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    Microscopio Óptico

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    El microscopio óptico permite observar objetos demasiado pequeños para ser vistos a simple vista mediante el uso de lentes que magnifican la imagen. Está compuesto de un sistema óptico de lentes y objetivos, un sistema mecánico de soporte, y una fuente de iluminación. Existen varios tipos como de contraste de fases, fluorescencia y barrido confocal, cada uno con ventajas para observar diferentes tipos de muestras. La técnica histológica involucra varios pasos de preparación de muestras

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    El microscopio óptico permite observar objetos demasiado pequeños para ser vistos a simple vista mediante el uso de lentes que magnifican la imagen. Está compuesto de un sistema óptico de lentes y objetivos, un sistema mecánico de soporte, y una fuente de iluminación. Existen varios tipos como de contraste de fases, fluorescencia y barrido confocal, cada uno con ventajas para observar diferentes tipos de muestras. La técnica histológica involucra varios pasos de preparación de muestras

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    El microscopio óptico permite observar objetos demasiado pequeños para ser vistos a simple vista mediante el uso de lentes que magnifican la imagen. Está compuesto de un sistema óptico de lentes y objetivos, un sistema mecánico de soporte, y una fuente de iluminación. Existen varios tipos como de contraste de fases, fluorescencia y barrido confocal, cada uno con ventajas para observar diferentes tipos de muestras. La técnica histológica involucra varios pasos de preparación de muestras

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    Microscopio ptico Instrumento para estudiar las clulas, constituido por lentes que magnifican la imagen, y nos permite

    observar aquello que en un principio es invisible para el ojo humano.

    Ocular

    Macromtrico Tubo ptico Micromtrico Revlver Brazo Objetivos

    Pinzas Platina Diafragma

    Fuente de luz

    Base

    Sistema mecnico Base o pie Asa cabezal revolver platina pinzas tornillo de enfoque (macromtrico y micromtrico) tornillo de desplazamiento

    Sistema ptico Objetivos oculares: 4x Roja 10x amarillo 40x azul 100x blanco (oil) Un lente 4x en realidad muestra un objeto a 40 veces su tamao natural. Los lentes 10x muestran un objeto en 100 veces, un 40x a 400 veces, y un 100x en 1.000 aumentos. El objetivo (100 X) es un lente especial que requiere del aceite de inmersin para lograr una buena observacin. Propiedades Aumento: la imagen que estamos viendo es mayor que el tamao real del objeto. Resolucin: capacidad del MO de enfocar distintos y separados dos puntos muy cercanos. Cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor ser la definicin de un objeto. Los microscopios de gran poder resolutivo son especialmente buenos para ver pequeas estructuras. Sistema de iluminacin Foco: da energa elctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condensador. Condensador: concentra la luz a travs de la muestra, afinando drsticamente la imagen y permitiendo que el microscopio mantenga una imagen clara en resoluciones ms altas. Diafragma: regula el exceso de luz para tener una buena iluminacin del objeto a observar Tipos Contraste de fases: Permite observar clulas sin colorear y resulta especialmente til para mirar clulas vivas, realiza modificaciones en la trayectoria de los rayos de luz, los cuales producen contrastes notables en la preparacin. Fluorescencia: se utiliza para ubicacin de protenas, ADN y observar sustancia fluorescentes denominadas fluorforos o fluorocromos (es un componente de una molcula que hace que sta sea fluorescente y capte la luz ultravioleta) Barrido Confocal: incluye como fuente de luz un lser gracias a ello se consigue un aumento en la resolucin eliminando as la interferencia que produce la luz que llega de los diferentes campos pticos de todo el grosor de la muestra que se observa, permitiendo ver imgenes tridimensionales o en relieve.

    Microscopio Electrnico (ME) Electrnico de Transmisin: no utiliza luz dirige el haz de electrones hacia el objeto que se desea aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del espcimen. De Barrido: Permite observar reas mucho mayores sobre la superficie de los objetos. Se puede observar, superficies y relieve. Los se desplazan sobre la muestra realizando un barrido de la superficie que es proyectado sobre la pantalla de observacin. Tcnica Histolgica Es la serie de pasos que han de darse para obtener un preparado observable con el microscopio. Pasos
    1. Fijacin: detener el proceso de destruccin celular, precipitar la protenas para

    preservar la estructura (forma) evita la contaminacin de la muestra.


    2. Deshidratacin: eliminar la cantidad de agua, intracelular como extracelular. Se

    realiza en forma progresiva con sucesivos baos en alcohol etlico cada vez menos hidratados 70% - 80% - 90% - 96% - 100% para detener el fijador.
    3. Aclaramiento: permite que el alcohol sea reemplazado por un lquido solvente

    (xileno) miscible (mezclable).


    4. Inclusin en Parafina: Para la inclusin de muestras que han de observarse con

    microscopa ptica se utiliza sobre todo la parafina Es recomendable una dureza mayor para incluir muestras ms duras. Las parafinas ms usadas tienen un punto de fusin en torno a los 56C - 60 C. La parafina no es miscible con agua.
    5. Corte con Micrtomo: Los aparatos mecnicos para hacer secciones de un grosor

    de micrmetros se denominan micrtomos, generalmente se usa el micrtomo para material incluido en parafina.
    6. Desparafinado con Xileno: Para realizar la desparafinacin de los cortes los

    mismos son introducidos en un frasco de boca ancha que contenga xileno,


    7. Rehidratacin: se realizan sucesivos lavados en alcohol 100 96 y 70 una vez

    realizados los baos con alcohol se puede proceder a la hidratacin de los cortes. La hidratacin es una operacin necesaria.
    8. Coloracin

    Simple 1 color. Directas: se producen por inmersin en el bao colorante. Diferencial 2 colores o ms. Indirectas: en este tipo de coloracin, el colorante no puede actuar directamente, el objeto que ha de colorearse debe ser tratado de antemano por otra sustancia que lo prepare para admitir el colorante.

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