Identificacin y descripcin de los procesos bioqumicos ocurridos en diferentes

medios de cultivo tomando como organismo de estudio staphylococcus aureus

Laverde,S J; Galeano, D; Grisales,O; Ruiz, J.
Estudiantes de 4 semestre de microbiologa Universidad Libre seccional Pereira

RESUMEN
El presente estudio de investigacin se realiz con el objetivo de identificar y describir,
los diferentes procesos bioqumicos que ocurren en los medios de cultivo. Los
microorganismos se pueden identificar y relacionar a travs de las reacciones
bioqumicas que ocurren en los medios; los medios agar MacConkey y EMB, permiten
el crecimiento de toda la familia de enterobacterias e inhiben el crecimiento de bacterias
Gram positivas, siendo diferenciales por la presencia de lactosa en McConkey y,
lactosa/sacarosa en EMB, que permite observar los diferentes crecimientos en bacterias
que utilizan y no, estos hidratos de carbono; el agar sangre es un medio enriquecido
donde crecen microorganismos exigentes en nutrientes adems de que se pueden
observar las diferentes hemolisis segn la especie requerida; el agar SMRF permite el
crecimiento y diferenciacin de la familia estafilococos, y es diferencial debido a que se
puede observar los microorganismos que fermentan o no el manitol; el medio SIM, al
ser un medio semislido permite observar la movilidad o la inmovilidad de las cepas.
Para identificar y describir las reacciones bioqumicas de los medios, se utiliz 6 medios
de cultivo que fueron inoculados con staphylococcus aureus, e incubados por 24 horas.
Los resultados obtenidos demuestran que staphylococcus aureus mostr crecimiento en
los medio de cultivo agar nutritivo, agar sangre de cordero al 5% y agar SMRF; y se vio
inhibido en los medios MacConkey y EMB, por lo cual no present crecimiento; mostr
inmovilidad en el medio SIM.
Palabras Claves: lactosa, manitol, hemolisis, movilidad y crecimiento

INTRODUCCION
Los microorganismos, pueden ser
relacionadas o separadas en diferentes
especies mediante la utilizacin de
pruebas bioqumicas por medio de
actividades enzimticas que se observan
a travs de un medio de cultivo, donde
se pueden obtener datos acerca de la
especie, su capacidad de fermentar,
degradar molculas, competir y crecer
con otras especies. (Tortora et al; 2007)

para la siembra de microorganismos en

medios solidos se utilizan medios de
cultivo con caractersticas diferentes
segn las particularidades que se estn
requiriendo; entre los medio ms
generales, se encuentra el agar nutritivo,
que es utilizado para el aislamiento de
microorganismos poco exigentes que no
posee
agentes
selectivos
ni
diferenciales;
se
compone
de
pluripeptona y extracto de carne que
proporcionan los nutrientes y la fuente

de carbono; cloruro de sodio que se

utiliza como equilibrio osmtico; y agar
que es el agente solodificante.
(Sagardoy et al; 2004)
Los medios de cultivo compuestos,
pueden ser selectivos cuando estn
diseados para suprimir el crecimiento
de ciertas bacterias y favorecer el
crecimiento de otras; los medios
diferenciales, que permiten distinguir
con mayor facilidad las colonias del
microorganismos deseado con respecto
a otras colonias; y los medios de
enriquecimiento que proporcionan
nutrientes y condiciones ambientales
que favorecen el desarrollo de los
microorganismos. (Tortora et al; 2007)
entre los medios de cultivo ms usados,
se encuentran:
Agar MacConkey
Es un medio selectivo diferencial, que
permite el crecimiento de bacterias
Gram negativas de toda la familia
Enterobacteriaceae; de tal forma que
permite distinguir entre bacterias que
fermentan y no fermentan la lactosa. El
medio est compuesto de peptona y
pluripeptona que aportan los nutrientes
necesarios al medio; la lactosa que es la
fuente de carbono fermentable; cloruro
de sodio, que mantiene el balance
osmtico; agar que le da la consistencia
solida al medio; cristal violeta y sales
biliares que son los agentes selectivos
que inhiben el crecimiento de bacterias
Gram positivas y algunas Gram
negativas; y finalmente, el rojo neutro
que es un indicador de pH, que vira de
color segn el intervalo de transicin
(6.8-8.0); en un medio acido, el
indicador vira a rojo, y en un medio
bsico, vira a amarillo. Las bacterias

fermentadoras de lactosa acidifican el

medio, por lo cual el color vira a rojo,
rojo fucsia, que depende de la cantidad
de cido producido; y las no
fermentadoras de lactosa, producen
colonias incoloras o ligeramente
amarillas debido a que utilizan peptonas
como fuente de carbono, que alcalinizan
el medio. (Rodriguez; 2005)
Agar E.M.B (Eosina azul de metileno)
Es un medio selectivo diferencial para
bacterias Gram negativas no exigentes
que permite el desarrollo de todas las
especies
de
la
familia
Enterobacteriaceae; permite distinguir
entre bacterias que fermentan lactosa
y/o sacarosa de las bacterias que son
incapaces. El medio est compuesto de
peptona que aporta los nutrientes y
favorece el desarrollo microbiano;
fosfato dipotasico, que al ser una sal,
regula y estabiliza la acidez; El agar
como agente solidificante; lactosa y
sacarosa como fuente de carbono
fermentable, La presencia de sacarosa
permite para algunos miembros de
bacterias, que puedan fermentarla con
ms facilidad que la lactosa (Alarcon;
2001); Eosina (colorante acido) y azul
de metileno (colorante bsico), (Vives et
al; 2006) que mantienen un pH estable e
inhiben el crecimiento de bacterias
Gram positivas y algunas Gram
negativas. Las cepas que utilizan la
lactosa poseen centro oscuro con
periferia azulada o rosada, mientras que
las que no lo hacen son incoloras.
(Alarcon; 2001)
Agar SMRF (Salino manitol rojo de
fenol)

Es un medio selectivo diferencial

utilizado para la diferenciacin de
estafilococos, permite observar entre
bacterias que fermentan y no fermentan
el manitol. El medio est compuesto de
extracto de carne y pluripeptona que
aportan los nutrientes, vitaminas,
nitrgeno y minerales; manitol, que es
el hidrato de carbono fermentable;
cloruro de sodio al 7,5% (agente
selectivo) que se encuentra en alta
concentracin, lo que permite que gran
cantidad de bacterias que no resistan
estas concentraciones sean inhibidas;
agar que actan como agente
solidificante; y rojo de fenol que es un
indicador de pH, que a pH bajo vira a
amarillo y pH alto vira a rojo, el
intervalo de transicin de pH es de 6,88,4. Las colonias que fermentan
manitol, aparecen rodeadas de un halo
amarillo debido a que se acidifica el
medio en cambio, las colonias que no
utilizan el manitol como fuente de
carbono, el medio permanece incoloro o
rojo (Rodriguez; 2005).
Agar Sangre de cordero
Es un medio enriquecido preparado para
aislar todo tipo de microorganismos
Gram positivos y Gram negativos. Est
compuesto de peptona e infusin de
msculos de corazn que aporta una
elevada nutricin al medio permitiendo
el
crecimiento
de
muchos
microorganismos; cloruro de sodio que
mantiene el balance osmtico; agar
como agente solidificante; y sangre de
cordero con el propsito de observar
caractersticas de hemolisis en los
microorganismos. (Rodriguez; 2005)
Los tipos de hemolisis se identifican
como: -hemolisis, halo verde alrededor
de la colonia debido a una destruccin

parcial de los eritrocitos; -hemolisis

que se representa como un halo
intensamente claro alrededor de la
colonia, que representa una lisis total; y
-hemolisis, que representa la ausencia
de halo claro (Bermejo et al; 2004).
Medio SIM (Sulfuro-indol-movilidad)
Es un medio semislido, que permite
conocer la movilidad, la produccin de
indol y sulfuro de hidrogeno. El medio
SIM, est compuesto de Tripteina y
peptona, que uno de sus aminocidos
principales es el triptfano que se
oxidan para formar indol; sulfato de
hierro y amonio, y tiosulfato de sodio,
que se utilizan para aquellas cepas
productoras de sulfidrico que se
distinguen al observarse un precipiatdo
negro. Al realizar una puncin en la
siembra, se pude observar la movilidad
del inoculo por la turbidez que produce
alrededor de la puncin de siembra. Son
cepas inmviles cuando el crecimiento
solo se observa alrededor de la siembra,
y son cepas mviles cuando producen
turbidez ms all de la lnea de siembra.
(MacFaddin; 2003)
Concepto y caractersticas del genero
sthaphylococcus
Son cocos Gram positivos aerobios y
anaerobios
facultativos,
inmviles
(carecen de flagelos), no formadores de
esporas y de tamao 0,5 a 2 m. se
agrupan en forma de racimos y
degradan por fermentacin los azucares;
son bastante resistentes a agentes
externos y crecen bien en medios
generales. S. aureus, es de las especies
ms patgenas; es conocido como
estafilococo dorado por el pigmento de
color amarillo que forma; fermenta

manitol, mientras que especies como S.

epidermis y S. saprophytus, no
fermentan manitol (Granados; 1997).
Con respecto a la capsula, algunas cepas
de
staphylococcus
aureus
estn
recubiertas por una capa de limo o
capsula micoide que confiere una mayor
capacidad de adherencia. (Pahissa;
2009)
MATERIALES Y METODOS
Se prepararon 6 medios de cultivo, agar
nutritivo, agar EMB, agar SMRF, agar
MacConkey, medio SIM y agar sangre
de cordero; los 5 primeros medios se
prepararon en 250mL de agua destilada
y se le adicion la cantidad de gramos
necesarios segn el inserto de la casa
comercial; las soluciones fueron
calentadas hasta punto de ebullicin. El
medio agar sangre se prepar al 5% con
sangre de cordero, por lo que se realiz
una proporcin de 2,12 gr en 150 mL de
agua destilada, que luego se le rest en
5% a la cantidad de mL (2,12 gr en
142,5 mL). Todos los medios se pasaron
a autoclavar por 15 min a 121 a 15 Psi.
Los medios se vertieron en una cabina
de seguridad biologa para evitar alguna
contaminacin cruzada en las cajas de
Petri correspondientes; el medio SIM se
verti en un tubo de ensayo estril, y el
medio agar sangre se le agreg 250 mL
de sangre de cordero. Los medios se
solidificaron y se inocul en cada medio
una cepa de staphylococcus aureus. Se
sembr por medio de la tcnica de
agotamiento a travs de un asa
microbiolgica de redondel estril; el
medio SIM al verterse en un tubo de
ensayo, la siembra se realiz haciendo
una ligera punzada con un asa
microbiolgica recta. Las siembras se
pasaron a incubar durante 24 horas a

37c, posteriormente se observaron los

resultados.
RESULTADOS
Los resultados obtenidos demuestran
que staphylococcus aureus mostr
crecimiento en los medio de cultivo
agar nutritivo, agar sangre de cordero al
5% y agar SMRF; y se vio inhibido en
los medios MacConkey y EMB, por lo
cual no present crecimiento.
En la figura 1, se muestra el crecimiento
obtenido de staphylococcus aureus en
medio agar nutritivo; se observa una
cepa uniforme sin contaminacin. En
este medio de cultivo crece fcilmente
cualquier microorganismo, por lo cual
es usado como rutina y control de
crecimiento.

Figura 1. Staphylococcus aureus en medio agar

nutritivo; siembra por agotamiento

Staphylococcus
aureus
demostr
crecimiento en el medio agar sangre de
cordero, ya que ste medio
est
diseado para facilitar el desarrollo de
microorganismos exigentes, (Kloss WE
2009). En la figura 2, se muestra el
crecimiento obtenido al inocular
staphylococcus aureus en agar sangre
de cordero al 5%; se observa un color
dorado en las colonias, lo que es

caracterstico de la especie; adems se

presenta -hemolisis, lo cual indica la
presencia de halos intensamente claros
alrededor de las colonias; as pues que
Staphylococcus aureus present una
lisis total en las hemates (eritrocitos).

Figura 2. Crecimiento de staphylococcus

aureus en medio agar sagre de cordero; present
- hemolisis

El medio agar SMRF, dio positivo para

staphylococcus aureus, lo cual indica
que es capaz de utilizar el manitol como
fuente de carbono; en la figura 3, se
presenta los resultados en el medio
SMRF; se observa de color amarillo, ya
que al degradar el manitol, el medio se
acidifica, virando el rojo de fenol a un
color amarillo. Staphylococcus aureus,
tambin fue capaz de crecer, en
presencia de altas concentraciones de
cloruro
de
sodio,
siendo
un
microorganismo resistente a ambientes
de salinidad.

Figura 3. Crecimiento de staphylococcus

aureus
en
el
medio
agar
SMRF.
Microoragnismo capaz de fermentar mainitol
(+) (color amarillo)

Los medios agar MacConkey y EMB,

no
presentaron
crecimiento
de
staphylococcus aureus; en la figura 4, se
observa la siembra realizada en ambos
cultivos que fue inhibida por los
factores del medio

Figura 4. Staphylococcus aureus en medio

EMB (A) y McConkey (B)

Los resultados corresponde con la teora

al especificar que estos medios son
selectivos
para
bacterias
Gram
negativas; staphylococcus aureus al ser
una bacteria Gram positiva, fue inhibida
en el medio EMB, debido a la presencia
de Eosina y azul de metileno, que son
los agentes selectivos; y en algar
MacConkey, fue inhibida por el cristal
violeta y las sales biliares.
Por ltimo, los resultados adquiridos en
el medio SIM de staphylococcus aureus,
demuestran que dieron negativo para
movilidad, as pues que corresponde a
una cepa inmvil carente de flagelos.
En la figura 5, se muestran los
resultados para SIM; se observa que
solo se presenta turbidez en el punto en
que se realiz la siembra, por lo que se
deduce que los microorganismos no se
desplazaron alrededor de todo el medio
de cultivo.

Figura 5. Crecimineto de
staphylococcus aurues en medio
SIM; negativo para movilidad

DISCUSION
Staphilococcus aureous se caracteriza
por ser un microorganismo halfilo, lo
que ha permitido la creacin de medios
de cultivo casi especficos para su
desarrollo, como es el caso del agar
salino manitol rojo de fenol, este medio
de cultivo es representativo por tener
un elevado porcentaje de NaCl entre
el 7.5% y el 10% del total, lo que
representa un factor de inhibicin para
la mayora de las bacterias y a su vez
caracterstico para el crecimiento de
staphilococcus y micrococcus adems
de esto; est agar, cuenta con un
indicador de pH como lo es el rojo de
fenol, staphilococcus aureous a su vez
cuenta con un metabolismo capas de
fermentar manitol, Por lo que los
staphilococcus
con produccin de
coagulasa
positiva mediante
la
fermentacin generan como resultado
subproductos cidos, que al entrar en
contacto con el rojo fenol hacen que
este modifique
su color rojo
caracterstico por amarillo lo que hace
de este medio un medio altamente
selectivo (Kampf et al, 1998). Por otra
parte medios de cultivo como el agar
nutritivo y el agar sangre, son medio
enriquecidos y altamente enriquecidos,
respectivamente, lo que permite el

desarrollo de gran cantidad de

microorganismos
el agar
sangre
permite
el
crecimiento
de
microorganismos altamente exigentes,
gracias a esto el microorganismo bajo
estudio, desarrollo un crecimiento
optimo
en
estos dos medios,
observndose claramente en el agar
sangre una hemolisis beta o completa
debido a una lisis total de los eritrocitos
por parte del microorganismo, tambin
se observ en ambos cultivos colonias
mucosas esto debido a la presencia de
Slim o capsula mucoide con una
tonalidad vainilla, segn observaciones
realizadas, tras un tiempo posterior a
24 horas de incubacin las colonias
adquieren una tonalidad dorada, de ah
el nombre staphilococucus aereous
(Koneman et al , 1994).
El staphilococcus aureous, cuenta
con una morfologa cocoide y responde
a la tincin de gran de forma positiva,
por lo que al someterlo a crecimiento
en medios de cultivo como el eosina
azul de metileno (EMB) por sus siglas
en ingls, su crecimiento es nulo este es
un medio selectivo diferencial, debido
a que la eosina es un indicador de pH
y el azul de metileno por su parte es un
agente inhibidor de bacterias Gram
positivas,
lo que
impide
el
crecimiento en este medio de cultivo
del staphilococcus aereous, (Koneman
et al, 2008) por su parte el agar
macConkey es un medio
para
enterobacterias
que
utilicen como
nica fuente de carbono
lactosa
caractersticas
que no cumple
staphilococcus
aureous
por ser
fermentador de manitol adems cuenta
con sales biliares y violeta de genciana
que no son metabolizados por este,

produciendo una inhibicin de bacterias

Gram positivas.
Existen por su parte
medios
semislidos en este caso el medio
(SIM)
sulfuro
indol
movilidad,
especiales para medir la movilidad en
este caso, aunque tambin la
produccin de sulfuros e indol, en este
caso la siembra de staphilococcus
aereous se realiz con el objetivo de
medir
la
movilidad
del
microorganismo, lo que conllevo a un
crecimiento inmvil ya que se llev a
cabo en la lnea de siembra, y por
conocimiento previo se sabe que
staphilococcus aereous
no cuenta
mecanismos que le permitan
una
movilidad.
CONCLUSIONES

Se estableci la diferencia de cada

uno de los medios de cultivo segn
sus caractersticas bioqumicas.
Los conceptos y caractersticas de
staphylococcus
aureus
correlacionaron con las pruebas
obtenidas en los medios de cultivo.
Cada medio de cultivo contiene
nutrientes, humedad, fuente de
carbono y pH que permiten el
crecimiento
de
ciertos
microorganismos
Los medios de cultivo
tanto
diferenciales,
como selectivos
representan una fuerte herramienta
en el tratamiento microbiolgico,
tanto de identificacin morfolgica
como bioqumica, permitiendo
fiabilidad y seguridad al momento
de realizar un diagnstico.
El agar SMRF es un medio de
cultivo, que
permite la fcil
identificacin de la familia de

staphilococcus, ya que la fuente de

carbono especifica de estos es el
manitol, generando
cambios
visibles a nivel macroscpico como
el cambio de color, debido a la
fermentacin llevada a cabo por el
microorganismo.
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