Evaluacin de tres metodologas de

tratamiento con metabisulfito de sodio en

camarones enteros para prevenir melanosis









Mario Roberto Alvarez Herrera














2
ZAMORANO
Carrera de Ciencia y Produccin Agropecuaria

Diciembre, 2000

ZAMORANO
Carrera de Ciencia y Produccin
Agropecuaria





Evaluacin de tres metodologas de
tratamiento con metabisulfito de sodio en la
cosecha de camarones enteros para prevenir
melanosis






Proyecto especial presentado como requisito parcial
para optar al ttulo de Ingeniero Agrnomo
en el grado acadmico de Licenciatura





Por:

Mario Roberto Alvarez Herrera
3







Zamorano, Honduras
Diciembre, 2000
















El autor concede a Zamorano permiso
para reproducir y distribuir copias de este
trabajo para fines educativos. Para otras personas
fsicas o jurdicas se reservan los derechos del autor.






Mario Roberto Alvarez Herrera





4










Zamorano, Honduras
Diciembre, 2000









Evaluacin de tres metodologas de tratamiento con
metabisulfito de sodio en la cosecha de camarones enteros para
prevenir melanosis


presentado por

Mario Roberto Alvarez Herrera


Aprobada


_______________________ _____________________________
Daniel Meyer, Ph. D. Miguel Vlez, Ph. D.
Asesor Principal Coordinador de Area Temtica



5
_______________________ _____________________________
Claudia Garca, Ph. D. Jorge Ivn Restrepo, M.B.A.
Asesor Coordinador de la Carrera de
Ciencia y Produccin Agropecuaria


_______________________ _____________________________
Carlos Aceituno, M. Sc. Antonio Flores, Ph. D.
Asesor Granjas Marinas Decano Acadmico


_______________________ _____________________________
Aura Jurez, Ing. Keith L. Andrews, Ph. D.
Asesor Director General



_______________________
John Jairo Hincapi, Ph. D.
Coordinador PIA Zootecnia





DEDICATORIA


A Dios todopoderoso, por guiarme y brindarme sabidura en cada faceta de mi vida.

Tambin a mis padres, por el amor y apoyo que me han brindado para llegar a ser lo que
soy. A mis hermanos Jos Luis y Uriel por la comprensin y cario que han expresado a
travs de su delicada forma de tratarme. Ellos representan todo para m en la vida.

A mi to Octaviano y su familia, por tratarme como una persona muy especial y
brindarme su apoyo incondicional. A mis abuelos, por su delicadeza y sus sabios
consejos. A todos mis tos y primos. Todos aportaron un granito de arena en la
culminacin de una meta muy importante en mi vida.

A Don Alonso, Doa Ruth, Aliesther, Alonso, Jannory y Brenda, por tratarme como un
miembro ms de su hermoso hogar.
6

A mis mejores amigos, Daniel, Lempira, Allyn, Angel, Reyniero, Ricardo, Norman y
Toms. Por comprenderme y soportarme da a da. A Paola y Brbara, Gracia. Por
regalarme una sonrisa siempre. A todos mis compaeros y colegas.

A Leonel Morales por demostrarme su amistad desinteresada y ser una persona muy
ntegra. Representas algo muy especial para mi y mi familia.





















AGRADECIMIENTOS


A Dios por darme salud y sabidura.

A mis asesores, Dr. Meyer, por brindarme todos sus conocimientos, ser muy paciente y
ser sin duda muy especial. A la Dra. Claudia Garca por sus sabias orientaciones y
delicado trato. Al Ing. Carlos Aceituno por su amistad de calidad total y su gran
experiencia. A la Ing. Aura Marina Jurez, por su amistad y cada una de las consultas. A
todos mil gracias por su importante apoyo en cada una de las reas que manejan
excelentemente y fundamento el desarrollo de este estudio.
7

Al Ing. Hctor Corrales, Ricardo Gmez, Henrique Weddle, Allan Garca, Gustavo
Flores, Santiago Lpez y las personas de Granjas Marinas San Bernardo, que permitieron
el desarrollo de este trabajo.

Al Ing. Rafael Zelaya, por su delicado gesto de ofrecernos su importante presencia en la
presentacin de la defensa de tesis.

Al Ing. Napolen Araujo por su excelente colaboracin y su desinteresada amistad. A
Galileo por apoyarnos.

Al Lic. Guillermo Espinoza, Carlos Palmese, Denis Canales y cada una de las personas
que laboran en el Departamento de Investigacin y Desarrollo del Grupo Granjas Marina
S. A. Sin ustedes no se hubiera desarrollado este estudio.

Al personal del Departamento de control de calidad del GGM, Claudia, Blanca, Alba,
Rosalba Osiris, Ricardo, Javier, Jos Ruben. Su apoyo fue fundamental para el desarrollo
de este estudio, mil gracias.















AGRADECIMIENTO A PATROCINADORES


A la Secretara de Agricultura y Ganadera de Honduras por la ayuda financiera otorgada
para mi formacin profesional durante el cuarto ao de estudio en Zamorano, su apoyo
fue fundamental en el desarrollo de mi formacin profesional.
8

Al Fondo Dotal Hondureo, por financiar parte de mi carrera en Zamorano.

Al Laboratorio de Acuicultura de Zamorano por financiar parte de mi ltimo trimestre en
cuarto ao.

Al Grupo Granjas Marinas S.A, por financiar parte del desarrollo de mi proyecto especial



























RESUMEN


9
Alvarez H., Mario R. 2000. Evaluacin de tres metodologas de tratamiento con
metabisulfito de sodio (MBS) en la cosecha de camarones enteros para prevenir
melanosis. Proyecto Especial del Programa de Ingeniera Agronmica, Zamorano,
Honduras. 28 p.

El camarn entero exportado al mercado francs representa una alternativa de
diversificacin al Grupo Granjas Marinas (GGM). Los franceses castigan fuertemente el
camarn con presencia de melanosis y residuos de sulfitos superiores a 150 ppm. Los
objetivos del estudio fueron evaluar tres metodologas para tratar camarones enteros con
MBS, evaluar los niveles de absorcin de sulfitos segn el peso del camarn, determinar
su reduccin en congelamiento durante seis semanas, y comparar los mtodos de
deteccin de sulfito en tejidos de camarones, Monier Williams (M-W) e Idometra (IM).
La metodologa tradicional (MT) fue evaluada con cinco lotes comerciales de camarn
entero procesados por el GGM (30,000 kg). El mtodo de inmersin controlada (MIC) se
realiz tratando los camarones en una solucin con 10% de MBS en mezcas, 4:1 y 1:1
(solucin:hielo) durante 1, 6, 10 y 11 minutos. Adems se realizaron tratamientos con
MBS a camarones clasificados en cuatro pesos durante seis semanas en almacenamiento
a -18 C. La metodologa de dinmica del recipiente (MDR) fue evaluada con soluciones
de MBS (0.1, 0.5, 0.8, 1.0 y 1.5%) adicionadas a los recipientes de cosecha para tener 6,
12, 24 y 36 horas de contacto con los camarones. En las tres metodologas se evaluaron
residuos de sulfitos y grado de melanosis. Todos los lotes de proceso de la MT tenan
ms de 150 ppm de residuos de sulfito y hubo mucha variacin en la concentracin
detectada de sulfito. Los camarones manejados con la MIC y la mezcla de 4:1 absorbi
ms sulfitos que la mezcla 1:1 (P<0.001). Los camarones de 14 y 17 g tratados con 10%
MBS en mezcla 4:1 durante 10 minutos tenan menos de 150 ppm de residuos de sulfito.
Los camarones de 8 g absorbieron 74% ms sulfitos que los camarones de 17 g. Hubo
20.5% de reduccin de residuos de sulfitos a lo largo de seis semanas de almacenamiento
en los camarones tratados segn el peso. Los camarones que mejor cumplan con las
exigencias del mercado francs fueron los tratados con 0.5% de MBS durante 24 horas de
contacto de la MDR. El mtodo de deteccin de M-W detect ms residuos de sulfito que
la IM (P<0.004). El mtodo de M-W result ser el ms eficiente para detectar residuos de
sulfito. La MDR result en una excelente alternativa para cosechar camarones enteros y
exportarlos al mercado francs.

Palabras claves: Dinmica del recipiente, inmersin controlada, iodometra, mercado
francs, metodologa tradicional, Monier Williams.


___________________
Dr. Abelino Pitty
10


Nota de Prensa


La melanosis en camarones enteros y como podemos prevenir su desarrollo.

La melanosis es referida a una coloracin negruzca causada enzimticamente por la
polifenol oxidasa (tirosinasa). Esta enzima reacciona con el contenido celular del
camarn para formar pigmentos. La melanosis es considerada el principal problema en la
industria del camarn entero. Se desarrolla a las pocas horas de la muerte del camarn,
comenzando en la cabeza del camarn y ramificndose a travs de la cola.

El metabisulfito de sodio (MBS) provee un efectivo control en el desarrollo de la
melanosis. La Comunidad Econmica Europea (CEE) acepta hasta 150 ppm de residuos
de sulfito para camarones enteros tratados con MBS. El Grupo Granjas Marinas (GGM) a
travs del su Departamento de Investigacin y Desarrollo, evalu en conjunto con
Zamorano tres metodologas para tratar el camarn entero recin cosechado con MBS
para prevenir la melanosis.

La metodologa tradicional (MT) fue evaluada mediante cinco lotes de camarn entero
procesados por el GGM. La MT involucra la preparacin de soluciones de MBS (200,000
ppm) en 500 L de agua a temperatura ambiente en estructuras especiales de 1000 L de
capacidad. Los camarones fueron inmersos en estas soluciones durante 3 a 4 minutos y
empacados con hielo y agua en los recipientes de cosecha (bines). Para la metodologa de
inmersin controlada (IC) los camarones fueron tratados en solucin preparada de MBS
(100,000 ppm) con una mezcla 1:1 y 4:1 (solucin:hielo) durante 1, 6, 10 y 11 minutos de
inmersin. La metodologa de dinmica del bin (MDB) fue evaluada con soluciones de
MBS (0.1, 0.5, 0.8, 1.0 y 1.5%) adicionadas a los bines para tener 6, 12, 24 y 36 horas de
contacto con los camarones.

La MT present mucha variacin en la concentracin detectada de sulfito en los tejidos
de los camarones y no hubo un control efectivo en cuanto a melanosis. La IC result con
residuos de sulfito mayores a 150 ppm y no hubo un control adecuado en cuanto a la
melanosis. Los camarones que mejor cumplan con las normas de la CCE y con un
excelente control en cuanto a melanosis fueron los tratados con 0.5% de MBS durante 24
horas de contacto con los en los recipientes de cosecha.

La MDB result en una excelente alternativa para cosechar camarones enteros y
exportarlos a los mercados ms exigentes de Europa en cuanto a presencia de melanosis,
11
los camarones tratados con esta metodologa no presentaron melanosis despus de seis
semanas en almacenamiento a 18C.

____________________________
Lic. Sobeyda Alvarez



12



CONTENIDO

Portadilla...................................................................................... i
Autora............................................................................................. ii
Pgina de firmas............................................................................... iii
Dedicatoria....................................................................................... iv
Agradecimientos.............................................................................. v
Agradecimientos a patrocinadores................................................... vi
Resumen....................................................................................... vii
Nota de Prensa................................................................................. viii
Contenido..................................................................................... ix
Indice de Cuadros........................................................................ xi
Indice de Figuras.. xii
Indice de Anexos............................................................................. xiii



1.
INTRODUCCION.....................................................................
1



2.
MATERIALES Y METODOS............................................
4
2.1 UBICACION................................................................................... 4
2.2 METODOLOGIAS DE TRATAMIENTO CON MBS.................. 4
2.2.1 METODOLOGIA TRADICIONAL....................................... 4
2.2.1.1 Preparacin de la solucin y tratamientos....................................... 4
2.2.1.2 Toma de las muestras...................................................... 4
2.3 METODOLOGIA DE INMERSION CONTROLADA. 5
2.3.1 Prueba de laboratorio.................................................................... 5
2.3.1.1 Anlisis de SO
2
-
de las muestras... 5
2.3.2 Concentracin de SO
2
-
en camarones de diferentes pesos promedios y
su reduccin durante seis semanas de almacenamiento a -
18C...... 5
2.3.2.1 Preparacin de la solucin, tratamientos y recoleccin de
muestra..... 5
2.3.2.2 Anlisis de las muestras... 6
2.3.3 Prueba de campo de la metodologa de inmersin controlada. 6
2.4 METODOLOGA DE DINAMICA DEL BIN. 6
2.4.1 Preparacin de la solucin, tratamientos y recoleccin de
muestra.... 7
2.5 ANALISIS ESTADISTICO 7
13



3.
RESULTADOS Y DISCUSION..........................................
8
3.1 METODOLOGIA TRADICIONAL 8
3.2 METODOLOGIA DE INMERSION CONTROLADA. 9
Ensayos en el laboratorio........................................ 9
3.2.2 Absorcin de MBS, reduccin de SO
2
-
a travs del tiempo y evaluacin
de melanosis en cuatro pesos pomedios de camarn entero. 11
3.2.3 Prueba de campo de la metodologa de inmersin controlada .... 15
3.2.4 Comparacin de dos mtodos de deteccin de residuos de SO
2
M-W
vs IM. 16
3.2.4.1 Comparacin general... 16
3.2.4.2 Comparaciones detectadas con M-W inferiores a 100 ppm de
SO
2.
comparadas a las detectadas por IM.. .. 18
3.3 METODOLOGIA DE DINAMCA DEL BIN.... 20



4.
CONCLUSIONES....................................................................
21



5.
RECOMENDACIONES........................................................
22



6.
BIBLIOGRAFIA......................................................................
23



7.
ANEXOS.....................................................................................
24














14













INDICE DE CUADROS

Cuadro

1. Concentracin de residuos de SO
2
-

con el mtodo de Monier Williams
y el grado de melanosis en cinco lotes de camarn entero, tratados
durante su cosecha con el mtodo tradicional con
MBS. 8



2. Concentracin de residuos de SO
2
-

y evaluacin de melanosis en cuatro
tiempos pos-tratamiento en camarones enteros(promedio 12 g) tratados
con 10% MBS en una mezcla de 4:1 (solucin:hielo) durante 11
minutos 16



3. Comparacin general de costos por muestra analizada, de dos
metodologas de determinacin de SO
2
-
en tejidos de
camarones.... 17



4. Comparacin de medias ajustadas de 16 tratamientos, utilizando cinco
concentraciones de MBS con cuatro tiempos de contacto de los
camarones con las soluciones. 22






15
INDICE DE FIGURAS

Figura

1. Concentracin de SO
2
-

(ppm) en camarones enteros, tratados en el
laboratorio con MBS al 10% en dos mezclas de solucin:hielo y con
cuatro tiempos de inmersin.... 10



2. Concentracin de residuos de SO
2
-

(determinado por el mtodo de M-
W) en camarones enteros, tratados con MBS al 10% en una mezcla 4:1
(solucin:hielo) durante diez minutos. .. 13



3. Evaluacin de melanosis en tres tiempos pos-tratamiento de camarones
enteros, tratados con 10% de MBS en una mezcla 4:1 (solucin: hielo)
durante 10 min de inmersin bajo condiciones de laboratorio. ... 13



4. Reduccin de la concentracin de SO
2
-

en tejido de camarones enteros
con cuatro pesos promedios durante seis semanas de almacenamiento a
18C pos-tratamiento a 10% MBS en una mezcla solucin:hielo 4:1
durante 10 minutos. . 14



5. Comparacin de dos mtodos (M-W y IM) de detccin de SO
2
-

en
tejido de camarn. Se incluye el porcentaje de SO
2
detectado por IM en
comparacin con la concentracin determinada por el mtodo M-W y
su promedio.. 17



6. Comparacin de dos mtodos (M-W y IM) de detccin de SO
2
-

en
tejido de camarn. Se incluye el porcentaje de deteccin de SO
2

detectado por IM en comparacin con la concentracin determinada
por el mtodo M-W entre el rango de 35 a 95 ppm de SO
2
y su
promedio 18



7. Concentraciones de SO
2
-
detectado (mtodo de M-W) en camarones
enteros tratados con cinco concentraciones de MBS y cuatro tiempos
de contacto por la metodologa de dinmica del bin.. 19





16





INDICE DE ANEXOS

Anexo

1. Procedimiento del mtodo de deteccin de residuos de sulfito
denominado Monier Williams (M-W). 24

2. Grados de afeccin de melanosis en una escala de 0 a 10 grados 27

17
1. INTRODUCCION

La industria del camarn cultivado en Honduras contribuye socioeconmicamente al
desarrollo de la zona sur del pas. La actividad genera alrededor de 25,000 empleos
directos (Sampson, 1997) y 112 millones de dlares al ao en divisas (ANDAH,
1994). El mayor exportador hondureo de camarn cola es el Grupo Granjas Marinas
S.A. (GGM). El GGM tiene inters en diversificar sus productos de exportacin y
ampliar los mercados donde son comercializados. El mercado tradicional para el
camarn cultivado en Centroamrica es de colas exportadas a Norteamrica.

En Europa existe la posibilidad de comercializar el camarn entero (Villaln, 1994).
Ecuador tiene ms de 15 aos de experiencia exportando camarn entero a Europa. El
mercado europeo es el ms exigente en cuanto a calidad de producto. El GGM cuenta
con algunos antecedentes sobre el proceso adecuado del camarn entero (GGM,
1999) pero no conoce en totalidad los parmetros de calidad que estos mercados
selectos exigen. Los procedimientos actuales de exportacin de camarn con cabeza,
implementados por las principales exportadoras de camarn en Honduras, an no
logran satisfacer las exigencias del mercado francs.

La presentacin del camarn entero como producto, constituye una fuente potencial
de problemas en el control de calidad. La mayora de los rganos y enzimas
digestivas se encuentran en la regin del cefalotrax del camarn. Estos rganos son
los primeros en descomponerse al morir y su congelamiento no prolongar,
sustancialmente, la prevencin del deterioro en la calidad del camarn (Villaln,
1994).

El mercado francs exige un camarn con carne de consistencia firme y con un
exoesqueleto rgido. Adems, el sabor del hepatopncreas es importante para los
compradores europeos. Para ofrecer un producto de alta calidad, el hepatopncreas
del camarn debe tener un sabor a marisco y no amargo. Los europeos son muy
exigentes en cuanto a la apariencia del camarn y castigan fuertemente el camarn
con presencia de melanosis (black spot). El trmino melanosis se refiere a una
coloracin negruzca causada enzimticamente por la polifenol oxidasa (tirosinasa).
La enzima reacciona con el contenido celular formando pigmentos insolubles. Los
pigmentos se desarrollan principalmente en un medio alcalino (McEvely et al., 1991)

La melanosis hace su aparicin pocas horas despus de haber muerto el camarn. La
coloracin negruzca aparece primeramente en la cabeza, extendindose
paulatinamente a la cola y ramificndose por las extremidades del camarn (Hispano
Qumica S.A., 1987).
18
La melanosis resulta en un problema de apariencia, anloga al oscurecimiento de
manzanas y papas. El proceso bioqumico se asemeja al broncearse la piel humana
cuando es expuesta por periodos prolongados de tiempo a la luz solar (Slattery et al.,
1992). La melanosis reduce el valor comercial y la aceptacin del producto
(Wigglesworth, 1995). Las normas oficiales de los Estados Unidos consideran a la
melanosis como una mancha, no como una alteracin (Lpez, 1990). Esta diferencia
es de gran importancia econmica. El productor de camarn entero queda exento de
responsabilidades sanitarias, ya que la melanosis es considerada como un fenmeno
natural del camarn.

Uno de los mtodos ms sencillos para la prevencin de melanosis es el descabezado,
ya que la mayora de la enzima causante del oscurecimiento est ubicada en la zona
del cefalotrax del camarn. Las altas temperaturas alcanzadas en cocinar los
camarones inactivan la enzima que causan melanosis. El cido brico evita melanosis
pero su uso fue prohibido por la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) por tener
efectos negativos al cerebro especialmente en nios (Lpez, 1990). Los sulfitos han
sido usados por la industria pesquera desde los aos 50 para prevenir melanosis
(Slattery et al., 1992).

El dixido de azufre (SO
2
-
) y sus derivados han sido utilizados en alimentos como
preservante general. Inhiben y controlan microorganismos y son usados como
antioxidantes y agentes reductores. Igualmente, los sulfitos inhiben la enzima
responsable de desarrollar la melanosis, que es el problema con mayor importancia en
la industria del camarn entero (Wigglesworth, 1995; Lpez, 1990).

Las formas de sulfito ms comnmente utilizadas en alimentos incluyen el gas de
dixido de sulfuro (SO
2
-
), sales de sulfito (SO
2
-2
), bisulfito (HSO
3
-1
) o metabisulfito
(MBS). El utilizado ms frecuentemente para tratar camarones es el MBS, porque
exhibe buena estabilidad qumica contra la autooxidacin en la fase slida (Fennema,
1996).

El uso de metabisulfito de sodio (MBS), bien sea mediante inmersiones en soluciones
a ciertas concentraciones o mediante un roco con o sin agregar cido ctrico, provee
un efectivo control del oscurecimiento enzimtico del camarn (Fennema, 1996). El
MBS comercial es de bajo precio y totalmente soluble en agua. El MBS origina
diversos productos segn la acidez del agua. El MBS se presenta en el mercado en
forma de un polvo blanco. La humedad descompone el MBS. La accin inhibidora
del MBS sobre la enzima polifenol oxidasa es irreversible.

El GGM a travs del Departamento de Investigacin y Desarrollo ha investigado
entre 1999-2000 la metodologa de inmersin controlada para tratar camarones
19
enteros con MBS, y recientemente sobre la metodologa de dinmica del bin. Ambas
metodologas se investigan para encontrar una mejor alternativa para tratar con MBS
a camarones para ser exportados a mercado francs.

La metodologa tradicional de tratamiento con MBS resulta en concentraciones de
SO
2
-
en el camarn que sobrepasan los lmites aceptados para el mercado francs. La
metodologa tradicional involucra la preparacin de soluciones con 100 kg de MBS
en 500 L de agua a temperatura ambiental en pilas (matadores). Los camarones recin
cosechados son baados en las soluciones utilizando canastas o mallas durante 3 a 4
minutos.

La deteccin de residuos de SO
2
-
en tejidos de camarones se realiza con dos mtodos
de laboratorio, que son de Monier Williams (M-W) e Iodometra (IM). El mtodo de
M-W es empleado internacionalmente (Lpez, 1990). El mtodo de IM es menos
costoso y necesita menos tiempo para realizar cada anlisis. La Comunidad
Econmica Europea (CEE) actualmente acepta hasta 150 ppm de SO
2
-
en camarones
enteros tratados con MBS (CEE, 2000).

El mercado francs es atractivo por permitir al GGM comercializar un producto de
menor tamao comparado al mercado de camarn cola. Cosechar camarones ms
pequeos, contribuir a la eficiencia productiva de la empresa, acortando los ciclos de
produccin y reduciendo el tiempo de exposicin de los camarones a diferentes
patgenos.


OBJETIVOS


OBJETIVO GENERAL

Evaluar metodologas para tratar el camarn recin cosechado con MBS para evitar la
melanosis y cumplir con las exigencias del mercado francs.


OBJETIVOS ESPECIFICOS

Comparar los mtodos de M-W e IM de deteccin de SO
2
-

en camarones enteros.

Analizar la concentracin de SO
2
-
y melanosis segn el peso del camarn.

Determinar los porcentajes de reduccin de residuos de SO
2
-

en camarones enteros en
funcin del tiempo en almacenamiento a -18C.



2. MATERIALES Y METODOS


2.1 UBICACION

Los tratamientos del camarn entero con metabisulfito de sodio (MBS) fueron
realizados en Granjas Marinas San Bernardo (GMSB), ubicada en el Departamento de
Choluteca, Honduras. Las pruebas de deteccin de residuos de SO
2
-

y evaluaciones de
melanosis fueron realizadas en Biolab, Departamento de Investigacin y Desarrollo
(DID) del Grupo Granjas Marinas (GGM), Punta Ratn, Honduras.


2.2 METODOLOGIAS DE TRATAMIENTO CON MBS

El GGM a travs de su DID evalu tres metodologas para tratar los camarones
enteros durante su cosecha. Las metodologas evaluadas fueron: la metodologa
tradicional, inmersin controlada y dinmica del bin.


2.2.1 MESTODOLOGIA TRADICIONAL

2.2.1.1 Preparacin de la solucin de MBS y tratamiento con matadores. En
varios bines se prepararon 500 L de una solucin a 200,000 ppm de MBS con agua de
la laguna a temperatura ambiental. Se realizaron los tratamientos en canastas con 15 a
20 kg de Litopenaeus vannamei, realizando inmersiones en los bines durante 3 a 4
min, aproximadamente. Los camarones tratados con MBS se depositaron en los bines
de cosecha, agregando una capa de hielo (20 kg) y luego, una capa de camarones (30
kg). A cada capa se agregaron 20 L de agua de la laguna para evitar el dao fsico de
los camarones y el roce con el hielo.


2.2.1.2 Toma de las muestras. Los camarones utilizados en estas pruebas fueron
tomados de cosechas comerciales realizadas por el GGM (6,000 kg cada una) de
camarn entero que fueron tratados con MBS con la metodologa tradicional,
procesados y almacenados en diferentes lotes en la Empacadora San Lorenzo (ESL),
en julio del 2000.

Se evaluaron cinco lotes de camarones tratados en soluciones de MBS con 20, 19, 14,
15 y 8 das en almacenamiento en ESL. Se tom al azar dos cajas de camarn entero
de 2.25 kg cada una para cada prueba. Se realiz anlisis de SO
2
-
(con el mtodo de
M-W) y determinacin de los grados de melanosis por duplicado para cada
21
lote de camarn procesado. La evaluacin de melanosis se hizo con lotes de 20
camarones procesados segn la escala de melanosis de 0 a 10 grados (Anexo 2). Se
calcul el promedio de melanosis para cada lote.

2.3 METODOLOGIA DE INMERSION CONTROLADA

Est metodologa involucra la preparacin de una solucin de MBS a 100,000 ppm.
La solucin se mezcla con hielo en bines de 1000 L de capacidad. Los camarones
enteros recin cosechados fueron sumergidos en las mezclas de solucin de MBS y
hielo durante periodos cortos de tiempo manejados rigurosamente.


2.3.1 Prueba de laboratorio

Se realizaron tratamientos de camarones enteros con una solucin de MBS (10%)
mezclados con hielo a las proporciones 1:1 y 4:1 y con tiempos de inmersin de 1, 6,
10 y 11 min. Estas pruebas fueron realizadas en Biolab en baldes de 20 L de
capacidad.

Para cada tratamiento (mezcla solucin:hielo y tiempo de inmersin) se utilizaron 100
camarones cosechados con atarrayas en horas de la maana en lagunas de produccin
de GMSB. Los camarones fueron depositados en baldes con agua de la laguna y
aireados.

Una vez cosechados los 100 camarones para cada tratamiento, se realizaron las
inmersiones con una malla o canasta que permiti el paso uniforme de la solucin
alrededor de todos los camarones. Luego de la inmersin en la solucin de MBS los
camarones recibieron un bao en una solucin de cloro a 30 ppm durante tres
minutos. Los camarones tratados con MBS fueron depositados en bolsas plsticas
etiquetadas por tratamiento, que fueron colocadas en una hielera a 5C para su
transporte a Biolab.


2.3.1.1 Anlisis de SO
2
-
de las muestras. Se realizaron anlisis de residuos de SO
2
-

al da siguiente de las inmersiones en las soluciones de MBS, mediante los mtodos
M-W e IM. Cada mtodo de deteccin de residuos se realiz dos veces para cada lote
de camarones tratados y con tres repeticiones.


2.3.2 Concentracin de SO
2
-
en camarones de diferentes pesos promedios y su
reduccin durante seis semanas de almacenamiento a 18 C


2.3.2.1 Preparacin de la solucin, tratamientos y recoleccin de muestras.
Grupos de 150 camarones con pesos promedio de 8, 12, 14 y 17 g fueron tratados
mediante la metodologa de inmersin controlada, utilizando 10% MBS en una
22
mezcla solucin:hielo de 4:1 durante 10 min. La preparacin de las soluciones se
realiz 30 min antes de realizar la inmersin en baldes de 20 L de capacidad. Los
camarones fueron cosechados con atarrayas en horas de la maana en las lagunas de
produccin de GMSB. Los camarones cosechados presentaron pesos promedios
similares a los evaluados en los tratamientos anteriores. Se utiliz una balanza digital
de bolsillo para clasificar los camarones segn su peso. Cada balde tena un aireador.

Una vez recolectados los 150 camarones, se realizaron las inmersiones de cada grupo
con ayuda de una canasta o malla que permiti el paso de la solucin preparada
alrededor de todos los camarones. Luego cada lote recibi un bao en una solucin de
cloro (30 ppm) durante tres minutos. Cada lote de camarones tratados se empac en
tres bolsas plsticas de 50 camarones cada una, etiquetadas con la fecha de
tratamiento, peso y nmero de laguna.


2.3.2.2 Anlisis de las muestras. Se realiz la deteccin de residuos de SO
2
-

mediante el mtodo M-W en la semana uno, tres y seis pos-tratamiento. Cada muestra
fue analizada dos veces. Se realiz una evaluacin para la presencia de melanosis en
los camarones tratados en la semana uno, tres y seis pos-tratamiento. Cada vez se
evaluaron 20 camarones. Ellos fueron clasificados en una escala de 1 a 10 grados de
melanosis (Anexo 2).


2.3.3 Prueba de campo de la metodologa de inmersin controlada

Durante el mes de julio del 2000 se realiz una cosecha parcial de una laguna
previamente seleccionada segn la calidad de los camarones (sabor y textura). El 17
de julio a las 11:00 p.m. comenz la cosecha. Se prepararon soluciones con 10% de
MBS, en mezcla de solucin:hielo de 4:1, en tres tinas de plstico de 200 L de
capacidad cada una. A cada tina se le agreg 72 L de agua, 18 kg de hielo y 10 kg de
MBS. Los camarones fueron recolectados en canastas con capacidad de 20 kg y
sumergidos en la solucin de MBS durante 11 min. Se trat un total de 80 kg de
camarn, el cual fue empacado en hieleras de 0.10 metros cbicos. Se coloc una
capa de hielo y luego una de camarones de un grosor de 10 cm cada una en la hielera.
Las hieleras fueron transportadas al da siguiente a ESL donde los camarones fueron
procesados y empacados en cajas de 2.25 kg y almacenadas en cuartos fros de la
misma empresa. Se realiz el anlisis de residuos de SO
2
en los camarones con el
mtodo de M-W y una evaluacin de melanosis en las semanas uno, dos, cuatro y seis
pos-tratamiento.


2.4 METODOLOGIA DE DINAMICA DEL BIN

Esta metodologa involucra la adicin de soluciones con baja concentracin de MBS
(< 1.5% MBS), que se distribuye uniformemente en todo el perfil del bin de cosecha.
As la solucin permanece en contacto con los camarones por un tiempo prolongado
23
(12 a 36 hs). El tiempo de contacto depende de la facilidad de transporte de los bines
de cosecha hasta la planta de proceso y la capacidad de procesamiento de la planta.


2.4.1 Preparacin de las soluciones, tratamientos y recoleccin de muestras

En horas de la maana se cosecharon 75 kg de camarn de una laguna de produccin,
utilizando atarrayas. Los camarones fueron recolectados en canastas con capacidad de
20 kg. Se prepararon soluciones al 0.1, 0.5, 0.8, 1.0 y 1.5% de MBS 30 min antes de
cosechar los camarones en baldes de 20 L. Para cada solucin de MBS se utiliz una
hilera de 0.20 metros cbicos y con una altura de 50 cm. A cada hielera se le agreg
15 kg de camarn entero, distribuidas en tres capas uniformes. Cada capa de
camarones fue colocada sobre una capa de hielo y se les agregaron proporciones
iguales de las soluciones de MBS preparadas para cada hielera.

De cada hielera se sacaron muestras de 50 camarones a intervalos de 6, 12, 24 y 36 hs
pos-tratamiento para realizar pruebas de deteccin de SO
2
-
con el mtodo de M-W y
evaluar por la presencia de melanosis. La deteccin de SO
2
-
fue repetida dos veces
para cada lote de camarones evaluados.


2.5 ANALISIS ESTADISTICO

El anlisis de los resultados se realiz con el programa Statistical Analysis System
(SAS, 1991). Se analiz la variable residuos de SO
2
-
(ppm) y grado de melanosis
utilizando un diseo completo al azar (DCA), para la metodologa tradicional e
inmersin controlada. Se analiz la variable residuos de SO
2
-
(ppm) utilizando un
modelo de medidas repetidas en el tiempo, para los tratamientos con MBS segn los
pesos y almacenados durante seis semanas a -18C.














3. RESULTADOS Y DISCUSION


3.1 METODOLOGIA TRADICIONAL

El mercado francs acepta camarones con un promedio mximo de 0.30 grados de
melanosis. Todos los lotes de camarones tratados con MBS en este estudio sobrepasaron
el nivel de melanosis permisible para exportar al mercado francs (Cuadro 1). En general
hubo mucha variacin en la concentracin de SO
2
-

detectado en los camarones. Los
camarones tratados con MBS fueron almacenados por diferentes perodos de tiempos
antes de ser evaluados por la presencia de SO
2
-

Estos periodos varan de 8 a 20 das.

La concentracin de SO
2
-
en los tejidos de los camarones disminuye progresivamente
durante el tiempo de su almacenamiento en congelamiento (Lpez, 1990). En este estudio
no se detect una relacin entre el tiempo de almacenamiento y la concentracin de SO
2
-

en los camarones tratados (Cuadro 1).

No se observ una relacin entre la concentracin de SO
2
-
en las muestras y melanosis en
los camarones tratados con MBS en este estudio. Segn Fennema (1996), el MBS es un
producto efectivo en controlar melanosis en crustceos. La metodologa probada en este
estudio no result en un control adecuado de melanosis.

Los factores ms importantes que incrementan la tasa de formacin de melanosis son:
incrementos en el pH del tejido del camarn, la presencia de oxgeno y cobre en la
solucin de MBS, la exposicin de los camarones a luz, y altas temperaturas (Slattery et
al., 1992). Posiblemente hubo un incremento en la temperatura de la solucin de MBS, el
cual aument la tasa metablica de los camarones y favoreci el desarrollo de melanosis
en algunos lotes tratados con MBS. A medida que se realizan las inmersiones de los
camarones en una cosecha comercial (> 6,000 kg de peso vivo) que puede durar ms de
seis horas, la solucin de MBS puede variar de temperatura.

Los camarones tratados en este estudio fueron cosechados durante la noche. No se realiz
ningn monitoreo de temperatura, pH y oxgeno en la solucin de MBS en la cual fueron
tratados los camarones.
25
Cuadro 1. Concentracin de residuos de SO
2
-
con el mtodo de Monier Williams y el
grado de melanosis en cinco lotes de camarn entero tratados durante su cosecha con el
mtodo tradicional con MBS.
Lote No
Das de almacenamiento
previo anlisis
Sulfitos
(ppm)
Evaluacin de
melanosis
Grado promedio

2 19 150.8
a
1.05
b

4 13 29.8
b
1.55
ab
1 20 27.0
b
2.50
a
3 14 25.6
b
1.90
ab
5 8 3.6
b
0.80
b
Promedio c.v. 14.8 4.9 50.2 74.0 1.56 0.68

Escala de melanosis 0 = ausencia completa de melanosis y 10 =
melanosis en todos los segmentos de los camarones.


3.2 METODOLOGIA DE INMERSION CONTROLADA


3.2.1 Ensayos en el laboratorio

A los seis y diez min de inmersin, la mezcla 4:1 result en la absorcin de mayor
residuos de SO
2
-
en los tejidos de los camarones que la mezcla de 1:1 solucin:hielo
(P<0.001) (Figura 1). Con un mayor volumen de lquido, los camarones estn ms en
contacto con la solucin de MBS y consecuentemente se encuentra una mayor
concentracin de SO
2
-
en sus tejidos.

Hubo un incremento de 83.5% en los niveles de absorcin de SO
2
-
en los camarones
tratados en la mezcla 4:1 solucin:hielo comparada a la mezcla 1:1 solucin:hielo. Esta
diferencia probablemente se debi a incementos en las temperaturas de las soluciones en
el momento que el camarn entra en contacto con ellas. La mezcla 4:1 solucin:hielo se
mantuvo entre 5 a 7C, mientras que la mezcla 1:1 solucin:hielo se mantuvo entre 0 a
2C. A temperaturas entre 0 a 2C los camarones mueren rpidamente. Un camarn
muerto absorbe ms lentamente la solucin preparada con MBS. En cambio un camarn
mantenido entre 5 a 7C posiblemente absorbe una mayor cantidad de MBS. Regulando
el tiempo de inmersin en la solucin con MBS de los camarones cosechados se puede
cumplir con las exigencias del mercado francs para residuos de SO
2
-
.






26
















Figura 1. Concentracin de SO
2
-

(ppm) en camarones enteros, tratados en el laboratorio
con MBS al 10% en dos mezclas de solucin:hielo y con cuatro tiempos de inmersin.







0
50
100
150
200
250
300
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Tiempo de inmersin (minutos)

S
u
l
f
i
t
o
s

(
p
p
m
)
Mezcla 1:1 solucin:hielo
Mezcla 4:1 solucin:hielo
27





3.2.2 Absorcin de MBS, reduccin de SO
2
-
a travs del tiempo y evaluacin de
melanosis en cuatro pesos promedios de camarn entero.

Hubo un descenso general en los niveles de SO
2
-

desde la semana uno hasta la semana
seis pos-tratamiento en los camarones congelados a 18C (Figura 2). Los camarones
ms pequeos tuvieron mayor (P<0.001) concentracin de SO
2
-
en sus tejidos en
comparacin con los grandes, a lo largo de seis semanas de almacenamiento a 18C. No
hubo diferencia en la concentracin de SO
2
-
en los camarones de pesos promedios de 12,
14 y 17 g a lo largo de seis semanas de almacenamiento.

La proporcin entre rea superficial y volumen es mayor en camarones pequeos que en
camarones grandes. El MBS es absorbido por la superficie del exoesqueleto de los
camarones, por tanto es lgico pensar que los camarones ms pequeos absorbieron ms
solucin con MBS y con ello mayor cantidad de SO
2
-
.

A las seis semanas de almacenamiento, solamente los camarones de 14 y 17 g cumplan
con las exigencias del mercado francs en cuanto a residuos de SO
2
-

(Figura 2). Los
camarones de los otros pesos tenan concentraciones de SO
2
-
superiores a los permisibles
por el mercado francs.

Hubo un incremento general en el desarrollo de melanosis desde la semana uno hasta la
semana seis pos-tratamiento con los camarones congelados a 18C (Figura 3). A menor
concentracin de residuos de SO
2
-

hubo una mayor cantidad de melanosis en los
camarones (P<0.001).

En general la concentracin de SO
2
-
disminuyeron con el tiempo de almacenamiento
(Figura 2). Por consiguiente, la presencia de melanosis increment con el tiempo en
congelamiento.












28




















Figura 2. Concentracin de residuos de SO
2
-

(determinado por el mtodo de M-W) en
camarones enteros, tratados con MBS al 10% en una mezcla 4:1 (solucin:hielo) durante
diez minutos.




29
















Peso promedio de los camarones (gramos)
0
50
100
150
200
250
300
0 3 6
Tiempo pos-tratamiento (semanas)
S
u
l
f
i
t
o
s

(
p
p
m
)
8 g 12 g 14 g 17 g Promedio Linear (Promedio)
30




Figura 3. Evaluacin de melanosis en tres tiempos pos-tratamiento de camarones
enteros, tratados con 10% de MBS en una mezcla 4:1 (solucin: hielo) durante 10 min de
inmersin bajo condiciones de laboratorio.










Los camarones de 8, 12, 14 y 17 g experimentaron reducciones promedios en los niveles
de SO
2
-

de 70.47, 62.46, 33.32 y 20.82 ppm de SO
2
,
-
respectivamente. Sin embargo, los
camarones de 12 g presentaron niveles mayores de reduccin porcentual de SO
2
-

(Figura
Peso promedio de los camarones
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
2 4 6
Tiempo pos-tratamiento (semanas)
M
e
l
a
n
o
s
i
s

(
G
r
a
d
o
s
)
8 gramos 12 gramos 14 gramos
17 gramos Promedio Linear (Promedio)
31
4) debido a la menor absorcin de SO
2
-
comparados a los camarones de 8 g. Durante seis
semanas de congelamiento en 18C hubo una reduccin de SO
2
-

en los tejidos de los
camarones de 20.5%, muy similar a las reducciones de SO
2
-
por congelacin y
almacenamiento de 20% que reporta Lpez (1990).










Figura 4. Reduccin de la concentracin de SO
2
-
en tejido de camarones enteros con
cuatro pesos promedios durante seis semanas de almacenamiento a 18C tratados con
10% MBS en una mezcla solucin:hielo 4:1 durante 10 minutos.








y = -0.3377x
2
+ 7.072x - 11.167
R
2
= 0.8379
0
10
20
30
4 8 12 16 20
Peso promedio de camarn entero (g)
R
e
d
u
c
c
i

n

d
e

s
u
l
f
i
t
o
s

(
%
)
32
3.2.3 Prueba de campo de la metodologa de inmersin controlada

Se observ una reduccin de 26% en los niveles de residuos de SO
2
-
en camarones
enteros tratados con MBS y luego almacenados durante seis semanas (Cuadro 2). Esta
reduccin es similar a lo observado en camarones con peso promedio de 12 g en
condiciones de laboratorio (Figura 4). Despus de seis semanas de almacenamiento, estos
camarones presentaron concentraciones de SO
2
-
mayores de 150 ppm y grados promedio
de melanosis mayor de 0.3. Estos niveles superan las normas francesa en cuanto a
residuos de SO
2
-
y melanosis. Estos camarones fueron cosechados con atarrayas y
estaban contaminados con lodo del estanque. Esto puede ayudar a explicar el alto grado
de melanosis observado en ellos a las seis semanas de almacenamiento.

Los camarones de 12 g tratados en una solucin con 10% de MBS en una mezcla de 4:1
solucin:hielo durante 10 min de inmersin en condiciones de laboratorio tuvieron 0.32
grados de melanosis (Figura 3). Estos mismos camarones no cumplen con las normas de
los franceses sobre presencia de SO
2
-
. Similares tratamientos en condiciones de campo
resultaron en evaluaciones de melanosis ms elevadas y concentraciones de SO
2
-

mayores
de 150 ppm (Cuadro 2).

Esta disminucin en el control de melanosis en la prueba de campo, probablemente se
debi al exceso de materia orgnica presente en la muestra. La materia orgnica pudo
haber incrementado la temperatura de la solucin y acelerado el desarrollo de la
melanosis. El lodo posiblemente redujo el efecto del MBS en controlar melanosis en los
camarones.


Cuadro 2. Concentracin de residuos de SO
2
-

y evaluacin de melanosis en cuatro
tiempos pos-tratamiento en camarones enteros (promedio de 12 g) tratados con 10%
MBS en una mezcla de 4:1 (solucin:hielo) durante 11 minutos.
Tiempo de muestreo Sulfitos (ppm)
Escala (1 a 10 grados)
Grados promedio de melanosis
0 semana pos-tratamiento 287.6 --

2 semanas pos-tratamiento 243.4 0.45

4 semanas pos-tratamiento 223.6 0.625

6 semanas pos-tratamiento 213.0 0.525








33


3.2.4 Comparacin de dos mtodos de deteccin de residuos de sulfitos (SO
2
),
Monier Williams (M-W) vs Iodometra (IM)


3.2.4.1 Comparacin general. Se hizo una comparacin de los mtodos M-W y IM para
determinar la concentracin de SO
2
-
en muestras de tejidos animales (Cuadro 3). Ambos
mtodos son aceptados oficialmente por la Food and Drug Administration (FDA) de
los USA. El procedimiento de M-W requiere ms tiempo para analizar una muestra y
requiere el uso de equipo ms sofisticado y reactivos ms costosos que el mtodo de IM.
Adems requiere una persona capacitada en tcnicas de laboratorio y un mayor nivel de
sofisticacin en cuanto a infraestructura y equipo. El procedimiento de IM consiste en un
proceso de titulacin de la muestra macerada.

En 35 anlisis comparativos, en promedio el mtodo M-W detect 91.4 ppm de SO
2
-
ms
(P<0.001) que el mtodo IM (Figura 5). En general, el mtodo IM dio una concentracin
de SO
2
-
inferior a la obtenida con el mtodo M-W. En promedio, la determinacin de la
concentracin de SO
2
-

del mtodo IM representa el 58% del valor obtenido con el mtodo
de M-W. Los resultados de ambos mtodos coinciden ms con concentraciones de SO
2
-
<
100 ppm en las muestras (Figura 6).


Cuadro 3. Comparacin general de costos por muestra analizada de dos metodologas de
determinacin de SO
2
-
en tejidos de camarones
Descripcin Monier Williams Iodometra

Costo de reactivos (Lps) 52.00 6.95

Depreciacin de equipo e instrumentos (Lps) 31.25 0.69

Costo de mano de obra (Lps) 125.00 16.50

Procedimiento bsico de anlisis Destilacin Titulacin

Equipo especial Destilador Ninguno

Mano de obra calificada (hs) 2.50 --

Tiempo para realizar un anlisis (hs) 2.50 0.33

Nivel de precisin +++ +




34











Figura 5. Comparacin de dos mtodos (M-W y IM) para la deteccin de SO
2
-
en tejido
de camarn. Se incluye el porcentaje de SO
2
detectado por IM en comparacin con la
concentracin determinada por el mtodo M-W y su promedio.





0
100
200
300
400
500
600
700
800
13579
1
1
1
3
1
5
1
7
1
9
2
1
2
3
2
5
2
7
2
9
3
1
3
3
Muestra.
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i

n

d
e
t
e
c
t
a
d
a

d
e

s
u
l
f
i
t
o
s

(
p
p
m
)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
D
e
t
e
c
c
i

n

I
M

/

M
-
W

(
%
)
Monier Williams (M-W) Iodometra (IM)
Porcentaje de deteccin
35




3.2.4.2 Comparacin de concentraciones detectadas con M-W inferiores a 100 ppm
de SO
2
-

comparadas a las concentraciones detectadas con el mtodo IM.

La Figura 6
muestra que con concentraciones detectadas con M-W inferiores a 100 ppm de SO
2
-
la
proporcin de concentraciones detectadas como IM / M-W result ser 50% ms de la
concentracin detectada por el mtodo M-W. El mtodo IM es poco sensible y ningn
resultado de este mtodo super 108 ppm de SO
2
-
en las muestras analizadas.

En general, an tomando solo las concentraciones detectadas con el mtodo de M-W
menores a 100 ppm de SO
2
-

y comparndolas a IM, el mtodo M-W detecta 9.73 ppm de
SO
2
-

ms que IM
.
El resultado del mtodo de M-W es diferente (P<0.0043) del de IM.




Figura 6. Comparacin de dos mtodos (M-W y IM) de deteccin de SO
2
-
en tejido de
camarn. Se incluye el porcentaje de deteccin de SO
2
detectado por IM en comparacin
con la concentracin determinada por el mtodo M-W entre el rango de 35 a 95 ppm de
SO
2
y su promedio.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Muestra
S
u
l
f
i
t
o
s

(
p
p
m
)
0
15
30
45
60
75
90
105
120
135
150
D
e
t
e
c
c
i

n

d
e

I
M
/

M
W

(
%
)
Monier williams (M-W) Iodometra (IM)
Porcentaje de deteccin
36















Figura 7. Concentraciones de SO
2
-
detectadas (mtodo de M-W)
en camarones enteros tratados con cinco concentraciones de
MBS y cuatro tiempos de contacto por la metodologa de
dinmica del bin.




0
100
200
300
400
500
600
700
800
900
6 12 24 36
Tiempo de contacto de los camarones en la solucin (horas)
S
u
l
f
i
t
o
s

(
p
p
m
)

Solucin MBS a 1.5% Solucin MBS a 1.0% Solucin MBS a 0.8%
Solucin MBS a 0.5% Solucin MBS a 0.1%
37








3.3 METODOLOGIA DE DINAMICA DEL BIN

Con un mayor tiempo de contacto de los camarones con las soluciones hubo un
incremento en la concentracin de SO
2
-
(P<0.05). A medida que se aument la
concentracin de las soluciones, increment la concentracin de SO
2
-

detectada en el
tejido de los camarones (Figura 7 y Cuadro 4).

El MBS es un producto til en controlar melanosis en camarones. La presencia de
residuos de MBS (sulfito) en los camarones tratados se limita a 150 ppm en el mercado
francs. Segn los resultados de esta prueba, los camarones deben ser tratados en el bin
con una concentracin de 0.5% MBS y durante 24 hs de inmersin. Luego de un periodo
de almacenamiento de aproximadamente seis semanas, estos camarones cumplieron con
las exigencias del mercado francs de residuos de SO
2
-
(Lpez, 1990).


Cuadro 4. Comparacin de medias ajustadas de 16 tratamientos, utilizando cinco
concentraciones de MBS con cuatro tiempos de contacto de los camarones con las
soluciones
No Tratamiento Concentracin detectada con M-W
Horas / %MBS SO
2
(ppm)(
1
)

16 36 / 1.5 767.15
a

4 36 / 1.0 709.85
ab

15 24 /1.5 658.25
bc

3 24 / 1.0 619.75
cd

12 24 / 0.8 532.85
de

14 12 / 1.5 523.69
e

2 12 / 1.0 472.49
e

11 12 / 0.8 346.50
f

13 6 / 1.5 331.48
f

1 6 / 1.0 308.05
f

10 6 / 0.8 301.00
f

9 24 / 0.5 177.75
g

8 12 / 0.5 153.65
gh

7 6 / 0.5 107.85
hi

6 12 / 0.1 50.85
ij

5 6 / 0.1 18.60
j


38
(
1
) Promedios con letras diferentes difieren estadsticamente (P<0.05)








4. CONCLUSIONES


1. La metodologa tradicional evaluada en este estudio no result en un control efectivo
de melanosis en los camarones tratados con MBS.

2. El tratamiento en campo de inmersin controlada en MBS evaluado en este estudio
no cumpli con las exigencias del mercado francs para residuos de SO
2
-

y melanosis.

3. Los camarones de 14 y 17 g tratados en 10% de MBS en mezcla 4:1 solucin:hielo,
durante 10 min cumplieron con las exigencias del mercado francs en cuanto a
residuos de SO
2
-
, pero sobrepasaron ligeramente los niveles permisibles de melanosis.
Los camarones de 8 y 12 g sobrepasaron los niveles de residuos de SO
2
, pero
cumplieron con las exigencias de melanosis.

4. Los camarones de 8 g absorbieron 74% ms SO
2
-
que los camarones de 17 g con
similar exposicin a la solucin de MBS.

5. La concentracin de SO
2
-
en los tejidos de los camarones disminuy con el tiempo de
almacenamiento en un 20.5% a lo largo de seis semanas en congelamiento a 18C.

6. La presencia de melanosis increment con el tiempo en congelamiento de los
camarones tratados con MBS.

7. Con una mayor cantidad de SO
2
-
en los tejidos de los camarones en congelamiento
hubo una menor cantidad de melanosis. A medida que se redujo el nivel de SO
2

increment la cantidad de melanosis en los camarones evaluados.

8. El mtodo de deteccin de residuos de Monier Williams es ms eficiente en detectar
concentraciones de SO
2
-

y result estadsticamente diferente al mtodo de deteccin
de residuos de Iodometra.










5. RECOMENDACIONES


1. Investigar el pH en los tejidos de los camarones, presencia oxgeno y cobre en la
solucin de MBS, y exposicin de los camarones a altas temperaturas y la luz solar,
factores que podran estar relacionados con favorecer el desarrollo de la melanosis en
el camarn entero.

2. Determinar las condiciones ptimas de preparacin de las lagunas de produccin para
la cosecha de camarones enteros.

3. Durante la cosecha se debe realizar muestreos en intervalos de 30 minutos, evaluando
la textura del exoesqueleto y presencia de arena en las branquias de los camarones
enteros.

4. Se debe establecer una fluida comunicacin con los compradores en Francia para
entender mejor las exigencias y preferencias de su mercado.

5. Diversificar y agregar valor al camarn entero, como por ejemplo producir el
camarn entero cocinado.

6. Investigar sobre mtodos de deteccin de residuos de sulfito rpidos y precisos en
sustitucin al mtodo IM.

















6. BIBLIOGRAFIA

ANDAH. 1994. Boletn informativo. No 5. Tegucigalpa, Honduras. 6 p.

CEE. 2000. Legislacin sobre la utilizacin de sulfitos, nitritos y nitratos en los
productos alimenticios http://www.cde.ua.es/dsi/doc.htm?DOL:I_32919991222
es00010014.pdf (30 de 0ctubre).
FENNEMA, O.R. 1996. Food Chemistry. 3 ed. New York, Marcel Dekker. 1067 p.
FOOD AND DRUG ADMINISTRATION. 1987. Mtodo Monier Williams. In
Pesticide Analytical Manual. USA. 4 p.
GGM. 1999. Empacadora San Lorenzo, Manual de Procedimientos. Narracin del
proceso de camarn con sulfito. San Lorenzo, Valle. s.n. s.p. 150 p.
HISPANO QUIMICA S.A. 1987. Manual informativo de BACTEROL F.
Barcelona, Espaa. 11 p.
LOPEZ, F. 1990. LA MELANOSIS DEL CAMARON: Tendremos que olvidar el
bisulfito?. ALIMENTARIA (Espaa) 90(47):47 52.
McEVELY, A. J.; IVENGAR, R.; OTWELL, S. 1991. Sulfite alternative Prevents
Shrimp Melanosis. FOOD TECHNOLOGY (USA):80 86.
SAMPSOM, M. 1997. Comparacin fsico-qumica del agua de dos esteros del sur
de Honduras en poca seca. Tesis Ing. Agr. El Zamorano, Honduras, Escuela
Agrcola Panamericana. 20 p.
SAS Institute. 1991. SAS user guide: Statics. Version 6.04. Edition. SAS Institute
Inc., Cary, N.Y.
SLATTERY, L.; WILLIAMS, D.J.; DEETH, H.C. 1992. How to Use Sodium
Metabisulphite to Prevent Black Spot on Prawns. Fishing Industry. Queensland,
Australia. 3 p.
VILLALON, R. 1994. Manual prctico para la produccin comercial semi-intensiva
de camarn marino. Texas A&M University. Bryan Texas, U.S.A. 122 p.

WIGGLESWORTH, J. 1995. Analysis of the mechanism of blackspot formation during
the moult cycle of Litopenaeus vannamei. The Queens University Belfast (Northem
Ireland). 9 p.


42
ANEXO 1. Procedimiento del mtodo de deteccin de residuos de sulfitos
denominado Monier Williams (M-W).
El mtodo estndar de laboratorio para la deteccin de residuos de sulfitos M-W es
basado en un proceso de destilacin. El mtodo M-W mide los residuos sulfitos en
solucin o en el tejido de un animal. El mtodo M-W es preciso pero tiene el
inconveniente que necesita varias horas para desarrollarse (Slaterry et al., 1992 ). El
mtodo M-W es aceptado por la Food and Drug Administration FDA de USA.
PREPARACION DE REACTIVO:
Acido clorhdrico (4N): Para cada anlisis preparar 90 ml de cido clorhdrico
agregando 30 ml de cido concentrado (12N) en 60 ml de agua destilada.
Indicador rojo de metilo: Disolver 250 mg de rojo de metilo en 10 ml de etanol si el
rojo de metilo es en polvo (si es lquido no disolver), mantenga fuera de la luz.
Perxido de hidrgeno 3%: Diluir reactivo ACS 30% de perxido de hidrogeno al 3%
con agua destilada.(100 ml de perxido de hidrgeno en 900 ml de agua destilada,
considerando que solo se utilizan 30 ml por anlisis queda preparada la solucin para
varias pruebas)
Titulante estandarizado NaOH 0.01N: El titulante se obtiene de la mezcla de 0.4 g de
NaOH con un litro de agua destilada, sellar bien el recipiente de NaOH por ser
altamente higroscpico.
Gas nitrgeno: Una fuente de alta pureza (99.9%) es requerida y esta debe ser aplicada
utilizando un regulador de flujo que lo mantendr en 200 cc/min (90 burbujas/minuto)
NOTA: Una vez preparados todos los reactivos y la trampa de pyrogallol
comience con el paso 1 del protocolo M-W.
Preparacin de la trampa de pyrogallol
- Agregar 4.5 g de pyrogallol en un erlenmeyer de 1000 ml y purgar durante 3 minutos
con gas nitrgeno para evacuar el oxgeno y crear una atmsfera de nitrgeno en el
erlen meyer.
- Preparar una solucin con 85 ml de agua destilada y 65 g de KOH, agregar al
erlenmeyer despus de haber sido purgado con gas nitrgeno.




El mtodo M-W involucra 16 pasos para la determinacin de la presencia de sulfitos
en una muestra:
1. Revisar y ensamblar el aparto como se muestra en la figura 1., agregar una pelcula
de vaselina a cada una de las uniones.
2. El baln separador (A) debe estar posesionado sobre la manta de calor, el flujo de
enfriamiento del condensador debe de iniciar.


43
3. Agregar 400 ml de agua destilada en el baln y cierre la llave de paso del embudo.
Agregue 90 ml de cido clorhdrico (4N) al embudo. Comience el flujo de gas
nitrgeno a una tasa de 200 cc/min (90 burbujas en la probeta o trampa G).
4. Agregue 30 ml de perxido de hidrgeno al 3% a la trampa (G), el cual ha sido
titulado con 3 gotas de NaOH al 0.01 N hasta llegar a un punto amarillo claro.
5. Despus de 15 minutos de estar funcionando el aparato, el agua destilada estar
libre de oxgeno, el aparato est listo para introducir la muestra.
6. Preparar una muestra de 50 g de cola de camarn con exoesqueleto, partido en tres
pedazos cada camarn.
7. Preparar una solucin de 100 ml de etanol al 5% en un beaker de 250 ml
8. Remover el embudo (B) y transferir la muestra al baln (C).
9. Limpiar el orificio de entrada de la muestra, el flujo de nitrgeno a travs de la
solucin de perxido de hidrgeno debe ser reiniciado tan pronto como el embudo
sea reinsertado.
10. Examinar cada unin para asegurarse que este bien sellado el equipo.
11. Aplique presin con ayuda de un bulbo equipado con vlvula, a la solucin de
cido clorhdrico que se encuentra en el embudo (B).
12. Abrir la vlvula del embudo y permita que el cido fluya dentro del baln
aplicando presin para facilitar el procedimiento. Antes de que se evacue todo el
cido del embudo hacia el baln cierre la llave de paso para evitar la salida del
dixido de azufre hacia el embudo.
13. Aplicar calor sobre la manta (en el nivel 5.3/10) usando un poder regulador que
cause 80 a 90 gotas por minuto de condensado al retorno del frasco condensador
(E).
14. Despus de 105 minutos de hervor del contenido del baln, retire la trampa (G).
15. Titule el contenido con NaOH a 0.01 N hasta alcanzar un color amarillo que
persista por mas de 20 segundos.
16. Determine la cantidad de sulfitos en la muestra mediante la siguiente formula:
ppm de SO
2
-
= 32.03 x V1 x N x 1000 / Wt
Donde:
32.03 = miliequivalentes del peso del dioxido de azufre
V1 = volumen de hidrxido de sodio titulante de 0.01 N
N = 0.01, que es la normalidad del NaOH
1000 = factor de conversin de miliequivalentes a microequivalentes
Wt = peso en gramos de la muestra de camarn que fue introducido dentro del baln.

PUNTOS CRITICOS EN EL DESARROLLO DE LA PRUEBA


44
1 Trampa de pyrogallol
La fuente de gas nitrgeno debe ser de 99.9% de pureza, debido a que si hay
contaminacin de oxigeno no se capturan los sulfitos reales.
Al agregar la solucin de KOH a los 4.5 gramos que se estn purgando durante 3
minutos en el erlen meyer debe tornarse transparente y no negro o verde. Cada trampa
de pyrogallol puede desarrollar hasta un mximo de ocho pruebas y luego volverse a
preparar. A medida se realicen las pruebas la trampa tomara un color oscuro.
2 Condensado
A los 30 minutos de desarrollo de la prueba, con el condensado deben alcanzarse 90
gotas del condensador que caen al interior del baln separador. Estas 90 gotas son
reguladas mediante la temperatura de la manta de calor, el flujo de gas nitrgeno y
agua a temperatura de 0 a 5 C.
3 Reactivo certificado grado ACS. Use una pipeta para cada reactivo y no los
reutilize.
EQUIPO:

! Manta de calor
! Baln separador
! Embudo
! Vlvula de entrada
! Conectores
! Condensador
! Mangueras
! Trampa de Pyrogallol
! Fuente de enfriamiento
! Fuente de enfriamiento
! Bureta
! Cilindro de gas nitrgeno
! Probeta o trampa de sulfitos
ANEXO 2. Grados de afeccin de melanosis en una escala de 0 a 10 grados.


Grado Descripcin
0 Ausencia de melanosis
1 Manchas negras moderadas en el rosrtum del camarn
2 Manchas negras moderadas en el rostrum del camarn
acompaadas con manchas fuertes en el primer par de
peripodos y manchas leves en los urpodos
3 Manchas negras fuertes en el rostrum, primer par de
peripodos y manchas negras fuertes en los urpodos
4 Grado 3 ms manchas negras fuertes en el segundo par
de peripodos y maxilas
6 Todo el cefalotrax est oscuro e inician
oscurecimiento en el primer par de plepodos y


45
urpodos completamente oscuros
8 Grado 6 ms oscurecimiento del segundo, tercer par de
plepodos y algunas manchas en los segmentos de la
cola

10

Todos los segmentos del camarn presentan fuertes
manchas oscuras





































46
















































47





.








48