Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el

laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el
Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han
preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad.
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

OBJETIVOS:
Distinguir y conocer los diferentes medios de cultivo y para que tipo de
microorganismos se utiliza.
Aprender a esterilizar los medios de cultivo pues es importante para la
prctica.
Saber preparar los diferentes medios de cultivo sean slidos o lquidos.

http://www.biologia.edu.ar/animaciones/temas/ciclos/dictiosoma.html

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Microbiologia
General
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CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo pueden clasificarse segn diferentes criterios, pero los ms
importantes son aquellos que se basan en:

SEGN SU ESTADO FSICO (CONSISTENCIA).
1) Medios lquidos: Son los que se presentan en este estado, denominndose
por esta razn caldos. El medio lquido ms utilizado es el llamado caldo nutritivo,
compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza
fundamentalmente cuando se pretende la obtencin de una suspensin bacteriana
de una determinada concentracin.
2) Medios slidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregndoles un
agente gelificante. Los ms utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una
protena animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es
hidrolizada por muchas bacterias, y adems su uso est muy limitado porque su
punto de fusin es bajo (lica a temperatura ambiente) razn por la que no puede
utilizarse para cultivos a 37C, que es la tempera ptima de crecimiento para
muchos microorganismos. Agar-agar: Es un polmero de azcares obtenido de
algas marinas. Se trata de una molcula insoluble enagua pero soluble en agua
caliente; una solucin al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39C y nose funde
por debajo de 85C. Funde a 90C y solidifica una vez fundido alrededor de los
45C. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgnicos indefinidos
que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un
microorganismo. Aunque el agar es una mezcla de polisacridos, Araki, en 1937,
los dividi en dos grupos:- agarosa, con poco sulfato, libre de cido pirvico, y-
agaropectina, con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. La proporcin de
agarosa a agaropectina en el agar vara segn el alga de origen. El agar puede
utilizarse para diferentes fines, aunque los ms importantes son: agar comercial
para la industria alimenticia, agar bacteriolgico, agares purificados y agarosa,
utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que
se produce, se utiliza en trabajo microbiolgico, por lo que es importante la
ausencia de metales txicos.
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3) Medios semislidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a
stos un agente solidificante en una proporcin menor que para preparar medios
slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad de las bacterias.

SEGN SU UTILIZACIN.
1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mnimos para
que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos
especiales. El medio ms conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar
comn, que resulta de la adicin de agar al caldo nutritivo. Otros representantes
de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc.
2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las sustancias
nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el
crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por
adicin de sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis,
etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir suplementos
artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej.
Polivitex, Isovitalex, etc)El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cistena para
su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada
adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).
3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de
ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento de
estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin
microbiana especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se
utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de
enterobacterias.
4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo
impiden totalmente el crecimiento de una poblacin microbiana, se denomina
inhibidor. Los medios inhibidores podran considerarse como una variante ms
restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen
habitualmente por adicin de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que
inhiba completamente el desarrollo de una poblacin determinada. Un medio
inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los grmenes Gram
negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos.
5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia caractersticas
bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o especies. La adicin de un azcar
fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin.
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El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los
grmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. Tambin lo son
el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemlisis), el SS (que es
doblemente diferencial), etc.
6) Medios de identificacin: Son los destinados a comprobar alguna cualidad
especfica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo.
Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el
crecimiento de los microorganismos, el sustrato especfico que vaya a ser
metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. El agar Kligler, el medio
de Simmons y en general, cualquier medio al que se le haya aadido un elemento
diferencial de un microorganismo, son medios utilizados en identificacin.
Actualmente estn apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios
especficos de identificacin para ciertos microorganismos, con lo cual se consigue
simultneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de identificacin. Son
ejemplos de esto ltimo los medios CPS ID3 o Uriline ID(Biomerieux), utilizados
para identificar los grmenes urinarios ms importantes a partir de la placa de
cultivo gracias a la utilizacin de sustratos cromognicos especficos.
7) Medios de multiplicacin: Sirven para obtener una gran cantidad de clulas a
partir de un microorganismo ya aislado. Seemplean en la obtencin de vacunas,
en la investigacin y en la industria. Los medios ms adecuados para la
multiplicacin suelen ser lquidos. El caldo-infusin cerebro-corazn (BHI), es un
ejemplo tpico de estos medios.
8) Medios de conservacin: Se utilizan para conservar una cepa que, por
diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan como
controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en elLaboratorio de
Microbiologa. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas:
a) haciendo pases peridicos de placa a placa,
b) mediante liofilizacin de una suspensin bacteriana, y
c) congelando las cepas en leche descremada estril al 0,1%.




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MATERIALES:



















matraz de 50 ml
papel de aluminio
esptula
lapiz marcador
cocinilla electrica
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AUTOCLAVE

ESTERILIZADOR BALANZA ANALITICA


EQUIPOS:









MUESTRAS:

STANDARD
METHODS
MUESTRA 1
TSN
MUESTRA 2
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METODOS:
PREPARACION DEL AGAR TSN:
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PREPARACION DEL AGAR STANDARD METHODS:

Leer las instrucciones del agar a utilizar e identificar
su clasificacion y pH mostrado en el envase
(suspender 40 gr del medio en 1L de agua destilada).
Realizar los calculos segun los requerimientos en esta
oportunidad 50 ml.
En una balanza analitica pesar 2 g del agar con ayuda
de papel metalico y estufa.
Agregar agua destilada hasta obtener 50 ml, calentar
con agitacion frecuente, hervir por un minuto y medir
su pH.
Esterilizar en un autoclave por media hora y a una
temperatura de 120 C.
Enfriar y observar el estado del agar.
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Leer las instrucciones del agar a utilizar e identificar
su clasificacion y pH mostrado en el envase
. Realizar los clculos segun los requerimientos en
esta oportunidad 50 ml.
En una balanza analitica pesar 1,17 g del agar con
ayuda de papel metalico y estufa.
Agregar agua destilada hasta obtener 50 ml y medir
su pH.
Esterilizar en un autoclave por media hora y auna
temperatura de 120 C.
Enfriar y observar el estado del agar.
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1. en caso de no tener agar de gelatina para el medio solido, que utilizara?.
2. Qu medios de cultivos selectivos y especficos conoce para el anlisis microbiolgico de los
alimentos? Especificar medio y tipo de microrganismos a analizar.
3. Por qu es importante medir y ajustar el pH en medios de cultivo que se preparan a partir de
ingredientes?