Identificación de Carbohidratos Monosacáridos Valeria

Mtodos cualitativos para la identificacin de carbohidratos
monosacridos, disacridos y polisacridos
Autor:
Romero Noeliana
Len Fabiana
Introduccin
Los carbohidratos, tambin llamados glcidos, hidratos de
carbono o sacridos, son elementos principales en la
alimentacin, que se encuentran principalmente en
azcares, almidones y fibra. La funcin principal de los
carbohidratos es el aporte energtico. Son una de las
sustancias principales que necesita nuestro organismo,
junto a las grasas y las protenas, los carbohidratos se
clasifican en Monosacridos Disacridos y Polisacridos, en
este trabajo hablaremos sobre mtodos cualitativos para
identificar cada uno de ellos.
IDENTIFICACION DE UN MONOSACARIDO A TRAVES DE
PRUEBA DE MOLISH
Al tubo de ensayo se coloca en primer lugar la muestra del
problema que desconocemos su nombre de 1 a 2 mililitros
luego adicionamos el reactivo de molish que es el alfanaftol la Misma cantidad seguidamente el cido sulfrico
pero con cuidado por las paredes del recipiente por estar
este cido concentrado 2 gotas esperamos la reaccin.
Se observa que la reaccin tomo una coloracin violeta
rojizo demostrando que es positivo para monosacridos
adema se nota que la reaccin fue exotrmica pues libero
calor despus de reaccionar.
Al haberse depositado en el fondo del recipiente el cido
sulfrico este acta sobre la glucosa arrancndole una
molcula de agua y volviendo la molcula de glucosa un
derivado
del
furfurral
hidroximetilenfurufural.
en
este
caso
el
Luego de esa reaccin se mezcla con el alfa-naftol en

presencia de cido sulfrico atacando la zona del doble
enlace del grupo carbonilo unindose en un compuesto
mixto pues presenta sustituyentes cidos y fenolicos que
toma una coloracin rojiza violeta en un anillo del tubo de
ensayo.
IDENTIFICACION DE UN DISACARIDO UTILIZANDO DIESI Y
UN ANALIZADOR DE TRAMPA LINEAL EN MS A TRAVES DE
IONIZACION
La sacarosa, formada por glucosa y fructosa, es el
disacrido ms abundante en granos y tubrculos, as como
en otros tejidos de la planta; tambin existen ciertos
organismos que no sintetizan o acumulan sacarosa en este
experimento trabajaremos con los disacridos fructosa y
glucosa.
Los carbohidratos que se utilizaron en el estudio fueron
adquiridos a SIGMA con las siguientes identificaciones
numricas nicas (CAS): glucosaD(+), 50-99-7 - C6H12O6
180.16 g/mol, 50-99-7;fructosa D(-), 57-48-7 - C6H12O6
180.16 g/mol. Los solventes que se usaron fueron agua
desionizada y metanol. El agua fue desionizada y el
metanol grado HPLC. Al considerar que los niveles de
concentracin de azcares reductores de jugo de tallo de
maz se encuentran en un nivel de 0.30 a 2.36 mg/mL se
prepararon soluciones de 1 mg/mL de cada carbohidrato
disueltos en agua y metanol. Las sustancias ionizantes
fueron: a) cloruro de litio 5 Mm (CAS, 7447-41-8), 42.39
g/mol, LiCl; b) hidrxido de amonio 10mM (CAS, 1336-21-6),
35.05 g/mol, NH4OH; c) fluoruro de sodio 1mM (CAS, 768149-4),41.9881 g/mol, NaF; d) fluoruro de amonio 1 mM
(CAS, 12-12-501-8), 37.04 g/mol, NH4F y; e) cido frmico
10mM (CAS, 64-18-6), 46.03 g/mol, CH2O2 Los niveles de
concentracin de los ionizantes utilizados se basaron en
datos experimentales del Laboratorio de Anlisis Bioqumico

e Instrumental del CINVESTAV-Irapuato (Lpez, 2013). En la
lectura de estndares (en modo positivo y negativo), se
utiliz una relacin de dilucin 50/50 v/v (agua/metanol)
para el solvente y, antes de la inyeccin en la unidad de
electrospray, se mezclaron las soluciones con cada
sustancia ionizante, en una relacin de 1% del ionizante,
v/v, filtrndose con fluoruro de polivinilideno (pvdf) de 0.45
M. En la lectura de muestras de jugo de tallo de maz se
utilizaron 10 L de muestra y 990 L de H2O (factor de
dilucin: 1:100). En la Figura 2. Izquierda, se presenta el
diagrama de flujo del experimento y etapas para la
transformacin de archivos y lectura con el programa
TOPPAS view. Los archivos en formato de texto son
adecuados para anlisis posteriores con el software en R.
Las condiciones de operacin del espectrmetro de masas
(con trampa de iones lineal tipo cuadrupolo) LTQ-FLEET, son
las que recomienda el fabricante Thermo Scientific de
Mxico para lectura de muestras de metabolitos con la
opcin MS-MS. Mediante el empleo del programa TOPPASVIEW se generaron los espectrogramas de cada solvente,
agua desionizada y metanol, as como los estndares de
glucosa y fructosa con cada ionizante: cloruro de litio,
hidrxido de amonio, fluoruro de sodio, fluoruro de amonio
y cido frmico, en modo positivo y negativo, con el fin de
evaluar el grado de ionizacin de los reagentes y de ambas
opciones de lectura. Los espectrogramas de las muestras
de jugo de tallo de maz fueron ledos mediante MS-MS en
modo negativo con el cloruro de litio, por ser la mejor
sustancia ionizante previo anlisis de la huella metablica
del grupo de ionizantes en los dos modos de lectura,
negativo y positivo (datos no mostrados); el criterio de
seleccin para utilizar el cloruro de litio consisti en
comparar el nivel de intensidad (%) representado en el eje
y del espectrograma. La obtencin y revisin de
espectrogramas MS-MS se hizo con el software Excalibur de
Thermo Scientific. Los espectrogramas obtenidos en la
primera etapa de lectura en MS-MS, fueron registrados en

formato mzXML, el cual permite el manejo directo de los
datos generados en diferentes plataformas informticas,
con el fin de identificar los iones padres de los fragmentos.
El hbrido de maz utilizado en el experimento es CV- 702 de
CIMMYT. La muestra de jugo de tallo se obtuvo con un
extractor industrial hecho en Mxico. Del tallo de maz se
corta la seccin que comprende dos internados hacia arriba
y dos internados hacia abajo de la posicin de la
inflorescencia femenina. El volumen de inyeccin manual es
de 100 L y despus de 1 minuto para estabilizar el flujo de
iones se hace la lectura. Las lecturas son el resultado de 6
barridos de los iones durante 1 minuto en el intervalo de 15
a 2000 m/z, con 3 repeticiones tcnicas. Respecto a las
lecturas de las muestras de jugo de tallos de plantas de
maz recientemente cosechadas, tratadas con dosis alta de
400 kg/ha y baja de fertilizante nitrogenado en forma de
urea, lograda sta ltima dosis por la supresin de
nitrgeno durante los ltimos cuatro aos. Los tres
carbohidratos, junto con las muestras de jugo de tallo de
maz, se inyectaron en el espectrmetro de masas sin el
uso de ionizante y sin uso de trampa lineal, y fueron
detectados e identificados por comparacin con los
fragmentos caractersticos de dichos carbohidratos, a partir
de espectrogramas previamente adquiridos con los
estndares de fructosa y glucosa y ionizadas con cloruro de
litio (fructosa y glucosa en modo negativo y con MS-MS).
Los patrones de fragmentacin de glucosa y fructosa que se
observaron en registros grficos de lectura son diferentes
para cada uno de los ionizantes, sin embargo, se pudo
determinar de manera previa la masa molecular de la
glucosa y fructosa, de acuerdo a la relacin m/z de los iones
de mayor abundancia.
IDENTIFICACION DE UN POLOSACARIDO A TRAVES DE UNA
PRUEBRA SIMPLE DE POLISACARIDO
Esta prueba se realiza con el reactivo de Lugol y sirve para

identificar polisacridos en la muestra del problema.
Al reaccionar con el reactivo de Lugol que es la mezcla de
ioduro de potasio con yodo acuoso se forma un compuesto
coordinado de mezcla, esta mezcla que est en el tubo de
ensayo se coloca a bao mara durante 5 minutos y
observamos.
En un primer momento antes de llevar al equipo de bao
mara la muestra con el reactivo eran incoloros pero luego
de estar sometido durante 5 minutos a la accin de este
calor esta se torna de color azulino pues se ha formado el
ioduro de almidn este almidn se form por la accin de
halgeno correspondiente como lo es el yodo con la
diferencia que arranca una molcula de agua sin formar
derivados del furfural como lo son en la reaccin con los
cidos orgnicos y tambin se forma agua.
Conclusin
Se realiz los siguientes trabajos con el fin de poder
reconocer e identificar los carbohidratos, estos nos ayudan
a identificar todos los componentes que llevamos en
nuestro cuerpo y sus derivados as como tambin nos
incentivan a realizar experimentos en nuestros laboratorio
pruebas sencillas que constan que todos aquellos
estudiantes
REFERENCIAS
http://www.fsalazar.bizland.com/pdf/POLISACARIDOS.pdf
http://laboratoriobioquimica3semestre.blogspot.com/2014/0
4/identificacion-de-carbohidratos-en-los.html
http://www.laselva.edu.mx/rcalderon/wpcontent/uploads/2013/05/Practica-1.-bioqu%C3%ADmicacarbohitrados-3AgroAV.pdf
http://somecta.org.mx/Revistas/SomectaVol3.2/E.
%20CYTAM-3-2-4-2015.pdf

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monosacridos, disacridos y polisacridos

Luego de esa reaccin se mezcla con el alfa-naftol en

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