Manual para la Toma de Muestras

Servicio de Laboratorio de Serologa

Chaso del Valle S.A.

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Tel. +506 220.2323 / 220.0833 Fax +506 290.5981 [email protected]
Apdo. Postal 712-1007 Centro Coln, San Jos, Costa Rica.

ndice
Pginas

1.
2.

Calidad de la Muestras
Tipos de Muestras
a. Suero-Plasma
b. Yema de Huevo
c. Jugo de Carne
d. Leche
e. Otros tipos de muestras
3. Nmero de Muestras
4. Recoleccin de Muestras
5. Separacin del Suero-Plasma
6. Almacenamiento y Congelamiento de Muestras
7. Transporte de Muestras
8. Recepcin de Muestras
9. Muestras Invlidas
10. Anexos

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Calidad de Muestra
La calidad de la muestra puede tener un impacto en el resultado final de la prueba. La mayora de los
laboratorios no pueden seleccionar las muestras que reciben de hay la importancia de su recoleccin,
almacenamiento y transporte.
En muchos casos la formulacin del diluente de muestra puede compensar la calidad de la muestra, sin
embargo contaminaciones por hongos y bacterianas pueden tener efectos adversos a los anticuerpos y
otros componentes protenicos y pueden tener efectos no deseando en el resultado final de la prueba.
Si la muestra es altamente cuestionada en su calidad se recomienda tomar otra muestra fresca si es
posible.

Tipos de Muestras
Suero-Plasma
La muestra de suero se obtiene mediante la separacin fsica de la
sangre, esta se puede obtener mediante centrifugacin o
separacin natural por tiempo.
La apariencia de la muestra debe ser de un color amarillo claro, sin
embargo las pruebas ELISAs pueden trabajan con muestras con
baja hemlisis (color rojo claro) o ruptura de los eritrocitos con
liberacin de hemoglobina al plasma o moderada lipemia (Presencia
de lpidos o grasas en la sangre), este tipo de muestra puede tener
un bajo o ningn impacto en el resultado de la prueba.
No se recomienda utilizar muestras con alta hemlisis o lipemia
gruesa, ya que pueden afectar los resultados.
Se recomienda no enviar muestras con coagulo(s) o residuos de
clulas sanguneas con esto se garantiza la mejor calidad de la
muestra durante su preparacin de la prueba.

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Baja Hemlisis

Alta Hemlisis

Yema de Huevo
Para muestras de yema de huevo se recomienda enviar una unidad o huevo por muestra, la yema ser
recolectada en el laboratorio por medio de una jeringa limpia de tuberculina.

Jugo de Carne
Las muestras de jugo de carne se obtiene mediante la mezcla de una muestra de 25 gramos de carne en
un buffer de 225 ml de agua petonada u otro caldo recomendado en el manual de la prueba, para la
mezcla se puede usar un homogenizador de muestras, una licuadora o mezcla manual de 20 minutos, la
cual permitir homogenizar la muestra significativamente el caldo o buffer.

Leche
Para muestras de leche se obtiene directamente de ordeo o de una recoleccin de un tanque de
almacenamiento, donde haya como mximo la leche recolecta de 150 animales.

Otras tipos de muestras

Las otras muestras como materia fecal, debern recolectarse mediante hisopos estriles y mantenidos en
un medio fresco para la conservacin de las bacterias y humedad de la muestra.

Nmero de Muestras
La cantidad de muestras es muy importante para obtener un resultado estadstico representativo de la
poblacin, no existe un estndar del nmero de muestras, las empresas y veterinarios difieren del nmero
a usar, sin embargo por experiencia mundial de los laboratorios fabricantes de los diagnsticos
recomendamos:

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Pollos
Reproductoras
Monitoreo

Lnea Base Ideal

Enfermedades: IBV, IBD, REO, NDV

Edad :
1 - 3 das de edad
Semanalmente hasta 6 semanas de edad
Cada 2 semanas hasta 16 semanas
Cada 5 semanas hasta salida del Lote
2-3 semanas despus de vacuna viva
5-7 semanas despus de vacuna inactivada
Muestreo: 23 o 30 muestras por Lote

Enfermedades: IBV, IBD, REO, NDV

Edad:
1 - 3 das de edad
Semanalmente hasta 6 semanas de edad
Cada 2 semanas hasta 16 semanas
Cada 5 semanas hasta salida del lote
(1 dia,1 sem, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 14, 16,
20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60)
Muestreo: 23 o 30 muestras por Lote

Enfermedades: CAV
Edad : 6-7 semanas despus de
vacunacin y repetir 30 semanas
Muestreo: 23 o 30 muestras por Lote

la

Enfermedades: AE
Edad : 5 semanas despus de la vacunacin.
Muestreo: 23 o 30 muestras por Lote
Enfermedades: MG, MS, SE
Edad y Muestras:
12 MG:300, MS:100, SE:100 muestras
24 MG:150, MS:100, SE:500 muestras
36 MG:150, MG:100,SE:100 muestras
48 MG:150, MG:100,SE:100 muestras
60 MG:150, MG:100,SE:100 muestras

Engorde
Monitoreo

Lnea Base Ideal

Edad: IBV, IBD, REO, NDV

1-3 das de edad
Edad de Procesamiento (35-42 das)
Muestreo :
23 o 30 muestras por Lote

Edad: IBV, IBD, REO, NDV

1-3 das de edad
Edad de Procesamiento (35-42 das)
Muestreo :
23 muestras por Lote

Enfermedades: CAV, ALJ

Edad :
3 das de edad.
Muestreo:
30 muestras por Lote
Nota: Obtenidos los datos de la lnea base ingresemos estos al software xChek para evaluar el monitoreo.

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Cerdos
Enfermedades: Mhyo, SIV
Hembras: 5 muestras
Machos: 5 muestras
Reemplazos antes y despus del servicio
Lechones: mnimo 10 muestras a las siguientes semanas:
2-4, 6-10, 12-16, 18-20
Enfermedades: PRRS y APP
Adultos: 10-30 muestras
Lechones: 10-30 muestras
Gordos: 10-30 muestras
Mnimo 30 muestras por sitio
Si el 30% de la granja esta infectada un muestro de10 sueros tendra un 95% confiabilidad para detectar
infeccin. Un muestro de 30 sueros incrementa la oportunidad de detectar infecciones menores a 30%

Bovinos
Enfermedades: NEO, IBR, BVD, Mtp, BLV
Si el 30% de la granja esta infectada un muestro de10 sueros tendra un 95% confiabilidad para detectar
infeccin.
El muestro de 30 sueros incrementa la oportunidad de detectar infecciones menores a 30%.

Equinos
Enfermedades: EIA
Muestra individual o 30 sueros para detectar infecciones menores a 30% en finca.

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Recoleccin de Muestras
La recoleccin de muestras debe hacer conforme a las disposiciones del veterinario o al protocolo interno
de cada empresa (ver Anexo 1)
Sin embargo indicamos algunas recomendaciones generales:

1. Muestras adecuadas pueden ser obtenidas usando el sistema de recoleccin de sangre becton
dickinson vacutainer o una aguja y jeringa estril.
2.

3.
4.
5.
6.

Se pide al veterinario que recolecte como mnimo 5 ml de sangre por animal (cerdos, bovinos y equinos) o 2
ml en pollos..
Es importante usar una nueva jeringa para preservar la calidad de la muestra, nunca utilizar la
misma jeringa para recolectar todas las muestras .

Las jeringas que ya han vencido no tienen buena succin y cualquier humedad puede daar las
clulas o alterar la muestra.
Idealmente la vena ms larga que est disponible (segn la especie) permitir el libre flujo de
sangre, debe ser usada como el lugar de recoleccin de muestras de calidad.
Si una aguja y jeringa son usadas en lugar el tubo vacutainer, saque lentamente, no ms rpido
de lo que la sangre pueda fluir naturalmente a travs de de la vena y coloque la muestra en
microtubo para centrfuga.

a.

7.

Si el fluido se detiene, puede ser porque la vena ha colapsado hacia la aguja por un jaln
muy fuerte y de una muestra con alta posibilidades de hemlisis.
Identifique correctamente cada muestra por el nmero de identificacin individual o lote.

Ahora proceda a separar el suero o plasma de la muestra.

Separacin de Suero o Plasma

1.

2.

3.

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5.
6.
7.
8.

Si la muestra fue obtenida por jeringa coloque la muestra recolectada en tubo de vidrio o plstico estril o
en un microtubo para centrfuga de 1 y 2 ml (preferiblemente en caso de muestras de pollos), si la muestra
es recolectada en un tubo vacuteiner proceda a separar el suero.
La separacin de la muestra mediante dos formas:
a. Separacin Natrual: Dejar las muestras a temperatura ambiente entre 4 o 5 horas para que el
suero se separe de la sangre, a una inclinacin de 45 grados preferiblemente. (Esto debe hacerse
durante las 24 horas siguientes de la recoleccin de muestra).
b. Separacin por Centrifuga: Centrifugar unos 5 minutos a 2000 rpm es suficiente (la velocidad
tambin depende de la calidad del tubo)
Una vez separado el suero de la sangre se recomienda colocarlo en microtubo para centrfuga de 1 y 2 ml o
tubo diferente estril con una pipeta de 10l o pipeta desechables de 100l, igual que las jeringas utilizar una
punta de pipeta o pipeta desechable por muestra.
Si el suero esta con hemlisis mejor centrifugar para separar el suero (especialmente en cerdos)

Se recomienda no enviar muestras con coagulo(s) o residuos de clulas sanguneas con esto se
garantiza la mejor calidad de la muestra durante su preparacin de la prueba.
El suero se puede refrigerar a 5C por 2 das mximo o congelar a -20C por 3 meses .
Usar hielera o maletn trmico con bolsas de hielo seco para el transporte de la muestra al laboratorio para
mantener una temperatura en 2C Y 8C.
El laboratorio podr diagnosticar con mejor calidad las pruebas Serolgicas deseadas.

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Almacenamiento y Congelacin de Muestras

El suero , la leche y el Jugo de Carne se pueden refrigerar a 5C por 2 das mximo o congelar a -20C por 3 meses,
en caso de otras muestras como hisopos de materia fecal se recomienda refrigerar a 5C y no congelar y enviarla lo
ms rapido posible al laboratorio.

Transporte de Muestras
Para el transporte de la muestra al laboratorio debe usarse una hielera o un maletn trmico con bolsas de hielo seco
para mantener una temperatura en 2C Y 8C, se recomienda sellar lo mejor posible el embalaje de transporte.

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Recepcin de Muestras
Para la recepcin de muestra es necesario llenar el Formulario de Recoleccin de Muestra, el objetivo de
este formulario es ingresar la mayor cantidad de informacin del lote o del grupo de muestras para poder
llevar un control estadstico verdadero.

Esta informacin se ingresa sin costo alguno a la base de datos por el personal de laboratorio, pero si
propietario de las muestras considera que esta informacin es confidencial el puede ingresarla
posteriormente cuando le lleguen la base de datos.
Datos Bsicos
Aqu se ingresara el Nombre del Cliente, Fecha de Entrega de las muestras, Enfermedades a diagnosticar
y el nmero de muestras. Esta informacin se necesaria para poder realizar el diagnostico, si falta alguna
de estas casillas NO se puede recibir las muestras.
Datos Caso
Los datos de esta seccin van a permitir al veterinario o la gerencia de la empresa identificar y localizar
los datos del muestreo especfico en la base de datos as como facilitar a crear la Lnea Base, si estos
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datos no se incluyen podr dificultar identificar los datos en el tiempo como limitar el uso de la base de
datos.
1.

Nmero de Caso: Si el veterinario lleva un estudio o secuencia de los muestreos puede indicarlo
en esta casilla.

2.

Nmero de Caso : Extra: Esta es una casilla opcional por si existe un estudio o secuencia de los
muestreos adicionales al mismo caso, si esta casilla no se lleva el personal de laboratorio
escribir el nmero del Formulario de Recoleccin de Muestras indicado en la esquina superior
derecha del mismo en nmeros rojos.

3.

Veterinario: Nombre del veterinario que realiza o solicita el muestreo.

4.

Motivo: Aqu se marcara con una equis si el diagnostico es por Monitoreo, Remuestreo,
Problema.

5.

Tipo de Muestra: Se marcara con una equis el tipo de matriz de la muestra Huevo, Suero, Leche,
Sangre si es otra matriz diferente a las anteriores se indicara en la casilla (eje: Carne)

6.

Fecha de Toma: Se indicara la fecha en la que se realizo la toma de muestra.

7.

Edad Calendario: Esta casilla solo se llena cuando se trata de muestras por lote como es el caso
de muestras avcolas, si se trata de muestras de aves se indicara en semanas y das (eje: 23 das
= 3-2), si se trata de Ganado Vacuno, Equinos, Ovinos y Porcinos se indica en meses y semanas
(eje 6 y 15 das meses = 6-2)

Datos de Poblacin
En esta seccin se incluirn los datos del Poblacin, Lote o grupo de muestras y donde esta localizados
as como los datos del propietario, criador y del animal, esta seccin es importante cuando la empresa
tiene subdivisiones, instalaciones o complejos alquilados, subcontratado o fuera de las instalaciones de la
empresa, con estos datos la empresa podr trazar la informacin fcilmente y realizar reportes especficos
a los datos solicitados, especialmente para valorar programas de vacunacin y mejoras en bioseguridad.
1.

Nombre: Se indicara el nombre de la poblacin o lote a la que se realiza el estudio (eje: Galera 1,
Hato Norte, Destete 2, etc), el programa xChek reasigna un valor numrico cuando no se le
asigna un nombre.

2.

Propietario: Nombre de la empresa propietaria de la poblacin, Lote, Hato, etc.

3.

Criador: Nombre de la persona o empresa responsable de la poblacin durante la produccin o

explotacin de la misma.

4.

Modulo: Nombre del lugar donde se ubica la poblacin o lote, si estas se ubican en un grupo de
instalaciones especificas como Galeras, Establos, etc

5.

Localizacin: Si la poblacin se ubica en un modulo o lugar y esta a su vez esta divida en

diferentes reas o localizaciones aqu se indica su nombre.

6.

Sublocalizacin: Si la anterior localizacin esta divida en otras reas o sublocalizaciones indicar

aqu su nombre.
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7.

Instalacin: Indicar el nombre de la instalacin donde se encuentra la poblacin Galera, Establo,

etc.

8.

Especie: Indicar la especie del animal.

9.

Raza: Indicar la raza del animal.

10. Tipo de Animal: Indicar de que tipo de animal(es) es la poblacin (eje: animales de engorde,
Cra, etc)
11. Observaciones: Si la poblacin o el caso es necesario agregar otra informacin puede llenar esta
casilla.

Identificacin de Muestras Entregadas

Esta seccin se indicara el numero de la muestra que se diagnosticara, esto se hace solo en animales de
muestra individual como Ganado Vacuno, Ovejas, Porcinos, Equinos y ciertos caso en aves segn la
enfermedad como CAV, ALV J.
Datos Laboratorio
Aqu el personal de laboratorio indicar con una equis si las muestras estn refrigeradas, si las muestras
estn identificadas u otra observacin de las muestras como estado de embalaje de las muestras, estados
de las muestras (hemlisis), etc.
Seccin Firmas
La persona que entrega las muestras como la persona que las recibe deben firmar en las casillas
correspondientes como acuso de entrega y recibo.

Muestras Invlidas
Se consideran muestras invlidas:
-

Cantidad insuficiente en el tubo

Fuerte hemlisis
Fuerte lipemia
Contaminacin microbiana (turbio, mal olor)

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