Guia Practica Bioquimica 2016-II - Laboratorio
Guia Practica Bioquimica 2016-II - Laboratorio
Guia Practica Bioquimica 2016-II - Laboratorio
GUA DE PRCTICAS
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MDICA
LABORATORIO CLINICO Y ANATOMIA PATOLOGICA
BIOQUMICA
Autores:
2016
INDICE
PAGINA
CARATULA
INDICE
INTRODUCCIN
SIMBOLOS DE SEGURIDAD
PRACTICA 01:
MATERIAL DE LABORATORIO, INSTRUMENTOS. USO CORRECTO
Y MANIPULACIN PREPARACIN DE SOLUCIONES
PRACTICA 02:
ESPECTROFOTOMETRA: FACTOR Y CURVA DE CALIBRACIN
13
PRACTICA 03:
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA I: SUSTRATO Y PH
18
PRACTICA 04:
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA II: ENZIMA,
TIEMPO, TEMPERATURA
21
PRACTICA 05:
RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS
24
PRACTICA 06:
DIGESTIN ENZIMTICA DEL ALMIDN
27
PRACTICA 07:
AISLAMIENTO DE GLUCGENO HEPTICO - CUANTIFICACIN DE GLUCOSA
30
33
PRACTICA 10:
LPIDOS: SOLUBILIDAD Y SAPONIFICACIN
35
PRACTICA 11:
COLESTEROL OBTENCIN E IDENTIFICACIN
38
PRACTICA 12:
IDENTIFICACIN Y VALORACIN DE LA VITAMINA C EN CTRICOS
41
PRACTICA 13:
DETERMINACIN DE PROTENAS: OVOALBMINA
44
PRACTICA 14:
47
PRACTICA 15:
EXTRACCIN DE ADN
50
INTRODUCCIN
Uno de los cursos fundamentales en las carreras de la salud es la Bioqumica, el cual
permite comprender los mecanismos de formacin, transformacin y utilizacin de los
distintos nutrientes que componen un determinado alimento; as como tambin como
se interrelacionan las distintas vas metablicas.
La presente Gua de Prcticas de Bioqumica, est elaborada de acuerdo al Programa
de Bioqumica para la Escuela Acadmico Profesional de Tecnologa Mdica:
Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica y contiene una serie experimentos de
Laboratorio de diferentes grados de dificultad, que permiten a los estudiantes adquirir
habilidades y destrezas para el anlisis individual del material orgnico e inorgnico,
al mismo tiempo que complementan los conceptos fundamentales impartidos en las
clases tericas.
Con los principios aplicados en esta gua, los estudiantes los podrn orientarse en la
realizacin de trabajos de investigacin que incrementen sus conocimientos
bioqumicos. Cada prctica tiene un pequeo resumen terico.
Al iniciar cada prctica el alumno tendr una pequea orientacin sobre la
importancia del anlisis y de la utilidad del ensayo contenida en el Marco Terico,
seguidamente se mencionarn los objetivos que se alcanzarn y que van acorde al
tema asignado en el Silabo del curso de Bioqumica.
En cada prctica tambin se indicar la lista de reactivos y materiales de Laboratorio
a utilizar, el procedimiento a seguir, los principales resultados a obtener, una pequea
lista de preguntas contenidas en un cuestionario que se complementar sus
conocimientos y por ltimo la bibliografa recomendada donde se apoyar cada
prctica.
Los experimentos descritos son de fcil ejecucin y permiten al estudiante desarrollar
su capacidad y criterio cientfico. Los temas de laboratorio se han diseado teniendo
en consideracin la accesibilidad de material e instrumentos con que cuenta la
universidad.
La presente Gua orienta el procedimiento de las prcticas que complementa el
aprendizaje de la Bioqumica bsica en relacin del desarrollo terico del curso.
Los autores agradecen anticipadamente la(s) crtica(s) o sugerencias que puedan tener
los lectores que sirvan para mejorar el presente trabajo.
Titulo de la prctica.
Breve marco terico.
Objetivo general.
Reacciones qumicas que ocurren.
Diagrama de flujo del procedimiento.
Tabla de datos, resultados y observaciones.
Clculos.
Grficas, (si la prctica lo requiere)
Anlisis de resultados y de grficas.
Aplicaciones en la profesin.
Conclusiones.
Recomendaciones (posibles errores ocurridos).
Bibliografa.
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
En el laboratorio existe una serie de normas de bioseguridad las cuales pueden evitar
o disminuir los riesgos de accidentes debido a la mala manipulacin o desconocimiento
de lo que se realiza.
NORMAS PERSONALES
Cada grupo de prcticas se responsabilizar del orden de su zona de trabajo y del
material que utilizara.
SMBOLOS DE RIESGO
Para manejar con seguridad las sustancias qumicas se han ideado diversos cdigos
dependiendo de la casa fabricante, pero en general los sistemas clasifican las
sustancias en las siguientes categoras:
Sustancias explosivas
Peligro. Este smbolo sealiza sustancias que pueden explotar bajo determinadas
condiciones. Ejemplo: dicromato de amonio.
Precaucin. Evitar choques, percusin, friccin, formacin de chispas y contacto con
el calor.
Sustancias txicas
Peligro: Tras una inhalacin, ingestin o absorcin a travs de la piel pueden
presentarse, en general, trastornos orgnicos de carcter grave o incluso la muerte.
Ejemplo: trixido de arsnico, cloruro de mercurio (II). Precaucin: Evitar cualquier
contacto con el cuerpo y en caso de malestar acudir inmediatamente al mdico.
Sustancias nocivas
Peligro: La incorporacin de estas sustancias por el organismo produce efectos nocivos
de poca trascendencia. Ejemplo: tricloroetileno. Precaucin: Evitar el contacto con el
cuerpo humano as como la inhalacin de vapores. En caso de malestar acudir al
mdico.
Sustancias corrosivas
Peligro: Por contacto con estas sustancias se destruye el tejido vivo y tambin otros
materiales. Ejemplo: bromo, cido sulfrico. Precaucin. No inhalar los vapores y
evitar el contacto con la piel, los ojos y la ropa.
Sustancias irritantes
Peligro: Este smbolo destaca en aquellas sustancias que pueden producir accin
irritante sobre la piel, los ojos y sobre los rganos respiratorios. Ejemplo: amonaco,
cloruro de bencilo. Precaucin. No inhalar los vapores y evitar el contacto con la piel y
los ojos.
PRCTICA N 01
MATERIAL DE LABORATORIO, INSTRUMENTOS. USO CORRECTO Y MANIPULACIN
PREPARACIN DE SOLUCIONES.
1.1
MARCO TERICO
Los Laboratorios son unidades de trabajo acadmico adscritos a los Departamentos de
la Escuela cuya finalidad esencial es asegurar a los docentes-investigadores y a los
alumnos de sta las condiciones para el cumplimiento de actividades de investigacin
y de prcticas asociadas a las asignaturas del Plan de Estudios vigente que as lo
exigen. Para el desarrollo de las prcticas y las actividades del laboratorio se
requieren diversos materiales, equipos e instrumentos, entre los principales tenemos:
Materiales de Vidrio: Los materiales en los que se combinan las sustancias estn
fabricados con vidrio ptico, vidrio de Jena o vidrio duro. stos, debido a su
composicin, son muy resistentes a la accin de los reactivos qumicos y/o los
cambios bruscos de temperatura. Algunos nombres comerciales de estos tipos de
vidrio son el Pyrex y el Kimax. Algunos ejemplos de estos materiales son: Tubo de
ensayo; Vaso de precipitados; Matraz Erlenmeyer; Matraz Base plana; Matraz de
destilacin; Balones, etc. Los materiales de vidrio que no se utilizan para calentar
sustancias estn elaborados con otros tipos de vidrio.
Materiales para medir volmenes: Los materiales para medir volmenes son de
vidrio o de plstico transparente y estn graduados. Algunos de estos materiales son:
Probeta; Pipeta; Bureta; Matraz aforado.
Materiales de soporte y sujecin: En cuanto a los materiales de soporte y sujecin,
con excepcin de la gradilla, que puede ser de madera o de plstico, son de metal.
Algunos de los materiales que pertenecen a esta clasificacin son: Soporte universal
con anillo de fierro, pinzas para bureta y tela de alambre con asbesto; Gradilla para
tubos de ensayo; tringulo de porcelana; Pinzas para tubo de ensayo; Pinzas para
crisol; Pinzas de 2 o 3 dedos con nuez.
Otros materiales del Laboratorio son: Mechero de alcohol, Embudo, luna de reloj;
Cpsula de porcelana, Mortero con piln, Cuba hidroneumtica, Cucharilla de
combustin, Agitador de vidrio, Frascos goteros, Esptula Tapones, Escobillones.
Instrumentos para medir: Los principales instrumentos para medir son: Balanza de
dos platillos y marco de pesas, Regla de 1m, Vernier Balanza triple brazo,
Dinammetro, Termmetro.
Otros instrumentos y aparatos que usamos son: Lupa Lentes; Pinzas; Microscopio;
Agitador; Aguja Para Diseccin; La bagueta; Balanza elctrica; Balanza analtica;
Pipetas automticas; Bistur.
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Preparacin de Soluciones.
Las soluciones, son mezclas homogneas de sustancias en iguales o distintos estados
de agregacin. La concentracin de una solucin constituye una de sus principales
caractersticas.
Bastantes propiedades de las soluciones dependen exclusivamente de la
concentracin. Su estudio resulta de inters tanto para la fsica como para la
qumica. Algunos ejemplos de soluciones son: agua salada, Hidrxido de sodio y
bicromato de potasio. Todas las propiedades de las soluciones: color, sabor, densidad,
punto de fusin y ebullicin dependen de las cantidades que pongamos de los
diferentes solutos. La sustancia presente en mayor cantidad suele recibir el nombre
de solvente, y a la de menor cantidad se le llama soluto y es la sustancia disuelta. El
soluto puede ser un gas, un lquido o un slido, y el solvente puede ser tambin un
gas, un lquido o un slido. El agua con gas es un ejemplo de un gas (dixido de
carbono) disuelto en un lquido (agua). Las mezclas de gases, son soluciones. Las
soluciones verdaderas se diferencian de las soluciones coloidales y de las
suspensiones en que las partculas del soluto son de tamao molecular, y se
encuentran dispersas entre las molculas del solvente.
Algunos metales son solubles en otros cuando estn en el estado lquido y solidifican
manteniendo la mezcla de tomos. Si en esa mezcla los dos metales se pueden
solidificar, entonces sern una solucin slida.
Propiedades fsicas de las soluciones: Cuando se aade un soluto a un solvente, se
alteran algunas propiedades fsicas del solvente. Al aumentar la cantidad del soluto,
sube el punto de ebullicin y desciende el punto de solidificacin. As, para evitar la
congelacin del agua utilizada en la refrigeracin de los motores de los automviles,
se le aade un anticongelante (soluto). Pero cuando se aade un soluto se rebaja la
presin de vapor del solvente. Otra propiedad destacable de una solucin es su
capacidad para ejercer una presin osmtica. Si separamos dos soluciones de
concentraciones diferentes por una membrana semipermeable (una membrana que
permite el paso de las molculas del solvente, pero impide el paso de las del soluto),
las molculas del solvente pasarn de la solucin menos concentrada a la solucin de
mayor concentracin, haciendo a esta ltima ms diluida. Estas son algunas de las
caractersticas de las soluciones:
-
Las partculas de soluto tienen menor tamao que en las otras clases de mezclas.
Presentan una sola fase, es decir, son homogneas.
Si se dejan en reposo durante un tiempo, las fases no se separan ni se observa
sedimentacin, es decir las partculas no se depositan en el fondo del recipiente.
Son totalmente transparentes, es decir, permiten el paso de la luz.
Sus componentes o fases no pueden separarse por filtracin.
Concentracin de una solucin: La concentracin de una solucin lo da el nmero de
molculas que tenga el soluto de una sustancia y el nmero de molculas que tiene el
resto de la sustancia. Existen distintas formas de decir la concentracin de una
solucin, pero las dos ms utilizadas son: gramos por litro (g/l) y molaridad (M). Los
gramos por litro indican la masa de soluto, expresada en gramos, contenida en un
determinado volumen de disolucin, expresado en litros. As, una solucin de cloruro
de sodio con una concentracin de 40 g/l contiene 40 g de cloruro de sodio en un litro
de solucin. La molaridad se define como la cantidad de sustancia de soluto,
expresada en moles, contenida en un cierto volumen de solucin, expresado en litros,
es decir: M = n/V. El nmero de moles de soluto equivale al cociente entre la masa de
soluto y la masa de un mol (masa molar) de soluto.
Soluciones acuosas: El agua es la biomolcula ms abundante del ser humano,
constituye un 65-70 % del peso total del cuerpo. Esta proporcin debe mantenerse
muy prxima a estos valores para mantener la homestasis hdrica, por lo contrario el
organismo se ve frente a situaciones patolgicas debidas a la deshidratacin o la
retencin de lquidos. La importancia del estudio de la biomolcula agua radica en el
hecho de que la totalidad de las reacciones bioqumicas se realizan en el seno del
agua, todos los nutrientes se transportan en el seno del agua.
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2. Porcentaje en volumen (% V)
%V=
M = n/v
n: es el nmero de moles y
V: es el volumen de la solucin en litros.
Donde:
N = N Eq / v
N Eq: es el nmero de equivalentes.
V: es el volumen de la solucin en litros.
El nmero equivalente de un compuesto queda expresado por:
Donde:
N Eq = W/P-Eq
W: es el peso de la sustancia y
P-Eq: es el peso equivalente.
El peso equivalente de un compuesto queda expresado por:
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P-Eq = PM/EO
Donde: PM: es el peso molecular del compuesto correspondiente a la Sustancia
EO: es el estado de oxidacin o valencia.
1.2
COMPETENCIAS
- Conceptuales: Al finalizar la practica el alumno reconoce los Materiales e
instrumentos ms usados en el Laboratorio de Bioqumica y explica las
caractersticas de las soluciones
- Procedimentales: Describe y manipula los principales materiales e instrumentos del
Laboratorio de Bioqumica. Resuelve problemas y Prepara Soluciones de uso mas
frecuente en el Laboratorio Clnico.
- Actitudinales: Participa del cuidado del material, demuestra capacidad analtica,
diligencia y orden; coopera con el grupo respetando las reglas acordadas, brinda
ayuda oportuna a sus compaeros
1.3
MATERIALES Y EQUIPOS
Beaker 100ml.
Bureta 25ml.
Matraz Erlenmeyer 250ml.
Fiola 100ml.
Pipeta serolgica 10ml.
Pipeta serolgica 2ml.
Pera de decantacin
Piceta 500ml.
Esptula de metal
Gradilla de metal 15 x 160
Probeta 100ml.
Micropipeta (100 - 1000)
Micropipeta (10 - 100)
Pinza para bureta (de plstico)
Espectrofotmetro
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Bao mara
Balanza analtica
Potencimetro porttil (Hanna)
Gradillas de metal
Tubos de ensayo 13x100
Agar fosfato dipotasico
Agar fostato monopotasico
Glucosa anhidra
Sodio acetato anhidrido
Sodio hidroxido (lentejas)
Sodio tiosulfato pentahidratado
Amarillo de alizarina
Safranina
Azul de metileno
1.4 PROCEDIMIENTO
a) Reconocer los diferentes instrumentos.
b) Describir las partes de cada uno de ellos.
c) Realizar la manipulacin de uso y transporte.
d) Experiencia I.
1) Pesar 5, 15 y 30 g de glucosa
2) Disolver en beakers por separado los 5,15 y 30 g del soluto con 50 mL de agua
destilada, obteniendo las soluciones A, B y C respectivamente.
3) Agregar 1gota de Amarillo de Alizarina al tubo A, 1 gota de Safranina al B y 1 gota de
Azul de Metileno al tubo C
4) Encuentre los volmenes de cada una midiendo en una probeta.
5) Encuentre en cada caso la concentracin de las soluciones en P/P, P/V, V/V.
e) Experiencia II.
1. Coloque en un tubo de ensayo 4 mL de la solucin A.
2. Agrega inclinando el tubo y muy lentamente por las paredes, 1 mL de la solucin C
3. Observe y explique.
f)
Experiencia III: prepara un Buffer fosfato 0,5 molar pH: 7,5, volumen: 500 mL
1. A una fiola de 500 mL agregarle 200 mL de agua desionizada, luego agregarle 11,5 g
de fosfato dicido de potasio y homogenizar. Luego agregar 28.85g de fosfato
monocido dipotsico, disolver y completar con agua desionizada hasta el aforo
(500mL). Verificar el pH con el potencimetro.
2. Agregue hidrxido de sodio 1N 1mL y luego compruebe con el potencimetro si el pH
ha cambiado. Agregue acido clorhdrico 1N 2 mL y luego compruebe con el
potencimetro si el pH a variado.
3. Explique.
1.2.5
RESULTADOS
-
El alumno presenta los esquemas sealando las diferentes partes de los equipos e
instrumentos ms usados en el laboratorio de bioqumica.
1.2.6 CUESTIONARIO
a) Cmo debe ser lavado el material de uso constante en el Laboratorio de Bioqumica?
b) Qu sustancias son corrosivas para los equipos e instrumentos?
c) Cul es la composicin qumica del material de vidrio utilizado en el laboratorio?
d) Qu cuidado especial se debe tener con el material de vidrio nuevo, antes de usarlo por
primera vez?
e) Cual ser la densidad, concentracin en P/P, P/V y mol/L de una mezcla de:
F-CV3-3B-2
f)
g) Describir los mltiplos y submltiplos utilizados con las principales medidas del SI
h) Qu diferencia hay entre volumen y capacidad y cules son sus unidades?
i)
1.7
FUENTES DE INFORMACIN
-
Baynes ,John W, Dominiczack ,Marek H. Bioqumica mdica. 3a. ed. Barcelona: Elseiver
Mosby; 2011
Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires:
Mdica Panamericana; 2006.
Villavicencio Nuez, M. Bioqumica. 2a. ed. Lima: CONCYTEC; 2010.
Voet, D, Voet, J. Bioqumica. 1a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 1992.
http://www.quimicaweb.net/ciencia/paginas/laboratorio/material.html
http://laboratoriopasteur.mex.tl/20239_equipo-y-material-de-laboratorio.html
http://biblioteca.duoc.cl/bdigital/Documentos_Digitales/600/610/39593.pdf
http://www.amschool.edu.sv/paes/science/concentracion.htm
http://quimicamedusac.files.wordpress.com/2013/05/semana-09-2012-clase.pdf
http://www.sc.ehu.es/sbweb/fisica/unidades/unidadMedida.htm
PRCTICA N 02.
ESPECTROFOTOMETRA: FACTOR Y CURVA DE CALIBRACIN
2.1 MARCO TERICO.
El anlisis colorimtrico contempla al conjunto de mtodos de anlisis cuantitativo
que se fundamenta en la medicin de la intensidad de la luz transmitida a travs de una
solucin coloreada, ya sea que se trate de sustancias naturalmente coloreadas o que se han
hecho de tal calidad mediante reacciones qumicas adecuadas.
Casi todas las sustancias en
solucin tienen la capacidad de absorber en forma selectiva determinadas radiaciones
luminosas unas ms que otras, dejndolas pasar. La longitud de onda en la que las molculas de
dicha sustancias absorben con mayor intensidad la luz, se denomina longitud de mxima
absorcin o lambda mximo. Si consideramos que cada molcula absorbe una determinada
cantidad de luz, la intensidad de la luz transmitida por una solucin disminuir en relacin con el
aumento del nmero de molculas que se interpongan entre la fuente luminosa y el observador.
Este nmero vara de acuerdo a la concentracin del soluto y al espesor del recipiente que
contiene la solucin, estos factores estn considerados en la LEY DE LAMBERT Y BEER, que rige los
principios de la colorimetra.
LEY DE LAMBERT: Expresa la proporcionalidad que existe entre la absorbancia de una
solucin coloreada y la distancia que recorre el haz de luz monocromtica en ella (sin variacin de
la concentracin).
LEY DE BEER: Expresa la proporcionalidad que existe entre la absorbancia de una
solucin coloreada y la concentracin de sta en un haz de luz monocromtica (sin variacin de la
longitud que recorre el haz)
A = l. c. e
E:
A:
l:
c:
e:
es la extincin.
es absorbancia.
es la longitud que atraviesa el haz de luz.
es la concentracin de la solucin coloreada.
es el coeficiente de extincin molar.
A es absorbancia.
Io es la luz incidente.
I1 es la luz transmitida.
CURVA DE CALIBRACION
El mtodo consiste en emplear soluciones de concentraciones conocidas y crecientes
denominadas estndares o patrones a las cuales se les determinar su absorbancia ya sea en un
fotocolormetro o en un espectrofotmetro y pueden ser expresadas en absorbancia.; en
cualquier caso los resultados se grafican en un sistema de coordenadas donde en el eje "X" se
grfica la concentraciones y en el "Y" la absorbancia. Los puntos resultantes en el sistema
empleado se traza una recta de tal manera que pase por el origen y que una en la medida posible
a todos los punto o a la mayora de estos.
La lnea obtenida constituye la curva de calibracin; tambin se le denomina curva
estndar. Por ejemplo:
Supongamos los estndares de 1, 2, 4, 6 y 8 g/dL y sus absorbancias son 40, 81, 161, 238
y 323 respectivamente; con estos puntos podemos construir la grfica. Posteriormente leemos la
muestra de concentracin desconocida y la lectura la llevamos al eje Y de la grfica, extrapolamos
y ubicamos el punto de corte con la lnea luego se ubica el punto de la recta que corresponde al
componente del eje X y esta ser la concentracin de la muestra analizada.
FACTOR DE CALIBRACION (Fc)
El factor de calibracin es un trmino que relaciona la concentracin de una sustancia
con su absorbancia. Tiene la caracterstica de ser un nmero constante o muy aproximado entre s,
a lo largo de la curva de calibracin y se cumple slo en la zona lineal de la misma.
Matemticamente el factor de calibracin es la inversa de la pendiente de la recta generada en la
curva de calibracin. El factor de calibracin es la relacin entre la concentracin del estndar (St)
y la absorbancia del mismo:
Fc[ ] = [St ]/ DOSt
Si hay ms de un estndar, entonces se obtendr un promedio de los Fc.
CASO 1: Si la muestra problema (MP) y el estndar (St) son procesados de igual manera
(diluciones, tratamientos trmicos, centrifugaciones etc.) se podr usar directamente la siguiente
formula:
[MP] = DOmp. Fc[ ]
CASO 2: Si la muestra problema ha sido diluida previamente, se determinar el
FACTOR DE DILUCIN (Fd) que matemticamente es la inversa de la dilucin, o sea 1/dil de
donde se deduce:
dil = Vol MP/Vol T
Donde:
Vol MP: es el volumen de la muestra problema tomada para hacer la dilucin.
Vol T: es el volumen total (volumen de la muestra ms el volumen del diluyente).
Para este segundo caso, para conocer la concentracin de una MP se aplicar la
siguiente frmula:
[MP] = AMP. Fc[ ]. Fd
Donde:
AMP:
Fc:
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Fd:
[MP]:
es el factor de dilucin.
concentracin de la muestra problema.
2.2 COMPETENCIAS
-
Actitudinal: Demuestra capacidad analtica, diligencia y orden; coopera con el grupo respetando las
reglas acordadas, brinda ayuda oportuna a sus compaeros.
2.3 MATERIALES Y EQUIPOS
-
Beacker 100ml.
Piceta 500ml.
Pipeta serolgica 2ml.
Pipeta serolgica 5ml.
Pipeta serolgica 10ml.
Micropipeta (100 - 1000)
Micropipeta (10 - 100)
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Esptula de metal
Espectrofotmetro
Gradillas de metal
Tubos de ensayo13x100
Cobalto (II) nitrato hexahidrato
Cobre (II) sulfato pentahidrato
Permanganato de potasio
2.4 PROCEDIMIENTO
Preparacin de las soluciones trabajo
a)
de
Nitrato de Cobalto
(II) (5mg/dL)
Agua destilada
Volumen final
Concentracin final
Sulfato
Cobre
(10mg/dL)
-
Agua destilada
Volumen final
Concentracin final
b)
Permanganato de
Potasio (1g/dL)
Agua destilada
Volumen final
Concentracin final
Efectuar las lecturas de los tubos N2 de cada reactivo y leerlo a 400, 500,
600, 700 nm, y anotar en que longitud se encuentra la mayor absorbancia, luego ajustar las
longitudes para hallar la longitud de onda de mayor absorbancia.
-
2.6 CUESTIONARIO
Transformar
DO a T%
a)
Transformar
T% a DO
0.050
0.120
0.230
0.325
0.420
0.538
0.756
0.925
1.062
1.348
1.426
1.653
15%
26%
38.5%
42.3%
30%
46%
54.5%
50%
63.2%
74.5%
87%
95.4%
b) Resolver:
-
Una muestra obtuvo una absorbancia de 0.380, si el estndar de calibracin tena una
concentracin de 50 mg/dl y obtuvo una absorbancia de 0.250, Cul ser la
concentracin de la muestra problema?
Una muestra al estar muy concentrada se diluy al quinto, luego se obtuvo como
absorbancia 0.460, el estndar de 100mg/dL obtuvo 0.300 de DO. Cul es la
concentracin de la muestra?
http://electromagnetismo2010a.wikispaces.com/file/view/ESPECTRO+ELECTROMAGNETICO.p
df/139152159/ESPECTRO+ELECTROMAGNETICO.pdf
http://www.espectrometria.com/espectro_electromagntico
http://www.espectrometria.com/espectrometra_ultravioleta-visible
http://es.wikipedia.org/wiki/Espectro_electromagn%C3%A9tico
-
PRCTICA N 03
Procedimental: Elabora una curva de Michaelis y Menten as como la curva del pH.
Baguetas
Esptula de metal
Gradillas de metal
Tubos de ensayo13x100
Cronmetros.
cido clorhdrico
Sodio hidrxido (lentejas)
Glucosa anhidra (polvo)
Reactivo Glucosa-Oxidasa
Glucosa (estndar)
Solucin de azida de sodio
3.4.
PROCEDIMIENTO
-
PREPARACION DE LA ENZIMA
Concentraciones
(mmoL/L)
TUBO
S
Soluci
n de
glucos
a (20
mmol/
L)
Agua
destila
da
Finales
3. Agregar del tubo que contiene la solucin de enzima 0,4 mL al tubo 1, mezcle y
mantenga el tubo en incubacin a 37C, despus de dos minutos agregue 0,4 mL de la
enzima al tubo dos, agite e incube.
4. Espere dos minutos, es decir, despus que hayan transcurrido 4 minutos desde la
primera vez que agreg la enzima al tubo 1, retrelo del bao Mara y adale
inmediatamente 2 gotas de Azida de sodio y mezcle por inversin, dos minutos despus de
haber retirado el tubo 1 del bao de agua, retire el tubo 2 y agregue inmediatamente 2
gotas de azida de sodio y mezcle.
6. Proceda de la misma forma que en el paso 3 y 4 con los tubos 3 y 4; de esta manera
cada uno tendr 4 minutos exactos de incubacin.
EFECTO DEL pH
glucos
a (20
mmol/
L)
-
pH Final
Hacer una segunda grfica con las dobles recprocas o grfica de Lanewaever y Burk.
Hacer una grfica tomando como velocidad de reaccin a la DO colocando los valore en el
eje Y y el pH en el eje X.
Determinar el pH ptimo.
3.6. CUESTIONARIO
a)
b)
c)
d)
-
Definir:
Sitio activo.
Co-enzima cite dos ejemplos.
Metaloenzima; cite dos ejemplos.
Activador, cite dos ejemplos.
Qu tipo de inhibicin causa la Azida de sodio en el sistema usado en la prctica?
Qu le ocurre a la enzima cuando se le someta a altas temperaturas?
Qu mecanismos de control de la actividad enzimtica se han propuesto?
Qu es Km, cul es su importancia?
-
Baynes ,John W, Dominiczack ,Marek H. Bioqumica mdica. 3a. ed. Barcelona: Elseiver
Mosby; 2011
Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires: Mdica
Panamericana; 2006.
Villavicencio Nuez, M. Bioqumica. 2a. ed. Lima: CONCYTEC; 2010.
Voet, D, Voet, J. Bioqumica. 1a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 1992.
http://www.fmv-uba.org.ar/grado/medicina/ciclo_biomedico/segundo_a%C3%B1o/
bioquimica/Seminario%206-Enzimas.pdf
http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm
http://www.uhu.es/08007/documentos%20de
%20texto/apuntes/2005/pdf/tema_08_enzimas_2.pdf
-
PRCTICA N 04
Beaker 100ml.
Beaker 250ml.
Probeta 100ml.
Pipeta serolgica 2ml.
Pipeta serolgica 5ml.
Pipeta serolgica 10ml.
Piceta 500ml.
Propipetas de jebe
Esptula de metal (pequea)
Micropipeta (100 - 1000)
Micropipeta (10 - 100)
Micropipeta (5 - 50)
Olla de cocina
Trpode de metal
-
4.4.
Espectrofotmetro
Bao mara
Balanza analtica
Baguetas
Esptula de metal
Pinza de madera
Gradillas de metal
Tubos de ensayo13x100
Cronmetros
Glucosa anhidra (polvo)
Reactivo de glucosa-oxidasa
Glucosa (estndar)
Solucin de azida de sodio
PROCEDIMIENTO
- EFECTO DEL TIEMPO
TUBOS
Solucin
de
glucosa
20
mmol/L
Agua
destilad
a
EFECTO DE LA TEMPERATURA
TUBOS
- -
Solucin
de
glucosa
20
2.
mmol/L
otra
- Agua
destilad
a
correspondientes a la solucin de enzima segn el siguiente esquema:
-
TUB
OS
3. Lleve a
por
5
siguientes temperaturas:
-
So
- -
- -
Preparar
batera de
tubos de
ensayo
pre incubacin
minutos a las
4. Luego mezcle la solucin de enzima y sustrato correspondientes de cata tubo y mantenga las
mezclas de los tubos en las mismas temperaturas en que estn por 5 minutos ms.
5. Finalmente retire del bao y agregue inmediatamente 2 gotas de azida de sodio, mezcle por
inversin y proceda a leer las absorbancia.
-
TUB
OS
Sol
Ag
2. En otro tubo colocar 5 mL de la solucin de glucosa (sustrato) y llevar los 6 tubos a preincubar
en bao Mara a 37C por 5 minutos.
3. Agregar del tubo que contiene la solucin de glucosa (sustrato) 0,8 mL al tubo 1, mezcle y
mantenga el tubo en incubacin a 37C, despus de dos minutos exactos, agregue 0,8 mL del
sustrato al tubo dos, agite e incube.
4. Espere dos minutos, es decir, despus que hayan transcurrido 4 minutos desde la primera vez
que agreg el sustrato al tubo 1, retrelo del bao Mara y adale inmediatamente 2 gotas de
Azida de sodio y mezcle y lleve a leer, dos minutos despus de haber retirado el tubo 1 del
bao de agua, retire el tubo 2 y agregue 2 gotas de azida de sodio y lleve a leer el tubo al
espectrofotmetro.
5. Proceda de la misma forma que en el paso 3 y 4 con los tubos 3, 4 y 5; de esta manera cada
uno tendr 4 minutos exactos de incubacin.
4.5. RESULTADOS
-
4.6. CUESTIONARIO
Cul es la clasificacin general de las enzimas?
Cmo se nombran y clasifican las enzimas segn su cdigo enzimtico?
4.7. FUENTES DE INFORMACIN
- Baynes ,John W, Dominiczack ,Marek H. Bioqumica mdica. 3a. ed. Barcelona: Elseiver
Mosby; 2011
- Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires: Mdica
Panamericana; 2006.
- Villavicencio Nuez, M. Bioqumica. 2a. ed. Lima: CONCYTEC; 2010.
- Voet, D, Voet, J. Bioqumica. 1a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 1992.
- http://www.fmv-uba.org.ar/grado/medicina/ciclo_biomedico/segundo_a%C3%B1o/
bioquimica/Seminario%206-Enzimas.pdf
- http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm
- http://www.uhu.es/08007/documentos%20de
%20texto/apuntes/2005/pdf/tema_08_enzimas_2.pdf
PRCTICA N 05
RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS
-
Cn(H2O)n
Beaker 100ml.
Beaker 250ml.
Pipeta serlogica 2ml.
Pipeta serlogica 5ml.
Probeta 100ml.
Micropipeta (100 - 1000)
Micropipeta (10 - 100)
Espectrofotmetro
Bao maria
Balanza analitica
Baguetas
Esptula de metal
Gradillas de metal
Tubos de ensayo13x100
Tubo de ensayo 16 x150
Pinza de madera
Olla de cocina
Trpode de metal
Solucin de glucosa 2%
Solucin de fructuosa 2%
Solucin de galactosa 2%
Solucin de ribosa 2%
Solucin de arabinosa 2%
Solucin de maltosa 2%
Solucin de sacarosa 2%
Almidn soluble 2%
Solucin de glucgeno 1%
Etanol
Lugol (solucion)
Reactivo Molish
Reactivo Benedict
Reactivo de Selliwanoff
Reactivo de Bial
Reactivo de Barfoed
cido Sulfrico qp
6.
6.1.
PROCEDIMIENTO
1. Realizar la reaccin de Molish con cada una de las muestras colocando en un tubo de ensayo
2 mL de ella con 1 mL de alcohol, agregar 3 a 4 gotas del reactivo de Molish y mezclar;
agregar en zona, por las paredes y con mucho cuidado 0,5 mL de cido sulfrico
concentrado. Observar e identificar las muestras. Separar las que sean identificadas como
no carbohidratos.
2. Con las muestras identificadas como carbohidratos realizar la reaccin de Lugol colocando
en un tubo de ensayo 2 mL de muestra y agregar II gotas de reactivo de lugol (si est muy
concentrado, diluir 1/10), mezclar y anotar los resultados.
3. Con las muestras identificadas como no polisacridos, realizar la reaccin de Bnedict,
Seliwanoff, Bial
a. Tcnica de Bnedict: Colocar en un tubo de ensayo 0,2 mL de muestra y agregar 0,5 mL
de reactivo de Bnedict, llevar por 4 min. a bao mara hirviente. Anotar los resultados.
b. Tcnica de Seliwanoff: Colocar en un tubo de ensayo 0,2 mL de muestra y agregar 0,5
mL de reactivo de Seliwanoff, llevar por 4 min a bao mara hirviente. Anotar los
resultados.
c. Tcnica de Bial: Colocar en un tubo de ensayo 0,2 mL de muestra y agregar 0,5 mL de
reactivo de Bial, llevar por 3 min a bao mara hirviente. Anotar los resultados.
d. Tcnica de Barfoed: Colocar en un tubo de ensayo 0,2 mL de muestra y agregar 1 mL de
reactivo de Bial, llevar por 5 y 7 min min a bao mara hirviente. Si no se forma el
precipitado, dejar reaccionar por 10-12 min
6.2. RESULTADOS
Verificacin de polisacridos.
Identificacin de monosacridos y disacridos
Identificacin de hexosas y pentosas
Clasificacin de azucares reductores de no reductores.
Construccin de una tabla con los resultados obtenidos.
6.3. CUESTIONARIO
-
8.
Baynes ,John W, Dominiczack ,Marek H. Bioqumica mdica. 3a. ed. Barcelona: Elseiver
Mosby; 2011
Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires:
Mdica Panamericana; 2006.
Villavicencio Nuez, M. Bioqumica. 2a. ed. Lima: CONCYTEC; 2010.
Voet, D, Voet, J. Bioqumica. 1a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 1992.
http://www.fsalazar.bizland.com/pdf/POLISACARIDOS.pdf
http://www.uniquindio.edu.co/uniquindio/ntic/trabajos/10/davidyoscar/paginas/reccarb
.htm
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/20%20REACCIONES%20COLOREADAS
%20DE%20AZ%C3%9ACARES.pdf
9.
10.
11.
12.
13.PRCTICA N 06
14.
15.DIGESTIN ENZIMTICA DEL ALMIDN
16.
6.1. MARCO TERICO
17.
Uno de los polisacridos ms comunes en la dieta del ser humano es el
almidn, el cual se encuentra en muchos alimentos de origen vegetal y en muchos productos
elaborados como pan, fideos, etc. En el organismo, las enzimas digestivas lo degradan hasta
glucosa, la cual es absorbida y utilizada por todos los tejidos o almacenada principalmente en
el hgado y msculos bajo la forma de glucgeno. El almidn estructuralmente est
constituido por la amilosa (cadena lineal) y la amilopectina (cadena ramificada). La cadena
lineal o amilosa, es la sucesin de unidades de 300 a 350 unidades glucosa unidas por enlaces
alfa 1-4. Las cadenas ramificadas de la amilopectina tienen enlaces alfa 1-4 y enlaces alfa 16, entre cada 24 a 30 molculas de glucosa. La digestin enzimtica del almidn consiste en
hidrolizar los enlaces alfa 1-4 por la enzima amilasa ya sea salival o pancretica, originando
dextrinas lmites, maltotriosa y hasta maltosa; posteriormente por accin de las enzimas
intestinales o la degradacin total llega hasta glucosa. La alfa amilasa presente en la saliva y
en la secrecin pancretica tiene un pH ptimo de 6,7 a 7,2.
6.2. COMPETENCIAS
-
Conceptuales: Define y explica los fundamentos del proceso de digestin del almidn por
la amilasa salival.
Beaker 250ml.
Beaker 100ml.
Pipeta serolgica 2ml.
Pipeta serolgica 5ml.
Pipeta serolgica 10ml.
Piceta 500ml.
Esptula de metal pequea
Propipetas de jebe
Micropipeta (100 - 1000)
Micropipeta (10 - 100)
Pinza de madera
-
Olla de cocina
Trpode de metal
Bao mara
Tubo de ensayo 13 x 100
cido Clorhdrico
Almidn soluble
Lugol
Reactivo Benedict cualitativo
Cloruro de sodio
Buffer fosfato pH 6.8
6.4. PROCEDIMIENTO.
-
cido
Clorhdrico
N
Solucin
Lugol
Buffer( Fosfato
pH 6.8/0.1M
0.5 -
cido (
Clorhdrico 0,5
N
de
--
E-
--
--
PROC
DIMIENTO
II:
Preparar
los
siguientes tubos
de digestin:
Agua destilada
Cloruro
de
Sodio 0,9 g/dL
PROCEDIMIENTO III
PROCEDIMIENTO IV.
Reactivo
Benedict
de
(
(
6.5.
RESULTADOS
Evidenciar la coloracin azulada de reaccin lugol positiva.
Observar la reaccin amarilla de reaccin de lugol negativa.
Evidenciar la coloracin de amarillo a rojo ladrillo de reaccin Benedict positiva.
Evidenciar la coloracin celeste de reaccin Benedict negativa.
-
6.6. CUESTIONARIO
-
Cules son los productos finales de la digestin del almidn por la amilasa?
Baynes ,John W, Dominiczack ,Marek H. Bioqumica mdica. 3a. ed. Barcelona: Elseiver
Mosby; 2011
Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires:
Mdica Panamericana; 2006.
Villavicencio Nuez, M. Bioqumica. 2a. ed. Lima: CONCYTEC; 2010.
Voet, D, Voet, J. Bioqumica. 1a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 1992.
http://med.javeriana.edu.co/fisiologia/autoestudio/FISIOLOGIAPANCREAS.PDF
-
PRCTICA N 07
7.1.MARCO TERICO
Los seres vivos almacenan hidratos de carbono en forma de polisacridos, que sirven
como materiales de reserva. El almidn, la inulina en los vegetales superiores y el glucgeno
en los animales. El glucgeno consta de unidades de glucosa unidas por enlaces glicosdicos
alfa (1-4) y cada 8 10 unidades de glucosa se ramifica en enlace glicosdico alfa (1-6). El
glucgeno es especialmente abundante en el hgado y en msculo. Esta prctica consiste en
el aislamiento de glucgeno heptico de rata. La Extraccin consiste en que el glucgeno
presente en una muestra de tejido heptico y posterior hidrlisis cida que despolimeriza al
glucgeno y genera una disolucin cida de glucosa (hidrolizado). En esta Prctica el
glucgeno se libera de los tejidos que lo contienen por calentamiento con una base fuerte
(KOH) hasta la destruccin total del tejido. La separacin del glucgeno del tejido se
consigue mediante la adicin de etanol (precipita polisacridos y elimina los monosacridos
solubles) y sulfato de sodio (coprecipitante). As, se produce un precipitado que contiene una
mezcla de glucgeno, protenas y cidos nucleicos, que han resistido el calentamiento
anterior. El tratamiento posterior con cido tricloroactico (TCA) hace que precipiten las
protenas y cidos nucleicos de la mezcla. El glucgeno aislado se vuelve a precipitar con
etanol, obtenindose una preparacin con un alto grado de pureza. Entre los carbohidratos,
la glucosa es el que se usa principalmente en el metabolismo energtico. Constituye el
principal componente de los productos de la digestin de almidones y otros hidratos de
carbono. Se trata de una molcula de seis carbonos, es una hexosa con que se encuentra en
sus formas aldehdica y enlica. Tiene un peso molecular de 180 y es muy higroscpica, siendo
uno de los principales componentes de la presin osmtica de la sangre. En la segunda parte
de esta practica cuantificaremos la glucosa presente en el residuo obtenido del aislamiento
del glucgeno heptico, utilizando el mtodo enzimtico en cual consiste que la glucosa por
accin de la glucosa oxidasa produce cido glucnico y peroxido de hidrgeno; este ltimo
por accin de la peroxidasa oxida a la 4-aminofenazona generando la oxazona de color
rosado, color que es proporcional a cantidad de glucosa y medible a 505 nm.
7.2. COMPETENCIAS
-
Conceptuales: Explica los mecanismos del metabolismo del glucgeno heptico y Explica
los fundamentos de la cuantificacin de la glucosa en una muestra.
Bao mara
Espectrofotmetro
Gradillas de metal
Tubo de ensayo 13 x 100
Tubo de ensayo 16 x150
Material de diseccin
Tabla de cortar
cido Tricloroacetico (TCA)
Etanol
Hidrxido de potasio
- Solucin
de
sulfato
de
(saturado)
- Reactivo de glucosa-oxidasa
- Glucosa (estandar)
-
sodio
7.4. PROCEDIMIENTO
- HOMOGENIZADO:
1. Se ponen 3 mL de la solucin de hidrxido potsico al 30% en un tubo de ensayo de vidrio de
16X150.
2. Se pesan 4 g de tejido (hgado) y se introducen en el tubo anterior.
3. Se calienta en un bao de agua hirviendo, homogenizando con cuidado para acelerar el
proceso, durante 10 minutos (o hasta su digestin). USAR PINZAS DE MADERA PARA
MANIPULAR LOS TUBOS. PRECAUCION: ALCALI HIRVIENDO!!
4. Se enfra el tubo bajo el grifo una vez acabada la digestin.
PURIFICADO:
5. Una vez enfriado el tubo de ensayo, se aaden 0.2 mL de la solucin saturada de Na 2SO4 y se
mezclan fuertemente. Reposar 5 minutos.
6. Se precipita el glucgeno que est en solucin por adicin de 7 mL de Etanol al 95%. Se
agita y deja en fro en un bao de hielo durante 5 minutos.
7. Se pasa la solucin a 2 tubos de vidrio de 13x100 y se centrifuga a 4,000 rpm durante 5
minutos. Se desecha el sobrenadante y se coloca el tubo invertido sobre papel de filtro.
8. Se aaden 3 mL de la solucin de TCA al 10% a cada tubo y se disuelve totalmente el
sedimento agitando fuertemente.
9. Se centrifuga de nuevo 5 minutos a 4,000 rpm
10. Se aade los 2 sobrenadantes obtenidos en la ltima centrifugacin a un tubo de ensayo
de 16x150, al que previamente se han aadido 10 mL de etanol al 95%, desechando el
sedimento de la centrifugacin. Se deja reposar 5 minutos para que se produzca la
precipitacin del glucgeno.
11. Se traslada la solucin 2 tubos de vidrio de 13x100 (previamente pesados), y se centrifuga
durante 5 minutos ms a 4,000 rpm. Una vez acabada la centrifugacin se descarta el
sobrenadante. El sedimento obtenido representa el glucgeno prcticamente exento de
sustancias contaminantes. Dejar secar en la estufa a 37C y volver a pesar los 2 tubos.
12. Obtener la diferencia en peso de los tubos y sumarlas (este ser el peso de glucgeno
aislado de 4 g de tejido (hgado)
13. Disolver 8 mg de glucgeno por mL de tampn fosfato 0,02 M pH 7.0 con NaCl 0,005 M
14. Diluir 1/50 del glucgeno disuelto (0.1 mL en 4.9 agua destilada)
15. Separar del producto anterior obtenido medio mililitro de muestra y trabajarlo como a
continuacin se indica.
-
F-CV3-3B-2
TUBOS
Muestra
Solucin estndar
100 mg/dL
Reactivo
enzimtico
S
T
M
P
1
0
0
1
0
Rendimiento:
|gluc| geno
x 100
|glucosa|
mg precipitado x %glucgeno
100 mg
7.5. RESULTADOS
Al finalizar cada grupo presentara los resultados obtenidos.
Indicar el rendimiento total en glucgeno y calcular el contenido en glucgeno del hgado,
expresndolo en mg de glucgeno por g de tejido fresco.
Expresar la concentracin de glucosa que se pueda encontrar en la muestra.
7.6. CUESTIONARIO
Adems de la insulina y glucagn, que otras hormas tienen ingerencia en el control de la
glucosa sangunea.
Existen plantas y/o productos naturales que regulan la glicemia, cuales son, que origen
tiene y como son administrados.
Qu otros mtodos para determinacin de glucosa existen?
Se excreta glucosa por la orina de manera normal? Por qu?
SEMANA N 08
F-CV3-3B-2
PRCTICA N 09
Conceptuales: Define e identifica los procesos de digestin de los lpidos y menciona los
fundamentos de la determinacin.
F-CV3-3B-2
Baguetas
Beaker 100ml.
Beaker 250ml.
Pipeta serolgica 5ml.
Pipeta serolgica 10ml.
Micropipeta (100 - 1000)
Propipeta de jebe
Piceta 500ml.
Buretas 25ml.
Mariposas
Soporte universal
Bao mara
9.4.
Solucin de pancreatina
PROCEDIMIENTO
-
PROCEDIMIENTO I: HIDRLISIS.
TUBOS
Aceite
Neutralizado
Sol. Buffer
Fosfato 0.1M
pH:8
Sales Biliares 1%
en Buffer
Agua destilada
Sol. Pancreatina
1% en Buffer
(m
(m
(m
(m
(m
--
--
--
--
--
--
Tapar, agitar los tubos y llevarlos al bao mara a 37C por 60 min (agitar el
tubo cada 10 minutos)
-
F-CV3-3B-2
Normalida
d del
NaOH:
Nmero de mEq
Volumen del NaOH
gastado(mL)
9.6. CUESTIONARIO
a) Qu funcin cumple las sales biliares en la presente prctica.
b) Qu es el aceite neutralizado, y por qu fue necesario usarlo de esta manera.
c) Que funcin cumple los tubos blancos B1 y B2 en la prctica.
d) Para qu es necesario agitar los tubos.
e) Expresar los miliequivalentes hallados en mEq por litro de sustrato.
f) Por qu en el tubo 1 hubo mayor gasto de NaOH.
g) Si se hubiera usado un NaOH de 0,15 mol/L, cuanto de este se hubiera gastado en la
titulacin de cada uno de los tubos de la prctica.
h) Y si el NaOH hubiera sido 0,005 N que volmenes se hubieran gastado.
9.7. FUENTES DE INFORMACIN
- Baynes ,John W, Dominiczack ,Marek H. Bioqumica mdica. 3a. ed. Barcelona: Elseiver
Mosby; 2011
- Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires:
Mdica Panamericana; 2006.
- Villavicencio Nuez, M. Bioqumica. 2a. ed. Lima: CONCYTEC; 2010.
- Voet, D, Voet, J. Bioqumica. 1a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 1992.
- http://med.javeriana.edu.co/fisiologia/autoestudio/FISIOLOGIAPANCREAS.PDF
- http://www.sefh.es/fh/83_6.pdf
- http://www.odontochile.cl/archivos/segundo/fisiologia/pancreasdigestionyabsorcion.pdf
- http://www.fodonto.uncu.edu.ar/upload/metabolismo-de-lipidos-claudio-faderodonto.pdf
-
F-CV3-3B-2
PRCTICA N 10
10.1.
MARCO TERICO
Designamos con el nombre de Lpidos a una serie de Principios Inmediatos de
naturaleza qumica heterognea, pero cuyo carcter comn es su insolubilidad en agua, y su
solubilidad en disolventes orgnicos. A los de composicin qumica ms sencilla se les
denomina lpidos simples son compuestos ternarios formados por C, O y H y resultan de la
unin de cidos grasos con alcoholes mediante un enlace tipo ster. Entre los lpidos simples
merecen destacarse los glicridos que son tristeres de cidos grasos con glicerol. Un
ejemplo son las grasas animales y los aceites vegetales.
Estos son lquidos a la temperatura de 20C debido a la presencia de cidos
grasos insaturados (oleico, linolnico, araquidnico), mientras que en las grasas animales de
reserva predominan los steres palmticos y estericos cuyo punto de fusin es superior a
50C. En general, los lpidos se acumulan a modo de gotitas en el interior de las clulas
animales y vegetales, de donde pueden ser extrados mediante los denominados disolventes
de grasa: ter, cloroformo, benceno, petrleo, sulfuro de carbn. En los animales pueden
acumularse en las clulas del cuerpo, en el hgado de muchos peces (hasta el 90% del peso
total), y en el tejido adiposo de los mamferos. En los vegetales, las grasas se acumulan en
las semillas y son utilizadas para la germinacin.
10.2. COMPETENCIAS
-
Conceptuales: Describe las propiedades de los lpidos segn los diferentes solventes
orgnicos utilizados y el concepto de saponificacin.
F-CV3-3B-2
Baguetas
Beaker 100ml.
Pipeta serolgica 5ml.
Aceite vegetal
Acetona
Cloroformo
Etanol
Hidrxido de Potasio
Sales biliares
Laurilsufato de Sodio
Tween60
10.4. PROCEDIMIENTO
10.5.
1. Saponificacin de las grasas: En un beaker de 100 mL, colocar 10 gramos de manteca de
cerdo, en otro 10 g de manteca de res y en otro 10 g de manteca de pollo, aadir 20 mL
de Hidrxido de Potasio 50%, y 20 mL de Etanol 96, calentar en Bao mara durante al
menos 30 minutos a 80C, observar.
10.6.
10.7.
10.8.
2. Ensayo de la solubilidad: tomar 4 tubos de ensayo y enumerarlos del 1 al 4, luego:
10.9.
10.10.
10.11.
10.12.
10.13.
10.14.
10.15.
10.16.
10.17.
10.18.
10.19.
10.20.
10.1.
TUBOS
10.6.
Aceite
Veget
al
10.12.
10.7.
(go
10.2.
10.3.
10.8.
4
10.4.
3
10.5.
4
10.9.
10.10.
10.11.
10.15.
10.16.
10.17.
Agua
destil
ada
10.13. 10.14.
10.18.
10.19. 10.20.
10.21.
10.22.
10.23.
10.24.
10.25. 10.26.
10.27.
10.28.
10.29.
Acetona
mL
Etanol
10.30.
Cloroform
o
mL
mL
---
-----
---
10.31. 10.32.
mL
---
10.33.
---
---
--2
10.34.
---
---
-----
10.35.
2
3. Preparar 20mL
de solucin de
Sales biliares al
1%, 20mL de
solucin
de
Laurilsulfato de
Sodio al 1% y
F-CV3-3B-2
TUBOS
10.27.
Aceite Vegetal
10.34.
Agua destilada
10.41.
1%
10.28.
(go
10.35.
mL
10.42.
mL
10.48.
1%
Sol de Laurilsulfato
10.55.
Sol Tween 60
10.62.
Jabn (obtenido de la
saponificacin)
10.69.
-
10.49.
mL
10.50. 10.51.
10.53.
10.52.
10.54.
-----4
10.56.
mL
10.63.
(go
RESULTADOS
10.70.
10.71.
-
F-CV3-3B-2
CUESTIONARIO
Realice la formula del compuesto saponificable obtenido y explique la solubilidad de los
lpidos en cada solvente.
FUENTES DE INFORMACIN
Baynes ,John W, Dominiczack ,Marek H. Bioqumica mdica. 3a. ed. Barcelona: Elseiver
Mosby; 2011
Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires:
Mdica Panamericana; 2006.
Villavicencio Nuez, M. Bioqumica. 2a. ed. Lima: CONCYTEC; 2010.
Voet, D, Voet, J. Bioqumica. 1a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 1992.
http://ucvvirtual.edu.pe/campus/HDVirtual/700426354/Teor
%C3%ADa/7000001834/TecNoAl_08.pdf
http://tuylaquimica.files.wordpress.com/2011/03/saponificacic3b3n-de-grasas-yaceites.pdf
10.72.
10.74.
PRCTICA N 11
10.73.
COLESTEROL OBTENCIN E IDENTIFICACIN
10.75.
11.1.
MARCO TERICO
10.76.
El colesterol es un lpido antiptico que se encuentra en los
tejidos y en las lipoprotenas plasmticas como colesterol libre o ster de colesterol. Es un
componente esencial de las membranas celulares. Es sintetizado en numerosos tejidos a
partir de AcetilCoA y finalmente eliminado del organismo en la bilis, ya sea como colesterol
o como sales biliares. El nivel srico de colesterol ha sido objeto de muchas investigaciones
en individuos sanos y enfermos. Su concentracin en la sangre es variable con la edad, el
tipo de dieta, el sexo y en diversas condiciones clnicas. El colesterol es uno de los factores
contribuyentes a la formacin de ateromas. Aproximadamente la mitad del colesterol que
tiene el organismo, resulta de la sntesis endgena y la otra mitad proviene de la dieta. El
tejido heptico es el principal formador de colesterol, seguido de los intestinos y la piel. Los
niveles de colesterol total en sangre varan desde 140 mg/dL en jvenes, 200 mg/dL en
adultos y adulto mayor, sin embargo existe bibliografa que indica el lmite para los adultos
mayores de 250 mg/dL. Se sabe que el riesgo de enfermedad cardiaca coronaria es tres
veces mayor en varones adultos cuando los niveles son mayores de 230 mg/dL y aumenta a 6
veces en individuos con ms de 260 mg/dL de colesterol srico; de aqu la importancia del
control de los niveles de colesterol sanguneo. En la prctica el colesterol ser extrado del
tejido cerebral de un animal (pollo) por diferencial de solubilidad y luego se determinar
empleando un mtodo enzimtico colorimtrico. Inicialmente los esteres de colesterol son
hidrolizados por la colesterol ster hidrolasa en colesterol libre y cidos grasos. El colesterol
libre es oxidado por la colesterol oxidasa generando en el medio de reaccin colest-4-en-3ona y perxido de hidrgeno; este ltimo por medio de la peroxidasa y en presencia de 4amino fenazona y fenol forma un complejo coloreado el p-benzoquinona monoimino
fenazona, que es de color rosado rojiso, directamente proporcional a la concentracin de
colesterol que se mide a una longitud onda de 520 nm.
11.2.
COMPETENCIAS
11.3.
MATERIALES Y EQUIPOS
-
F-CV3-3B-2
Baguetas
Beaker 100ml.
Pipeta serolgica 2, 5,10 mL
Micropipeta (100 - 1000)
Micropipeta (10 - 100)
Propipeta de jebe
Piceta 500ml.
Bao maria
Espectrofotmetro
Balanza analtica
Centrifuga
Material de diseccin
Tabla de cortar
Esptula de metal pequea
Placa Petri 15x100
Tubo de ensayo 13 x 100
Acetona
Eter
Etanol
Colesterol (estndar)
Reactivo de colesterol
11.4. PROCEDIMIENTO
1.
2.
3.
4.
5.
Retirar con una pipeta pasteur todo el sobrenadante en otro tubo de ensayo y rotularlo
como FRACCION I.
6.
7.
Extraer el sobrenadante con una pipeta pasteur y juntarlo con el primer sobrenadante
obtenido. Esta fraccin contiene principalmente colesterol, pero tambin tiene en menor
cantidad grasas neutras.
8.
9.
10.
Retirar con una pipeta pasteur todo el sobrenadante en otro tubo de ensayo y rotularlo
como FRACCION II.
11.
12.
Retirar con una pipeta pasteur todo el sobrenadante y juntarlo con el sobrenadante de
la FRACCION II Esta fraccin contiene fosfolipdos.
13.
14.
15.
Pesar 3 placas Petri y luego verter el contenido de las fracciones en cada una de las
placas. Luego desecar y volver a pesar las placas. La diferencia de peso corresponde al
peso del material extrado. Anotar los pesos.
16.
BL
-
F-CV3-3B-2
TUBOS
ES
M
U
E
S
T
R
A
Muestra
desecad
a
Estanda
r
(100mg
%)
uL
----
Reactiv
o para
Coleste
rol
mL
uL
----
----
1
0
0
10
11.5. RESULTADOS
-
Calcule el porcentaje de cada una de las fracciones, colocando los datos en la siguiente
tabla:
-
FRACCIO
N
COLESTER
OL
FOSFOLIPI
DOS
GLUCOLIP
IDOS
REND
IMIEN
TO
(g)
REN
DIMI
ENT
O
(%)
11.6.CUESTIONARIO
1. Durante la extraccin de los lpidos, Qu ocurri con las protenas del tejido? Explique.
2. Haga una lista de disolventes orgnicos en orden decreciente de polaridad.
3. De los siguientes lpidos: colesterol, fosfolpidos y glucolpidos Cul es la de mayor
polaridad y cual la de menor polaridad?
4. Qu otro tipo de molculas lipdicas se deben encontrar en el tejido cerebral?
5. Qu otros mtodos se conocen para aislar y purificar lpidos?
11.1. FUENTES DE INFORMACIN
Baynes ,John W, Dominiczack ,Marek H. Bioqumica mdica. 3a. ed. Barcelona: Elseiver
Mosby; 2011
Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires:
Mdica Panamericana; 2006.
Villavicencio Nuez, M. Bioqumica. 2a. ed. Lima: CONCYTEC; 2010.
Voet, D, Voet, J. Bioqumica. 1a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 1992.
-
F-CV3-3B-2
PRCTICA N 12
12.1.
MARCO TERICO.
- El Per es un pas productor de frutas, uno de los principales frutos cultivados es la naranja,
los principales mritos nutritivos de esta fruta es el elevado contenido en vitamina C, soluble
en agua, que apenas se acumula en el organismo, lo que implica que debe ser ingerida
diariamente, de modo que la Cantidad Diaria Recomendada (CDR) de vitamina C es de 60 mg.
En esta prctica se va a determinar el contenido de vitamina C de un zumo de naranja
(obtenido a partir de naranjas de la zona) mediante una valoracin (titulacin) redox
utilizando disolucin de tiosulfato de sodio como agente valorante (titulante). La vitamina C
(cido ascrbico) es oxidada por un oxidante suave como una disolucin de yodo para dar
lugar a cido deshidroascrbico segn la reaccin
F-CV3-3B-2
Como indicador para esta reaccin qumica redox, vamos a emplear una
sustancia que presenta actividad redox, la cual presenta distintos colores en su forma
oxidada y reducida, esta sustancia es el almidn.
En aquellos en que el reductor sea el yoduro de potasio y sobre l se haga
reaccionar el oxidante que se desea valorar, el yodo puesto en libertad y cuya cantidad es
equivalente a la del oxidante, se valora con una solucin titulada de tiosulfato de sodio;
esta solucin es de uso general en todos los mtodos yodomtricos en los que se pone yodo
en libertad; as pues la reaccin fundamental de estos procesos es la siguiente:
2Na2S2O3 + I2
Na2S4O6 + 2 NaI
-
12.2. COMPETENCIAS
12.3.
Baguetas
Beaker 100ml.
Beaker 250ml.
Micropipeta (10 - 100)
Micropipeta (100 - 1000)
Probeta 25ml.
Probeta 100ml.
Buretas 50ml.
Mariposas
Embudo mediano
Soporte universal
Olla de cocina
Tripode de metal
Pinza de madera
Tubo de ensayo 13 x 100
Gradillas de metal
Solucin de ioduro de potasio
Solucin de iodato de potasio
cido clorhdrico concentrado
Solucin de tiosulfato de sodio
Solucin de almidn
Reactivo Benedict cualitativo
12.4. PROCEDIMIENTO
- DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE LA VITAMINA C
1. Obtener el jugo de 1 naranja y colarlo con una gasa
2. Agregar 3mL del jugo de naranja en un Beaker de 250mL
3. Agregar 20mL de Ioduro de Potasio (KI) y 20mL de Iodato de Potasio (IO 3K) al matraz con el
jugo de naranja.
4. Agregar 3mL de HCL concentrado
5. Agregar 0.5mL de solucin de almidn (indicador).
6. En la Bureta agregar el Tiosulfato de Sodio hasta el ras que indica cero.
7. Dejar gotear el Tiosulfato de Sodio al matraz con la solucin preparada homogenizando
con una bagueta hasta que desaparezca por 10 segundos el color violceo producto de la
reaccin del almidn con el exceso del Yodo que no reaccion con la Vitamina C
F-CV3-3B-2
Baynes ,John W, Dominiczack ,Marek H. Bioqumica mdica. 3a. ed. Barcelona: Elseiver
Mosby; 2011
Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires:
Mdica Panamericana; 2006.
Villavicencio Nuez, M. Bioqumica. 2a. ed. Lima: CONCYTEC; 2010.
Voet, D, Voet, J. Bioqumica. 1a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 1992.
http://pendientedemigracion.ucm.es/info/analitic/Asociencia/Vitamina%20C.pdf
http://www.dgadp.uady.mx/salud/articulos/n18_15042010/La.Vitamina.C.como.Antioxida
nte.muchas.cosas.mas.pdf
http://bvs.sld.cu/revistas/ali/vol14_1_00/ali07100.pdf
F-CV3-3B-2
- PRCTICA N 13
13.3.
Conceptuales: Explica los efectos de los agentes fsicos qumicos sobre las protenas y
como influyen en su solubilidad.
F-CV3-3B-2
Acetato de plomo
-
13.4. PROCEDIMIENTO
-
2 mL de Albumina
Prueba
Ninhidrina
Prueba de
Biuret
2 mL de Reactivo de
Ninhidrina
Calentar en Bao mara
hirviente x 1 min
2 mL de Albumina
1 mL de Reactivo de Biuret
2 mL de Albumina
2 mL de Albumina
Prueba de
la
Coagulaci
n
4 gotas de Ac Actico
glacial 30%
1 mL NaCl saturado
Prueba de
HopkinsCole
Reaccin
Xantoprote
ica
Prueba de
Millon
Prueba de
Sakaguchi
Prueba
para
Grupos SH
4 gotas de Reactivo de
Millon
2 mL de Albumina
8 gotas de Naftol
10 gotas de Hipoclorito de
Sodio 2%
Mezclar bien
2 mL de Albumina
1 mL de NaOH 40%
1 mL de Acetato de Plomo
O
O
13.5. RESULTADOS
F-CV3-3B-2
13.6. CUESTIONARIO
Explicar el fundamento de cada prueba realizada
Cules son las aplicaciones prcticas de cada prueba?
Para la siguiente protena cuya estructura es: ALA-VAL-GLY-GLU-LYS, Qu prueba utilizara
para identificarla y por qu?
Defina usted el termino anlisis cualitativo y anlisis cuantitativo
Grafique un enlace peptdico
Baynes ,John W, Dominiczack ,Marek H. Bioqumica mdica. 3a. ed. Barcelona: Elseiver
Mosby; 2011
Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires:
Mdica Panamericana; 2006.
Villavicencio Nuez, M. Bioqumica. 2a. ed. Lima: CONCYTEC; 2010.
Voet, D, Voet, J. Bioqumica. 1a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 1992.
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201103/201103/leccin_5_pruebas_cualitativas__
y_cuantitativas_para_determinar__aminocidos___y_protenas_en_laboratorio.html
http://lab-bioquimica2011.blogspot.com/2011/09/laboratorio-3-pruebas-de-aminoacidosy.html
http://biokimik2011.blogspot.com/2011/09/objetivos-aplicar-pruebas-cualitativas.html
http://polimedia.upv.es/pub/visor/pub.swf?file=/ISANZ/P2_Aminoacidos_DVD_PAL_6000
-
F-CV3-3B-2
PRCTICA N 14
COMPETENCIAS
-
F-CV3-3B-2
14.4. PROCEDIMIENTO
-
Extraer una muestra de sangre sin anticoagulante, esperar a su coagulacin (5min aprox)
y luego centrifugar a 3500 rpm por 5 min. Separar el suero.
Precalentar el sobrenadante a 60C por 10 min y diluir la muestra 1/10 con agua
destilada.
14.5. FUNDAMENTO
El cido rico es oxidado por la enzima especfica uricasa generndose
alantona y H2O2, el cual en una reaccin mediada por la enzima POD, reacciona con el Ac.
3-5-Dicloro-2-Hidroxi-Bencensulfnico y 4-AAP (4-aminoantipirina) producindose un
compuesto coloreado con un mximo de absorcin a 520 nm., en cantidad proporcional a la
cantidad de cido rico presente en la muestra.
-
UOD:Enzima Uricasa
14.6 PROCEDIMIENTO
Preparar lo siguiente batera de tubos, realizando blanco, estndar, y la
muestra de orina o suero por duplicado.
-
F-CV3-3B-2
14.7. RESULTADOS
Encuentre la dilucin de la muestra en el procedimiento
Determinar el factor de calibracin
Obtencin de la concentracin de la muestra urinaria.
Clculo de la excrecin de urea en 24 horas. (mg/24h)
14.8.
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
PRCTICA N 15
F-CV3-3B-2
EXTRACCIN DE ADN.
15.1.
MARCO TERICO.
El cido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado ADN (y tambin
DNA, del ingls DeoxyriboNucleic Acid), es un cido nucleico que contiene las instrucciones
genticas usadas en el desarrollo y el funcionamiento de todos los organismos vivos
conocidos y algunos virus. El papel principal de las molculas de ADN es el de ser portador y
transmisor entre generaciones de informacin gentica. El ADN a menudo es comparado a un
manual de instrucciones, ya que este contiene las instrucciones para construir otros
componentes de las clulas, como molculas de ARN y protena. Los segmentos de ADN que
llevan esta informacin gentica se llaman genes, pero otras secuencias de ADN tienen
funciones estructurales, o estn implicadas en la regulacin del empleo de esta informacin
gentica. Qumicamente, el ADN es un largo polmero de unidades simples llamadas
nucletidos, con un armazn hecho de azcares y grupos de fosfato unidos alternativamente
entre s mediante enlaces de tipo ster. Conectado a cada azcar est cada uno de los
cuatro tipos de molculas llamadas bases nitrogenadas. La disposicin secuencial de estas
cuatro bases a lo largo de la cadena es la que codifica la informacin. Esta informacin es
leda usando el cdigo gentico, que especifica la secuencia de los aminocidos de las
protenas. El cdigo es interpretado copiando los tramos de ADN en un cido nucleico
relacionado, el cido ribonucleico (ARN), en un proceso llamado transcripcin. Dentro de las
clulas, el ADN est organizado en estructuras llamadas cromosomas. Estos cromosomas se
duplican antes de que las clulas se dividan, en un proceso llamado replicacin de ADN. Los
organismos Eukaryota (animales, plantas, y hongos) almacenan la inmensa mayora de su
ADN dentro del ncleo celular y una mnima parte en los orgnulos celulares mitocondrias, y
en los cloroplastos en caso de tenerlos; mientras que en procariticas (las bacterias y
archaeas) se encuentra en el citoplasma de la clula. Las protenas cromticas como las
histonas comprimen y organizan el ADN dentro de los cromosomas. Estas estructuras
compactas dirigen las interacciones entre el ADN y otras protenas, ayudando al control de
las partes del ADN que son transcritas.
15.2.
15.3.
COMPETENCIAS
-
-Baguetas
-Beacker 250ml.
-Pipeta serolgica 5ml.
-Pipeta serolgica 10ml.
-Probeta 100 ml
-Gradilla de metal 15 x 160
-Propipeta de jebe
-Tubo de ensayo 16x150
-Bao mara memmert
- Vaso de licuadora
-Motor de licuadora
F-CV3-3B-2
-Tabla de picar
-Cuchillo
-Esptula de metal
-Balanza digital
-Embudo de vidrio
-Cloruro de sodio en polvo
-Bicarbonato de sodio
-Solucin de laurilsulfato de sodio
-Alcohol etlico fro
-
15.4.
PROCEDIMIENTO
1
En primer lugar cortamos la cebolla en trozos pequeos para poder triturarla con
facilidad en la licuadora.
Agregamos por las paredes (en zona) 3 mL de Alcohol Etlico fro a cada tubo y dejamos
reposar 5 min a temperatura ambiente.
Luego verificamos la aparicin del ADN en la interfase y lo extraemos con una bagueta y
observamos.
15.5.
RESULTADOS
Romper la membrana plasmtica de la clula eucariota para poder acceder al ncleo de
la clula
Liberar al ADN
Extraer el ADN de la cebolla
15.6.
CUESTIONARIO
Qu sucede en cada paso de la extraccin de ADN?
Qu utilidad tiene el Laurilsulfato?
Cul es la finalidad de utilizar el jugo de la pia?
Por qu se utiliza alcohol etlico fro?
Baynes ,John W, Dominiczack ,Marek H. Bioqumica mdica. 3a. ed. Barcelona: Elseiver
Mosby; 2011
Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires:
Mdica Panamericana; 2006.
Villavicencio Nuez, M. Bioqumica. 2a. ed. Lima: CONCYTEC; 2010.
Voet, D, Voet, J. Bioqumica. 1a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 1992.
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/39%20AISLAMIENTO%20Y
%20PURIFICACI%C3%93N%20DEL%20DNA%20DE%20UN%20PL%C3%81SMIDO
%20RECOMBINANTE.pdf
http://ibcmunq.files.wordpress.com/2010/03/tp4.pdf
http://www.mdp.edu.ar/agrarias/grado/741_Intr_Biotecnologia/archivos/4_TPN1_Extra
ccion_ADN_Vegetal.pdf
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/42%20AISLAMIENTO%20VISUALIZACI
%C3%93N%20ACIDOS%20NUCLEICOS.pdf