Propiedades Plaguicidas de Cinco Especies Del Género Tagetes PDF
Propiedades Plaguicidas de Cinco Especies Del Género Tagetes PDF
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TESIS
CONTENIDO
Pg.
NDICE DE FIGURAS
NDICE DE CUADROS
II
RESUMEN
IV
ABSTRACT
1. INTRODUCCIN
2. ANTECEDENTES
10
11
12
16
20
21
25
3. JUSTIFICACIN
27
4. OBJETIVOS
28
28
28
5. MATERIALES Y MTODOS
29
29
29
30
31
31
31
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5.3. Bioensayos
33
33
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37
37
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37
38
38
38
38
39
39
5.4.3.2 Esporulacin
39
5.4.3.3 Germinacin
39
6. RESULTADOS
40
41
41
41
43
47
49
49
52
54
56
56
6.3.2. Esporulacin
57
6.3.3. Germinacin
7. DISCUSIN
58
60
60
62
65
8. CONCLUSIONES
66
9. LITERATURA CITADA
68
NDICE DE FIGURAS
Pg.
6
10
11
30
45
46
47
NDICE DE CUADROS
Pg.
4
14
29
32
34
35
36
41
42
43
44
Cuadro 12. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones,
incorporados a la dieta, en la duracin de la etapa pupal de C. decolora.
44
48
Cuadro 14. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1%, sobre la tasa
de crecimiento micelial (cm2/da) de S. rolfsii.
50
II
50
51
52
Cuadro 18. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1 % sobre la
produccin de esclerocios de S. rolfsii.
53
54
Cuadro 20. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1 % sobre el
porcentaje de viabilidad de esclerocios de S. rolfsii.
55
Cuadro 21. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1 % sobre la tasa
de crecimiento micelial (cm2/da) de M. fructicola.
56
57
57
58
59
III
Resumen
IV
Abstract
1. INTRODUCCIN
La investigacin sobre mtodos alternativos en el manejo de plagas y enfermedades se
increment en los ltimos aos, debido a los continuos problemas asociados con el uso de
productos convencionales (Choi et al. 2003) que incluyen el desarrollo de resistencia en los
organismos objetivo de control, generacin de plagas secundarias, resurgencia de plagas
(Ortega, 2001), eliminacin de fauna benfica, y contaminacin ambiental (Milln, 2008).
Esta problemtica impulsa la generacin de estrategias alternativas, como es el uso de plantas
con actividad biolgica, que permiten proteger el cultivo y por ende obtener mayor
rendimiento y calidad en la produccin sin poner en riesgo la salud del hombre y su entorno
(Rodrguez, 2000).
Las plantas resisten al ataque de patgenos mediante diferentes estrategias de defensa, que
pueden ser constitutivas (histolgicas o qumicas) o defensas inducidas por factores externos
(Verpoorte, 2000).
En general las propiedades biolgicas de los metabolitos de defensa de las plantas no se
conocen en forma amplia y algunos pueden actuar de manera individual contra una o varias
especies de hongos y otros, como la alicina del ajo, pueden tener un amplio espectro de accin,
no slo contra hongos fitopatgenos, zoopatgenos y patgenos de humanos sino tambin
contra bacterias, nemtodos e insectos (Isman, 2000).
La familia Asteraceae se encuentra ampliamente distribuida en el continente americano, y est
conformada por 18 tribus; en la tribu Tageteae se encuentra Tagetes, que es uno de los ocho
gneros que la integran (Heywood et al., 1977). El nmero de especies de Tagetes es de 55
2. ANTECEDENTES
2.1. Distribucin del gnero Tagetes
La aparicin de la Familia Asteraceae (Compositae) en el Continente Americano hace 65
millones de aos (Turner, 1977). Mxico es considerado como centro de origen de numerosas
especies, gneros, subtribus y tribus (Turner y Nesom, 1993). El gnero Tagetes, de la subtribu
Tageteae, cuenta con cerca de 55 especies (Soule, 1993), en Mxico est representado por 26
de ellas (Turner, 1996) constituyendo un importante centro de diversidad de dicho gnero.
Abarcan desde el paralelo 16 hasta el 32 N con la siguiente distribucin (Cuadro 1). Las especies
mexicanas, de acuerdo con Turner (1996) son: T. eppaposa B. L. Turner, T. lacera Brandegee, T.
nelsonii Greenm, T. mulleri Blake, T. moorei H. Rob., T. micrantha Cav., T. filifolia Lag., T.
oaxacana B. L. Turner, T. foetidissima Hort., T. erecta Linn., T. lucida Cav., T. coronopifolia
Willd., T. subulata Cerv., T. lunulata Ortega, T. tenuifolia Cav., T. parryi A. Gray, T. pringlei S.
Wats., T. minuta Linn., T. triradiata Greenm., T. hartwegii Greenm., T. palmeri A. Gray, T.
stenophylla B. L. Rob., T. linifolia Seaton, T. terniflora H. B. & K., T. lemmonii A. Gray y T.
persicaefolius Benth.
Especies
T. filifolia (a), T. micrantha (a), T. subulata (a), T. lacera (p), T. lunulata (a)
T. filifolia, T. lu cida (p), T. micran tha, T. palmeri (p), T. lemmonii (p), T. subulata, T. erecta (a), T.
minuta (a)
T. filifolia, T. lu cida, T. micran tha, T. palmeri, T. p ringlei (a), T. subulata
T. co ronopifolia (a), T. lucida , T. micrantha
T. lucida, T. mulleri (p), T. micrantha
T. filifolia, T. lu cida, T. foetidissima , T. erecta
T. filifolia, T. lu cida, T. palmeri, T. subulata , T. erecta
T. filifolia, T. micrantha, T. subulata, T. lucida, T. p ringlei, T. lunulata, T. epapposa (a), T.
foetidissima (a), T. elongata (a), T. remotiflo ra (a), T. erecta
T. filifolia, T. micrantha, T. subulata, T. lu cida
T. erecta, T. lu cida, T. micrantha, T. parryi, T. tenuifolia
T. lucida, T. micrantha, T. lunulata, T. p ringlei
T. filifolia, T. lu cida, T. lunulata, T. micrantha, T. tenuifolia, T. p ringlei, T. remotiflo ra, T. subulata
T. erecta, T. filifolia, T. hartwegii, T. lucida, T. micrantha, T. subulata
T. erecta, T. filifolia, T. fo etidissima, T. hartwegii, T. lucida, T. lunulata, T. micrantha, T.
persicaefolius, T. pringlei, T. stenophylla, T. subulata
T. filifolia, T. lu cida, T. subulata, T. tenuifolia
T. erecta, T. filifolia, T. foetidissima , T. lucida, T. lunulata, T. micrantha, T. p ersicaefolius, T. pringlei,
T. stenophylla, T. subulata, T. tenuifolia, T. remotiflora, T. triradiata
T. erecta, T. filifolia, T. foetidissima , T. lucida, T. stenophylla, T. subulata,
T. erecta, T. filifolia, T. foetidissima , T. lucida, T. oaxacana, T. subulata, T. tenuifolia
T. co ronopifolia, T. erecta, T. filifolia, T. fo etidissima, T. lu cida, T. micrantha , T. tenuifolia
T. co ronopifolia, T. erecta, T. foetidissima. T. linifolia, T. lu cida, T. micrantha, T. triradiata,
tenuifolia
T. co ronopifolia, T. foetidissima, T. linifolia , T. lu cida, T. micrantha, T. tenuifolia
T. co ronopifolia, T. erecta, T. filifolia, T. foetidissima, T. lucida, T. lunulata, T. micrantha,
persicaefolius, T. pringlei, T. stenophylla, T. subulata, T. triradiata, T. tenuifolia
T. coronopifolia, T. erecta, T. filifolia, T. foetidissima , T. lucida, T. micrantha, T. stenophylla,
subulata, T. triradiata, T. tenuifolia
T. erecta, T. filifolia, T. foetidissima , T. lucida, T. lunulata, T. persicaefolius, T. tenuifolia
T. erecta, T. filifolia, T. lucida, T. lunulata, T. micrantha, T. moorei (a-sp-p), T. tenuifolia,
foetidissima, T pringlei, T. remotiflo ra
T. erecta, T. filifolia, T. foetidissima , T. lucida. T. nelsonii, T. subulata, T. tenuifolia, T. terniflora
T. erecta, T. tenuifolia
T. lucida
Fuente: Turner (1996), complementado por Villarreal (2003). (a) anuales, (sp) semiperenes, (p)
perenes.
T.
T.
T.
T.
Plantas herbceas anuales o perennes, aromticas al estrujarse; con hojas todas opuestas por
lo comn pinnadas, con numerosas glndulas oleferas translcidas; cabezuelas solitarias o ms
o menos cimoso-corimbosas, involucro cilndrico, fusiforme o angostamente campanulado, sus
brcteas de tamao subigual, unidas entre s hasta cerca del pice y provistas de dos hilera s de
glndulas oleferas; receptculo plano o convexo, desnudo; flores liguladas generalmente
presentes, frtiles, sus corolas amarillas, anaranjadas, rojizas o blancas; flores hermafroditas,
corola con garganta infundibuliforme, anteras con las bases obtusas, ramas del estilo truncadas
y peniciliadas en el pice con apndices cnicos cortos; aquenios lineares o claviformes, vilano
de tres a 10 escamas desiguales lineares, a veces ms o menos unidas entre s (Caldern y
Rzedowski, 2001).
Es una planta ruderal de lugares abiertos y perturbados en pastizales, bosque de pino encino y
bosque tropical caducifolio; prospera entre los 600 a 2400 msnm y desarrolla en los meses de
agosto a enero; su altura vara desde 10 hasta 40 cm (Turner, 1996; Villarreal, 2003). Los
nombres comunes con los que se conoce a esta especie son anisillo (Figura 1), hierba ans, ans
de campo, ans ujts, curucumin, flor de Santa Mara, limoncillo, putsuti (purpecha), putzuti, ita
kua mishi (mixteco) (SEMARNAT, 2000). Esta especie tiene aroma de ans y se utiliza para
disminuir el dolor de estmago y clicos menstruales (Neher, 1966; Villareal, 2003), como
6
forraje para ganado (Turner, 1996) y como insecticida (Cubillo et al., 1999);
saborizante
anisado para atole y de caas de maz para masticar, preparacin de curados de pulque y
elaboracin de mezcal y de licor (con alcohol de caa) de ans, y como esencia de ans para
saborizar bebidas (Serrato y Barajas, 2006); da sabor a elotes y calabazas cocidas y a tamales, y
cuando se quema la planta en fresco, el humo ahuyenta moscos (Serrato et al., 2007).
Planta herbcea anual, erecta, sin pelos, de hasta 1 m de alto (Figura 2), muy aromtica y con
un olor desagradable al estrujarse, creciendo como vegetacin secundaria en bosque de pino,
Planta ruderal en reas de montaa (Figura 3) y en terrenos agrcolas, crece como vegetacin
secundaria en bosques de pino, pino-encino y tropicales caducifolios (Neher, 1966; Turner,
8
1996; Villarreal, 2003); es erecta, herbcea perenne, altura de 30 hasta 100 cm, hojas simples y
ssiles, cabezuelas en corimbos, flores liguladas con corolas de amarillo claro o amarillo
anaranjado, olor dulce de aroma anisado al estrujarse (Neher, 1966; Turner, 1996; Villarreal,
2003; SEMARNAT, 2006). Prospera en altitudes de 800 a 2700 msnm (Turner, 1996; Villarreal,
2003), aunque Neher (1966) seala el intervalo de 1500 hasta 4100 msnm, considerando desde
Mxico hasta Centro Amrica. Se le conoce como pericn, aunque tiene otros nombres: flor de
Santa Mara, yerbans, anisillo, coronilla, hierba de las nubes, falso hipericon, hierba ail,
periquilla, yita perico, cuchrucumin, curucumis, curucumin, tzitziqui, nan uarhi (purpecha),
guia laga-zaa (zapoteco), baschigko (tarahumara), cuauhiyautli-zacayahucti-yiauhtli (nhuatl)
(Villarreal, 2003; SEMARNAT, 2006). Es pigmentante amarillo para teir telas; saborizante
anisado en bebidas y licores; condimento de elotes y chayotes hervidos; t; sahumar en casos
de sustos y espanto; ramillete ceremonial y alimento forrajero para ganado y aves de traspatio.
Como medicinal se emplea en alrededor de 25 padecimientos, utilizado como humo,
cataplasma y t (SEMARNAT, 2006); la medicina cientfica ha validado la efectividad de T. lucida
en la cura de diarrea y otras enfermedades gastrointestinales y verificado su actividad
antifngica y antibacteriana (Cspedes et al., 2006). Tambin se ha demostrado efecto
nematicida (Siddiqui y Alam, 1988).
Planta herbcea anual, erecta, glabra, muy aromtica al estrujarse (Figura 4), de hasta 50 cm
de altura (Neher, 1966; Turner, 1996), crece en condiciones de disturbio (Villaseor y Espinoza
1998), fuerte aroma al estrujar casi repugnante. Se le ubica a 2300-2800 msnm (Turner, 1996),
2400-3100 m (Neher, 1966); principalmente en la laderas altas de los picos volcnicos de centro
sur de Mxico, bosques de Quercus, Juniperus y pastizales (Turner, 1996). Se utiliza en infusin
contra la tos y el dolor de pecho (Rzedowski y Rzedowski, 2001).
10
Planta erecta anual de hasta 1.8 m de alto, muy aromtica al estrujarse (Figura 5). Se le
conoce como flor de muerto, aptsicua (lengua tarasca), cempoalxchitl (lengua nhuatl),
guie'bigu, guie'coba, picoa, quiepi-goa (lengua zapoteca), kalhpu'xa'm (lengua totonaca),
ita-cuaan (lengua mixteca), jondri (lengua otom), mus, musajoy (lengua zoque), tiringuini
(lengua tarasca), cempaxchil y xumpatsnchitl (Martnez, 1979). Distribuida en vegetacin
perturbada, ruderal y arvense, se registra como maleza en maz (Villaseor y Espinosa,
1998). Se cultiva ampliamente para fines ornamentales (especialmente en ceremonias
religiosas), como medicinal y como complemento del alimento de aves de corral o como
11
tintrea (Rzedowski y Rzedowski, 2001), no solo en Mxico, sino a nivel mundial. Vasudevan
et al. (1997), la reportan con propiedades nematicidas, con actividad antifngica, mientra s
que Hilje y Mora (2007), mencionan un efecto insecticida e insectisttico.
2.4.
La composicin qumica del gnero Tagetes vara entre las especies, Marotti et al. (2004),
mencionan que la diversidad qumica est determinada genticamente y estrictamente
relacionada a las especies.
El contenido y cantidad de compuestos es afectado por factores como el hbitat de la planta
(Karousou et al., 2005), la etapa fenolgica, las diferentes partes de las que se extrae, la
composicin del suelo y la fertilizacin mineral (Macias y Galindo, 2001), por lo que es comn
encontrar diferencias en el contenido de compuestos, an entre plantas de la misma especie.
Hay algunas especies de Tagetes que comparten compuestos qumicos, mientras que otros
compuestos solo se encuentran en una sola especie (Cuadro 2).
Algunos de los compuestos encontrados en las especies de Tagetes pertenecen a los grupos de
alcoholes, teres, aldehdos, acetonas, steres, carotenoides, flavonoides, tiofenos, terpenos y
cumarinas (Zygadlo et al., 1993; Marotti et al., 2004; Kaul et al., 2005; Krishna et al., 2004). Las
propiedades biolgicas de estas plantas afectan a diversos organismos, desde bacterias, virus,
hongos, nematodos, caros e insectos e inclusive otras especies de plantas (Serrato y Quijano,
1993).
Rai y Mares (2003), estudiando la presencia de aceites esenciales en 295 familias de plantas
reportaron que las lactonas sesquiterpnicas son caractersticas de la familia Asteraceae.
12
13
T. lucida
T. erecta
T. filifolia
T. minuta
T. patula
1,8-Cineol
Anetol
Anisaldehdo
Cariofileno
Chavicol
Herniarin
Linalol
Metil-eugenol
Mirceno
Tiofeno
1,8-Cineol
-Tertienilo
Kaempferol
-Tertienil
Anetol
Anisaldehido
Citral
1,8-Cineol
cido actico
-Tertienil
-Felandreno
Bornol
Cariofileno
Ocimeno
Citral
Geraniol
Cimeno
Quercetina
4-Terpinenol
Terpinoleno
Tiofeno
Timol
cido cafeico
Kaempferol
cido
Cumrico
Quercetin
Efecto
fungisttico
Limoneno
Metil-eugenol
Limoneno
Carvon
Acido frmico
Limoneno
Efecto
nematicida
1,8-Cineol
Chavicol
Limoneno
Linalol
Metil-eugenol
Metilisoeugenol
Tiofeno
-Tertienil
Citral
Limoneno
1,8-Cineol
5-3-1 Butenil
2-2`Bitienil
-Terpineol
-Tertienilo
Borneol
Carvon
Citral
Geraniol
Limoneno
Acido
palmtico
4-Terpinenol
Tiofeno
Timol
1,8-Cineol
5-3-1
Butenil
2-2 Bitienil
-Tertienilo
14
Los principales compuestos del aceite esencial de T. foetidissima son: citronelol y alcohol
benclico. Estos constituyentes varan segn el color prpura o verde que presentan estas
plantas: citronelol 8 y 15 %, y alcohol benzlico 11 y 15 %, respectivamente (Prez-Amador et
al., 1994).
Con respecto a la composicin qumica de T. lucida, se ha registrado la presencia de cumarinas
(Cspedes et al., 2006), flavonoides (Abdala, 1999; Cspedes et al., 2006) y aceites esenciales
(Annimo, 1938; Guzmn y Manjarrz, 1962). El contenido del aceite esencial suele presentar
metil chavicol en alta concentracin (Annimo, 1938; Cicci, 2004), aunque otros compuestos
pueden aparecer como metil eugenol y anetol (Guzmn y Manjarrz, 1962; Bichi et al., 1997). El
origen geogrfico de T. lucida parece relacionarse con la variabilidad del contenido del aceite
esencial. Por ejemplo, materiales de Costa Rica contienen 30 componentes qumicos con alto
porcentaje de metil chavicol (95 97 %); material de Guatemala presenta 53 compuestos, los
abundantes son metil chavicol (38.9 %), metil eugenol (24.3 %) y anetol (23.8 %); en materiales
mexicanos, metil eugenol (80%) y metil chavicol (12 %) son los compuestos mayoritarios. La
variabilidad del contenido del aceite esencial de poblaciones mexicanas de T. lucida no se ha
estudiado por completo. Con estos antecedentes Serrato et al. (2007) presentan resultados en
germoplasma colectado en Oaxaca, en la Regin Centro Sur de Mxico, encontrando que la
presencia y proporcin de molculas en el aceite esencial de T. lucida es variable en
compuestos principales.
De T. coronopifolia se conoce su contenido de flavonoides (quercetagetina 7-glucsido,
isorhamnetina, quercetina, quercetina 3-glucsido, quercetina 3-diglucsido y miricetina 7glucsido) tomando en cuenta extracto de planta completa en fresco (Abdala, 1999).
15
2.5.
Actividad biolgica
Cubillo et al., (1999), reportan que con extracto etanlico obtenido de la raz de T. filifolia,
aplicado a una concentracin de 100 ppm contra mosquita blanca (Bemisia tabaci) en el cultivo
de jitomate bajo invernadero, inhibe la oviposicin al 60 %, es repelente (55 %) y es txica (49
%) contra adultos. Serrato y Quijano (2003) observaron repelencia del aceite esencial de T.
filifolia, obtenido por arrastre de vapor, contra B. tabaci y Trialeurodes vaporariorum,
registrando una concentracin de 7.18 mg/mL, se obtiene una repelencia al 50 % (CR 50).
Camarillo et al. (2007) sealan que el anetol sinttico, el aceite esencial de T. filifolia, la fraccin
turbia de la destilacin y extractos acuosos de la planta utilizados al 1 y 10 % causan toxicidad
diferencial en los adultos de mosca blanca; los extractos acuosos y turbio fueron menos txicos
16
que el aceite o el anetol. Entre el anetol y aceites extrados de diferentes partes de la planta no
hay diferencias al aplicarlos al 10 %, pero al 1 % es mejor anetol que los aceites esenciales. En
cuanto a oviposicin, el aceite obtenido de hoja y de flores, aplicado al 10 % tiene el mejor
efecto, pero al 1 % de la fraccin turbia floral es ms activo. Los aceites fueron ms efectivos al
inhibir casi en su totalidad la oviposicin. Serrato et al. (2004) refieren que en general
concentraciones menores de 5000 ppm, no causan fitotoxicidad.
Por otra parte Zygadlo et al. (1994), reportan inhibicin en el crecimiento de Sclerotium
cepivorum, Colletotrichum coccodes y Alternaria solani a concentraciones de 0.2, 0.3 y 0.5 %, de
aceite esencial de T. filifolia.
Grainge y Ahmed (1988), reportan que los extractos acuosos y polvos de hojas , flores y raz de
T. erecta asperjados tienen efecto insecticida contra Aphis craccivora, Dysdercus singulatus,
Musca domestica, Nephotettix virescens, Ostrinia furnacalis y Plutella xylostella.
Tagetes patula tiene efectos sobre Aphis creacivora, Epilachna varivestis, Musca domestica,
Nephotettix virescens, Nilaparvata lugens, Ostrinia furnacalis, Pieris rapae y Plutella xylostella.
Extractos etanlicos, acuosos y de acetato de etilo, polvos y aceites de tallos, hojas y flores de
T. minuta actan sobre Aedes aegypti, Ceratitis capitata, Dacus cucurbitae, Dacus dorsalis,
Musca domestica, Oncopeltus fasciatus y Tribolium castaneum.
Perich et al. (1994), evaluaron extractos de diferentes partes y especies de Tagetes patula en
larvas y adultos de Anopheles stephensi, los autores observaron que los adultos mostraron
sntomas tpicos de envenenamiento en el sistema nervioso, ya que el mosquito expuesto
evidenca excitacin inicial, seguida por parlisis y finalmente la muerte. Mencionan que los
sntomas son similares a los efectos provocados por las piretrinas, pero se sabe que los aceites
17
18
Pratylenchus
penetrans y P. pratensis. T. erecta disminuye las poblaciones del nemtodo barrenador del
platano Radopholus similis, y de Helicotylenchus multicinctus y Hoplolaimus indicus (Koon-Hui
et al. 2007).
Marles et al. (1992), reportan actividad nematicida, insecticida y fungicida de T. erecta y
atribuyen esta actividad biolgica a la presencia de tiofenos en los tejidos de la planta.
Respecto a las especies T. foetidissima y T. coronopifolia no hay registros en la literatura sobre
sus propiedades biolgicas.
19
2.6.
Es un insecto que pertenece a la familia Noctuidae, polfago que est presente desde Mxico
hasta la Patagonia y es una plaga importante de diversas plantas cultivadas como col ( Brassica
oleracea) y otras cruciferas, huauzontle (Chenopodium nuttalliae), cilantro (Coriandrum
sativum), papa (Solanum tuberosum), alfalfa (Medicago sativa), chcharo (Pisum sativum), vid
(Vitis vinifer) y plantas ornamentales (Angulo y Weigert, 1975; Gutirrez y MacGregor, 1983;
Bautista, 1992). Esta especie tambin es relevante por las barreras fitosanitarias ligadas a ella ,
debido a que uno de los principales mercados de los productos agrcolas mexicanos es el de
Estados Unidos de Norteamrica, donde no est presente, y se mantiene cuarentenada, por lo
que hay obstculos para la comercializacin de plantas hospederas de dicha especie (USDA,
2007).
Es de hbito nocturno, se alimenta y copula por la noche, el dao de mayor importancia es
provocado por la larva. Al alimentarse, una sola larva puede destruir una planta (Acatitla et al.
2003).
El manejo de esta plaga se realiza mediante la aplicacin de qumicos generalmente en la etapa
larval, es decir cuando la plaga ya est presente en el cultivo, principalmente, con productos
organofosforados, piretroides y carbamatos, solos o en mezclas (Prez et al. 2009).
En cuanto al control biolgico se tienen registros del uso de parasitoides del gnero
Trichogramma, de entomopatgenos como Beauveria y Metarhizium y el efecto de Bacillus
thuringiensis (Fuentes y Gmez 2003); as como el uso de semioqumicos como las feromonas
sexuales para el monitoreo y control de esta plaga (Castrejn et al. 2000).
20
2.7.
subtropicales, desde el sur de Estados Unidos hasta Sudamrica, en frica, Asia, Australia y
parte de Europa (Aycock, 1996), en Estados Unidos se han reportado alrededor de 500
hospederos, entre ellas a T. erecta (Farr et al., 1989), en Nueva Zelanda solo 44 plantas
hospederas (Broadhurst 1995), en Mxico se ha reportado como patgeno en arroz, papaya,
cacahuate, chile, alfalfa, cebolla y jitomate ( Garca-lvarez, 1976; Saldaa et al. 1985, Lpez y
Fucikovsky 1990; Hernndez-Hernndez et al., 1991; Lpez-Salinas et al. 2002, Montes-Belmont
et al., 2003)
En suelo se desarrolla cerca o sobre la superficie del mismo y usualmente ataca el cuello de la
raz de la planta. En la zona afectada se produce un micelio blanco algodonoso sobre el que se
forman numerosos esclerocios, al principio blancos y luego de color marrn claro, de 1-2 mm
de dimetro, que son signos de diagnsticos de la enfermedad (Larez et al., 1996).
Las infecciones primarias de S. rolfsii ocurren en la superficie del suelo donde germinan los
esclerocios y el crecimiento micelial es mayor donde los esclerocios se alimentan de materia
orgnica de races infectadas, tiene habilidad para colonizar y crecimiento eficaz en sustratos
orgnicos y produccin de esclerocios que pueden persistir en los suelos por varios aos (Punja,
1996).
21
El hongo es diseminado a travs de prcticas culturales como son el arado, barbecho de s uelo
contaminado, trasplante de plntulas contaminadas, agua de irrigacin, el viento y por semillas
vegetativas (Jenkins y Averre, 1986).
Dentro de las prcticas culturales que se recomiendan para el manejo de S. rolfsii est el arado
profundo, en los cultivos anuales la rotacin de cultivos ayuda a disminuir los daos por la
enfermedad. Otro mtodo que se recomienda es la adicin de cal al suelo para subir el pH a 6.5
y as evitar el rpido desarrollo del hongo (Jenkins y Averre, 1986).
Existen enemigos naturales los cuales tienen un papel importante en el control biolgico bajo
condiciones naturales o en forma inducida, entre los microorganismos se encuentran
Trichoderma harzianum, T. viridae, Bacillus subtilis, Penicillium spp. y Gliocladium virens. Estos
microorganismos colonizan las hifas de S. rolfsii y las va destruyendo hasta matar el hongo
(Morton y Stroube, 1985).
Hoynes et al. (1999), reportan un control efectivo de S. rolfsii en el cultivo de frijol ejotero al
combinar la fertilizacin nitrogenada, con la aplicacin del fungicida metam sodio (isotiocianato
de metilo), Trichoderma hamatum y T. viride.
Se reporta una reduccin en la infestacin de suelos por sobre S. rolfsii a los que se les aplic
una combinacin del fungicida difenoconazol con T. harzianum (Cilliers et al. 2003). Los
fungicidas del suelo han sido usados por largo tiempo en el control de S. rolfsii. Hagan y Olive,
(1999) mencionan que en el cultivo de cacahuate se ha logrado buen control de S. rolfsii con
cloratalonil, tebuconazole y azoxystrobin.
22
24
2.8.
La moniliasis o momificado de los frutos producida por M. fructicola que tambin se le conoce
como Sclerotinia fructicola y Monilinia fructicola, ocasiona importantes prdidas de produccin
en especies de rosceas Prunus spp., manzano (Pyrus malus) y peral (Pyrus communis). Las
esporas (conidias) se producen bajo condiciones hmedas en la primavera, que infectan frutos
que usualmente se momifican y se convierten en fuente de inculo para posteriores
infecciones, as como ramas, yemas florales y cancros sobre ramas, si la infeccin ocurre
prxima a la cosecha la enfermedad se puede desarrollar en post-cosecha (CESAVEP, 2006).
El inculo puede ser transportado en material de siembra, especialmente en plantas con races,
en plantas vivas, frutos frescos; afecta la etapa vegetativa del cultivo, fructificacin y postcosecha, daando tallos, flores y frutos. Los frutos presentan una pudricin suave y color caf
con esporas color plomo, las flores se vuelven color caf y se marchitan, en el tallo se forman
zonas de color caf llamados cancros, frecuentemente con goma sobre la superficie de stos
(CESAVEP, 2006).
Para el manejo de la enfermedad de han utilizado mtodos qumicos, biolgicos y culturales. En
el caso de los qumicos el benomil, metil- tiofanato, vinclozolin, iprodione, triforine y bitertanol
son eficaces en el manejo de moniliasis. Sin embargo las constantes aplicaciones han inducido
resistencia al fungicida. Se han reportado cepas resistentes a benzimidazoles y dicarboximidas
(CESAVEP, 2006).
En muchos pases, para los frutos de hueso, los fungicidas son autorizados para aplicarse antes
de la cosecha, y en postcosecha preferiblemente con otro fungicida, los mtodos alternativos
incluyen el uso de Bacillus subtilis, que ha demostrado ser tan eficaz como benomil, en el
25
manejo post-cosecha de M. fructicola. Otros mtodos son la irradiacin con luz ultravioleta,
tratamientos con agua caliente y fumigacin con cidos como el actico y propinico (CESAVEP,
2006).
Teodorescu et al. (2009), reportan el efecto fungisttico de extractos de hojas y flores de T.
patula sobre Monilia spp.
El extracto crudo de Calia secundiflora tiene actividad fungicida y el efecto es atribuido a los
alcaloides presentes en la semilla, que contiene grandes cantidades de lupanina y espartaina
(Prez-Lanez et al. 2008).
Munain et al. (2008), reportan la actividad antifngica contra Monilia spp., de compuestos
triterpnicos aislados de Psolus patagonicus conocido como pepino de mar.
Bengtsson et al. (2007), mencionan que el tratamiento con extractos de las especies de Yucca
schidigera y Y filamentosa son efectivos para la prevencin y tratamiento de las enfermedades
causadas por M. fructigena y M. laxa en especies de rosaseas.
Lara-Cambil y Garca-Pareja (2006), reportan que extractos de plantas del gnero Allium inhiben
el crecimiento de Monilia spp y atribuyen el efecto antifngico a los tiosulfanatos, sustancias
que se encuentran en las especies de Allium.
Lamery, (2005), evalu el efecto del aceite de soya y menciona que es efectivo en el
tratamiento y prevencin de enfermedades causadas por especies de Monilia.
26
3.
JUSTIFICACIN
La demanda de la sociedad para consumir alimentos vegetales sin residuos, que principalmente
provienen de la aplicacin de insecticidas y fungicidas sintticos, justifica la bsqueda de
fuentes naturales de plaguicidas que sean estables y altamente biodegradables con efectos
biolgicos en contra de insectos, hongos, nemtodos, virus y bacterias. La enorme riqueza de
los recursos genticos de Tagetes en Mxico, tanto silvestres como domesticados, y las
posibilidades para su aprovechamiento es un estmulo para la realizacin de investigaciones
encaminadas a buscar alternativas al uso de productos sintticos, por lo que en este trabajo se
evalu la actividad biolgica de cinco especies del gnero Tagetes en tres modelos biolgicos
un insecto generalista, Copitarsia decolora, un patgeno con amplio rango de hospederos
Sclerotium rolfsii y causante de enfermedades con origen en el suelo y Monilia fructicola
patgeno que principalmente ocasiona enfermedades en postcosecha.
27
4.
OBJETIVOS
4.3.
Objetivo general
Evaluar la actividad biolgica de aceites esenciales y extractos acuosos de las especies Tagetes
filifolia, T. foetidissima, T. lucida, T. coronopifolia y T. erecta en los modelos de estudio,
Copitarsia decolora, Sclerotium rolfsii y Monilia fructicola.
4.4.
Objetivos particulares
a) Evaluar la actividad biolgica de los aceites esenciales de las cinco especies de Tagetes,
sobre el desarrollo, fecundidad y fertilidad de C. decolora.
b) Evaluar la actividad biolgica de aceites esenciales y extractos acuosos de cinco espec ies
de Tagetes sobre el crecimiento micelial, produccin y viabilidad de esclerocios de S.
rolfsii.
28
5.
MATERIALES Y MTODOS
5.1.
Las plantas de las cinco especies de Tagetes se cultivaron en el campo agrcola experimental de
la Universidad Autnoma Chapingo (UACh), en Texcoco Estado de Mxico y fueron sometidas a
manejo agronmico, sin aplicacin de herbicidas, insecticidas y fungicidas, ni fertilizacin
mineral. En el Cuadro 3 se presentan los orgenes de las colectas, los materiales provienen del
banco de germoplasma de la UACh.
Nombre comn
Origen
Tagetes filifolia
Anisillo
Ozumba, Mxico
Tagetes foetidissima
Cinco llagas
Texcoco, Mxico
Tagetes lucida
Pericn
Ocuituco, Morelos
Tagetes coronopifolia
Santa Mara
Texcoco, Mxico
Tagetes erecta
Cempoalxchitl
Texcoco, Mxico
29
Para el caso de los polvos, las plantas se cosecharon en la misma etapa fenolgica y se secaron
en una estufa a 50 C por 72 horas y se pulverizaron en un procesador de alimentos Moulinex
(picadora) y se tamiz en una malla del nmero 40 para obtener una muestra homognea y
partculas pequeas.
30
31
Origen
Yautepec, Morelos
Yautepec, Morelos
Yautepec, Morelos
12
Yautepec, Morelos
16
Cotaxtla, Veracruz
17
Mochis, Sinaloa
18
Len, Guanajuato
20
25
27
Georgia, EE.UU.
32
5.3. Bioensayos
Se utilizaron 40 larvas por cada tratamiento (Cuadro 5) con un mximo de edad de 24 horas,
cada una se tom como una repeticin, se individualizaron en recipientes de plstico de 30 mL
con tapa y se alimentaron con la dieta, a la dieta se adicion una concentracin de 0.01 y 0.1 %
el aceite esencial de T. filifolia, T. foetidissima, T. lucida, T. coronopifolia y T. erecta
emulsificados con Tween 20 al 0.02 %, antes de solidificar.
A partir del da 10 de alimentacin y despus, cada tercer da, se registr el peso de cada larva,
la mortalidad y duracin del estadio larval, as como el peso de las pupas, mortalidad y duracin
del estadio pupal. Las pupas se separaron por sexo, y se colocaron en jaulas de acrlico de 30 x
30 x 30 cm.
Cuando emergieron los adultos, se formaron parejas individuales de cada uno de los
tratamientos y se colocaron en recipientes de plstico de 1 L con tapa; la cual se perfor
dejando nicamente la orilla para cerrar el recipiente. En la tapa se coloc una servilleta de
papel, donde en experimentos previos se observ que las hembras muestran preferencia para
ovipositar, a partir del tercer da de haber formado las parejas, se cambi diariamente la
servilleta durante 10 das y se cont el nmero de huevos puestos sobre ella (fecundidad) y el
nmero de larvas emergidas por tratamiento por pareja (fertilidad).
Solo fueron considerados los huevos puestos sobre la servilleta de papel, por lo que la
fecundidad corresponde a un dato relativo.
33
incorporaron a un matrz con agua destilada, y se pusieron en agitacin a 150 revoluciones por
minuto durante 12 horas. Posteriormente se tamizaron en malla del nmero 100, al extracto
acuoso se adicion el medio de cultivo PDA y se esteriliz.
Cuadro 6. Tratamientos con aceites esenciales (AE) al 0.1 % y extracto acuoso (EA) al 2 % de
Tagetes evaluados contra S. rolfsii
Tratamientos
Testigo (sin AE o EA)
Testigo con Tween 20 (0.02 %)
T. filifolia (AE)
T. foetidissima (AE)
T. lucida (AE)
T. coronopifolia (AE)
T. erecta (AE)
T. filifolia (EA)
T. foetidissima (EA)
T. lucida (EA)
T. coronopifolia (EA)
T. erecta (EA)
35
Cuadro 7. Tratamientos con aceites esenciales (AE al 0.1 % y extracto acuoso (EA) al 2 % de
Tagetes evaluados contra M. fructicola.
Tratamientos
Testigo (sin AE o EA)
Testigo con Tween 20 (0.02 %)
T. filifolia (AE)
T. foetidissima (AE)
T. lucida (AE)
T. coronopifolia (AE)
T. erecta (AE)
T. filifolia (EA)
T. foetidissima (EA)
T. lucida (EA)
T. coronopifolia (EA)
T. erecta (EA)
En los modelos S. rolfsii y M. fructicola para la variable de crecimiento micelial, con los datos de
la tasa de crecimiento se calcul el porcentaje de reduccin del crecimiento con respecto al
tratamiento testigo (RRT) mediante la frmula:
% =
100
Donde:
TCT= tasa de crecimiento en el testigo.
TCt= tasa de crecimiento en el tratamiento.
36
5.4.
Las larvas de cada tratamiento se pesaron en una balanza analtica a partir del da 10 de
alimentacin y despus, cada tercer da, tambin se registr la mortalidad y la duracin del
estadio larval.
Se registr el peso de las pupas de cada tratamiento, posteriormente se separaron las hembras
de los machos, se registr la mortalidad y duracin de la etapa pupal.
37
El rea de crecimiento micelial de S. rolfsii se evalu hasta que el testigo llen la caja Petri. S
tomaron fotografas digitales diariamente, y con ayuda del programa ImageJ(versin 1.4),
software, para anlisis de imgenes, desarrollado por el Instituto Nacional de la Salud Mental
de Estados Unidos. El rea de crecimiento se calcul en centmetros cuadrados. Con el
programa Sigma Stat V. 3.5 se realizaron regresiones lineales para calcular la tasa de
crecimiento.
Se tomaron 10 esclerocios de cada uno de los tratamientos para sembrarse en medio PDA, se
evalu la germinacin (viabilidad) de los esclerocios y se expres como el porcentaje de
germinacin.
38
5.4.3.1.
Crecimiento micelial
El rea de crecimiento micelial de M. fructicola se evalu hasta que el testigo llen la caja Petri.
Se realiz el mismo procedimiento que para S. rolfsii.
5.4.3.2. Esporulacin
Para evaluar la esporulacin de M. fructicola, una vez que el testigo, el hongo present el
mximo crecimiento, se le adicionaron 2 ml de agua destilada estril y se rasp el micelio, se
obtuvo una suspensin de la que se tomaron 10 L que se depositaron en un hematocmetro y
con el objetivo 40x del microscopio ptico, se realiz el conteo celular. Se efectuaron 4
mediciones en cada tratamiento.
5.4.3.3. Germinacin
39
5.5.
Anlisis estadstico
40
6. RESULTADOS
6.1.
Copitarsia decolora
Cuadro 8. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones, incorporados
a la dieta, en el peso en la etapa larval de Copitarsia decolora.
Tratamientos
Testigo (sin AE)
T. erecta 0.1 %
T. coronopifolia 0.1 %
Testigo con Tween 20 (0.02 %)
T. erecta 0.01 %
T. filifolia 0.01 %
T. coronopifolia 0.01 %
T. filifolia 0.025 %
T. foetidissima 0.1 %
T. foetidissima 0.01 %
T. lucida 0.1 %
T. lucida 0.01 %
DMS
Peso (g)
0.339 a
0.321 ab
0.305 abc
40
0.305 abc
0.302 abc
39
40
0.301 abc
0.296 bc
40
37
0.295 bc
0.276 cd
34
27
0.239
0.205
de
ef
31
31
0.188
38
39
38
0.0417
41
peso con valores de 0.205 g y 0.188 g para cada concentracin, mientras que en el testigo fue
de 0.339 g, (Cuadro 8).
Para las dos concentraciones evaluadas, la duracin del estadio larval se redujo en promedio 3
das. En los tratamientos con aceites esenciales fue de 21 das y en el tratamiento testigo y
Tween fue de 24 y 23.2 das respectivamente, (Cuadro 9).
Cuadro 9. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones, incorporados
a la dieta, en la duracin de la etapa larval de Copitarsia decolora.
Tratamientos
Testigo (sin AE)
Testigo con Tween 20 (0.02 %)
T. foetidissima 0.1 %
T. filifolia 0.025%
T. coronopifolia 0.01 %
T. coronopifolia 0.1 %
T. lucida 0.1 %
T. filifolia 0.01 %
T. foetidissima 0.01 %
T. lucida 0.01 %
T. erecta 0.1 %
T. erecta 0.01 %
DMS
Duracin (d)
38
24.0 a
23.2 a
38
21.6 b
21.4 b
19
17
21.3 b
34
21.0 b
21.0 b
35
23
21.0 b
21.0 b
22
26
21.0 b
21.0 b
25
38
21.0 b
39
0.8244
42
Cuadro 10. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones,
incorporados a la dieta, en el peso de pupa de Copitarsia decolora.
Tratamientos
T. foetidissima 0.1 %
T. foetidissima 0.01 %
T. lucida 0.1 %
Testigo con Tween 20 (0.02 %)
T. filifolia 0.025 %
T. coronopifolia 0.01 %
T. coronopifolia 0.1 %
T. lucida 0.01 %
T. erecta 0.01 %
Testigo (sin AE)
T. erecta 0.1 %
T. filifolia 0.01 %
DMS
Peso (g)
0.423 a
0.404 ab
0.401 ab
19
0.400 ab
38
0.399 ab
0.397 ab
17
34
0.395 ab
0.386 b
35
25
0.380 b
0.379 b
39
38
0.376 b
0.376 b
38
22
26
23
0.0359
En la mortalidad en la etapa pupal (Cuadro 11) se observ que, todos los tratamientos incluido
el testigo con Tween 20 presentaron una mortalidad superior al 20 %, mientras que en el
tratamiento testigo la mortalidad fue del 8 %.
43
Cuadro 11. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones,
incorporados a la dieta, en la mortalidad pupal de Copitarsia decolora.
Mortalidad (%)
Tratamientos
58
T. foetidissima 0.1 %
39
T. erecta 0.1 %
38
T. coronopifolia 0.01 %
36
T. filifolia 0.01 %
35
T. filifolia 0.025 %
34
T. coronopifolia 0.1 %
26
T. lucida 0.1 %
24
T. foetidissima 0.01 %
23
T. erecta 0.01 %
21
T. lucida 0.01 %
21
Testigo con Tween 20 (0.02 %)
8
Testigo (sin AE)
Cuadro 12. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones,
incorporados a la dieta, en la duracin de la etapa pupal de Copitarsia decolora.
Tratamientos
Testigo (sin AE)
Testigo con Tween 20 (0.02 %)
T. erecta 0.01 %
T. erecta 0.1 %
T. foetidissima 0.1 %
T. filifolia 0.01 %
T. lucida 0.1 %
T. filifolia 0.025 %
T. foetidissima 0.01 %
T. coronopifolia 0.1 %
T. coronopifolia 0.01 %
T. lucida 0.01 %
DMS
Media
20.2 a
19.9 a
N
35
30
16.1 b
15.6 b
30
23
15.3 c
15.2 c
8
14
15.1 c
14.9 c
17
11
14.8 c
14.2 d
20
23
14.1 d
14.1 d
21
20
0.501
En el Cuadro 12 se observa que la duracin del estadio pupal se redujo en promedio en 5 das
con relacin al tratamiento testigo y al Tween 20, en los tratamientos con aceites esenciales de
44
Tagetes tuvo una duracin de 14 a 16 das, mientras que en el tratamiento testigo y Tween 20
fue de 20.2 y 19.9 das para cada uno.
Para efecto de claridad los resultados se presentan en dos Figuras (7 y 8), sin embargo el
anlisis estadstico se realiz para todos los tratamientos a ambas concentraciones, se observa
que con los tratamientos con aceites esenciales de T. filifolia, T. foetidissima y T. lucida, se
produce una reduccin en la supervivencia de las larvas, de hasta un 50 % entre los das 13 y 17
(Figuras 7 y 8).
100
Supervivencia (%)
80
Testigo (sin AE)
60
40
T. foetidissima
20
T. lucida
T. coronopifolia
T. erecta
9
11
13
15
17
19
21
23
Etapa larval
Duracin (das)
Figura 7. Curvas de supervivencia de larvas de Copitarsia decolora con los tratamientos de
aceites esenciales de Tagetes al 0.1 %.
45
100
Supervivenvia (%)
80
Testigo (sin AE)
60
40
T. foetidissima
20
T. lucida
T. coronopifolia
T. erecta
11
13
15
17
19
21
23
Etapa larval
Duracin (das)
A partir de las curvas de supervivencia se calcul la supervivencia media de las larvas (Figura 9).
Como se puede observar la Figura 9, la supervivencia media menor en la etapa larval se
encontr con los tratamientos con aceites esenciales de T. filifolia, T. foetidissima y T. lucida.
Para estas especies, con aceites esenciales al 0.1 % (excepto en T. filifolia que fue de 0.025 %)
se encontraron valores de 16.9, 17.4 y 18.8 das de supervivencia media larval, resultados
similares, se observaron en cuanto al efecto de estas especies sobre la mortalidad en la
concentracin de 0.01 %.
46
30
25
ab
ab
ab
ab
bc
bc
das
20
bc
bc
c
T3
T5
15
10
5
0
T12
T1
T2
T11
T9
T10
T8
T4
T6
T7
Tratamiento
Figura 9. Supervivencia media de larvas de Copitarsia decolora con los tratamientos de aceites
esenciales de Tagetes.
*(T1), Testigo sin AE, (T2), Testigo Tween 20 al 0.02 %, (T3), AE de T. filifolia 0.025% (T4), AE de T. filifolia 0.01%,
(T5) AE de T. fo etidissima 0.1% (T6), AE de T. fo etidissima 0.01%, (T7), AE de T. lu cida 0.1%, (T8), AE de T. lu cida
0.01%, (T9), AE de T. coronopifolia 0.1 %., (T10), AE de T. coronopifolia 0.01 %. (T11) AE de T. erecta 0.1 %., (T12),
AE de T. erecta 0.01 %. (F=105.45, gl= 39, p <0 .001).
Con el aceite esencial de T. lucida al 0.1 % se registr la mayor fecundidad, con 362 huevos
puestos en promedio por pareja con respecto a los dems aceites es enciales de Tagetes y en el
testigo y con Tween, (Cuadro 13). Sin embargo, en este mismo tratamiento se present la
menor fertilidad, con el 47.7 % de larvas eclosionadas.
En el tratamiento con el aceite esencial de T. foetidissima al 0.1 %, solo se formaron dos
parejas, en las que no se registr oviposicin (fecundidad) por lo tanto, tampoco fertilidad. Con
el aceite esencial de T. foetidissima al 0.01 % se formaron ocho parejas, con un promedio de
159. 4 huevos por pareja y una fertilidad de 79.6 % (Cuadro 13).
47
Cuadro 13. Efecto de los aceites esenciales de Tagetes incorporados a la dieta, en la fecundidad
y fertilidad de adultos de Copitarsia decolora.
Tratamiento
Testigo
Tween 20
T. filifolia
Valores seguidos de la misma letra en la columna no difieren estadsticamente. (F=12.34, gl=11, p <0.0001).
* No oviposit, Nh, nmero de huevos .
48
6.2.
Sclerotium rolfsii
Durante la evaluacin del efecto de los aceites esenciales sobre el crecimiento micelial de S.
rolfsii, se encontr que el tratamiento con T. filifolia al 0.1 %, inhibi completamente el
crecimiento, por lo que no se incluy en el anlisis estadstico. En los dems tratamientos con
aceites esenciales se encontr que la tasa de crecimiento vari entre aislamientos de S. rolfsii y
entre tratamientos con aceites esenciales de Tagetes (Cuadro 14). El comportamiento fue
selectivo, en la mayora de los casos fue menor con respecto al testigo (Cuadro 14). El
porcentaje de reduccin en la tasa de crecimiento con respecto al testigo (Cuadro 15), tambin
vari. Con T. coronopifolia se present en ocho aislamientos una inhibicin mayor al 50 %. En
siete aislamientos con T. lucida hubo una inhibicin mayor al 50 %. Con T. foetidissima slo en
cuatro aislamientos se mostr una inhibicin mayor al 50 %. T. erecta hubo una inhibicin
mayor al 50 % en cinco de los 10 aislamientos.
Los aislamientos ms sensibles fueron el 4, 5 y el 27 que tuvieron inhibiciones mayores al 50 %
con los aceites de las cuatro especies de Tagetes. Los aislamientos menos sensibles fueron el 1
y 12 que tuvieron inhibiciones menores al 50 %, en tres de las cuatro especies de Tagetes en el
aislamiento 1 y en todas las especies en el aislamiento 12.
49
Cuadro 14. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1%, sobre la tasa de crecimiento
micelial (cm2/da) de diferentes aislamientos de Sclerotium rolfsii.
A
T1
T2
T4
T5
T6
T7
F
gl
P
DMS
1
15.1 a 11.1 b
6.2 c 9.2 bc 10.3 b
7.7 35 <0.0001 3.9
16.4 a
4
11.7 a 12.1 a 2.9 bc
5.3 b
1.9 c 3.7 bc 29.4 35 <0.0001 2.5
5
15.2 a 11.1 b
4.3 d
4.2 d 5.3 dc 6.1 c
60.4 35 <0.0001 1.7
12 14.3 a 15.1 a 13.5 a
8.5 b 13.2 a 9.7 b
5.95 35 0.0006 3.2
16 12.5 a
8.5 b
1.6 d
0.1 e
0.1 e
3.0 c 109.1 35 <0.0001 1.4
17 14.0 ab 15.9 a 13.7 ab 4.7 c
6.2 c 11.2 b 13.1 35 <0.0001 3.6
18 14.9 a 16.0 a
9.5 b
7.4 b
6.4 c
5.7 c
26.4 35 <0.0001 2.5
20 15.2 a 14.0 ab 8.0 de 11.5 bc 4.9 e 10.0 dc 10.9 35 <0.0001 3.4
25 15.1 a 15.7 a
8.7 b
0.1 d
2.8 c 10.3 b 109.4 35 <0.0001 1.7
27 15.4 a 11.9 b
3.2 c
3.5 c
0.8 c
3.5 c
37.5 35 <0.0001 2.7
T2
7.9
-3.4*
27.0
-5.6
32.0
-13.6
-7.4
7.9
-4.0
22.7
T4
32.3
75.2
71.7
5.6
87.2
2.1
36.2
47.4
42.4
79.2
T5
62.2
54.7
72.4
40.6
99.2
66.4
50.3
24.3
99.3
77.3
T6
43.9
83.8
65.1
7.7
99.2
55.7
57.0
67.8
81.5
94.8
T7
37.2
68.4
59.9
32.2
76.0
20.0
61.7
34.2
31.8
77.3
(A), aislamiento de S. rolfsii; (T2), Testigo Tween 20 al 0.02 %, (T4), T. foetidissima , (T5), T. lucida, (T6), T.
coronopifolia, (T7), T. erecta.
*Resultado con signo negativo, significa efecto estimulatorio en la tasa de crecimiento .
50
Cuadro 16. Efecto de los extractos acuosos (EA) de Tagetes al 2 % sobre la tasa de crecimiento
micelial (cm2/da) de Sclerotium rolfsii.
A
1
4
5
12
16
17
18
20
25
27
T1
16.4 a
11.7 a
15.2 a
14.3 a
12.5 a
14.0 a
14.9 a
15.2 a
15.1 a
15.4 a
T3
10.4 b
10.3 a
10.2 b
12.0 b
5.6 c
10.4 b
0.6 d
9.2 d
8.8 c
8.1 b
T4
9.9 c
2.0 c
8.6 c
10.9 c
2.6 d
10.9 b
1.9 c
9.2 d
10.5 b
1.6 e
T6
7.7 d
7.4 b
7.0 d
11.0 c
5.0 c
11.3 b
7.8 b
9.8 c
2.6 e
5.8 d
T7
9.8 c
7.0 b
7.2 d
10.9 c
6.7 b
9.9 b
0.01 e
10.6 b
4.5 d
7.4 c
F
96.7
21.9
220.8
52.2
93.6
35.0
20.5
20.3
15.9
98.9
gl
29
29
29
29
29
29
29
29
29
29
P
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
0.0211
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
DMS
0.3
2.3
0.7
0.2
1.1
2.5
0.1
0.3
0.2
0.5
51
Cuadro 17. Porcentaje de reduccin (RRT) de la tasa de crecimiento micelial de Sclerotium rolfsii
en los tratamientos con extractos acuosos de Tagetes respecto al tratamiento testigo.
T3
T4
T6
T7
36.6
39.6
53.0
40.2
12.0
82.9
36.8
40.2
32.9
43.4
53.9
52.6
12
16.1
23.8
23.1
23.8
16
55.2
79.2
60.0
46.4
17
25.7
22.1
19.3
29.3
18
96.0
87.2
47.7
99.9
20
39.5
39.5
35.5
30.3
25
41.7
30.5
82.8
70.2
27
47.4
89.6
62.3
51.9
(A), aislamiento de S. rolfsii; (T3), T. filifolia, (T4), T. fo etidissima, (T6), T. co ronopifolia, (T7), T. erecta .
En el tratamiento con aceite esencial de T. filifolia, aunque inhibi a los ocho das el crecimiento
micelial, al incubarse por 30 das se present crecimiento micelial y produccin de esclerocios,
por lo que el efecto fue fungisttico.
En general la produccin de esclerocios fue menor con los tratamientos con aceites esenciales
que en el testigo y Tween (Cuadro 18). A excepcin del aislamiento 5 que con el tratamiento de
T. erecta produjo una mayor cantidad de esclerocios con respecto al tratamiento con Tween. En
algunos de ellos, aunque se registra crecimiento micelial no se producen esclerocios como
ocurri con el tratamiento con aceite esencial de T. erecta que inhibe la produccin de
esclerocios en tres aislamientos y el aceite esencial de T. lucida que inhibi la produccin de
esclerocios en los aislamientos 16 y 20. En el caso del tratamiento con aceite de T. foetidissima
en el aislamiento 20 no hubo formacin de esclerocios.
52
Cuadro 18. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1 % sobre la produccin de
esclerocios de Sclerotium rolfsii.
A
T1
1 124 a
4
22 b
5
430 a
12 903 a
16 76 a
17 468 a
18 273 a
20 25 b
25 26 a
27 51 a
T2
117 a
36 a
103 c
720 b
60 b
316 b
225 b
18 bc
19 ab
40 ab
T3
T4
45 c 10e
24 b 26 b
37 e 66 d
28 f 119 d
9d
7d
36 f 47 f
57 e 72 d
10 c
*
11 b 9 bc
38 b 51 a
T5
T6
T7
F
gl
P
DMS
33 d 6 e
49 c
36.5 41 <0.0001
9
16 b 16 b
*
33.0 35 <0.0001 12
35 e 23 f 120 b 12.27 41 <0.0001 12
70 e 254 c 127 d 72.9 41 <0.0001 35
*
28 c 14 d 50.7 35 <0.0001
7
97 e 119 d 194 c 15.3 41 <0.0001 23
90 c 45 f
*
56.3 35 <0.0001
5
*
63 a 15 bc 27.1 29 <0.0001
9
13 b 18 bc 2 c
36.9 41 <0.0001
7
31 b 35 b
*
41.5 35 <0.0001 11
En los tratamientos con extractos acuosos de las especies de Tagetes, el ms sobresaliente fue
el de T. lucida ya que se registr una inhibicin completa del crecimiento, y se registr
produccin de esclerocios. Este tratamiento no se incluye en el anlisis estadstico por lo que no
aparece en el Cuadro 19. Los aislamientos 4 y 18 fueron susceptibles a los extractos acuosos de
las cinco especies ya que no se produjeron esclerocios. Los tratamientos extractos ac uosos de
T. filifolia y T. coronopifolia inhibieron la produccin de esclerocios en los aislamientos 25 y 16,
respectivamente. En algunos aislamientos se registra un efecto estimulatorio en la produccin
de esclerocios respecto al tratamiento testigo, como en el caso del tratamiento de T. erecta y T.
filifolia en tres aislamientos, T. coronopifolia y T. foetidissima en dos aislamientos donde la
produccin de esclerocios es mayor que en el tratamiento testigo.
53
Cuadro 19. Efecto de los extractos acuosos (EA) de Tagetes al 2 % sobre la produccin de
esclerocios de Sclerotium rolfsii.
A
1
4
5
12
16
17
18
20
25
27
T1
124 c
22
430 a
903 b
76 a
468 c
273
25 c
26 b
51 c
T3
175 b
*
164 c
523 c
4b
307 d
*
54 b
*
90 a
T4
227 a
*
117 d
565 c
4b
624 b
*
27 c
4c
14 d
T6
T7
77 d
73 d
*
*
114 d 242 b
886 b 1177 a
*
1b
276 e 799 a
*
*
31 c
89 a
31 a
2c
66 b
7d
F
26.0
*
40.2
43.7
80.1
28.9
*
44.0
13.2
73.5
gl P
DMS
29 <0.0001 25
29
29
23
29
<0.0001
<0.0001
<0.0001
<0.0001
19
115
12
36
29 <0.0001
23 <0.0001
29 <0.0001
14
3
7
Los tratamientos testigo, Tween y aceite esencial de T. erecta, as como los tratamientos con
extractos acuosos de las especies T. filifolia, T. foetidissima, T. coronopifolia y T. erecta no
afectaron la viabilidad de los esclerocios de los 10 aislamientos de S. rolfsii. En los aislamientos
1 y 12, los tratamientos con aceites esenciales de las cinco especies de Tagetes no afectaron la
viabilidad de los esclerocios (Cuadro 20), dado que el 100 % de los esclerocios germin. El
tratamiento con
aislamientos evaluados de S. rolfsii; con registros en los aislamientos 5, 18, 25, 16 y 20 de 20,
40, 50, 80 y 90 % de reduccin en la viabilidad de los esclerocios respectivamente.
54
Cuadro 20. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1 % sobre el porcentaje de
viabilidad de esclerocios de Sclerotium rolfsii.
A
1
4
5
12
16
17
18
20
25
27
T3
100
100
80
100
20
100
60
10
50
100
T4
100
90
80
100
30
100
100
*
100
100
T5
100
100
90
100
*
95
100
*
100
100
T6
100
55
100
100
75
100
100
25
100
75
(A), Aislamientos de S. rolfsii, (T3), T. filifolia (T4), T. fo etidissima, (T5), T. lucida, (T6), T. coronopifolia.
(*), no produjo esclerocios, por lo que no se eval u.
55
6.3.
Monilia fructicola
6.3.1. Crecimiento micelial
Cuadro 21. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1 % sobre la tasa de crecimiento
micelial (cm2/da) de Monilia fructicola.
Tratamiento
Tasa de crecimiento (cm2/da) RRT (%)
En los tratamientos con extractos acuosos de Tagetes el tratamiento de T. lucida inhibi por
completo el crecimiento (efecto fungicida), por lo que no se incluy en el anlisis estadstico
(Cuadro 22). Solo el tratamiento con extractos acuosos de T. coronopifolia present diferencias
estadsticamente significativas con respecto al testigo, con una reduccin del 44 % en la tasa de
crecimiento.
56
Cuadro 22. Efecto de los extractos acuosos de Tagetes al 2 % sobre la tasa de crecimiento
micelial (cm2/da) de Monilia fructicola.
Tratamiento
Tasa de crecimiento (cm2/da) RRT (%)
T. erecta
-4.8*
8.8 a
T. foetidissima
8.5 a
-1.2
Testigo (sin EA)
8.4 a
T. filifolia
8.1 a
3.6
T. coronopifolia
4.7 b
44.0
DMS
0.9
Los tratamientos con aceites esenciales al 0.1 % de las cinco especies de Tagetes inhibieron
completamente la esporulacin de M. fructicola, as como con los tratamientos con extractos
acuosos al 2 % de las especies de T. foetidissima, T. lucida y T. erecta. Por lo que, no se
incluyeron en el anlisis estadstico ni en el Cuadro 23.
T. filifolia
2.34 X106 a 4
T. coronopifolia
3.50 X105 b 4
Testigo (sin EA)
1.55 X105 c 4
Testigo con Tween 20 (0.02 %) 1.48 X105 c 4
DMS
1.94x 105
Valores seguidos de la misma letra en la columna no difieren estadsticamente. (F=6.18, gl=35, p <0.0001).
57
6.3.3. Germinacin
En el Cuadro 24, no se incluyeron las especies donde hubo inhibicin total de la esporulacin.
La germinacin desde las primeras horas evaluadas, con el tratamiento con extractos acuosos
de T. coronopifolia, fue significativamente mayor con respecto al testigo, pero sin diferencias
respecto al testigo con Tween. A las cuatro horas, se registr un 100 % de germinacin con el
tratamiento con extractos acuosos de T. coronopifolia, y en un 87 % en T. filifolia; mientras que
en el testigo y con el tratamiento con Tween, la germinacin fue alrededor del 40 y 60 %, a
partir de las 6 horas de evaluacin, la germinacin en todos los tratamientos es
aproximadamente del 90 %.
Germinacin (%)
2 hrs 4 hrs 6 hrs 8 hrs
T. coronopifolia
60 a 100 a 100 a 100 a
T. filifolia
41 b 87 a 90 b 100 a
Testigo con Tween 20 (0.02 %) 36 ab 64 ab 86 b 100 a
Testigo (sin EA)
30 b 36 b 92 ab 97 b
DMS
4.2
4.2
4.2
1.04
n
4
4
4
4
58
Cuadro 25. Resumen de los efectos observados de los aceites esenciales y extractos acuosos de
las especies de Tagetes sobre los organismos modelo.
Modelo
Efecto sobre:
Peso
Larvas Mortalidad
Duracin
Peso
Copitarsia Pupas Mortalidad
(>30%)
decolora
Duracin
Fecundidad
(menor)
Adultos
Fertilidad
(<50%)
Crecimiento
micelial
Sclerotium rolfsii
Esclerocios
Viabilidad
Crecimiento
micelial
Monilia fructicola
Esporulacin
Germinacin
T.
T.
T.
T.
T.
filifolia foetidissima lucida coronopifolia erecta
AE EA AE
EA AE EA AE
EA AE EA
-- *
X
*
X *
-*
-- *
X *
X
*
X *
-*
-- *
X *
X
*
X *
X
*
X *
-- *
-*
-- *
-*
-- *
X *
X
*
-- *
X
*
X *
X
X
*
*
X
--
*
*
X
--
*
*
X
X
*
*
X
X
*
*
--
--
--
--
X
X
X
X
---
X
X
X
X
---
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
-X
X
-X
X
---
X
*
X
--
X
*
X
X
X
*
X
X
X
*
X
--
X
*
X
X
AE Aceite esencial, EA Extracto acuoso. (X) con efecto significativo, (--) sin efecto, (*) No se evalu.
En el Cuadro 25 se sintetizan todos los resultados obtenidos, la especie T. filifolia tuvo efecto
insecticida en forma de aceite esencial y efecto fungisttico, como extracto acuoso y aceite
esencial. La especie T. lucida, present efecto fungicida en forma de aceite esencial y extracto
acuoso, las especies T. foetidissima, T. coronopifolia y T. erecta presentaron efectos
insectistticos y fungicidas en forma de extractos acuosos y aceites esenciales.
59
7. DISCUSIN
7.1.
Copitarsia decolora
La supervivencia de las larvas de C. decolora fue afectada por los tratamientos con aceites
esenciales de las especies de Tagetes y se redujo la duracin de las etapas larval y pupal. Esto
pudo ser el resultado de la exposicin prolongada a los metabolitos presentes en los aceites
esenciales, que pudieron haber causado un efecto toxico crnico. Como lo menciona Pavela et
al. (2008), el tiempo de desarrollo de los insectos puede acortarse o alargarse, dependiendo de
la naturaleza qumica de la sustancia involucrada y de la cantidad ingerida cuando se realizan
bioensayos que involucran la ingestin de las sustancias.
Sun et al. (2000) sugieren que algunos compuestos de origen vegetal actan como reguladores
de crecimiento en los insectos, interfieren en procesos fisiolgicos, y por lo tanto en el
desarrollo ya sea acortndolo o retardndolo y puede que la madurez y funcionalidad se vea
afectada. Al respecto, Foster y Howard (1999), mencionan que un desarrollo limitado en los
insectos puede influir negativamente en sus etapas posteriores de vida, como en la etapa
reproductiva, atraccin de la pareja, copula, fecundidad y fertilidad.
Los principales componentes qumicos en los aceites esenciales de Tagetes son terpenos
(Bakkali et al. 2008), por lo que probablemente los efectos en el desarrollo de C. decolora se
deban a estos compuestos acten bloqueando los receptores de ecdisona (hormona de la
muda), la cual tiene una estructura parecida al terpeno (Rodrguez, 2003). Sin embargo, aunque
no se observaron deformaciones en larvas o pupas de C. decolora no se descarta que hubiera
otros efectos nocivos no apreciados.
60
La duracin del estadio larval y pupal registrados en los tratamientos incluidos el control y el
Tween coinciden con los reportados por More no y Serna (2006), quienes registran una duracin
del estadio larval entre 17 y 31 das, mientras que la etapa pupal es entre 15 y 21 das. Sin
embargo con los tratamientos de Tagetes se registraron diferencias estadsticamente
significativas respecto a los tratamientos testigo y testigo con Tween, fueron ms cortos los
estados larval y pupal en los tratamientos con aceites esenciales de Tagetes.
La reduccin en la fecundidad y fertilidad pudiera estar relacionada a un desarrollo anormal del
sistema reproductivo en los insectos tratados, al estar en contacto e ingiriendo los metabolitos
presentes en los aceites esenciales durante todo su desarrollo. Como lo mencionan Smagghe et
al. (1996), el tebufenozido, un regulador sinttico de crecimiento afect en he mbras de
lepidpteros, la ovulacin y la oviposicin a travs de la reabsorcin de las ovariolas. La
estructura qumica del tebufenozido tiene dos anillos aromticos y en las sustancias de
naturaleza terpnica cuentan solo con un anillo aromtico, por lo que puede que no acten de
manera similar.
El efecto de reduccin o alargamiento en el tiempo de desarrollo de un insecto por parte de las
sustancias vegetales, es un efecto biolgico deseable, ya que impedira por ejemplo que los
insectos alcancen la madurez reproductiva al mismo tiempo y por consiguiente se afectara su
xito reproductivo; por ejemplo, teniendo una menor cantidad de hembras por macho en edad
reproductiva. Una sustancia vegetal con este tipo de efecto biolgico podra incorporarse en un
programa de manejo integrado de plagas, por las caractersticas de los productos naturales que
son bioracionales, altamente selectivos y generalmente menos txicos que los insecticidas
convencionales (Sun et al., 2000).
61
Por otra parte los resultados aqu obtenidos indican la potencialidad de T. filifolia como
insecticida vegetal, quedando pendiente de realizar ensayos de campo para el control de C.
decolora.
7.2.
Sclerotium rolfsii
El efecto fungicida de los tratamientos con aceite esencial de T. filifolia y el extracto acuoso de
T. lucida sobre los diez aislamientos de S. rolfsii coinciden con los reportados por MontesBelmont et al (2006 b), quienes reportan actividad fungicida de otras especies vegetales, tales
como epazote, clavo y canela, pero ellos probaron la concentracin de 5 % sobre S. rolfsii.
Tambin
62
Montes-Belmont et al., (2006 a) reportan que metabolitos como el carvacrol y eugenol, tienen
actividad fungicida a bajas concentraciones; por lo que, el efecto fungicida de T. lucida
observado en el presente trabajo pudiera estar dado por el contenido de metil eugenol. Montes
y Prados (2006) mencionan que en Pimienta dioica y Syzgium aromaticum el eugenol es
responsable de la inhibicin del crecimiento micelial de S. cepivorum, sustancia que
previamente ha sido reportada como inhibidora de procesos enzimticos (Pepeljnjak et al.
2003).
Aunque se ha demostrado ya la actividad antifngica de los aceites esenciales, el mecanismo de
accin no est bien documentado, Romagnoli et al. (2005), revisaron en el microscopio
electrnico de barrido estructuras de B. cinerea tratadas con aceite esencial de T. patula, y
observaron alteraciones en la membrana, degeneracin mitocondrial, degeneracin y
rompimiento de la pared celular, disolucin parcial del ncleo y retculo endoplsmico.
La naturaleza lipoflica de los compuestos voltiles presentes en las especies de Tagetes sugiere
que estos compuestos pudieron ser absorbidos por las hifas de S. rolfsii, penetraron en la
membrana plasmtica del patgeno y modificaron la sntesis de enzimas requeridas en sus
procesos de desarrollo del patgeno como sugieren Rasooli et al. (2006).
La reduccin en la produccin de esclerocios fue reportada previamente por Montes y Prados
en 2006, en donde mencionan que polvos de Bougainvillea spectabilis redujeron la produccin
de esclerocios de S. cepivorum. Sin embargo, tambin mencionan un efecto contrario con los
tratamientos de polvos de Medicago sativa, Petroselinium crispum, Piper nigrum y Origanum
vulgare, reportan un incremento en la produccin de esclerocios con respecto al tratamiento
testigo.
63
64
7.3.
Monilia fructicola
El efecto fungicida del extracto acuoso de T. lucida sobre M. fructicola, puede estar relacionado
con el contenido de metil eugenol que esta reportado como inhibidor de procesos enzimticos
que interfieren en el desarrollo del patgeno como ha sido reportado por Pepeljnjak et al.
2003.
En los dems tratamientos con aceites esenciales se registr crecimiento micelial, pero no hubo
produccin de esporas, al igual que con los tratamientos con extractos acuosos de T.
foetidissima y T. erecta. Al respecto Bravo et al. (1998) y Montes, (1997), mencionan que la
interaccin de las sustancias y el patgeno genera una gran variedad de respuestas. Algunos
extractos pueden ser inhibidores para un hongo y estimulantes para otro, o en un mismo
patgeno, inhibir en una etapa de crecimiento y en otra puede ser estimulatorio, como ocurri
con los tratamientos con extractos acuosos de T. filifolia y T. coronopifolia, en donde se
produjeron ms esporas que en el tratamiento testigo y hubo una germinacin ms rpida.
Compuestos como el geraniol, eugenol, timol, borneol, linalol, anetol, citronelol y citral han sido
reportados con efectos fungicidas y fungistticos (Cuadro 2), algunos de estos compuestos
estn presentes en especies de Tagetes, principalmente T. minuta, T. filifolia, T. foetidissima y
T. lucida (Cuadro 2) de ah que T. filifolia y T. lucida presentaron la mayor actividad biolgica en
los dos patgenos utilizados como modelos de estudio en el presente trabajo.
Las concentraciones de aceites esenciales y extractos acuosos evaluadas permiten pensar en
experimentar en trabajos posteriores con combinaciones de los mejores tratamientos , ya que
para extractos acuosos con otras especies vegetales y de Tagetes reportan concentraciones
superiores al 5 %.
65
8. CONCLUSIONES
66
Los aceites esenciales de las cinco especies de Tagetes tuvieron efecto fungisttico en el
crecimiento de M. fructicola e inhibieron la esporulacin.
Los extractos acuosos de T. foetidissima y T. erecta no tuvieron efecto en la inhibicin del
crecimiento micelial de M. fructicola, pero inhibieron su esporulacin.
El extracto acuoso de T. filifolia no tuvo efecto en la inhibicin del crecimiento micelial de M.
fructicola, pero estimul la esporulacin y germinacin.
El extracto acuoso de T. coronopifolia tuvo efecto en la inhibicin del crecimiento micelial de
M. fructicola, pero estimul la esporulacin y germinacin.
67
9. LITERATURA CITADA
Abad, M. J., Bermejo, P., Palomino, S. S., Chiriboga, X. y Carrasco, L. 1999. Antiviral activity of
some South American medicinal plants. Phytotherapy Research. 13: 142-146.
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