con una
asada recta transversal y de manera
perpendicular se hizo un estriado en
Salmonella
tiphy
forma
de Z. Para
el anlisis
cuantitativo.
Da 1: Posteriormente se inocul
orina en las placas de Agar Mck,
Sal manitol, Sangre mediante la
tcnica de cultivo puro y se
incub 24 horas a 37C, esto es
para realizar al anlisis cualitativo
Da 2: Se realiz el mtodo de Kirby Bauer

(antibiograma) a partir de una muestra
aislada de E. coli uropatgena, se prepar
para ello una solucin de 0.5 de turbidez
mediante la comparacin con el Nefelmetro
de MacFarland 0.5para obtener una solucin
de 1.5 x108 UFC, posteriormente mediante
un hisopo estril se realiz en agar mueller
hinton la inoculacin de estra cerrada,
finalmente se eligieron 4 antibioticos y se
colocaron 4 sensidiscos, se incub por 24hr a
37C, finalmente se anotaron las
observaciones.
Si creci algo, realizar tincin de

Gram para identificar la bacteria
(morfologa microscpica)
Elegir y Montar las pruebas
bioqumicas correspondientes, en
esta ocasin no se obtuvo
crecimiento.
32
RESULTADOS
Se realiz un examen fsico de la orina proporcionada, en donde se observ un aspecto
transparente con un color amarillo mbar y un olor a suigeneris. Luego de incubar la
siembra de orina, se procedi a observar el crecimiento microbiano.
En nuestros medios,(Agar sangre, sal manitol, chromoagar y Agar Mckonkey) no se
observ crecimiento alguno. La paciente est libre de infeccin del tracto urinario.
Para realizar el antibiograma nos fue proporcionada una cepa de E.coli uropatgena en
la cual se observaba claramente su crecimiento mediano y su borde redondeado.
En cuanto a los antibiticos de eleccin y su sensibilidad los resultados fueron:
E. coli
Resistencia
Intermedio
Susceptibilidad
ATCCC
25922
RESULTADO
OBTENIDO
Sensibilidad
Amikacina
30g
Cefotaxime
30g
Ciprofloxaci
na 5g
Trimetoprim
1.25 g
sulfametaxa
zol 23.75g
<-14
15-16
>-17
19-26
27 mm
sensible
<-14
15-22
>-23
29-35
31mm
sensible
<-15
16-20
>-21
30-40
40mm
sensible
<-10
11-15
>-16
23-29
25mm
sensible
CONCLUSIN
En la muestra de orina que se analiz no se encontr crecimiento microbiano. La
paciente no se encontraba cursando un proceso infeccioso el cual fuera significativo.
Podramos decir que la paciente tiene una buena higiene, quiz
Inmunidad elevada o bien simplemente su aparato urinario est trabajado en perfecto
estado.
Fue proporcionada una cepa de E.coli uropatgena del laboratorio para realizar el
antibiograma. Se dio la facilidad de elegir los antibiticos recomendados para esta
bacteria y como resultados se obtuvo una sensibilidad a todos ellos, el antibitico que
present mayor sensibilidad fue la ciprofloxacina 1.25g, de la cual se obtuvo un halo
de inhibicin de 40 mm, posteriormente el cefotaxime, amikacina y finalmente el que
mostr menor inhibicin fue el trimetroprim- sulfametaxol. Segn la Universidad
Nacional del Nordeste la E.coli es 99% sensible a la Fosmomicina, un antibitico
derivado del cido fosfnico que actua sobre la pared celular bacteriana inhibiendo la
sntesis del peptidoglicano.
33
DISCUSIN
Al llegar la muestra se realiz el examen fsico de la orina, y desde ese momento, nos
pudimos percatar de que la orina no se perciba patolgica.
Al momento de realizar el urocultivo en diferentes medios, como Agar Mck, sal
manitol, Agar sangre y Chromoagar no se observ crecimiento microbiano.
La orina de la paciente se perciba normal, olor a suigeneris, color amarillo mbar y un
pH de 6. Con lo que se pudo confirmar la ausencia de infeccin de tracto urinario.
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+Katherine Henrquez (2005). COCOS GRAM (+) PIGENOS DE IMPORTANCIA
MDICA.
http://www.telmeds.org/AVIM/Abacterio/cocos%20gram%20positivos/cocos_
gram_positivos.html#Prueba_de_hemlisis.
+Gardeweg Lori (2002). Urocultivo.
http://www.microbiologia-al-click.com/page8.html.
+ http://www.sampac.es/sites/default/files/docs/UROCULTIVO.pdf
+https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-demicrobiologia/indice/estudio-de-la-sensibilidad-aantimicrobianos/antibiograma
34
PRCTICA
NALISIS DE CEPAS DE REFERENCIA REALCIONADAS A

INFECCIONES DEL TRACTO GENITAL Y DIAGNSTICO DE
INFECCIONES DE TRANSMISIN SEXUAL.

35
RESUMEN
Las infecciones relacionadas con el tracto genital pueden ocurrir tanto en mujeres como en
hombres, entre ellas se encuentran las infecciones de transmisin sexual y en el caso de las
mujeres se puede presentar vaginosis debido prcticas de higiene inadecuadas o cambios en la
mircobiota o pH vaginales, en la presente prctica se analizaron cepas de bacterias que
comnmente causan infecciones en el tracto genital: Neisseria gonorrhoeae, Candida albicans
(levadura)y Streptococcus agalactiae, en las cuales se observaron sus caractersticas
diferenciales como la hemlisis, factor CAMP en S. agalactiae, reduccin de bismuto de C.
albicans asi como sus caractersticas microscpicas en cada una. Adems se analiz una
muestra de exudado vaginal en la que se realiz un conteo de morfotipos en base a la
ponderacin de Nugent y se encontr a la microbiota en un estado intermedio con una
cantidad anormal de Gardnerella sp., y posteriormente se inocul en 4 medios diferentes:
Biggy, Agar sangre, Agar McK y Thayer Martin. En base a los crecimientos y la morfologa
microscpica se seleccionaron las correspondientes pruebas bioqumicas y se obtuvo un
diagnstico positivo para Escherichia coli y, Gardnerella vaginalis agente causal de la vaginosis.
INTRODUCCIN
El aparato reproductor es uno de los encargados de garantizar la reproduccin humana:
femenino y masculino. Ambos se componen de las gnadas (rganos sexuales donde se
forman los gametos y producen las hormonas sexuales), las vas genitales y los genitales
externos. El aparato genital femenino es un tubo que presenta la particularidad anatmica de
poner en comunicacin una cavidad serosa con el exterior. Se le divide en rganos genitales
internos y externos. Los rganos internos comprenden vagina, tero, trompas y ovarios,
mientras que los rganos externos son la porcin de aparato genital limitada por los surcos
genitocrurales, el monte de Venus y el ano, y en profundidad se extiende hasta el diafragma
pelviano accesorio y comprenden: el monte de Venus, la vulva y el perineo ginecolgico.
Mientras que el aparato reproductor o genital masculino se compone de la siguiente manera:
los principales rganos internos son los testculos, el epiddimo, los conductos deferentes y las
glndulas accesorias. El pene, por su parte, es un rgano externo, junto con el escroto, el saco
que envuelve los testculos.
Infecciones de transmisin sexual
Las ITS son infecciones que se propagan principalmente de persona a persona a travs de
contactos sexuales, incluido el sexo vaginal, el sexo anal y el sexo oral. Sin embargo, pueden
transmitirse tambin por uso de jeringas contaminadas o por contacto con la sangre, y algunas
de ellas pueden transmitirse durante el embarazo o el parto, desde la madre al hijo. Hay ms
de 30 bacterias, virus y parsitos diferentes transmisibles por va sexual. Algunos, en particular
el VIH y los treponemas causantes de la sfilis, tambin se pueden transmitir de la madre al hijo
durante el embarazo y el parto, as como a travs de las transfusiones de productos
sanguneos y los trasplantes de tejidos.
36
Las ITS son causadas por bacterias, virus y parsitos. A continuacin figuran algunos de los
microorganismos ms frecuentes y, entre parntesis, las enfermedades que causan.
Bacterias
Neisseria gonorrhoeae (gonorrea o infeccin gonoccica);
Chlamydia trachomatis (clamidiasis);
Treponema pallidum (sfilis);
Haemophilus ducreyi (chancroide);
Klebsiella granulomatis (antes llamada Calymmatobacterium granulomatis, (granuloma
inguinal o donovanosis).
Streptococcus agalagtiae
Ganderella vaginalis
Virus
Virus de la inmunodeficiencia humana (sida);
Virus del herpes simple de tipo 2 (herpes genital) ;
Papilomavirus humanos (verrugas genitales y, en el caso de algunos tipos de estos
virus, cncer del cuello del tero en la mujer);
Virus de la hepatitis B (hepatitis, que en los casos crnicos puede ocasionar cncer de
hgado);
Citomegalovirus (inflamacin de diferentes rganos, como el cerebro, los ojos y los
intestinos).
Parsitos
Trichomonas vaginalis (tricomoniasis vaginal);
Candida albicans (vulvovaginitis en la mujer y balanopostitis [inflamacin del glande y
el prepucio] en el hombre).
Las ITS (Infecciones de transmisin sexual) no tratadas tienen repercusiones muy importantes
en la salud reproductiva, materna y neonatal. Son la principal causa prevenible de infertilidad,
sobre todo en la mujer. El dao de las trompas por la infeccin es responsable del 30 a 40% de
los casos de infertilidad femenina. Adems, la probabilidad de tener embarazos ectpicos
(tubricos) es 6 a 10 veces mayor en las mujeres que han sufrido ITS que en las que no la han
sufrido. En mujeres con infecciones gonoccicas no tratadas, los abortos espontneos y los
partos prematuros pueden llegar al 35%, y las muertes perinatales al 10%. En ausencia de
profilaxis, un 30 a 50% de los lactantes cuyas madres tenan gonorrea no tratada y hasta un
30% de aquellos cuyas madres tenan infecciones clamidiales no tratadas contraen infecciones
oculares graves (oftalmia neonatal) que pueden ser causa de ceguera si no se tratan
rpidamente. En todo el mundo, esta afeccin causa ceguera a unos 1000-4000 recin nacidos
cada ao.
La OMS recomienda un enfoque sindrmico del diagnstico y el tratamiento de las ITS. Aunque
hay muchos patgenos diferentes causantes de ITS, algunas de estas presentan signos (las
manifestaciones objetivas que el paciente o el profesional sanitario observan en la
exploracin) y sntomas (las manifestaciones subjetivas que siente el paciente, como el dolor o
la irritacin) similares o coincidentes. Algunos de estos signos y sntomas son fcilmente
37
reconocibles y sistemticos, constituyendo lo que se denomina un sndrome, que seala la

presencia de uno o varios patgenos. Por ejemplo, en el hombre, el flujo uretral puede ser
causado por la gonorrea aislada, la clamidiasis aislada, o ambas conjuntamente.
Los principales sndromes de las ITS frecuentes son:
flujo uretral;
lceras genitales;
tumefacciones inguinales (bubas);
tumefaccin escrotal;
flujo vaginal;
dolor abdominal bajo;
infecciones oculares neonatales (conjuntivitis del recin nacido).
Gonorrea
La gonorrea puede crecer y multiplicarse fcilmente en reas hmedas y tibias del aparato
reproductivo, incluidos el cuello uterino (la abertura de la matriz), el tero y las trompas de
Falopio (tambin llamadas oviductos) en la mujer, y en la uretra (conducto urinario) en la
mujer y el hombre. Esta bacteria tambin puede crecer en la boca, la garganta, los ojos y el
ano. Uno de los sntomas comunes en los hombres es la sensacin de ardor al orinar o una
secrecin blanca, amarillenta o verdosa del pene que, por lo general, aparece entre 1 y 14 das
despus de contraer la infeccin. Algunas veces a los hombres con gonorrea les duelen los
testculos o se les inflaman.
En las mujeres con gonorrea cuando tienen sntomas, por lo general son muy leves y se
pueden confundir con los sntomas de una infeccin vaginal o de la vejiga. Entre los primeros
sntomas en las mujeres se encuentran una sensacin de dolor o ardor al orinar, aumento del
flujo vaginal o hemorragia vaginal entre perodos. Las mujeres con gonorrea corren el riesgo
de tener graves complicaciones por la infeccin, aun cuando no presenten sntomas o sean
leves. Cuando la gonorrea no se trata, puede ocasionar problemas de salud graves y
permanentes puede propagarse al tero (matriz) o a las trompas de Falopio (oviductos) y
causar enfermedad inflamatoria plvica (EIP). La EIP puede provocar abscesos internos
(pstulas llenas de pus difciles de curar) y dolor plvico crnico (prolongado). Tambin puede
causar suficientes daos a las trompas de Falopio al punto de impedir que una mujer pueda
tener hijos.
Vaginosis bacteriana
Vaginosis bacteriana (VB) es el nombre que se le da a una afeccin que ocurre en las mujeres,
en la cual el equilibrio bacteriano normal en la vagina se ve alterado y en su lugar ciertas
bacterias crecen de manera excesiva. En ocasiones, va acompaada de flujo vaginal, olor,
dolor, picazn o ardor, algunas actividades o conductas alteran el equilibrio normal de las
bacterias en la vagina y exponen a la mujer a un riesgo mayor de contraer la VB: tener una
nueva pareja sexual o mltiples parejas sexuales y utilizar duchas vaginales. Las mujeres con
VB pueden tener un flujo vaginal anormal con un olor desagradable. Algunas mujeres
38
manifiestan sentir un fuerte olor a pescado, especialmente despus de haber tenido relaciones
sexuales. De estar presente, el flujo vaginal suele ser de color blanco o gris y puede ser poco
espeso. Las mujeres con VB tambin pueden sentir ardor al orinar o picazn en la parte
externa de la vagina o ambos sntomas.
Microbiota vaginal.
La microbiota del tracto genital inferior femenino se divide en transitoria y residente. La mayor
parte de la microbiota transitoria proviene de fuentes exgenas, como el ano o la uretra. La
microbiota residente consiste de manera predominante de Lactobacillus spp., con las especies
prevalentes L. crispatus, L. jensenii, L. iners, L. acidophilus y Lactobacillus gasseri,
microorganismos que se consideran, en general, como una lnea fundamental de defensa
contra patgenos potenciales.
Tambin se reportan dentro de la microbiota vaginal especies de Bacteroides, Staphylococcus

epidermidis, especies de Corynebacterium, Peptostreptococcus y Eubacterium, asi como otros
gneros bacterianos: Atopobium vaginae, Megasphera, Leptotrichia y Mycoplasma. Existen,
adems, variaciones tnicas. El microbioma de la vagina es mucho ms heterogneo que lo
que antes se consideraba.
La relacin simbitica entre lactobacilos/hospedero es regulada por las hormonas femeninas
que estimulan a los epitelios para la produccin de glucgeno, el cual, metabolizado a nivel
vaginal, da lugar a cido lctico, un responsable importante de mantener cido el pH en el
epitelio vaginal (<4.5). La microbiota vaginal, en resumen, se caracteriza por la produccin de
cido lctico, la disminucin del pH, la produccin de H2O2, bacteriocinas, as como de la
liberacin de bacterifagos. Influye tambin en otras funciones inmunes, lo cual potencia la
capacidad de estas clulas para reconocer y responder ante la presencia de patgenos
potenciales. Algunos lactobacilos se pueden identificar tambin en el ectocrvix, en tanto que
el endocrvix y tero se consideran como nichos estriles.
Prevencin
El modo ms eficaz de evitar las ITS consiste en no tener relaciones sexuales (sean orales,
vaginales o anales) o tenerlas nicamente en el mbito de una pareja a largo plazo, no
infectada y mutuamente mongama. Siempre que se utilicen sistemtica y correctamente, los
preservativos masculinos de ltex son muy eficaces para reducir la transmisin del VIH y de
otras ITS, tales como la gonorrea, la clamidiasis y la tricomoniasis.
Toma de muestra
Las indicaciones para toma de muestra en mujeres son evitar: tener relaciones sexuales
previas al examen, aplicacin de vulos, medicamentos (5 das antes). No estar en periodo
menstrual.
En el caso de los varones, no realizarse aseo en el rea, no consumir medicamentos 5 das
antes previos al examen.
39
En el caso de las mujeres para la toma de muestra se sanitiza el rea con una gasa, se
introduce con ayuda de un espejo, un hisopo en la vagina hasta llegar casi al borde con la
matriz, se gira y se mueve en el sentido de las manecillas del reloj, se extrae y se coloca en el
medio de transporte de stuart, para el cultivo, se toma otro hisopo y se repite la operacin, se
deposita en un tubo con solucin salina estril, atemperada a 37C, se incuba 1 hr a la misma
temperatura, se toma otro hisopo y se hace una extensin en un portaobjetos, para la tincin
de gram. En el caso de los varones se introduce el hisopo en la uretra se rota y se realiza el
mismo procedimiento.
Descripcin de cepas de referencia
Neisseria gonorrhoeae
Tambin conocido como gonococos, es una especie de bacterias Gram-negativas de caf en
forma de frijol son diplococos, bacterias intracelulares responsables de la infeccin de
transmisin sexual gonorrea, son oxidasa positivos, glucosa positiva y es mvil, normalmente
est aislado en agar Thayer Martin, Martin Lewis y medio Cd. De New York.
Candida albicans
Es un hongo diploide asexual (forma de levadura).2 3 saprfito de la familia de los
Sacaromicetos. Puede asumir patogeneidad provocando la candidiasis; en ese caso se presenta
como una afeccin vaginal (vaginitis), se puede aisalr en agar Dextrosa sabouraud, agar
chromognico ( produce color verde) y se observa como colonias grandes de bordes enteros se
puede incubar en un tubo germinativo y se observa el pseudomicelio producido.
Streptococcus agalactiae
Es una bacteria gram positiva pertenece al grupo B, su forma es en cocos y arreglo
streptococos, es hemoltico, fermenta glucosa, produce cido lctico, el medios de cultivo
adecuado para su cultivo es: agar sangre de carnero, y para pruebas especficas de
identificacin se realiza: CAMP y la hidrolisis de hipurato.
Ganderella vaginalis
Es un gnero de bacterias Gram-variable de -tincin anaerobias facultativas bacterias de los
cuales G. vaginalis es la nica especie. Los organismos son pequeas (1 a 1,5 m de dimetro)
formando no forma esporas, no mviles coccobacillos produce hemolisis.
MATERIALES
Asas de nicromio circular y recta
Portaobjetos
Cubreobjetos
Frasco de vidrio grande con tapa
40
Vela blanca pequea

Mecheros de Bunsen
MATERIAL BIOLGICO
Muestra de exudado genital (vaginal) en medio de transporte Stwart.
Cepas de Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae y Candida albicans, sangre de
carnero (agar sangre), tubo con plasma y la levadura en agar Biggy
EQUIPO
Microscopio compuesto de campo claro
Incubadora
REACTIVOS
Solucin salina fisiolgica estril 0.85%, aceite de inmersin, cristal violeta, safranina, yodo
lugol, alcohol acetona, reactivo de oxidasa (Clorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina), H2O2
3%, rojo de metilo, - Naftol, KOH 40%, FeCl3, reactivo de Kovacs, -naftilamina, cido
sulfanlico, plasma, KOH 10%, KOH 3%
MEDIOS DE CULTIVO
Agar MacConkey (McK)
Agar sangre
Agar Bismuto, glicina, glucosa, levadura (Biggy, por sus siglas en ingls)
Agar Thayer Martin
PRUEBAS BIOQUIMICAS
Rojo de metilo (RM), Voges Proskauer (VP), Fenilalanina deaminasa (FEA),Lisina Hierro Agar
(LIA), Medio Movilidad, produccin de Indol, descarboxilacin de Ornitina (MIO), Caldo de
Urea, Medio Triple Azcar Hierro (TSI), medio de OF glucosa, lactosa y maltosa.
METODOLOGA
Da 1
*Muestra proporcionada por un laboratorio, en medio de transporte Stwart.
Se inocul con el hisopo la muestra en los medios: Agar Thayer Martin, agar sangre, Biggy y
Mck, de los cuales el Thayer Martin y el agar sangre se incubaron en condiciones de
carboxifilia, utilizando el frasco de vidrio con tapa y la vela blanca pequea para crear el
ambiente microaerofilico. Se incubaron a 35C durante 24 horas.
Se realiz un frotis en un portaobjetos, se fij y se realiz una tincin gram.
41
CEPAS
Streptococcus agalactiae se realiz la prueba CAMP en la cual se realiza una estra de S.aureus
en la zona media del agar sangre, posteriormente se coloca un inculo de S. agalactiae (estra
lineal) perpendicular a la estra de S.aureus con una separacin de 2mm aprox, entre ambas
estras, y hacia el otro lado se realiz un estriado con le tcnica de cultivo puro para observar
la morfologa de S. agalactiae, se incub a 37C en condiciones de carboxifilia por 24 hrs.
Candida albicans se inocularon 2 colonias en el tubo con plasma, y se tom con el asa una
colonia para inocularla en el agar Biggy con el mtodo de cultivo puro, se incub a 37C por 24
hrs.
Da 2
CEPAS
Se realizaron las pruebas de diferenciacin: catalasa y adems se analiz la prueba de CAMP
para observar la hemolisis junto con el factor CAMP. Se observ y reporto la morfologa
macroscpica y microscpica del agar sangre.
Candida albicans
Se realiz la observacin microscpica (x10 y x40) del pseudomicelio con tincin azul de
algodn y en fresco, con un inculo del crecimiento obtenido del tubo con plasma. As como la
observacin macroscpica en el agar Biggy y se reportaron las observaciones.
MUESTRA
Se realiz la observacin y recuento de morfotipos: bacilos gram +, cocobacilos gram y
bacilos curvos gram +, en 20 campos.
Se observ la morfologa macroscpica y microscpica de los medios: Agar Thayer Martin, agar
sangre, Biggy y Mck y se anot los resultados observados.
Se realiz la seleccin e inoculacin de las pruebas bioqumicas, apartir del agar McK y sangre.
Da 3
CEPAS
Se realiz la observacin en la laminilla (fijado) de exudado uretral.
MUESTRA
Se realiz la lectura de las pruebas bioqumicas y se analizaron los resultados obtenidos
conforme a la bibliografa.
42
RESULTADOS
ANLISIS DE CEPAS
Forma
Tamao
Color
Elevacin
Borde
Luz reflejada
Luz transmitida
Cosnsistencia
sustrato
Forma
arreglo
Color
Gram
Redonda
Mediano
Gris/caf
Plana
Entero
Si
Si
Cremosa
Sangre ( hemlisis)
Cocos
Streptococos
morado
positivo
Pruebas de diferenciacin
Factor CAMP
Positivo- sinergismo S. aureus y S.

agalactieae.
Hemlisis
Catalasa
hemlisis
Negativo
Candida albicans
Forma
Tamao
Color
Elevacin
Borde
Luz reflejada
Luz transmitida
Consistencia
sustrato
Redonda
Mediana
Caf
Convexa
Entero
Si
No
cremosa
Reduccin de sal de bismuto a bismuto y el
sulfito a sulfuro
43
Crecimiento en tubo con plasma: positivo

TINCIN observacin microscpica
Levaduras ovoides, pseudomicelio (hifas) alargadas
Formacin de pseudomicelio positivo
Formacin de pseudomicelio positivo y presencia de levaduras.
Forma
Azul de algodn
En fresco
Forma
arreglo
Color
Gram
Cocos
diplococos
rosa
negativo
ANLISIS DE LA MUESTRA
*muestra proporcionada por el CAAPS en medio de transporte Stuart.

Mac Conkey
Agar Thayer Martin
Redonda
Colonia 1: redonda
Colonia 2: redonda
Forma
Agar sangre
Redonda
Tamao
Mediano
Grande
Color
Grisacea
Rosa
Elevacin
Convexa
Convexas
Borde
Rizoide
Rizoide
Luz reflejada
No
No
Luz transmitida
No
No
Cosnsistencia
Cremosa
Cremosa
sustrato
No hemlisis
Lactosa positiva
Colonia 1:chico
Colonia 2:mediano
Colonia 1:gris
Colonia 2:blanco
Colonia 1: plana
Colonia 2: convexa
Colonia 1: rizoide
Colonia 2:entero
Colonia 1:no
Colonia 2:si
Colonia 1:no
Colonia 2:no
Colonia 1:cremosa
Colonia 2:mucoide
Colonia 1: proteico
utilizado
Colonia
2:proteico
utilizado
Biggy
no
se
report
crecimiento.
-
44
Agar sangre
Forma
cocobacilos
Arreglo
Simple
Afinidad tintorial Gram -
Mac Conkey
Agar
Thayer Biggy
Martin
Bacilos
1: cocos gram +
No
hubo
2:bacilos gram - crecimiento
Simple
1: diplococos
2: simple
Gram 1:gram +
2:gram-
OBSRVACIN Y RECUENTO DE MORFOTIPOS

Bacilos Gram +
Cocobacilos
Gram Bacilos curvos
variable
1
6
8
0
2
17
23
0
3
59
10
0
4
4
0
0
5
27
0
0
6
29
9
0
7
12
9
0
8
4
0
0
9
14
2
0
10
8
0
0
11
5
10
0
12
13
4
0
13
46
2
0
14
7
4
0
15
18
4
0
16
9
16
0
17
10
6
0
18
9
6
0
19
7
0
0
20
7
6
0
promedio
15.55=16
5.95= 6
0
De acuerdo con el sistema de ponderacin de Nugent: Cada morfotipo se cuantific de 1 a
4 + con respecto al nmero de morfotipos por campo de inmersin en aceite (0, no hay
morfotipos; 1 +, menos de 1 morfotipo; 2 +, 1 a 4 morfotipos; 3 +, 5 a 30 morfotipos
presentes; 4+ son 30 o ms morfotipos presentes.
45
Se obtuvo el valor del promedio de cada morfotipo

Bacilos gram positivos (Lactobacillus spp. morfotipos) = 16 corresponde a un valor de 3+.
Cocobacilos gram variable (Gardnerella vaginalis) = 6 corresponde a un valor de 3+
Bacilos curvos gram negativos (Mobiluncus spp.) =0 corresponde a un valor de 0
Puntuacin total= 1+3=4
Por lo tanto en base a la cuantificacin la microbiota se considera: intermedia.
PRUEBAS BIOQUMICAS
Colonia de Agar sangre: cocobacilos Gram Prueba
Catalasa
Oxidasa
glucosa
lactosa
maltosa
Resultado
negativa
negativa
Positiva
positiva
positiva
Bacilos Gram de agar McK

Prueba
TSI
LIA
FEA
RM
Resultado
Gas: positivo
H2S: negativo
Glucosa: positivo
Sacarosa: positivo
Lactosa: positivo ( tambin se comprob en
Mck)
Deaminacin: negativa
Decarboxilacin: positiva
Deaminacin de fenilalanina: negativa
Fermentacin cido mixta: parcialmente
46
positiva
Ureasa negativa
Movilidad: positiva
Indol: positivo
Decarboilacin de ornitina: positiva
Fermentacin 2-3 butanodiol: negativa
Urea
MIO
VP
Comparacin con metabolismo de Escherichia coli:

Prueba
Indol
Resultado
positivo
Rojo de metilo
VP
H2S
Ureasa
deaminasa
de
fenilalanina
Lisina decarboxilasa
positivo
positivo
negativo
negativo
negativo
Prueba
ornitina
decarboxilasa
Movilidad
Lactosa
Glucosa
Sacarosa
Produccin de gas
Resultado
positivo
positiva
positiva
positiva
positiva
positiva
positivo
Las pruebas obtenidas coinciden en un 98% con E. coli en los valores de referencia
encontrados en la bibliografa.
CONCLUSIN
En el anlisis de cepas se observ a tres cepas de referencia: Streptococcus agalactiae la cual
microscpicamente se visualiz como cocos gram positivos, arreglo streptococos y catalasa
negativa lo cual indica que pertenece al grupo de los Streptococcus sp. Adems se observ la
hemolisis y la prueba para el factor CAMP positiva con un efecto en forma de flecha debido
al sinergismo entre S. agalactiae con la hemolisina esfingomielinasa C producida por S.
aureus. Lo anterior concuerda con lo revisado en la bibliografa (Subhash, 2009). En la cepa de
Candida albicans se observ la reduccin de sal de bismuto a bismuto en el medio Biggy, as
como microscpicamente se observ la formacin de pseudomicelio a partir de la levadura,
tras la incubacin en un tubo con plasma, lo cual es descrito en la bibliogafa (Garca,1998),
tambin se observ la morfologa microscpica de Neisseria gonorrhoeae en la cual se
identific el arreglo de diplococos Gram negativo. En cuanto al anlisis que se realiz a la
muestra proporcionada del CAAPS en medio de transporte, del extendido teido con tincin
Gram se realiz el recuento de morfotipos de acuerdo con el sistema de ponderacin de
Nugent se determin que con una puntuacin total de 4 la microbiota analizada es intermedia,
en base al artculo revisado (Nugent 1991), se recomienda al paciente volver a realizarse ste
examen dentro de uno o dos meses para monitorear la microbiota y evitar que contine un
proceso infeccioso por Gardnerella, de los cuatro medios en los que fue inoculada hubo
crecimiento positivo en 3: agar sangre, en Mac Conkey y dos colonias en agar Thayer Martin de
las cuales se seleccionaron los bacilos gram negativos obtenidos en el agar McK y en base a las
pruebas bioqumicas se demostr la presencia de Escherichia coli en la muestra, lo que es un
47
indicativo de contaminacin a partir del rea anal, por una inadecuada prctica de higiene,
adems en el agar sangre se aisl una pequea colonia cuya morfologa corresponde a
cocobacilos gram negativos y ferment los azucares glucosa, lactosa y maltosa, adems fue
catalasa y oxidasa negativos, lo cual concuerda con las caractersticas presentadas por
Gardnerella vaginalis que tambin fue cuantificada en el extendido inicial en una proporcin
anormal, por lo que se concluye que la presencia de stas dos bacterias son la etiologa de la
posible vaginosis presentada en la paciente, en tanto se recomienda practicar una buena
higiene, as como un segundo examen para monitorear el estado de la microbiota vaginal.
BIBLIOGRAFA
Nugent (1991) Reliability of Diagnosing Bacterial Vaginosis Is Improved by a
Standardized Method of Gram Stain Interpretation, JOURNAL OF CLINICAL
MICROBIOLOGY, Feb. 1991, p. 297-301 Vol. 29, No. 2 .
WESLEY CATLIN (1992) Gardnerella vaginalis: Characteristics, Clinical Considerations,
and Controversies, CLINICAL MICROBIOLOGY REVIEWS, July 1992, p. 213-237 Vol. 5,
No. 3, Copyright 1992, American Society for Microbiology.
Figueroa Paula (2007) http://pathmicro.med.sc.edu/spanish/chapter13.htm.
Subhash Chandra, (2009), Textbook of Microbiology and Inmunology, editorial Elsevier,
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Herrera N.; Gonzalez O. y Villalba R. (2013) Manual Bacteriologa Mdica, UACH,
Prctica Nm. 5 Anlisis de cepas de referencia relacionadas a infecciones del tracto
genital y diagnstico de infecciones de transmisin sexual.
48
PRCTICA
NALISIS DE CEPAS DE REFERENCIA RELACIONADAS A

INFECCIONES DEL TRACTO RESPIRATORIO

49
RESUMEN.
El aparato respiratorio tiene como funcin principal permitir al intercambio gaseoso, p
uede verse afectado en sus diferentes partes por infecciones causadas por virus o bact
erias, las bacterias principales causantes de infecciones respiratorias son los cocos Gra
m negativos como streptococcus pyogenes y S. pneumoniae, staphylococcus aureus y S
. epidermidis, asi como tambin corynebacterium spp. y klebsiella. En la presente prc
tica fueron analizadas stas cepas causantes de IR, las cuales se inocularon en diferent
es medios de cultivo donde se observ tanto la morfologa macroscpica como la micr
oscpica por medio de una tincin de Gram posteriormente se inocul en pruebas bio
qumicas y se hizo lectura, de igual manera se hizo un antibiograma a Streptococcus pa
ra medir su sensibilidad a diferentes antibiticos adems en uno de ellos se hizo un fac
tor CAMP y en Klebsiella se inocul en pruebas bioqumicas API, se obtuvieron resulta
dos y se compar con los parmetros ya estipulados.
INTRODUCCIN.
Considerando que la funcin primordial del aparato respiratorio es poner en contacto
el aire atmosfrico con la sangre para que tenga lugar el intercambio gaseoso, se pued
en diferenciar, por razones didcticas, tres grupos de estructuras, de acuerdo a la funci
n predominante que desempean.
rea de intercambio gaseoso.
Vas de conduccin area.
Caja torcica con funciones de proteccin y movimiento
De igual manera este aparato se enferma por causantes infecciosos como son virus y b
acterias. La facilidad con que se producen las infecciones en el aparato respiratorio var
a segn el estado de salud del individuo. Cabe sealar que algunos grmenes invaden
nicamente algunas partes del aparato respiratorio.
Las infecciones respiratorias (IR) son afecciones muy frecuentes. Constituyen una impo
rtante causa de morbilidad y mortalidad en todas las edades.
Las bacterias que causan IR comnmente son los cocos Gram positivos los cuales son:
El gnero Streptococcus es un grupo formado por diversos cocos Gram positivos que n
ormalmente se disponen en parejas o en cadenas. La mayora de las especies son anae
robios facultativos y algunos crecen nicamente en una atmosfera enriquecida con di
xido de carbono. Sus exigencias nutricionales son complejas y su aislamiento requiere
el uso de medios enriquecidos con sangre o suero. Son capaces de fermentar hidratos
de carbono, son catalasa negativos a diferencia de las especies del genero Staphylococ
cus.
50
Genero Streptococos
Ilustracin 3 clasificacin de estreptococos ms frecuentes.
Streptococo pyogenes
La especie ms importante de los estreptococos del grupo A es S. pyogenes. S. pyogen
es origina diversas enfermedades supurativas y no supurativas. Aunque este microorga
nismo constituye la causa ms frecuente de faringitis bacteriana, la fama de estos micr
oorganismos se debe a las llamativas enfermedades potencialmente motales provocad
as por estas bacterias necrosantes, como evidencian las publicaciones que han inunda
do tanto la literatura cientfica como la prensa sensacionalista. S. pyogenes son cocos e
sfricos que forman cadenas cortas en las muestras clnicas y cadenas de mayor longit
ud en medios de cultivo. Su crecimiento es ptimo en el medio agar sangre enriquecid
o, pero se inhibe cuando se contiene una concentracin elevada de glucosa, esta bacte
ria causa beta hemolisis en el agar sangre y es sensible a bacitracina (importante en pr
uebas de identificacin).
Streptococo pneumoniae
Fue aislado independientemente por Pasteur y se ha dado una mayor comprensin no
obstante la enfermedad neumoccica contina siendo en la actualidad una causa impo
rtante de morbimortalidad, es un coco Gram positivo encapsulado con forma ovalada
o de lanceta y se disponen en parejas o cadenas cortas, anaerobio facultativo exigente
desde el punto de vista nutricional la mayora de las cepas posee capsula externa, tien
e un cido teicico en la pared celular rico en colina que puede reaccionar con una pro
tena srica esta prueba es til para el diagnstico, son alfa hemolisis cuando se incuba
51
n en una atmosfera aerobia, estas bacterias se inhiben con optoquina, S.pneumoniae p

uede fermentar varios hidratos de carbono, siendo el cido lctico el principal derivado
metablico, este crece con dificultad en medios con altas concentraciones de glucosa.
Genero Staphylococcus
El nombre del genero Staphylococcus procede del griego racimo de uvas por tanto se
refiere a que las clulas de estos cocos se desarrollan en un patrn que recuerda a un r
acimo de uvas, sin embargo los microorganismos presentes en muestras clnicas apare
cen como clulas aisladas, en pares o en cadenas cortas, la mayor parte de estos son a
naerobios facultativos, inmviles capaces de crecer en un medio con una elevada conc
entracin de sal y a temperaturas desde los 18 hasta los 40 grados centgrados. Estas b
acterias estn presentes en la piel y las mucosas del ser humano, son conocidos colecti
vamente como estafilococos coagulasa negativos.
Staphylococcus aureus
Causa enfermedad mediante la produccin de toxina o a travs de la invasin directa y
destruccin del tejido, este produce un gran nmero de factores de virulencia, entre lo
s que figuran 5 toxinas citoliticas o hemolisinas. S. aureus es capsulado lo que inhibe la
quimiotasis y la fagocitosis, este es el nico del genero Staphylococcus que contiene la
enzima coagulasa pues ya que convierte el fibringeno en fibrina esta es una prueba d
e diferenciacin entre el gnero.
Staphylococcus epidermidis.
Estos pueden infectar las vlvulas cardiacas naturales y prostesicas. Se cree que la infe
ccin de las vlvulas naturales se debe a la inoculacin del microorganismo en una vlv
ula cardiaca alterada en contraste son la causa principal de endocarditis en las protesis
valvulares. Los staphylococcus epidermidis son cocos grampositivos que forman racim
os cuando crecen en medio de agar pero generalmente se encuentran en forma de cl
ulas nicas o en pequeos grupos de microorganismos. Se pueden utilizar pruebas bio
qumicas sencillas para diferenciarlo entre S. aureus como son la coagulasa y la fermen
tacin de manitol.
Corynebacterium spp. C. diphtheriae es un bacilo pleomorfo que se tie de manera irre
gular.se pueden usar medios de agar selectivos para recuperar este patgeno de mues
tras contaminadas con otros microorganismos. Esta especie se subdivide en 4 biotipos
en funcin de la morfologa de sus colonias y sus propiedades bioqumicas: belfanti, gr
avis, intermedius y mitis.
Corynebacterium se divide en en 10 especies. Los ms comunes son diphteriae, jeikeiu
m, urealyticum, amycolatum, minutssimum.
52
Otro gnero que genera IR es el de Klebsiella, las bacterias pertenecientes a este gner
o poseen una capsula prominente que confiere el aspecto mucoide a las colonias aislad
as y la mayor virulencia de los microorganismos in vivo. Los miembros de este gnero q
ue se aslan con mayor frecuencia son K. pneumoniae y K. oxytoca, los cuales pueden p
roducir una neumona lobular primaria adquirida en la comunidad, estos son gramnega
tivos, fermentan lactosa ya que pertenecen a la familia de enterobacterias.
MATERIALES
2 agares sangre de carnero
2 agares sangre
1 agar sangre con 2% de telurito de sodio
1 agar sal manitol
1 agar Mac Conkey
Cepas (S. pyogenes, S. pneumoniae, S. aureus, S. epidermidis, Corynebacterium
, Klebsiella)
asas de nicromio
Mechero
METODOLOGA.
DA 1
Fueron proporcionadas las siguientes cepas: S. pyogenes, S. aureus, S. pneumoniae, S e
pidermidis, Corynebacterium y Klebsiella y se inocularon en diferentes medios de cultiv
os:
S. pyogenes y S. pneumoniae en agar sangre de carnero y en este mismo se les hizo un
antibiograma con bacitracina y optoquina respectivamente estos dos se incubaron en c
arboxifilia a 37 grados.
S. aureus y S. epidermidis en medios agar sangre y agar sal manitol
Corynebacterium spp en agar sangre con 2% de telurito de potasio
Klebsiella pneumoniae en agar Mack conkey
Los dems se incubaron a 37 grados por 24 horas.
DA 2
Se observ la morfologa macroscpica y microscpica y se inocularon las pruebas bio
qumicas correspondientes: en corynebacterium se inoculo en los medio de O/F de car
bohidratos (maltosa, glucosa, sacarosa y lactosa). Klebsiella en las pruebas API segn s
e indicaba en el inserto.
53
DA 3 Se hizo lectura de las pruebas bioqumicas sistema API y lectura de las pruebas
de Corynebacterium.
RESULTADOS.
MORFOLOGIA MACROSCOPICA
Forma
Tamao
Color
Elevacin
Borde
Luz ref
Luz trans
consistencia
sustrato
catalasa
coagulasa
S. pyogenes
Sangre
redondo
Mediana
Blanco/gris
Plana
Entero
Si
Si
Cremoso
B hemolisis
Negativo
S. pneumoniae
sangre
Redonda
Gris
Grande
Convexa
Entero
Si
No
Viscosa
A
Hemolisis
negativo
S. aureus
sangre
Redonda
Grande
Blanqueisna
Convexa
Entero
Si
No
Cremosa
Gama
Hemolisis
Positivo
manitol
Redonda
Pequeo
Blanca/gris
Convexa
Entero
No
Si
Cremoso
Manitol positivo
Positivo
Positivo
MORFOLOGIA MACROSCOPICA
Cepas
Forma
Tamao
Color
Elevacin
Borde
Luz ref
Luz trans
Consistencia
Sustrato
catalasa
coagulasa
S. epidermidis
sangre
manitol
Redondo
Redondo
Pequeo
pequeo
Griscea
Transparente
Convexa
Plana
entero
Entero
Si
No
No
Si
Cremosa
cremosa
Gama he Manitol negati
molisis
vo
positivo
positivo
negativo
Corynebacterium
sangre
Redondo
Pequeo
Negras
Convexas
Entero
Si
No
solido
Hidrlisis de teluri
to
positivo
Klebsiella
Mck
Irregular
Grande
Rosas
Convexa
Irregular
Si
Si
Cremosa
Lactosa positivo
Negativo
PRUEBAS DE MEDIO DE O/F

cepa
Maltosa
Sacarosa
Glucosa
Lactosa
Caldo de nitrato
s
Corynebacterium
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Red. Nitratos a compu
estos nitrogenados no
gaseosos.
ANTIBIOGRAMA
54
cepa
Streptococcus
Pyogenes
Streptococcus
pneumoniae
Antibiograma
Bacitracina
1 cm
Optoquina
2 cm
Sensibilidad
Intermedio
Sensible
Sistema API
Los resultados realizados a Klebsiella fueron los siguientes:
Se consult en el sistema apiweb

El software consultado del sistema API arroj la siguiente determinacin en cuanto a la
especie de Klebsiella
Cepa: Klebsiella pneumaniae con un 97.6%

MORFOLOGIA MICROSCOPICA
cepa
S. pyogenes
Arreglo
Cadenas
55
S. pneumoniae
S. aureus
S. epidermidis
Corynebacterium
Klebsiella pneumo
niae
Diplococos
Racimos
Racimos
Agrupaciones r
amificadas
Simple
CONCLUSIN
En esta prctica podemos observar que la especie de Corynebacterium es diphtheriae
y que en la bibliografa dice que una prueba de diagnstico es el medio de agar sangre
con telurito de potasio lo que da una produccion de colonias negras y es diferencial ent
re las dems especies ya que las otras pruebas no nos ayudan mucho.
Para S. pyogenes segn la literatura los resultados fueron obtenidos bien ya que nos di
o beta hemoltico, catalasa negativo, tiene sensibilidad a bacitracina.
En S. pneumoniae la prueba de mayor significancia es la sensibilidad a optoquina y la al
fa hemolisis segn la bibliografa, en S. aureus la prueba de significancia es coagulasa p
ositivo y en S. epidermidis es coagulasa negativa ya que pertenece al grupo se staphylo
coccus coagulasa negativo. (koneman, Macfaddin).
Segn el sistema api en nuestras pruebas si nos dio el resultado de klebsiella pneumon
iae pues dio con un 97.6 % taxn significativo klebsiella pneumoniae.
BIBLIOGRAFA
http://www.salud.gob.mx/unidades/cnts/pdfs/LABS-manual-vigilancia-serotipo
56
s.pdf
Murray, P., Rosenthal, K., Pfaller, M. (2009), microbiologia medica 6ta edicion.
Editorial Elvesier, Espaana.
TM Pedro Alarcon, diagnostico microbiologico para genero streptococcus., insti
tuto de salud publica, ministerio de salud.
Microbiologia clinica medios de cultivo curso 2012-2013 pdf
Manual de laboratorio de bacteriologia ( O gonzalez, R villalba, Norma).
Diagnostico microbiologico, Koneman, 6ta edicion, editorial medica panamerica
na.
Pruebas bioquimicas para la identificacion de bacterias de importancia clinica
MacFaddin, 3era edicion, editorial medica panamericana.
57
PRCTICA
DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE INFECCIONES DE VAS

RESPIRATORIAS ALTAS:
FARINGE, NASOFARINGE, CONJUNTIVA Y ODOS

58
RESUMEN
En est practica se consigui una muestra de exudado farngeo de un paciente de
Hospital, se inoculo un Agar sangre de cordero, un Agar McConkey y un Agar sal
manitol. Se observo gran crecimiento en el agar sangre y otro poco en el Agar sal
manitol, se realiz un frotis y una tincin de gram y se observaron 3 tipos de colonias
distintas, procedimos con diferentes pruebas diferenciales para confirmar el
diagnstico
INTRODUCCIN
Las bacterias de la flora normal que viven en la garganta son clasificadas como
bacterias anaerobias. Esto significa que estas bacterias no pueden sobrevivir en un
ambiente oral con alto grado de oxidacin. Florecen y se multiplican cuando hay una
falta de oxgeno en el ambiente oral, lo que se llama una condicin anaerobica. De ah
que es muy probable que se siten en sitios de la cavidad bucal donde no hay mucho
oxgeno, como la parte trasera de la lengua y de la garganta, entre los dientes, en las
bolsas
periodontales
y
en
otros
sitios
difciles
de
alcanzar.
Las bacterias que se encuentran en la parte trasera de la lengua son la causa principal
en la mayora de los casos de mal aliento. Si se mira en el espejo y se abre la boca, se
puede ver una capa amarilla-blanca, signo de la presencia de estas bacterias en la
parte trasera de la lengua. Una de las caractersticas principales de la halitosis es una
lengua blanca causada por una mezcla de gases sulfurosos, saliva y moco.
No todas las bacterias que son aisladas en un cultivo farngeo son patgenas o estn
relacionadas como causa de faringits bacteriana.
La primera etiologa de faringitis es viral. Dentro de la etiologa bacteriana, la causa
ms comn de faringitis es el estreptococo beta hemoltico del grupo A
o Streptococcus pyogenes..
Dentro de la etiologa bacteriana tambin podemos encontrar otros patgenos
comoCorynebacterium diphteriae, Neisseria gonorrhoeae. Siendo solo para estos
patgenos junto con el Streptococcus pyogenes para los cuales est recomendado el
tratamiento antibitico.
Otros patgenos que son causas raras de faringitis como Arcanobacterium
haemolyticum, Francisella tularensis, Yersiniaenterocolitica, Yersinia pestis,
Mycoplasma pneumoniae y Chlamydophila pneumoniae tambin pueden requerir un
manejo antibitico.
Haemophilus
influenzae,
Streptococcus
pneumoniae,Streptococcus del
grupo viridans, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, y Moraxella
catarrhalis se consideran flora normal de faringe y orofaringe, por lo que no son
59
considerados como patgenos, entrando en este mismo contexto las levaduras

de Candida sp.
Tambin es normal encontrar otras bacterias propias de la flora intestinal como
Enterobacterias (E. coli) P. aeruginosa, Enterococcus sp. entre otras sin que estas
guarden relacin con la etiologa de la faringitis.
El cultivo del exudado farngeo o frotis farngeo se realiza utilizando un hisopo especial.
Una muestra tomada de la pared posterior de la garganta se coloca en un plato
especial (cultivo) que permite el crecimiento de las bacterias. El tipo especfico de
infeccin se determina utilizando anlisis qumicos. Si no hay crecimiento de bacterias,
el cultivo es negativo y la persona no tiene una infeccin.
En una faringitis se puede observar la parte posterior de la garganta y las amgdalas,
que se inflaman e irritan, lo cual provoca dolor de garganta particularmente molesto al
tragar. Es posible que la garganta y las amgdalas presenten manchas o una capa de
color amarillo y, quizs, los ganglios linfticos del cuello estn inflamados. La faringitis
estreptocccica se presenta comnmente en nios en edad escolar. La infeccin puede
provocar dolor de cabeza, dolor de estmago, nuseas, vmitos y languidez. Las
infecciones estreptocciccas de la garganta no suelen ir acompaadas de sntomas de
resfro, como tos, estornudos, congestin o mucosidad nasal.
Si bien los sntomas de la faringitis estreptoccicca suelen desaparecer en unos pocos
das sin tratamiento directo, los mdicos recetan antibiticos con el fin de evitar
complicaciones relacionadas, como la fiebre reumtica. El frotis farngeo puede ayudar
a determinar las causas del dolor de garganta. Con frecuencia, el dolor de garganta se
debe a un virus, pero el cultivo permite determinar si se debe a una bacteria
estreptoccicca para que los mdicos puedan brindar el tratamiento adecuado.
Se puede realizar distintas tomas de muestra, para identificar una infeccin de vas
respiratorias altas.
Para la muestra de nariz, faringe y nasofaringe
Coger 2 hisopos impregnados en un caldo (TSB) y tocar el fondo de la garganta,
amgdalas y lugares con inflamacin, exudado o ulceracin. No tocar labios ni lengua.
Un hisopo se utiliza para el examen microscpico (tincin de Gram) y el otro para el
cultivo microbiolgico: agar sangre, agar chocolate, etc.
Para la muestra de odo
Las muestras se toman tambin con un hisopo previamente impregnado en caldo
(TSB).
60
Hay que tener en cuenta que no son zonas estriles, y que por tanto en ellas hay biota
saprfita. Por ello, se deben procesar las muestras inmediatamente, pero si no es
posible, se puede usar un medio de transporte como Stuary.
Particularidades en la toma de la muestra
Si se trata de Haemophilus, Bordetella o Neisseria meningitidis, que pueden tener
alta abundancia en nasofaringe, la toma de muestra se hace con escobillones flexibles,
introducindolos por la nariz hasta la faringe posterior, o bien por la boca hasta detrs
de la vula.
Para los portadores de Staphylococcus y Streptococcus se suelen emplear frotis de la
parte anterior de la nariz.
MATERIAL Y EQUIPO
Bata
Guantes
Cubre bocas
Asa de Nicromio
Mechero
Hisopo (medio de transporte de la muestra)
Portaobjetos
Incubadora
Microscopio
Reactivo
Agar Sangre de Cordero
Agar McConkey
Agar Sal manitol
Cristal violeta
Yodo lugol
Alcohol cetona
Safranina
Agua destilada
Solucin salina
METODOLOGA
Diagrama de flujo:
+De la muestra problema ya obtenida, con el hisopo del medio de transporte

sembrar en cada uno de estos medios: Agar sangre de cordero, McConkey, y sal
manitol.
61
+Despues dejar incubar por 24 hrs a 37C (el Agar sangre colocarlo en
condiciones parciales de CO2 en un frasco tapado con una vela encendida).
+A las 24 hrs se observa el crecimiento de cada colonia y se hace morfologa
macroscpica y microscpica de cada una para luego realizar pruebas
diferenciales.
+En agar sangre se hace pruebas bioqumicas de catalasa y coagulasa
37C
MUESTRA
EXUDADO
24 hrsFARINGEO
Frotis
Con Giemsa
o Gram
Si hay
bacterias
intracelulares,
puede ser
Chlamydia.
Agar Sangre
de cordero
CO2
Agar
Mc Conkey
Carboxifilia
37C
24 hrs
Aerobiosis
37C
24 hrs
Podemos tener
Pyogenes,
Haemophilus o
Hemoliticos
Gram
Puede ser
Klebsiella o
Pseudomona
Agar
Salmanitol
Aerobiosis
37C
24 hrs
Podemos tener
S.aureus
Si se observan
cocobacilos en la
muestra, utilizas Agar
chocolate para confirmar
la presencia de
Haemophilus.
62
Catalasa+
Sthaphylococcus
Hacemos
Gram+
Manitol y
coagulasa
Cocos
CatalasaHemolisis
Streptococcus
Gram Neisseria
Acinetobacter
Moraxella
Oxidada
O/F glucosa, maltosa, sacarosa
hemolisis realizar
sensibilidad a la Bacitracina
o factor Camp
hemolisis, no se realiza prueba,
se reporta como Streptococcus
de la flora normal
hemolisis realizar sensibilidad
a la Autoquina, sino es sensible
se reporta como Streptococcus
de la flora normal
Gram + Corynebacterium
-Reduccin de Telurito
-Caldo de Nitratos
-Medio Off, glucosa, Lactosa, Sacarosa, Maltosa
Bacilos
Gram
Klebsiella
Haemophilus (No crece en MCK)
Kit de GramSi se sospecha de Haemophilus se realiza
TSI
una prueba de satelismo,
LIA
Requiere de factores X y V.
CITRATO
RM
VP
MIO
RESULTADOS
Morfologa Macroscpica
Analisis
Agar sangre
Agar Sal
Manitol
Colonia
Tamao
Forma
Borde
Elevacion
Color
Ref.luz
Mediana
Redonda
Rizoide
Convexa
Blanco
Si
Chica
Redonda
Entero
Plana
Gris
No
Chica
Redonda
Entero
Plana
Blanco
Si
Agar McConkey
NO HUBO
CRECIMIENTO,
YA QUE NO
HABIA GRAM-
Chica
Redonda
Entero
Convexa
Amarillenta
Si
63
Trans. Luz
Consistencia
Sustrato
No
No
No
Si
Viscosa
Viscosa
Viscosa
Viscosa

Salmanitol +
hemolisis hemolisis hemolisis
Morfologa Microscpica
Tincin de Gram
Colonias
A. sangre 1
Levaduras
A. sangre 2
Cocos Gram+
A. Sangre 3
Cocos Gram+
Sal Manitol
Cocos Gram+
2 A.S
-
3 A.S
+
(-), sin halo de
inhibicin.
Sal-Manitol
+
Pruebas Bioqumicas
Colonia
Catalasa
Sensible a
Bacitracina
1 A.S
-
CONCLUSIONES
Por medio de los resultados obtenidos, podemos deducir que el microorganismo que
est produciendo la infeccin de garganta es el Sthaphylococcus aureus, ya que la
morfologa macroscpica (beta hemolisis), microscpica (Gram+ racimos), adems de
las pruebas bioqumicas (catalasa, coagulasa y manitol positivas) son correspondientes
a esta bacteria patgena.
BIBLIOGRAFIA
http://www.infectologiapediatrica.com/blog/tag/infeccion-de-garganta/
http://www.iqb.es/cbasicas/farma/farma04/b001.htm
http://kidshealth.org/parent/en_espanol/medicos/labtest11_esp.html
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003746.htm
http://html.rincondelvago.com/muestras-de-la-nariz-faringe-nasofaringe-yoido.htm
Microbiologa y Parasitologa mdicas, Tay, tercera edicin, Mndez editores,
pgs. 48, 70, 151-155
64
PRCTICA
DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE INFECCIONES DE VAS

RESPIRATORIAS BAJAS: DIAGNSTICO DE TUBERCULOSIS

65
RESUMEN
La tuberculosis es una enfermedad infecciosa que suele afectar a los pulmones y es causada
por una bacteria (Mycobacterium tuberculosis), la cual es una bacteria cido alcohol
resistente, En 2012 en Amrica se notificaron casi 220 mil casos y se estima que ocurrieron
unas 19 mil muertes por tuberculosis. En la presente prctica se analiz un cultivo de
tuberculosis (cepa de referencia) en el medio Lowenstein-Jensen, se describieron las
caractersticas morfolgicas macroscpicas propias de M. tuberculosis, las cuales se
observaron color beige y duras de aspecto granular. Se realiz tambin el anlisis de una
muestra previamente proporcionada, se realiz una baciloscopa, mediante la tincin de
Kinyoun y se obtuvo un resultado de Positivo ++ ya que se observ en promedio ms de 1
bacteria por campo en los 100 campos que fueron analizados del frotis.
INTRODUCCIN
La tuberculosis es una enfermedad infecciosa que suele afectar a los pulmones y es causada
por una bacteria (Mycobacterium tuberculosis). Se transmite de una persona a otra a travs de
gotculas generadas en el aparato respiratorio pacientes con enfermedad pulmonar activa.
Mycobacteriumsp.
Las bacterias se clasifican en el gnero Mycobacterium en funcinde: 1) su capacidad de
acidorresistencia; 2) la presencia de cidos miclicos con 60 a 90 tomos de carbono, un
elevado contenido (61%-71%) de guanosina+ citosina (G + C) en su cido desoxirribonucleico
(ADN). Las micobacterias poseen una pared celular compleja y rica en lpidos. Esta pared
celular es la responsable de muchas de las propiedades caractersticas de las bacterias (p. ej.,
su acidorresistencia, crecimiento lento, resistencia a detergentes, resistencia a los antibiticos
antibacterianos frecuentes, antigenicidad, formacin de agregados).
Mycobacterium tuberculosis.
M. tuberculosis es un patgeno intracelular capaz de producir infecciones de por vida.
En el perodo de exposicin, M. tuberculosis ingresa en las vas respiratorias y las diminutas
partculas infecciosas alcanzan los alvolos, y son digeridas por los macrfagos alveolares. A
diferencia de la mayor parte de las bacterias fagocitadas, M. tuberculosis impide la fusin del
fagosoma con los lisosomas. No obstante, el fagosomaes capaz de fusionarse a otras vesculas
intracelulares para facilitar el acceso del patgeno a nutrientes y su proceso de replicacin
intravacuolar. Las bacterias fagocitadas tambin pueden eludir la destruccin mediada por los
macrfagos con la formacin de intermediarios reactivos del nitrgeno y los aniones
superxidoal catabolizar catalticamente los oxidantes generados.Aunque los macrfagos
alveolares inician el proceso de fagocitosis, los macrfagos circulantes y los linfocitos son
atrados hasta los focos de infeccin por las bacterias, los restos celulares y los factores
quimiotcticos propios del organismo anfitrin. La caracterstica histolgica de este foco es la
formacin de clulas gigantes multinucleadas a partir de los macrfagos fusionados, conocidas
tambin como clulas de Langhans. Los macrfagos infectados se pueden diseminar tambin
66
durante la fase inicial de la enfermedad a los ganglios linfticos locales, as como al torrente
circulatorio y a otros tejidos (p. ej., la mdula sea, bazo, rones, sistema nervioso central).
La replicacin intracelular de las micobacterias estimulatanto a los linfocitos T cooperadores
(helper) (CD4+) como a los linfocitos T citotxicos (CD8+). La activacin de los linfocitos CD4+
lleva a la produccin de anticuerpos, pero esta respuesta no es eficaz en el control de la
infeccin por micobacteriaspuesto que las bacterias se encuentran protegidas en su
localizacin intracelular. Los linfocitos T liberan tambin interfern-y y otras citocinas que
activan a los macrfagos.
Los granulomas ms grandes o caseosos se encapsulan con fibrina y protegen eficazmente a
las bacterias de la eliminacin producida por los macrfagos. Las bacterias pueden permanecer
latentes en esta fase o se pueden reactivar algunos aos ms tarde, cuando disminuye la
respuesta inmunitaria del paciente como consecuencia de la edad o por una enfermedad o un
tratamiento inmunosupresor. Este es el motivo de que la enfermedad pueda no desarrollarse
hasta etapas tardas de la vida en pacientes expuestos a M. tuberculosis.
TIPOS DE TINCIONES PARA MICOBACTERIAS
Bsicamente hasta hoy en da existen tres procedimientos distintos para la coloracin de
bacterias cido alcohol resistentes:
Tincin de Ziehl-Neelsen
Tincin de Kinyoun
Tincin con fluorocromoauramina.
CULTIVO
Lowenstein-Jensen: Es el ms utilizado en los laboratorios clnicos, este es menos inhibitorio
a bacterias contaminantes que el medio de petragnani; posee gran ventaja, ya que los estudios
cromognicos y pruebas bioqumicas son ms exactas cuando son realizados a partir de
subcultivos provenientes del medio de Lowenstein-Jensen.
Petragnani: Posee gran cantidad de agente inhibidor, es muy utilizado en cultivos a partir de
muestras muy contaminadas.
American ThoracicSociety (ATS): No es recomendable para muestras de esputo, este medio
es muy utilizado para muestras de LCR, lquido pleural y biopsias de tejidos (muestras
regularmente estriles).
Middlebrook 7H10 y 7H11: Estn preparados en placas transparentes, permitiendo la
observacin precoz de microcolonias de micobacterias en un tiempo de 10 a 12 das de
incubacin en lugar de los 18 a 24 das en promedio requeridos por otros medios. La rapidez
de estos medios de cultivo, es la adicin de biotina y catalasa.
IDENTIFICACIN (PRUEBAS BIOQUMICAS)
67
La identificacin de Mycobacterium tuberculosis mediante pruebas bioqumicas es hasta

ahora la prueba diagnstica ms confiable y utilizada, sin embargo, la desventaja de las
pruebas bioqumicas es el tiempo que tarda en obtener los resultados finales. Esta situacin ha
dado lugar al perfeccionamiento de tcnicas moleculares o cromatogrficas.
Aunque la tuberculosis puede afectar a cualquier rgano, la mayora de las infecciones en
pacientes inmunocompetentescon estn restringidas a los pulmones. El foco pulmonar inicial
se encuentra en los campos pulmonares medios o inferiores, donde los bacilos tuberculosos se
pueden multiplicar libremente. Se activa la inmunidad celular del anfitrin, y cesa la
replicacin de las micobacterias en la mayora de los pacientes entre 3 y 6 semanas despus de
la exposicin al microorganismo. Alrededor del 5% de los pacientes expuestos a M.
tuberculosis evoluciona hasta desarrollar una enfermedad activa a lo largo de los 2 aos
siguientes, y entre un 5% y 10% desarrolla la enfermedad en una fase posterior. La
probabilidad de que la infeccin progrese a una enfermedad activa depende tanto de la dosis
infecciosa como del estado inmunolgico del paciente. Por ejemplo, alrededor del 10% de los
pacientes infectados por VIH y bajo recuento de linfocitos T CD4 desarrolla enfermedad activa
durante el ao siguiente a la exposicin en comparacin con el 10% de riesgo de enfermedad
durante toda la vida en los pacientes VIH negativos. En los sujetos con una infeccin por VIH,
la enfermedad suele aparecer antes del inicio de otras infecciones oportunistas, se disemina
con frecuencia dos veces mayor a localizaciones extrapulmonares y puede conducir
rpidamente a la muerte. Los signos y sntomas clnicos de la tuberculosis son el reflejo de la
localizacin de la infeccin y la enfermedad primaria normalmente se restringe a las vas
respiratorias inferiores. La enfermedad tiene un comienzo insidioso. Los pacientes suelen
tener sntomas inespecficos como malestar general, adelgazamiento, tos y sudoracin
nocturna. El esputo puede ser escaso o hemoptsico y purulento. La produccin de esputos
hemoptsicos se asocia a la destruccin tisular (enfermedad cavitada). El diagnstico clnico se
apoya en: 1) indicios radiolgicos de enfermedad pulmonar, resultados positivos en la prueba
de reactividad cutnea, y 3) deteccin en el laboratorio de micobacterias al microscopio o en
cultivo. En los pacientes con enfermedad activa, como neumonitis o formacin de abscesos y
cavitacin, suelen estar afectados los dos lbulos superiores o tan slo uno de ellos. Como se
ha comentado previamente, la tuberculosis puede ser el resultado de la diseminacin
hematgena de los bacilos durante la fase inicial de multiplicacin. Puede no haber indicios de
enfermedad pulmonar en pacientes con tuberculosis diseminada (miliar)
La infeccin por M. tuberculosis suele ser asintomtica en personas sanas, dado que su
sistema inmunitario acta formando una barrera alrededor de la bacteria. Los sntomas de la
tuberculosis pulmonar activa son tos, a veces con esputo que puede ser sanguinolento, dolor
torcico, debilidad, prdida de peso, fiebre y sudoracin nocturna. La tuberculosis se puede
tratar mediante la administracin de antibiticos durante seis meses.
Una de cada cinco personas afectadas con tuberculosis en Amrica desconoce que tiene la
enfermedad, ya sea porque no accede a los servicios de salud o no se le detecta la enfermedad
de manera adecuada, segn estimaciones de la Organizacin Panamericana de la
Salud/Organizacin Mundial de la Salud (OPS/OMS).
68
En 2012 se notificaron casi 220 mil casos y se estima que ocurrieron unas 19 mil muertes por
tuberculosis en Amrica. Se calcula que, adems, unas 60 mil personas no fueron diagnsticas
o notificadas a tiempo. Esta situacin no slo pone en riesgo la vida de quienes padecen esta
enfermedad, sino que tambin perpeta la transmisin de la tuberculosis, y genera problemas
socio-econmicos para la persona y sus comunidades.
MATERIALES
Mechero de Bunsen
Portaobjetos
Cerillos
Aplicadores de madera
Algodn
MATERIAL BIOLGICO
Muestra de expectoracin proporcionada por el centro de control de Tuberculosis de
Chihuahua.
CEPA DE REFERENCIA
Frotis
Cultivo de M. tuberculosis
EQUIPO
Microscopio
Mecheros
Campana biolgica
REACTIVOS
Aceite de inmersin
Tincin de Kinyoun
Fenol 5%
EQUIPO DE SEGURIDAD PERSONAL
Bata para uso de laboratorio
Guantes de ltex (doble)
Cubreboca (doble)
69
METODOLOGA
Se prepar previamente todo el material para realizar la baciloscopa, y se coloc en la
campana biolgica encendiendo la funcin de extraccin de aire. Cada responsable de realizar
el frotis se coloc previamente el equipo de seguridad adecuado.
Una vez encendido el mechero de alcohol, se coloc entre la persona y la muestra para evitar
cualquier riesgo de infeccin, se parti el aplicador en dos partes y se tom una porcin
purulenta del esputo, se coloc sobre el portaobjetos y se realiz un extendido en forma oval
de 2 cm por 1 de ancho aprox. Se dej secar a temperatura ambiente y posteriormente se fij
con calor.
Para realizar la tincin se agreg fuscina bsica fenificada por 5 minutos, luego se realiz un
lavado con alcohol cido, y posteriormente se aplic la tincin de contraste con azul de
metileno por un minuto. Se dej secar a temperatura ambiente.
Se realiz la observacin del frotis en el microscopio utilizando el objetivo de 100 X, junto con
aceite de inmersin y se realiz el conteo de BAAR, en 100 campos. Finalmente se realiz el
reporte segn la normatividad establecida.
De igual forma se analiz la morfologa macroscpica del cultivoLowenstein-Jensen, de una
cepa de referencia.
RESULTADOS
Muestra proporcionada por el centro de control de tuberculosis en Chihuahua.
Paciente: Miguel Tarango
Tipo de muestra: Esputo.
CULTIVO Cepa de referencia
MORFOLOGA MICROSCPICA
CARACTERISTICA
FORMA
ARREGLO
AFINIDAD TINTORIAL
MUESTRA ANALIZADA
Bacilo curvo
En cadena y libres
Rojo o rosa Tincin Kinyoun
BAAR
MORFOLOGA MACROSCPICA
CEPA DE REFERENCIA
Medio de cultivo
Forma
Color
Tamao
Lowestein- Jensen
redonda
beige
mediano
70
Borde
Elevacin
Luz transmitida
Luz reflejada
consistencia
irregular
convexa
no
no
Dura, seca y aspecto polvoso(granulares)
BACILOSCOPA- Muestra.
Lectura de los 100 campos
1
1
1
3
2
0
2
4
2
1
0
1
1
1
3
0
2
1
1
0
0
1
2
1
0
2
2
1
5
0
0
3
1
2
3
1
0
1
4
0
2
2
0
1
3
2
1
3
1
0
1
2
0
1
2
5
3
1
1
0
1
1
1
1
0
1
4
1
1
0
3
2
1
2
1
1
7
0
2
2
2
3
3
1
3
2
0
2
3
5
2
3
1
1
0
3
1
2
3
0
Total de Bacilos cido alcohol resistentes en 100

campos tiles = 159 BAAR
Promedio= 1.59 BAAR por campo.

De acuerdo con el estndar de informe establecido a nivel internacional para reportar
tuberculosis y segn la NORMA Oficial Mexicana NOM-006-SSA2-2013, Para la prevencin y
control de la tuberculosis.
El resultado es POSITIVO ++, de uno a 10 bacilos en promedio por campo en 100 campos
observados.
71
CONCLUSIN
Se analizaron 2 de las tcnicas ms utilizadas y de buena sensibilidad para el diagnstico de
tuberculosis, conociendo la situacin actual de nuestro pas, se concluye que es de suma
importancia conocer las formas de diagnstico bsico para tuberculosis as cmo lo dictado
por la NOM- 006- SSA2-2013. En el cultivo se analizaron las caractersticas morfolgicas
macroscpicas, coincidiendo con lo descrito en la bibliografa, se observaron colonias de
consistencia dura, color beige o amarillentas y convexas, las cuales crecieron en el medio
Lowestein- Jensen, el cual mediante la adicin de glicerina nos ayud a identificar a
Mycobacterium tuberculosis de otras especies, adems el colorante verde malaquita ayud a
aislarla. En cuanto a la baciloscopa, fue realizada a la muestra en la cual visualizamos las
caractersticas microscpicas de M. tuberculosis se observaron bacilos delgados, curvos y
teidos rosa fucsia, lo cual coincide con lo descrito en las indicaciones de la Organizacin
Panamericana de la Salud. Adems se realiz el conteo de BAAR en 100 campos segn lo
establecido por la norma, y el resultado obtenido fue POSITIVO ++, debido a que el promedio
por campo es de 1.59, es decir se encuentra entre el rango de 1 a 10 bacterias por campo, en
100 campos observados, se recomienda que resultados positivos sean entregados
inmediatamente para que el mdico a cargo, tome la decisin en cuanto al tratamiento del
paciente, adems la baciloscopa es de gran ayuda para monitorear la efectividad del
medicamento en un paciente, para saber si el medicamento funciona es necesario que en la
muestra ya no se encuentren BAAR.
BIBLIOGRAFA
Sequeira,Barrera, 2008, Manual para el diagnstico bacteriolgico de tuberculosis,
Organizacin Panamericana de la Salud.
http://files.sld.cu/tuberculosis/files/2009/12/tb-labs-baciloscopia1.pdf.
Murray P. Microbiologa Mdica,2007, 5 edicin, Editorial ELSEVIER, Madrid pg 294.
NORMA Oficial Mexicana NOM-006-SSA2-2013, Para la prevencin y control de la
tuberculosis. http://files.sld.cu/tuberculosis/files/2009/12/tb-labs-baciloscopia1.pdf
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/lowesteinjensen.htm
http://www.who.int/topics/tuberculosis/es/
http://www.cdc.gov/tb/topic/testing/default.htm
http://www.paho.org/hq/index.php?option=com_content&view=article&id=301&Item
It=394
72
PRCTICA
y
9 y 10
NALISIS DE CEPAS DE REFERENCIA RELACIONADAS A DE CEPA DE

REFERENCIA
RELACIONADA A SEPTICEMIA
DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE INFECCIONES EN HERIDAS

73
RESUMEN
Las lesiones de la piel son una de las enfermedades ms frecuentes en Amrica latina y
en Mxico, para realizar el diagnstico, es necesaria la obtencin de una muestra de la
lesin, a partir de un hisopo en medios Mck y agar sangre, adems de la tincin de
esporas para detectar la presencia de Bacillus spp, adems de que fue necesaria la
inoculacin de medios como SIM a 37 y 25C para Listeria y adems de un medio para
anaerobios para la muestra.
INTRODUCCIN
Es una enfermedad en la cual el cuerpo tiene una respuesta grave a bacterias u otros
microorganismos. Esta respuesta se puede denominar sndrome de respuesta
inflamatoria sistmica (SRIS). Uno de los indicadores fundamentales de la sepsis local
es la acumulacin de pus dentro de un absceso o que exuda desde una fstula o de una
superficie mucocutnea. Tambin pueden encontrarse diferentes grados de
enrojecimiento, dolor y tumefaccin. Las infecciones de las heridas externas incluyen
las asociadas con una lesin traumtica o con lceras por decbito (escaras),
picaduras o mordeduras de animales o de personas, quemaduras o cuerpos extraos
en la piel o las mucosas, puede existir la diseminacin directa de bacterias desde sitios
adyacentes de infeccin o por la rotura de una vscera, en especial, el intestino grueso.
Las bacterias anaerobias suelen ser un problema cuando el sitio de infeccin se
encuentra adyacente al intestino o cuando la herida est contaminada por microbiota
fecal.
Las bacterias Gram positivas aerobias, las bacterias anaerobias estrictas y los bacilos
Gram negativos aerobios suelen causar infecciones en los pacientes diabticos.
Las heridas superficiales suelen estar colonizadas por bacterias ambientales; a menudo
la muestra obtenida con un hisopo no refleja la verdadera causa del proceso de
infeccin.
Si no se puede obtener el material con una aguja y una jeringa, se puede tomar una
muestra de la superficie. Si bien se utilizan comnmente hisopos tambin se han
utilizado paos y papeles filtro. Se debe realizar una limpieza cuidadosa del sitio, como
ya se describi. Puede ser necesario separar los bordes de la herida con el pulgar y el
ndice de una mano o realizar un pequeo corte con una hoja de bistur en un absceso
cerrado antes de introducir la punta del hisopo en el interior de la lesin con la otra
mano. Se coloca entonces de inmediato el hisopo en un recipiente apropiado de
transporte.
Las bacterias comnmente encontradas en lesiones de piel son:
74
Cocos Gram positivos que presentan un arreglo en forma de racimo (estafilococos),

algunas cepas presentan capsula, son inmviles, anaerobios facultativos y halfilos.
Causa enfermedad mediante la produccin de toxina o a travs de la invasin directa y
la destruccin del tejido. Las manifestaciones clnicas de algunas enfermedades
estafiloccicas se deben casi exclusivante a la actividad de la toxina, mientras que
otras afecciones son consecuencia de la proliferacin de los microorganismos, la cual
da lugar a la formacin de abscesos y la destruccin tisular.
Bacillus spp.
Bacilos Gram positivos que se agrupan en cadenas largas, y se caracterizan por poseer
endoesporas en la parte central del bacilo en forma ovalada, es aerobio y anaerobio
facultativo, presentan terminaciones cuadradas o redondeadas. Se distinguen tres
especies importantes para este gnero, que son de importancia clnica: Bacillus cereus,
Bacillus anthracis y Bacillus subtilis
Las especies de Bacillus con excepcin de B. anthracis, son fundamentalmente
patgenos oportunistas que tienen una capacidad de virulencia relativamente baja.
Aunque se ha constatado que muchas de estas especies producen enfermedades, B
cereus representa con claridad el patgeno mas importante, siendo la gastroenteritis,
las infecciones oculares y las septicemias relacionadas con el catter las entidades que
se observan con una frecuencia mayor.
Listeria monocytogenes
El gnero Listera est formado por 6 especies, de las que Listeria monocytogenes y
Listeria ivanovii son los nicos patgenos reconocidos. L. monocytogenes representa
un destacado patgeno del ser humano, esta es un bacilo grampositivo pequeo no
ramificado y anaerobio facultativo capaz de proliferar dentro de un amplio abanico de
temperaturas y una elevada concentracin de sal. Estos bacilos aparecen de forma
aislada, en parejas o cadenas cortas y se pueden confundir con Streptococcus
pneumoniae o Enterococcus, lo cual reviste importancia debido a que tanto S.
pneumoniae como L. monocytogenes pueden producir meningitis.
Estos
microorganismos son mviles a temperatura ambiente, pero no a 37C y muestran
una movilidad caracterstica por viraje cando se examina una gota de caldo de cultivo
en el microscopio.
L. monocytogenes muestra una dbil Beta hemolisis al crecer en plagas de agar sangre
de carnero. Estos rasgos diferenciales son tiles para la identificacin preliminar de
Listeria.
75
METODOLOGA
Da 1
Se sembraron las cepas de referencia Bacillus spp y Listeria monocytogenes y se
sembr la muestra problema:
Bacillus spp en Agar Sangre
Listeria monocytogenes en Agar sangre de carnero donde a la mitad se le hizo el factor
CAMP y en la otra mitad se sembro comnmente.
La muestra se sembr en Agar Mackonkey
(gramnegativos), Agar sangre
(grampositivos), ambos aerobios a 37C y Agar para anaerobios (anaerobios), en
anaerobiosis a 37C.
Para las condiciones de anaerobiosis se utilizo el sistema de bolsa de GasPak, la cual
consiste en un sobre generador de hidrogeno y CO2 que se activa agregando agua, la
produccin de calor ene le termino de de unos minutos y el desarrollo posterior de
humedad en las paredes del sobre son indicadores de que el catalizador y el sobre
generador funcionan adecuadamente, este medio se debe de tener cerrado
hermticamente por lo que se quemo la punta de la bolsa y se cerro.
2do da
Se ley la morfologa macroscpica y microscpica de Bacillus spp, Listeria
monocytogenes y muestra de los agares correspondientes.
Adems de que para Bacillus spp se inocularon medios de SIM, de nitratos, Medio O/F
(lactosa 1%, glucosa1%, maltosa 1%)
En Listeria monocytogenes se ley adems la prueba de CAMP, hemolisis y se inoculo
medios de SIM (25 y 37C), caldo de nitratos y bilis esculina, y se hizo prueba de
catalasa.
En la muestra se seleccion pruebas bioqumicas para inocular: coagulasa, medio rojo
de fenol-manitol
Da 3
Se leyeron las pruebas bioqumicas inoculadas al da anterior y se hizo la tincin de
esporas pero no se observaron ya que no se tuvo el tiempo suficiente.
76
RESULTADOS
Muestra
Agar Sangre
Agar anaerobios
Forma
Redonda
Redondas
Tamao
Pequea
Pequeas
Color
Griscea
Transparentes
Elevacin
Plana
Convexa
Borde
Entero
Entero
Luz reflejada
Si
No
Luz transmitida
No
Si
Consistencia
Cremosa
Cremosa
Sustrato
Gama hemolisis
(sulfato de formaldehido y
tioglicolato de sodio)
Arreglo
Cosos simples, cadenas

diplococos grampostivos.
Catalasa
Positiva
Coagulasa
Negativa
Rojo de fenol- manitol
Negativo
, Cocos (facultativos
Listeria
Agar sangre de carnero
Forma
Redonda
Tamao
Mediana
Color
Blanca
Elevacin
Plana
Borde
Entero
Luz reflejada
No
Luz transmitida
Si
77
Consistencia
Cremosa
Sustrato
Beta hemolisis
CAMP
Positivo
Catalasa
Positivo
SIM movilidad
37C (negativo)
25C (positivo)
Caldo de nitritos
Negativo
Bilis esculina
Positivo
Indol
Negativo
Arreglo
Bacilo grampositivo simple
Bacillus cereus
Agar sangre
Forma
Redonda
Tamao
Grande
Color
Griscea
Elevacion
Plana
Borde
Entero
Luz reflejada
No
Luz transmitida
No
Consistencia
Cremosa/mucoide
Sustratos
Beta hemolisis
SIM
Positivo movilidad
Caldo de nitritos
Positivo
Medio O/F
Glucosa negativo
Maltosa negativo
Lactosa negativo
Indol
Negativo
78
Arreglo
Bacilo grampositivo, simple, grande alargado.
CONCLUSIN
De acuerdo a los resultados obtenidos con las pruebas bioqumicas, se determin que
coinciden en un 90% con las caractersticas bioqumicas de Staphylococcus epidermidis
en un estado inactivo. De acuerdo a lo revisado en la bibliografa (2008, Murray)
Staphylococcus epidermidis tambin posee una morfologa microscpica coco
grampositivo y coagulasa negativa tanto catalasa positiva y sal manitol negativo por lo
que concuerda con el resultado obtenido en el agar sangre
. ya que no tenemos datos del metabolismo que sea una de las cepas de referencia ya
que para Bacillus cereus es un bacilos y la muestra es un coco, donde de igual manera
no podra ser Listeria monocytogenes ya que esta tiene igual una morfologa de bacilo,
adems de que tienen diferentes metabolismos. El diagnstico microbiolgico de las
lesiones causadas por los diferentes grupos de Staphylococcus se ve complicado por el
hecho de que esta especie es un componente natural del ser humano, en la
microbiota normal de la piel y las mucosas humanas; ampliamente distribuido, a
menudo en grandes cantidades, sobre toda la superficie corporal. De igual manera es
importante el diagnostico de las cepas que utilizamos para una lesin en la piel como
son Bacillus cereus o Listeria monocytogenes. Bacillus cereus produce dos
enterotoxinas durante su crecimiento exponencial: la toxina diarreica y la toxina
emtica que dan lugar a dos formas clnicas distintas de intoxicacin alimentaria. Nos
79
referiremos esencialmente al papel del Bacillus cereus en la intoxicacin alimentaria

dejando de lado las actividades purulenta y necrotizante cutneas que pueden verse.
La listeriosis es una de las enfermedades ms importantes de transmisin por
alimentos. Las manifestaciones de la enfermedad en el hombre comprenden
septicemia, meningitis (o meningoencefalitis) y encefalitis, habitualmente precedidas
de sntomas parecidos a los de la gripe, incluida la fiebre.
Por lo que ambas son adquiridas por medio de contaminacin alimentaria.
Staphylococcos epidermidis se transmite por medio de la diseminacin de la cepa
endgena del paciente a un sitio normalmente estril, casi siempre como resultado de
implante de dispositivos mdicos, durante una hospitalizacin. La diseminacin
interpersonal en los hospitales puede provocar la colonizacin de los pacientes y la
probable infeccin por cepas resistentes a los antibiticos.
Por ser un miembro de la flora normal esta especie es la ms frecuente en muestras
clnicas, casi siempre como contaminante. Puede ser difcil establecer su importancia
clnica. Las infecciones ms frecuentes son la bacteriemia nosocomial asociada con
catteres vasculares permanentes, la endocarditis que afecta vlvulas cardiacas
protsicas, la infeccin de los sitios de entrada de catteres intravasculares, que con
frecuencia provoca bacteriemia, y otras infecciones asociadas con derivaciones de LCR,
prtesis articulares, injertos vasculares, infecciones oculares posquirrgicas y
bacteriemia en los recin nacidos internados en unidades de cuidados intensivos.
Bibliografa
Murray R. Patrick, 2008, Microbiologa mdica,5ta edicin, Editorial

ELSEVIER.
Viramontes y Portillo, 2008, metabolismo microbiano, 1 edicin, Editorial

textos universitarios.
Baile & Scott, diagnostico microbiolgico, 12
panamericana, 2007.
edicin, editorial medica
Manual Bacteriologa Mdica, M.C. Norma H., M.A Olga G., M.C Rosalba V.,
2014.
80
PRCTICA
11
HEMOCULTIVO

81
RESUMEN
El hemocultivo es un cultivo microbiolgico de la sangre el cual es utilizado para diagnstico de
infecciones por bacterias (bacteremia) o presencia de hongos. Es necesario tomar en cuenta
las consideraciones como el volumen de sangre adecuado, la cantidad de extracciones y el
proceso de toma de muestra, ya que de ello depende la expedicin de un resultado de calidad.
En la presente prctica se realiz el procedimiento de un hemocultivo, desde la obtencin de
la muestra hasta la identificacin del agente etiolgico, el microorganismo encontrado fue
descrito como Streptoccocus agalactiae, debido a su morfologa presentada: streptococos, y
los resultados obtenidos en las pruebas bioqumicas: catalasa, bilis esculina, crecimiento en
NaCl, sensibilidad a la bacitracina negativas y factor CAMP y hemolisis positivas. De sta
manera se determin la presencia de la bacteria en el hemocultivo.
INTRODUCCIN
BACTERIEMIA
La deteccin de la bacteriemia constituye una de las prioridades de la Microbiologa Clnica,
dada su importancia diagnstica y pronstica ya que se asocia con una elevada mortalidad que
oscila entre el 20 y el 50%.
Se define como bacteriemia la presencia de bacterias en la sangre que se pone de manifiesto
por el aislamiento de stas en los hemocultivos. Se producen cuando los microorganismos
invaden el torrente sanguneo y se multiplican a un ritmo que supera la capacidad del sistema
reticuloendotelial para eliminarlos. Esta invasin puede producirse desde un foco infeccioso
extravascular, a travs de los capilares sanguneos o de los vasos linfticos, o desde un foco
intravascular (endocarditis, infeccin de catteres intravenosos o arteriales...).
Las bacteriemias pueden ser transitorias, continuas o intermitentes segn la forma en que
aparecen los microorganismos en la sangre, pero esta distincin es difcil de establecer y poco
prctica desde el punto de vista microbiolgico. El trmino bacteriemia de brecha se emplea
cuando sta se presenta en un paciente que est recibiendo terapia sistmica con
antimicrobianos a los cuales es sensible el microorganismo aislado. Su presencia puede ser
debida a una concentracin inadecuada del antimicrobiano en la sangre, a un incorrecto
drenaje del foco de infeccin, a la presencia de endocarditis o infeccin endovasular, al
deterioro de las defensas del husped, al desarrollo de resistencia al tratamiento
antimicrobiano, etc.
La incidencia de la bacteriemia depende del tipo de poblacin estudiada (5-30 casos por 1000
pacientes hospitalizados) y puede presentarse a cualquier edad, sobre todo en pacientes con
graves enfermedades de base y en los sometidos a maniobras que alteran los mecanismos
locales y generales de defensa frente a la infeccin. Los focos ms frecuentes de bacteriemia
son el tracto genitourinario, los abscesos, las heridas quirrgicas, el tracto biliar y los catteres
intravasculares, aunque hasta en un 25% de los casos su foco originario es desconocido.
La mayora de los microorganismos son capaces de invadir el torrente circulatorio. En la
actualidad los grampositivos, especialmente estafilococos y enterococos, igualan o superan en
82
frecuencia a los gramnegativos. Ello es debido a mltiples causas, entre las que destacan la
utilizacin de antibiticos de amplio espectro, el uso generalizado de catteres intravasculares
y el empleo de mtodos de diagnstico invasores. Por otra parte, el aumento de pacientes
inmunodeprimidos con tratamientos antineoplsicos o con infeccin por el VIH ha propiciado
la aparicin de bacteriemias por agentes que en el pasado eran causa muy rara de infeccin.
El diagnstico definitivo de la bacteriemia se establece cuando se asla el microorganismo
causal en la sangre del enfermo mediante el cultivo de sta.
El aislamiento del agente responsable es trascendente, adems, para conocer su sensibilidad a
los antimicrobianos e instaurar el tratamiento o las modificaciones necesarias a la terapia
emprica ya establecida. En ocasiones puede orientar el diagnstico de enfermedades como la
neoplasia de colon (asociada a bacteremia por Streptococcus bovis), endocarditis
(estreptococos del grupo viridans) e incluso infecin por el VIH (Salmonella, enterococo). Por
otra parte, permite, en la mayora de las ocasiones, la diferenciacin de los casos de verdadera
bacteriemia de aquellos en los que la positividad es debida a un inadecuado procedimiento de
extraccin y procesamiento.
INDICACIONES DE LOS HEMOCULTIVOS
Deben realizarse, antes de la administracin de la terapia antimicrobiana sistmica, siempre
que exista sospecha clnica de sepsis, meningitis, osteomielitis, pielonefritis, infeccin
intraabdominal, artritis, infecciones graves de la piel y tejidos blandos, neumona, endocarditis
y fiebre de origen desconocido (absceso oculto, fiebre tifoidea, brucelosis, tularemia, etc.). Los
signos que orientan esta sospecha incluyen fiebre o hipotermia (neonatos, ancianos),
escalofros, leucocitosis o granulocitopenia, deterioro uni o multiorgnico de etiologa no
aclarada, shock, compromiso hemodinmico de causa desconocida y combinaciones de
algunos de ellos.
El cultivo de la sangre debe complementarse con el de otros fluidos como lquido
cefalorraqudeo, orina, muestras del tracto respiratorio inferior o lquido sinovial en pacientes
con sospecha de meningitis, pielonefritis, neumona o artritis sptica, respectivamente.
VOLUMEN DE LA SANGRE
De todas las variables que influyen en el aislamiento de una bacteria u hongo en un
hemocultivo, el volumen de sangre cultivada es la ms importante debido al bajo nmero de
microorganismos presentes en la mayora de las bacteriemias. La mayor parte de los escasos
recuentos realizados muestran cifras prximas a menos de un microorganismo por mililitro de
sangre. En nios las cifras son muy variables. Se han descrito recuentos superiores a 1.000
UFC/ml en bacteriemias por Haemophilus influenzae o Neisseria meningitidis y por el contrario
bacteriemias con escassimo nmero de microorganismos.
El volumen recomendado por cada venopuncin en adultos es de 20 ml, ya que con volmenes
menores se ha demostrado una disminucin del ndice de positividad. Se considera que el
ndice de positividad aumenta entre el 3-5% por cada mililitro adicional de sangre cultivada.
Sin embargo, la recomendacin de elevar el volumen de sangre por extraccin no se aplica, en
83
cierta medida por la anemia que se puede provocar al paciente y para mantener la proporcin
de volumen sangre/medio de cultivo.
En neonatos y nios, se ha preconizado que la mayor cantidad de bacterias presentes en
sangre permite que con volmenes considerablemente menores, incluso inferiores a 1 ml, se
obtengan resultados aceptables y comparables a los de los adultos. Sin embargo, algunos
trabajos han demostrado que la bacteriemia de bajo nivel es muy comn en la poblacin
peditrica y que el volumen de sangre para detectarla debe ser proporcional al peso (al
volumen de sangre total) y a la edad. Se recomienda cultivar un volumen de sangre
aproximadamente del 4,5% del volumen total de sangre del paciente.
NMERO E INTERVALO DE LAS EXTRACCIONES

Se considera una extraccin para hemocultivo a la sangre extrada de una nica venopuncin,
independientemente de los frascos en los que sea inoculada, habitualmente dos (aerobio y
anaerobio).
El nmero de extracciones considerado ptimo para la documentacin de un episodio de
bacteriemia es de 2 a 3, utilizando siempre lugares diferentes de venopuncin. De esta manera
logran detectarse ms del 95% de las bacteriemias.
HEMOCULTIVOS POSITIVOS
La mayor parte de las muestras de sangre se inoculan en frascos que contienen caldo de
cultivo enriquecido. Se deben inocular dos frascos de medio para cultivo (10 ml de sangre por
frasco) con el fin de garantizar una recuperacin mxima de microorganismos. Cuando estos
frascos de caldo inoculados llegan al laboratorio, se incuban a 37C y se inspeccionan a
intervalos regulares paraobservar el crecimiento bacteriano.
Tincin de Gram y otras tinciones
Cuando, por el mtodo convencional, en un hemocultivo se observan signos de crecimiento, o
los resultado obtenido en la tincin de Gram, debe ser subcultivados en distintos medios (agar
sangre, agar chocolate y agar sangre enriquecido) que se incubarn a 35-37C en diferentes
atmsferas (aerobia, con 5% de CO2 y anaerobia, respectivamente) y perodos de tiempo (24
h el agar sangre y el agar chocolate, y 48-72 h el agar sangre enriquecido en anaerobiosis). En
ocasiones puede ser necesaria la incubacin del agar chocolate 48 h.
Teniendo en cuenta la morfologa de los microorganismos observada en la tincin de Gram se
deben realizar, adems, subcultivos en medios especficos, por ejemplo, en agar Sabouraud si
se observan levaduras, e incubar a diferentes temperaturas, 30C en caso de sospecha de
hongos.
Identificacin y antibiograma preliminares
84
Con objeto de obtener resultados lo antes posible, se deben realizar pruebas de identificacin
presuntiva partiendo del caldo. En el caso de que la tincin de Gram demuestre la presencia de
bacterias grampositivas la morfologa de las mismas tiene un alto valor predictivo.
Al tiempo que se procede a la identificacin, a partir del caldo de cultivo tambin debe
realizarse un antibiograma preliminar, que permita disponer lo ms rpido posible la
sensibilidad del microorganismo.
Dependiendo del resultado de la tincin de Gram se realizarn pruebas especficas de
identificacin y antibiograma preliminares utilizando como inculo unas gotas del caldo de
cultivo de los frascos de hemocultivo siguiendo el siguiente esquema:
a) Cocos grampositivos en racimos: TSI, DNAsa o coagulasa, novobiocina, antibiograma en agar
Mueller Hinton con discos de antibiticos para grampositivos.
b) Cocos grampositivos en cadenas o diplococos: bilis-esculina y antibiograma en agar sangre
con discos para grampositivos, aadiendo un disco de optoquina y otro de bacitracina.
c) Cocos gramnegativos: antibiograma en agar chocolate con discos para Neisseria e
incubacin en CO2.
d) Bacilos gramnegativos: pruebas bioqumicas de identificacin y antibiograma en agar
Mueller Hinton con discos para gramnegativos.
e) Cocobacilos gramnegativos: antibiograma en agar chocolate incubado en CO2
(Haemophilus) con discos para gramnegativos.
e) Bacilos grampositivos: esculina, antibiograma agar sangre con discos para grampositivos.
f) Flora mixta: Se esperar al crecimiento del subcultivo al da siguiente.
OBTENCION DE LA MUESTRA
El procedimiento de extraccin de sangre para la realizacin de hemocultivos se debe realizar
cumpliendo las mximas precauciones de asepsia.
2. Colocar ligadura
3. Palpar la vena a puncionar.
4. Realizar antisepsia con alcohol 70% en una zona de piel de unos 10 cm de dimetro
alrededor del sitio de puncin con movimientos de abajo hacia arriba.
5. Repetir el procedimiento utilizando Yodo povidona al 10%.
6. Dejar actuar 1-2 minutos, esto es, hasta que se seque el antisptico sobre la piel.
7. Mientras acta el iodforo, desinfectar el tapn de goma del frasco de hemocultivo con
alcohol 70%.
8. Colocarse los guantes estriles.
9. Extraer la sangre sin tocar en ningn momento el campo desinfectado. Si fuera necesario
palpar nuevamente la vena se cambiaran los guantes estriles y se realizar nueva antisepsia
de piel.
85
10. Inyectar directamente la sangre en el frasco. No es necesario cambiar de aguja.

11. Mover los frascos para que la sangre y el medio de cultivo se mezclen.
12. Para frascos de sistemas automatizados, retirar las tirillas de las botellas y pegarlas en la
hoja de pedido correspondiente al paciente. En ningn caso se rotular o pegar ningn tipo
de etiqueta adhesiva sobre los cdigos de barras de las botellas. Mantener la muestra a
temperatura ambiente. Nunca debe refrigerarse ni congelarse.
MATERIALES
Asa de nicromio
Portaobjetos
Cerillos
Gradilla
Puente de tincin
Frasco de vidrio grande con tapa
Vela blanca pequea
Algodn
Equipo para venopuncin
CEPA DE REFERENCIA
Cepa a identificar
EQUIPO
Microscopio ptico
Incubadora
Mecheros
PRUEBAS BIOQUMICAS:
Bilis esculina, caldo de NaCl 4%, Disco A.
METODOLOGIA
Se realiz cuidadosamente y con la mayor asepsia, la extraccin de la muestra mediante
venopuncin.
Se coloc la sangre obtenida directamente en el frasco de hemocultivo junto al mechero lo
ms rpido posible.
86
Se mezcl suavemente por 1 min. Para asegurarse que la sangre se impregn en toda la
superficie del medio de cultivo del frasco, se incub el frasco del hemocultivo a 37.
Resembrar el hemocultivo en los medios especficos. Se utiliz sal manitol y agar sangre de
carnero.
Se incubaron los medios a 37 C durante 24 horas y un agar sangre se incub en condiciones
parciales de CO2.
Se realiz tincin de Gram.
En base a la morfologa obtenida se realizaron las pruebas bioqumicas de las colonias
sospechosas, obtenidas en los medios de cultivos utilizados.
DA 1
Se observ la presencia de crecimiento en el medio, turbidez, hemlisis o presencia de gas.
Se realiz tincin de Gram en fresco para identificar donde se cultivara la muestra.
Se eligieron los agares que considere convenientes: Sal manitol, Agar sangre de carnero
aerobio y en carboxifilia.
DA 2
Se realiz las pruebas bioqumicas correspondientes: bilis esculina y caldo de NaCl 4%.
DA 3
Se observaron los resultados de pruebas bioqumicas del hemocultivo y se identific la bacteria
presente en el hemocultivo.
RESULTADOS
Turbidez
Hemolisis
Formacin de gas
Formacin de velo
Coagulo
Colonias visibles
Caractersticas del hemocultivo.

NEGATIVA
POSITIVA
NEGATIVA
NEGATIVA
POSITIVA
POSITIVA
Forma
Arreglo
Afinidad tintorial
Morfologa microscpica del hemocultivo.

Cocos
Estafilococos o cocos aislados
Gram positivos
Medio de cultivo
Sal manitol
Agar sangre de
Agar sangre de
87
Forma
Tamao
Color
Elevacin
Borde
Luz reflejada
Luz transmitida
Consistencia
sustrato
Sin crecimiento.
Sin crecimiento.
Sin crecimiento.
Sin crecimiento.
Sin crecimiento.
Sin crecimiento.
Sin crecimiento.
Sin crecimiento.
Sin crecimiento.
Forma
Arreglo
Afinidad tintorial
Prueba de Bilis esculina

Caldo NaCl
carnero aerofilia
Redondas
Medianas
Grisceas
Convexas
Entero
Reflejan
transmiten
Cremosa
hemlisis.
carnero carboxifilia
Redondas
Grandes
Blanquecinas
Convexas
Entero
Refleja
Tranmite.
Cremosa
hemlisis.
Cocos
Simple
Gram +
Pruebas bioqumicas
negativa
Negativa.
Prueba del factor CAMP: Positiva, sinergismo con la hemolisina de S. aureus.

Catalasa: Negativa
Sensibilidad a la Bacitracina: Negativo.
Organismo identificado: Strepotococcus agalactiae (del grupo B) de

acuerdo a la clasificacin de Lancefield.
CONCLUSIN
Se determin que el organismo presente en el hemocultivo, corresponde tanto en morfologa
como en caractersticas bioqumicas a Streptococcus agalactiae, perteneciente a los
estreptococos del grupo B segn la clasificacin de Lancefield. Concordando con la bibliografa,
el arreglo, forma y afinidad tintorial, corresponde a estreptococos, posteriormente tras la
realizacin de la prueba de catalasa ( negativa), se descarta la presencia de staphylococcus,
adems la evidente hemolisis producida en el agar sangre tanto en aerobiosis como en
carboxifilia nos llev a optar por realizar pruebas correspondientes para streptoccocus, tanto
la prueba de bilis esculina, NaCl y sensibilidad a la Bacitracina fueron negativas, mientras que
88
la prueba del Factor CAMP result positiva. Todo lo anterior concuerda por lo mencionado en
bibliografa (2007, Murray).
S. agalactiae, es una bacteria que se encuentra formando parte de la biota natural de la
vagina, uretra, tracto gastrointestinal y el aparato respiratorio en el hombre.
Se ha encontrado en meningitis, bacteriemias, endocarditis y septicemias en neonatos. (2007,
Romero).
BIBLIOGRAFA
Murray P. Microbiologa Mdica,2007, 5 edicin, Editorial ELSEVIER, Madrid pg 247.
Romero, Microbiologa y parasitologa humana, 3 edicin,Editorial Panamericana,
Mxico,2007 Pg 706.
Olivas, Manual de prcticas de microbiologa y parasitologa, 2004, UCJ, Mxico, pg
26.
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiolo
pro/seimc-procedimientomicrobiologia3a.pdf
http://www.ispch.cl/lab_sal/doc/proc_emo.pdf
http://www.slideshare.net/TPorta/hemocultivo-15019573
https://docs.google.com/presentation/d/1CY3yDtSGknN3sEYHrmfhUZN1JP5VwrJOIhkI
VwrJOIh/edit#slide=id.i0
Gonzlez, Herrera, Villalba, 2013 Manual de bacteriologa mdica, UACH, pg 85.
89
CONTROL DE CALIDAD EN
MICROBIOLOGA

90
A- INTRODUCCION
El laboratorio clnico de microbiologa moderno, requiere para su
correcto funcionamiento de un adecuado y constante control de calidad sobre
todas las etapas en el recibo, manejo y reporte de especimenes clnicos.
En general este control debe identificar, monitorear, evaluar y aprobar
metodologas relativas al cuidado del paciente. En este contexto el control de
calidad en Microbiologa Clnica envuelve el monitoreo de los medios de cultivos,
reactivos, instrumentos, procedimientos y el personal, para asegurar una
adecuada prctica en el aislamiento, identificacin y caracterizacin de agentes
etiolgicos y su correspondiente prueba de susceptibilidad como una gua de la
terapia.
Un programa de control de calidad debe incluir adems un Manual de
Procedimientos, validacin de metodologas y equipos, el desarrollo de ciclos de
educacin continuada, elementos de bioseguridad y una supervisin sobre los
reportes generados. En ste sentido se hace nfasis en la correcta valoracin de
las pruebas de laboratorio, los agentes causales de enfermedades, el
conocimiento de la flora normal ,la taxonoma bacteriana y la interpretacin
correcta de las pruebas de susceptibilidad a los antibiticos.
El Aseguramiento de la Calidad, es un concepto un tanto ms difcil de
cuantificar que el control de calidad, ya que su foco es el impacto de las pruebas
de laboratorio en el cuidado del paciente. Este control nos indica que tan bueno
es nuestro trabajo y establece mecanismo para asegurar la generacin de
informacin de utilidad clnica rpida y segura. Este concepto incluye
entrenamiento y calificacin del personal, evaluacin de los reportes, rapidez y
seguridad diagnstica, certificacin de los laboratorios, controles externos, etc. El
Control de Calidad y el Aseguramiento de la Calidad son similares en sus
propsitos, aunque su significado y su manera de funcionar sean diferentes, Sin
embargo, ambos conceptos deben desarrollarse interactivamente durante un
programa de control de calidad.
El control de calidad en el laboratorio tiene como objetivo , que el
producto final del trabajo tenga un grado aceptable de seguridad , de
conformidad con los limites establecidos. Debido a que la mayora de los
resultados en microbiologa son producto de interpretaciones y evaluacin de
reacciones bioqumicas de seres vivos donde la capacidad y experiencia del
evaluador tienen un gran valor, los clculos de coeficientes de variacin y
desviaciones estndares que son parte de funciones analticas, tienen muy poca
aplicacin en el laboratorio de microbiologa. Es por ello que algunos expertos
consideran que el control de calidad en microbiologa es mas un arte que una
ciencia.
91
Un programa de control de calidad debe contar con los siguientes

elementos mnimos:
-
Las pruebas y los procedimientos.

Verificacin y validacin del test.
Manual de procedimientos.
Mantenimiento de reportes y libros record.
Evaluacin del personal.
Controles externos.
LAS PRUEBAS Y LOS PROCEDIMIENTOS:

El programa evala y documenta el desempeo de todos los aspectos de un
procedimiento. Esto incluye la calidad del espcimen, la eficiencia de los reactivos,
medios e instrumentos y verifica los resultados del test por errores.
La coleccin y transporte de la muestra es esencial para una buena calidad de
los resultados microbiolgicos. Los elementos del proceso de coleccin deben ser
claramente expresados, incluyendo volumen de la muestra, nmero de especimenes,
calidad del mismo, y el manejo apropiado para evitar contaminacin.
Los medios, reactivos , materiales etc, deben ser claramente rotulados para
indicar identidad, concentracin, requerimientos para almacenaje, preparacin , fecha
de expiracin y si es aplicable, el tipo de bioseguridad que requiere. En general
controles positivos y negativos son necesarios para evaluar las pruebas.
El reporte final debe ser examinado por errores humanos o de computadora.
En los casos en que se observaran errores de este tipo, se debe analizar todo lo
actuado para detectar el lugar donde ocurri a fin de evitar su repeticin.
VERIFICACION Y VALIDACION DE PRUEBAS:
Los test nuevos , especialmente los altamente complejos, deben ser verificados
por seguridad y precisin, antes de ser utilizados en la rutina diaria con las muestras
clnicas. As mismo, el laboratorio debe validar los test existentes para asegurarse que
cumplen con las expectativas de sensibilidad y especificidad. Los nuevos mtodos
deben ser comparados con pruebas convencionales conocidas.
EL MANUAL DE PROCEDIMIENTOS:
El Manual de Procedimientos del laboratorio de microbiologa, debe contener
todos los aspectos relevantes en la operacin del laboratorio y la generacin de
reportes que tienen que ver con la salud de los pacientes.
Los procedimientos originales y sus revisiones, deben ser aprobados, fechados
y firmados por el Director del laboratorio.
El Manual debe estar accesible al personal de la seccin y deben ser ledos con
alguna regularidad y revisados al menos cada dos aos.
92
MANTENIMIENTO DE REPORTES Y LIBROS RECORD:
El laboratorio debe mantener un record de todas las pruebas realizados a una

muestra de un paciente que han generado un reporte de laboratorio. Este record
puede ser mantenido al menos por 6 meses como un libro de trabajo diario.
Igualmente se debe mantener un libro record de registro de muestras que indique el
nombre del paciente, su nmero de identificacin personal, procedencia, fecha de
recibo de muestra, nmero de muestra, tipo de muestra, resultados de identificacin
,sensibilidad a los antibiticos y fecha de reporte. Este libro record puede guardarse al
menos por 5 aos, el cual puede ser de mucha utilidad en investigaciones
retrospectivas y comparacin de incidencias bacterianas.
EVALUACION DEL PERSONAL:
El mas importante factor en la generacin de reportes microbiolgicos de

calidad corresponde al personal. El personal del laboratorio de microbiologa debe ser
escogido en base a sus cualidades acadmicas y personales. Debe poseer habilidad
para ejecutar pruebas complejas, la mayora de las veces manuales, inters en
mantenerse al da en las ejecutorias y taxonoma bacteriana, excelente concepto de
proteccin de grupo y bioseguridad en general y la suspicacia de saber que est
trabajando con microorganismos vivos que pueden modificar su conducta mediante
mutaciones, con diferentes requerimientos de crecimiento y muchos altamente
patgenos.
CONTROLES EXTERNOS:
Es recomendable que todos los laboratorios participen en programas de
controles externos reconocidos, con los cuales el laboratorio puede medir la calidad de
su trabajo, lo que le confiar en los test y las metodologas con las cuales evala
rutinariamente las muestras clnicas.
El control de calidad en resumen, es un elemento vital en el laboratorio, ya que

ayuda en la confiabilidad de las pruebas, su reproducibilidad, asegura la calidad de los
materiales, reactivos y equipos empleados, mejora la auto confianza del personal,
detecta fallas que pueden reflejarse en el informe de muestras clnicas y en general
provee un entorno de excelencia en todos los aspectos del trabajo.
Conociendo los elementos bsicos que debe poseer un programa de control de
calidad moderno, los albores de un nuevo milenio nos obligan a la confeccin de un
Manual que pueda ser una gua para el personal dedicado a la microbiologa clnica en
el pas, en una disciplina de las Ciencias del Laboratorio en constante evolucin que
marcha a la par de la medicina moderna.
93
Ponemos a la consideracin de todos los colegas el siguiente Manual de Control

de Calidad en Microbiologa, el cual esperamos llene las expectativas y necesidades en
nuestros laboratorios.
B- CONTROL DE CALIDAD
1. CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:
Los medios de cultivo deshidratados son higroscpico y la absorcin de agua del

exterior, as como la formacin de agua dentro de la botella como
consecuencia de las fluctuaciones de temperatura en el ambiente, favorecen
el crecimiento bacteriano. Esto puede conducir al consumo de nutrientes,
variaciones de Ph y cambios en el color del medio. Adems la exposicin a la
luz puede llevar a importantes alteraciones en los constituyentes del medio
de cultivo.
Tomando en cuenta los factores antes sealados, los medios de cultivo
deshidratados deben almacenarse siempre en lugares frescos, a temperatura
ambiente y protegidos contra la humedad y la luz. La mayora de los
suplementos se guardan en refrigeracin. Utilizando condiciones de
almacenamiento adecuadas, los medios elaborados en polvo tienen una vida
til de al menos 3 aos. El material que ha sufrido cambios substanciales,
tales como hidratacin, endurecimiento y cambio de color, deben
descartarse.
Se debe mantener un registro de cada frasco de medio de cultivo
deshidratado, con el nombre del producto, nombre y nmero telefnico de la
casa proveedora, nmero de control del frasco, fecha de recibo, fecha de
expiracin, nmero de lote y fecha en que se abri el frasco.
El grado de disolucin de un medio deshidratado, as como la eficacia del mismo
ya preparado, depende en gran medida del procedimiento empleado en la
rehidratacin. Se recomienda utilizar agua recin destilada o completamente
desmineralizada y un erlenmeyer con capacidad del doble del medio que se
quiere preparar. Si el medio va a distribuirse en tubos, debe agitarse
constantemente para asegurar una adecuada homogenizacin al momento de
servirlos.
Cuando se va a esterilizar, debe asegurarse en seguir las instrucciones de tiempo,
presin y temperatura para la obtencin de medios de cultivo ptimos. Una
temperatura de 121 C , presin de 15 libras y un tiempo de esterilizacin de
15 minutos, son suficientes para la mayora de los medios.
94
Si no se dispone de autoclave, es posible esterilizar en marmita de

vapor a 100 C por 30 minutos. En tal caso la esterilizacin debe
repetirse durante 3 das consecutivos.
5) El medio esterilizado debe ser enfriado a 45-60C en un bao mara, para
evitar la formacin de agua de condensacin. Al ser vertidos en las placas Petri,
evitar la formacin de burbujas y cogulos. Durante el proceso de servida, debe
tomarse una muestra del medio para realizar el control de calidad por
esterilidad
y eficiencia.
El medio de cultivo reconstituido tiene una vida til limitada. Si no se emplea

de inmediato, debe almacenarse bajo condiciones apropiadas para garantizar
su
utilidad durante un periodo de tiempo.
El almacenamiento a 4C es el mejor para la mayora de los medios.
Sin embargo, aquellos que contienen Tioglicolato, deben guardarse a
temperatura ambiente.
Los medios deben mantenerse preferiblemente en sitios oscuros, ya que la luz
puede afectar algunos de sus componentes. Para evitar la desecacin se
aconseja que se guarden en bolsas plsticas bien cerradas. Las placas Petri
almacenadas as, deben mantenerse con el fondo hacia arriba.
Dado que los medios almacenados en refrigeracin, cuando pasan a temperatura
ambiente tienden a formar agua de condensacin en la superficie, se
recomienda poner los platos Petri en la incubadora a 35C por 2 horas,
colocndolos con el fondo hacia arriba para obtener una superficie seca. Esto
es particularmente importante para que el agua no afecte la individualidad de
las colonias en el
aislamiento o en los casos de pruebas de sensibilidad a los antibiticos en los
que el exceso de agua puede afectar la dilucin de las colonias y por ende la
lectura del halo de inhibicin.
Cada lote preparado de medio de cultivo se prueba antes de su uso rutinario, por
eficiencia o calidad, mediante la inoculacin de microorganismos cuyo
comportamiento conocemos, tanto para reacciones positivas como negativas.
Puede utilizarse para ello cepas bacterianas domsticas o cepas control
comerciales ( ATCC ).
Se debe guardar un libro de registro de los resultados obtenidos.
Evite el congelamiento de los medios preparados o la sangre de carnero.
Al colocar en la refrigeradora los medios preparados, debe colocar los de ms
reciente preparacin al fondo y los mas viejos adelante.
95
Rotular todos los medios preparados, tanto en platos Petri como en tubos,
indicando adems, la fecha de preparacin y expiracin.
PRUEBAS BASICAS DE CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS PREPARADOS:

Ph
Esterilidad
Capacidad de crecimiento y reaccin
Estabilidad
CRITERIOS DE CALIDAD DE LOS MEDIOS PREPARADOS:

Rajadura del plato o envase.
Rajadura en la superficie del medio.
Variaciones en el volumen del medio.
Hemlisis.
Cristales en el medio.
Presencia de burbujas.
Presencia de cogulos.
Cambio de color normal.
Contaminacin.
Falla en la inhibicin de microorganismos saprfitos.
FALLAS Y CAUSAS EN LA PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO :

Valor de Ph incorrecto:
Medir el Ph por encima de los 25C.
Sobrecalentamiento en la esterilizacin, vuelta a fundir o calentamiento
prolongado a 50C.
Solucin incompleta del medio.
Mala calidad del agua.
Recipiente mal lavado o con residuos qumicos.
Mala conservacin del medio deshidratado o vencido.
Turbidz o precipitacin :
Mala calidad del agua.
Sobrecalentamiento.
Ph incorrecto.
Solucin incompleta.
96
Oscurecimiento :
Sobrecalentamiento.
Solucin incompleta.
Alteracin del Ph.
Gel blando :
Bajo porcentaje de agar en el medio.
Errores en la pesada del medio deshidratado o en los suplementos.
Sobrecalentamiento.
Mala homogenizacin del medio.
Exceso de agua.
Crecimiento bacteriano pobre :
Exceso de calentamiento.
Substancias inhibidoras en el agua o en el recipiente.
Alteracin en el Ph.
EVALUACION DE LA EFICIENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

PREPARADOS :
MEDIO DE CULTIVO ORGANISMO CONTROL
TSI
TSI
TSI
E. coli
Shigella flexneri
SIM
SIM
Proteus mirabilis
K. Pneumoniae
Citrato de Simmons
Citrato de Simmons
REACCION ESPERADA
cido/cido
alcalino/cido
alcalino/alcalino
movilidad positiva
movilidad negativa
K.pneumoniae
E. coli
color azul. Crece

color verde. No crece.
Caldo de urea
Caldo de urea
Proteus mirabilis
E. coli
Rojo-Morado. Positivo.
color Naranja. Negativo.
Agar sangre
Agar sangre
Agar sangre
Estr.Betahem.Grupo B
S. pneumoniae
K.pneumoniae
McConkey
McConkey
McConkey
E. coli
Proteus sp
Estafilococos
McConkey Sorbitol
McConkey Sorbitol
E.coli 0157:H7
Proteus sp
Crece. Betahemlisis.
Crece. Alfahemlisis.
Crece. No hemoltico.
Crece. Colonias moradas.
Crece. Colonias claras.
No crece.
Colonias claras. Sorbitol negativo
Colonias claras. Sorbitol negativo
97
McConkey Sorbitol
EMB
EMB
Klebsiella sp
Colonias rosadas. Sorbitol positivo
E. coli
Proteus
Manitol Sal
Manitol Sal
Estafilococos
E. coli
SS agar
SS agar
Salmonella sp
E. coli
Brillo metlico
colonias Claras
Colonias amarillas
No crece.
Crece. Colonias claras con H2S
No crece.
Agar alcohol-fenil etlico

Agar alcohol-fenil etlico
Estafilococos
E. coli
Crece.
No crece.
Thayer-Martin
Thayer-Martin
N. Gonorrhoeae
E. coli
Crece.
No crece.
OF medio
OF medio
OF medio
E. coli
Pseudomona sp
Moraxella sp
Amarillo ambos tubos. Fermentador

Un tubo amarillo. Oxidativo
Ningn tubo amarillo. Inerte
MEDIO DE CULTIVO ORGANISMO CONTROL

Lysina decarboxylasa
Bili-Esculina
Bili-Esculina
REACCION ESPERADA
Citrobacter freundii
Proteus vulgaris
Salmonella arizonae
Streptococcus mitis
Caldo Malonato
Caldo Malonato
NaCl 6.5%
NaCl 6.5%
Sabouraud-Dextrosa agar
Klebsiella pneumoniae
E. coli
Streptococcus mitis
Levaduras
Dermatofitos
Estafilococos
alcalino/cido H2S +
Rojo/cido H2S Alcalino/alcalino H2S +
Incoloro
Negro
Azul
No cambia el color
No crece
Crece
Crece
Crece
Crece
Mycosel agar
Levaduras
Crece
Tioglicolato
Flora mixta
Crece
Selenita
Flora mixta
Crece en menos de 24h
98
Caldo Cerebro-Corazn
Flora mixta
Crece
CONTROL DE CALIDAD DE LOS SUPLEMENTOS :
Es importante tener en cuenta que los suplementos de los medios de cultivo,

pudieran confrontar problemas de eficiencia o inhibicin, ya que como todo
producto pudiera no haber sido almacenado y/o transportado
adecuadamente.
Solo el uso rutinario de los medios de cultivo preparados con stos
suplementos, pudieran darnos la alarma de problemas en los mismos.
Muchos suplementos son lbiles al calor, por ello se aaden al medio despus
de la esterilizacin para evitar su deterioro.
Los medios preparados con la mezcla inhibidora VCN , deben ser utilizados
dentro de los 8 das siguientes a su preparacin ya que la eficacia de la mezcla
decrece muy rpidamente. La misma advertencia es aplicable a los frascos de
VCN rehidratados, por lo que conviene guardarlos congelados si no se va a
usar de inmediato. No sobrepasar los 15 das,
En el caso de la sangre de carnero para la preparacin del agar sangre, es

Importante cada vez que se reciba un nuevo lote, anotar su apariencia,
observar por presencia de cogulos, hemlisis, nmero de lote, fecha de
recibo y expiracin, hacerle una determinacin de hemoglobina, la cual debe
medir entre los 12.0 - 14.0 g/dl y hematocrito.
Control de calidad de la sangre de carnero :
a) Con una jeringuilla, tomar 2.5 ml de sangre de carnero no utilizada y
colocar en un frasco para determinacin de hemocultivos por mtodo
automatizado ( Bactec o BacTalert ).
b) Incubar siguiendo la rutina del sistema. Se recomiendan 5 das de
incubacin.
d) Si resulta positivo en el sistema, se le debe realizar frotis por Gram e
identificacin hasta el nivel de especie. No hacer antibiograma.
e) No utilizar el frasco original con la sangre examinada. Desechar.
f) Se debe levantar un informe del estudio.
La sangre cuya calidad fuera aceptable, se usar para preparar el medio de
cultivo respectivo. Una vez preparado se le debe realizar prueba de
esterilidad, soporte de crecimiento, produccin de hemlisis, etc. Incubar los
platos a
35 C por 48 horas.
99
2. CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS :

Un elemento fundamental en el trabajo diario del laboratorio, lo constituyen
los reactivos, tanto comerciales como de preparacin domstica, que son
utilizados en la caracterizacin de microorganismos. Estos reactivos merecen una
especial atencin, toda vez que fallas en su funcionamiento pueden generar en
identificaciones equivocadas.
Por ello, se recomienda correr controles diarios con las bacterias tipo y seguir
estrictamente las indicaciones en cuanto almacenamiento de los reactivos,
metodologa de la prueba y tiempo de lectura.
Es recomendable que los reactivos comerciales sean examinados
inmediatamente cuando se abre un nuevo lote o vial y llevar un registro de su
funcionamiento.
REACTIVO
MICROORGANISMO
REACCION ESPERADA
Coagulasa
Coagulasa
Coagulasa
Cogulo. Coagulasa positiva
Cepa ATCC
Cogulo. Coagulasa positiva
Stafilococcus epidermidis
Inerte. Coagulasa negativa
Oxidasa
Oxidasa
Negro. Oxidasa positiva
E. coli
Inerte. Oxidasa negativa
Catalasa
Catalasa
Staphylococcus sp
Streptococcus sp
Betalactamasa
Betalactamasa
S. aureus ATCC 29213

H. influenzae ATCC 10211
Optoquina
S. pneumoniae
ONPG
ONPG
Ehrlich
Ehrlich
REACTIVO
Burbujas. Catalasa positiva

Inerte . Catalasa negativa
E. coli
Proteus sp
E. coli
K .pneumoniae
MICROORGANISMO
Cloruro frrico
Cloruro frrico
Sobres de Anaerobiosis
Proteus sp
E. coli
Bacteroides sp
Rojo. Positiva
Inerte. Negativa
Halo de >/= 12 mm
Amarillo. Positivo
Incoloro. Negativo
Anillo rojo. Indol positivo

Incoloro. Indol negativo
REACCION ESPERADA
Verde. Fenilalanina positivo

Incoloro. Fenilalanina negativo
Crecimiento en Anaerobiosis
100
Suero para tubos germinales Candida albicans
Tubos germinales positivo
3. CONTROL DE CALIDAD DE LOS TINTES :

La clasificacin correcta de las bacterias, de acuerdo a las reacciones con
las substancias qumicas, dependen de la pureza, reactividad y estabilidad de los
reactivos. La concentracin de las soluciones por efecto de la evaporacin de los
solventes o las variaciones introducidas en los mtodos recomendados, puede afectar
los resultados de modo adverso. Este es el caso de las tinciones para diferenciar
bacterias por su reaccin al Gram y la morfologa bacteriana, tintes para cpsulas,
esporas, etc.
El control de calidad de stos tintes debe realizarse primero con cada nuevo
lote preparado; luego basta con un control cada semana para mantener un grado de
seguridad apropiado en su uso.
En el caso de la tincin de Gram, sin lugar a dudas una de las herramientas ms
importantes del microbilogo, se recomienda tener especial cuidado con la mezcla de
alcohol-acetona para decolorar la placa. Es posiblemente ste reactivo el que produce
mayores problemas ya sea por decoloracin excesiva o por dbil decoloracin de los
microorganismos. Es tambin la etapa de la Tincin de Gram en la que el tiempo de
exposicin es ms determinante.
Para facilitar el control de los tintes, se recomienda preparar placas con
microorganismos aislados en el trabajo rutinario, utilizando cepas frescas, tomando en
cuenta aquellos que pudieran ser ms tiles segn la tincin a evaluar.
Algunos ejemplos son :
TINCION
Gram
Gram
Gram
MICROORGANISMO
Estafilococo sp
E. coli
Mezcla de ambos
REACCION ESPERADA
Morado. Gram-Positivo.
Rosado. Gram-Negativo.
Mezcla de ambas colores.
Zielh-Neelsen
Zielh-Neelsen
Mycobacterium sp
E. coli
Rosadas. BAAR positivo

Azul. BAAR negativas.
Kellung
Kellung
S. pneumoniae
E. coli
Deteccin de cpsula positiva

Deteccin de cpsula negativa
Verde malaquita
Clostridium sp
Espora de color verde.

Resto de la clula rosada.
101
Verde malaquita
E. coli
Clula completa rosada.
ALGUNAS CAUSAS DE ERROR DURANTE LA TINCION :
El Violeta Cristal tiende a hacer precipitacin, lo cual puede ser causa de observacin
de estructuras en el frotis. Si se observa precipitacin, proceda a filtrar el tinte.
La evaporacin puede ser causa de mal funcionamiento de los tintes.
Las placas que no han sido previamente limpiadas o con restos de grasa, pueden ser
causa de mala fijacin de la muestra / tincin.
Sobrecalentamiento de la placa durante la fijacin. El exceso de calor provoca un dao
fsico en la pared celular de las bacterias que puede afectar la retencin de los
colorantes.
Lavado muy fuerte de la placa durante la tincin.
Proporcin no adecuada de los componentes de la tincin.
Algunos tintes como Safranina y Fucsina bsica pueden contaminarse. Si se sospecha
esto , cultive 1 ml en Tioglicolato, o descarte el tinte.
La tincin de Zielh-Neelsen tiene sus limitaciones en cuanto a no ser especfica para
micobacterias y su baja sensibilidad, ya que el nivel de deteccin es de 5,000 a
10,000 bacilos por mililitro de esputo. Esto debe ser tenido en cuenta al evaluar
una placa.
Una Cepa Control positiva, debe ser teida cada vez que un nuevo lote de tintes para
Zielh-Neelsen es preparado y cuando se reciba un nuevo pedido de tintes y
reactivos. Se puede utilizar la cepa de Mycobacterium tuberculosis ATCC 25177
como control positivo.
4. CONTROL DE CALIDAD DE ANTISUEROS :

El mundo de la microbiologa ha sido inundado cada vez ms por productos
comerciales hechos con el objetivo de detectar agentes etiolgicos de enfermedades
en el menor tiempo posible, con el mayor grado de especificidad , sensibilidad y
algunos de ellos con la intencin de eliminar el cultivo bacteriano como nica forma
diagnstica. Estos sistemas actan algunos con solo la muestra del paciente y otros
requieren de la cepa aislada o detectan sus metabolitos. Estos sistemas se han
convertido en un arma imprescindible para el microbilogo y en muchos casos dan
102
confianza en la seguridad del diagnstico y en otras se utilizan en la deteccin de

microorganismos difciles de cultivar.
Estos productos para la deteccin directa del espcimen o la cepa bacteriana, son
considerados exmenes bacterianos y no test serolgicos. En forma general stos kit
deben ser probados cada vez que se recibe un nuevo lote y cada vez que se utilicen, se
le deben correr sus controles positivo y negativo que vienen con cada kit.
CONSIDERACIONES GENERALES EN EL USO DE ANTISUEROS :
Los sistemas son para uso exclusivo de diagnstico in vitro.

Conservar todos los reactivos en refrigeracin.
Colocar la fecha en que se abre el kit.
No congelar los reactivos.
No utilizar los reactivos si se sospecha deterioro de los mismos, tales como si se
observa cambio de color, autoaglutinacin en el envase, no producen la reaccin
esperada con los controles respectivos, reactivos contaminados o con signos de
evaporacin.
El personal de laboratorio calificado, debe utilizar las tcnicas aspticas y las
precauciones habituales para protegerse de los agentes infecciosos.
Nunca pipetear con la boca las muestras y/o los reactivos.
No utilizar reactivos de lotes diferentes.
No utilizar los reactivos despus de la fecha de caducidad.
Despus de sacar los reactivos de la refrigeradora, dejarlos a temperatura ambiente
antes de utilizar.
Todos los productos inoculados deben ser considerados como potencialmente
infecciosos.
No volver a utilizar las tarjetas desechables , despus de haber sido utilizadas.
Algunas pruebas deben estar precedidas por su apropiado cultivo, aislamiento y
pruebas bioqumicas preliminares, antes de realizar mtodos serolgicos y una
identificacin final.
103
Al terminar la prueba, todo el material sucio y productos inoculados deben ser

sometidos a esterilizacin por autoclave, incinerados o sumergidos en un
desinfectante germicida adecuado, antes de su eliminacin.
La interpretacin de los resultados debe ser hecha por personal calificado, que tomar
en cuenta el contexto clnico, el origen de la muestra, los aspectos macro y
microscpico y su experiencia.
Aglutinacin por Antgenos de Estreptococos :
Un test positivo est indicado por la aparicin de una aglutinacin ntida de ltex
en 2 minutos en un crculo, lo cual permite la identificacin de grupo.
No tomar en cuenta las aglutinaciones dbiles que pudieran aparecer en otros
crculos.
Una aglutinacin intensa en varias suspensiones de ltex, representa una mezcla
de grupos o una cepa autoaglutinable. Volver a hacer el aislamiento de la
colonia y el test de ltex.
Una vez a la semana verificar la reactividad de las suspensiones bacterianas. Para
ello seguir la tcnica y reemplazar la cepa a analizar , por el control positivo.
Debe aparecer una aglutinacin en cada suspensin ltex.
Tambin la especificidad del test se puede analizar utilizando cepas control como el
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 seguir la tcnica sin emulsionar colonias
en la enzima de extraccin, o mezclar los reactivos de ltex con una gota de
NaCl 0.15 mol/l. No debe aparecer aglutinacin en las suspensiones de ltex.
Pueden aparecer resultados falsamente negativos si se estudia una cantidad
insuficiente de colonias
Cuando se utiliza el mtodo de deteccin directa de antgenos en el tracto
respiratorio superior, hay que tener en cuenta la baja sensibilidad del test, por
lo que todo resultado negativo debe ser seguido por su correspondiente cultivo
para verificar.
17) Deteccin de antgenos asociados a meningitis bacteriana :

El antgeno de N. meningitidis grupo B es ms difcil de detectar, ya que est
relacionado estructural e inmunologicamente con el antgeno de E. coli K1.
Por ello una reaccin positiva con ste antisuero en LCR de recin nacido o
prematuro, indica en la mayora de los casos la presencia de E. coli K1. En un
sujeto de ms edad, si puede indicar la presencia de N. meningitidis grupo B.
La sensibilidad de ste ltex de aglutinacin tiene un rango entre 65% para
S. pneumoniae y 95% para H. influenzae.
Como otras pruebas de ltex, un valor positivo depende del nivel de antgenos
detectable. Este es un test de descarte, que no reemplaza al cultivo.
Cada laboratorio debe evaluar la sensibilidad, especificidad y valor predecible
para su poblacin de pacientes.
18) Aglutinacin por Salmonella sp :
104
Sea estricto en el tiempo de la reaccin.

Miembros del grupo Salmonella estn antignicamente relacionados a
Citrobacter y Arizona. Antgenos de stos microorganismos tienen similar
frmula antignica, por lo que puede haber reacciones cruzadas.
Por esto es importante que la prueba de aglutinacin por Salmonella solo se
realice a aquellas cepas que muestran patrn bioqumico del gnero
Salmonella.
5. CONTROL DE CALIDAD DE LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD

A LOS ANTIBITICOS MEDIANTE DISCO:
Hemos querido resaltar los aspectos de control de calidad de la prueba de
sensibilidad a los antibiticos por difusin simple en agar, utilizando discos de
sensibilidad, ya que es la prueba de mayor utilidad en nuestro medio.
Es importante tener presente que sta prueba a sido designada exclusivamente
para examinar microorganismos de rpido crecimiento, utilizando la normativa
NCCLS M2-A6 , volumen 13, nmero 24.
Este mtodo no es til para organismos fastidiosos, de crecimiento lento o para
anaerobios.
El mtodo de difusin simple en agar es sin lugar a dudas el sistema de mayor
uso para la realizacin de la sensibilidad bacteriana. Hay que tener en cuenta el gran
valor de sta prueba en la deteccin temprana de multiresistencia, escogencia y
valoracin de un antibitico frente a un microorganismos patgeno, proteccin de
infeccin, estudios epidemiolgicos, etc .
La prueba de sensibilidad a los antibiticos consta de varios elementos que
deben ser tenidos en cuenta: El medio de cultivo, inoculo, incubacin, lectura e
interpretacin y el reporte.
Control de calidad del medio de cultivo:
Utilizar agar de Mueller-Hinton.
La calidad del agua es determinante, ya que la misma debe estar libre de
iones metlicos. Las variaciones de cationes divalentes, principalmente
calcio y magnesio, afectar los resultados con aminoglicsidos,
tetraciclina y colistina, cuando se prueban ante cepas de Ps.
Aeruginosa. Un contenido excesivo en catin, reducir la zona de
inhibicin, mientras que un escaso contenido en catin, puede dar un
inaceptable aumento en el tamao de la zona.
Servir en platos Petri grandes de 150 x 15 mm preferiblemente o
100 x 15 mm, con una profundidad de 4 a 5 mm
Aproximadamente se utilizan 25 cc para platos de 100 mm y 60 cc para
platos de 150 mm.
105
5. Volmenes mayores de medio provocan disminucin en el tamao del

halo de inhibicin, y volmenes menores halos ms pequeos.
6. Se deben seguir las normas generales establecidas para
almacenamiento
del medio de cultivo.
7. Los platos Petri deben ser colocados en la incubadora para secarlos de
restos de agua producto de la condensacin, antes de ser utilizados para
no diluir el inoculo bacteriano.
Control de calidad de los discos de sensibilidad:

Las metas de un programa de control de calidad van destinadas a monitorear:
La precisin y exactitud del procedimiento de la prueba de susceptibilidad, el
comportamiento de los reactivos utilizados en la prueba y la actuacin de las
personas que llevan a cabo las pruebas y sus resultados.
Los discos deben ser almacenados a un temperatura entre 20 y +8C.
Algunos discos, especialmente los de antibiticos -lactmicos deben
guardarse congelados a -20C. Solo los viales en uso deben
mantenerse a temperatura de refrigeracin.
Al sacarlos de la refrigeradora para su uso, espere a que los viales
alcancen la temperatura ambiente por 1 a 2 horas.
Siempre utilice primero los viales con fecha de caducidad ms prxima.
Siempre que un cartucho a sido extraido del paquete, ste debe guardarse
en un desecador que cierre perfectamente.
Cuando se utilice el aparato dispensador que contiene los discos deber
mantenerse siempre refrigerado.
Los discos son colocados en el medio a una distancia de ms de 24 mm del
centro de uno al centro del otro. En todo caso no colocar ms de 12
discos en una placa de 150 mm, ni ms de 5 discos sobre la placa de
100 mm.
Procurar no colocar discos de antibiticos bactericidas ( Ej. Penicilina,
Cefalosporinas, Aminoglicsidos, Vancomicina ) al lado de antibiticos
bacteriostticos ( Ej. Cloranfenicol, Tetraciclina, Sulfonamidas ) para
evitar el antagonismo antibitico.
Colocar las placas en la incubadora dentro de los 15 primeros minutos
despus de su aplicacin.
Para verificar el estado de los discos de sensibilidad, utilice cepas control
ATCC, las cuales son seleccionadas por su estabilidad gentica y por su
utilidad en el mtodo utilizado. Estas cepas se corren como una
muestra ms y se correlaciona el tamao de los halos de inhibicin con
las medidas expresadas en los Manuales NCCLS M2-A6.
106
Entre las cepas ATCC ( American Type Culture Collection )

recomendadas estn:
Streptococcus pneumoniae ATCC 49619
Haemophilus influenzae ATCC 49247 y 49766
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226
Escherichia coli ATCC 25922 y 35218
( La E coli 35218 como organismo de control para combinaciones con
inhibidor de betalactamasa, como aquellos que contienen cido
clavulnico, sulbactam o tazobactam ).
Staphylococcus aureus ATCC 25923 y 29213
Pseudomona aeruginosa ATCC 27853
Enterococcus faecalis ATCC 29212
( Para ser utilizado con discos de alto contenido de Aminoglicsidos ).
EL ESTANDAR McFARLAND :
La densidad de la turbidez del Estndar McFarland deber ser verificada

utilizando un espectrofotmetro con direccin de luz de 1 cm y cubetas
adecuadas para determinar absorbancia. Para realizar el control de un
estndar McFarland de 0.5 , la absorbancia deber leer entre 0.08 a 0.10
a una longitud de onda de 625 nm.
La suspensin de Sulfato de Bario deber transferirse en alcuotas de 4 a 6 ml
dentro de tubos con rosca. Estos tubos debern guardarse a temperatura
ambiente en un lugar fresco y oscuro.
Antes de ser usados, los patrones debern agitarse para una adecuada
homogenizacin.
Mensualmente los patrones son descartados y vueltos a preparar, o en su
defecto se debe comprobar su densidad.
Habituales causas de error en la prueba con disco:

Error administrativo en la transcripcin de los datos del control de calidad.
Lectura errnea al medir el dimetro de la zona.
Contaminacin u otros cambios en la cepa control.
Suspensin del inculo demasiado fuerte o demasiado dbil.
Mala agitacin del estndar McFarland o estndar daado.
Incorrecta temperatura, tiempo o atmsfera de incubacin.
Perdida de la potencia del disco durante su transporte, su manejo o su
almacenaje en el laboratorio.
107
3) Control de calidad de la lectura e interpretacin:
Cuando se va a determinar la sensibilidad del S. Pneumoniae a la

Penicilina, utilizar un disco de Oxacilina de 1 g.
Las cepas de S. Pneumoniae con zonas de Oxacilina de >/- a 20 mm
son susceptibles a penicilina ( CIM </- 0.06 g/ml ).
Se recomienda utilizar un disco de Oxacilina de 1 g para probar
Resistencia a Oxacilina y Meticilina de los Estafilococos. Esto se debe a
que la Oxacilina es ms resistente a la degradacin durante el
almacenaje y porque es ms probable que detecte a las cepas
heteroresistentes de Estafilococo.
Las pruebas para detectar Estafilococos Meticilina Resistentes
( MRSA), deben incubarse a 35 C por 24 horas exactas.
Los Estafilococos meticilina resistentes debern informarse como

resistentes a todos los Cefems y otros betalactmicos, as como
Ampicilina/cido clavulnico, Ampicilina/Sulbactam, Ticarcilina/cido
clavulnico, Piperacicilina/Tazobactam e Imipenem, independiente de
los resultados in vitro con dichos agentes.
Los Enterococos pueden ser resistentes a Penicilina y a Ampicilina debido
al desarrollo de poca afinidad de las protenas fijadoras de penicilina (
PBPs) o a la produccin de betalactamasa. Las pruebas de difusin en
disco pueden detectar con exactitud los aislamientos que poseen
alteradas las PBPs , pero no detectarn con fiabilidad las cepas
productoras de betalactamasa. Estas ltimas han de detectarse con
pruebas directas de betalactamasa ( Ej. Cefinasa ).
Las placas han de leerse con luz transmitida para visualizar cualquiera
pequea colonia dentro del halo, que hara la cepa resistente.
Todo caso de Estafilococo resistente a la Vancomicina, debe ser
confirmado, enviado a un laboratorio de referencia e informar a las
Autoridades de Salud Pblica.
Cuando se trata de Sulfonamidas, los microorganismos deben desarrollarse
por varias generaciones antes de que ocurra inhibicin, por lo que se
hace caso omiso del crecimiento leve, al igual que de un vestigio de
proliferacin dentro del halo de inhibicin.
Si se observan colonias dentro de un halo de inhibicin, deber
confirmarse la pureza de la cepa y repetir la prueba.
La difusin ( swarming ) de los Proteus sp no es inhibida por todos los
antibiticos, por lo que no se toma en cuenta.
Ocasionalmente se pueden observar varis colonias esparcidas por una zona
de inhibicin. Este fenmeno es constante para la Serratia sp y la
108
Polimixina. Las colonias se considerarn significativas y la cepa

resistente
Solo es necesario probar una Tetraciclina y sus resultados son equivalentes
a la Tetraciclina, Minociclina, Doxiciclina.
Los resultados obtenidos con al Polimixina, pueden aplicarse a la
Colimicina. Su halo es pequeo debido a su pobre difusin en agar.
Se ha informado que algunas cepas de Providencia sp dan resultados
de sensibilidad falsos con discos de Cefprozil , las cepas de ste gnero
no deben analizarse ni informarse con ste disco.
Los Estafilococos resistentes a la Meticilina, Oxacilina o Nafcilina, tambin
puede ser informados como resistentes a la Penicilina, Cefalosporinas ,
carbapenem y combinaciones de inhibidores de betalactamasa, a pesar
de su aparente sensibilidad in vitro, lo cual no se refleja in vivo.
La Cefalotina puede utilizarse para representar Cefalotina, Cefradina
Cefaclor y Cefadroxil
Los datos de sensibilidad al cido nalidxico, Nitrofurantoina, Norfloxacina,
Sulfonamidas y Trimethoprim, se aplican solamente a cepas aisladas de
infecciones urinarias.
El disco de Sulfisoxazol puede ser usado para representar cualquiera de las
Sulfonamidas disponibles.
En cepas de Salmonella y Shigella, solo Ampicilina, una Quinolona y
Trimethoprim/sulfametoxazol deben ser probados e informados de
rutina en heces. Adems el Cloranfenicol y una cefalosporina de tercera
generacin deben ser probados e informados en cepas de Salmonella
sp extraintestinal.
En cepas de Salmonella sp y Shigella sp, los aminoglicsidos y las
cefalosporinas de primera y segunda generacin, pueden aparecer
como activos in vitro pero no son efectivos clnicamente y no deben ser
informados como susceptibles.
La prueba de la betalactamasa predice la resistencia a la Penicilina,
Ampicilina y Amoxicilina.
Las cefalosporinas pueden aparecer activas in vitro contra Listeria sp, pero
no son efectivas clnicamente y no deben ser informadas como
susceptibles.
Los Enterococos sp las cefalosporinas, los aminoglicsido ( Excepto por
resistencia de nivel alto ), Trimethoprim/sulfametoxazole y la
Clindamycina, pueden aparecer activos in vitro pero no son efectivos
clnicamente y stas cepas no deben informarse como susceptibles.
La susceptibilidad y resistencia a Azitromicina, Claritromicina y
Diritromicina puede ser interferida por la prueba de Eritromicina.
Solo los resultados de las pruebas de Ampicilina, una cefalosporina de
tercera generacin, el Cloranfenicol y Meropenem deben ser
informados de rutina en todas las cepas aisladas de H. influenzae
aisladas de sangre y LCR de pacientes con infecciones severas.
Los resultados de las pruebas de susceptibilidad con Penicilina, Cefotaxime
o Ceftriaxone, Meropenem y Vancomicina, deben ser informados de
109
rutina en cepas de S. pneumoniae aisladas de sangre y LCR de pacientes

con infecciones severas como meningitis y bacteremia.
Verificacin de antibiogramas atpicos :

Examine primero por errores de trascripcin.
Reexamine el plato de sensibilidad.
Evalu reportes previos del paciente para observar su patrn de
sensibilidad anterior.
Repita los test de identificacin y sensibilidad a los antibiticos.
Condiciones sugeridas que requieren verificacin del resultado de

Sensibilidad a los antibiticos :
S. aureus resistente a Oxacilina.

S. pneumoniae resistente a Penicilina.
Cefalosporinas de amplio espectro ( Cefotaxime, Ceftriaxone ) resistente
a S. pneumoniae.
Streptococcus viridans penicilina resistente o intermedio, aislados de
reas estriles del cuerpo.
Estafilococos o Enterococos resitentes a la Penicilina o intermedio.
Enterococos con altos niveles de resistencia a la Gentamicina aislados
de reas estriles del cuerpo.
Klebsiella sp o E. coli con potencial espectro de betalactamasa.
( Ej. Resistente a Ceftazidime ).
Bacilos Gramnegativos no fastidiosos resistentes a GentamicinaTobramicina-Amikacina.
S. maltophilia resistente a Trimethoprim-Sulfametoxazole.
H. influenzae Ampicilina resistente y betalactamasa negativa.
Un aislamiento para el cual el antibiograma es atpico para la especie.

Ampicilina y/o Cefalotina susceptible para Enterobacter sp,
110
Citrobacter freundii, Serratia marcescen y Ps. Aeruginosa.

Klebsiella sp sensible a Ampicilina.
Bacilos Gramnegativos Imipenem resistentes o intermedio, excepto
S. maltophilia.
Control de calidad de la sensibilidad a los antibiticos

en los sistemas computarizados :
Los Laboratorios de Microbiologa modernos tienen a su alcance una creciente

gama de sistemas computarizados para la identificacin de los microorganismos y su
susceptibilidad a los antibiticos. Algunos de estos sistemas traen consigo programas
de computadora para ayudar a evaluar el control de calidad de los mismos. En algunos
casos, la computadora hace un control peridico de su funcionamiento mediante
comandos u ordenes preestablecidas.
Debido a que en nuestro medio existe solamente el Sistema Vitek de
identificacin microbiana, solo haremos algunas observaciones relativas a ste
sistema.
El Sistema Vitek utiliza una determinacin turbidimtrica de la rapidez de
crecimiento del microorganismo, en presencia de agentes antimicrobianos para
obtener un anlisis de regresin lineal y posteriormente determinar un algoritmo
derivado de la concentracin inhibitoria mnima ( CIM ).
Actualmente el laboratorio cuenta con un grupo limitado de tarjetas Vitek para
la sensibilidad a los antibiticos, tal como sigue:
Sensibilidad de los Gramnegativos :
1. GNS : Para uso en Policlnicas y rea hospitalaria.
GNS-PA : Para uso hospitalario Cuidados intensivos.
GNS-GD : Uso hospitalario Lquidos corporales
GNS-OP : Uso exclusivo para urocultivos.
Sensibilidad de los Grampositivos:
1. GPS-SA : Para Estafilococos y bacilos Grampositivos.
2. GPS-TA : Para Estreptococos, inclusive Enterococos.
Al hacer el control de calidad de las tarjetas de sensibilidad a los antibiticos, se

recomienda utilizar cepas ATCC con CIM conocidas. Estas pruebas se pueden realizar
una vez al mes durante 10 das seguidos, en los cuales se aceptan no ms de 2 valores
de CIM para cada combinacin de Antibitico/Organismo fuera del rango establecido.
111
Si se diera el caso de deben correr controles de calidad con cepas ATCC durante 30 das
consecutivos, en los cuales no se aceptan ms de 3 valores fuera de rango. Si los hay,
llamar al Departamento de Servicio de Vitek para el chequeo correspondiente.
Para realizar los controles se recomiendan las siguientes cepas ATCC para las
tarjetas respectivas:
TARJETA
CEPAS ATCC
GNS
E. coli ATCC 25922 / Ps. aeruginosa ATCC 27853

E. faecalis ATCC 29212
GNS-PA
TARJETA

CEPAS ATCC
GNS-GD

E. coli ATCC 35218 / E. faecalis ATCC 29212
GNS-OP

E. coli ATCC 35218 / E. faecalis ATCC 29212
GPS-SA
E. faecalis ATCC 29212 / S. aureus ATCC 29213

E. coli ATCC 35218
GPS-TA
E. faecalis ATCC 29212 / S. aureus ATCC 29213
Las tarjetas de sensibilidad a los antibiticos del Sistema Vitek, han sido
comparado con los estndares de la NCCLS, mediante las tcnicas de microdilucin
para obtener la CIM; sin embargo, bioMrieux Vitek recomienda la utilizacin de
mtodos alternos para confirmar la susceptibilidad a ciertos microorganismos contra
drogas especficas.
TARJETA
GNS
ANTIBIOTICO
Ampicilina
MICROORGANISMO
A. lwoffii, Aeromona sp, Citrobacter sp
112
GNS
GNS
GNS
GNS
Carbenicilina
Cefoxitin
Cefalotina
Trimeth/Sulfa
Acinetobacter lwoffii
A. lwoffii, Aeromona sp.
Aeromona sp
A. lwoffii, Aeromona sp
GNS-PA
GNS-PA
GNS-PA
GNS-PA
Ceftazidime
Imipenem
Mezlocilina
Piperacilina
GNS-PA
Ticarcilina
A. jejunii, A. lwoffii
Aeromona sp
Aeromona sp
Aeromona sp , Ps. aeruginosa
A. jejunii, A. lwoffii, Aeromona sp
GNS-GD
TARJETA
Ampicilina
ANTIBIOTICO
GNS-GD
GNS-GD
GNS-GD
GNS-GD
Cefazolina
Cefoxitina
Imipenem
Piperacilina
GNS-GD Ticarcilina/Acido clavulnico

GNS-GD Trimetho/Sulfametoxazole
GNS-OP
GNS-OP
GNS-OP
GNS-OP
GNS-OP
GNS-OP
GNS-OP
A. jejunii, A. lwoffii,
MICROORGANISMO
Aeromona sp, Citrobacter sp

Aeromona sp
Aeromona sp
A. jejunii , A. lwoffii,
Aeromona sp, Ps. aeruginosa
Aeromona sp, Ps. aeruginosa
Acido nalidxico
Ampicilina
Pseudomona sp ( diferente a Ps. aeruginosa)

Carbenicilina
A. jejunii , A. lwoffii
Cefalotina
Aeromona sp
Ceftriaxone
Klebsiella sp
Norfloxacina
Acinetobacter sp
Trimetho/Sulfametoxazole
A. jejunii, A.lwoffii, Aeromona sp
GPS-SA
GPS-SA
Eritromicina
Tetraciclina
GPS-SA
Vancomicina
GPS-TA
GPS-TA
Cloranfenicol
Eritromicina
Enterococcus sp, Estreptococos grupo D

Estafilococos coagulasa negativa,
Enterococcus sp, Estreptococos grupo B,
Estreptococos grupo D.
Enterococcus sp.
Staphylococcus sp
Estafilococos coagulasa negativa,
113
Enterococcus sp, Estreptococos grupo B,

Estreptococos grupo D
GPS-TA
Vancomicina
Enterococcus sp
Existe un grupo de microorganismos en que se desconoce la capacidad de las

tarjetas de sensibilidad para detectar resistencia a antibiticos especficos, debido a
que las cepas resistentes no estaban disponibles en el momento de realizar los test
comparativos. Entre ellos tenemos :
TARJETA
GNS
GNS
GNS
GNS
GNS
ANTIBIOTICO
Amikacina
Cefalotina
Gentamicina
Tetraciclina
Tobramicina
GNS-PA
GNS-PA
GNS-PA
TARJETA
Amikacina
Aztreonam
Ceftazidima
ANTIBIOTICO
GNS-PA
GNS-PA
GNS-PA
Ciprofloxacina
Gentamicina
Tobramicina
GNS-GD
GNS-GD
Cefazolina
Cefotaxime
GNS-GD
GNS-GD
GNS-GD
Ciprofloxacina
Gentamicina
Tobramicina
GNS-OP
GNS-OP
GNS-OP
GNS-OP
GNS-OP
GNS-OP
MICROORGANISMO
Aeromona sp
A. lwoffii
Aeromona sp
A. lwoffii
Aeromona sp
Aeromona sp
Aeromona sp
MICROORGANISMO
Aeromona sp
Aeromona sp
Aeromona sp
Aeromona sp
Aeromona sp
Aeromona sp
Acido nalidxico
Amoxicilina/Acido clavulnico
Cefalotina
Ceftriaxone
Aeromona sp
Ciprofloxacina
Aeromona sp
Nitrofurantoina
114
GNS-OP
GNS-OP
Norfloxacina
Tetraciclina
Aeromona sp
GPS-SA
Penicilina y Ampicilina
Enterococcus sp : Utilizar Betalactamasa
GPS-TA
Penicilina y Ampicilina
Enterococcus sp : Utilizar Betalactamasa
CONSIDERACIONES GENERALES:
Se debe tener especial cuidado en la preparacin del inculo. Fallas en su
preparacin, tienen efecto sobre el funcionamiento de todo el
instrumento.
Siempre tener presente que el sistema no puede examinar todos los grupos
relevantes de bacterias.
El uso de colonias absolutamente aisladas es clave en el aprovechamiento de
los sistemas computarizados.
Algunos de los organismos sugeridos por el fabricante para control de calidad,
podran no detectar deterioro en el instrumento o la calidad de los
reactivos.
Es relevante utilizar mtodos alternos de sensibilidad a los antibiticos en
aquellos casos en que la literatura que acompaa las tarjetas indique que el
sistema falla en detectar resistencia.
Se han reportado casos de falsa sensibilidad o resistencia, particularmente
debido al lector del instrumento o a un corto periodo de incubacin
durante la prueba de sensibilidad. Un periodo de 3.5 a 6 horas podra no
ser adecuado para expresar todos los mecanismos de resistencia de las
bacterias.
Tal es el caso de algunos bacilos Gramnegativos que inducen resistencia
mediada por -lactamasa a algunos antimicrobianos enzimticamente
lbiles a la -lactamasa, como ocurre con el Citrobacter freundii,
Enterobacter sp, Serratia sp, Morganella morganii, Providencia sp y Ps.
aeruginosa.
Se ha observado una falsa resistencia a Aztreonam, especialmente por Proteus
y Morganella sp por problemas de deteccin fotomtrica del crecimiento.
Se han reportado falsa resistencia a Imipenem para varias especies en periodos
largos y cortos de incubacin. Esto no es comn y se debe a la degradacin
del antibitico o la concentracin de Zinc en el medio.
Una baja o moderado nivel de resistencia a la Vancomicina frente a
Enterococcus sp se ha detectado, especialmente del tipo VanB, ya que
podra no ser detectado en periodos cortos de incubacin.
Se han observado o problemas en la deteccin de resistencia a altos niveles de
Gentamicina o Estreptomicina frente a Enterococcus sp en incubaciones
largas y cortas.
Tener presente colocar las marcas externas en la tarjeta, antes de meterla a la
incubadora/lector.
115
No deje pasar ms de 15 minutos despus de prepara el inculo, para llenar las

tarjetas y colocarla en la incubadora.
Chequear la solucin salina por esterilidad. Para ello inocule en caldo de cultivo
e incube a 35C por 24 horas.
Con cada lote de preparacin de inculo, estandarizar primero el calormetro.
Haga que el Departamento de Servicio tcnico de Vitek revise peridicamente
el lector del aparato para calibrarlo.
Lleve un rcord de cualquier discrepancia en la identificacin de cepas estndar
de control. Igualmente el tipo de tarjeta, lote, fecha de expiracin, etc.
PATRON DE RESISTENCIA ESPERADA PARA ALGUNOS MICROORGANISMOS:
MICROORGANISMO
RESISTENCIA ESPERADA
Citrobacter, Enterobacter,
Klebsiella, Morganella,
Providencia, Proteus vulgaris,
Proteus penneri, Serratia,
Yersinia.
Citrobacter freundii, Enterobacter,
Morganella, P. Vulgaris, P. penneri,
Providencia, Serratia, Yersinia.
Ampicilina
Cefazolin, Cefalotina
Klebsiella
Ticarcilina
C. freundii, Enterobacter, Serratia.
Cefoxitin, Cefotetan
C. freundii, Enterobacter,
Cefuroxime
P. vulgaris, Serratia.
Citrobacter, Enterobacter, Serratia.
Amoxicilina/cido clavulnico
Ampicilina/Sulbactam
Acinetobacter baumannii,
Burkholderia cepacia,
Ps. aeruginosa, Aeromonas,
Stenotrophomonas maltophilia.
Ampicilina, Cefazolin,
Cefalotina, Cefoxitin, Cefotetan,
Cefmetazole.
Acinetobacter baumannii
B. cepacia, S. maltophilia,
S. maltophilia
Ticarcilina, Mezlocilina, Piperacilina.

Gentamicina
Imipenem, Meropenem.
116
Ps. aeruginosa
Trimethoprim-Sulfametoxazole.
6. CONTROL DE CALIDAD DE EQUIPOS Y MATERIALES DE

TRABAJO:
Objetivo: Todos los instrumentos utilizados en el laboratorio clnico, deben estar

amparados por un programa de control de calidad y de mantenimiento preventivo,
basados en las instrucciones del fabricante y los procedimientos establecidos.
Programa de mantenimiento: Un programa de mantenimiento preventivo es esencial
para asegurar la exactitud y longevidad del instrumento. El chequeo peridico
recomendado es importante para minimizar el dao o la necesidad de servicio y
reparacin. El Director del laboratorio es responsable por el programa general y el jefe
de la seccin la responsabilidad primaria en su rea de trabajo. Puede en algunos casos
relegar la responsabilidad en el Departamento de Biomdica de la institucin quienes
coordinarn con la casa suplidora el programa de mantenimiento.
Manual Estndar de Procedimientos Operacionales: El Manual Estndar de
Procedimientos Operacionales debe ser organizado por grupo de equipos.
Un listado de los equipos debe incluir: nombre, marca, modelo, nmero de serie,
fecha de recibo y nmero de inventario de la institucin.
Los nuevos equipos requieren una inspeccin previa de Biomdica para garantizar su
funcionabilidad y seguridad elctrica.
El Manual debe incluir el rcord de mantenimiento preventivo, periodicidad de la
inspeccin y fallas del instrumento.
El Manual debe estar accesible en todo momento.
Validacin de Equipos : Los nuevos equipos de mayor impacto en el cuidado del

paciente ( Vitek, Bactec, BacT/alert) requieren estudios de validacin para determinar
que su funcionamiento es al menos comparables a los equipos existentes o a mtodos
de referencia. Estos equipos son aceptados solo si logran cumplir las metas mnimas
de funcionabilidad y eficiencia al compararse con los existentes.
Este rcord de validacin debe mantenerse por toda la vida til del equipo.
Manual de Instrucciones del Uso del Instrumento: Estos Manuales deben estar
incluidos en el Manual de Operaciones del instrumento, redactados en forma clara,
en el idioma de los usuarios, inclusive la documentacin del entrenamiento del
personal.
117
Cada protocolo debe incluir precauciones de seguridad y los procedimientos de

limpieza y cuidado del instrumento. Los Manuales deben incluir instrucciones bsicas
para resolver problemas menores y un rcord de incidencias, que incluye el tipo de
problema, los pasos tomados para resolverlo y la accin correctiva para evitarlo en el
futuro.
Calibracin del Instrumento : Los equipos que requieren un exacto nivel de precisin
para obtener un resultado seguro, requieren de una calibracin peridica. La fecha de
la calibracin, frecuencia y resultado, deben ser mantenidos en un libro rcord dentro
del laboratorio.
Control de Calidad: Todo equipo debe ser evaluado por un programa de Control de
Calidad en base a las instrucciones del proveedor y las regulaciones internas del
laboratorio. Debe mantenerse un libro rcord de todo lo realizado al respecto, con el
nombre del instrumento, fecha, resultado y comentarios. En otro captulo se
afianzarn los conceptos sobre ste tema.
Referencias y Lectura Suplementaria: El Laboratorio guardar en un flder toda
literatura extra que se obtenga sobre un equipo, sus accesorios, materiales, estudios
forneos sobre su funcionamiento, etc.
a) INCUBADORAS:
Controle diariamente la temperatura de las incubadoras , antes de sacar los
platos y anote en una hoja control el resultado.
Observe el termoregulador por cualquiera alteracin en su posicin
preestablecida.
Coloque las muestras, platos y tubos, en una posicin segura.
Un papel de filtro humedecido con agua en el fondo de la incubadora, es
adecuado para mantener la humedad requerida.
Las incubadoras de CO2 requieren medir el nivel de gas diariamente.
El jefe de seccin debe ser notificado cuando una incubadora falla en mantener
el rango de temperatura aceptable.
Observe macroscpicamente los platos Petri para observar desecacin.
En incubadoras de CO2 , se puede colocar un cultivo de N. Gonorrhoeae ATCC
43069 , subcultivandola cada da, para observar su ptimo crecimiento, ya
que es un microorganismo que necesariamente requiere CO2 para crecer.
Todas las incubadoras deben ser limpiadas mensualmente y llevar un rcord de
mantenimiento preventivo.
b) AUTOCLAVES :
118
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Examine rcord de Temperatura y Presin

Utilice Indicadores de Esterilizacin
Rcord de uso, fecha, temperaturas, presin
Chequeo del nivel de agua
Uso de Indicadores biolgicos de Esterilidad
Chequeo de la vlvula de seguridad
Limpieza del Interior y Exterior.
Limpieza de la Pantalla de Temperatura
Limpieza del drenaje y sellos
Por corrida
Diario
Semanal
Mensual
X
X
X
X
X
X
X
X
X
c) CAMARAS DE SEGURIDAD :
Apague la lmpara Ultravioleta antes de comenzar a trabajar.
Prenda el blower 15 minutos antes de utilizar.
Observe que no se obstruye el flujo de aire.
Si hay derrame dentro de la cabina, limpie con un desinfectante apropiado,
manteniendo apagada la cabina.
Evite el uso de mecheros de flama dentro de la cabina.
Lleve un control de la medida del flujo de aire.
Lleve un control de la calibracin del flujo de aire.
Lleve un control del reemplazo de los filtros.
Compruebe los sistemas de alarma de funcionamiento.
La superficie interior de la mesa de trabajo de la cabina, puede ser cultivada
semanalmente para detectar contaminacin.
Desinfecte la cabina antes y despus de utilizar.
No utilice las cabinas biolgicas para hacer mezclas de sustancias qumicas y
viceversa.
Cuando trabaje en la cabina, evite la entrada brusca de aire y el uso innecesario de
las puertas del rea.
d) INCINERADOR :
En condiciones normales el incinerador logra la temperatura ptima de
esterilizacin ( 815C ) 10 minutos despus de haber sido encendido.
Bastan 5 segundos para lograr la destruccin de bacterias, hongos y
micobacterias.
No es necesario observar incandescencia en el asa para lograr la esterilizacin.
Inspeccione la cermica del incinerador por rajaduras.
Aleje el incinerador de elementos que puedan incendiarse por el calor generado.
e) GENERADORES DE AMBIENTE - SISTEMA GasPak
119
Mantenga los generadores de gas a temperatura ambiente y el sobre sellado.

Mantenga los catalizadores en lugar seco, a temperatura ambiente y las bolsas
sellados.
Mantenga los indicadores de anaerobiosis a temperatura de refrigeracin
( 2-8C ).
El tiempo de generacin de la atmsfera dentro de la jarra es de 30 minutos.
El indicador de anaerobiosis cambia de color azul a blanco dentro de la jarra en 4 a
5 horas.
Una evidencia sugestiva de ambiente anaerobio, es el cambio de color a rojo vino
del agar sangre.
Algunos microbilogos utilizan un agar inoculado con Clostridium novyi B
( ATCC 19402 ) como indicador de ambiente anaerobio, ya que el mismo es
anaerobio estricto.
Los catalizadores de Paladio, pueden ser regenerados colocndolos en horno a 160
C por 2 horas.
Control biolgico de crecimiento:
CEPA
Cl. perfringes
Micrococcus luteus
Campylobacter jejuni
ATCC
RESULTADO
13124
9341
33291
Crece
No crece
Crece
Refrigeradoras :
Control diario de la temperatura.

Coloque los platos Petri en posicin invertida con la tapa hacia abajo.
Mantenga la temperatura entre 4 8 C.
Utilice refrigeradoras que no hacen escarcha.
No coloque medios de cultivo an ligeramente calientes dentro de la
refrigeradora.
Evite abrir con frecuencia la puerta de la refrigeradora.
Lleve un registro de problemas de funcionamiento, causa y solucin.
No guarde alimentos en refrigeradoras para especimenes clnicos.
Microscopios :
Cuidados y mantenimiento
Diario
Mensual
Semestral
120
1.
2.
3.
4.
Limpieza del aceite de objetivos, condensador, etc

Apagar la fuente de luz
Colocar cobertor contra el polvo
Limpieza de Ocular, condensador, diafragma
con lquido de limpieza de lentes
5. Limpieza y ajuste del sistema ptico
6. Limpieza y ajuste del sistema lumnico
7. Limpieza y lubricacin del sistema mecnico
X
X
X
X
X
X
X
______________________________________________________________________
Centrfugas :
_____________________________________________________________________________________
Elemento / accin
Por corrida Diario Semanal Mensual Anual
1. Verificar tubos por rajaduras
X
2. Verificar por restos de vidrio o lquido
dentro del porta tubo o las copas
X
3. Verificar por balance de cada lote
X
4. Verificar por la temperatura de
funcionamiento ( Refrigeradas )
X
5. Limpieza de cualquier derrame
X
6. Limpieza de la olla del rotor
7. Limpieza externa
8. Desinfeccin de la olla del rotor
9. Verificacin de brochas
10. Chequeo del circuito elctrico
11. Certificacin del velocmetro
12. Medicin de la temperatura interna
con termmetro calibrado ( Centrfugas refrigeradas )
X
X
X
X
X
X
X
Problemas y Limitaciones:
Vibracin
Chequear por balance apropiado.
Chequear tamao de los tubos.
Mirar si la centrfuga est sobre una superficie plana.
Rotura
Chequear tamao de los tubos.
Balance correcto.
Verificar el interior de los porta tubos
Desprendimiento de tapas:
Utilice tapas de rosca.
Si no es posible, use Parafilm sobre los tapones de caucho.
Siempre que sea posible utilice tubos de plstico.
121
4) No centrifuge grandes volmenes de lquidos inflamables, los cuales pueden

producir vapores que pueden incendiarse durante la operacin del equipo.
La concentracin de materiales infecciosos para cultivo puede realizarse en el rea
rutinaria de cultivo, siempre y cuando los tubos estn bien cerrados.
No colocar las tazas o los porta tubos en el horno o autoclave para descontaminar.
Evitar utilizar para la limpieza soluciones que contengan cloro o sal, ya que son
altamente corrosivas.
1. CONTROL DE CALIDAD DE EQUIPOS COMPUTARIZADOS
El laboratorio de microbiologa moderno se auxilia de equipos computarizados

para ayudar en la rapidez y precisin del diagnstico etiolgico. En la seccin de
Microbiologa del Laboratorio Clnico del C.H.M,Dr. A.A. Madrid contamos hasta la
fecha de 4 sistemas computarizados: BacT/Alert y Bactec para los hemocultivos,
Vitek System para la identificacin y antibiogramas y mas recientemente el
Bactec MGIT 960 para la deteccin de micobacterias.
Cada uno de stos equipos, consta de sus propios sistemas para el control de
calidad. A continuacin presentamos algunas observaciones relativas al control de
calidad de los referidos equipos:
a) BacT/Alert:
El sistema BacT/Alert es utilizado para la deteccin temprana de

microorganismos en hemocultivos u otros fluidos corporales. El sistema utiliza un
sensor colorimtrico y una luz reflejada para monitorear la presencia y produccin de
CO2 disuelto en el medio de cultivo. Si existen microorganismos en la muestra, se
genera CO2 cuando los microorganismos metabolizan los substratos del medio de
cultivo. Si el crecimiento de los microorganismos genera CO2, el color del sensor
gas-permeable instalado en el fondo de cada frasco de cultivo cambia de verde a
amarillo.
Cada equipo trae consigo un kit de reflectancia estndar para los procedimientos
de control de calidad y de calibracin. Adems, de un software para ayudar en
pantalla a realizar el mismo. A parte de esto, cada lote de frascos de cultivo es
suministrado con un Certificado de Anlisis de control de calidad de fbrica.
122
El BacT/Alert utiliza 3 determinantes de control de calidad: Control de calidad

de las celdas, Calibracin de las celdas y Calibracin de la temperatura del equipo.
La opcin Control de Calidad de las Celdas es utilizada para asegurar que las
celdas del instrumento estn en su ptima capacidad de deteccin.. Este control debe
ser parte del mantenimiento normal del sistema. Un kit estndar de reflectancia es
proporcionado con cada instrumento para los procesos de control de calidad y
calibracin. Son dos estndares de reflectancia en cada kit, sin embargo, el proceso de
control de calidad solo utiliza el estndar de reflectancia B. El anillo al final de los
estndares identifica su nmero estndar de reflectancia. Cuando el control de calidad
de una celda falla y no es recalibrada, sta automticamente es inactivada.
Generalmente el periodo de control de calidad para cada celda est
configurado en 30 das en base al men Editar Configuracin del Sistema del captulo
Mantenimiento de Funciones del Sistema. Este control solo se puede realizar en
celdas vacas. Al final de que todas las celdas han sido evaluadas, puede obtenerse por
impresin un Reporte del Estado de las Celdas, luego de lo cual el instrumento
retorna automticamente al men Funciones de Mantenimiento del Instrumento.
La opcin Calibracin de Celdas, es utilizada para recalibrar cualquier celda que
haya fallado el control de calidad. El kit viene con dos estndares de reflectancia. El
procedimiento utiliza ambos. El instrumento automticamente recalibra la celda una
vez se ha introducido el estndar cuando lo indique el instrumento. Si la calibracin de
la celda falla, el instrumento automticamente inactiva la celda. Al final se puede
obtener un reporte del estado del instrumento y la pantalla retorna automticamente
al men de Funciones de Mantenimiento del Instrumento.
La opcin Calibracin de la Temperatura, es utilizada para calibrar la
temperatura dentro del instrumento. Primero se mide la temperatura interna del
instrumento utilizando el proceso descrito en Verificacin de la Temperatura del
captulo Mantenimiento Preventivo. Solo utilice sta opcin si hay discrepancia entre
la temperatura marcada por el equipo y la temperatura ptima preestablecida.
En el Men principal ir a Otras Funciones BacT/Alert.

Mantenimiento del Instrumento.
a1) Control de calidad.
b1) Control de calidad de celdas.
c1) Lista de Celdas
d1) Seleccionar la tecla F9
f1) Introducir los estndares de calibracin de celdas siguiendo las
instrucciones de la pantalla.
a2) Calibrar celdas.
b2) Quiere calibrar la celda x
c2) Si
123
d2) Introducir el estndar I en la celda x
a3) Calibrar temperatura

b3) Seleccionar y ajustar la temperatura del equipo.
Observaciones y Limitaciones del Test:
En cada frasco se debe anotar su nmero de laboratorio y la casilla asignada.
Colocar los frascos hasta el fondo de la celda.
No aerear los frascos anaerobios.
Todo frasco con frotis negativo, debe ser colocado nuevamente en el aparato.
Ciertas variantes de H. influenzae, N. Meningitidis, N. Gonorrhoeae y
P. anaerobius, pueden ser sensibles al anticoagulante ( SPS ) lo que resulta
en una falta de crecimiento o baja produccin de CO2.
En el caso de cultivo de otros fluidos corporales, se requiere agregar sangre
u otro suplemento al frasco si se intenta recuperar organismos tales como
H. influenzae y N. gonorrhoeae.
En contadas ocasiones pueden presentarse BacT/Alert positivos, con frotis y
subcultivos negativos, debido a una excesiva cantidad de glbulos blancos
en la muestra de sangre.
Se recomienda quitar del aparato, aquellos frascos considerados positivos por
el BacT/Alert, para evitar cultivos no viables debido a autolisis,
especialmente en microorganismos fastidiosos como el S. pneumoniae.
BACTEC 9240 :
El sistema Bactec 9240 es utilizado para la deteccin temprana de

microorganismos en hemocultivos por el mtodo de la fluorescencia.
Cada frasco contiene un sensor que puede detectar aumentos del CO2 producido por
el crecimiento de los microorganismos. Cada 10 minutos el instrumento verifica el
aumento de la fluorescencia del sensor, la que se relaciona con la cantidad de CO2
presente.
Observaciones y limitaciones del test:
1.. No utilice frascos con signos evidentes de deterioro.

No utilice frascos de cultivo despus de la fecha de caducidad.
Los frascos inoculados deben ponerse en el instrumento tan pronto como sea
posible.
Si se ha tardado en colocar un frasco inoculado en el instrumento, y se puede ver
crecimiento, el frasco no debe analizarse en el instrumento, sino subcultivarse y
hacer placa por Gram, considerndolo como un frasco presuntamente positivo.
124
Se recomienda analizar el rendimiento de cada lote de frascos recibidos, utilizando

un control positivo y uno negativo. El frasco positivo debe inocularse con 1.0 ml
de una suspensin de E. coli o S. aureus con un estndar McFarland de 0.5.
El control negativo est constituido por un frasco sin inocular.
Dado que la sangre puede neutralizar la accin txica del anticoagulante SPS
sobre algunas Neiserias y cocos Grampositivos anaerobios, se recomienda utilizar
volmenes de sangre no menores a 1.0 ml para facilitar el crecimiento.
Ciertos organismos exigentes como el H. influenzae requieren para su crecimiento de
elementos que se encuentran en la sangre como el factor V. Si la muestra de
sangre es reducida, es posible que se requiera agregar stos suplementos al
frasco si se sospecha de stos microorganismos.
Puede darse casos de falso positivo en pacientes con un conteo de leucocitos muy
elevado.
Sistema Vitek:
El control de calidad , es un subsistema del Vitek, que examina la seguridad de

sus tarjetas. El control de calidad opera similarmente a la evaluacin de exmenes
clnicos. El test clnico identifica el organismo, el examen de control de calidad valida el
test.
1. El programa de control de calidad evala el kit del Vitek y los
organismos de control de calidad listados en el paquete.
Las tarjetas de control de calidad utilizan 7 dgitos, compuestos de 2 partes:
Los primeros 6 dgitos identifican el tipo de tarjeta y un organismo ATCC.
El sptimo dgito identifica el nmero de lote.
Cada nmero predefinido de referencia en el control de calidad significa un tipo
de test y un organismo. Un nmero de referencia de control de calidad es ms
que un nmero de identificacin de tarjeta. Cada uno de stos nmeros
significa
la paridad de un tipo de tarjeta con un organismo. As por ejemplo el nmero
de
referencia 900101 corresponde al Proteus mirabilis ( ATCC 7002 ) y el 900102
a la Ps. aeruginosa ( ATCC 27853 ).
Un campo para control de calidad demogrfico est accesible para la informacin
del lote de la tarjeta.
El control de calidad provee su propio set especial de reporte.
El flujo de operacin del control de calidad es idntico al flujo de una muestra
clnica.
Los resultados de control de calidad se transfieren de la incubadora/lector a la base
de datos, si la opcin de transferir la tarjeta finalizada est activa.
Todos los resultados se mueven a travs del manejador de desviaciones del control
de calidad, el cual compara los resultados actuales con los conocidos.
El programa de control de calidad Vitek permite ver los resultados del control en
pantalla., los cuales aparecen en 3 diferentes formatos: Resultado de la
125
identificacin, resultado de la sensibilidad a los antibiticos y Resultado de la

Identificacin de Urocultivos. La pantalla nos indica :
La identificacin del organismo esperado ( ATCC ).
Resultado de la identificacin actual.
Lote de la tarjeta.
Fecha del test.
Fecha de expiracin de la tarjeta.
Reacciones bioqumicas esperadas y de la prueba actual. Cada uno de
los test bioqumicos son sealados tanto en lo esperado como en el
resultado actual, y se genera una lista de los test que se han
desviado del resultado esperado.
Igual patrn al anterior muestra la tarjeta de sensibilidad a los
antibiticos.
Todos los resultados de control de calidad pueden ser imprimidos para
guardar en un libro rcord.
La base de datos de los equipos de identificacin computarizados, deben ser

frecuentemente revisados para actualizarlo en lo referente a los cambios
taxonmicos que ocurran. Igualmente se debe prestar atencin a la
informacin
proveniente de la casa manufacturera acerca del producto y las investigaciones
que con el equipo aparezcan en la literatura especializada.
El sistema Vitek tambin cuenta con un programa que ayuda a evaluar los
resultados, minimizando los errores de interpretacin. Se trata del bioMrieux
Vitek Expert System, un programa que usa la lgica proposicional, es decir llega
a ofrecer ciertas conclusiones basado en la informacin formulada.
El programa puede detectar:
Identificaciones que son inconsistente con los resultados de sensibilidad.
Errores tcnicos.
Fenotipos raros o improbables.
Expresiones de resistencia incompleta.
Resistencia cruzada.
El sistema tambin permite la adicin de reglas ( CAR ) en la que se establecen
parmetros que debe cumplir el reporte antes de su impresin.
Sistema Bactec MGIT 960 :

El sistema Bactec MGIT 960 es utilizado para la deteccin temprana de
micobacterias en especimenes clnicos. El control de calidad del instrumento es
automtico y est activo continuamente para asegurar la operacin confiable del
sistema.
126
El reporte de control de calidad suministra una lista del estado de todos los
detectores del instrumento con la fecha y hora de la ltima verificacin, e incluso la
lista de las celdas bloqueadas, temperatura de cada incubadora, estado de los
sensores, etc.
Control diario del Equipo:

Verificar la operacin de las gavetas/incubadoras y las lmparas indicadoras de
estacin.
Realizar test de las luces LED indicadoras ( Verde y Roja ).
Chequear el termmetro apretando el botn de test.
Cada vez que se recibe un lote nuevo de tubos MGIT , se sugiere control de
calidad de cepas ATCC en caldo Middlebrook 7H9.
______________________________________________________________________
Especie
ATCC
Dilucin 0.5 McFarland
Das para ser detectado
( Suspensin en salina )
Positivo
______________________________________________________________________
M. tuberculosis 27294
1:500
6 10
M. kansasii
12478
1:50000
7 11
M. fortuitum
6841
1:5000
1-3
______________________________________________________________________
Control de Calidad Negativo:

Utilice un frasco MGIT con solucin descontaminante MycoPrep kit y PANTA (
Mezcla antimicrobiana ). colquelo en la incubadora/detector.
Colocar un frasco de MGIT sin muestra y sin descontaminante y colquelo en la
incubadora/detector.
Inocule una suspensin de E. coli dentro de un tubo MGIT y colquelo dentro de la
incubadora/detector.
Control de Calidad Positivo:

Inocule un frasco de MGIT con una cepa control domstica de Mycobacterium
tuberculosis o una cepa control de M. Tuberculosis ATCC 25177
o M. Intracellulare ATCC 13950 y colquelo en la incubadora.
Es importante comprobar que el agua, reactivos de tincin, suplementos, etc,
estn libres de contaminacin por micobacterias ambientales especialmente
M. Gordonae y M. Terrae.
CONTROL DE CALIDAD DE FORMULAS LACTEAS y
MAMADERAS PARA EL SERVICIO DE NEONATOLOGIA :
127
El control de calidad de las frmulas lcteas y mamaderas se realiza como un

servicio al Departamento de Neonatologa del hospital. Bsicamente ste control
consiste en un recuento bacteriano de bacterias mesfilas y recuento de bacilos
coliformes.
Consideraciones referentes al control de calidad:
Mantener control sobre la esterilidad de los platos Petri y las pipetas.
Si al calentar los tubos para diluir el agar base o el Red Bile presentaran turbidz,
descartar ya que es signo de contaminacin del medio.
Es preferible no mezclar por inversin la leche para homogenizar, ya que se puede
salpicar la parte interna de las mamaderas y si hubiera contaminacin de la
leche, sta se puede extender a la mamadera.
Evitar servir muy calientes el agar base o el Red Bile al plato Petri conteniendo la
muestra a evaluar, ya que se pueden matar los posibles grmenes. Una
temperatura de aproximadamente 30-40 C es apropiada, sin dejar coagular
el agar.
Mezclar homogneamente el agar y la muestra rotando el plato y sin permitir la
formacin de cogulos.
Las frmulas lcteas solo pueden guardarse en refrigeracin por un mximo de 48
horas antes de ser procesadas.
En condiciones normales la leche y las mamaderas deben ser estriles.
Si repetitivamente se observa contaminacin de la leche, solicitar a las
nutricionistas encargadas de la supervisin de la preparacin de las frmulas,
una muestra de leche en polvo para un cultivo directo y una muestra de agua,
si fuera necesario.
NOTA: Solo como referencia se describen los grados de leche pasteurizada

establecidos en Panam, mediante el decreto # 522 de 1957
Grado A : No debe exceder de 30,000 col/ ml.
Recuento de coliformes no mayor de 10 col/ml.
Grado B: No debe exceder de 50,000 col/ml.
Recuento de coliformes no mayor de 10 col/ml.
CONTROL DE CALIDAD DEL AGUA DESTILADA:
128
El agua destilada utilizada en la preparacin de medios de cultivos y para

reconstituir reactivos, debe tener un control de calidad bsico que incluye los
parmetros qumicos y bacterianos.
Control de Calidad Qumico:
Este control puede ser realizado teniendo en cuenta una gran variedad de parmetros
a evaluar, tales como:
Ph
Conductividad
Olor
Color aparente
Turbidz
Alcalinidad
Dixido de carbono
Dureza
Iones
Cationes
Metales pesados
Sin embargo, dadas las limitaciones para realizar un estudio profundo,
recomendamos el siguiente mtodo sencillo y apropiado para determinar la calidad
del agua, aparte de la determinacin de su Ph ( 5.0 5.5 ).
Reactivos:
a) Solucin Acuosa de Nitrato de plata ( NO3Ag )
NO3Ag ......... 5.1 g
Agua destilada ............ 300 ml
b) Acido Ntrico
Mtodo:
Colocar en un vaso qumico limpio :
10 ml de agua destilada a examinar
2 gotas de cido ntrico
1 ml de Solucin de NO3Ag
Evaluacin:
El agua deber continuar completamente clara. Si aparece una ligera turbidz
blanquecina, indicar que la calidad es deficiente.
Ref: manual de Tcnicas Bsicas OPS/OMS N 439, pag. 58
129
Control de Calidad Microbiolgico del Agua destilada:

Agregar 1 ml de agua destilada a examinar, a un tubo de Tioglicolato.
Agregar 1 ml de agua destilada a examinar a un plato de agar sangre.
Incubar a 35.5 C por 4 das.
Llevar un libro rcord del control de calidad del agua.
INFECCIONES NOSOCOMIALES.EL PAPEL DEL

LABORATORIO EN LA VIGILANCIA Y CONTROL DE LAS
INFECCIONES NOSOCOMIALES.

130
INFECCIONES NOSOCOMIALES. EL PAPEL DEL LABORATORIO EN LA VIGILANCIA Y

CONTROL DE LAS INFECCIONES NOSOCOMIALES.
QFB Juana Salazar Salinas. Jefa del Laboratorio de Vigilancia Epidemiolgica.
Subdireccin de Prevencin y Proteccin a la Salud. ISSSTE.
La incidencia de infecciones nosocomiales (IN) en los hospitales es un indicador primordial de
la calidad de los servicios que estos ofrecen. Para las instituciones hospitalarias, las IN resultan
ser una de las principales causas de morbilidad y mortalidad, as como un pesado gravamen a
los costos de salud.
El laboratorio de microbiologa clnica es el pilar fundamental para el programa de prevencin
y control de las infecciones nosocomiales, ya que proporciona de manera oportuna la
informacin de los casos de IN, adems de integrar y analizar la informacin de los
microorganismos responsables de las mismas.
Una de las responsabilidades del laboratorio es garantizar la calidad de la informacin
generada para la notificacin que realizan las instituciones a la Red
Hospitalaria de Vigilancia Epidemiolgica (RHOVE) y se cumpla con los estndares requeridos.
Para lograr dichos objetivos el laboratorio debe realizar algunas funciones especficas entre las
que se encuentran:
Aislamiento e identificacin de microorganismos dentro de la rutina del laboratorio clnico:
bacterias, virus, parsitos y hongos.
Establecer y uniformar prcticas reproducibles de aislamiento, identificacin y determinacin
de resistencia bacteriana
Buscar el aislamiento de las cepas causantes de un probable brote
Apoyo microbiolgico para programas de vigilancia y control de las infecciones:
Evaluacin de la resistencia a los antibiticos.
Cultivos de vigilancia.
Caracterizacin microbiolgica detallada de microorganismos especficos especialmente para
definir brotes, fuente de diseminacin, reservorios y rutas de transmisin: fenotipificacin y
genotipificacin.
Realizar control de calidad interno y externo.
Participacin activa en el Comit de Deteccin de Infecciones Nosocomiales (CODECIN).
Coordinacin con los servicio de Epidemiologa e Infectologa
131
ANEXOS
KRIBY BAUER
B.Mtodos de difusin
B.1. Mtodo del antibiograma disco-placa
B.1.1. Fundamento
El antibiograma disco-placa basado en el trabajo de Bauer, Kirby y colaboradores es uno de los
mtodos que el National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) recomienda
para la determinacin de la sensibilidad bacteriana a los antimicrobianos. El antibiograma
disco-placa consiste en depositar, en la superficie de agar de una placa de
petri previamente inoculada con el microorganismo, discos de papel secante impregnados con
los diferentes antibiticos. Tan pronto el disco impregnado de antibitico se pone en contacto
con la superficie hmeda del agar, el filtro absorbe agua y el antibitico difunde al agar. El
antibitico difunde radialmente a travs del espesor del agar a partir del disco formndose un
gradiente de concentracin.
Transcurridas 18-24 horas de incubacin los discos aparecen rodeados por una zona de
inhibicin.
La concentracin de antibitico en la interfase entre bacterias en crecimiento y bacterias
inhibidas se conoce como concentracin crtica y se aproxima a la concentracin mnima
inhibitoria (CMI) obtenida por mtodos de dilucin. Sin embargo, los mtodos disco-placa no
permiten una lectura directa del valor de la CMI. Para cuantificarla, basta con haber
contrastado previamente el sistema disco-placa con un gran nmero de cepas de CMI
conocidas que han estado previamente determinadas por otros mtodos de determinacin de
la sensibilidad a los antimicrobianos (ej.: mtodo de dilucin). Esta determinacin se realiza
con cientos de bacterias para minimizar errores. Se mide el dimetro de la zona de inhibicin
obtenida por cada una de tales cepas y se grafica dicha medida frente a la CMI, obtenindose
la lnea de regresin o "recta de concordancia" que proporciona la correspondencia entre las
CMI y los dimetros de inhibicin. Para determinar la CMI de una cepa se procede a medir el
dimetro de la zona de inhibicin y luego extrapolarlo en el grfico para obtener la CMI.
Existen, por tanto, unos dimetros de inhibicin, expresados en mm, estandarizados para cada
antimicrobiano. La lectura de los halos de inhibicin debe interpretarse como sensible (S),
intermedia (I) o resistente (R) segn las categoras establecidas por el NCCLS
Materiales
Tubos con suero fisiolgico (0,85 g de NaCl en 100 ml de agua destilada estril).
Escobillones estriles.
Medio de cultivo.
Generalmente se utiliza agar Mueller-Hinton, regulado en su concentracin de iones
divalentes, aunque existen excepciones que se describen ms adelante. El medio Mueller
Hinton posee una concentracin baja de iones divalentes y debe ser suplementado para
obtener concentraciones fisiolgicas (20 a 35 g/litro de Mg2+ y 50 a 100 g/litro Ca2+). Este
medio es el recomendado por la NCCLS porque en l crecen bien la mayor parte de las
bacterias patgenas, hay muy pocas diferencias entre los distintos lotes comercializados, lo
que ayuda a una estandarizacin entre laboratorios, y adems no contiene timina o timidina,
que son inhibidores de sulfamidas y del trimetoprim.
El pH del medio debe ajustarse entre 7,2-7,4, debe almacenarse a 2-8C y utilizarse dentro de
los 7 das siguientes a su preparacin. El medio debe dejarse a temperatura ambiente unas dos
horas antes de utilizarlo. Si existe agua en la superficie del agar, las placas pueden colocarse en
el incubador a 35C durante unos 30 minutos con la tapa ligeramente entreabierta.
132
Discos de antibiticos. Se deben guardar a 4C y dejarlos a temperatura ambiente 1

hora antes de utilizarlos. Los discos se congelarn si son antimicrobianos betalactmicos y ha de transcurrir ms de una semana hasta su utilizacin. Por regla
general, se recomienda reemplazar los discos de beta-lactmicos que estn
refrigerados con aquellos que se encuentran congelados. El deterioro de los discos
ocurre si son sometidos a humedad o a frecuentes fluctuaciones de temperatura. En el
caso de utilizar dispensador, ste debe tener una tapa muy ajustada y un desecante,
que ser substituido cuando por exceso de humedad cambie de color el indicador.El
dispensador debe mantenerse refrigerado cuando no se vaya a utilizar.
Mtodo
Para la determinacin del antibiograma disco- placa en estafilococos, enterococos,
enterobacterias y bacilos gram-negativos no fermentadores utilizamos el siguiente
procedimiento:
1. Preparacin del inculo
Mtodo del medio de cultivo lquido: Coger de 3 a 5 colonias iguales de la placa de cultivo de
18 a 24 horas y sembrarlas en 5 ml de un medio lquido (Brain-Heart, Todd Hewitt, Tripticasa
soja, etc.) e incubar en la estufa a 35C durante 2 a 6 horas hasta conseguir o superar una
turbidez del 0.5 de la escala de MacFarland. Si la turbidez es superior se realiza el ajuste
necesario con suero salino estril. (Preparacin de la suspensin MacFarland ver apartado
control de calidad).
2. Mtodo de suspensin directa de colonias
A partir de una placa de cultivo de 18 a 24 horas coger varias colonias con un asa y ajustar el
inculo a una turbidez equivalente al 0.5 de la escala de MacFarland 0.5 en suero fisiolgico.
3. Agitar en un agitador "vortex" durante 15-20 segundos.

4. Se recomienda utilizar el primer mtodo si el cultivo tiene ms de 24 horas de
incubacin. El segundo mtodo es el ms adecuado para microorganismos de crecimiento
difcil en medios lquidos (Haemophilus spp., N. gonorrhoeae, S. pneumoniae, estrepococos no
enterococos, Listeria, Moraxella y Corynebacterium spp.) y para estafilococos en los que se
quiera detectar la resistencia a oxacilina
5. Inoculacin de las placas. Antes de que transcurran 15 minutos de haber ajustado el
inculo, introducir un escobilln dentro de la suspensin y al retirarlo rotar varias veces contra
la pared del tubo por encima del nivel del lquido con la finalidad de eliminar el exceso de
inculo.
- Inocular las placas de Mueller-Hinton completamente, sin dejar ninguna zona libre. Esto se
consigue deslizando el escobilln por la superficie del agar tres veces, rotando la placa unos
133
60 cada vez y pasndola por ltimo por la periferia del agar para conseguir una siembra
uniforme. Dejar secar de 3 a 5 minutos antes de depositar los discos.
6. Dispensacin de los discos.

Colocar los discos con los dispensadores o manualmente con pinzas estriles. Debe asegurase
que contacten perfectamente con la superficie del agar, por lo que deben presionarse
ligeramente sobre la superficie del agar. No deben situarse a menos de 15 mm del borde de la
placa, y han de estar distribuidos de forma que no se produzca superposicin de los halos de
inhibicin. Para placas de 150 mm no se emplearn ms de 12 discos y para las de 100 mm no
ms de 6.
- Incubar las placas invertidas (agar en la parte superior), en grupos no superiores a 5 placas, a
35C en atmsfera aerbica antes de que transcurran 15 minutos. Las placas se incubarn 1618 horas (con estafilococos sensibles a meticilina debe prolongarse la incubacin hasta 24
horas para confirmar la ausencia de resistencia a la meticilina).
134
Lectura de los resultados.

Despus de 18 horas de incubacin leer el dimetro de las zonas de completa inhibicin con un
pie de rey o regla. Si el microorganismo es un estafilococo o un enterococo debemos esperar
24 horas para asegurar la sensibilidad a la oxacilina y vancomicina. Las zonas de los medios
transparentes se miden sobre el reverso de la placa y los medios que contienen sangre sobre la
superficie del agar. En las pruebas de sensibilidad a meticilina en estafilococos el halo
alrededor de la oxacilina debe observarse utilizando luz transmitida para visualizar las colonias
diminutas.
Cuando aparecen colonias dentro del halo de inhibicin, puede tratarse de mutantes
resistentes, contaminaciones, poblaciones heterogneas o cultivos mixtos y conviene volver a
identificarlas y realizar otra vez el ensayo de sensibilidad antimicrobiana. Como regla general,
no debe considerarse aquellas colonias diminutas que aparecen en el halo de inhibicin y que
han sido visualizadas mediante luz transmitida o con ayuda de una lupa, a excepcin de
estafilococos resistentes a oxacilina o enterococos resistentes a vancomicina. La interpretacin
de los resultados puede realizarse en funcin de las normas del NCCLS.
135
DIAGRAMA KIRBY BAUER
136
Tablas de halo de inhibicin por antibiticos.

E. coli
E. coli
137
138
Enterococos sp.
FUENTE:
http://coesantseimc.org/documents/M%C3%A9todosB%C3%A1sicos_SensibilidadAntibi%C3%
B3ticos.pdf
Vaginosis
Criterio
diagnstico
pH vaginal
Flujo vaginal
Normal
< 4.5
Claro o blanco
flocular
Vaginosis
bacteriana
> 4.5
Blanco, grisceo,
homogneo
Prueba de
aminas (olor
a pescado)
Microbiota
vaginal
No
Lactobacillus spp.
Examen
microscpico
Clulas
epiteliales,
predominio
deLactobacillus.
Gardnerella
vaginalis
Micoplasmas
y anaerobios
Clulas clave.
Escasos
polimorfonucleares,
flora mixta
Vaginitis
por Trichomonas
> 4.5
Amarillo, verdoso,
homogneo, con
frecuencia
espumoso
S
Vulvovaginitis
porCandida
< 4.5
Blanco, en
agregados
adherentes
Trichomonas
vaginalis
C. albicans y
otras levaduras
Trichomonas
vaginalis,
leucocitos
Levaduras,
seudomicelios
leucocitos,
clulas
epiteliales.
No
139
Diagnstico de tuberculosis
Calidad de la muestra
La muestra de esputo mucopurulenta, proveniente de rbol bronquial, es la que asegura
mayor probabilidad de que se puedan observar bacilos.
Baciloscopa.
140
Fuente: whqlibdoc.who.int/hq/2007/WHO_HTM_TB_2007.379_spa.pdf
Fuente: Jawetz, microbiologa mdica, 25 ed. Mac Graw Hill, 2010, Espaa.
Identificacin de Haemophilus influenzae
141
Identificacin de Streptococcus pneumeniae
Esteptococos hemolticos
142
Familia Pastereullaceae
143
NORMA Oficial Mexicana NOM-045-SSA2-2005, Para la vigilancia

epidemiolgica, prevencin y control de las infecciones
nosocomiales.
file:///C:/Users/DELL/Downloads/II_E_NOM_38.pdf
SECRETARIA DE SALUD
NORMA Oficial Mexicana NOM-045-SSA2-2005, Para la vigilancia
epidemiolgica, prevencin y control de las infecciones nosocomiales.
Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretara de
Salud.
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-045-SSA2-2005, PARA LA VIGILANCIA EPIDEMIOLOGICA,
PREVENCION Y
CONTROL DE LAS INFECCIONES NOSOCOMIALES.
MAURICIO HERNANDEZ AVILA, Subsecretario de Prevencin y Promocin de la Salud y
Presidente del
Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Prevencin y Control de Enfermedades, con
fundamento en los artculos 39 de la Ley Orgnica de la Administracin Pblica Federal; 4 de la
Ley Federal de Procedimiento
Administrativo; 3o. fraccin XVII, 13, apartado A fraccin I, 133 fraccin I, y 141 de la Ley
General de Salud;
38 fraccin II, 40 fracciones III y XI, 41, 43 y 47 fraccin IV y 51 de la Ley Federal sobre
Metrologa y
Normalizacin; 28 del Reglamento de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin, y 8
fraccin V, 10 fracciones VII y XVI, y 45 fraccin VII, del Reglamento Interior de la Secretara de
Salud, he tenido a bien ordenar la publicacin en el Diario Oficial de la Federacin de la Norma
Oficial Mexicana NOM-045-SSA22005, Para la vigilancia epidemiolgica, prevencin y control de las infecciones nosocomiales.
CONSIDERANDO
Que con fecha 8 de diciembre de 2005, en cumplimiento de lo previsto en el artculo 46
fraccin I, de la
Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin, el Centro Nacional de Vigilancia Epidemiolgica
y Control de
Enfermedades present al Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Prevencin y
Control de
Enfermedades, el anteproyecto de la presente Norma Oficial Mexicana.
Que con fecha 7 de agosto de 2006, en cumplimiento del acuerdo del Comit y lo previsto en
el artculo 47 fraccin I, de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin, se public en el
Diario Oficial de la Federacin el Proyecto de Norma, a efecto de que dentro de los siguientes
sesenta das naturales posteriores a dicha publicacin, los interesados presentaran sus
comentarios al Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de
144
Prevencin y Control de Enfermedades.

Que con fecha 2 de abril de 2007, fueron publicados en el Diario Oficial de la Federacin las
respuestas a los comentarios recibidos por el mencionado Comit, en los trminos del artculo
47 fraccin III, de la Ley
Federal sobre Metrologa y Normalizacin.
Que en atencin a las anteriores consideraciones, contando con la aprobacin del Comit
Consultivo
Nacional de Normalizacin de Prevencin y Control de Enfermedades, el 23 de junio de 2009,
se expide la siguiente:
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-045-SSA2-2005, PARA LA VIGILANCIA EPIDEMIOLOGICA,
PREVENCION Y CONTROL DE LAS INFECCIONES NOSOCOMIALES
PREFACIO
En la elaboracin de esta Norma Oficial Mexicana, participaron las unidades administrativas e
instituciones siguientes:
SECRETARIA DE SALUD
Subsecretara de Prevencin y Promocin de la Salud
Centro Nacional de Vigilancia Epidemiolgica y Control de Enfermedades
Direccin General Adjunta de Epidemiologa
Instituto de Diagnstico y Referencia Epidemiolgicos
Centro Nacional para la Prevencin y el Control del VIH/SIDA
Subsecretara de Innovacin y Calidad
Direccin General de Calidad y Educacin en Salud
Comisin Federal para la Proteccin contra Riesgos Sanitarios
Direccin General de Salud Ambiental
Comisin Coordinadora de Institutos Nacionales de Salud y Hospitales de Alta Especialidad
Hospital Infantil de Mxico Federico Gmez
Instituto Nacional de Cancerologa
Instituto Nacional de Cardiologa Ignacio Chvez
Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias Ismael Coso Villegas
145
Instituto Nacional de Ciencias Mdicas y Nutricin Salvador Zubirn

Instituto Nacional de Neurologa y Neurociruga Manuel Velasco Surez
Instituto Nacional de Pediatra
Instituto Nacional de Perinatologa Isidro Espinosa de los Reyes
Instituto Nacional de Salud Pblica
SECRETARIA DE LA DEFENSA NACIONAL
Direccin General de Sanidad
SECRETARIA DE MARINA
Direccin General Adjunta de Sanidad Naval
INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL
Direccin de Prestaciones Mdicas
Unidad del Programa IMSS Oportunidades
Coordinacin de Vigilancia Epidemiolgica y Apoyo en Contingencias
Coordinacin de Unidades Mdicas de Alta Especialidad
Centro Mdico Nacional Siglo XXI
INSTITUTO DE SEGURIDAD Y SERVICIOS SOCIALES DE LOS TRABAJADORES DEL ESTADO
Jefatura de Servicios de Regulacin de Medicina Preventiva y Control Epidemiolgico
SISTEMA NACIONAL PARA EL DESARROLLO INTEGRAL DE LA FAMILIA
PETROLEOS MEXICANOS
Subgerencia de Prevencin y Control de Enfermedades
SECRETARIA DE SALUD DEL GOBIERNO DEL DISTRITO FEDERAL
ACADEMIA MEXICANA DE CIRUGIA
ASOCIACION MEXICANA DE INFECTOLOGIA Y MICROBIOLOGIA CLINICA, A.C.
ASOCIACION MEXICANA PARA EL ESTUDIO DE LAS INFECCIONES NOSOCOMIALES, A.C.
COLEGIO NACIONAL DE ENFERMERAS, A.C.
SOCIEDAD MEXICANA DE SALUD PBLICA, A.C.
146
INDICE
0. Introduccin
1. Objetivo y campo de aplicacin
2. Referencias
3. Definiciones, smbolos y abreviaturas
4. Generalidades
5. Flujo de la informacin
6. Criterios para el diagnstico de infecciones nosocomiales
7. Organizacin
8. Capacitacin y asesora
9. Supervisin y evaluacin
10. Aspectos generales de prevencin y control
11. Investigacin
12. Concordancia con normas internacionales y mexicanas
13. Bibliografa
14. Observancia de la Norma
15. Vigencia
0. Introduccin
Desde mediados de los aos ochentas, en Mxico, el control de infecciones nosocomiales se
formaliza a partir del programa establecido en el Instituto Nacional de Ciencias Mdicas y
Nutricin Salvador Zubirn
(INCMNSZ) que se extiende a los otros institutos nacionales de salud y desde donde surge la
Red Hospitalaria de Vigilancia Epidemiolgica (RHOVE). Fue en el INCMNSZ donde se elabor el
primer manual de control para su aplicacin nacional, y donde surgi la primera propuesta de
creacin de una Norma Oficial Mexicana sobre control de infecciones. A finales de 1989, la
Organizacin Panamericana de la Salud conjuntamente con la Sociedad de Epidemiologa
Hospitalaria de Estados Unidos de Amrica, realiz una conferencia regional sobre la
prevencin y el control de las infecciones nosocomiales. Los objetivos de dicha conferencia
fueron formulados para estimular la implementacin de mecanismos para retomar la
preparacin de normas e instrumentos homogneos sobre la prevencin y control de
147
infecciones nosocomiales. El objetivo fundamental por el cual se instituy la prevencin y el

control de las infecciones nosocomiales fue garantizar la calidad de la atencin mdica.
La vigilancia epidemiolgica de las infecciones nosocomiales se inscribe dentro de estos
propsitos al permitir la aplicacin de normas, procedimientos, criterios y sistemas de trabajo
multidisciplinario para la identificacin temprana y el estudio, prevencin y control de las
infecciones de este tipo. Constituye un instrumento de apoyo para el funcionamiento de los
servicios y programas de salud que se brindan en los hospitales.
Actualmente se reconoce la necesidad de consolidar los mecanismos vigentes de vigilancia
epidemiolgica y ampliar su cobertura mediante el manejo gil y eficiente de la informacin
necesaria para la prevencin y el control de las infecciones nosocomiales, por lo que se
considera indispensable homogeneizar los procedimientos y criterios institucionales que
orienten y faciliten el trabajo del personal que se encarga de estas actividades dentro de los
hospitales.
Las infecciones nosocomiales representan un problema de gran importancia clnica y
epidemiolgica debido a que condicionan mayores tasas de morbilidad y mortalidad, con un
incremento consecuente en el costo social de aos de vida potencialmente perdidos, as como
de aos de vida saludables perdidos por muerte prematura o vividos con discapacidades, lo
cual se suma al incremento en los das de hospitalizacin y del gasto econmico.
A pesar de que se reconoce a la infeccin nosocomial como una complicacin donde se
conjugan diversos factores de riesgo y que es susceptible, en la mayora de los casos de
prevenirse, se debe sealar que existen casos en los que se presenta debido a condiciones
inherentes al husped.
El problema es de gran magnitud y trascendencia. Por ello, es indispensable establecer y
operar sistemas integrales de vigilancia epidemiolgica que permitan prevenir y controlar las
infecciones de este tipo, entendiendo que su ocurrencia debe ser controlada como se describe
pero no es esperable lograr una tasa de cero. Las tasas debern ser evaluadas en su tendencia
temporal y no hay cifras de referencia, buenas o malas. Los programas deben evaluarse por
sus actividades de vigilancia, prevencin y control y no slo por resultados aislados. Debe ser
claro que las epidemias son eventos que pueden presentarse, deben identificarse y controlarse
de inmediato pero al igual que ocurre con los casos de infeccin nosocomial, no es esperable
que no ocurran.
Esta Norma incluye las enfermedades adquiridas intrahospitalariamente secundarias a
procedimientos invasivos, diagnsticos o teraputicos y, adems, establece los lineamientos
para la recoleccin, anlisis sistematizado de la informacin y toma de decisiones para la
aplicacin de las medidas de prevencin y de control pertinentes.
1. Objetivo y campo de aplicacin
1.1 Objetivo
Esta Norma Oficial Mexicana establece los criterios que debern seguirse para la prevencin,
vigilancia y control epidemiolgicos de las infecciones nosocomiales que afectan la salud de la
poblacin usuaria de los servicios mdicos prestados por los hospitales.
1.2 Campo de aplicacin
148
Esta Norma Oficial es de observancia obligatoria en todas las instituciones de atencin que
prestan servicios mdicos y comprende a los sectores pblico, social y privado del Sistema
Nacional de Salud.
2. Referencias
Para la correcta aplicacin de esta Norma Oficial Mexicana es necesario consultar las
siguientes normas:
2.1 NOM-003-SSA2-1993, Para la disposicin de sangre humana y sus componentes con fines
teraputicos.
2.2 NOM-010-SSA2-1993, Para la prevencin y control de la infeccin por virus de la
inmunodeficiencia humana.
2.3 NOM-017-SSA2-1994, Para la vigilancia epidemiolgica.
2.4 NOM-040-SSA2-2004, En materia de informacin en salud.
2.5 NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, Proteccin ambiental-Salud Ambiental-Residuos
Peligrosos biolgico-infecciosos-Clasificacin y especificaciones de manejo.
2.6 NOM-093-SSA1-1994, Bienes y servicios. Buenas prcticas de Higiene y Sanidad en la
preparacin de alimentos que se ofrecen en establecimientos fijos.
2.7 NOM-168-SSA1-1998, Del expediente clnico.
2.8 NOM-171-SSA1-1998, Para la prctica de hemodilisis.
2.9 NOM-197-SSA1-2000, Que establece los requisitos mnimos de infraestructura y
equipamiento de hospitales generales y consultorios de atencin mdica especializada.
3. Definiciones, smbolos y abreviaturas
3.1 Para efectos de esta Norma Oficial Mexicana se entiende por:
3.1.1 Antisepsia, al uso de un agente qumico en piel u otros tejidos vivos con el propsito de
inhibir o destruir microorganismos.
3.1.2 reas de alto riesgo, a las reas de cuidados intensivos, unidad de trasplantes, unidades
de quemados y las que defina el Comit de Deteccin y Control de las Infecciones
Nosocomiales.
3.1.3 Asociacin epidemiolgica, a la situacin en que dos o ms casos comparten las
caractersticas de tiempo, lugar y persona.
3.1.4 Barrera Mxima, al conjunto de procedimientos que incluye el lavado de manos con
jabn antisptico, uso de gorro, cubrebocas, bata y guantes, la aplicacin de antisptico para la
piel del paciente y la colocacin de un campo estril para limitar el rea donde se realizar el
149
procedimiento; con excepcin del gorro y cubrebocas, todo el material de uso debe estar
estril.
3.1.5 Brote epidemiolgico de infeccin nosocomial, a la ocurrencia de dos o ms casos de
infeccin adquirida por el paciente o por el personal de salud en la unidad hospitalaria
representando una incidencia mayor de la esperada y en los que existe asociacin
epidemiolgica. En hospitales donde la ocurrencia de determinados padecimientos sea nula, la
presencia de un solo caso se definir como brote epidemiolgico de infeccin nosocomial,
ejemplo: meningitis por meningococo.
3.1.6 Caso, al individuo de una poblacin en particular, que en un tiempo definido, es sujeto de
una enfermedad o evento bajo estudio o investigacin.
3.1.7 Caso de infeccin nosocomial, a la condicin localizada o generalizada resultante de la
reaccin adversa a la presencia de un agente infeccioso o su toxina, que no estaba presente o
en periodo de incubacin en el momento del ingreso del paciente al hospital y que puede
manifestarse incluso despus de su egreso.
3.1.8 Caso descartado de infeccin nosocomial, al caso que no cumple con los criterios de
infeccin nosocomial porque se demuestra que la infeccin se adquiri fuera de la unidad de
atencin mdica o en el que hay evidencia suficiente para definir al evento infeccioso como
inherente al padecimiento de base.
3.1.9 Comit de Calidad y Seguridad del Paciente (COCASEP), al comit colegiado de carcter
tcnico consultivo orientado al anlisis de la problemtica en materia de calidad de la atencin
de los establecimientos de salud, que propone y recomienda a los directivos, acciones de
mejora continua de la calidad y seguridad del paciente.
3.1.10 Comit para la Deteccin y Control de las Infecciones Nosocomiales, al organismo
conformado por enfermeras, epidemilogos y/o infectlogos, en su caso clnicos,
administradores de servicios en salud y de otras reas pertinentes como microbiologa,
farmacia, etc., que coordinan las actividades de deteccin, investigacin, registro, notificacin
y anlisis de informacin, adems de la capacitacin para la deteccin, manejo y control de las
infecciones nosocomiales. Dentro de este Comit deber integrarse el Subcomit de Control
de Uso de Antimicrobianos. Esta instancia trabajar en coordinacin con la Unidad de
Vigilancia Epidemiolgica Hospitalaria (UVEH) y ser la responsable de evaluar y regular el uso
de antimicrobianos, elaborar guas o manuales para su uso racional, as como evaluar su
repercusin en la resistencia antimicrobiana. El Comit estar vinculado al Comit de Calidad y
Seguridad del paciente.
3.1.11 Contacto de infeccin nosocomial, a la persona, paciente o personal de salud, cuya

asociacin con uno o ms casos de infeccin nosocomial, la site en riesgo de contraer el o los
agentes infectantes.
3.1.12 Control de infeccin nosocomial, a las acciones encaminadas a limitar la ocurrencia de
casos y evitar su propagacin.
3.1.13 Desinfeccin, a la destruccin o eliminacin de todos los microorganismos vegetativos,
pero no de las formas esporuladas de bacterias y hongos de cualquier objeto inanimado.
150
3.1.13.1 Desinfeccin de Alto Nivel, a los procesos de eliminacin dirigidos a la destruccin de

todos los microorganismos, incluyendo formas vegetativas, virus y esporas sicticas, en
cualquier objeto inanimado utilizado en el hospital.
3.1.14 Egreso hospitalario, a la salida del nosocomio de todo individuo que requiri atencin
mdica o quirrgica, con internamiento para su vigilancia o tratamiento por 24 horas o ms en
cualquiera de sus reas.
3.1.15 Equipo de terapia intravenosa, al grupo de enfermeras con conocimientos
especializados en la instalacin, el cuidado y limpieza del sitio de insercin de los dispositivos
intravasculares, la toma de muestras sanguneas a travs del catter, el proceso de
preparacin de medicamentos y de infusiones endovenosas, la deteccin oportuna de
complicaciones inherentes a su uso, por ejemplo, infeccin del sitio de entrada, bacteriemia,
ruptura o fractura del catter, trombosis, as como el registro de la informacin que permita la
evaluacin de su funcionalidad.
3.1.16 Esterilizacin, a la destruccin o eliminacin de cualquier forma de vida; se puede lograr
a travs de procesos qumicos o fsicos. La esterilizacin se puede lograr mediante calor, gases
(xido de etileno, ozono, dixido de cloro, gas plasma de perxido de hidrgeno o la fase de
vapor del perxido de hidrgeno), qumicos (glutaraldehdo y cido paractico), irradiacin
ultravioleta, ionizante, microondas y filtracin.
3.1.17 Estudio de brote de infecciones nosocomiales, al anlisis epidemiolgico de las
caractersticas de los casos catalogados como pertenecientes a un brote de infeccin
nosocomial con el objeto de describirlo en tiempo, lugar y persona, identificar los factores de
riesgo y establecer las medidas de prevencin y control correspondientes.
3.1.18 Estudio clnico-epidemiolgico de infeccin nosocomial, al proceso que permite
identificar las caractersticas clnico-epidemiolgicas de un caso de infeccin nosocomial.
3.1.18.1 Estudio epidemiolgico de infeccin nosocomial por laboratorio, al proceso que
permite, con apoyo del laboratorio, aislar e identificar las caractersticas microbiolgicas y
epidemiolgicas de la cepa causante de un caso o un brote de infeccin nosocomial.
3.1.19 Factores de riesgo de infeccin nosocomial, a las condiciones que se asocian con la
probabilidad de ocurrencia de infeccin nosocomial dentro de las que se encuentran el
diagnstico de ingreso, la enfermedad de base o enfermedades concomitantes del paciente, el
rea fsica, procedimientos diagnsticos y teraputicos, el propio sistema hospitalario,
polticas, el paciente mismo, la presencia de microorganismos o sus toxinas, la falta de
capacitacin, disponibilidad del personal, de evaluacin, garantizar los insumos, la
estandarizacin de los procesos y la calidad de stos.
3.1.20 Fuente de infeccin, a la persona, vector o vehculo que alberga al microorganismo o
agente causal y desde el cual ste puede ser adquirido, transmitido o difundido a la poblacin.
3.1.21 Hospital o nosocomio, al establecimiento pblico, social o privado, cualquiera que sea
su denominacin y que tenga como finalidad la atencin de pacientes que se internen para su
diagnstico, tratamiento o rehabilitacin.
151
3.1.22 Infeccin nosocomial, a la multiplicacin de un patgeno en el paciente o en el

trabajador de la salud que puede o no dar sintomatologa, y que fue adquirido dentro del
hospital o unidad mdica.
3.1.23 Modelo de regionalizacin operativa, al que presenta los procedimientos y aplicacin de
acciones para un programa y una regin en forma particular.
3.1.24 Modelo de gestin de riesgos en infecciones nosocomiales, al planteamiento lgico de
un conjunto de acciones interrelacionadas orientadas a limitar las posibilidades de ocurrencia
de infecciones nosocomiales, basado en la aplicacin de instrumentos y cdulas de gestin de
calidad para la deteccin, prevencin y control de factores asociados, identificacin de reas
de oportunidad y aplicacin de estrategias de mejora continua de la calidad y seguridad del
paciente.
3.1.25 Periodo de incubacin, al intervalo de tiempo entre la exposicin y el inicio de signos y
sntomas clnicos de enfermedad en un husped hospitalario.
3.1.26 Portador, al individuo que alberga uno o ms microorganismos y que constituye una
fuente potencial de infeccin.
3.1.27 Prevencin de infeccin nosocomial, a la aplicacin de medidas para evitar o disminuir

el riesgo de adquirir y/o diseminar las infecciones nosocomiales.
3.1.28 Riesgo de infeccin nosocomial, a la probabilidad de ocurrencia de una infeccin
intrahospitalaria.
3.1.29 Red Hospitalaria de Vigilancia Epidemiolgica, al componente del Sistema Nacional de
Vigilancia Epidemiolgica que comprende un conjunto de servicios, recursos, normas y
procedimientos integrados en una estructura de organizacin que facilita la sistematizacin de
las actividades de vigilancia epidemiolgica hospitalaria, incluyendo la de las infecciones
nosocomiales.
3.1.30 Sistema integral en terapia de infusin, al sitio de insercin del acceso intravenoso; este
acceso puede ser un catter central, perifrico o umbilical, lnea de venoclisis o infusin,
bomba de infusin, llaves, bancos de llaves, extensiones y los contenedores de soluciones y los
de volumen medido. Para la insercin de catteres intravenosos centrales o largos, debern
utilizarse las precauciones de barrera mxima, que consisten en colocacin de mascarilla
simple (cubrebocas), lavado de manos, vestimenta de bata quirrgica y guantes estriles,
preparacin de piel con antisptico yodado y clorhexidina u otro avalado por evidencia
cientfica calificada con A1 (CDC) y uso de campos quirrgicos.
3.1.31 Tcnica asptica o tcnica estril, a la estrategia utilizada en la atencin del paciente
para lograr y mantener los objetos y las reas en su mximo posible libre de microorganismos.
La tcnica estril comprende lavado meticuloso de las manos con jabn antisptico, el uso de
barreras estriles (campos quirrgicos, guantes estriles, mascarilla simple (cubre-bocas) y el
uso de todo el instrumental estril) y la utilizacin de antisptico para preparacin de la piel o
mucosas.
3.1.32 Unidad de Vigilancia Epidemiolgica Hospitalaria, a la instancia operativa a nivel local,
responsable de realizar las actividades de la vigilancia epidemiolgica hospitalaria.
152
3.1.33 Vigilancia Epidemiolgica de Infecciones Nosocomiales, a la observacin y anlisis

sistemticos, continuos y activos de la ocurrencia y distribucin de las infecciones
nosocomiales, as como de
los factores de riesgo asociados a stas.
3.2 Smbolos y abreviaturas.
C Grados Celsius
> Mayor de.
< Menor de.
CIE-10 Clasificacin Internacional de Enfermedades. Dcima revisin.
COCASEP Comits de Calidad y Seguridad del Paciente.
CODECIN Comit para la Deteccin y Control de las Infecciones Nosocomiales.
CONAVE Comit Nacional de Vigilancia Epidemiolgica.
EPI-NOSO Sistema automatizado para la notificacin de las infecciones nosocomiales.
IN Infeccin nosocomial.
INCMNSZ Instituto Nacional de Ciencias Mdicas y Nutricin Salvador Zubirn
IRAM Infeccin relacionada a la atencin mdica.
IVU Infeccin de vas urinarias.
LCR Lquido cefalorraqudeo.
Min Minuto
mm Milmetros cbicos
NOM Norma Oficial Mexicana.
RHOVE Red Hospitalaria de Vigilancia Epidemiolgica.
RHOVE-SNS-1-97 Formato nico de captura del caso de infeccin nosocomial.
RHOVE-SNS-2-97 Formato de captura de datos para la construccin de indicadores.
RHOVE-SNS-3-97 Formato alternativo para la concentracin de datos generados por la Red
Hospitalaria
de Vigilancia Epidemiolgica.
SNS Sistema Nacional de Salud.
153
SUIVE-1-2000 Formato de uso sectorial para el informe de casos semanales de enfermedades

de
notificacin obligatoria.
UFC/mL Unidades formadoras de colonias por mililitro.

UVEH Unidad de Vigilancia Epidemiolgica Hospitalaria.
v. gr. Verbigracia
VIH Virus de la inmunodeficiencia humana.
VTLH 1 y 2 Virus T linfotrpico humano 1 y 2.
4. Generalidades
4.1 La vigilancia epidemiolgica de infecciones nosocomiales deber realizarse a travs de un
sistema que unifique criterios para la recopilacin dinmica, sistemtica y continua de la
informacin generada por cada unidad de atencin mdica para su procesamiento, anlisis,
interpretacin, difusin y utilizacin en la resolucin de problemas epidemiolgicos y de
operacin por los niveles tcnico-administrativos en las distintas instituciones de salud
conforme se establezca en la normatividad aplicable.
4.2 La vigilancia epidemiolgica de infecciones nosocomiales considera los subcomponentes de
informacin, supervisin, evaluacin, coordinacin, capacitacin en servicio e investigacin,
como base para su funcionamiento operativo adecuado dentro del sistema de vigilancia
epidemiolgica de las infecciones nosocomiales.
4.3 La informacin epidemiolgica generada por la RHOVE tendr uso clnico, epidemiolgico,
estadstico y de salud pblica. Su manejo observar los principios de confidencialidad para
proteger la identidad individual de los pacientes.
4.4 La informacin epidemiolgica de las infecciones nosocomiales deber ser registrada en los
formularios establecidos por el nivel normativo tanto de la Secretara de Salud como de sus
equivalentes en otras instituciones del SNS, para el anlisis general y particular, y deber
retroalimentar a todo el sistema.
4.5 La RHOVE aportar la informacin necesaria para que se establezcan los indicadores para
la evaluacin y seguimiento del sistema de vigilancia epidemiolgica de las infecciones
adquiridas en el hospital, as como de su comportamiento epidemiolgico, segn se establece
en la normatividad para la certificacin de hospitales.
5. Flujo de la informacin
5.1 Para efectos de esta NOM, los elementos de la vigilancia epidemiolgica de infecciones
nosocomiales incluyen los casos y los factores de riesgo.
5.2 Esta NOM no sustituye la notificacin semanal de casos nuevos que se realiza en el
formato para la notificacin semanal de casos y las actividades que para esta notificacin se
154
requieran llevar a cabo. Slo se circunscribe a las actividades relacionadas con la vigilancia
epidemiolgica de las infecciones nosocomiales.
5.3 El sistema de informacin epidemiolgica de las infecciones nosocomiales comprende:
a. Notificacin inmediata de brotes por IN.
b. Notificacin inmediata de defunciones con IN en las reas de atencin neonatal.
c. Notificacin mensual de casos y defunciones por IN.
d. Estudios epidemiolgicos de brote.
e. Estudios epidemiolgicos de padecimientos y situaciones especiales.
Las notificaciones debern realizarse conforme a lo establecido en la NOM-017-SSA2-1994,
Para la vigilancia epidemiolgica.
5.3.1 La notificacin inmediata de casos de infeccin nosocomial se realizar conforme a la
lista de padecimientos referida en los manuales de procedimientos para la vigilancia
epidemiolgica de infecciones nosocomiales expedidos por la Secretara de Salud y debern
ser comunicados por la va ms rpida segn lo sealado en la misma.
5.3.2 La notificacin mensual de casos de infeccin nosocomial se generar a partir de los
formatos
RHOVE-SNS-1-97 y RHOVE-SNS-2-97 o en su defecto, los que proponga el CODECIN.
5.3.3 La notificacin mensual deber realizarse a travs del sistema automatizado elaborado
para este efecto, EPI-NOSO, o su equivalente en cada institucin.
5.3.4 El estudio epidemiolgico de brote de infecciones nosocomiales se deber realizar en las
situaciones que as lo requieran y apoyarse en lo referido en los manuales de procedimientos
para la Vigilancia
Epidemiolgica de Infecciones Nosocomiales.
5.3.5 El estudio epidemiolgico de casos especiales de infeccin nosocomial se ajustar a lo

estipulado en los manuales de procedimientos para la vigilancia epidemiolgica.
5.3.6 Los estudios epidemiolgicos de las infecciones nosocomiales comprenden las reas de
investigacin epidemiolgica y de servicios de salud y se realizarn cuando se requiera
informacin adicional a la generada por el sistema de vigilancia ordinario que sea de utilidad
para el desarrollo de diagnsticos situacionales de salud o de costos e impactos de la atencin
u otros.
5.4 Sern objeto de notificacin obligatoria mensual, las enfermedades mencionadas en el
Captulo 6 de esta NOM, cuando cumplan con los criterios de caso de infeccin nosocomial.
5.5 Los casos notificados de infeccin nosocomial que posteriormente se descarten como
tales, debern ser eliminados de la notificacin previa por escrito.
155
5.6 Las fuentes de informacin de casos de infeccin nosocomial se conformarn con los
registros de pacientes y casos generados en cada hospital. La recoleccin de informacin
basada en el paciente se obtendr mediante visitas a los servicios clnicos, revisin de
expedientes clnicos y hojas de enfermera, lo cual podr ser complementado con la
informacin verbal o escrita del personal de los servicios hospitalarios, de quirfano,
laboratorio de microbiologa, radiologa, anatoma patolgica, admisin y archivo. La
notificacin que realice el mdico tratante a la UVEH o su equivalente, deber ser por escrito,
oportuna y de acuerdo con los criterios de infeccin nosocomial.
5.6.1 Las autoridades del hospital debern establecer lo necesario para garantizar el acceso, la
disponibilidad y la conservacin de las fuentes de informacin necesarias para el estudio y
seguimiento de las infecciones nosocomiales as como la referente al anlisis del uso de
antimicrobianos en el hospital y de la evolucin de la resistencia antimicrobiana, a partir de la
entrada en vigor de la presente NOM.
5.7 La informacin de cada uno de los servicios ser recopilada, integrada, procesada,
verificada y analizada por las UVEH o su equivalente en los hospitales de las diferentes
instituciones.
5.8 La informacin generada en los servicios de la unidad hospitalaria ser utilizada por la
UVEH para retroinformar a los servicios que la generaron y al CODECIN y deber ser remitida
mensualmente a las autoridades del hospital y a los niveles tcnico-administrativos
correspondientes.
5.9 La informacin ser remitida del nivel local al jurisdiccional dentro de los diez primeros das
del mes; del jurisdiccional al estatal, dentro de los siguientes diez das, y del estatal al nacional,
en los siguientes diez das, de forma tal que el plazo mximo no sea mayor a 30 das
posteriores al mes que se notifica.
5.10 La informacin recolectada en los distintos niveles tcnico-administrativos deber ser
integrada y analizada garantizando su uso y difusin para la toma de decisiones.
5.11 El flujo de toda la informacin relacionada con la vigilancia epidemiolgica de infecciones
nosocomiales deber apegarse en forma estricta al modelo de regionalizacin operativa
vigente en cada entidad federativa.
6. Criterios para el diagnstico de infecciones nosocomiales
A continuacin se describen entre otras las cuatro causas ms frecuentes de infeccin
nosocomial y su relacin con las intervenciones asociadas. De esta forma Infecciones de Vas
Urinarias, Infecciones de Herida
Quirrgica, Neumonas y Bacteremias debern ser objeto de atencin primordial tanto en su
vigilancia como control, en vista de que stas acontecen para la ocurrencia del 66% del total de
episodios de infeccin nosocomial.
Neumonas
Infeccin de Vas Urinarias
Bacteriemias
156
Infeccin de Herida Quirrgica

Otras infecciones
6.1 Infecciones del tracto respiratorio.
Cuando se trate de infecciones virales, bacterianas o por hongos, deben tomarse en cuenta los
periodos de incubacin para su clasificacin como intra o extrahospitalarias; las infecciones
bacterianas nosocomiales pueden aparecer desde las 48 a 72 horas del ingreso del paciente, y
las micticas despus de los 5 das de estancia, aunque puede acortarse el tiempo debido a los
procedimientos invasivos y a la terapia intravascular.
6.1.1 Infecciones de vas respiratorias altas. CIE-10 (J00, J01, J06, H65.0, H66.0).
6.1.1.1 Rinofaringitis y faringoamigdalitis. CIE-10 (J00 y J06.8).
Con tres o ms de los siguientes criterios:
6.1.1.1.1 Fiebre.
6.1.1.1.2 Eritema o inflamacin farngea.
6.1.1.1.3 Tos o disfona.
6.1.1.1.4 Exudado purulento en faringe.
6.1.1.1.5 En faringoamigdalitis purulenta, exudado farngeo con identificacin de
microorganismo considerado patgeno.
6.1.1.2. Otitis media aguda. CIE-10 (H65.0, H65.1, H66.0).
Con dos o ms criterios:
6.1.1.2.1 Fiebre.
6.1.1.2.2 Otalgia.
6.1.1.2.3 Disminucin de la movilidad de la membrana timpnica.
6.1.1.2.4 Otorrea secundaria a perforacin timpnica.
6.1.1.2.5 Cultivo positivo por puncin de la membrana timpnica.
6.1.1.3 Sinusitis aguda. CIE-10 (J01).
Con tres o ms criterios:
6.1.1.3.1 Fiebre.
6.1.1.3.2 Dolor local o cefalea.
157
6.1.1.3.3 Rinorrea anterior o posterior de ms de 7 das.

6.1.1.3.4 Obstruccin nasal.
6.1.1.3.5 Evidencia radiolgica de infeccin.
6.1.1.3.6 Puncin de senos paranasales con obtencin de material purulento.
6.1.1.3.7 Salida de material purulento a travs de meatos evidenciado por nasofibroscopia.
6.1.2 Infecciones de vas respiratorias bajas. CIE-10 (J12-J18, J20, J86.9, J98.5).
6.1.2.1 Neumona. CIE-10 (J12, J13, J14, J15, J16, J17, J18).
Cuatro criterios hacen el diagnstico. Criterios 6.1.2.1.4 y 6.1.2.1.5 son suficientes para el
diagnstico de neumona.
6.1.2.1.1 Fiebre, hipotermia o distermia.
6.1.2.1.2 Tos.
6.1.2.1.3 Esputo purulento o drenaje purulento a travs de cnula endotraqueal que al examen
microscpico en seco dbil muestra <10 clulas epiteliales y > 20 leucocitos por campo.
6.1.2.1.4 Signos clnicos de infeccin de vas areas inferiores.
6.1.2.1.5 Radiografa de trax compatible con neumona.
6.1.2.1.6 Identificacin de microorganismo patgeno en hemocultivo, en secrecin
endotraqueal (obtenida por cepillado bronquial, aspirado transtraqueal o biopsia) o en esputo.
6.1.2.2 Bronquitis, traqueobronquitis, traquetis. CIE-10 (J20).
Pacientes sin evidencia clnica o radiolgica de neumona, con tos ms dos de los siguientes
criterios:
6.1.2.2.2 Incremento en la produccin de esputo.
6.1.2.2.3 Disfona o estridor.
6.1.2.2.4 Dificultad respiratoria.
6.1.2.2.5 Microorganismo aislado de cultivo o identificado por estudio de esputo.
6.1.2.3 Empiema secundario a procedimientos. CIE-10 (J86.9).
Con dos de los siguientes criterios:
158

6.1.2.3.2 Datos clnicos de derrame pleural.
6.1.2.3.3 Radiografa con derrame pleural.
6.1.2.3.4 Exudado pleural.
Ms uno de los siguientes criterios:
6.1.2.3.5 Material purulento pleural.
6.1.2.3.6 Cultivo positivo de lquido pleural.
6.2 Mediastinitis. CIE-10 (J98.5).
Debe incluir dos de los siguientes criterios:
6.2.1 Fiebre, hipotermia o distermia.
6.2.2 Dolor torcico.
6.2.3 Inestabilidad esternal.
Ms uno de los siguientes:
6.2.4 Drenaje purulento del rea mediastinal o torcica.
6.2.5 Evidencia radiolgica de mediastinitis.
6.2.6 Mediastinitis vista por ciruga o examen histopatolgico.
6.2.7 Organismo aislado de fluido o tejido mediastinal.
6.2.8 Hemocultivo positivo.
6.3 Infecciones cardiovasculares.
6.3.1 Endocarditis. CIE-10 (I33).
Considerarla en pacientes con fiebre prolongada y sin justificacin evidente.
Dos criterios mayores o uno mayor y tres menores o cinco menores hacen el diagnstico de
endocarditis:
Criterios mayores: Cultivo positivo con al menos uno de los siguientes:
6.3.1.1 Hemocultivos persistentemente positivos definidos como:
6.3.1.1.1 Microorganismo en un mnimo de dos hemocultivos.
159
6.3.1.1.2 Hemocultivos obtenidos con ms de 12 horas de diferencia.

6.3.1.1.3 Tres o ms hemocultivos positivos cuando entre ellos haya al menos 1 hora de
diferencia.
6.3.1.2 Ecocardiograma positivo con al menos uno de los siguientes:
6.3.1.2.1 Masa intracardiaca oscilante en vlvula o estructuras de soporte.
6.3.1.2.2 Absceso en el anillo valvular, perivalvular o intravascular.
6.3.1.2.3 Dehiscencia de vlvula protsica o aparicin de regurgitacin valvular.
Criterios menores:
6.3.1.3 Causa cardiaca predisponente.
6.3.1.4 Fiebre.
6.3.1.5 Fenmeno emblico, hemorragias, hemorragias en conjuntivas, lesiones de Janeway.
6.3.1.6 Manifestaciones inmunolgicas como glomerulonefritis, ndulos de Osler, manchas de
Roth, factor reumatoide positivo.
6.3.1.7 Evidencia microbiolgica, cultivo positivo sin cumplir lo descrito en mayores.
6.3.1.8 Ecocardiograma positivo sin cumplir lo descrito en criterios mayores.
6.3.2 Pericarditis. CIE-10 (I30).
Se requieren dos o ms de los siguientes criterios para el diagnstico:
6.3.2.1 Fiebre, hipotermia o distermia.
6.3.2.2 Dolor torcico.
6.3.2.3 Pulso paradjico.
6.3.2.4 Taquicardia.
Ms uno de los siguientes criterios:

6.3.2.5 Electrocardiograma anormal compatible con pericarditis.
6.3.2.6 Derrame pericrdico identificado por electrocardiograma, ecocardiografa, resonancia
magntica, angiografa u otra evidencia por imagenologa.
6.3.2.7 Microorganismo aislado de cultivo de fluido o tejido pericrdico.
160
6.4 Diarrea. CIE-10 (A01-A09). Diarrea nosocomial. Aumento en el nmero de evacuaciones

con consistencia disminuida durante la estancia hospitalaria sin presencia previa de estas
evacuaciones antes del internamiento y de inicio 48 a 72 horas despus del mismo por dos o
ms das con o sin deteccin de un patgeno a travs de un cultivo, siendo necesario descartar
causas secundarias como derivaciones intestinales, uso de laxantes o lactulosa, anticidos
catrticos o hiperalimentacin enteral, entre otras.
6.5 Infecciones de vas urinarias. CIE-10 (N39.0).
6.5.1 Sintomticas.
Tres o ms de los siguientes criterios:
6.5.1.1 Dolor en flancos.
6.5.1.2 Percusin dolorosa del ngulo costovertebral.
6.5.1.3 Dolor suprapbico.
6.5.1.4 Disuria.
6.5.1.5 Sensacin de quemadura.
6.5.1.6 Urgencia miccional.
6.5.1.7 Polaquiuria.
6.5.1.8 Calosfro.
6.5.1.9 Fiebre o distermia.
6.5.1.10 Orina turbia.
Independientemente de los hallazgos de urocultivo:
6.5.1.11 Chorro medio: muestra obtenida con asepsia previa, mayor de 50,000 UFC/ml (una
muestra).
6.5.1.12 Cateterismo: ms de 50,000 UFC/ml (una muestra).
6.5.1.13 Puncin suprapbica: cualquier crecimiento es diagnstico.
6.5.1.14 El aislamiento de un nuevo microorganismo en urocultivo es diagnstico de un nuevo
episodio de infeccin urinaria.
6.5.2 Asintomticas.
Pacientes asintomticos de alto riesgo con un sedimento urinario que contenga 10 o ms
leucocitos por campo ms cualquiera de los siguientes:
161
6.5.2.1 Chorro medio: muestra obtenida con asepsia previa mayor de 50,000 UFC/ml (una
muestra).
6.5.2.2 Cateterismo: mayor de 50,000 UFC/ml (una muestra).
6.5.2.3 Puncin suprapbica: cualquier crecimiento es diagnstico.
6.5.3 En caso de sonda de Foley:
Cuando se decide instalar una sonda de Foley, la UVEH deber evaluar la necesidad de obtener
urocultivo al momento de la instalacin, cada cinco das durante su permanencia y al
momento del retiro. La vigilancia de la etiologa microbiolgica descrita tendr prioridad en
pacientes graves, con enfermedades energizantes e internados en reas crticas.
6.5.3.1 Sintomtica, de acuerdo con los criterios del numeral 6.5.1: mayor de 50,000 UFC/ml
(una muestra).
6.5.3.2 Asintomtica (ver criterios del numeral 6.5.2): mayor de 50,000 UFC/ml (dos muestras).
6.5.4 Infecciones de vas urinarias por Candida spp:
Dos muestras consecutivas. Si se tiene sonda de Foley deber retirarse y obtenerse una nueva
muestra con:
6.5.4.1 Adultos: >50,000 UFC/ml.
6.5.4.2 Nios: >10,000 UFC/ml.
6.5.4.3 La presencia de pseudohifas en el sedimento urinario es diagnstica de IVU por
Candida spp.
6.6 Infecciones del sistema nervioso central.

6.6.1. Encefalitis. CIE-10 (G04).
Paciente con alteraciones del estado de conciencia y con dos o ms de los siguientes criterios:
6.6.1.2 Cefalea.
6.6.1.3 Alteracin en el estado de conciencia.
6.6.1.4 Otros signos neurolgicos.
6.6.1.5 Respuesta clnica a terapia antiviral.
6.6.1.6 Trazo de electroencefalograma, tomografa axial computada de crneo o resonancia
magntica compatibles.
162

6.6.1.7 Citoqumico del LCR compatible con el diagnstico.
6.6.1.8 Microorganismo identificado en el LCR o en tejido cerebral.
6.6.2 Absceso epidural o subdural. CIE-10 (G06.2).
Tres o ms de los siguientes criterios:
6.6.2.2 Cefalea.
6.6.2.3 Alteracin en el estado de conciencia.
6.6.2.4 Otros signos neurolgicos (focalizacin).
6.6.2.5 Respuesta clnica a terapia antimicrobiana emprica.
6.6.2.6 Evidencia de coleccin subdural o epidural en estudios de imagen.
6.6.2.7 Evidencia de coleccin purulenta subdural o epidural por ciruga.
6.6.2.8 Evidencia histopatolgica de infeccin epidural o subdural.
6.6.3 Meningitis. CIE-10 (G00, G01, G02, G03).
Con dos de los siguientes:
6.6.3.2 Signos de irritacin menngea.
6.6.3.3 Signos de dao neurolgico.
Con uno o ms de los siguientes:
6.6.3.4 Cambios de LCR compatibles.
6.6.3.5 Microorganismo identificado en la tincin de Gram de LCR.
6.6.3.6 Microorganismo identificado en cultivo de LCR.
6.6.3.7 Hemocultivo positivo.
6.6.3.8 Aglutinacin especfica positiva en LCR.
6.6.4 Ventriculitis. CIE-10 (G04.9).
163
En pacientes con sistemas de derivacin de LCR por hidrocefalia, para el diagnstico se

requiere dos o ms de los siguientes:
6.6.4.1 Fiebre (>38C), hipotermia o distermia.
6.6.4.2 Disfuncin del sistema de derivacin de LCR (cerrado).
6.6.4.3 Celulitis en el trayecto del catter del sistema de derivacin de LCR.
6.6.4.4 Signos de hipertensin endocraneana.
6.6.4.5 LCR ventricular turbio con tincin de Gram positiva para microorganismos en LCR.
6.6.4.6 Identificacin del microorganismo por cultivo de LCR.
6.7 Infecciones oculares.

6.7.1 Conjuntivitis. CIE-10 (H10.9).
Dos o ms de los siguientes criterios:
6.7.1.1 Exudado purulento.
6.7.1.2 Dolor o enrojecimiento local.
6.7.1.3 Identificacin del agente por citologa o cultivo.
6.7.1.4 Prescripcin de antibitico oftlmico despus de 48 horas de internamiento.
6.8 Infeccin de piel y tejidos blandos.
6.8.1 Infecciones de piel.
Drenaje purulento, pstulas, vesculas o fornculos con dos o ms de los siguientes criterios:
6.8.1.1 Dolor espontneo o a la palpacin.
6.8.1.2 Inflamacin.
6.8.1.3 Rubor.
6.8.1.4 Calor.
6.8.1.5 Microorganismo aislado por cultivo de aspirado o drenaje de la lesin.
6.8.2 Infecciones de tejidos blandos. CIE-10 (L04, L08).
164
Fascitis necrosante, gangrena infecciosa, celulitis, miositis y linfadenitis.

Con tres o ms de los siguientes criterios:
6.8.2.1 Dolor localizado espontneo o a la palpacin.
6.8.2.2 Inflamacin.
6.8.2.3 Calor.
6.8.2.4 Rubor, palidez o zonas violceas.
6.8.2.5 Crepitacin.
6.8.2.6 Necrosis de tejidos.
6.8.2.7 Trayectos linfangticos.
6.8.2.8 Organismo aislado del sitio afectado.
6.8.2.9 Drenaje purulento.
6.8.2.10 Absceso o evidencia de infeccin durante la ciruga o por examen histopatolgico.
6.9 Bacteriemias. CIE-10 (A49.9).
6.9.1 El diagnstico se establece en un paciente con fiebre, hipotermia o distermia con
hemocultivo positivo. Este diagnstico tambin puede darse an en pacientes con menos de
48 horas de estancia hospitalaria si se les realizan procedimientos de diagnsticos invasivos o
reciben terapia intravascular.
Un hemocultivo positivo para Gram negativos, Staphylococcus aureus u hongos es suficiente
para hacer el diagnstico. En caso de aislamiento de un bacilo Gram positivo o estafilococo
coagulasa negativa se requerirn dos hemocultivos tomados en dos momentos y/o sitios;
puede considerarse bacteriemia si se cuenta con uno o ms de los siguientes criterios:
6.9.1.1 Alteraciones hemodinmicas.
6.9.1.2 Trastornos respiratorios.
6.9.1.3 Leucocitosis o leucopenia no inducida por frmacos.
6.9.1.4 Alteraciones de la coagulacin (incluyendo trombocitopenia).
6.9.1.5 Aislamiento del mismo microorganismo en otro sitio anatmico.
6.9.2 Bacteriemia primaria.
Se define como la identificacin en hemocultivo de un microorganismo en pacientes
hospitalizados o dentro de los primeros tres das posteriores al egreso con manifestaciones
165
clnicas de infeccin y en quienes no es posible identificar un foco infeccioso como fuente de

bacterias al torrente vascular.
6.9.3 Bacteriemia secundaria.

Es la que se presenta con sntomas de infeccin localizados a cualquier nivel con hemocultivo
positivo. Se incluyen aqu las candidemias y las bacteriemias secundarias a procedimientos
invasivos tales como colecistectomas, hemodilisis, cistoscopias y colangiografas. En caso de
contar con la identificacin del microorganismo del sitio primario, debe ser el mismo que el
encontrado en sangre. En pacientes que egresan con sntomas de infeccin hospitalaria y
desarrollan
bacteriemia
secundaria,
sta
deber
considerarse
nosocomial
independientemente del tiempo del egreso.
6.9.4 Bacteriemia no demostrada en adultos.
En pacientes con evidencia clnica de bacteriemia pero en quienes no se asla el
microorganismo. Esta se define como:
Pacientes con fiebre o hipotermia con dos o ms de los siguientes criterios:
6.9.4.1 Calosfro.
6.9.4.2 Taquicardia (>90/min).
6.9.4.3 Taquipnea (>20/min).
6.9.4.4 Leucocitosis o leucopenia (>12,000 o < 4,000 o ms de 10% de bandas).
6.9.4.5 Respuesta al tratamiento antimicrobiano.
6.9.5 Bacteriemia no demostrada en nios (antes sepsis).
Pacientes con fiebre, hipotermia o distermia ms uno o ms de los siguientes:
6.9.5.1 Taquipnea o apnea.
6.9.5.2 Calosfro.
6.9.5.3 Taquicardia.
6.9.5.4 Ictericia.
6.9.5.5 Rechazo al alimento.
6.9.5.6 Hipoglucemia.
Ms cualquiera de los siguientes:
6.9.5.7 Leucocitosis o leucopenia.
166
6.9.5.8 Relacin bandas/neutrfilos > 0.15

6.9.5.9 Plaquetopenia < 100,000.
6.9.5.10 Respuesta a tratamiento antimicrobiano.
6.9.6 Bacteriemia relacionada a catter venoso central.
Hemocultivos cualitativos incubados con sistema automatizado obtenidos a travs del catter
y de puncin perifrica con tiempo de positividad de ms de dos horas (catter perifrico) o
cuantitativos 103 UFC (catter perifrico) ms al menos uno de los siguientes criterios:
6.9.6.1 Escalofros o fiebre posterior al uso del catter en pacientes con catter venoso central
incluyendo el de permanencia prolongada.
6.9.6.2 Fiebre sin otro foco infeccioso identificado.
6.9.6.3 Datos de infeccin en el sitio de entrada del catter, cultivo de la punta del catter
(Tcnica de
Maki) positivo al mismo micoorganismo identificado en sangre.
6.9.6.4 Desaparicin de signos y sntomas al retirar el catter.
6.10 Infecciones de sitio de insercin de catter, tnel o puerto subcutneo.
Con dos o ms de los siguientes criterios:
6.10.1 Calor, edema, rubor y dolor, no relacionados con la administracin de frmacos con
potencial reconocido para ocasionar flebitis qumica.
6.10.2 Drenaje purulento del sitio de entrada del catter o del tnel subcutneo.
6.10.3 Tincin de Gram positiva del sitio de entrada del catter o del material purulento.
6.10.4 Cultivo positivo del sitio de insercin, trayecto o puerto del catter.
Si se documenta bacteriemia, adems de los datos locales de infeccin, deber considerarse
que se trata de dos episodios de infeccin nosocomial y reportarlo de esta forma.
6.11 Flebitis. CIE-10 (I80).

6.11.1 Dolor, calor o eritema en una vena invadida de ms de 48 horas de evolucin,
acompaados de cualquiera de los siguientes criterios:
6.11.1.1 Pus.
6.11.1.2 Cultivo positivo.
6.11.1.3 Persistencia de sntomas, ms de 48 horas o ms despus de retirar el acceso
vascular.
167
6.12 Infeccin de heridas quirrgicas.

6.12.1 Para definir el tipo de infeccin postquirrgica debe tomarse en cuenta el tipo de herida
de acuerdo con la clasificacin de los siguientes criterios:
6.12.1.1 Limpia.
6.12.1.1.1 Ciruga electiva con cierre primario y sin drenaje abierto.
6.12.1.1.2 Traumtica no penetrante y no infectada.
6.12.1.1.3 Sin "ruptura" de la tcnica asptica.
6.12.1.1.4 No se invade el tracto respiratorio, digestivo ni genito-urinario.
6.12.1.1.5 Limpia con implante. Cuando rene las caractersticas anteriores y se coloca un
implante.
6.12.1.2 Limpia-contaminada.
6.12.1.2.1 La ciruga se efecta en el tracto respiratorio, digestivo o genito-urinario bajo
condiciones controladas y sin una contaminacin inusual.
6.12.1.2.2 Apendicectoma no perforada.
6.12.1.2.3 Ciruga del tracto genito-urinario con urocultivo negativo.
6.12.1.2.4 Ciruga de la va biliar con bilis estril.
6.12.1.2.5 Rupturas en la tcnica asptica slo en las cirugas contaminadas.
6.12.1.2.6 Drenajes (cualquier tipo).
6.12.1.3 Contaminada.
6.12.1.3.1 Herida abierta o traumtica.
6.12.1.3.2 Salida de contenido gastrointestinal.
6.12.1.3.3 Ruptura de la tcnica asptica slo en las cirugas contaminadas.
6.12.1.3.4 Incisiones en tejido inflamado sin secrecin purulenta.
6.12.1.3.5 Cuando se entra al tracto urinario o biliar y cuando la orina o la bilis estn
infectados.
6.12.1.4 Sucia o infectada.
6.12.1.4.1 Herida traumtica con tejido desvitalizado, cuerpos extraos, contaminacin fecal,
con inicio de tratamiento tardo o de un origen sucio.
168
6.12.1.4.2 Perforacin de vscera hueca.

6.12.1.4.3 Inflamacin e infeccin aguda (con pus) detectadas durante la intervencin.
6.12.2 Infeccin de herida quirrgica incisional superficial.
6.12.2.1 Ocurre en el sitio de la incisin dentro de los 30 das posteriores a la ciruga y que
solamente involucra piel y tejido celular subcutneo del sitio de la incisin.
Con uno o ms de los siguientes criterios:
6.12.2.1.1 Drenaje purulento de la incisin superficial.
6.12.2.1.2 Cultivo positivo de la secrecin o del tejido obtenido en forma asptica de la
incisin.
6.12.2.1.3 Presencia de por lo menos un signo o sntoma de infeccin con cultivo positivo.
6.12.2.1.4 Herida que el cirujano deliberadamente abre (con cultivo positivo) o juzga
clnicamente infectada y se administran antibiticos.
6.12.3 Infeccin de herida quirrgica incisional profunda.

6.12.3.1 Es aqulla que ocurre en el sitio de la incisin quirrgica y que abarca la fascia y el
msculo y que ocurre en los primeros 30 das despus de la ciruga si no se coloc implante o
dentro del primer ao si se coloc implante.
6.12.3.1.1 Secrecin purulenta del drenaje colocado por debajo de la aponeurosis.
6.12.3.1.2 Una incisin profunda con dehiscencia o que deliberadamente es abierta por el
cirujano, acompaada de fiebre o dolor local.
6.12.3.1.3 Presencia de absceso o cualquier evidencia de infeccin observada durante los
procedimientos diagnsticos o quirrgicos.
6.12.3.1.4 Diagnstico de infeccin por el cirujano o administracin de antibiticos.
6.12.4 Infeccin de rganos y espacios.
6.12.4.1 Involucra cualquier regin (a excepcin de la incisin) que se haya manipulado
durante el procedimiento quirrgico. Ocurre en los primeros 30 das despus de la ciruga si no
se coloc implante o dentro del primer ao si se coloc implante. Para la localizacin de la
infeccin se asignan sitios especficos (hgado, pncreas, conductos biliares, espacio subfrnico
o subdiafragmtico, o tejido intraabdominal).
169
6.12.4.1.1 Secrecin purulenta del drenaje colocado por contraabertura en el rgano o

espacio.
6.12.4.1.2 Presencia de absceso o cualquier evidencia de infeccin observada durante los
procedimientos diagnsticos o quirrgicos.
6.12.4.1.3 Cultivo positivo de la secrecin o del tejido involucrado.
6.12.4.1.4 Diagnstico de infeccin por el cirujano o administracin de antibiticos.
6.13 Peritonitis no quirrgica. CIE-10 (K65).
6.13.1 El diagnstico se realiza tomando en cuenta el antecedente de dilisis peritoneal,
peritonitis autgena o de paracentesis diagnstica.
Con dos o ms criterios diagnsticos:
6.13.1.1 Dolor abdominal.
6.13.1.2 Cuenta de leucocitos en lquido peritoneal >100/mm.
6.13.1.3 Tincin de Gram positiva en lquido peritoneal.
6.13.1.4 Pus en cavidad peritoneal.
6.13.1.5 Cultivo positivo de lquido peritoneal.
6.13.1.6 Evidencia de infeccin, inflamacin y material purulento en sitio de insercin de
catter para dilisis peritoneal continua ambulatoria.
6.14 Endometritis. CIE-10 (N71.0).
Con tres de los siguientes criterios:
6.14.1 Fiebre (>38C).
6.14.2 Dolor plvico.
6.14.3 Dolor a la movilizacin de cuello uterino.
6.14.4 Loquios ftidos.
6.14.5 Subinvolucin uterina.
6.14.6 Leucocitosis con neutrofilia.
6.14.7 Cultivo positivo obtenido de cavidad uterina con aguja de doble o triple lumen.
6.15 Infecciones trasmitidas por trasfusin o terapia con productos derivados del plasma. CIE10 (A04.6,
A23, A53.9, A78, B15-17, B19. B20-24, B25.9, B34.3, B34.9. B54. B55, B57, B58, B60).
170
6.15.1 Se consideran todas las enfermedades infecciosas potencialmente trasmitidas por estas
vas, sean secundarias a transfusin o al uso de productos derivados del plasma,
independientemente del lugar en donde se haya utilizado el producto (otro hospital o clnica
privada, entre otras) con base en las definiciones de caso referidas en la NOM-017-SSA2-1994,
Para la vigilancia epidemiolgica; la NOM-003-SSA2-1993,
Para la disposicin de sangre y sus componentes con fines teraputicos; y la NOM-010-SSA21993, Para la prevencin y control de la infeccin por virus de la inmunodeficiencia humana.
Son infecciones trasmitidas por estas vas:
6.15.1.1 Hepatitis viral A, B, C, D y otras. CIE-10 (B15-17, B19).
6.15.1.2 Infeccin por virus de la inmunodeficiencia humana (1 y 2). CIE-10 (B20-24).
6.15.1.3 Citomegalovirus. CIE-10 (B25.9).
6.15.1.4 Virus de Epstein-Barr. CIE-10 (B34.9).
6.15.1.5 Parvovirus 19. CIE-10 (B34.3).
6.15.1.6 Brucelosis. CIE-10 (A34).
6.15.1.7 Sfilis. CIE-10 (A53.9).
6.15.1.8 Paludismo. CIE-10 (B54).
6.15.1.9 Toxoplasmosis. CIE-10 (B58).
6.15.1.10 Enfermedad de Chagas. CIE-10 (B57.0).
6.15.1.11 Leishmaniasis. CIE-10 (B55).
6.15.1.12 Babesiosis. CIE-10 (B60.0).
6.15.1.13 Fiebre Q. CIE-10 (A78).
6.15.1.14 Yersiniosis. CIE-10 (A04.6 y A28.2).
Puede haber contaminacin de la sangre por otros microorganismos no enlistados, en cuyo
caso se consignar el microorganismo.
6.16 Infeccin trasmitida por productos humanos industrializados (de origen no sanguneo) o
por injertos u rganos trasplantados.
6.16.1 Idealmente debe documentarse la infeccin en la fuente del injerto o trasplante o en
receptores de otros rganos del mismo donante. En caso de productos industrializados,
consignar lote o periodo de exposicin.
Son infecciones trasmitidas por estas vas:
171
6.16.1.1 Enfermedad de Creutzfeld-Jakob CIE-10 (A 81.0).

6.16.1.2 Virus de la Rabia CIE-10 (89.2).
6.16.1.3 Citomegalovirus CIE-10 (B25.9).
6.16.1.4 Hepatitis viral B, C, D y otras CIE-10 (B16, B17).
6.16.1.5 Virus de inmunodeficiencia humana 1 y 2 CIE-10 (B20-B24).
6.16.1.6 Virus de Epstein-Barr CIE-10 (B34.9).
6.16.1.7 Parvovirus 19 CIE-10 (B34.3).
6.16.1.8 VTLH 1 y 2 CIE-10 (C84.1, C84.5, C91.4, C91.5).
Pueden existir agentes no descritos en la lista, en cuyo caso se deber agregar el agente. Se
consignan todos los casos con infeccin por esta va independientemente del lugar en donde
fueron utilizados (v.gr. otro hospital).
6.17 Enfermedades exantemticas.
Se incluyen las referidas en el Sistema Activo de Vigilancia Epidemiolgica de Enfermedades
Exantemticas del Sistema Nacional de Salud. Para fines de esta NOM se consideran a aquellos
pacientes que tengan el antecedente de contacto hospitalario, tomando en cuenta los
periodos de incubacin de cada una de las enfermedades.
6.17.1 Varicela. CIE-10 (B01.9).

6.17.1.1 Varicela: Presencia de mculas, ppulas, vesculas y pstulas en diferentes estadios,
ms uno de los siguientes:
6.17.1.1.1 Fiebre y/o manifestaciones clnicas de infeccin respiratoria alta.
6.17.1.1.2 Prueba de Tzanck positiva en lesiones vesiculares.
6.17.2 Sarampin CIE-10 (B05.9).
6.17.2.1 Sarampin: Exantema maculopapular de al menos tres das de duracin. Con fiebre
mayor de
38C o no cuantificada. Con uno o ms de los siguientes signos y sntomas:
6.17.2.1.1 Tos, coriza o conjuntivitis.
6.17.2.1.2 Confirmacin por serologa IgM o IgG.
6.17.3 Rubola. CIE-10 (B06.9).
172
6.17.3.1 Rubola: Exantema maculopapular de al menos tres das de duracin. Con fiebre
mayor de 38C o no cuantificada con la presencia de linfadenopatas retroauriculares. Con uno
o ms de los siguientes signos y sntomas:
6.17.3.1.1 Tos, coriza o conjuntivitis.
6.17.3.1.2 Confirmacin por serologa IgM o IgG.
6.18 Otras exantemticas.
6.18.1 Escarlatina. CIE-10 (A38).
6.18.2 Exantema sbito. CIE-10 (B08.2).
6.18.3 Otras enfermedades.
6.19 Fiebre postoperatoria.
6.19.1 Fiebre que persiste ms de 48 horas despus de la ciruga en la que no se documenta
foco infeccioso y en paciente que recibe terapia antimicrobiana.
6.20 Tuberculosis.
Se considerar infeccin nosocomial, en aquellos casos en que exista el antecedente de
infeccin adquirida en el hospital.
6.20.1 Tuberculosis en adulto. Paciente mayor de 15 aos que presente tos con expectoracin
sin importar la evolucin y con baciloscopia, cultivo o estudio histopatolgico que confirman el
diagnstico.
6.20.2 Tuberculosis en nios, adems del diagnstico de laboratorio, se debe realizar
verificacin de contactos positivos, radiografa de trax, como apoyo al estudio integral.
6.20.3 Tuberculosis menngea. Paciente con alteracin del sensorio e irritacin menngea, cuyo
lquido cefalorraqudeo presente caractersticas sugerentes a tuberculosis.
6.20.4 Otras localizaciones de la tuberculosis.
6.21 Vigilancia de infeccin por quemaduras CIE-10 (T20-T32)
El diagnstico definitivo de la infeccin de la lesin se basa fundamentalmente en el estudio
histopatolgico por medio de cultivo de biopsia que permite distinguir entre la colonizacin y
la infeccin verdadera, esta ltima se caracteriza por la presencia de microorganismos en
tejido no quemado, lo que indica infeccin invasiva.
Cuando la cuenta de bacterias en la herida es >105 microorganismos por gramo de tejido,
deber considerarse diagnstico de infeccin invasiva, por el contrario, cuando la cuenta es
menor a dicha cifra deber considerarse como colonizacin de la herida.
Desde el punto de vista clnico se reconocen actualmente cuatro tipos de infeccin focalizada:
173
1. Imptigo de la quemadura o infeccin superficial con prdida de epitelio, de una superficie

cutnea previamente epitelizada, sin relacin a traumatismo local.
2. Infeccin de la herida quirrgica relacionada a la quemadura, definida como infeccin de
una herida creada en forma quirrgica, que an no ha epitelizado, incluye la prdida de un
apsito biolgico o del injerto subyacente.
3. Celulitis de la quemadura, cuando se presenta infeccin de la piel no quemada alrededor de
la quemadura, con signos de infeccin local que progresa ms all de lo esperado por la
inflamacin relacionada a la quemadura.
4. Infeccin invasiva de la quemadura, ocurre en una quemadura no escindida y que invade

tejido viable por debajo de la quemadura, el diagnstico como se mencion debe estar
sustentado en el examen histolgico del tejido.
Criterios relacionados a infeccin localizada:
6.21.1 Presencia de secrecin purulenta
6.21.2 Ftido
6.21.3 Sangrado anormal
6.21.4 Profundizacin de quemaduras
Criterios relacionados a infeccin generalizada:
6.21.5 Fiebre persistente >38C
6.21.6 Hipotermia <36C
6.21.7 Taquicardia o bradicardia
6.21.8 Polipnea o bradipnea
6.21.9 Lucocitosis o leucopenia >12,000 o <4,000 o ms de 10% de bandas
6.21.10 Hemocultivo positivo.
6.22 Otras infecciones.
Cualquier infeccin que pueda ser adquirida en forma intrahospitalaria, que cumpla con los
requisitos mencionados en la definicin de caso de IN y que no haya sido mencionada en esta
NOM.
6.23 Infeccin relacionada a la atencin mdica (IRAM): se refiere a la infeccin asociada a
cualquier procedimiento de atencin mdica de pacientes no hospitalizados, v.gr. unidades de
aplicacin de quimioterapia ambulatoria, unidades de endoscopa, unidades de hemodilisis,
clnicas externas de ciruga, etctera.
174
7. Organizacin
7.1 La organizacin, estructura y funciones para la vigilancia epidemiolgica de las infecciones
nosocomiales sern acordes a las caractersticas de cada institucin y establecer las bases
para garantizar la generacin y flujo de informacin epidemiolgica, apoyar la certificacin de
hospitales y realizar el estudio y seguimiento de los casos y brotes asociados a infeccin
nosocomial, as como las medidas para su prevencin y control.
7.2 La Direccin General de Calidad y Educacin en Salud coadyuvar, en el marco del Sistema
Integral de Calidad en Salud, a la prevencin y reduccin de la morbilidad y la mortalidad
causada por la infeccin nosocomial con la implantacin de un modelo de gestin de riesgos y
las acciones de seguridad del paciente.
Los COCASEP conocern de las acciones y propuestas de mejora planteadas por la UVEH y el
CODECIN y viceversa, fomentando el trabajo en equipo.
7.3 El subsistema de vigilancia epidemiolgica de las infecciones nosocomiales ser coordinado
por el
Centro Nacional de Vigilancia Epidemiolgica y Control de Enfermedades a travs de la
Direccin General
Adjunta de Epidemiologa y contar con la participacin de todos los hospitales del SNS.
Los hospitales de los sectores pblico, social y privado que integran el SNS estn obligados a
integrarse al sistema de vigilancia epidemiolgica, prevencin y control de las infecciones
nosocomiales apegndose al cumplimiento de esta Norma Oficial Mexicana reportando
directamente a la RHOVE a travs de la Plataforma del SINAVE.
7.3.1 De conformidad con los niveles tcnico-administrativos del SNS, la operacin del sistema
de Vigilancia Epidemiolgica de las Infecciones Nosocomiales se llevar a cabo de acuerdo con
la siguiente estructura: nivel operativo, nivel jurisdiccional, nivel estatal o nivel nacional
conforme a lo establecido en la NOM-017-SSA2-1994, Para la vigilancia epidemiolgica.
7.3.2 En el mbito hospitalario, la organizacin y la estructura para la vigilancia de las
infecciones nosocomiales se conforma por la UVEH y el CODECIN.
7.3.3 La UVEH es la instancia tcnico-administrativa que efecta las actividades de vigilancia
epidemiolgica incluyendo la referida a las infecciones nosocomiales. Debe estar conformada
por un epidemilogo, un infectlogo, una o ms enfermeras en salud pblica, una o ms
enfermeras generales, uno o ms tcnicos especializados en informtica y otros profesionales
afines, de acuerdo con las necesidades especficas, estructura y organizacin del hospital.
7.3.4 La UVEH realizar la vigilancia de los padecimientos considerados como infecciones

nosocomiales conforme a lo establecido en esta NOM.
7.3.5 Ser responsabilidad de la UVEH concentrar, integrar, validar, analizar y difundir la
informacin epidemiolgica de las infecciones nosocomiales a los servicios del hospital y al
CODECIN elaborando un informe mensual y uno anual y emitir en forma permanente
actividades de prevencin y control documentadas.
7.3.6 La UVEH coordinar, supervisar y evaluar las acciones operativas dentro de su mbito
de competencia; asimismo realizar acciones dirigidas a mejorar la vigilancia epidemiolgica,
175
prevencin y control de las infecciones nosocomiales y apoyar al Subcomit de Control de

Uso de antimicrobianos en la evaluacin del uso de los antimicrobianos en el hospital y la
vigilancia de la evolucin de la resistencia antimicrobiana.
7.3.7 La UVEH deber participar en la capacitacin y actualizacin de todo el personal de salud
y de apoyo del hospital.
7.3.8 El responsable de la UVEH o su equivalente institucional es el que deber organizar,
coordinar, supervisar y evaluar las actividades de vigilancia epidemiolgica de las infecciones
nosocomiales y todos los miembros de la UVEH y del CODECIN lo apoyarn para el
cumplimiento de esta responsabilidad.
7.3.9 El coordinador de la UVEH ser el epidemilogo, conforme a la estructura y necesidades
del hospital.
7.3.10 La UVEH deber contar por lo menos con una enfermera en salud pblica o capacitada
en epidemiologa para vigilancia en instituciones con 0 a 100 camas y este personal deber
incrementarse en, por lo menos, una enfermera por cada 100 camas del hospital, para que
puedan realizarse con la periodicidad adecuada las visitas a los servicios, la identificacin de
pacientes en riesgo, as como la vigilancia, actividades de prevencin y control y seguimiento
de pacientes con infeccin nosocomial o sospecha de la misma. A este personal no se le
debern asignar actividades que no estn relacionadas con las descritas.
7.3.11 Las visitas a los servicios de hospitalizacin debern realizarse a diario, dirigidas a los
ingresos donde se evaluar el riesgo del paciente para adquirir una infeccin nosocomial,
tambin se revisarn diariamente los resultados de los cultivos en el laboratorio para
relacionarlos con los pacientes hospitalizados.
7.3.11.1 Por lo menos, dos veces por semana se deber efectuar seguimiento al expediente
buscando aquellos factores de riesgo que vuelvan susceptible al paciente de desarrollar una
infeccin nosocomial. De igual modo ser necesario que al menos dos veces a la semana se
busquen activamente en el laboratorio, los resultados de los cultivos realizados al paciente. El
seguimiento al caso, su expediente y resultado de cultivos se realizar dependiendo del tiempo
promedio de estancia hospitalaria.
7.3.11.2 En el archivo, por lo menos una vez por semana, se obtendr la informacin necesaria
para la vigilancia de infecciones nosocomiales. En los servicios que as lo ameriten, las visitas se
realizarn con la periodicidad que el CODECIN defina.
7.3.12 Los resultados de la vigilancia de las infecciones nosocomiales sern informados por el
coordinador de la UVEH. Deber informar sobre los problemas detectados y las situaciones de
riesgo; deber asimismo presentar alternativas de solucin.
7.3.13 El CODECIN se integrar de acuerdo con las necesidades y estructura del hospital, por
un presidente que ser el director del hospital responsable del comit, un secretario ejecutivo,
que ser el coordinador de la UVEH y por los representantes de los servicios sustantivos y de
apoyo.
7.3.14 El CODECIN ser el rgano consultor tcnico del hospital en los aspectos relacionados
con la vigilancia epidemiolgica, prevencin y control de las infecciones nosocomiales as como
de la evaluacin del uso de antibiticos y la resistencia antimicrobiana en el hospital.
176
7.3.15 Ser funcin del CODECIN identificar problemas, definir y actualizar polticas de
prevencin y control de infecciones de manera permanente.
7.3.16 Las resoluciones aprobadas y su seguimiento debern llevarse a cabo por cada una de
las reas responsables del CODECIN.
7.3.17 El CODECIN deber establecer una estrecha coordinacin con el laboratorio de
microbiologa para establecer la revisin sistematizada y permanente de los cultivos realizados
y establecer su vnculo con los hallazgos clnicos, a travs de la asesora por el personal de
laboratorio en los casos que as se requiera.
7.3.17.1 En los hospitales en los que no se cuente con laboratorio de microbiologa, el
CODECIN deber promover el apoyo de un laboratorio regional o estatal.
7.4 El Comit Jurisdiccional de Vigilancia Epidemiolgica de Infecciones Nosocomiales,

coordinar las actividades de los hospitales en su rea de influencia.
7.4.1 Las acciones de este Comit en relacin con la vigilancia epidemiolgica, prevencin y
control de las infecciones nosocomiales sern:
7.4.1.1 Coordinar las diferentes UVEH en su rea de competencia.
7.4.1.2 Asesorar en aspectos tcnico-operativos y administrativos a los responsables de las
UVEH.
7.4.1.3 Garantizar el uso de la informacin en los hospitales para la toma de decisiones.
7.5 El nivel estatal coordinar las actividades de la vigilancia epidemiolgica de las infecciones
nosocomiales a travs de los comits estatales de vigilancia epidemiolgica, realizando las
siguientes funciones:
7.5.1 Elaborar los mecanismos e indicadores que permitan realizar la supervisin, seguimiento
y evaluacin de las actividades de vigilancia epidemiolgica.
7.5.2 Establecer, en coordinacin con las instituciones de salud, las medidas de prevencin y
control pertinentes.
7.6 El Centro Nacional de Vigilancia Epidemiolgica y Control de Enfermedades, a travs de la
Direccin
General Adjunta de Epidemiologa como representante del rgano normativo y en
coordinacin con todas las instituciones del SNS, deber concentrar, analizar y difundir la
informacin generada por todas las instituciones del Sector Salud, otorgar asesora y emitir
recomendaciones cuando sea pertinente.
8. Capacitacin y asesora
8.1 Las UVEH, los CODECIN, los comits estatales de Vigilancia Epidemiolgica y el CONAVE,
sern los encargados de proporcionar asesora y capacitacin en materia de vigilancia
177
epidemiolgica hospitalaria en sus respectivos mbitos de competencia, a quienes as lo

requieran.
8.2 La capacitacin deber llevarse a cabo en los diferentes niveles tcnico-administrativos del
SNS involucrando a todo el personal de salud y de apoyo relacionado con la atencin
intrahospitalaria de pacientes, segn su rea de responsabilidad.
8.3 El personal del laboratorio de microbiologa y otros servicios de apoyo debern participar
en las actividades de capacitacin en los diferentes niveles administrativos.
8.4 En caso de presencia o sospecha de brote deber efectuarse de inmediato la capacitacin a
todo el personal de salud de las reas involucradas hasta que el brote haya sido controlado o
descartado; estas actividades se dirigirn a los aspectos bsicos de prevencin y control, de
acuerdo a las hiptesis de cmo se gener y se desarroll el problema. Los responsables de
estas actividades de capacitacin sern los integrantes del CODECIN.
9. Supervisin y evaluacin
9.1 Las acciones de supervisin y evaluacin de la vigilancia epidemiolgica de infecciones
nosocomiales se sustentan en la organizacin de las instituciones participantes y tienen como
base los recursos existentes en cada nivel tcnico-administrativo.
9.1.1 El CODECIN deber supervisar mensualmente y evaluar semestralmente, las actividades
de vigilancia epidemiolgica, prevencin y control de las infecciones nosocomiales de acuerdo
con lo establecido en esta NOM.
9.2 Los servicios de salud en sus distintos niveles tcnico-administrativos, debern designar al
personal que realizar el seguimiento y evaluacin de las actividades de vigilancia
epidemiolgica de infecciones nosocomiales, y que est capacitado en esta rea.
9.3 La supervisin y evaluacin de las actividades de vigilancia epidemiolgica, prevencin y
control de las infecciones nosocomiales, debern realizarse peridicamente y contar con
instrumentos especficos.
9.4 El personal que realice la supervisin deber redactar y entregar un informe a las
autoridades del hospital y al nivel normativo correspondiente.
9.5 Las autoridades enteradas del informe de la supervisin y de la evaluacin debern
desprender decisiones de ajuste y control en un plazo no mayor de una semana, enviando sus
instrucciones al CODECIN para que ste las aplique de inmediato, dando adems el
seguimiento correspondiente.
9.6 Las autoridades y los niveles tcnico-administrativos establecern un sistema de control de
calidad en la prevencin y control de infecciones nosocomiales con el consenso de las
principales instituciones de salud, mismas que participarn en evaluaciones peridicas para
emitir opiniones y recomendaciones.
9.7 El laboratorio del hospital deber contar con todos los insumos necesarios para la
obtencin segura de las muestras y para su anlisis e interpretacin. Es importante contar con
un control de calidad externo para las reas de bacteriologa.
178
9.8 La obtencin de las muestras ser responsabilidad del laboratorio hospitalario. En caso de
realizar cultivos o pruebas de laboratorio a un paciente, stos debern ser autorizados por el
mdico tratante y sustentados por l mismo en el expediente clnico. El personal mdico y de
enfermera ser el responsable de la obtencin de, entre otros, hemocultivos, orina por
puncin suprapbica y los siguientes lquidos: LCR, pleural, peritoneal, sinovial, pericrdico,
etc., as como de aquellas muestras que por sus caractersticas tcnicas no pueden ser
competencia del personal del laboratorio.
9.9 De acuerdo con los recursos de cada hospital, el laboratorio deber realizar las pruebas de
resistencia y susceptibilidad en la mayora de los cultivos; emitir oportunamente la
informacin en cada caso y la comunicar a los clnicos tratantes y a los responsables de la
vigilancia epidemiolgica. As mismo deber presentar mensualmente la frecuencia de los
microorganismos aislados y su perfil de resistencia antibacteriana. Adicionalmente, evaluar
peridicamente, de acuerdo a los recursos del hospital y a la situacin epidemiolgica que
prive en los servicios prioritarios, la resistencia de la flora bacteriana a los antibiticos que se
emplean comnmente en la unidad.
10. Aspectos generales de prevencin y control
10.1 El CODECIN ser el responsable del establecimiento y aplicacin de medidas de vigilancia,
prevencin y control de las infecciones nosocomiales, as como de su seguimiento.
10.2 La unidad hospitalaria deber realizar acciones especficas de prevencin y control de
infecciones nosocomiales, para lo cual deber contar con programas de capacitacin y
educacin continua para el personal y la poblacin usuaria, enfocados especficamente a
disminuir los riesgos en los procedimientos realizados con mayor frecuencia. La instalacin y
permanencia de cualquier dispositivo o medio invasivo en el paciente deber ser evaluado por
los mdicos tratantes y en su caso por la UVEH, diariamente, limitando su permanencia slo al
tiempo indispensable.
10.3 El laboratorio de microbiologa, propio o subrogado, deber proporcionar informacin
para la vigilancia y control de infecciones nosocomiales conforme se establece en el apartado
de notificacin de esta
Norma.
10.4 Los servicios de intendencia, lavandera y dietologa, propios o subrogados, debern estar
capacitados para el control de factores de riesgo, del microambiente y de prevencin de
infecciones nosocomiales.
10.5 Las autoridades de salud en los distintos niveles e instituciones del SNS, debern asegurar
y demostrar la gestin de las acciones para la dotacin de recursos humanos, materiales y de
operacin para el funcionamiento adecuado de las actividades de laboratorio, enfermera e
intendencia, principalmente en apoyo a la vigilancia epidemiolgica y las medidas de
prevencin y control de acuerdo con sus recursos y organizacin interna.
10.6 El programa de trabajo del CODECIN deber contener como mnimo, en funcin de los
servicios existentes, los lineamientos correspondientes a las siguientes actividades:
10.6.1 Higiene de las manos.
179
10.6.1.1 Todo el personal de salud al entrar en contacto con el ambiente hospitalario debe
lavarse las manos con agua corriente y jabn, y secarse con toallas desechables. Se debe
realizar higiene de manos antes y despus de revisar a cada paciente y/o al realizar algn
procedimiento.
10.6.1.2 En las unidades de cuidados intensivos, urgencias, aislados y otros que la UVEH
considere de importancia, se debe utilizar jabn antisptico lquido, agua corriente y toallas
desechables. La descontaminacin de las manos puede hacerse tambin con productos con
base de alcohol etlico o isoproplico con una concentracin mayor al 60% con emolientes, v.gr.
glicerina a una concentracin entre 2% y 3%.
10.6.1.3 En procedimientos donde no hay contaminacin con sangre o lquidos corporales, la
limpieza de las manos puede realizarse con alcohol con emolientes o agua y jabn.
10.6.1.4 El abasto de material y equipo necesario, as como su mantenimiento, ser
responsabilidad de cada establecimiento.
10.6.1.5 El personal de salud que est en contacto directo con pacientes debe recibir
capacitacin sobre el procedimiento de lavado de manos, a su ingreso y cada seis meses. Las
autoridades registrarn las actividades de capacitacin del personal mediante bitcoras, listas
de capacitacin o cualquier otra forma de registro.
10.6.1.6 Es responsabilidad de cada institucin contar con el manual de procedimientos

especficos, actualizado cada dos aos y disponible para todo el personal.
10.6.2 Medidas para prevenir infecciones de vas urinarias asociadas a sonda.
10.6.2.1 Es obligacin de la unidad hospitalaria contar con material y equipo para la instalacin
del catter urinario, incluido un antisptico de nivel intermedio, as como garantizar la tcnica
estril.
10.6.2.2 La persona que ejecute el procedimiento debe estar capacitada.
10.6.2.3 El sistema de drenaje debe ser un circuito cerrado con las siguientes caractersticas:
con sitio para toma de muestras, cmara antirreflujo y pinza en el tubo de vaciado.
10.6.2.4 Una vez instalada la sonda y conectada al sistema de drenaje no se debe desconectar
hasta su retiro. Debe de rotularse la fecha de instalacin.
10.6.3 Instalacin, manejo y cuidado del Sistema integral de terapia intravenosa.
La instalacin y manejo del equipo del Sistema integral de terapia intravenosa deber hacerse
con las medidas aspticas adecuadas para los diferentes niveles de riesgo. Cuando se instalen
catteres centrales o en el caso de tratarse de pacientes con alto riesgo de infeccin, deber
utilizarse la tcnica de barrera mxima. Para mantener la esterilidad y apirogenicidad de las
soluciones intravenosas, el personal de salud se asegurar que una vez instalado el sistema,
ste contine cerrado y no se viole en ninguno de sus componentes. No deben usarse frascos
de solucin para tomas mltiples de fracciones de lquido (frascos nodriza).
10.6.3.1 El equipo de infusin deber ser rotulado con la fecha, hora y nombre de la persona
que lo instal. Tanto el equipo de infusin como el catter perifrico deben cambiarse cada 72
180
horas o antes, en caso de sospecha de contaminacin. Ante la sospecha de contaminacin de

un catter central o de infeccin asociada al mismo, se proceder al retiro inmediato de dicho
dispositivo.
10.6.3.2 Deber realizar higiene de manos previamente cada vez que se aplique un
medicamento en el sitio de inyeccin o tapn de goma de la lnea de infusin, deber
realizarse asepsia con alcohol etlico o
isoproplico al 70% dejndolo secar. En el caso de tapn de goma se utilizar una jeringa y
aguja estriles para cada puncin; y se utilizar jeringa estril en caso de tratarse de
dispositivos libres de uso de aguja.
10.6.3.3 Se utilizarn soluciones intravenosas envasadas en contenedores libres de Cloruro de
Polivinilo
(PVC) o manufacturados con Etil Vinil Acetato (EVA) o en frascos de vidrio, para la
administracin de
Nitroglicerina, Nitroprusiato de Sodio, Warfarina, Lidocana, Insulina, Nimodipina, Diazepam
(benzodiacepinas), Tiopental y otros medicamentos que muestren interaccin con los
contenedores fabricados con materiales plsticos (PVC), segn determine, en trminos de la
Ley General de Salud, la Secretara de
Salud, a travs de la Comisin Federal para la Proteccin contra Riesgos Sanitarios, mediante la
expedicin de las disposiciones correspondientes.
En caso de utilizar llaves de tres vas o cuatro vas con o sin dispositivos libres de uso de aguja
se deber asegurar que se manejen de acuerdo a la tcnica estril.
10.6.3.4 La preparacin de mezclas de soluciones y medicamentos se realizar por personal
capacitado en una rea especfica, cerrada y con acceso limitado.
10.6.3.5 La preparacin de medicamentos, previo lavado de manos y uso de mascarilla simple
(cubrebocas), se debe realizar con tcnica y material estril (jeringa, gasas y dispositivos
seguros y adecuados para extraer e inyectar el medicamento) para cada medicamento y de
forma exclusiva para cada paciente y por cada ocasin.
10.6.3.6 Los catteres venosos centrales y perifricos debern ser rotulados con fecha, hora y
nombre del mdico o enfermera responsables de su instalacin y de la curacin o antisepsia
del sitio de insercin del catter.
10.6.3.7 El sitio de insercin de las cnulas intravasculares perifricas y de los catteres
vasculares deber ser cubierto con gasa estril o un apsito estril semipermeable.
10.6.3.8 Queda prohibido utilizar sondas de alimentacin como catteres intravasculares.
10.6.3.9 En hospitales que cuenten con servicios de neonatologa slo se permitir utilizar
presentaciones de soluciones endovenosas de 50 y 100 mililitros para uso nico por paciente.
10.6.3.10 Todos los hospitales que cuenten con una unidad de oncologa mdica y/o terapia
intensiva debern contar con un equipo de enfermeras de terapia intravenosa que deber
cumplir con los lineamientos descritos en esta Norma.
181
10.6.3.11 Las ampolletas de vidrio o plstico debern utilizarse exclusivamente al momento de

abrirse y se desechar el remanente. Deber garantizarse la esterilidad del contenido durante
la apertura.
10.6.3.12 La utilizacin de frascos mpula deber ser con tcnica de asepsia y seguir las
instrucciones de conservacin y uso de los fabricantes.
10.6.3.13 La infusin de la nutricin parenteral ser exclusivamente a travs de un catter
venoso central.
La lnea por donde se administre ser para uso exclusivo. La lnea del catter ser manipulada
con tcnica estril slo para el cambio de las bolsas o equipos dedicados a la nutricin
parenteral. Queda prohibido aplicar nutricin parenteral a travs de una cnula perifrica.
10.6.3.14 La nutricin parenteral deber prepararse con tcnica de barrera mxima en una
campana de flujo laminar horizontal ya sea propia o subrogada por personal exclusivo y
capacitado, idealmente en un centro de mezclas. Adicionalmente, al realizar la conexin de las
bolsas debe tenerse especial precaucin en conservar la tcnica de barrera mxima y evitar la
contaminacin.
10.6.3.15 La nutricin enteral deber prepararse en un rea exclusiva, por personal capacitado
y bajo condiciones de acuerdo al manual de procedimientos establecidos para este fin.
10.6.4 Vigilancia de neumonas en pacientes de riesgo.
10.6.4.1 El hospital tendr la responsabilidad de capacitar a los trabajadores de la salud cada
seis meses para la vigilancia, prevencin y control de neumonas nosocomiales en pacientes de
riesgo.
10.6.4.2 Los circuitos para ventilacin e inhaloterapia, las bolsas de reanimacin respiratoria y
sensores de oxgeno utilizados en cualquier servicio o rea del hospital que no sean
desechables, debern ser lavados y esterilizados o someterlos a desinfeccin de alto nivel
antes de volver a ser usados en otro paciente.
10.6.4.3 Todo procedimiento que implique contacto con secreciones de la va area deber ir
precedido del lavado de manos y uso de guantes. Cuando sea necesario, el personal deber
utilizar lentes o gafas protectoras y mascarillas simples (cubrebocas).
10.6.4.4 Los humidificadores y equipos de apoyo respiratorio no invasivo deben ser
esterilizados o sometidos a desinfeccin de alto nivel. El agua que se utilice en estos
dispositivos debe ser estril y deber cambiarse por turno. El cambio de este equipo deber
hacerse mximo cada semana, a menos que exista contaminacin documentada; deben
registrarse la fecha y hora de cada cambio en la bitcora del servicio correspondiente.
10.6.4.5 El agua utilizada para nebulizadores debe ser estril.
10.6.4.6 En cada episodio de aspiracin de secreciones debe utilizarse material y tcnica
estril.
10.6.4.7 El mdico tratante debe especificar en la hoja de indicaciones mdicas la posicin del
paciente.
182
10.6.4.8 Se debe contar con un manual de procedimientos, cdula de cotejo o gua de

supervisin del procedimiento y responsables de su aplicacin.
10.6.5 Precauciones para evitar la transmisin de agentes infecciosos.
10.6.5.1 Desde el primer contacto con el paciente y en todas las reas del hospital debe
cumplirse con las precauciones estndar y contar con tarjetones en los que se especifiquen los
cuidados necesarios para precauciones especficas de acuerdo con los siguientes criterios:
10.6.5.1.1 Precauciones estndar: (rojo)
10.6.5.1.2 Precauciones por contacto: (amarillo)
10.6.5.1.3 Precauciones por gotas: partculas de secreciones respiratorias que se producen al
hablar, estornudar o toser y que son iguales o mayores de cinco micras: (verde)
10.6.5.1.4 Precauciones para va area: partculas de secreciones respiratorias que se
producen al hablar, estornudar o toser y que son menores de cinco micras: (azul)
10.6.5.2 Los tarjetones se colocarn en la entrada de la habitacin, en un lugar visible en
cuartos individuales y en la cabecera del paciente en cuartos compartidos.
10.6.6 Vigilancia y control de esterilizacin y desinfeccin.
10.6.6.1 Los objetos que se usen en procedimientos invasivos deben someterse a un proceso
de limpieza de acuerdo al tipo de instrumento para posteriormente realizar la esterilizacin o
desinfeccin de alto nivel. En procedimientos quirrgicos siempre deber realizarse
esterilizacin.
10.6.6.2 El material y equipo destinado a esterilizacin debe ser empacado en papel grado
mdico y cerrado mediante selladora trmica; debe ser rotulado con fecha de esterilizacin, de
caducidad y nombre de la persona responsable del proceso.
10.6.6.3 La unidad hospitalaria debe contar con anaqueles que resguarden el material estril
del polvo y la humedad.
10.6.6.4 Los recipientes que contengan desinfectante deben permanecer tapados y rotulados
con el nombre del producto, la fecha de preparacin y caducidad, se debe contar con una
bitcora de uso. No deben utilizarse productos de bajo nivel (v.gr. cloruro de benzalconio) en
la bsqueda de desinfeccin de nivel alto e intermedio. Cuando se utilice glutaraldehdo, debe
validarse su efectividad mediante tiras reactivas. Los germicidas utilizados deben ser validados
por la UVEH y por el CODECIN mediante pruebas de control microbiolgico y de la calidad del
producto, documentadas con una adecuada metodologa.
10.6.6.5 Los esterilizadores de vapor (v. gr. autoclaves), cmaras de gas, equipos de plasma y
calor seco deben contar con una bitcora de mantenimiento y utilizacin, as como de
controles de vigilancia de su funcionamiento. La calidad de la funcin deber vigilarse con
controles fsicos, qumicos y biolgicos apropiados a cada procedimiento.
183
10.6.7 Cuidado de reas fsicas, mobiliario y equipo.

10.6.7.1 Las reas de toco ciruga, las unidades quirrgicas y de terapia intensiva debern
cumplir con: las caractersticas de infraestructura fsica y acabados, gases, elctrica, flujos de
aire, filtracin correcta del aire (alta eficiencia, mantenimiento), circulaciones de pacientes, del
personal, del instrumental y del equipo y con las reas tributarias que determina la normativa
correspondiente.
10.6.7.2 Las reas especficas del inciso anterior contarn con un manual de procedimientos
para determinar las caractersticas, la frecuencia del aseo y limpieza del rea, as como los
mecanismos que permitan llevar a cabo una vigilancia estricta sobre su cumplimiento, dejando
constancia en una bitcora de control; igualmente se definir la responsabilidad que cada
profesional o tcnico del equipo de salud que ah labora, tiene en su cumplimiento y vigilancia.
No se recomienda realizar clausura de salas, ni fumigaciones de manera rutinaria.
10.6.7.3 Los circuitos para ventilacin de los equipos de anestesia que no sean desechables,
debern ser lavados y esterilizados antes de volver a ser usados en otro enfermo.
10.6.7.4 En el caso de contar con sistemas de inyeccin y extraccin de aire en el
establecimiento hospitalario, las reas de aislados, sin importar su ubicacin, debern contar
con ductos de extraccin de aire.
10.6.7.5 Las reas de terapia intensiva de adultos, pediatra, neonatologa, urgencias,
quimioterapia, hemodilisis y dilisis, contarn con un manual de procedimientos para
determinar las caractersticas, la frecuencia del aseo y limpieza del rea, as como los
mecanismos que permitan llevar a cabo una vigilancia estricta sobre su cumplimiento, dejando
constancia en una bitcora de control. Igualmente se definir la responsabilidad que cada
Las unidades o servicios en donde se realicen procedimientos endoscpicos (artroscopias,
endoscopias de tubo digestivo corto o largo, broncoscopios) debern contar con protocolos de
limpieza a base de detergente enzimtico y con desinfeccin de alto nivel o esterilizacin. Es
indispensable el registro detallado del proceso en bitcoras.
10.6.7.6 Cada vez que se desocupe una cama o cuna se deber realizar limpieza y desinfeccin
de ella, de acuerdo a su manual de procedimientos.
10.6.7.7 Las cunas de calor radiante, incubadoras y bacinetes de las reas peditricas debern
recibir aseo y limpieza cada vez que la ocupe un nuevo paciente. Cada vez que este mobiliario
se desocupe, se limpiar y desinfectar, al igual que cuando no sea utilizado en 48 horas. La
limpieza y desinfeccin de este mobiliario se registrar en una bitcora localizada en el rea.
10.6.7.8 Cuando en el establecimiento hospitalario exista un rea especfica para atencin de
quemados, sta deber contar con filtro de aislamiento o rea de transferencia, con lavabo,
jabn lquido y toallas desechables. Dentro del rea de atencin, el sistema de ventilacin
deber ser independiente al del resto del hospital. Dicha rea deber contar cuando menos
con un lavabo, jabn lquido, toallas desechables y alcohol con glicerina. Contar adems con
un manual de procedimientos que permita determinar las caractersticas, la frecuencia del
aseo y limpieza del rea, del mobiliario y del equipo, as como los mecanismos que permitan
llevar a cabo una vigilancia estricta sobre su cumplimiento, dejando constancia en una bitcora
de control que se ubicar en esa rea; igualmente se definir la responsabilidad que cada
184
10.6.7.9 Cada vez que se desocupe una cama del rea de quemados, se deber realizar
limpieza y desinfeccin.
10.6.7.10 Vigilancia de la calidad de la red de agua corriente hospitalaria. La UVEH en
coordinacin con las reas de mantenimiento del hospital, realizar cada dos das el monitoreo
permanente del cloro residual en cada uno de los servicios. Se vigilar que los niveles se
mantengan dentro de los lmites permisibles (0.2-1.0 mg/l). Adems se realizar una vez por
semana la bsqueda intencionada a travs de cultivo de Vibrio cholerae.
10.6.8 Los sistemas de tratamiento de agua del servicio de hemodilisis debern contar con
bitcoras de operacin y mantenimiento actualizadas as como reportes de control
bacteriolgico y fisicoqumico del agua producida.
11. Investigacin
11.1 CODECIN deber estimular el desarrollo de la investigacin en todas sus actividades. El
CODECIN deber ser el responsable de la evaluacin tcnica y uso apropiado de antispticos y
desinfectantes.
11.2 El desarrollo de la vigilancia epidemiolgica de las infecciones nosocomiales requiere de la
realizacin de investigacin bsica, clnica, epidemiolgica y operativa, con atencin particular
a los factores de riesgo para la adquisicin de infecciones nosocomiales.
11.3 Los resultados de tales investigaciones debern ser discutidos en el seno del CODECIN con
el objeto de evaluar y mejorar las actividades del mismo.
11.4 Los estudios e investigaciones se efectuarn con base en los principios cientficos y de
acuerdo con la Ley General de Salud y su Reglamento en Materia de Investigacin.
12. Concordancia con normas internacionales y mexicanas
Esta Norma no es equivalente a ninguna norma internacional ni mexicana.
13. Bibliografa
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189
14. Observancia de la Norma

La vigilancia del cumplimiento de esta Norma Oficial Mexicana corresponde a la Secretara de
Salud, as como a los gobiernos de las entidades federativas, en sus respectivos mbitos de
competencia.
Las instituciones de atencin mdica pertenecientes al Sistema Nacional de Salud podrn
solicitar, en cualquier momento, una evaluacin de la conformidad, si as lo estiman
pertinente.
15. Vigencia
Esta Norma Oficial Mexicana entrar en vigor al da siguiente de su publicacin en el Diario
Oficial de la
Federacin.
Sufragio Efectivo. No Reeleccin.
Mxico, D.F., a 20 de octubre de 2009.- El Subsecretario de Prevencin y Promocin de la
Salud y Presidente del Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Prevencin y Control
de Enfermedades, Mauricio Hernndez Avila.- Rbrica.
190
GUA PRCTICA Prevencin de las infecciones

nosocomiales.
http://www.who.int/csr/resources/publications/drugresist/en/PISpanish3.pdf
WHO/CDS/CSR/EPH/2002.1
Prevencin
de las
infecciones
nosocomiales
GUA PRCTICA
2a edicin
Revisores
G. Ducel, Fundacin Hygie, Ginebra, Suiza
J. Fabry, Universidad Claude Bernard, Lyon, Francia
L. Nicolle, Universidad de Manitoba,Winnipeg, Canad
Colaboradores
R. Girard, Centro Hospitalario Lyon-Sur, Lyon, Francia
M. Perraud, Hospital Edouard Herriot, Lyon, Francia
A. Prss, Organizacin Mundial de la Salud,
Ginebra, Suiza
A.
Savey, Centro Hospitalario LyonSur, Lyon, Francia
E.Tikhomirov, Organizacin Mundial de la Salud,

Ginebra, Suiza M.Thuriaux, Organizacin Mundial
de la Salud, Ginebra, Suiza
P.Vanhems, Universidad Claude Bernard, Lyon, Francia
ORGANIZACIN MUNDIAL
DE LA SALUD
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M.

en A Olga Gonzlez Rangel

Jessica Janette Saucedo Maltos 247464

M en A. Olga Gonzlez Rangel

ENFERMEDADES DEL APARATO GASTROINTESTINAL

Jessica Saucedo, Marcela Salazar y Guadalupe Santos. |

Caractersticas morfolgicas y bioqumicas del gnero Salmonella

(28C y no 35C), endotoxinas bloqueadores beta adrenrgicos y cadriotxicos en

*Incubar por 24 hrs a 37 grados y realizar morfologa macro y microscpica y pruebas

*Realizar tincin de GRAM

M en A. Olga Gonzlez Rangel

Jessica Saucedo, Marcela Salazar y Guadalupe Santos. |

como en el estmago, es compleja y una adventicia o

Salmonelosis: (salmonella entrica cuadros de gastroenteritis y salmonella tiphy

Diarrea por Campylobacter.- Campylobacter jejuni causa diarrea.

Shigellosis: (S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii) o disenteria bacilar.

Diarrea por Escherichia coli: ( cuadros diarreicos)

Diarrea por Yersinia: (diarrea acuosa y sanguinolenta de breve duracin).

Diarrea por Aeromonas.- Aeromonas hidrophila ( cuadros diarreicos, fiebre y dolor

Diarrea por Staphylococcus aureus.

Diarrea por Plesiomonas (no se conoce la va de contagio y mecanismo de accin)

Diarrea por Clostridium difficile ( por dos toxinas (verotoxina y citotoxina)

Ilustracin 2 Tabla de bacterias que causan diferentes sntomas.

Lavarse las manos antes y despus del procedimiento.

Evitar que la evacuacin se mezcle con orina.

Que el cmodo este perfectamente limpio.

El paciente no debe estar en tratamiento con antibiticos

1. Lavarse las manos.

posteriormente se realiz la inoculacin de una porcin de materia fecal en el caldo nutritivo

Se observa en el agar SS, la

Morfologa de las colonias del McK

Morfologa obtenida de las colonias del agar SS

Coincide con: Escherichia coli.

M en A. Olga Gonzlez Rangel

NALISIS DE CEPAS DE REFERENCIA RELACIONADAS A

Jessica Saucedo, Marcela Salazar y Guadalupe Santos. |

Glucosa (+) sacarosa (-)

Glucosa (+) Sacarosa (-) Lactosa (-) Gas

Movilidad (+) Indol (-)

Movilidad: (+) Indol: (+) Ornitina: (+)

H2S (+) Indol (+) Movilidad (+)

Glucosa (-) sacarosa (-)

Glucosa (-) Sacarosa (-) Lactosa (-) Gas

Deaminacin (-) Decarboxilacin (+)

Movilidad (+) Indol (-)

Movilidad: (+) Indol: (-) Ornitina: (+)

M en A. Olga Gonzlez Rangel

Jessica Saucedo, Marcela Salazar y Guadalupe Santos. |

El estado de salud y la edad influyen en las manifestaciones clnicas que acompaan a

3. ORGANISMOS QUE PUEDEN SER UROPATOGENOS, PUEDEN REQUERIR MEDIOS

La gran mayora de los casos de cistitis y pielonefritis pueden ser correctamente

Da 2: Se realiz el mtodo de Kirby Bauer

Si creci algo, realizar tincin de

M en A. Olga Gonzlez Rangel

NALISIS DE CEPAS DE REFERENCIA REALCIONADAS A

Jessica Saucedo, Marcela Salazar y Guadalupe Santos. |

reconocibles y sistemticos, constituyendo lo que se denomina un sndrome, que seala la

Tambin se reportan dentro de la microbiota vaginal especies de Bacteroides, Staphylococcus

Vela blanca pequea