Toma y Envío de Muestras Al Laboratorio
Toma y Envío de Muestras Al Laboratorio
Toma y Envío de Muestras Al Laboratorio
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
SALUD ANIMAL
Presentacin
Normas Generales
Identificacin de Muestras
Tcnicas de Recoleccin
Empaque y Sistemas de Envo
Anexo 1 Cuadro de puncin y calibre de aguja
Anexo 2 Puntos de LIFEX para recepcin de muestras en el Ecuador
Volver a la pgina de LIFEX
Presentacin
En nuestro medio, el diagnstico de las causas de enfermedad o muerte que afectan a las
diferentes especies animales es de fundamental importancia para la aplicacin rpida de
medidas teraputicas y de control.
Laboratorios LIFE en su afn de enfrentar esta necesidad, contribuye con la medicina
veterinaria, creando el Laboratorio de Diagnstico de Salud Animal LIFEX, dotado con
la infraestructura tcnica y humana para responder a estos requerimientos.
La capacidad de un laboratorio para confirmar la sospecha de una enfermedad est
directamente relacionada con la calidad de las muestras remitidas para el diagnstico. El
profesional de campo tiene la responsabilidad de seleccionar, recolectar, preservar y
enviar adecuadamente las muestras convenientes para el diagnstico.
El presente manual tiene por objeto, indicar de manera clara y precisa las tcnicas
apropiadas del manejo de muestras para su recepcin en el laboratorio.
Normas Generales
Para la adecuada recoleccin, conservacin y envo de las muestras, es indispensable
tener presentes las siguientes normas:
1. Toda muestra debe ser remitida con su historia clnica completa y perfectamente
identificada. LIFEX no procesar muestras que no cumplan con esta condicin.
2. Las muestras ideales se obtienen de animales vivos en distintos estadios de la
enfermedad. Si es necesaria la necropsia, sta debe guardar un orden y metodologa
adecuadas; adems, debe realizarse al menor tiempo posible despus de la muerte del
animal (1 hora).
3. Las muestras para estudios bacteriolgicos deben tomarse antes de la administracin
de medicamentos y empleando siempre material estril. Para evitar que la muestra se
seque y lograr una adecuada conservacin, en algunos casos es necesario utilizar medios
de transporte.
4. Para la recoleccin de cualquier otro tipo de muestra, utilizar material limpio y seco.
5. Los envases utilizados para el envo de muestras deben ser en lo posible irrompibles,
hermticos y de dimensiones adecuadas. Las Precauciones a considerar varan con la
clase de muestra, temperatura ambiente, transporte y duracin del viaje; en lneas
generales, el tiempo entre la obtencin de la muestra y su llegada al laboratorio no debe
extenderse ms de 24 horas.
Identificacin de las muestras
La identificacin de las muestras es de primordial importancia para el laboratorio y debe
estar acompaada de la siguiente informacin:
Nombre, direccin, E-mail, telfono y fax del mdico veterinario.
Nombre,
direccin,
E-mail,
telfono
y
fax
del
propietario.
Nombre
de
la
explotacin
pecuaria.
Ubicacin:
provincia,
cantn
y
parroquia.
Especie, raza, sexo, edad e identificacin o nombre del animal o animales.
Nmero
de
animales
de
la
explotacin
Porcentaje
de
morbilidad
(enfermos)
y
mortalidad
(muertos).
Sintomatologa
Tiempo
de
evolucin
de
la
enfermedad.
Tratamiento
efectuado.
Vacunas
aplicadas
(tipo
y
fechas).
En caso de necropsia, descripcin de hallazgos o lesiones macro.
Tipo
de
muestra,
fecha
y
hora
de
la
toma.
Sistema
de
conservacin
utilizado.
Diagnstico
presuntivo.
Observaciones
Nota: Para garantizar el flujo adecuado de la informacin, solicite los formularios de
pedido de exmenes de nuestro laboratorio.
Tcnicas para recoleccin de las muestras
Leche
Para estudios bacteriolgicos
1.
Lavar,
enjuagar
y
secar
la
ubre.
2. Con una solucin de alcohol al 70% desinfectarse las manos.
3. Con la misma solucin y utilizando algodn desinfectar los pezones. Dejar secar (2
minutos). Eliminar los dos primeros chorros de leche antes de tomar la muestra.
4. Ordear recogiendo en un recipiente estril sin topar sus bordes 3 ml
aproximadamente, tomando proporcionalmente de los cuartos afectados,
preferiblemente
en
recipientes
de
vidrio
estriles.
5. En caso de que la infeccin est plenamente localizada en uno de los cuartos o se
1 ml
201 - 500
2 ml
501 - 900
3 ml
Trazas
++
+++
Interpretacin:
En los primeros chorros de leche procedentes de una sola vaca, una reaccin (+) se
debe clasificar como sospechosa, mientras que (++) o ms indican mastitis subclnica.
Se recomienda tomar muestras de leche del cuarto o cuartos afectados, y enviar al
laboratorio para que se les realice cultivo bacteriolgico y antibiograma.
Una reaccin (+) con leche a granel procedente de un rebao, sugiere que por lo
menos el 20% de las vacas lactantes tiene mastitis subclnica, o que un gran porcentaje
de ellas est cerca del final de su lactancia.
Observaciones recientes sugieren que los resultados ms seguros se obtienen cuando la
prueba se lleva a cabo con leche extrada 3-5 horas despus del ordeo normal.
Las reacciones que se observan con el CMT LIFEX en relacin al nmero de clulas
somticas son como sigue:
+
++
+++
Heridas
abiertas
y
exudados
En heridas abiertas, lo mismo que en exudados y raspados de garganta, los hisopos de
algodn previamente esterilizados, son los que ofrecen las mayores ventajas:
1. En casos de heridas y exudados en contacto con las partes muy sucias del animal, se
debe previamente lavar y secar la zona.
2. Con un hisopo estril, raspar la zona afectada evitando el contacto con cualquier otra
parte, introducir dentro de un tubo estril con 3 ml de medio de transporte, o a su vez
utilizar culturetes para transporte.
3. Mezclar adecuadamente la muestra con el medio de transporte y romper el mango del
hisopo para eliminar la parte que ha estado en contacto con las manos
4. Tapar el tubo evitando contaminar su interior. Identificarlo y enviarlo al laboratorio
en refrigeracin.
Nota: Los culturetes pueden ser suministrados en LIFEX.
Abscesos, edemas y lquido articular
Para obtener ste tipo de muestras, est indicada la puncin con aguja fina.
1.
Depilar,
lavar
y
desinfectar
el
sitio
de
la
puncin.
2. Introducir la aguja en forma perpendicular a la zona de puncin y a la profundidad
necesaria de acuerdo al
caso. Recuerde utilizar material estril.
3. Aspirar la muestra hasta obtener una cantidad suficiente (1-2 ml)*
4. Pasar la muestra a un tubo estril o bien sellar la punta de la aguja de la jeringuilla
con
su
tapa.
5. Identificar y enviar al laboratorio en refrigeracin.
* Cuando la muestra no puede ser aspirada por lo denso del material, se puede inyectar
en el sitio solucin salina estril.
Organos
y
tejidos
La recoleccin se realiza con asepsia y mximo una hora despus de la muerte del
animal.
1. Evitando topar el lugar de la lesin a muestrear, cortar trozos de tejido u rgano
afectado
de
un
grosor
no
menor
de
3x3
cm.
2. Para evitar contaminacin y sangrado, sin topar el sitio de la lesin, sellar la muestra
flamendola directamente o utilizando una esptula previamente flameada.
3. Depositar la muestra en un frasco estril individual de boca ancha.
4. Para anlisis histopatolgico las muestras deben colocarse con formol al 10% y
enviarse
al
laboratorio
en
envases
bien
sellados
e
identificados.
5. En caso de anlisis bacteriolgico las muestras deben enviarse refrigeradas al
laboratorio. No utilizar formol.
Exudado
prepucial
La obtencin de ste tipo de muestra es importante para el diagnstico de las
enfermedades infecciosas que afectan el sistema reproductor del macho.
1. Depilar, lavar con agua y jabn toda el rea externa, verificando que el orificio
externo
del
prepucio
se
mantenga
seco.
2. Introducir una pipeta de plstico conectada a una jeringa (todo ste material estril),
en la parte ms profunda de la cavidad. Se recomienda realizar un lavado de la cavidad
prepucial, introduciendo aproximadamente 30 ml de solucin salina estril, con masajes
de
abajo
hacia
arriba
por
espacio
de
5
a
20
minutos.
3. Atar el orificio externo del prepucio con una liga de caucho y aspirar el lavado al
interior
de
la
jeringa.
4. Pasar la muestra a un tubo estril o bien sellar la jeringa con un corcho o tapn de
caucho.
5. Identificar la muestra y transportar en refrigeracin al laboratorio.
Semen
Cuando se sospecha de problemas de infertilidad en el macho es importante realizar un
anlisis de semen.
Existen tres procedimientos para la obtencin de semen: el uso de electroeyaculador, la
estimulacin de rganos sexuales y la vagina artificial.
Secrecin
vaginal
Las infecciones uterinas (piometra, endometritis), as como las infecciones localizadas,
se manifiestan con la presencia de secrecin.
1.
Introducir
en
el
canal
vaginal
un
espculo
estril.
2. Con un hisopo estril, realizar barrido del contenido o secrecin vaginal.
3. Mezclar la muestra con el medio de transporte adecuado y romper el mango del
hisopo para eliminar la parte que ha estado en contacto con la mano.
4. Identificar y enviar la muestra al laboratorio.
Generalidades sobre el manejo de muestras para microbiologa
Seleccin
y
recoleccin
de
muestras
El xito y valor final de analizar una muestra clnica en el laboratorio de bacteriologa,
depende inicialmente del cuidado ejercido en la seleccin, recoleccin y envo de la
muestra. La muestra seleccionada debe ser aquella que es ms probable que contenga el
agente causal y se debe hacer un esfuerzo para evitar su contaminacin con organismos
del medio ambiente.
Cultivos
bacteriolgicos
Tejidos y rganos: En lo posible, el tamao de las muestras debe ser mnimo de 3 x 3
cm colocadas en fundas individuales de polietileno u otros recipientes estriles. En caso
de no tener dichos envases, es posible esterilizar los frascos o tubos de ensayo y las
respectivas tapas, ponindolos a hervir por espacio de 30 minutos. Enviarlas
refrigeradas al laboratorio en un lapso no mayor de 4 horas.
Porciones de intestino deben enviarse con sus extremos amarrados y empacados
individualmente.
Hisopos: Los hisopos son la forma preferida para enviar muestras de secreciones (nasal,
farngea, ocular, cutnea, cervical, vaginal, etc.), exudados, contenido de abscesos, etc.
introducidos en un medio de transporte adecuado y enviados en refrigeracin.
Heces: Las muestras fecales deben ser recolectadas directamente del recto para evitar
contaminacin, puestas en un envase hermtico y enviadas en refrigeracin al
laboratorio. Debido a la alta probabilidad de contaminacin se debe evitar el envo de
excretas expuestas al medio ambiente.
En caso de animales grandes, la muestra puede ser recolectada introduciendo la mano y
el brazo en el recto del animal colocndose previamente un guante plstico que cubra
inclusive el brazo. La manga de la funda puede ser invertida y sta enviada al
laboratorio.
Leche: Las muestras de leche deben ser tomadas de animales que no hayan recibido
tratamiento con antibiticos durante los ltimos 10 das. Estas deben ser recolectadas en
envases estriles bien cerrados y luego enviadas en refrigeracin al laboratorio en el
menor tiempo posible.
Orina: Se debe utilizar un recipiente estril. El sondeo vesical es la forma ideal para
evitar contaminacin, en su defecto, la miccin espontnea es la tcnica aconsejable. La
muestra debe enviarse al laboratorio en refrigeracin.
Cultivos micticos (Hongos)
Micosis superficiales: Raspados cutneos del borde de una lesin activa y pelo son las
muestras preferidas para aislamiento de dermatofitos. Deben ser enviados al laboratorio
en un tubo estril tapado con un algodn o sobre de celofn. No enviar la muestra en
medio de cultivo porque proliferan los hongos contaminantes.
Micosis profundas: Las muestras (tejidos y rganos) deben ser enviadas en condiciones
semejantes a las de bacteriologa.
Hemocultivos
Sangre con anticoagulante EDTA (Vacutainner tapa lila), refrigerada, enviar lo ms
pronto posible al laboratorio (mximo 4 horas).
Anlisis
de
alimentos
Granos forrajeros, balanceados o cama deben ser enviados, mnimo 50 g, en fundas de
papel al laboratorio. Si existe demora para su envo debe refrigerarse.
Anlisis
de
agua
Una muestra de agua (50 ml aproximadamente) sin preservativos debe ser enviada al
laboratorio en un frasco estril en condiciones de refrigeracin.
Parasitologa (parsitos gastrointestinales, hepticos y pulmonares)
Coproparasitarios:
1. Con guante o funda plstica introducir la mano en el recto del animal y estimular
mediante
masaje
el
esfnter
anal.
2. Cuando se haya obtenido la cantidad suficiente (20 a 40 g) reversar el guante hacia
dentro y cerrarlo. Enviar la muestra refrigerada al laboratorio en menos de 4 horas.
Si la muestra tardara ms de 4 horas en llegar al laboratorio, pasar una parte a un
recipiente con 3 gotas de formalina al 10%. En caso de requerir investigacin de
parsitos pulmonares (identificacin de larvas) enviar otra muestra sin formalina, en
refrigeracin.
Cuando se requiera evaluar el estado de infestacin de un grupo de animales, debe
tomarse un pool de muestras por edad. En ste caso, se colectarn pequeas muestras
de heces tomadas al azar. Cada pool debe corresponder a un solo grupo de edad.
Muestra
de
sangre
Para la coleccin de sangre debe tenerse en cuenta el sitio de puncin y el calibre de
aguja a utilizar para cada especie (Ver Anexo No. 1).
Consideraciones generales para la toma de muestras de sangre:
a) No colocar el bisel de la aguja hacia abajo pues imposibilita el paso de sangre.
b) No usar agujas hmedas ya que se hemolizan los glbulos rojos.
c) Retirar la aguja de la jeringa antes de llenar el tubo donde se depositar la sangre para
evitar
la
ruptura
de
los
glbulos
rojos
(hemlisis)
d) En caso de que se requiera anticoagulante es aconsejable utilizarlo en polvo y no en
forma
lquida,
pues
se
diluye
la
sangre.
e) Homogenizar la sangre con el anticoagulante para evitar la formacin de cogulos.
Para la extraccin de sangre utilizar preferentemente el sistema de tubos al vaco (tipo
Vacutainner), que por ser un sistema cerrado presta mayor garanta en cuanto a asepsia y
preservacin de las muestras, o tubos limpios estriles y secos.
Los tubos Vacutainner con y sin anticoagulante estn disponibles en LIFEX. Este
sistema manejado en forma adecuada representa un menor riesgo de hemlisis de las
muestras, con respecto al sistema de extraccin con jeringuilla.
Para exmenes hematolgicos (conteo celular, hemoglobina, hematocrito, etc.)
1. Extraer 5 ml de sangre con un tubo que contenga una solucin anticoagulante de
EDTA
(Vacutainner
tapa
lila).
2. Mezclar el tubo por inversin de 5 a 7 veces hasta homogenizar la sangre.
3. Realizar frotis por duplicado para estudio diferencial de clulas (Ver procedimiento
para
frotis).
4. Identificar y enviar la muestra refrigerada.
Las muestras enviadas sin anticoagulante no podrn ser procesadas.
Frotis
sanguneo:
1.
Mezclar
invirtiendo
el
tubo
de
5
a
7
veces.
2. Colocar una pequea gota de sangre (0,02 ml aproximadamente), en un extremo de la
placa
portaobjetos.
3. Con otra placa portaobjetos de bordes lisos (esmerilada) y formando un ngulo de 35
grados extender la gota en su borde y con un movimiento continuo hacia adelante
realizar la extensin (frotis). Las esquinas de esta placa deben estar cortadas, de modo
que el borde que obra en la extensin sea algo menor que el ancho del portaobjetos en
que
se
extiende
la
sangre
(*).
4. Dejar secar al medio ambiente (2 minutos) y guardar evitando que la superficie del
frotis
se
deteriore.
5. Identificar las placas portaobjetos, con el nmero de la muestra utilizando lpiz.
Un buen frotis se reconoce por la formacin de una lengeta y por ser lo
suficientemente fino como para dejar pasar la luz.
Para
estudios
qumicos
o
serolgicos:
1. Extraer 7 ml de sangre con un tubo sin anticoagulante (Vacutainner tapa roja).
2. Evitar mover el tubo, dejarlo a temperatura ambiente en un ngulo de 30 grados hasta
formarse
el
cogulo
(30
minutos).
3. Identificar y llevar al laboratorio en un tiempo no mayor de 2 horas.
4. Si el tiempo de llegada al laboratorio fuese mayor a 2 horas, mantener la muestra
refrigerada en forma vertical y preferentemente separar el suero.
5. - No congelar.
Muestras
de
tejidos
para
Histopatologa
1. Al cortar, las muestras deben contener una parte del tejido afectado junto a otra de
aspecto
normal.
2. El grosor de la muestra depende del tejido, pero por lo general no debe ser mayor de
0,5
cm.
3. Colocar la muestra en un frasco que contenga formol al 10% en una cantidad que
cubra
al
rgano
completamente.
4. Los recipientes para las muestras deben ser de boca ancha para que puedan salir
ntegras y fcilmente. Las muestras para estudios histopatolgicos no necesitan
refrigeracin y nunca deben congelarse.
Urianlisis
Utilizar un recipiente estril y mantener la muestra refrigerada. El tiempo mximo entre
la toma de muestra y la llegada al laboratorio debe ser de 2 horas. Preferentemente la
muestra debe ser tomada por sondeo vesical.
Muestra de ectoparsitos
Garrapatas
1. Se toma el cuerpo de la garrapata con los dedos ndice y pulgar procurando llevar la
ua del pulgar hasta el rgano de fijacin de la garrapata (hipostoma)
2. Ejercer ligeras presiones y pequeos movimientos en todos los sentidos hasta que la
garrapata se desprenda (en lugar de los dedos puede utilizarse una pinza de diseccin).
3. Colocar las garrapatas recolectadas en un frasco con alcohol al 70%.
4. Rotular y enviar al laboratorio para su identificacin.
Acaros
1. Utilizando una gasa embebida en glicerina y sostenida por una pinza, limpiar la zona,
separando las costras poco adheridas y las escamas que se encuentran sobre o alrededor
de
la
lesin
que
se
va
a
investigar.
2. Hacer un doblez en la piel del animal a nivel del rea sospechosa y colocar una gota
de
glicerina
o
aceite
mineral.
3. Con la hoja de bistur raspar la parte superior del doblez varias veces hasta lograr
algo
de
sangrado
en
la
zona.
4. Transferir el raspado a un recipiente estril y enviar al laboratorio.
Nota: Al enviar material para diagnstico, tomar en cuenta que los raspados deben
hacerse cerca de los bordes de las lesiones activas, evitando incluir costras secas, pelos
o lana.
Muestras para virologa
El diagnstico de enfermedades virales en trminos generales puede requerir de suero
(sangre sin anticoagulante), exudados (enfermedades vesiculares) y de tejidos con el fin
de llevar a cabo pruebas serolgicas, aislamientos de virus y estudios estructurales. En
caso de que lo requiera comunquese con LIFEX para mayor informacin.
Empaque y sistemas de envo de muestras
Anexo No. 1
Cuadro de puncin y calibre de aguja
14 - 18
2,5 - 3,0
Bovino
14 - 18
2,5 - 3,0
Ovino
vena yugular
16 - 18
2,5 - 3,0
16 - 18
2,5 - 3,0
19 - 21
1,5 - 4,0
Ave
21 - 27
1,0
22 - 25
1,5
20 - 22
1,5
Felino
20 - 22
1,5
Conejo
19 - 23
2,0
Cuy
22 - 25
2,5
Anexo No. 2
Puntos de LIFEX para recepcin de muestras en el Ecuador
Ciudad
Nombre
Direccin
Telfono
Quito
LIFEX
Guayaquil
LIFE
Cuenca
LIFE
(07) 835640
Ambato
VETECA
(03) 844472
Santo
Domingo
DISAGRES
Km 1 Va Quevedo # 593
(02) 750102
Loja
DAVET
(07) 579366
Machala
Ibarra
Dr. Gonzalo
Alvarez
(06) 951177