Introduccin

La presente investigacin aborda el tema de la obtencin de Taxol nombre

comercial para Paclitaxel, un frmaco de quimioterapia anticanceroso; se utiliza
para el tratamiento del cncer de mama, de ovario, de pulmn, de vejiga, de
prstata, de melanoma, de esfago y tambin de otros tipos de tumores
cancerosos slidos. Adems ha sido utilizado en el sarcoma de Kaposi.
Taxol pertenece a una clase de frmacos de quimioterapia llamados alcaloides
vegetales. Los alcaloides vegetales se producen a partir de plantas. Los taxanos
se producen a partir de la corteza del rbol tejo del Pacfico (Taxus). Los taxanos
tambin se conocen como agentes antimicrotubulares. Los alcaloides vegetales
son especficos al ciclo celular. Esto significa que atacan las clulas durante
diversas fases de la divisin.
Los agentes antimicrotubulares inhiben las estructuras microtubulares dentro de la
clula. Los microtbulos son parte del aparato celular que las divide y duplica. La
inhibicin de estas estructuras finalmente provoca la muerte celular.
El rbol de Taxus globosa se encuentra bajo proteccin especial debido a que
est en peligro de desaparecer he aqu la importancia de un sistema
biotecnolgico sustentable con la finalidad de tener una alternativa viable para la
conservacin de la especie.
Con esta investigacin reconocemos la importancia de la biotecnologa en el
desarrollo de la sociedad con uno de los principales puntos de inters que es la
salud, reflexionando en que se est convirtiendo en una de las principales causas
de muerte en el mundo.
En el desarrollo de este trabajo cubriremos la problemtica de esta aportacin de
la biotecnologa, posibles soluciones, metodologa y perspectivas hacia un futuro
que sin duda ser muy prometedor.


Antecedentes
En 1971, trabajando dentro de un proyecto del Intituto Nacional del Cncer (NCI)
para analizar los componentes antitumorales en un gran nmero de productos de
origen vegetal, Wani y Wall aislaron de la corteza de tejos del Pacfico (Taxus
brevifolia) el Paclitaxel (Taxol), para muchos la sustancia anticancergena ms
importante descubierta en los ltimos 40 aos.
En 1978, el mismo instituto pidi al servicio de bosques de Estados Unidos 30,000
Kg de corteza de tejo seca para obtener el Paclitaxel necesario para iniciar
pruebas preclnicas. El problema se hizo evidente: de un rbol de cien aos se
obtenan en promedio 3 Kg de corteza, de los cuales se aislaban 300 mg de
Paclitaxel. Para obtener un slo gramo de Paclitaxel se requeran entonces 10 Kg
de corteza de tres rboles centenarios, que moran despus del descortezamiento.
Ahora se sabe que el Paclitaxel est presente en prcticamente toda la planta y en
todas las especies de tejos. Adems, se han desarrollado mtodos de produccin
sustentables que incluyen la sntesis parcial, a partir de precursores que se
encuentran en el follaje de los tejos y el cultivo de clulas vegetales en
fermentadores.
En 1992 la FDA (Food and Drug Administration) de Estados Unidos aprob el uso
de Paclitaxel en pacientes con cncer de ovario y en 1994, en pacientes con
cncer de pecho.
La importancia del Paclitaxel ha sido tal, que tan slo en los Estados Unidos, se
han otorgado a la fecha ms de 400 patentes, que tratan diferentes aspectos del
proceso de obtencin de Paclitaxel a partir del follaje de tejos, por cultivo de
clulas de tejo in vitro, o con microorganismos. Otras patentes son sobre
compuestos derivados de Paclitaxel, mtodos de purificacin y mtodos de
tratamiento de pacientes.


Obtencin del Taxol
Planteamiento del problema
Desde el descubrimiento del Taxol considerables esfuerzos se han enfocado en
tratar de incrementar su produccin, ya que hasta la fecha las disponibilidades de
este compuesto no son suficientes para satisfacer los requerimientos comerciales.
La mayor dificultad encontrada ha sido en la baja concentracin (0.001 0.05%)
de Taxol que se acumula en las especies ms productivas, incluyendo a Taxus
brevifolia que fue la primera fuente de donde se aisl Taxol.
Soluciones al problema
Una de las alternativas a este problema es la produccin por semisntesis, la cual
requiere 2 intermediarios biosintticos como baccatina III o 10-deacetilbaccatina
III, encontradas tambin en Taxus sp.
Una fuente alternativa y ambientalmente sostenible de Taxol y compuestos
anlogos, es el cultivo de clulas vegetales. Esta metodologa ofrece diferentes
ventajas, como el no estar condicionado a variaciones medio ambientales,
estaciones y contaminaciones, adems que el material vegetal puede crecer en
condiciones in vitro independientemente de su origen. Con el fin de incrementar la
productividad de taxanos en cultivos celulares vegetales, diferentes estrategias
han sido empleadas como la optimizacin de las condiciones de cultivo, bsqueda
y seleccin de lneas celulares de alta produccin en diferentes especies de Taxus
y la adicin de elicitores o precursores.
Metodologa
Produccin in vitro de Taxol
Induccin de callos
El callo es una masa indiferenciada de clulas que crecen en medio slido, el cual
constituye la materia de partida para el establecimiento de suspensiones celulares.
Las primeras investigaciones de induccin de callos y la proliferacin desde
gametofitos de Taxus iniciaron con el cultivo de callos a partir de hojas y estudios
acerca de la composicin mineral y fitohormonal de los medios de cultivo, con el
fin de optimizar la proliferacin de celular de callos de ah la pauta para el
desarrollo de numerosas investigaciones.
Diferentes explantes tales como hojas, tallos y embriones han sido usados para la
induccin de callo. Se ha observado que el tejido joven es ms sensible y
propenso a la induccin de callos en comparacin con plantas adultas y adems
que el uso del cido 2-4 diclorofenoxiacetico y kinetina es la mejor combinacin
hormonal para la induccin de callo.
Obtencin de suspensiones celulares
Las suspensiones celulares son iniciadas con la inoculacin de callo friable en
medio lquido y agitacin, mediante el empleo de uno o ms pequeos agregados
celulares. Estos sistemas de rpido crecimiento pueden ser usados para
establecer procesos de escalado a nivel industrial y obtener productos valiosos.
Ensayos de actividades biosintticas de cultivos celulares han sido desarrollados
para incrementar la produccin de Taxol, muchos enfoques incluyen la
optimizacin de las condiciones de cultivo, identificacin de lneas altamente
productoras, optimizacin del crecimiento y medio de produccin, induccin de
vas de produccin de metabolitos secundarios por elicitacin y precursores, o el
uso de sistemas de cultivo en dos etapas y tcnicas de inmovilizacin.
Requerimientos nutritivos y medios de cultivo
El Taxol es producido en cultivos celulares cuando el crecimiento en la fase
exponencial ha terminado y las clulas se encuentran en fase estacionaria. Por
ello, un sistema ptimo para la produccin biotecnolgica de Taxol es el cultivo en
2 etapas, la primera para el desarrollo de biomasa que luego es transferida a un
segundo medio de cultivo, favorable para la produccin de taxanos. Este sistema
ha constituido una efectiva estrategia para mejorar la produccin de Taxol en
Taxus y podra ser utilizado en otras especies alternativas como Corylus avellana.


Fuente de carbono
El crecimiento y produccin de metabolitos secundarios a partir de cultivos
celulares depende de una fuente de carbono adecuada, sin embargo la
concentracin, puede variar, en funcin de la ruta biosinttica o procesos
involucrados, as como de la especie vegetal en estudio.
Uso de elicitores
Un elicitor es una sustancia que cuando es introducida en pequeas
concentraciones a un sistema celular vivo, inicia o mejora la biosntesis de
compuestos especficos, por ello, la elicitacin es el proceso de inducir o mejorar
la biosntesis de metabolitos secundarios vegetales debido a la adicin de
elicitores. Estos presentan un efecto sinrgico debido a su interaccin con
diferentes enzimas de la ruta metablica de produccin.
Corylus avellana
Corylus avellana es un pequeo rbol que no sobrepasa los 10 m de altura,
presentndose con frecuencia con porte arbustivo y tallas de 3-6 m de altura, su
madera es blanco-rojiza, ligera, empleada en la confeccin de mangos, cribas,
aviones de aeromodelismo, carbn para plvora, etc. Los frutos son muy
apreciados y alimenticios.
Es una angioesperma dicotiledonea, que pertenece a la familia Betulaceae, donde
se ubican otros rboles forestales y ornamentales tales como: Betula, Alnus,
Carpinus y Ostrya. Esta especie vegetal es originaria de Eurasia, sin embargo se
encuentra ampliamente extendida por el sureste de Europa, suroeste de Asia
occidental, Norte Amrica, etc.
Inters farmacolgico para la produccin de Taxol
Se ha reportado que el aislamiento y cultivo de hongos endfitos asociados a
Taxus producen Taxol, sin embargo la cantidades obtenidas son muy bajas en
comparacin a la obtenida en especies vegetales.
El avellano ha sido reportado como una especie productora de Taxol a travs de la
bioprospeccin de angioespermas. Los primeros informes sobre la presencia de
Taxol en avellano mantenan la posibilidad de encontrar Taxol en esta planta
derivado de hongos endfitos presentes en ella. Estudios posteriores confirmaron
que los cultivos celulares de avellano producen Taxol y taxanos bajo condiciones
controladas, lo cual implica que posee las enzimas necesarias para la produccin
de Taxol, una ruta biosinttica, considerada antes como exclusiva del gnero
Taxus. El principal beneficio de producir Taxol a partir de cultivos celulares de C.
avellana radica en que estos cultivos puede constituir una fuente alternativa para
la demanda existente, adems tiene un crecimiento mucho ms acelerado en
condiciones in vivo y es muy fcil de cultivar en condiciones in vitro.

Bibliografa
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