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    Susana Cortés - Opciones en La Selección Espermática - II Simposio Reproducción Asistida Quirón

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    II Simposio Reproducción Asistida Quirón. Susana Cortés. Opciones en la selección espermática. + info: http://reproduccion-asistida.quiron.es/index.php/es/simposio-quiron-2014

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    Susana Cortés - Opciones en la selección espermática - II Simposio Reproducción Asistida Quirón

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    Opciones en la seleccin espermtica: PICSI, Sperm-Slow, MACS?

    S. Corts Gallego Clnica Tambre Madrid

    Seleccin Espermtica

    La seleccin espermtica ocurre en el tracto reproductor femenino, aunque puede simularse en el laboratorio.

    Seleccin espermtica y capacitacin in vitro

    Seleccin Espermtica: Movilidad

    Tcnicas sin centrifugacin Dextrano Tcnicas con centrifugacin Swim-up Gradientes de densidad

    Seleccin Espermtica: Movilidad

    Seleccin Espermtica: Movilidad

    El nivel basal de SDF despus del swim-up es significativamente menor comparado con el semen antes de la recuperacin.. (T Student. p<0,001).

    ESHRE 2009

    Seleccin Espermtica: Movilidad

    Ability of various sperm wash techniques to eliminate sperms with DNA damage

    Sperm processing by swim-up and density gradient is effective in elimination of sperm with DNA damage.
    Javaraman V et al. J Assist Reprod Genet. 2012 June;29(6):557-563.

    Seleccin Espermtica: Movilidad

    Seleccin Espermtica: Morfologa

    1000X M. Fijada M. teida

    400X Spz mviles

    IMSI: Intracytoplasmatic morphologically selected sperm injection

    Seleccin Espermtica: Morfologa


    Andrologia. 2013 Jun;45(3):163-70.

    Selection of normal spermatozoa with a vacuole-free head (x6300) improves selection of spermatozoa with intactDNA in patients with high sperm DNA fragmentation rates.
    Hammoud I, Boitrelle F, Ferfouri F, Vialard F, Bergere M, Wainer B, Bailly M, Albert M, Selva J.

    IMSI: Aumento significativo del probabilidad de seleccin de spz sin dao en su ADN
    Andrologia. 2013 Nov;1(6):838-44.

    Specific sperm defects are differentially correlated with DNA fragmentation in both normozoospermic and teratozoospermic subjects.
    Mangiarini A, Paffoni A, Restelli L, Ferrari S, Guarneri C, Ragni G, Somigliana E.

    Mayor incidencia de ADN fragmentado en spz con cabeza vacuolada pequea Spz piriformes muestran una fragmentacin similar a los spz normales.

    Seleccin Espermtica: Morfologa


    Reprod Biomed Online 2011 Feb 15.

    Seleccin Espermtica: Morfologa

    Factores masculinos severos el IMSI aumenta la Tasa de implantacin (29,6% vs 15,2%, p=0,01)

    Seleccin Espermtica: Morfologa


    Fertil Steril. 2013 Apr;99(5):1290-3.

    1er ciclo: No diferencias IMSI vs ICSI Tasa de Embarazo (46% vs 46%) Recin Nacido (30% vs 23%) 2 ciclo tras ICSI: Diferencias IMSI vs ICSI Tasa de Embarazo (56% vs 38%) Recin Nacido (28% vs 18%)

    Seleccin Espermtica: Carga elctrica

    Epididimo: Carga negativa 1. Potencial Zeta (carga elctrica de la mb


    espermtica). Bajo coste, recuperacin de pocos espz, incremento de spz morfonormales, con ADN integro y condensado

    2. Electroforesis (mismo principio). Paso de los


    spz por una mb de 5m. Recuperacin spz mviles de buena morfologa y ADN.

    Seleccin Espermtica: Carga elctrica

    1. Incremento de ambas tcnicas del % de espz con morfologa normal, descenso de la fragmentacin del AND y deficiencia de protaminas. 2. MACS: mejores resultados en el porcentaje de espz con acrosoma normal y contenido en protaminas.

    Seleccin Espermtica: Carga elctrica

    1.ES resultados similares al Percoll en vitalidad 2.ES induce menor estres oxidativo.

    Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

    Receptores Moleculares: 1. Anexina V: Protena que se une a la PS (cara


    interna de la mb plasmtica de las clulas viables). Seal temprana de apoptosis: MACS (Magneticactivated cell sorting).

    2. Citometra de Flujo: Deteccin de apostosis


    mediante distintos tintes: FACS (fluorescenceactivated cell sorting)

    3. Acido Hialurnico : Receptores presentes en la


    mb espermtica para el HA: PICSI, Sperm-Slow.

    Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares


    Columnas de anexina

    Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

    - Aumento de la tasa de embarazo de las MACS vs GD/SP - No diferencias en la tasa de Implantacin y aborto

    Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

    Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

    Seleccin Espermtica: Citometra de flujo

    Utilizacin de YO-PRO como marcador de la viabilidad espermtica (permeabilidad de membrana como marcador apoptotico) Descenso de porcentaje de espz apoptoticos FACS vs SP

    Seleccin Espermtica: Citometra de flujo

    Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

    PICSI

    Sperm-slow

    Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

    No se observan diferencias entres PICSI vs Sperm-Slow en tasa de fecundacin, embriones de buena calidad, embarazo implantacin

    Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

    Fragmentacin del ADN

    Normalidad del ncleo espermtico

    Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

    Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

    Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

    Reduccin: >90% de fragmentacin ADN

    >88% de aneuploidias

    Alpha, 2012

    Evaluation of sperm selection procedure based on hyaluronic acid binding ability on the IVF success of donated oocytes following ICSI.
    Corts S, Ortega L., Gago M., Mooz C, Guijarro A, Caballero P, Nez R.

    No se observan diferencias significativas en la tasa de fecundacin, divisin, calidad embrionaria ni tasa de embarazo (HA efecto positivo sobre la TE).

    CON QU..

    TECNOLOGAS DE SELECCIN ESPERMTICA

    IMSI (intracytoplasmic morphologically selected sperm injection).


    Ventajas Inconvenientes Seleccin de espermatozoides No hay clara asociacin con aumento de morfolgicamente normales la tasa de gestacin Demasiado tiempo para la bsqueda espermtica que puede ser lesivo para los espermatozoides en PVP y/o para los ovocitos. Muy caro Falta de subjetividad en la seleccin Necesita personal especializado

    Columnas de Anexina V

    Ventajas

    Inconvenientes

    Seleccin de muestras de semen Prdida del nmero de espermatozoides con alto IF por sucesivos lavados: no se puede utilizar en muestras con OATz severa

    Fcil manejo

    Posibilidad de presencia de microbeads en la muestra No est confirmada la accin del campo magntico en los espermatozoides

    +/- Barato

    Seleccin mediante HA: seleccin de espermatozoides maduros (PICSI y Sperm-slow)

    Ventajas Seleccin de espermatozoides maduros

    Inconvenientes No hay suficientes evidencias cientficas que apoyen la mejora de resultados Se necesita personal especializado

    Mtodo fcil y barato

    Qu tcnica es ms apropiada?

    Tcnica
    MACS

    Indicacin
    Alto ndice de fragmentacin en muestras normozoosprmicas u OAT leves 100% morfoanomalas espermticas Seleccin de espermatozoides para ICSI en casos de pacientes con alto IF y OATz

    IMSI HA

    Como disminuir el ndice de fragmentacin el da del ICSI?


    En varones normozooprmicos que van a realizar ICSI, se les puede indicar que no tengan abstinencia sexual previa. Procesar las muestras de semen del modo habitual (swim-up, gradientes), minimizando el tiempo de incubacin. Si la muestra de semen tiene un alto ndice de fragmentacin y es normozoosprmica u OAT moderada, utilizar MACS. Posteriormente, se puede combinar con el uso de Sperm-slow para seleccionar los espermatozoides a microinyectar.

    CONCLUSIONES
    No existe actualmente una nica tcnica que seleccione el mejor espermatozoide para ICSI

    Individualizar los pacientes y sus eyaculados en funcin de su patologa y la indicacin de TRA, combinando varias tcnicas.

    Lo difcil ya esta hecho, lo imposible ya se har

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