Aislado Prot Lupino Tesis MSC Mexico PDF
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c) Anchura, longitud y espesor de semilla.
Materiales y mtodos
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d) Peso de 100 semillas. Se tomaron al azar cuatro muestras de 100 semillas y se
obtuvo el peso en gramos. Si en promedio, las muestras pesan menos de 25 g la
especie se considera de grano pequeo, si pesa entre 25 y 40 g la especie es de
grano mediano, si pesan ms de 40 g la especie es de grano grande (Lpez-
Herrera, 2002).
La caracterizacin qumico-proximal se determin de acuerdo a los mtodos oficiales
descritos por la AOAC (1995), comprendiendo los siguientes anlisis:
a) Humedad (925.30). Se calcul como la prdida de peso despus de secar la
muestra a 98-100 C hasta peso constante.
b) Nitrgeno (955.04). Se determin por el mtodo Kjendhal y el contenido de
protena se calcul multiplicando el porcentaje de Nitrgeno por el factor de
correccin 6.25.
c) Fibra cruda (962.09). La muestra seca fue sometida a hidrlisis cida-alcalina y
posteriormente calcinada en una mufla a 550 C por 2 h.
d) Aceite (920.309) Se cuantific por el sistema Soxhtlet despus de 3 h de
extraccin con ter de petrleo.
e) Cenizas (923.03). Se calcularon como el peso remanente despus de calcinar la
muestra en una mufla a 550 C durante 6 h.
Los factores antinutricionales, se detectaron a travs de un anlisis fitoqumico preliminar,
el cual involucra pruebas sencillas, sensibles, especficas y rpidas que permiten
identificar grupos qumicos con actividad biolgica potencial. Estas tcnicas se realizan
despus de una extraccin previa y consisten como norma general en reacciones de
coloracin y precipitacin de compuestos, con reactivos especficos. La obtencin de los
extractos de semillas de L. albus, L. splendens Rose y Lupinus sp., se realizaron
mezclando 7 g de harina de Lupinus con etanol en equipos Soxhtlet, la mezcla se calent
a ebullicin por 30 minutos, despus de este tiempo el extracto se filtr en papel Wattman
No. 1. El anlisis fitoqumico de los extractos de Lupinus incluyeron la determinacin de la
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presencia o ausencia de alcaloides, flavonoides, glucsidos cianognicos, saponinas y
taninos (Dominguez, 1973).
5.3.3. Efecto del tratamiento trmico y tiempo de lavado en semillas de Lupinus
A partir de semillas libres de impurezas, estas se sometieron a un tratamiento trmico,
que consisti en colocar una cantidad de semilla en cuatro porciones de agua (p/v)
durante 15 min a 94 C, despus se descascarillaron de forma manual y se procedi a su
lavado, por medio de recirculacin de agua a temperatura ambiente con recambios cada
12 h.
En esta etapa se determin el tiempo de lavado para cada especie, evaluando las
propiedades de descascarillado de las semillas (Sreema y col., 2009b) y la concentracin
proteica en el cotiledn por el mtodo Kjendhal.
Propiedades de descascarillado de las semillas (Sreema y col., 2009b):
a) ndice de descascarillado (ID). Se calcul el ndice de descascarillado con la
ecuacin 2. Donde, W
1
es el peso inicial de la muestra tomada para
descascarillar (g), W
2
es el peso de las semillas descascarilladas (g), W
3
es el
peso de semillas no descascarilladas despus del tratamiento (g), W
h
es el peso
de cascarilla o testa (g). El ndice de descascarillado puede variar desde un
mximo de +1 a un mnimo de -1. Un valor de +1 indica que la muestra original
es completamente descascarillada en dos fracciones en cotiledn y cascarilla
sin fragmentos de semilla ni semillas descascarilladas.
2
b) Grado de descascarillado (GD). El grado de remocin de testa, es el
porcentaje de cotiledn libre de cascarilla. El grado de descascarillado se
defini empleando la siguiente ecuacin:
3
Materiales y mtodos
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c) Eficiencia de descascarillado (ED). La eficiencia de descascarillado es un
estimado de la eficiencia de produccin del producto mayoritario, cotiledn. Este
se calcul con la ecuacin 4:
4
Consecutivamente se realiz el secado por 3 h a 70 C, con una velocidad de aire de ,
empleando un secador de charolas y se determin el contenido de aceite por el mtodo
de Soxhtlet.
5.3.4. Efecto de la proporcin harina/hexano en la extraccin de aceite de Lupinus
Una vez lavada y seca, la muestra se moli hasta reducir la partcula a 300 m en una
licuadora Osterizer, posteriormente se desgras con hexano grado reactivo (98.5%) en
agitacin continua (700 rpm), durante 8 h a 4 C. Se estudi la porcin de mezcla
harina/hexano (p/v) 1/4, 1/5 y 1/6 eligiendo aquella que permitiera remover la mayor
cantidad de aceite y se evalu la cantidad aceite residual por el mtodo de Soxhtlet en
harina desgrasada. Enseguida, el disolvente se elimin por decantacin y se evapor a
temperatura ambiente por 18 h (Vioque y col., 2001).
Despus se tritur la partcula hasta atravesar un tamiz de apertura estndar de 180 m.
La harina permaneci en un desecador hasta su uso.
5.3.5. Obtencin de aislados proteicos de Lupinus
Se extrajeron aislados mediante precipitacin isoelctrica de las protenas, (Rodrguez-
Ambrz y col., 2005) con algunas modificaciones (Figura 4).
El proceso consisti en suspender una cantidad de harina desgrasada de Lupinus en 10
porciones de agua (p/v), se ajust el pH a 9 con NaOH 0.1N. Se agit a 700 rpm a
temperatura ambiente durante 30 min, luego se centrifug a 5 000 rpm por 15 min en una
centrifuga Beckman Coulter modelo J2-MC. Despus el sobrenadante se filtr en papel
Wattman No. 1 y el retenido se elimin. Posteriormente, el sobrenadante se enfri a 4 C
y se ajust al punto isoelctrico (pI), el cual se determin a travs de la medicin de pH de
la muestra de cada especie al que ocurri la mxima precipitacin de protenas despus
de la adicin de HCl 0.1N (Pedroche y col., 2004).
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Enseguida se centrifug (10 000 rpm, 10 min, 4 C) y el pellet formado se congel a -35
C en un ultracongelador Revco modelo ULT-1340-3A e inmediatamente se liofiliz
(Liofilizadora Labconco, Vacio 3.0 Pa, -35 C).
Figura 4. Proceso de extraccin de aislados proteicos a partir de harina desgrasada de Lupinus
albus, Lupinus splendens Rose y Lupinus sp.
Dispersin
Harina desgrasada en agua
Extraccin alcalina
pH 9 por 30 min
Centrifugar
5 000 rpm, 15 min, 4 C
Filtracin
Con papel filtro Wattman No.
1
Residuo
Filtrado
4 C
Precipitacin
isoelctrica
(ajustar pH 4-5 con HCl 0.01N)
Centrifugar
10 000 rpm, 10 min, 4 C
Decantar
Precipitado
Liofilizar
AISLADOS PROTEICOS
DE LUPINUS
Suero
Materiales y mtodos
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El clculo de protena recuperada se realiz mediante la ecuacin 5 (Lestari y col., 2010):
5
Donde, P
R
es la protena recuperada (%), P
1
es el contenido proteico en el pellet liofilizado
(%), E
P
es el peso del pellet liofilizado (g), P
2
es la cantidad de protena en harina
desgrasada (%) y P
HD
es el peso de harina desgrasada para obtener aislados protecos
(g).
Concluida la obtencin de aislados proteicos (AP), se almacenaron en un desecador
hasta su posterior caracterizacin.
5.3.6. Anlisis de aislados proteicos de Lupinus
A los AP se les evalu sus propiedades tecno-funcionales e identific el peso molecular
de las protenas.
5.3.6.1. Propiedades tecno-funcionales de aislados proteicos de Lupinus
5.3.6.1.1. Solubilidad
Se analiz la solubilidad de aislado proteico de Lupinus (APL) en el intervalo de pH de
2.0-10.0. Se prepar una dispersin al 0.1% de APL en agua tridestilada, esta dispersin
se ajust en cada nivel de pH aadiendo HCl 0.1N NaOH 0.1N en agitacin continua por
30 min. Despus cada muestra se centrifug (10 000 rpm, 10 min) (Ogunwolu, y col.,
2007). Posteriormente se realiz una dilucin del sobrenadante y se determin el
contenido proteico, colocando 100 L de la dilucin en un tubo Eppendorf con 1 mL del
reactivo de Bradford (Sigma-Aldrich B6916) se agit de 2 a 3 segundos y despus de 15
min se ley la absorbancia a 595 nm en un espectrofotmetro Perkin Elmer modelo
Lamda XLS (Liu y col., 2007). Para determinar la concentracin de protena en la muestra,
se requiri la preparacin de una curva tipo empleando albumina de suero bovino como
estndar; con la cual se determin la ecuacin de ajuste: y= 0.0201 x + 0.0354 con R
2
=
0.993.
El porcentaje de solubilidad del aislado proteico se determin con la ecuacin 6.
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5.3.6.1.2. Capacidad de Absorcin de Agua (CAW) y aceite (CAO)
Para indicar la capacidad de absorcin, se pesaron 0.5 g de APL y se mezclaron con 5
mL de agua tridestilada o aceite de canola (Canoil) respectivamente en un tubo para
centrifuga de 50 mL, la mezcla permaneci por 30 min a 25 C. Despus la dispersin
proteica se centrifug (2000 rpm, 25 min) (Rodriguez-Ambrz y col., 2005). Posteriormente
el sobrenadante se retir y midi, el lquido retenido se expres como mL de agua o
aceite absorbidos por gramo de aislado proteico (Ogunwolu y col., 2009).
7
8
5.3.6.1.3. Propiedades de emulsin
El indice de actividad de emulsin (IAE) se estableci usando el mtodo descrito por
Zheng y col. (2008) con algunas modificaciones. Se mezclaron 10 mg de APL con 10 mL
de agua tridestilada, a esta dispersin se le adicion 3.33 mL de aceite vegetal de canola
(Canoil) y el pH se ajust en un intervalo de 2 a 10. Posteriormente la mezcla se
homogeniz en un mezclador Thermolyne Corporation modelo M16715 a velocidad
mxima durante un minuto. De la emulsin formada se tom una alcuota de 50 L y se
mezcl con 5 mL de una solucin de Dodecil Sulfato de Sodio al 0.1%. La absorbancia de
la dilucin se midi a 500 nm en un espectrofotmetro Perkin Elmer modelo Lamda XLS.
Para calcular el IAE se resolvi la siguiente ecuacin:
| u
9
Donde A
0
es la absorbancia al minuto cero, DF es el factor de dilucin (100), c es la
concentracin inicial de protena (0.1 g/100 mL), | trayectoria ptica (0.01 m); u es la
fraccin de aceite usada para formar la emulsin (0.25).
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Materiales y mtodos
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Para determinar el indice de estabilidad de emulsin (IEE) se midi la absorbancia a 500
nm despus de 10 min de reposo, para calcularlo se emple la ecuacin 10.
10
Donde:
A
0
es la absorbancia al minuto cero y A
10
es la absorbancia al minuto 10 (Zheng y col.,
2008).
5.3.6.1.4.-Capacidad de formacin y estabilidad de espuma
Estas propiedades se evaluaron en dispersiones de 50 mL de agua tridestilada con 1%
p/v de APL, se ajustaron a pH de 2, 4, 6, 8 y 10 y se homogenizaron con un mezclador
Osterizer durante 1 min, la capacidad de formacin de espuma (FE) se calcul como el
porcentaje del volumen de la dispersin sobre el mezclado (ecuacin 11) (Chew y col.,
2003). Para determinar el ndice de estabilidad de espuma (EE), se mantuvo en reposo la
espuma y se midi el volumen despus de 30 min (ecuacin 12) (Khattab y col., 2009).
11
12
Donde
V
DH
es el volumen despus del homogenizado, V
AH
es el volumen antes del
homogenizado y V
DR
es el volumen despus del reposo.
5.3.6.1.5. Concentracin Mnima de Gelificacin (CMG)
Se realizaron dispersiones de aislado proteico al 5%, 7.5%, 9.0%, 10.0%,11.0% y 12.50%
en 5 mL de regulador de fosfatos pH 7.6. Cada uno de los tubos que contenan las
dispersiones se mantuvieron por una hora en bao mara (94 C), en seguida se enfriaron
a 4C y despus se conservaron por dos horas en refrigeracin. La Concentracin Mnima
de Gelificacin (CMG) correspondi a aquella utilizada en la que la muestra no resbal
por la pared del tubo (Rodrguez-Ambriz y col., 2005).
Materiales y mtodos
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5.3.6.2. Anlisis electrofortico de aislados proteicos de Lupinus por SDS-PAGE
Para conocer los pesos moleculares de las protenas presentes en los aislados de
Lupinus se realiz electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS por el mtodo de
Schgger (1987).
15 l de muestra diluida en buffer de muestra 4X para protena (25% de Tris 0.5M, pH 6.8,
25% de SDS al 10%, 25% de 2-mercaptoetanol, 25% de glicerol y 0.1mg/mL de azul de
bromofenol) fueron colocados en el gel de poliacrilamida. El gel se form de un gel
separador al 10% y un gel concentrador al 5%.
Se empleo el marcador de peso molecular #SM0431 Fermentas Life Sciences.
Compuesto de una mezcla de siete protenas: |-galactosidas (116.0 kDa), albumina de
suero bovino (66.2 kDa), Ovoalbumina (45 kDa), Deshidrogenasa de lactato (35 kDa),
REase Bsp981 (34 kDa), |-lactoglobulina (26 kDa) y Lisozima (20 kDa).
Para la SDS-PAGE se us una cmara electrofortica Amersham Biosciences (HoeferTM
Dual Gel Caster) conectada a una fuente de poder modelo 301, la separacin de
protenas se realiz con una corriente elctrica de 90 V, utilizando un regulador del nodo
(Tris 0.2 M, pH 8.9) y un regulador del ctodo (Tris 0.1M y SDS 0.1%) como
amortiguadores de corrida.
Para detectar la separacin de las protenas, el gel se ti con una solucin al 0.1% de
azul brillante de Comassie, 90% de metanol al 50% y 10% de cido actico glacial,
durante 20 min en agitacin. Posteriormente para eliminar el exceso de colorante se
empleo una solucin desteidora de 10% de cido actico glacial, 50% de metanol y 40%
de agua destilada.
5.3.6.3. Anlisis estadstico
Se realiz por medio del programa sigma STAT 2.0 empleando un ANOVA y una prueba
aposteriori de Tukey para los datos obtenidos de cada experimento.
UPIBI IPN
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6. RESULTADOS Y DISCUSIONES
6.1. Caracterizacin de semillas de Lupinus
Lupinus splendens Rose es de grano pequeo (1.28 g/100 g de semilla) presenta una
coloracin caf, forma elptica, testa dura; las otras dos especies son similares entre s
con respecto al color y forma, difieren en las dimensiones y peso de 100 semillas (Cuadro
3 y 6). La geometra, rea de la superficie y volumen son caractersticas fsicas de las
semillas, importantes en los procesos como limpieza, separacin, aireacin, secado,
molienda, coccin y germinacin (Firatligil-Durmu y col., 2009).
Nota: Desviacin estndar de tres determinaciones de cada muestra; Letras diferentes en la columna indican diferencias
significativas (p<0.05)
En general, el contenido de protena en las semillas de Lupinus (Cuadro 4) es parecido al
de soya (38.6-40% de protena) y en particular Lupinus sp. posee dos veces mayor al de
otras leguminosas como garbanzo (Cicer arientinum) (18.4-29.0% de protena), lenteja
(Lens culinaris) (20.6-28.6% de protena), chcharo (Pisum sativum) (19.39-34.7% de
protena) y frijol (16.89-26.40% de protena) (Roy y col., 2010; Boye y col., 2010c; de
Almeida Costa y col., 2006).
La concentracin proteica es mayor en Lupinus sp. (48.63% de protena) comparada con
L. splendens Rose y L. albus (Cuadro 4); en general las tres especies en estudio poseen
una cantidad de protena semejante a L. luteus (37.9-48.2 % de protena) (Sujak y col.,
2006; Martnez-Villaluenga y col., 2006a); a especies mexicanas encontradas en Jalisco:
Cuadro 3. Caractersticas fsicas de las semillas de Lupinus
Especie Color Forma Testa Peso de 100
semillas (g)
Lupinus albus Amarilla Lenticular Blanda 28.530.43
a
Lupinus splendens Rose Caf Elptica Dura 1.280.01
b
Lupinus sp Amarilla Lenticular Blanda 9.930.12
c
Resultados y discusiones
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L. exaltatus (38.41%), L. reflexus (38.8% protena), L. mexicanus (36.7% de protena)
(Ruz-Lpez y Stelo, 2001).
Los lpidos en forma de aceite son un componente importante en las semillas de
leguminosas, en el caso de las especies de Lupinus estudiadas (Cuadro 4), la
concentracin de aceite es superior al presentado por garbanzo (6.69% de aceite), lenteja
(2.15% de aceite), chcharo (2.34% de aceite) y frjol (2.15% de aceite) (de Almeida Costa
y col., 2006) e inferior al de soya (19% de aceite) (de Luna, 2007).
Cuadro 4. Anlisis qumico-proximal de Lupinus albus, Lupinus splendens Rose y Lupinus sp
(g/100 g de harina en base seca)
Especie
Componente
Protena
(N x 6.25)
Aceite Ceniza Fibra Carbohidratos*
Lupinus albus 37.810.77 8.540.09
a
3.620.12
a
11.580.80
a
38.46
Lupinus splendens
Rose
34.140.75
a
13.010.37
b
4.320.41
b
16.391.82
b
32.11
Lupinus sp. 48.631.22
b
13.970.22
c
5.180.02
c
10.180.92
a
22.00
Nota: *Carbohidratos obtenidos por diferencia; Desviacin estndar de tres determinaciones de cada muestra; Letras
diferentes en las filas indican diferencias significativas (p<0.05)
Por otro lado, se encontraron diferencias significativas (p<0.05) en el contenido de aceite
en L albus, L. splendens Rose y Lupinus sp., siendo esta ultima la especie con una mayor
concentracin. Cabe destacar que el extracto etreo es superior en las especies silvestres
de Lupinus (L. splendens Rose y Lupinus sp) (Cuadro 4) que en L. albus y dos veces ms
alta a lo reportado para variedades de L. luteus (5.5% de aceite) y variedades de L.
angustifolius (6.8% de aceite) (Sujak y col., 2006). La cantidad de aceite en L. albus
reportado en este trabajo se encuentra en el intervalo para variedades de L. albus (7.12-
11.50% de aceite) (Boschin y col., 2008).
El contenido de cenizas encontrado en las especies estudiadas es significativamente
diferente (p<0.05). Sin embargo L. albus y L. splendens Rose poseen de 30.11 y 16.60 %
de ceniza, menor al de Lupinus sp. La cantidad de ceniza en L. albus y L. splendens Rose
son similares a L. luteus (4.62 g/100g de materia seca) y L. angustifolius (3.72 g/100g
de materia seca) (Sujak y col., 2006). La variabilidad en este componente depende del
tipo de suelo donde la planta se desarrolla (Martnez-Villaluenga y col., 2006a). Porres y
Resultados y discusiones
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col. (2008), destacaron la presencia de minerales como: Mn, Fe, Zn y K en especies del
gnero Lupinus.
Las semillas de Lupinus (Cuadro 4) exhiben niveles de fibra semejantes a otras
leguminosas como chcharo, frijol y lenteja (13.6-28.9% de fibra) (Rehinan y col., 2004;
Sridhar y Seena, 2006; de Almeida y col., 2006). L. albus y Lupinus sp., no muestran
diferencias significativas (p<0.05) entre s. No obstante, L. splendens Rose(16.39% de
fibra) semilla de grano pequeo y testa dura, presenta ms fibra que L. albus (11.58% de
fibra) y Lupinus sp. (10.18% de fibra) respectivamente.
Los carbohidratos presentes en L. albus, L. splendens Rose y Lupinus sp, obtenidos por
diferencia (Cuadro 4), son inferiores a los expuestos para leguminosas como chcharo,
frijol y lenteja (50% de carbohidratos) (de Almeida Costa y col., 2006). La especie con un
mayor contenido de carbohidratos es L. albus, seguido de L. splendens Rose y Lupinus
sp.
Por medio del anlisis cualitativo realizado a semillas de L. albus, L. splendens Rose y
Lupinus sp para determinar compuestos antinutricionales se registr la presencia de
alcaloides al reaccionar el extracto de las tres especies con el reactivo de Wagner,
mientras que el extracto de L. splendens Rose y Lupinus sp., reaccionaron con el reactivo
de Mayer (Cuadro 5). Bermdez-Torres y col. (2008), mencionaron que los alcaloides
tpicos en el gnero Lupinus son alcaloides quinolizidinicos (AQ), compuestos removidos
hasta en un 95% mediante un tratamiento hidrotrmico (Jimnez-Martnez y col., 2007).
En las tres especies de Lupinus estudiadas se detectaron taninos, se ha reportado que L.
campestris presenta 0.31%, el cual es 33% menor a la concentracin hallada en soya
(Jimnez-Martnez y col., 2007). Los taninos se encuentran principalmente en la testa y
debido a su sensibilidad al calor y la solubilidad en agua, es posible reducir su
concentracin, a travs de tratamientos como el lavado, coccin en ebullicin, en
microondas y autoclave (Khattab y Arntfield, 2009).
Adems de los compuestos antes mencionados, se detect la presencia de saponinas, al
dar positivo a la prueba de altura y estabilidad de espuma (Cuadro 5). La presencia de
factores antinutricionales en las semillas de Lupinus examinadas sugiere la aplicacin de
Resultados y discusiones
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un tratamiento para eliminarlos y como consecuencia lograr leguminosas adecuadas para
la ingesta humana.
Cuadro 5. Compuestos antinutricionales en Lupinus albus, Lupinus splendens Rose y Lupinus sp
Compuesto antinutricional Lupinus albus Lupinus splendens
Rose
Lupinus sp.
Alcaloides
Reactivo de Dragendorf - - -
Reactivo de Mayer - + +
Reactivo de cido Silicotngstico - - -
Reactivo de Wagner + + +
Flavonoides
Reaccin de Shinoda - - -
Glucosidos Cianognicos
Reaccin de Gignard - - -
Saponinas
Prueba de la altura y estabilidad
de la espuma
+ + +
Taninos
Reactivo de gelatina + + +
Reactivo de Cloruro Frrico + + +
Reactivo de Potasio - - -
Nota: + presencia, -ausencia
6.2. Efecto del tratamiento trmico y tiempo de lavado en semillas de Lupinus
Como consecuencia de la hidratacin trmica en semillas de L. albus y Lupinus sp., sus
dimensiones (largo, ancho y espesor) se modificaron significativamente (p<0.05) (Cuadro
6), permitiendo un una retencin de agua de 17.462.04 y 53.821.11% respectivamente,
y un ndice de descascarillado de uno, es decir, la semilla se puede separar en dos
fracciones: en cotiledn y testa; entre tanto L. splendens Rose tiene un valor negativo del
ndice de descascarillado.
Para alcanzar un valor positivo, se hidrat la semilla de L. splendens Rose mediante un
lavado, observando a la hora 24 el 50% de semillas hidratadas, con 50. 78% de remocin
de testa y 36.47% de eficiencia (Figura 5). Adems de los efectos antes indicados, el
Resultados y discusiones
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tratamiento trmico mejora la textura y palatabilidad de leguminosas e inactiva las
proteasas (Sreerama y col., 2009a; Roy y col., 2010).
Cuadro 6. Propiedades fsicas de expansin de Lupinus albus, Lupinus splendens Rose y Lupinus
sp.
Lupinus albus Lupinus splendens
Rose
Lupinus sp.
Semillas
sin hidratar
Semillas
hidratadas
Semillas
sin hidratar
Semillas
hidratadas
Semillas
sin hidratar
Semillas
hidratadas
Largo (mm) 0.980.08
a
1.300.10
b
0.410.05
c
0.560.05
d
0.830.10
e
0.940.07
f
Ancho (mm) 0.860.07
a
1.040.11
b
0.310.04
c
0.330.06
c
0.340.05
e
0.360.05
e
Espesor(mm) 0.500.07
a
0.600.07
b
0.250.04
c
0.210.03
d
0.630.11
e
0.760.05
f
L/A 1.140.09
a
1.250.10
a
1.350.15
c
1.80.56
d
2.410.45
e
2.610.33
e
L/E 1.940.31
a
2.200.38
a
0.600.10
c
2.70.35
d
1.210.14
e
1.250.11
e
Esfericidad 0.740.05
a
0.810.17
a
0.760.05
c
0.600.08
d
0.690.06
e
0.680.03
e
Nota: Desviacin estndar de 25 determinaciones de cada muestra; Letras diferentes en las filas indican diferencias
significativas (p<0.05)
Figura 5. Efecto del tiempo de lavado sobre propiedades de descascarillado en Lupinus splendens
Rose
El descascarillado es una etapa importante para la eliminacin de factores
antinutricionales como taninos y oligosacridos presentes en testa o cascarilla
(Tharanathan y Mahadevamma, 2003; Ghavidel y Prakash, 2007). L. splendens Rose se
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 24 48 72 96
G
r
a
d
o
y
e
f
i
c
i
e
n
c
i
a
d
e
d
e
s
c
a
s
c
a
r
i
l
l
a
d
o
(
%
)
Tiempo de lavado (h)
Grado de
descascarillado
Eficiencia de
descascarillado
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
38
compone del 28.17% de testa (Cuadro 7), similar a lo reportado por Sipsa (2008) para
semillas de Lupinus (75% de cotiledn y 25% de testa), mayor al de L. albus y Lupinus
sp., este componente retiene de 4.06 a 3.7 g de agua/ g de testa respectivamente.
Cuadro 7. Composicin de cotiledn y testa en semillas de Lupinus
Especie Cotiledn Testa
Lupinus albus 81.730.33 18.260.33
a
Lupinus splendens Rose 71.826.27
b
28.176.27
b
Lupinus sp. 82.220.35
a
17.770.35
a
Los valores son el porcentaje del total de semilla. Desviacin estndar de tres determinaciones de cada muestra; letras
diferentes en columnas indican diferencias significativas (p<0.05)
Al desechar la testa tambin se elimina protena y aceite (Cuadro 8), en la cascarilla de L.
splendens Rose se encuentra el 29.19% de la protena total de la semilla, superior al
contenido de protena en testa de L. albus (11.43%) y Lupinus sp. (22.24%), mientras que
el porcentaje de aceite en testa de L. albus es 13.31%, mayor al de testa en L. splendens
Rose y Lupinus sp., es importante mencionar que en el cotiledn reside la mayora de
estos componentes (protena y testa), estudios recientes sobre la testa de L. angustifolius,
indican su exitosa incorporacin en alimentos enriquecidos en fibra (Such y col., 2008;
Sipsa y col., 2008).
Cuadro 8. Distribucin de protena y aceite en cotiledn y testa de Lupinus
Especie Cotiledn Testa
Protena (%) Aceite (%) Protena (%) Aceite (%)
Lupinus albus 88.560.62
a
86.181.46
a
11.430.44
a
13.810.32
Lupinus splendens Rose 70.911.87
b
87.570.35
a
29.191.081
b
12.420.37
Lupinus sp 77.551.53
c
88.760.62
a
22.241.54
c
11.230.01
Nota: Desviacin estndar de tres determinaciones de cada muestra; letras diferentes en columnas indican diferencias
significativas (p<0.05)
En el lavado, el contenido proteico increment significativamente (p<0.05), hasta alcanzar
49.53% en L. albus a las 8 h del tratamiento acuoso, 41.61% en L. splendens Rose
despus de 24 h y 63.60% en Lupinus sp. a las 24 h de lavado. Valores similares son
reportados por Martnez-Villaluenga y col. (2006b), quienes lavaron semillas de L. albus y
L. luteus, obteniendo una concentracin proteica hasta un 45%, al extraer o-galactosidos
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
39
(estaquiosa, verbascosa y rafinosa), azcares solubles en agua y que son eliminados en
tratamientos acuosos (Aguilera y col., 2009).
Despus de alcanzar niveles mximos de protenas en L. albus, L. splendens Rose y
Lupinus sp., estos se reducen con el tiempo de lavado (Figura 6A, 6B, 6C), este
comportamiento se debe a la presencia de albminas en leguminosas, protenas solubles
en agua (Duranti y col., 2008) y durante el lavado probablemente se solubilizaron en el
medio de inmersin (Abd El-Hady y Habiba, 2003).
6.3. Efecto de la proporcin harina/hexano en la extraccin de aceite en harina de
Lupinus
La remocin de aceite de harina de Lupinus realizada durante 8 horas de agitacin
continua se muestra en el Cuadro 9. En general, la extraccin de aceite es directamente
proporcional a la cantidad de hexano empleada, este fenmeno se debe posiblemente
que al aumentar la concentracin de disolvente incrementa el coeficiente de transferencia
de masa resultando una mayor extraccin de aceite (Seth y col., 2007). No obstante, en L.
albus no hay diferencias significativas en aceite residual de la harina desgrasada; en L.
splendens Rose el aceite residual no muestra diferencias significativas al usar
proporciones 1/5 y 1/6 de harina/hexano; en Lupinus sp. la concentracin de aceite es
significativamente diferente en las tres proporciones.
Cuadro 9. Extraccin de aceite a 4C a partir de harina de Lupinus empleando diferentes
proporciones de harina/hexano
Proporcin
harina/hexano
(p/v)
Lupinus albus Lupinus splendens
Rose
Lupinus sp.
Extraccin de
aceite, % del
total
Aceite
residual
(%)*
Extraccin de
aceite, % del
total
Aceite
residual
(%)*
Extraccin de
aceite, % del
total
Aceite
residual
(%)*
1/4 78.29 2.320.57
a
61.37 4.920.49
a
78.30 3.100.18
a
1/5 79.85 2.120.36
a
73.58 3.210.37
b
80.28 2.680.04
b
1/6 82.90 1.830.51
a
72.39 3.250.50
b
82.87 1.770.19
c
Nota: Desviacin estndar de tres determinaciones de cada muestra; letras diferentes indican diferencias significativas
(p<0.05); * aceite residual en harina desgrasada de Lupinus
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
40
Figura 6. Efecto del tiempo de lavado sobre las protenas de Lupinus albus (A), Lupinus splendens
Rose (B) y de Lupinus sp. (C).
0
9
18
27
36
45
54
0 2 4 6 8 12
P
r
o
t
e
n
a
e
n
b
a
s
e
s
e
c
a
(
%
)
Tiempo de lavado (h)
0
9
18
27
36
45
0 24 48 72 96
P
r
o
t
e
n
a
e
n
b
a
s
e
s
e
c
a
(
%
)
Tiempo de lavado (h)
0
10
20
30
40
50
60
70
0 8 12 16 24 28 32 36
P
r
o
t
e
n
a
e
n
b
a
s
e
s
e
c
a
(
%
)
Tiempo de lavado (h)
A
B
C
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
41
En un estudio realizado al cotiledn de L. angustifolius, L. albus y L. luteus, se determin
la calidad elevada del aceite de Lupinus (Such y col., 2008). Boschin y col. (2008)
detallan la composicin de aceite de L. albus e indican la presencia del 50-60% de cido
oleico, 16-23% cido linoleico, estos valores logran un balance de cidos grasos
insaturados parecido al aceite de soya y probablemente sus beneficios sobre la salud son
similares. Por lo tanto el aceite de L. albus, L. splendens Rose y Lupinus sp., se podra
emplear en la preparacin de alimentos.
La harina desgrasada de Lupinus para la extraccin de aislados proteicos (AP), se
prepar empleando la mezcla harina/hexano 1/4 para L. albus, 1/5 para L. splendens
Rose y Lupinus sp. debido al contenido de aceite residual en harina (Cuadro 9),
concentraciones similares a los reportados en harina para la obtencin de AP de canola
(2.770.08%) (Khattab y Artfield., 2009), soya (2.0-2.85%) (Yoshie-Stark y col., 2008; Hua
y col., 2005) y L. albus (<5%) (Garzn-de la Mora y col., 2008). Bajo estas condiciones la
harina desgrasada de L. albus, L. splendens Rose y Lupinus sp., contiene 41.10%,
55.87% y 57.01% de protenas respectivamente (cuadro 12). A travs de un anlisis
fitoqumico preliminar se determin la ausencia de alcaloides y la presencia de taninos
derivados de catecol.
6.4. Obtencin de aislados proteicos de Lupinus
Los AP de L. albus, L. splendens Rose y Lupinus sp.se prepararon solubilizando las
protenas en una solucin de NaOH 0.1N. A menudo los AP se extraen mediante
procesos hmedos (Lee y col., 2007), el empleo de soluciones alcalinas se atribuye a la
efectividad y viabilidad para la extraccin de protenas de origen vegetal (Shen y col.,
2008). Posteriormente los slidos insolubles se separaron por centrifugacin seguida de
una filtracin, representan del 56-69% de los slidos de harina desgrasada y arrastran del
8.60% al 10.62% de protena en harina desgrasada (Cuadro 10).
Seguido de la extraccin alcalina se realiz la precipitacin isoelctrica de las protenas, a
travs de la metodologa descrita por Pedroche y col. (2004). El pH al cual se obtuvo una
mayor cantidad de precipitado de protenas fue de 4.4 para L. albus, 4.8 para L.
splendens Rose y 4.1 para Lupinus sp. (Cuadro 11), en el intervalo de pH de 4 a 5 las
protenas vegetales tienen un mnimo de solubilidad, conocido como punto isoelctrico
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
42
(Agboola y Aluko, 2009). Por manipulacin de esta propiedad es posible aislar protenas
con una pureza superior al 70% (Boye y col., 2010b).
Cuadro 10. Suproductos en la obtencin de aislados proteicos de Lupinus
Especie Residuos slidos Suero
Slidos
1
(%) Humedad (%) Protena
2
(%) Protena
2
(%)
Lupinus albus 66.152.60
a
79.497.55
a
10.621.40
a
2.850.32
a
Lupinus splendens
Rose
56.891.97
b
85.820.36
a
8.600.30
a
11.200.22
b
Lupinus sp. 69.702.00
a
84.400.84
a
9.580.27
a
16.781.00
c
Nota:
1
Porcentaje del total de slidos entrantes al proceso;
2
Porcentaje del total de protena que entra al proceso;
Desviacin estndar de tres determinaciones de cada muestra; letras diferentes en las columnas muestran diferencias
significativas (p<0.05)
Los AP de L. albus, L. splendens Rose y Lupinus sp presentaron un contenido proteico sin
diferencias significativas (p<0.05) entre s (Cuadro 11), sin embargo el AP de L. albus
presenta 91.84% de pureza, superior a los otros dos AP, y a los AP de canola (70.8% de
protena) (Yoshie-Stark y col., 2008), similar al reportado para protenas vegetales
procesadas con tcnicas parecidas: L. campestris (92.3% de protena)(Rodrguez-Ambrz
y col., 2005); L. mutabilis (93.5% de protena) (Gemes-Vera y col., 2008); cebada
(Hordeum vulgare) (90.5% de protena) (Mohamed y col., 2007); chcharo (Pisum sativum)
(91.2% de protena); frijol lima (95.7% de protena) (Boye y col., 2010b), cacahuate
(Arachis hypogaea) (96% de protena) (Wu y col., 2009).
Cuadro 11. Protena recuperada de aislados proteicos de Lupinus
Especie pH mg de precipitado/mL de
sobrenadante
Protena
(%)
Protena
recuperada (%)
Lupinus albus 4.4 27.433.25
a
91.844.11
a
36.930.77
a
Lupinus splendens
Rose
4.8 25.972.28
a
87.951.91
a
29.324.77
b
Lupinus sp. 4.1 13.30.05
b
88.552.40
a
17.671.73
c
Nota: Desviacin estndar de tres determinaciones de cada muestra; letras diferentes en las columnas muestran
diferencias significativas (p<0.05)
Despus de precipitar las protenas del extracto, quedan fracciones suspendidas en el
sobrenadante lquido (suero), en las especies en estudio la concentracin de protenas en
la fase lquida es estadsticamente diferente (p<0.05), Lupinus sp., es la especie con una
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
43
menor recuperacin de protena, quedando en el sobrenadante 16.78% del total de
protena (Cuadro 10); investigaciones en leguminosas indican que el contenido de
protenas en suero de soya es del 10-12% y en girasol del 17 al 20%.
La cantidad de protena recuperada es estadsticamente diferente (p<0.05) en L. albus, L.
splendens Rose y Lupinus sp., siendo mayor en L. albus seguido de L. splendens Rose; el
rendimiento proteico de L. splendens es 10% mayor a los obtenidos por Garzn-de la
Mora y col. (2008), quienes precipitaron protenas de L. albus a pH 4.5 y lograron
recuperar el 20% de protena; similares a los obtenidos al procesar semillas de canola
(27.1%) (Ghodsvali y col., 2005).
De los resultados antes expuestos, se resume en el Cuadro 12 la concentracin proteica
de L. albus, L. splendens Rose y Lupinus sp en cada una de las etapas involucradas
durante su aislamiento, tanto la pureza como la cantidad son afectadas por las
caractersticas de las semillas, tiempos de exposicin al tratamiento acuoso, proporcin
harina-disolvente y pH en el cual hay una mayor precipitacin de protenas (Boye y col.,
2010b).
Cuadro 12. Concentracin de protena durante la extraccin de aislados proteicos de Lupinus
Lupinus albus* Lupinus splendens
Rose*
Lupinus sp.*
Semilla 37.810.77
a
34.14 0.75
a
48.63 1.22
b
Tratamiento trmico 38.800.60
a
------ 41.291.58
a
Lavado 49.530.868
a
41.612.03
a
63.601.68
b
Desgrasado 41.101.94
b
55.8774.99
a
57.0170.19
a
Aislado de protena 91.844.11
a
87.951.91
a
88.552.40
a
Nota: ------ No determinado; Desviacin estndar de tres determinaciones de cada muestra; * porcentaje de protena en
base seca; letras diferentes en las filas indican diferencias significativas (p<0.05)
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
44
6.5. Propiedades tecno-funcionales de aislados proteicos de Lupinus
6.5.1. Solubilidad
La solubilidad en agua a pH natural del aislado (pH 4-5), es mayor en L. splendens Rose
(2.32%) estadsticamente diferente a lo hallado para L. albus y Lupinus sp., (Cuadro 14).
En L. splendens Rose la solubilidad es similar a lo reportado para aislados de girasol,
cacahuate y lenteja verde (Cuadro 13). Boye y col. (2010b) mencionan que la baja
solubilidad de las protenas de leguminosas a pH de 4 a 5 es mnima debido a la
formacin de agregados en pH cercanos al punto isoelctrico (pI) de las protenas. Sin
embargo esta propiedad se puede mejorar a travs de la adicin de conjugados de
caseinato de sodio con maltodextrina (OReagan y Mulvihil, 2009).
6.5.2. Capacidad de Absorcin de Agua (CAW) y Aceite (CAO)
La capacidad de absorcin de agua (CAW) de los aislados proteicos (AP) de L. splendens
Rose, L.albus y Lupinus sp., no muestran diferencias significativas entre s (Cuadro 14),
sin embargo de forma aritmtica la CAW de L. splendens Rose es semejante a lo
presentado por aislados comerciales de soya (Supro 270) y chcharo; 20%, 34%, 36% y
48% superior a lo reportado para AP de ssamo, L. campestris, girasol y cacahuate
respectivamente (Cuadro 13). La CAW est relacionada a la habilidad de las protenas
para hidratarse (Owungulu y col., 2009), y es importante en sistemas alimentarios debido
a sus efectos sobre el sabor y textura de los alimentos (Yu y col., 2007).
La Capacidad de Absorcin de Aceite (CAO) en Lupinus sp.es 60.76% mayor a la de L.
albus (Cuadro 13), esta propiedad en Lupinus sp. es 58%, 51%, 45% y 37% superior al de
aislados de L. angustifolius, aislado comercial de soya (670), girasol y ssamo
respectivamente(Cuadro 14). Un valor alto de la CAO en AP, indica la posibilidad de
emplearlos como ingredientes en la industria de productos crnicos fros, en particular
para salchichas donde la CAW y CAO son propiedades determinantes para desarrollar un
alimento de calidad aceptable (Ogunwolu y col., 2009).
6.5.3. Propiedades de emulsin
El ndice de actividad de emulsin (IAE) de los aislados se determin a pH natural de
estos (pH 4-5). El IAE es significativamente diferente (p<0.05) en los tres aislados, siendo
el de L. splendens Rose el que presenta un valor mximo (Cuadro 14), comparado con
Lupinus sp.(23.40 m
2
/g) y L. albus (28.65 m
2
/g).El rea emulsionada por gramo de aislado
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
45
proteico de L. splendens Rose es 2.48 veces mayor al rea emulsionada por aislados de
frijol (Cuadro 13), pero 20.71 minutos menos estable que este. Aislados de avena y soya
presentan un IAE parecida al de L. splendens Rose, no obstante son 18.81 minutos y 4.81
minutos ms estables (Cuadro 14).
Generalmente, las propiedades de emulsin de las protenas son afectadas por su
hidrofobicidad, estabilidad conformacional y por factores fisicoqumicos tales como pH,
fuerza inica y temperatura. Las propiedades de emulsin se correlacionan con la
solubilidad, por tanto las protenas que presentan baja solubilidad no son buenos agentes
para formar emulsiones (Tang y Ma, 2009). Ante este comportamiento, Raymundo y col.
(2002) optimizaron la composicin de una emulsin de aceite en agua utilizando aislados
proteicos de Lupinus (2 a 7%) y goma xantana (0 a 0.49%), dependiendo de la
concentracin deseable de los agentes estabilizadores se obtienen emulsiones con
propiedades fsicas cercanas a mayonesas comerciales.
6.5.4. Capacidad de formacin y estabilidad de espuma
Los AP de L. albus y Lupinus sp., incrementan el rea superficial de la interfase
lquido/aire hasta un 50%, la de formacin de espuma (FE) del aislado proteico de L.
splendens Rose es tres veces mayor a los otros dos aislados; cabe mencionar que el
aislado de L. albus conserva el 40% de espuma despues de 30 min y aunque
estadisticamente no hay diferencias significativas (p<0.05) entre Lupinus sp. y L.
splendens Rose, este ultimo es 5% menos estable (Cuadro 14).
La capacidad de formacin de espuma (FE) de L. splendens Rose es 107%,129%, 137%,
148% y 152% superior a aislados de frijol, soya chcharo amarillo, ssamo y canola
respectivamente (Cuadro 13). En contraparte aislados de L. campestris, tienen una
capacidad 24% mayor a la de AP de L. splendens Rose (Cuadro 14). Respecto al ndice
de estabilidad de espuma (EE) el cual se refiere a la habilidad de las protenas para
estabizar la espuma contra el estrs gravitacional o mecanico; el EE de aislado de soya
(646) es igual al de aislado de L. albus y 20.6% mayor a L. splendens Rose.
46
Cuadro 13. Propiedades tecno-funcionales de aislados proteicos de origen vegetal
Fuente Condiciones operacionales
Extraccin
o
//Recuperacin
|
//Secado
Solubilidad
(%)
CAW
(mL/g)
CAO
(mL/g)
IAE
(m
2
/g)
IEE
(min)
FE
(%)
EE
(%
AV)
CMG
(% de
aislado)
Referencia
Amaranto (Amaranthus
hypochondriacus)
Buffer de fosfatos /7.5/2/-//D 58.30 --- 7.04 79.30
2
43.80
7
24.00 78.8 --- Moure y col., 2006
Avena Agua/6.6/0.25/25//PIE4.5//F 76.50 0.09 --- 60.80 29.00 106
3
70.40 ---- Mohamed y col., 2008
Cacahuate (Arachis hypogaea) Agua/10/1/3-//PIE(4.5)//V-/70//S --- 0.83 1.00 90.00
5
--- 0.02
6
--- --- Yu y col., 2007
Agua/10/1/-//PIE(4.5)//S --- 1.33 2.08 275.67
5
--- 0.01
6
--- ---
Cacahuate (A. hypogaea) Agua/8.5/0.3-/-//PIE 4.5//F 2.00 1.20 2.00 0.20
8
14.89 50 50.00 --- Wu y col., 2009
Canola
(Brassica napus var. Express)
Agua/7.4/0.75/35//PIE(5.8)//S ---
3.85 4.20 373 60.00
7
--- --- --- Yoshie-Stark y col.,
2006
Canola
(B. napus var. Lion)
Agua/7.4/0.75/35//PIE(5.8)//S --- 4.85 4.75 363 66.00
7
--- --- --- Yoshie-Stark y col.,
2006
Canola (B. napus) Extraccin micelar --- --- --- 39.80
2
68.00
7
43.3 --- 74.70 Moure y col., 2006
Cebada 0.015N NaOH/-/10//PIE(4.5)//- --- --- --- 83.10 13.50 116
3
13.50 --- Mohamed y col., 2007
Chcharo amarillo Agua/9.5/1/35//PIE(4.5)//S 3.00 4.40 130
4
4.80 5.80 58 44.00 14.00 Boye y col., 2010b
Agua/9.5/1/35// UF-D //S 3.00 3.90 160
4
4.70 5.70 59 40.00 12.00
Chcharo Kabuli Agua/9.5/1/35//PIE(4.5)//S 3.00 3.10 120
4
5.70 5.50 92 34.00 14.00 Boye y col., 2010b
Agua/9.5/1/35// UF-D //S 3.00 2.50 140
4
6.20 6.30 92 18.00 10.00
Frijol (Phaseolus vulgaris L.) Agua/8.5/0.6//Coag (2% NaCl)//- 5.00 --- --- --- --- 2.00 0.80 --- Makri y Doxastakis,
Agua/8.5/0.6//UF//- 35.00 --- --- --- --- 2.20 0.72 --- 2006
Frijol (P. vulgaris L.) Agua/8/2/-//PIE (4.6)//- 80.00 --- --- 23.70 30.90 244.9 87.8 --- Tang y Ma, 2009
Frijol (P. coccineus L.) Agua/8.5/0.6//Coag (2% NaCl)//- --- --- --- --- --- 2.2 0.61 --- Makri y Doxastakis,
Agua/8.5/0.6//UF//- --- --- --- --- --- 1.9 0.71 --- 2006
Girasol
(Helianthus annus)
Agua/5.5/4.0/60 // A (3/50) // Df (Skelly F/-
/-)
3.30 1.38 2.08
1
14.00
2
--- 51.5-31
3
71.70 --- Moure y col., 2006
Agua/5.5/1.5/80 // A (3/50) // Df (Skelly F/-
/-)
3.10 1.66 2.55
1
11.30
2
--- 610-
170
3
220 ---
Agua/5.5/1/90//A(3/50)//Df(Skelly F/-/-) 2.10 2.03 2.40
1
* 10.10
2
--- 600-50
3
225 ---
Lenteja roja Agua/9.0/1/25// PIE(4.5)//S 5.00 3.70 120
4
5.00 5.80 62.00 38.00 10.00 Boye y col., 2010b
Agua/9.0/1/25//UF-D//S 5.00 4.20 225
4
5.30 5.90 64.00 39.00 12.00
47
Cuadro 13. Propiedades tecno-funcionales de aislados proteicos de origen vegetal (continuacin)
Fuente Condiciones operacionales
Extraccin
o
//Recuperacin
|
//Secado
Solubilidad
(%)
CAW
(mL/g)
CAO
(mL/g)
IAE
(m
2
/g)
IEE
(min)
FE
(%)
EE
(% AV)
CMG
(% de
aislado)
Referencia
Lenteja verde Agua/9.0/1/25// PIE(4.5)//S 2.00 3.90 150
4
4.90 5.70 78.00 42.00 12.00 Boye y col., 2010b
Agua/9.0/1/25//UF-D//S 5.00 3.50 180
4
5.00 5.80 68.00 36.00 10.00
Lupinus (Lupinus albus) Agua/6.6/0.25/25//PIE4.5//F --- --- --- 98.70 15.00 144 77.40 --- Hojilla-Evangelista
y col., 2004
Lupinus (L. albus) Agua/8.6/30/25//PIE(4.9)//- 85.00 --- --- 1830
8
--- --- --- 14.00 Moure y col., 2006
Lupinus (L. campestris) Agua/9/1/-//PIE(4.5)//F 8.00 1.70 1.70 --- --- 220 --- 6.00 Rodriguez Ambrz
Extraccin micelar 5.00 1.30 2.20 --- --- 220 --- 8.00 y col., 2005
Lupinus (L.
angustifolius)
0.2%N NaOH/12/1/-//PIE (4.3)//F 19.20 4.47 1.95 74.50 71.00
2
119.0
7
94.80 12.00 Moure y col., 2006
Nuez de la India
(Anacardium
Occidentale L.)
Agua/7-9/20//IEP(3.5-4.5)//L (12/-) --- 2.20 4.42 12.50
2
447
4
45.00 55.00 13.50 Ogunwolu y col.,
2009
Ssamo (Sesamun
indicum)
1M NaCl+0.2 M buffer de fosfatos/7.9/-/-//D//F --- 2.07 2.96 152
7
0.88
9
47.00 1.17
9
--- Moure y col., 2006
Soya (Glycine max) Agua/9/1/-//PIE(4.5)//F --- 2.20 1.50 --- --- --- --- 8.00 Rodriguez Ambrz
Extraccin micelar 3.50 2.50 --- --- --- --- --- 8.00 y col., 2005
Soya (G. max) Agua/6.6/0.25/25//PIE 4.5/F --- --- --- 56.00 15.00 131
3
95.00 --- Hojilla-Evangelista
y col., 2004
Soya (G. max) Aislado comercial (Profan 646) 18.50 5.26 2.38 387.7
10
/36.6 33.30 18.00 68.20 --- Moure y col., 2006
Aislado comercial (Supro 500E) 40.30 8.56 2.51 372.5
10
/38.4 38.00 40.70 65.70 ---
Aislado comercial (Supro 670) 39.80 2.41 2.29 273.3
10
/35.7 32.50 66.80 40.60 ---
Aislado comercial --- 4.10 4.88 8.00
10
5.60-
5.00
9
84.078-
55.00
3
14.00
Nota:
1
g de aceite/g de aislado;
2
ndice de actividad de emulsin (%);
3
mL de espuma
(1-60 o 120 min)
;
4
aceite absorbido/peso de muestra;
5
Capacidad de emulsin (ml/g);
6
Capacidad de espuma (ml/ml);
7
%
de estabilidad de emulsin;
8
Capacidad de emulsin D.O (500 nm);
9
minutos;
10
ml de agua o aceite/ g de muestra.
o
Extraccin: Solvente/pH/tiempo (h)/T (C).
|
Recuperacin: PIE (pH): precipitacin
isoelctrica y valor de pH; Coag (sal): coagulacin con sales; UF (UF): ultrafiltracin; Dilisis (D).
Secado : Aire seco (A(tiempo (h)/T(C)));Liofilizacin ( F); Vacio (V). CAW: Capacidad de Absorcin de
Agua; CAO: Capacidad de Absorcin de Aceite; IAE: ndice de Actividad de Emulsin; IEE: ndice de Estabilidad de Emulsin; C: saturacin; FE: Formacin de Espuma; EE: Estabilidad de Espuma;
CMG: Concentracin Mnima de Gelificacin
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
48
Cuadro 14. Propiedades tecno-funcionales de aislados proteicos de Lupinus albus, Lupinus
splendens Rose y Lupinus sp.
Propiedad
tecno-funcional
Lupinus albus Lupinus splendens
Rose
Lupinus sp.
Solubilidad (%) 0.090.01
a
2.320.79
b
0.3150.03
a
CAW (mL/g) 2.570.20
a
2.600.30
a
2.210.27
a
CAO (mL/g) 2.850.26
b
4.630.79
a
4.690.19
a
IAE (m
2
/g) 28.651.30
a
58.812.07
c
23.400.84
b
IEE (min) 12.670.25
a
10.191.27
b
8.170.07
b
FE (%) 48.673.83
a
195.392.17
b
50.857.69
a
EE (%) 40.183.78
a
200.00
b
25.404.49
b
CMG (% de aislado) 7.5 9 11
Nota: Desviacin estndar de tres determinaciones de cada muestra; letras diferentes en las filas indican diferencias
significativas (p<0.05); CAW: Capacidad de Absorcin de Agua; CAO: Capacidad de Absorcin de Aceite; IAE: ndice de
Actividad de la Emulsin; IEE: ndice de Estabilidad de la Emulsin; CFE: Capacidad de Formacin de Espuma; EE:
Estabilidad de Espuma; CMG: Concentracin Mnima de Gelificacin
6.5.5. Concentracin Mnima de Gelificacin (CMG)
Los geles de protena son formados por matrices tridimensionales, parcialmente
asociadas con polipptidos, en las cuales el agua es atrapada (Khattab y col., 1998; Wu y
col., 2009). Esta propiedad es de utilidad en la preparacin de diversos productos (budn,
jaleas, postres, productos lcteos y en aplicaciones crnicas) (Boye y col., 2010b). En los
APL de las especies analizadas, la Concentracin Mnima de Gelificacin (CMG) en L.
albus es 1.5% menos que L. splendens Rose y 3.5% menor que Lupinus sp. (Cuadro 14).
En aislados de L. angustifolius, soya y nuez de la India se han hallado CMG mayores a
11%, es importante mencionar que estos aislados tienen una pureza menor del 90%, lo
cual coincide con Boye y col. (2010b) quienes reportan que la gelacin no slo es
afectada por la concentracin proteica sino tambin por la presencia de componentes no
proteicos (Boye y col., 2010b).
6.5.6. Efecto del pH en la solubilidad de aislados proteicos de Lupinus
La solubilidad, es un indicador de las condiciones de la protena y proporciona informacin
relacionada sobre sus aplicaciones tecnolgicas (Lampart-Szczapa y col., 2006). Por
tanto, en el presente estudio se investig la solubilidad de los AP de L. albus, L.
splendens Rose y Lupinus sp., en un intervalo de pH de 2 a 10 (Figura 7).
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
49
En particular la solubilidad del aislado de L. albus es significativamente diferente (p<0.05)
en la regin cida y alcalina, logrando un valor mximo a pH 10 (96.19% de solubilidad)
(Figura 7). L. splendens Rose, presenta un comportamiento similar al aislado de L. albus
con una solubilidad mxima de 72.17% en pH 9 sin mostrar diferencias significativas
(p<0.05) con pH 10 y mayor que la solubilidad de pH 2 (60.67%). Lupinus sp., es
totalmente soluble en pH 2, pH 9 y pH 10 sin diferencias significativas en estos puntos.
Yoshie-Stark y Wsche (2004) demostraron a travs de ensayos in vitro que las protenas
de L. albus obtenidas por precipitacin isoelctrica, solubles en condiciones cidas tienen
aplicaciones potenciales como agentes reductores de colesterol en pacientes
hipercolesterolmicos.
Figura 7. Solubilidad de aislados proteicos de Lupinus albus, Lupinus splendens Rose y Lupinus
sp.
En general, la solubilidad de los aislados de L. albus, L. splendens Rose y Lupinus sp., es
mxima en los extremos de pH y mnima en pH 4 y 5; aunque los APL de las tres
especies en estudio muestran valores de solubilidad diferentes en los distintos puntos de
pH, mantienen la forma de U, tendencia similar y tpica de los perfiles de solubilidad en
AP de: Oryza sativa L (Pinciroli y col., 2009), Lathyrus clymenum y Lathyrus annuus
(Pastor-Cabada y col., 2010), chcharo (Boye y col., 2010), cacahuate (Wu y col., 2009),
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
2 3 4 5 6 7 8 9 10
S
o
l
u
b
i
l
i
d
a
d
d
e
l
a
i
s
l
a
d
o
p
r
o
t
e
i
c
o
(
%
)
pH
Lupinus albus
Lupinus splendens Rose
Lupinus sp
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
50
canola (Yoshie-Stark y col., 2008), L. angustifolius cv Gungurru (Chew y col., 2003), L.
albus (Mohamed y col., 2005) y Soya (Zheng y col., 2008).
6.5.7. Efecto del pH en las propiedades de emulsin de aislados proteicos de
Lupinus
Debido a la importancia de emulsiones en sistemas alimentarios tales como mayonesas y
aderezos, es necesario conocer el comportamiento de esta propiedad en funcin del pH.
El efecto del pH sobre el ndice de actividad de emulsin (IAE) y el ndice de estabilidad
de emulsin (IEE) de los APL en estudio se muestra en el Cuadro 15. En los AP de L.
albus, se observa un IAE mnimo a pH 4, 5, 6, sin diferencias significativas (p<0.05) en
estos puntos; en los extremos, es decir en pH 2 el IAE (84.46 m
2
/g) es superior a lo
alcanzado a pH de 10, sin diferencias significativas en el IEE. En L. splendens Rose a pH
10 se alcanza un IAE 2.57 veces mayor al IAE presentado en pH 4 y 1.87 veces mayor al
de pH 2. En Lupinus sp. el IAE estadsticamente no muestra diferencias significativas a
pH de 2 y 10, pero la emulsin es ms estable a pH 2 (48.85 min). Los perfiles del IAE e
IEE dependientes de pH de AP de L. albus, L. splendens Rose y Lupinus sp. son similares
al descrito por Ogunwolu y col. (2009), para aislados de nuez de la India y describen la
similitud existente con otros AP entre los que se incluyen los de soya.
Ogunwolu y col. (2009) indican que la actividad mnima de emulsin en la regin cercana
al punto isoelctrico (pI) de las protenas se encuentra correlacionada con la escasa
solubilidad a pH cercanos a este punto, bajo esta condicin los pptidos no pueden migrar
fcilmente a la interfase y su carga neta se minimiza, por lo que la actividad de emulsin
se reduce. Sin embargo cuando el pH de las protenas se modifica, la capacidad de
actividad de emulsin se favorece (Ogunwolu y col., 2009; Liu y col., 2007). Wu y col.
(2009), explican el incremento de esta propiedad conforme el pH se aleja del pI de las
protenas, debido al cambio existente en la superficie de los glbulos grasos, los cuales
causan una mutua repulsin y forman una capa hidratada alrededor del material
interfacial, lo que reduce su energa y retarda el colapso de las gotas.
51
Cuadro15. Propiedades de emulsin de los aislados proteicos de Lupinus albus, Lupinus splendens Rose y Lupinus sp. a diferentes valores de
pH
pH
Lupinus albus Lupinus splendens Rose Lupinus sp.
IAE (m
2
/g) IEE (min) IAE (m
2
/g) IEE (min) IAE (m
2
/g) IEE (min)
2 84.4719.09
a
70.284.35
a
68.992.96
ab
32.005.57 91.6211.42
a
48.852.45
3 40.065.93
b
40.076.39b
c
67.509.11
ab
30.026.48 45.6410.35
b
27.244.64
b
4 26.672.18
c
18.362.51
d
50.158.05
c
16.404.07
b
37.575.49
c
18.710.89
c
5 28.651.30
c
12.680.25
e
58.812.07
b
10.191.26
c
37.998.63
c
20.910.57
cd
6 25.1312.22
c
30.443.12
b
62.0119.56
ab
22.913.19
d
39.728.86
d
22.571.03
cde
7 38.3013.13
b
36.434.88
bc
78.907.07
a
22.374.42
d
53.761.71
e
23.203.38
de
8 34.503.50
b
38.272.51
bc
71.9814.20
ab
43.5412.79
e
56.071.23
f
31.121.81
e
9 46.218.53
b
50.316.39
b
85.579.98
a
31.8614.17
ad
61.416.78
f
37.6611.12
f
10 54.597.31
d
77.704.35
a
129.335.21
d
39.8210.90
e
89.788.34
a
37.640.81
g
Nota: Nota: Desviacin estndar de tres determinaciones de cada muestra; letras diferentes en las columnas indican diferencias significativas (p<0.05); IAE: ndice de Actividad de
Emulsin; IEE: ndice de Estabilidad de Emulsin
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
52
6.5.8. Efecto del pH en las propiedades espumantes de aislados proteicos de
Lupinus
La formacin de espuma es importante en aplicaciones alimentarias tales como productos
de panadera, pasteles, galletas, bebidas, merengues, coberturas y helados (Khattab y
col., 2009; Boye y col., 2010a).
La capacidad de formacin de espuma (FE) para todos los puntos evaluados en AP de L.
splendens Rose es superior a la de L. albus y Lupinus sp. (Figura 8), por ejemplo en pH 6
el volumen de espuma es de 212% para L. splendens Rose, mientras que AP de L. albus
y Lupinus sp. evaluados al mismo pH muestran valores de 51.54% y 47.43%
respectivamente. En la Figura 8 se observa la mxima formacin de espuma de AP de L.
albus (290%) y Lupinus sp. (240%) en condiciones cidas (pH 2); no obstante AP de L.
splendens Rose no muestra diferencias significativas en la FE a pH 2 y pH 10, aunque a
pH 2 se haya el mayor valor de FE (292%).
El ndice de estabilidad de espuma (EE) en aislados de L. albus despus de 30 min es del
66% en pH 6 y 8 sin mostrar diferencias significativas entre ambos (p<0.05), mayor a lo
presentado en pH 2 (40%), pH 4 (36%) y pH 10 (33%) e incluso superior a la mxima
estabilidad observada en L. splendens Rose (49%) y Lupinus sp. (52%) a pH de 10
(Figura 9). Wu y col. (2009), reportan estabilidad del 35% para aislados de cacahuate,
mientras que aislados de nuez de la India, logran un valor mximo a pH 6 (45-50%)
(Ogunwolu y col., 2009).
Las propiedades espumantes en los AP de L. albus, L. splendens Rose y Lupinus sp.
(Figura 8 y 9) muestran un comportamiento analogo al de las propiedades de emulsion
cuando se modifica el pH, ambas afectadas por la solubilidad de los APL, esto coincide
por lo reportado para aislados de: nuez de la India (Ogunwolu y col., 2009), cacahuate
(Wu y col., 2009) y chcharo (Boye y col., 2010b). Esta relacin podra indicar que la
presencia de protena soluble es un factor importante para desarrollar buenas
propiedades de formacin de espuma de los AP (Pinciroli y col., 2009), en donde el
carcter anfiflico de las protenas, les otorga la propiedad de formar una pelcula en la
interface aire-agua y la capacidad de prevenir el colapso de las burbujas (Yu y col., 2007).
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
53
Figura 8. Formacin de espuma de aislados proteicos de Lupinus albus, Lupinus splendens Rose
y Lupinus sp
Figura 9. Estabilidad de espuma de aislados proteicos de Lupinus albus, Lupinus splendens Rose
y Lupinus sp.
0
50
100
150
200
250
300
350
Lupinus albus Lupinus splendens Rose Lupinus sp
F
o
r
m
a
c
i
n
d
e
e
s
p
u
m
a
(
%
)
Aislado
pH 2 pH 4 pH 6 pH 8 pH 10
0
10
20
30
40
50
60
70
80
Lupinus albus Lupinus splendens Rose Lupinus sp
E
s
t
a
b
i
l
i
d
a
d
d
e
e
s
p
u
m
a
(
%
e
s
p
u
m
a
)
Aislado
pH 2 pH 4 pH 6 pH 8 pH 10
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
54
Para mejorar la capacidad y estabilidad de espuma se ha determinado la adicin de
sustancias como NaCl, compuesto que incrementa la habilidad de las protenas para
formar espuma pero no la estabilidad y la incorporacin de goma xantana que contribuye
a la estabilidad en protenas de girasol (Karayannidou y col., 2007).
6.6. Anlisis electrofortico de aislados proteicos de Lupinus por SD-PAGE
Los resultados de SDS-PAGE en los AP de L. albus, Lupinus sp. y L. splendens Rose
muestran bandas de 66.2 a 14.4 kDa (Figura 12), Garzn-de la Mora y col. (2008)
obtuvieron protenas por precipitacin isoelctrica de L. albus e indican la presencia
mayoritaria de globulinas (Cerletti y col., 1978; Oomah y Bushuk, 1983). Las globulinas
son una clase de protenas muy heterogenea, esta clasificada o, |, o y -conglutina (Sirtori
y col., 2010).
Figura 12. Perfil electrofortico SDS-PAGE de aislados proteicos de Lupinus. Carril 1 marcador
molecular (14.4-116 kDa), carril 2 Lupinus albus, carril 3 Lupinus splendens Rose y carril 4 Lupinus
sp.
En el perfil de los tres APL se muestran bandas localizadas entre 66.2 kDa y 45 kDa
(cinco en L. albus, en Lupinus sp. es similar a L. albus y dos en L. splendens Rose), en
Resultados y discusiones
UPIBI IPN
55
los AP de Lupinus sp y L. splendens Rose se distingue una banda inferior a 45 kDa
(Figura 12) probablemente corresponden a la subunidad cida de o-conglutina (42-52
kDa) detectada en L. albus estudiado por Duranti y col., (2008). En investigaciones
realizadas en protenas de L. angustifolius y L. albus se ha observado la presencia de |-
conglutina, tambin llamada vicilina compuesta de monmeros de peso molecular que
oscilan de 17 a 20 kDa, 25 a 46 kDa y 53-64 kDa; en el patrn electrofortico de los AP se
exhiben bandas prximos a estos pesos moleculares (una banda de 25 kDa en L. albus;
una de 25 kDa, una superior y otra inferior a 35 kDa en Lupinus sp.; en L. splendens Rose
una inferior a 35 kDa y otra de 25 kDa) lo que podra indicar la presencia de |-conglutina
(Duranti y col., 2008). En los tres APL se observan bandas inferiores a 14 kDa,
probablemente correspondan a las o-conglutinas de cadena larga o corta de 9 kDa y 4
kDa respectivamente (Duranti y col., 2008).
UPIBI IPN
56
7. CONCLUSI ONES
El anlisis qumico proximal demostr el elevado contenido proteico en semillas de
Lupinus splendens Rose, Lupinus sp. especies silvestres y de Lupinus albus especie
cultivada; resultados que confirman el inters de domesticar estas especies, con el
propsito de intensificar su cultivo para la alimentacin humana y animal. Al igual que
otras leguminosas poseen factores antinutricionales entre ellos: alcaloides, taninos y
saponinas.
En el proceso de lavado, las semillas se hidrataron permitiendo el desprendimiento de 18
a 28 g de testa/100g de semilla de Lupinus y se determin que el tiempo de lavado fue de
8 h para L. albus, 24 h para L. splendens Rose y Lupinus sp.
La proporcin harina hexano (p/v) 1/4 para L. albus y 1/5 para L. splendens Rose y
Lupinus sp., permitieron obtener harina con 2.32%, 3.21% y 2.68% de aceite residual
respectivamente.
Los aislados proteicos se obtuvieron por precipitacin isoelctrica de las protenas a pH
de 4.8, 4.4 y 4.1 para L. splendens Rose, Lupinus sp. y L. albus respectivamente; con una
pureza del 90% sin diferencias significativas (p<0.05) entre las especies, con rendimiento
de 36.930.77 para L. albus, 29.324.77 para L. splendens Rose y de 17.671.73 para
Lupinus sp.
Los aislados proteicos de L. splendens Rose mostraron mayor solubilidad que los aislados
de L. albus y Lupinus sp; la capacidad de retencin de agua no mostr diferencias
significativas (p<0.05) en los APL de las tres especies, los aislados de L. splendens Rose
Conclusiones
UPIBI IPN
57
y Lupinus sp presentaron una capacidad de retencin de aceite (4.63 mL/g), mayor a L.
albus. Los aislados de L. splendens Rose mostraron propiedades de formacin de
emulsin (58.81 m
2
/g) y espuma (195.39 %) superiores a las otras dos especies, con una
estabilidad menor en estas propiedades L. albus. El perfil de solubilidad en los APL es
mxima en la regin cida y alcalina, disminuyendo en pH de 4 a 5, esta tendencia se
observ en la formacin y estabilidad de emulsin y espuma.
El perfil proteico analizado por SDS-PAGE para Lupinus sp., y L. splendens Rose result
similar al de L. albus.
Tanto el contenido proteico de las semillas de Lupinus silvestres y de L. albus como el
comportamiento de las propiedades tecno-funcionales de los APL son similares al de
otras leguminosas con protenas de alta calidad; estos resultados confirman la
importancia de estudiar las especies de Lupinus nativas de Mxico y L. albus como fuente
potencial de protenas.
UPIBI IPN
58
8. RECOMENDACI ONES Y
PERSPECTI VAS
Se recomienda determinar compuestos antinutricionales en semillas de Lupinus por
HPLC, as como en el lavado de estas.
Estudiar la composicin de aminocidos en semillas de Lupinus splendens Rose y
Lupinus sp.
Se sugiere emplear un proceso de separacin por membranas en la recuperacin de
protenas del sobrenadante generado durante la precipitacin isoelctrica de estas
macromolculas, con fines de optimizar su proceso de extraccin.
Hidrolizar los aislados proteicos de Lupinus y evaluar sus propiedades tecno-funcionales.
Por las promisorias propiedades tecno-funcionales se recomienda aplicar los aislados
protecos de L. splendens Rose, Lupinus sp y L. albus en formulaciones base empleadas
en la preparacin de alimentos y analizar su efecto sobre sus propiedades tecno-
funcionales.
Evaluar el efecto de los aislados proteicos de Lupinus sobre aspectos relacionados con la
salud, a travs de tcnicas invitro.
Caracterizar la composicin qumica y el comportamiento reolgico del aceite extrado de
las semillas de Lupinus
UPIBI IPN
59
9. REFERENCI AS
Abd El-Hady, E., & Habiba, R. (2003). Effect of soaking and extrusion conditions on
antinutrients and protein digestibility of legume seeds. LWT, 36, 285-293.
Agboola, S. O., & Aluko, R. E. (2009). Isolation and structural of the major protein
fraction in australian wattle seed (Acacia victoriae Bentham). Food Chemistry, 115,
1187-1193.
Aguilera, Y., Martn-Cabrejas, M. A., Bentez, V., Moll, E., Lpez-Andru, F. J., &
Esteban, R. M. (2009). Changes in carbohydrate fraction during dehydration
process of common legumes. Journal of Food Composition and Analysis, 22, 678-
683.
A.O.A.C. 1995. Official Methods of Anayses. 15 th Edition. Association of Official
Analitical Chemists. Washington, D. C., USA
Bermdez-Torres, K., Martnez-Herrera, J., Figueroa-Brito, R., Wink, M., & Legal, L.
(2008). Activity of quinolozidine alkaloids from three Mexican Lupinus against the
lepidopteran crop pest Spodoptera frugiperda. Biocontrol .
Bermdez-Torres, K., Robledo Quintos, N., Martnez-Herrera, J., Tei, A., & Wink, M.
(1999). Biodiversity of the genus Lupinus in Mexico. En E. v. Santen, M. Wink, S.
Weissmam, & P. Roerner (Ed.), Lupin an Ancient crop for the New Millenium.
Proceedecium of the 9 th International Lupin Conference. New Zeleand:
International Lupin Asociation.
Boschin, G., DAgostina, A., Annicchiarico, P., & Arnoldi, A. (2008). Effect of genotype
and enviroment on fatty acid composition of Lupinus albus L. seed. Food
Chemistry, 108, 600-606.
Boye, J. I., Aksay, S., Roufik, S., Ribreau, M., Mondor, M., Farnworth, E., y otros.
(2010a). Comparison of the functional properties of pea, chickpea and lentil protein
concentrates processed using ultrafiltration and isoelectric precipitation
technological. Food Research International, 43, 537-548.
Referencias
UPIBI IPN
60
Boye, J., Zare, F., & Pletch, A. (2010b). Pulse proteins: Processing, characterization,
functional properties and aplications in food and feed. Food Researched
International, 43, 414-431.
Cassini, A. S., Tessaro, I. C., Marrczak, L. D., & Pertile, C. (2010). Ultrafiltration of
wastewater from isolated soy protein production: A comparison of three UF
memebranes. Journal of Cleaner Production, 18, 260-265
Cerletti, P., Fumagalli, A., & Venturin, D. (1978). Protein composition of seeds of
Lupinus albus. Journal of Food Science, 43 (5).
Chew, P. G., Casey, A. J., & Johnson, S. K. (2003). Protein quality and physico-
functionality of Australian sweet lupin (Lupinus angustifolius cv. Gungurru) protein
concetrates prepared by isoelectric precipitation or ultrafiltration. Food Chemistry,
83, 575-583.
de Almeida Costa, G. E., Queiroz-Monici, K. d., Machado Reis, S. M., & Costa de
Oliveira, A. (2006). Chemical composition, dietary fibre and resistant starch
contents of raw cooked pea, common bean, chicpea and lentil legumes. Food
Chemistry, 94, 327-330.
de Luna-Jimnez, A. (2007). Composicion y procesamiento de la soya para consmo
humano. Investigacin y ciencia de la Universidad Autonoma de Aguascalientes,
15 (037), 35-44.
Dijkink, B., Miedendorp, V., & Blom, W. (2008). Lupins for health and Wealth.
Procedings of the 12 th International Lupin Conference. En J. A. Palta, & J. B.
Berger (Ed.), Altering Lupine Flour for the Food Industry, (pgs. 454-458).
Canterbury, New Zealand.
Doxastakis, G., Papageorgiou, M., Mandalou, D., Irakli, M., Papalamprou, E.,
DAgostina, A., y otros. (2007). Technological properties and non-enzymatic
browing of white lupin protein enriched spaghetti. Food Chemistry (101), 57-64.
Drakos, A., Doxastakis, G., & Kiosseoglou, V. (2005). Functional effects of lupin protein
in comminuted meat and emulsion gels. Food Chemistry .pags
Dominguez, X., Mtodos de investigacin fotoqumica. Mxico. Limusa. 1973. Pags. 81-
226.
Duranti, M., Consonni, A., Magni, C., Sessa, F., & Scarafoni, A. (2008). The major
proteins of lupin seed: Characterisation and molecular properties for use as
functional and nutraceutical ingredients. Trends in Food and Technology, 1-11.
Referencias
UPIBI IPN
61
Eastwood, R. J., & Hughes, C. E. (2008). Origins of Domestication of Lupinus mutabilis
in the Andes. Proceedings of the 12 th International Lupin Conference (pgs. 373-
380). Caterbury, New Zealand: International Lupin Association.
Erdemoglu, N., Ozkan, S., & Tosum, F. (2007). Alkaloid profile and antimicrobial activity
of Lupinus angustifolius L. alcaloid extract. Phytochem Rev, 6, 197-201.
FAO Statics Division. http://faostat.fao.org/site/339/default.aspx. Revisado 23 de abril de
2010
Fernandez-Orozco, R., Frias, J., Zielinski, H., Muoz, R., Piskula, M., Kozlowska, H., y
otros. (2009). Evaluation of bioprocesses to improve the antioxidant properties of
chickpeas. LWT - Food Science and Technology, 42, 885-892.
Fratlgil-Durmu, E., rka, E., Bubnk, Z., Schejbal, M., & Kadlec, P. (2009). Size
properties of legume seeds of different varieties using image analysis. Journal of
Food Engineering. (Articulo en prensa).
Fraile, M. E., Garca-Suarez, D., & Martnez-Bernal, A. (2007). Nutritivas y apetecibles:
conozca de leguminosas comestibles. Parte I. Hojas, vanas y semillas. Contactos
66, 27-35.
Garzn-de la Mora, P., Avalos-Alcantara, G., Gurrola-Daz, C., Lpez, J., Brune, D. C.,
Garca-Lpez, J. S., y otros. (2008). Isoltion and purity assessment of Lupin albus
conglutines. Proceedings 12 TH international Lupin conference, (pgs. 152-156).
Australia.
Ghavidel, R. A., & Prakash, J. (2007). The impact of germination and dehulling on
nutrients, antinutrients, in vitro iron and calcium bioavailability and in vitro starch
and protein digestibility of some legume seeds. LWT, 40, 1292-1299.
Ghodsvali, A., Haddad, K. M., Vosoughi, M., & Diosady, L. L. (2005). Preparation of
canola protein materials using membrane technology and evaluation of meals
functional properties. Food Research International, 38, 223-231.
Glandstones, J. S., Atkins, C. A., & Hamblin, J. (1998). Lupins as crop plants biology,
production and utilization. Oxon, Reino Unido: Cab International.
Gemes-Vera, N., Pea-Bautista, R. J., Jimnez-Martnez, C., & Dvila-Ortz, G.
(2008). Effective detoxification and decoloration of Lupinus mutabilis seed
derivatives and effect of these derivatives on bread quality and acceptance. Journal
of the Science of Food and Agriculture, 88.
Hodgson, J., & Ping, L. Y. (2008). Potential for benefit of lupin on obesity and
cardiovascular disease risk in humans. En J. A. Palta, & J. B. Berger (Ed.),
Referencias
UPIBI IPN
62
Proceedings of the 12 th International Lupin Conference (pgs. 466-469).
Caterbury, New Zealand: International Lupin Association.
Hojilla-Evangelista, M. P., Sessa, D. J., & Mohamed, A. (2004). Functional properties of
soybean and Lupin protein concentrates produced by ultrafiltration-diafiltration.
JAOCS , 81 (12).
Hua, Y., Cui, S. W., Wang, Q., Mine, Y., & Poysa, V. (2005). Heat induced gelling
properties of soy protein isolates prepared from different defatted soybean flours.
Food Research International, 38, 377-385.
Jimnez Martnez, C., & Dvila Ortz, G. (2006). Elaboracin de un producto tipo botana
a base de harina de trigo fortificada con aislado proteco de Lupinus mutabilis. Alfa
Editores tcnicos, 12-20.
Jimnez-Martnez, C., Hernndez-Snchez, H., & Dvila-Ortz, G. (2007). Diminution of
quinolizidine alkaloids, oligosaccharides and phenolic compounds from two species
and soybean seeds by the effect of Rhizopus aligosporus. Journal of the Science of
Food and Agriculture (87).
Jimnez-Martnez, C., Hernndez-Sanchez, H., & Dvila-Ortiz, G. (2003). Production of
a yogurth-like product from Lupinus campestris seeds. Journal of the Science of
Food and Agriculture, 83, 515-522.
Jurez, C. H. (1991). Destoxificacin comparativa de tres especies de Lupinos
silvestres y de Lupinus mutabilis cultivada en Mxico. D. F., Mxico: Instituto
Politcnico Nacional-Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas (?????)
Karayannidou, A., Makri, E., Papalamprou, E., Doxastakis, G., Vaintraub, I., Lapteva,
N., y otros. (2007). Limited proteolysis as a tool for the improvement of the
functionality of sunflower (Helianthus annus L.) protein isolates produced by seeds
or indutrial by-products (solvent cake). Food Chemistry, 104, 1728-1733.
Khattab, R. Y., & Arntfield, S. D. (2009). Funtional properties of raw and processed
canola meal. LWT - Food Science and Technology, 42, 1119-1124.
Khattab, R., Arntfield, S., & Nyachoti, C. (2009). Nutritional quality of legume seeds as
affected by some physical treatments, Part 1: Protein quality evaluation. LWT -
Food Science and Technology, 42, 1107-1112.
Kumosinski, T., & Farell, H. M. (1994). Protein functionality in food sistems. (N. S.
Hrttiarrachchy, & G. R. Ziegler, Edits.) Chicago, Illinois, Estados Unidos de
Norteamrica: Marcell Dekker.
Referencias
UPIBI IPN
63
Lampart-Szczapa, E. (2001). Chemical and functional properties of food proteins. (Z.
E.Sikorski, Ed.) Boca Raton, Florida, United States of America: CRC Press.
Lampart-Szczapa, E., Konieczny, P., Nogala-Kalucka, M., Walczak, S., Kossowska, I., &
Malinowska, M. (2006). Some functional properties of lupin proteins modified by
lactic fermentation and extrusion. Food Chemistry, 96, 290-296.
Lee, H. C., Htoon, A. K., Uthayakumaran, S., & Paterson, J. L. (2007). Chemical and
functional quality of protein isolated from alkaline extraction of australian lentil
cultivars: Matilda and Digger. Food Chemistry, 1199-1207.
Lestari, D., Mulder, W., & Sanders, J. (2010). Improving Jatropha curcas seed protein
recovery by using counter current multistage extraction. Biochemical Engineering
Journal. (articulo en prensa).
Liu, C., Wang, H., Cui, Z., He, X., Wang, X., Zeng, X., y otros. (2007). Optimization of
extraction and isolation for 11S AND 7S globulins of soybean seed strage protein.
Food Chemistry, 102, 1310-1316.
Lpez-Herrera, A. (2002). Manual de prcticas de laboratorio de produccin y
tecnologa de semillas. Mxico: Universidad Autnoma de Chapingo.
Makri, E. A., & Doxastakis, G. I. (2006). Emulsifyinng and foaming properties of
Phaseolus vulgaris and coccineus proteins. Food Chemistry, 98, 558-568.
Martnez-Villaluenga, C., Fras, J., & Vidal-Valverde, C. (2006a). Functional lupin seeds
(Lupinus albus L. and Lupinus luteus L. after extraction of -galactosides. Food
Chemistry, 98, 291-299.
Martnez-Villaluenga, C., Sironi, E., Vidal-Valverde, C., & Duranti, M. (2006b). Effects of
oligosaccharide removing procedure on the protein profiles of lupin seeds.
European Food Reseacrch and Technology, 223, 691-696.
Mohamed, A., Biresaw, G., Xu, J., Hojilla-Evangelista, M. P., & Rayas-Duarte, P. (2008).
Oats protein isolate: thermal, rheological, surface and functional properties. Food
Research International. (articulo en prensa).
Mohamed, A., Hojilla-Evangelista, M. P., Peterson, S. C., & Biresaw, G. (2007). Barely
protein isolate: thermal, funtional, rheological and surface properties. Journal of the
American Oil Chemists' Society , 84, 281-288.
Mohamed, A., Peterson, S. C., Hojilla-Evangelista, M. P., Sessa, D. J., Rayas-Duarte,
P., & Biresaw, G. (2005). Effect of Heat Treatment and pH on the thermal, surface,
and rheological properties of Lupinus albus protein. Journal of the American Oil
Chemists' Society, 82, 135-140.
Referencias
UPIBI IPN
64
Moure, A., J., S., Domnguez, H., & Paraj, J. C. (2006). Functionally of oilseed protein
products: A review. Food Research International (39), 945-963.
Ogunwolu, S. O., Henshaw, F. O., Mock, H.-P., Santros, A., & Awonorin, S. O. (2009).
Funtional properties of protein concentrates and isolates produced from cashew
(Anacardium occidentale L.) nut. Food Chemistry, 115, 852-858.
Oomah, B. D., & Bushuk, W. (1983). Characterizaction of Lupine Proteins. Journal of
Food Science, 48 (38).
Oomah, B. D., & Sitter, L. (2009). Characteristics of flaxseed hull oil. Food Chemistry,
114, 623-628.
O'Reagan, J., & Mulvihill, D. M. (2009). Preparation, characterisation and selected
functional properties of sodium caseinate-maltodextrin conjugates. Food
Chemistry, 115, 1257-1267.
Paraskevopoulou, A., Athanasiadis, I., Kanellaki, M., Bekatorou, A., Blekas, G., &
Kiosseoglou, V. (2003). Functional properties of single cell protein produced by
kefir microflora. Food Rsearch International 36, 431-438.
Pastor-Cavada, E., Juan, R., Pastor, E. J., Alaiz, M., & Vioque, J. (2010). Protein
isolates from two Mediterranean legumes: Lathyrus clymenum and Lathyrus
annuus. Chemical composition, functional properties and characterization. Food
Chemistry .(Articulo en prensa).
Pedroche, J., Yust, M. M., Lqari, H., Girn-Calle, J., Alaiz, M., Vioque, J., y otros.
(2004). Brassica carinate protein isolates: chemical composition protein
characterization and improvement of functional properties by protein hydrolysis.
Food Chemistry, 88, 337-346.
Phillips, L. G., Whitehead, D. M., & Kinsella, J. (1994). Structure-function properties of
food proteins. San Diego, California, Estados Unidos de Norteamrica: Academic
Press.
Pinciroli, M., Vidal, A. A., An, C. M., & Martnez, N. E. (2009). Comparison between
protein functional properties of two rice cultivars. LWT-Food Science and
Technology, 42, 1605-1610.
Pomeranz, Y. (1991). Functional properties of food components (2 ed.). San Diego,
California, Estados Unidos de Norteamrica: Academic Press.
Porres, J. M., Aranda, P., Lpez-Jurado, M., Vilchez, A., & Urbano, G. (2008). Effects of
hydroalcoholic -galactoside extraction and phyrase supplementation on the nutritive
Referencias
UPIBI IPN
65
utilization of manganese, iron, zinc and potassium from lupin (Lupinus albus var.
multulupa)-based diets in growing rats. Food Chemistry, 109, 554-563.
Prodanov, M., Sierra, I., & Vidal-Valverde, C. (2004). Influence of soaking and cooking
on the thiamin, riboflavin and niacin contents of legumes. Food Chemistry, 84, 271-
277.
Purwanti, N., van der Got, A. J., Boom, R., & Vereijken, J. (2010). New directions
towards structure formation and stability of protein-rich foods from globular
proteins. Food science & technology, 21, 85-94.
Raymundo, A., Franco, J. M., Empis, J., & Sousa, L. (2002). Optimization of the
composition of low-fat oil-in-water emulsions stabilizaed by white lupin protein.
Journal of the American Oil Chemists' Society, 79, 783-790.
Rehinan, Z.-u., Rashid, M., & Shah, W. (2004). Insoluble dietary fibre components of
food legumes as affected by soaking and cooking processes. Food Chemistry, 85,
245-249.
Rodrguez-Ambrz, S., Martnez-Ayala, A., Milln, F., & Dvila-Ortz, G. (2005).
Composition and funtional properties of Lupinus campestris protein isolates. Plant
Food for Human Nutrition , 60, 99-107.
Roy, F., Boye, J. I., & Simpson, B. K. (2010). Bioactive proteins and pepetides in pulse
crops: Pea, chickpea and lentil. Food Research International, 43, 432-442.
Ruz, M. A., & Sotelo, A. (2001). Chemical composition nutritive value, and toxicology
evaluation of Mexican wild lupins. Journal Agriculture Food Chemistry, 49, 5336-
5339.
Ruz-Lpez, M. A., Garca-Lpez, P. M., Castaeda-Vazquez, H., Zamora, N. J.,
Garzn de la Mora, P., Bauelos Pineda, J., y otros. (2000). Chemical composition
and antinutrient content of three Lupinus Species from Jalisco, Mexico. Academic
Press, 193-199.
Schgger, H. & Von, J. G. (1987) Tricine-Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrilamida gel
electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDA.
Analytical Biochemistry, 166, 368-379.
Scopes, R. K. (1993). Protein Purification. Principles and Practice (Tercera edicin ed.).
New York, Estados Unidos de Norteamrica: Springer-Verlag.
Seth, S., Agrawal, Y., Ghosh, P., Jayas, D., & Singh, B. (2007). Oil extraction rates of
soya bean using isopropyl alcohol as solvent. Biosystems Engineering, 97, 209-
217.
Referencias
UPIBI IPN
66
Shen, L., Wang, X., Wang, Z., Wu, Y., & Chen, J. (2008). Studies on tea protein
extraction using alkaline and enzyme methods. Food Chemistry, 929-938.
Sipsa, S. (2008). Lupins for Health and Wealth Proceedings of the 12 th International
Lupin Conference. En J. A. Palta, & J. B. Berger (Ed.), Lupin products-Concepts
and reality (pgs. 506-513). Canterbury, New Zealand: International Lupin
Association.
Sirtori, E., Resta, D., Brambilla, F., Zacherl, C., & Arnoldi, A. (2010). The effects of
various processing conditions on a protein isolate from Lupinus angustifolius. Food
Chemistry, 120, 496-504.
Sreerama, Y. N., Sashikala, V. B., & Pratape, V. M. (2009 a). Effect of enzyme pre-
dehulling treatment on dehulling and cooking properties of legumes. Journal of
Food Engineering, 92, 389-395.
Sreerama, Y. N., Sashikala, V. B., & Pratape, V. M. (2009 b). Expansion properties and
ultrastructure of legumes: Effect of chemical and enzyme pre-treatments. LWT -
Food Science and Technology, 42, 44-49.
Sridhar, K. R., & Seena, S. (2006). Nutritional and antinutritional significance of four
unconventional legumes of the genus Canavalia-A comparative study. Food
Chemistry, 99, 267-288.
Such, P., Strakov, E., Kroupa, L., & Vacerek, V. (2008). The fatty acid content of oil
from seeds of some lupin varieties. 12 th International Lupin Conference (pgs.
188-192). Canterbury, New Zealand: International Lupin Association.
Sujak, A., Kotlarz, A., & Strobel, W. (2006). Composition and nutritional evaluation of
several lupin seeds. Food Chemistry, 98, 711-719.
Tang, C.-H., & Ma, C.-Y. (2009). Effect of high pressure treatment on aggregation and
structural properties of soy protein isolate. Food Science and Technology, 42, 606-
611.
Tang, H., Mitsunaga, T., & Kawamura, Y. (2005). Functionality of starch granules in
milling fractions of normal wheat grain. Carbohydrate Polymers, 59, 11-17.
Tharanathan, R. N., & Mahadevamma, S. (2003). Grain legumes -a boon to human
nutrition. Trends in Food Science & Technology, 14, 507-518.
Villavicencio, M. A., & Prez Escandn, B. E. (1998). Lista florstica del estado de
Hidalgo. Recopilacin bibliogrfica. Pachuca, Hidalgo, Mxico: UAEH.
Referencias
UPIBI IPN
67
Vioque, J., Sanchez-Vioque, R., Pedroche, J., del Mar Yust, M., & Milln, F. (2001).
Obtencin y aplicaciones de concentrados y aislados proteicos. Grasas y aceites
(52).
Wu, H., Wang, Q., Ma, T., & Ren, J. (2009). Comparative studies on the functional
properties of various protein concentrate preparations of peanut protein. Food
research International,42, 343-348.
Yoshie-stark, Y., & Wsche, A. (2004). In vitro binding of bile acids by lupin protein
isolates and their hydrolysates. Food Chemistry, 88 (2), 179-184.
Yoshie-Stark, Y., Bez, J., & Wsche, A. (2006). Effect of diferent pasteurization
conditions on bioacties of Lupinus albus protein isolates. LWT, 39, 118-123.
Yoshie-Stark, Y., Wada, Y., & Wsche, A. (2008). Chemical composition, functional
propeties, and bioactivities of rapeseed protein isolates. Food Chemistry,107, 32-
39.
Yu, J., Ahmedna, M., & Goktepe, I. (2007). Peanut protein concentrate: Production and
functional properties as affected by processing. Food Chemistry, 103, 121-129.
Zamora-Natera, F., Garca-Lpez, P., Ruz-Lpez, M., & Salcedo-Perez, E. (2008).
Composicin de alcaloides en semillas de Lupinus mexicanus (fabaceae) y
evaluacin antifngica y aleloptica del extracto alcaloideo. Agrociencia (42), 185-
192.
Zheng, H.-G., Yang, X.-Q., Tang, C.-H., Li, L., & Ahmad, I. (2008). Preparation of
soluble soybean protein aggregates (SSPA) from insoluble soybean protein
concentrates (SPC) and its functional properties. Food Research, 41, 154-164.
UPIBI IPN
68
10. ANEXOS
Anexo 1. Aportaciones
a) Josefina Porras-Saavedra; Alejandro Muoz-Herrera; Norma Gemes-Vera; Jorge
Yez-Fernndez. Caracterizacin del Proceso de Obtencin de Protenas de
Lupinus albus Memoria del 5
to
Congreso Nacional Estudiantil de Investigacin y
5
to
Congreso de Investigacin Politcnica. ISBN: 978-607-414-111-5
b) Jorge Yez-Fernndez; Norma Gemes-Vera; Alejandro Muoz-Herrera; Adolfo
Alejandro Gmez-Morales; Josefina Porras-Saavedra. Estudio de la extraccin de
aceite semillas de Lupinus Memoria del VI Congreso Internacional, XVII Congreso
Nacional de Ingeniera Bioqumica y VIII Jornadas Cientficas de Biomedicina y
Biotecnologa
c) Josefina Porras Saavedra, Roberto Castro Muoz, Alejandro Muoz Herrera,
Norma Gemes Vera, Jorge Yez Fernndez. Propiedades tecno-funcionales
del salvado de Lupinus ssp. Memoria del VII Encuentro Participacin de la Mujer
en la Ciencia. ISBN 976-607-95228-1-0
Anexos
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Anexo 2. Lupinus en Hidalgo
Especies silvestres de Lupinus en el estado de Hidalgo
Lupinus barkeri LIndl.
Lupinus ehrenbergeii Schl
Lupinus elegans HBK
Lupinus exaltatus
Lupinus filicaulis C. P. Smit
Lupinus glabratus Agardh
Lupinus leptophyllus Sch
Lupinus marshallianus
Lupinus mexicanus
Lupinus montanus
Lupinus persistens Rose
Lupinus simulans Rose
Lupinus stipulatus Agardh
Lupinus uncinatus
Lupinus versicolor Sweet
Fuente: Villavicencio y Perez-Escandn, 1998