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    Practica 4 Tincion de Gram

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    Blänchar Kankuychukwa
    Este documento presenta los resultados de un laboratorio de microbiología sobre la tinción de Gram. Se realizaron extendidos de 6 bacterias (S. aureus, estreptococos, Bacillus, E. coli, Klebsiella, Micrococcus) y se tiñeron con el método de Gram. Las bacterias Gram positivas se tiñeron de violeta y las Gram negativas de rosado. El documento describe la morfología, agrupación y otras características de cada bacteria.

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    Este documento presenta los resultados de un laboratorio de microbiología sobre la tinción de Gram. Se realizaron extendidos de 6 bacterias (S. aureus, estreptococos, Bacillus, E. coli, Klebsiella, Micrococcus) y se tiñeron con el método de Gram. Las bacterias Gram positivas se tiñeron de violeta y las Gram negativas de rosado. El documento describe la morfología, agrupación y otras características de cada bacteria.

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    tincion de gram

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    Este documento presenta los resultados de un laboratorio de microbiología sobre la tinción de Gram. Se realizaron extendidos de 6 bacterias (S. aureus, estreptococos, Bacillus, E. coli, Klebsiella, Micrococcus) y se tiñeron con el método de Gram. Las bacterias Gram positivas se tiñeron de violeta y las Gram negativas de rosado. El documento describe la morfología, agrupación y otras características de cada bacteria.

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    Este documento presenta los resultados de un laboratorio de microbiología sobre la tinción de Gram. Se realizaron extendidos de 6 bacterias (S. aureus, estreptococos, Bacillus, E. coli, Klebsiella, Micrococcus) y se tiñeron con el método de Gram. Las bacterias Gram positivas se tiñeron de violeta y las Gram negativas de rosado. El documento describe la morfología, agrupación y otras características de cada bacteria.

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    de 6

    UNIVERSIDAD POPULAR DELCESAR

    PROMAGA: LIC. EN CIENCIAS NATURALES


    AREA: LABORATORIO
    MATERIA: MICROBIOLOGIA
    PROF. IVONNE ACOSTA NIEVES
    Nombres y apellidos: Nataly Hernndez Borrego, Karolay Jimnez Martnez, Alberto
    Jimnez Romero, Jos Miranda Camacho, Yenifer Valds Gonzlez.
    Grupo (02)
    Fecha de Entrega: 21/05/15
    ACTIVIDAD PRCTICA N 4
    OBJETIVOS GENERAL
    Preparar
    correctamente
    un
    extendido para utilizarlo en la
    coloracin y establecer una
    clara diferencia entre una
    bacteria Gram positiva y Gram
    negativa dependiendo de su
    pared celular en la tincin de
    Gram.
    OBJETIVOS ESPECFICO
    Aprender
    a
    utilizar
    correctamente cada uno de los
    reactivos de la tincin de Gram.
    Estudiar
    las
    caractersticas
    morfolgicas y agrupaciones de
    las bacterias.
    Observar una bacteria Gram
    positiva y Gram negativa y
    diferenciarla.
    INTRODUCCION
    Para visualizar mejor la morfologa y
    agrupacin de las clulas bacterianas,
    es indispensable realizar el extendido
    para colorear de manera correcta, ya
    que a pesar de que es un
    procedimiento supremamente sencillo,
    de obviar un solo as podramos
    obtener coloraciones denominadas
    Gramvariables, esto es un Gram de
    difcil interpretacin. Por otro lado, la
    coloracin de Gram se convierte en el
    primer paso para el diagnostico
    microbiolgico.

    El tener claridad sobre la morfologa y


    la agrupacin de las bacterias es de
    suma importancia ya que la coloracin
    de Gram se convierte en una
    herramienta
    valiossima
    para
    el
    diagnostico preliminar y presuntivo de
    la bacteria observada, ya que nos
    puede dar una idea del posible agente
    infeccioso que esta causando la
    patologa.
    PALABRAS CLAVES
    Tincin, extendido, bacterias, Gram
    positivas,
    Gram
    negativa,
    Gram
    variable.
    MATERIALES Y METODOS
    Cultivos
    de
    S.
    ureos,
    Estreptococos, Basillus, E. coli,
    Klebsiella, Micrococcus
    Porta objetos
    Cristal violeta
    lugol
    alcohol cetona
    safranina
    solucin salina
    asa redonda
    mechero
    microscopio

    1. Confeccin Del Frotis Para


    Colorear: abrimos una caja
    Petri con el cultivo sembrado,
    en este caso fueron 6 cultivos
    (S.
    ureos,
    Estreptococos,

    Basillus, E. coli, Klebsiella,


    Micrococcus) tomamos una
    pequea muestra y la diluimos
    en una gota de solucin salina
    en un porta objeto y realizamos
    un extendido; fijamos la muestra
    flameando de 2 a 3 veces con el
    mechero de Bunsen.
    2. Coloracin de Gram: el frotis
    luego de estar fijado le
    realizamos la siguiente muestra:
    a) Cristal violeta: 1 minuto
    b) Lugol: 1 minuto
    c) Alcohol
    acetona:
    30
    segundos
    d) Safranina: 1 minuto
    Esperamos que seque la muestra a
    temperatura ambiente y visualizamos
    en el microscopio.
    RESULTADOS
    1. S. AUREOS
    Bacteri
    a
    S.
    ureos

    5. KLEBSIELLA

    6. MICROCOCCUS

    Morfologa

    Agrupacin

    Tincin
    de
    Gram

    Cocos

    Estafilococo
    s

    Gram
    variable

    2. ESTREPTOCOCCOS

    3. BACILLUS

    4. E. COLI

    DISCUSIN
    Identificacin de las bacterias Gram
    positivas.
    Examinando el portaobjetos bajo el
    microscopio ptico, las bacterias Gram
    positivas se vern violetas debido al
    cristal violeta atrapado en sus gruesas
    paredes celulares. que tienen una
    gruesa capa de peptidoglicano y que
    presentan cidos teicoicos en su
    superficie.
    Identificacin de las bacterias Gram
    negativas.
    Las
    bacterias
    Gram-negativas
    presentan dos membranas lipdicas
    entre las que se localiza una fina pared
    celular de peptidoglicano, lo que hace
    que estas no absorban el cristal violeta,

    y se descolorizan con el alcohol


    acetona, tomando como nico color el
    fucsia o rosado al agregarle la fucsina o
    safranina.
    1. S. AUREOS
    Una bacteria Gram variable, es
    aquella que puede tomar tanto color
    violeta
    como
    fucsia
    luego
    de
    practicrsele tincin de Gram; puede
    ser el resultado de un proceso errneo,
    afectando as la certeza de los
    resultados. Sin embargo, la definicin
    ms aceptada de lo que en s es una
    bacteria Gram variable es, que es una
    bacteria inicialmente Gram positiva que
    luego de ser cultivada o tratada se
    convierta en Gram negativa. Esto se
    debe a distinto factores que contienen
    ste tipo de bacterias que las hace
    variable.
    Bacteria S. ureos:

    Son cocos inmviles, Gram positivos,


    se observa asociacin en racimos
    irregulares (similar an racimo de
    uvas), carecen de flagelos; son Gram
    positivas ya que el peptidoglucano
    forma aproximadamente el 50% del
    peso de la pared celular.
    Esta bacteria tiene un amplio espectro
    de factores que contribuyen para
    producir infecciones y enfermedad.
    Algunas cepas de S. aureus pueden
    producir un pigmento carotenoide que
    les da un color amarillo, el color es mas
    evidente en agares nutritivos.
    Las cepas habituales de S. aureus son
    resistentes a la penicilina, dejando
    como los antibiticos ms eficaces para

    combatirlos a los amino glucsidos, las


    cefalosporinas, la oxacilina o la
    nafcilina.
    2. ESTREPTOCOCOS
    Es un grupo de bacterias formado por
    cocos Gram positivas, Estas bacterias
    crecen en cadenas o pares, donde
    cada divisin celular ocurre a lo largo
    de un eje.

    La mayora de las especies de


    Estreptococos
    son
    anaerobios
    facultativos (pueden adaptarse para
    crecer tanto en presencia como en
    ausencia de oxgeno), y algunos crecen
    nicamente
    en
    una
    atmsfera
    enriquecida con dixido de carbono.
    Sus exigencias nutricionales son
    complejas, y su aislamiento requiere el
    uso de medios enriquecidos con sangre
    o suero. Son capaces de fermentar
    carbohidratos
    produciendo
    cido
    lctico.
    3. BACILLUS
    Es una bacterias en forma de bastn y
    Gram positiva (posee una gruesa capa
    de peptidoglicano),

    Son aerobios estrictos o anaerobios


    facultativos.
    En
    condiciones

    estresantes forman una endosporas,


    Viven en el suelo, agua del mar y ros,
    aparte de alimentos que contaminan
    con
    su
    presencia.
    Aunque
    generalmente son mviles, con flagelos
    peritricos, algunas especies de inters
    sanitario son inmviles. Hay especies
    productoras de antibiticos.
    4. E. COLI
    La Escherichia coli (E. coli) es una
    bacteria Gram negativa, que no forman
    esporas, son mviles por flagelos.

    Se encuentra en los intestinos de los


    animales y las personas. Existen
    muchas cepas de E. coli, y la mayora
    resultan inofensivas, sin embargo,
    existe una variedad peligrosa,, que
    produce una poderosa toxina (Shiga)
    que
    puede
    originar
    graves
    enfermedades, como el Sndrome
    Urmico
    Hemoltico,
    que
    puede
    desencadenar un fallo renal.
    5. KLEBSIELLA
    La bacteria Klebsiella es un bacilo
    Gram
    negativo,
    es
    anaerbica
    facultativa, inmvil, con una prominente
    capsula de polisacridos.

    Las bacterias Klebsiella pueden


    encabezar un amplio rango de estados
    infecciosos, sobre todo neumona.

    Entre ellos, cabe destacar los


    siguientes:
    Klebsiella
    pneumoniae:
    infecciones del tracto urinario,
    septicemia, e infecciones de
    tejidos blandos.
    Klebsiella
    ozaenae:
    rinitis
    atrfica.
    Klebsiella
    rhinoscleromatis:
    infecciones
    en
    vas
    respiratorias,
    causando
    oescleroma.
    6. MICROCOCCUS
    Son bacterias Gram positivas con
    clulas esfricas, tiene una gruesa
    pared celular que puede abarcar tanto
    como el 50% del materia celular. Su
    genoma es rico en guanina y citosina.

    Se encuentran en ambientes diversos,


    incluyendo agua y suelo, tambin se
    encuentran en la piel de los mamferos.
    Son anaerbicos facultativos, aunque
    no forman esporas, las clulas de
    Micrococcus pueden sobrevivir durante
    largos periodos: cultivos no protegidos
    en muestras de suelo han revivido
    despus de estar almacenados en un
    refrigerador durante 10 aos.
    CONCLUSION
    Luego de dado por terminado este
    laboratorio podemos concluir que la
    tincin de Gram es un mtodo muy
    importante ya que permite el estudio de
    las estructuras internas de la clula
    bacteriana,
    tales
    como
    paredes

    celulares. Y estas se diferencian en su


    fundamento; ya que en las Gram
    negativas la capa de peptidoglucano es
    delgada, y por esta razn no sostienen
    el cristal violeta quedando de color
    fucsia y en las Gram positivas es
    gruesa y al agregarles el alcohol cetona
    si sostienen el cristal violeta quedando
    de color azul-violeta.
    INVESTIGACION
    1. los pasos que se deben
    realizar para confeccionar
    correctamente un frotis para
    colorear a partir de cultivos
    slidos,
    lquidos
    y
    secreciones corporales.
    a) En una placa limpia se
    adiciona media gota de
    solucin salina.
    b) Con un haza redonda
    tomamos muestra del cultivo
    puro y se emulsiona en la
    placa.
    c) Se extiende por toda la
    placa de manera uniforme
    d) Fijamos
    el
    extendido
    flamendolo 3 veces y
    dejndolo secar.
    2. Digas los pasos de la
    coloracin Gram.
    a) Para
    confeccionar
    un
    extendido para colorear
    debemos
    seguir
    estos
    pasos:
    b) aadimos cristal violeta
    dejndolo actuar por 60
    segundo, luego enjuagamos
    con
    abundante
    agua
    teniendo en cuenta no daar
    el extendido.
    c) Adicionamos lugol durante
    60 segundos y enjuagamos
    d) Agregamos alcohol cetona
    durante 30 segundos y
    enjuagamos.
    e) Aadimos safranina durante
    60 segundos, enjuagamos y

    ya es posible analizar el
    extendido.
    3. por qu razn no debe sobre
    calentarse el extendido en el
    proceso de su fijacin?
    Al sobrecalentar la muestra se puede
    distorsionar o llegar a causar la muerte
    del microorganismo.
    4. Cul es el paso ms crtico
    en la coloracin Gram y
    porque?
    El paso mas critico es la decoloracin
    del extendido usando alcohol cetona ya
    que solo son 30 segundos que se debe
    dejar actuar, si nos pasamos de ese
    tiempo distorsionaramos la muestra en
    este caso son llamadas Gram variable
    siendo difcil su interpretacin.
    5. Cul es la morfologa tpica
    y la agrupacin de las clulas
    bacterianas?
    COCOS: diplococos estreptococos,
    estafilococos, ttradas y sarcinas.

    BACILOS: diplobacilos, estrectobacilos,


    en v, empalizados y letras chinas.

    ESPIRILO:

    6. Averige que bacterias no se


    tien con la coloracin Gram
    y porque.
    Las micobacterias son las nicas que
    no se tien con la coloracin Gram.
    Con las micobacterias son de genero
    micobacterias, en algunos casos se
    considera como Gram positivas pero no
    parecen encajar en esta categora ya
    que no retienen el colorante cristal
    violeta y se consideran como bacterias
    acido resistentes Gram positivas.
    7. Qu
    es
    la
    bacteria
    pleomorfica?

    Son bacterias que no tienen una


    morfologa definida sino que pueden
    tomar
    una forma u otra. El
    pleomorfismo en biologa es un trmino
    que define la aparicin de dos o ms
    formas estructurales en un organismo.
    WEBGRAFIA
    http://es.slideshare.net/tato762/t
    incin-de-gram-25801593
    http://es.scribd.com/doc/516272
    28/PRACTICA-3-La-Coloracionde-Gram#scribd
    http://tareasmedicina.blogspot.c
    om/2010/08/procedimiento-yanalisis-deresultados_1110.html

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