Manual de procedimientos de laboratorio Clnico, rea Bacteriologa

Director Tcnico Moiss Parra

2014, Chilln

ndice de Manual de procedimientos de laboratorio Clnico en rea Bacteriologa

1. Introduccin 2. Objetivos 3. Definiciones 4. Mtodos de Siembra 5. Antibiograma 6. Tinciones 7. Toma de Muestra y Procesamiento

Coprocultivo Expectoracin Cultivo nasal Cultivo farngeo Hemocultivo Liquido asctico Liquido articular o sinovial Cultivo de liquido cefalorraqudeo (LCR) Liquido peritoneal Liquido pleural Cultivo ocular Cultivo otico Rotavirus y adenovirus (Por Enzimoinmunoensayo) en deposiciones.

Urocultivo Cultivo de herida Flujo vaginal Secrecin uretral Leucocitos fecales Muestras Micologicas

8. Identificacin de Bacterias Coprocultivo Staphylococcus Streptococcus Enterobacterias Bacilos no fermentadores

9. Bibliografa

1. Introduccin Los estudios microbiolgicos hoy en da se realizan con finalidad de conocer el agente causal de una infeccin y para determinar la susceptibilidad antimicrobiana a la cual est sujeto el organismo, con el propsito de entregar al clnico las herramientas necesarias para que otorgue la terapia antimicrobiana ms efectiva y adecuada al paciente. En el siguiente manual se pondr real nfasis en la toma de muestra y en los procedimientos a seguir para poder determinar el patgeno que est involucrado en la molestia del paciente, con la finalidad de evitar errores en la manipulacin de las muestras las cuales puedan influir en el resultado del examen . Las interferencias ms importantes y relevantes que se pueden cometer son: la contaminacin de las muestras al momento de su obtencin, tambin se vern muy afectadas si el transporte es inadecuado, lo cual podra provocar la muerte de los agentes infecciosos que se hayan rescatado de la muestra. Adems el uso indiscriminado de antibiticos, sobre todo aquellos sin indicacin mdica. Existen variadas tomas de muestras las cuales sern cultivadas en los medios ms adecuado, permitiendo as identificar el o los patgeno(s). Se entiende como medio de cultivo, a todo sustrato estril que contiene los medios nutricios necesarios para la multiplicacin bacteriana con caractersticas adecuadas para la sobrevivencia de la especie, contienen agar-agar como elemento solidificante, el cual es un polisacrido natural que forma geles transparentes , estables ,qumicamente inertes y que no modifica el pH .Adems se les pueden agregar colorantes como indicadores de actividad metablica o por su capacidad inhibitoria selectiva. Es por ello que es sumamente importante tener claro los medios de cultivo que se utilizaran y posteriormente las pruebas bioqumicas que terminaran de identificar el agente infeccioso. 2. Objetivos Entregar las bases tericas y prcticas fundamentales para llevar a cabo un correcto trabajo en el rea de bacteriologa. Otorgar las instrucciones necesarias para manejar, comprender y realizar todos los procedimientos de un laboratorio de microbiologa. Preservar la integridad de cada muestra a travs de su trasporte correspondiente con la finalidad de mantener la estabilidad de las propiedades biolgicas que la componen.

3. Definiciones Absceso: Acumulacin localizada de pus en un tejido u rgano. Aerbico: Un organismo que requiere oxgeno o aire atmosfrico para su crecimiento y reproduccin. Agar sangre: medio de cultivo enriquecido y no selectivo que permite el crecimiento de la mayora de las bacterias habituales y levaduras. Agar Chocolate: medio de cultivo enriquecido y no selectivo, contiene suplemento nutritivo que permite la recuperacin de microorganismos fastidiosos como Haemophilus spp. Agar Mac Conkey: Es un medio de cultivo selectivo y diferencial usado para el aislamiento y estudio de bacilos gram negativos. Agar TCBS: Medio selectivo para recuperar cepas de Vibrio spp a partir de muestras clnicas. Aislamiento primario: Desarrollo inicial de microorganismos a partir de una muestra clnica. Antimicrobiano: Agente biolgico o qumico que inhibe el crecimiento de microorganismos. Asas calibradas: Asas estriles usadas para la siembra de un inoculo conocido y estandarizado de la muestra de orina. Asepsia: Desinfeccin de un tejido vivo o piel. Atmosfera de anaerobiosis: Se logra introduciendo dentro de una jarra plstica, que contiene en su interior las placas sembradas con la muestra en estudio, un sobre con un sistema generador de gas y cerrando inmediatamente con tapa hermtica. Rpidamente se absorbe el O2 atmosfrico de la jarra con la generacin simultnea de CO2. Bacteria: Microorganismo unicelular microscpico perteneciente a los procariontes que se multiplica por fisin binaria y carece de clorofila. Se diferencian por la coloracin de Gram. Bacteria Gram negativa: Aquellas bacterias que no retienen el colorante primario (violeta de genciana o cristal violeta) en el mtodo de Gram son decoloradas por el alcohol y toman el color del colorante contraste (safranina o fucsina) dando un color rojizo.

Bacteria Gram positiva: Aquellas bacterias que retienen el colorante primario del mtodo de Gram, resisten la decoloracin por el alcohol y no son coloreadas por el colorante de contraste reteniendo el color azul prpura inicial. Cepa bacteriana: Cultivo puro de bacterias formada por los descendientes de un solo aislamiento. Colonia: Crecimiento visible de microorganismos, generalmente en medios slidos, originado por la multiplicacin de un solo organismo. Todos son la progenie de una nica bacteria preexistente. Coprocultivo: Es el cultivo de deposiciones en medios diferenciales y selectivos para la recuperacion de bacterias enteropatogenas , por ejemplo : Salmonella spp, Shigella spp, y Yersinia enterocoltica. Esterilizacin: Proceso validado que permite la eliminacin de toda forma de vida microbiana incluyendo endosporas bacterianas. Puede conseguirse por medio de mtodos qumicos, fsicos o gaseosos. Expectoracin: Obtencin de esputo por parte del paciente, para diagnostico en cuadros de neumonas adquiridas en la comunidad (NAC) o estudio de TBC. Fermentacin: Utilizacin de carbohidratos en forma anaerobia. Hemocultivo: Cultivo de muestra de sangre para el diagnostico de bacteriemias o fungemias, en medios de cultivo lquidos enriquecidos para la obtencin de microorganismos habituales y fastidiosos. Hemlisis: Presencia de restos de eritrocitos lisados alrededor de una colonia desarrollada en una placa de sangre de carnero. Incubacin: Mantenimiento de cultivos bacterianos en condiciones favorables para su desarrollo y multiplicacin. Infeccin: Invasin y multiplicacin de microorganismos en un husped, pudiendo progresar hacia una enfermedad. El trmino enfermedad infecciosa se aplica cuando aparecen signos y sntomas como resultado de la infeccin. Inmunofluorescencia: Es una tecnica que emplea anticuerpos conjugados o fluorocromos. Puede ser directa en un solo paso que detecta antgeno o indirecta en el que se detecta anticuerpo.

Inculo: Alcuota de una muestra que es transferida a un medio de cultivo. Medio de cultivo: Medio artificial de sustancias nutritivas necesarias para el crecimiento y multiplicacin de las bacterias in vitro, que puede encontrarse en estado slido, semislido o lquido. Medios bsicos: son la base para la preparacin de otros medios, contienen los nutrientes esenciales, se desarrollan bacterias poco exigentes, ej BHI. Medios mejorados o enriquecidos: son los medios basicos a los que se les ha agregado sustancias de alto valor nutritivo (por ejemplo sangre, vitamina) favoreciendo el desarrollo de bacterias ms exigentes. Medios selectivos: Medio al cual se le agrega un inhibidor que permite el desarrollo de solo ciertas bacterias, inhibiendo a otras ej: Thayer Martin. Medios diferenciales: medios de cultivo que permiten diferenciar microorganismos porque ponen en evidencia caractersticas metablicas. Ej: TSI,LIA. Sepsis: Patologa compleja de respuesta sistmica con compromiso multiorgnico, secundaria a la invasin del organismo por alguna bacteria u hongo. Siembra primaria: Inoculacin de una muestra a un medio de cultivo Simple, selectivo o de enriquecimiento. Tincin Gram: Mtodo de tincin basado en la propiedad de retener o no el colorante cristal violeta en la pared celular bacteriana debido a su composicin bioqumica despus de ser sometido a un tratamiento de decoloracin UFC: Unidad formadora de colonia

4. Mtodos de Siembra de muestras clnicas Procedimiento: 1. Prende el mechero, se coloca guantes de procedimiento y mascarilla. 2. Verifica el nombre del paciente con la orden de trabajo. Revisa las placas y los tubos de medios de cultivo que corresponde utilizar segn el tipo de muestra. 3. Rotular las placas, tubo con caldo y portaobjeto (en caso necesario). 4. El procesamiento de la muestra para su siembra depender del tipo de muestra y de cmo haya sido tomada. 5. El principio general es siempre sembrar primero el (los) medio(s) de cultivo solido, luego el medio de cultivo liquido y por ultimo realizar frotis para tincin. Para determinar la secuencia en que deben ser sembrados los medios de cultivo, siempre de debe empezar por el medio menos selectivo, para seguir con el medianamente selectivo y al final el ms selectivo. 6. A continuacin se describe la tcnica de siembra segn el tipo de medio de cultivo y de muestra.

Siembra en placa Se obtiene colonia aisladas por medio del arrastre y separacin. Con el asa ya esterilizada, se toma una gota de lquido o de una emulsin del producto patolgico y se deposita en un costado del agar de una placa Petri, se estra a partir de ese. En caso de muestras que se reciben en trulas, se realiza con esta la primera de las estras procediendo despus a diseminar con el asa o pipeta. Esterilizacin simple: Utilizada principalmente para la mayora de las muestras. Se inocula en el primer cuadrante. Se esteriliza el asa solo una vez y luego se disemina el 2o y 3er cuadrante. Si tiene varias placas, inocule primero en el primer cuadrante todas las placas y luego disemine. Esterilizacin doble: Utilizada principalmente para muestras con mucho inoculo bacteriano, como deposicin. La diferencia radica en agregar una segunda esterilizacion del asa entre el 2 y 3 cuadrante. Si tiene varias placas que sembrar, inocule primero en el primer cuadrante de cada una de las placas y luego disemine con asa.

Siembra en tubos de agar tendido El borde del tubo debe ser flameado antes y despus de ser sembrado. Con el asa previamente esterilizada a la llama, se toma una pequea cantidad de la muestra y se lleva al fondo del tubo, luego se estra suavemente la superficie del medio en forma ondulante. Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo, debe dejarse suelto el tapn de goma para evitar que los gases expulsen el tapn. Ejemplo Agar Sabouraud, Agar Citrato.

Siembra en superficie y picadura El inoculo es introducido con el asa recta o pipeta Pasteur hasta el fondo del medio con un solo movimiento y teniendo cuidado en hacer el mismo trayecto de entrada que de salida, se retira hacia la superficie inclinada del agar haciendo suavemente una estra ondulada. Debe flamearse el borde del tubo antes y despus de la siembra. Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapn de goma para evitar que los gases expulsen el tapn. Ejemplo Agar TSI, Agar LIA

Siembra en profundidad El inoculo se introduce como una picadura en el medio de cultivo cuidando que sea de manera recta y central hasta el Fondo del tubo. Se debe hacer el mismo trayecto de entrada y salida. Ejemplo agar MIO.

Siembra de inoculo longitudinalmente y diseminacin con estra nica} Recuento de colonias por siembra de un inoculo conocido a lo largo de la placa y diseminado posteriormente. Usado principalmente para orina y otras muestras respiratorias como Lavado broncoalveolar (LBA). Un inoculo determinado se siembra con una lnea que atraviesa longitudinalmente la placa (en el caso de orina. o 1/6 de la placa) y luego se disemina el inoculo primario con una estra nica.

Siembra en medio liquido Al inocular un medio liquido, el tubo se inclina y el material se extrae del asa por frotamiento contra la pared del tubo, cuando este se endereza el material se encuentra bajo la superficie del medio. Al inocular el medio liquido con torula o con inoculo liquido se deposita este en el fondo del tubo. Debe flamearse la boca del tubo antes y despus de efectuada la siembra. Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapn de goma para evitar que los gases expulsen el tapn. Ejemplos: tioglicolato, caldo soya.

5. Antibiograma El antibiograma es la prueba microbiolgica que se realiza para determinar la sensibilidad de una colonia bacteriana a un antibitico o grupo de antibiticos. Lectura: Sensible: Cuando un aislado bacteriano es inhibido in vitro por una concentracin de un antimicrobiano que se asocia a una alta probabilidad de xito teraputico. Intermedio: Cuando un aislado bacteriano es inhibido in vitro por una concentracin de un antimicrobiano que se asocia a un efecto teraputico incierto. Resistente: Cuando un aislado bacteriano es inhibido in vitro por una concentracin de un antimicrobiano que se asocia a una alta probabilidad con el fracaso teraputico. Medios utilizados: El medio Mueller-Hinton es el ms utilizado por la facilidad que presenta en el crecimiento de MO no fastidiosos. Es reproducible lote a lote para ensayos de susceptibilidad. Presenta en escasa cantidad inhibidores de sulfonamidas, tetraciclinas y timetropin. Abundante crecimiento para la mayora de los MO no fastidiosos.

Durante la preparacin del medio es necesario tener en cuenta diferentes factores que pueden influir en la prueba de susceptibilidad como el pH, humedad, efectos de timidina y timina, concentracin de metales divalentes, entre otros. pH: El pH debe oscilar entre 7,2 a 7,4 y debe ser medido cuando el medio es preparado. Si es muy bajo se corre el riesgo de que algunos antibiticos como las macrlidas, aminoglicsidos y quinolonas pierdan su potencia antimicrobiana, generando alguna falsa resistencia, del mismo modo antibiticos como la tetraciclina se podra ver potenciada por un pH ms cido de lo normal; por otro lado en un pH ms bsico de lo estandarizado los efectos anteriormente descritos se veran invertidos. El control se realiza con un electrodo sumergido en una cantidad de agar macerado.

Humedad: es necesario eliminar el exceso de humedad de la superficie del agar ya sea incubndolas a 35C o colocarlas en una cmara de flujo laminar entre 10 a 30 minutos entreabiertas. Lo correcto es que se presente una superficie hmeda pero libre de gotas en la tapa o en la superficie del medio como tal.

Efecto de Timidina y Timina: Un medio rico en Timidina o Timina lo ms probable es que invierta los efectos inhibitorios de sulfonamidas y trimetoprim, reflejado en resultados errneos como zonas poco ntidas, sin inhibicin o con halos ms pequeos, por lo tanto, mientras menos contenido de estos los resultados sern ms fiables.

Efectos de cationes divalentes: enfocado principalmente a Calcio y Magnesio, los que afectan pruebas con aminoglicosidos y tetraciclinas especficamente con cepas de Pseudomonas aeruginosa, en donde un bajo contenido de cationes presenta halos de inhibicin mayores, y viceversa en el caso de elevadas concentraciones de estos metales. Preparacin del estndar 0,5 McFarland Es necesaria la preparacin de un inculo para realizar la prueba de susceptibilidad, para lo cual se utiliza un estndar de turbidez de BaSO4, que ser equivalente a un estndar 0,5 McFarland. La forma correcta de realizarlo es la siguiente: 1. Se toma una alcuota de 0,5 ml 0,048 m/L de BaCl2, al cual se le agregan 99,5 ml de H2SO4 0,18 mol/L agitando constante. 2. La densidad se verifica por medio de la espectrofotometra determinando la absorbancia a una longitud de onda de 625 nm, la cual debe estar entre 0,08 a 0,1. 3. La solucin se transfiere a un tubo con tapa atornillada, bien sellados y almacenados en la obscuridad a T ambiente. 4. Al momento de usar debe ser agitado en un vortex mecnico antes de usar hasta que alcance una consistencia uniforme, de no ser as debe ser reemplazado. 5. Finalmente debe ser reemplazado o verificada su densidad mensualmente.

Preparacin inculo Para realizar la siembra se requiere la preparacin de un inculo que sea comparable al estndar de McFarland, de modo de estandarizar la cantidad de MO y no produzca variaciones en la lectura. 1. Se deben tomar entre 3 a 5 colonias bien aisladas y que presenten la misma morfologa, las que se transfieren a un tubo con 4 a 5 ml de un medio de cultivo adecuado como por ejemplo soya tripticasa. 2. El caldo es incubado a 35 C hasta que alcance o exceda la turbidez del estndar de 0,5 McFarland (2 a 6 horas, que resulta en una concentracin de 1 a 2 x 10`8 UFC/ml. 3. La turbidez se ajusta con suero fisiolgico hasta que sea pticamente comparable al estndar. 4. Se procede a medir al espectrofotmetro, en caso de no disponer de este se realiza tras un fondo con lneas blancas con lneas negras contrastantes. Inoculacin de las placas 1. Luego de ajustar turbidez en un periodo no mayor a 15 minutos se debe sumergir una trula de algodn, que debe ser presionada contra la pared del tubo para desechar el exceso de inculo. 2. Se inocula sobre la superficie del agar Mueller Hinton por rayado 2 a 3 veces rotando la placa entre cada rayado para asegurar una distribucin constante, finalmente se pasa por los bordes del agar. 3. Para evitar que un exceso de humedad en la superficie se pueden dejar las placas entreabiertas durante 3 a 5 minutos, hasta que sea absorbido. 4. Se debe evitar un exceso en la densidad del inculo, del mismo modo no usar caldos de cultivo de la noche anterior sin diluir o no estandarizado.

Aplicacin de los discos a las placas inoculadas 1. El disco debe ser presionado sobre el agar para que toque toda la superficie, deben ser distribuidos en forma constante (no ms de 24 mm entre centros). 2. Se deben colocar como mximo 12 discos en placas de 150 mm o mximo 5 en placas de 100 mm. 3. Debido a que difunden casi instantneamente no deben ser relocalizados una vez que haya tocado la superficie. 4. Las placas son invertidas y puestas a incubar a 35C 15 minutos despus de colocados los discos; se debe evitar la incubacin con CO2 debido a que el estndar fue desarrollado en aire ambiente.

6 .Tinciones Tincin Gram 1. Hacer extendido, fijar a temperatura ambiente o calor suave 2. Colorear con cristal violeta al 1% o violeta genciana durante 60 segundos, cuidando que el colorante cubra toda la preparacin. 3. Eliminar el exceso de colorante y lavar rpidamente con un chorro suave de agua, manteniendo la lmina en posicin inclinada. 4. Cubrir la preparacin con la solucin de lugol (mordiente), dejndola actuar durante 60 segundos. Lavar nuevamente con agua. 5. Decolorar con alcohol 6 acetona (mezcla 1: 1) durante 10 segundos. 6. Lavar con agua 7. Colorear con el colorante de contraste que es la safranina durante 30 segundos. 8. Lavar con agua, secar y observar al microscopio utilizando el objetivo de inmersin. Resultado: Las bacterias que retienen el colorante se denominan gram positivas y se observan de color azul. Las bacterias que se decoloran con el alcohol acetona y se tien con la safranina se denominan gram negativas y se observan de color rosado. Tincin de Kinyou Se utiliza para diferenciar entre Actinomyces y Nocardia 1. 2. 3. 4. 5. Hacer frotis, dejar secar a temperatura ambiente. Cubrir la lamina con carbol-fucsina durante 3 minutos (no calentar) Lavar y decolorar con agente decolorante durante 5 - 10 segundos. Colocar azul de metileno como contraste por 30 segundos Lavar con agua

Tincin de Tinta China para Cryptococcus neoformans Tincin negativa o tincin de tinta china, que tie toda la preparacin excepto la cpsula y permite hacer un diagnstico presuntivo de criptococosis. 1. Se realiza a partir del sedimento del LCR, tras centrifugacin, colocando en un portaobjetos una gota de sedimento y otra de tinta china comercial 2. Mezclar y poner un cubreobjetos

3. Observar al microscopio optico con objetivo 40x. Ha y que examinar el porta completo. La sensibilidad de la tincin oscila entre el 25-50% en los casos de meningitis, aunque en los pacientes con sida puede ser mayor. Pueden producirse falsos resultados positivos en presencia de levaduras de los gneros Rhodotorula y Candida, de otras especies de criptococos, Klebsiella neumona, as como por artefactos. Es importante diferenciar bien la clula con doble pared refringente, con su cpsula, y hay que buscar clulas en fase de gemacin. Tincin violeta-bicarbonato Tincin utilizada para detectar la presencia de Campylobacter sp. 1. Se realiza un extendido de la muestra de deposicin (idealmente muestra fresca). 2. Luego es teido con partes iguales de Cristal Violeta y Bicarbonato de Sodio al 1%, durante uno a dos minutos. 3. Luego las lminas se leen con aumento de 100x y se considera positiva la presencia Bacilos Gram Negativos de formas espirilares o semejantes a gaviotas. Se informa como: Se observa morfologa sugerente de Campylobacter. Si despus de revisar 50 campos no se observan estas formas espirilares, se considera negativa.

7 .Toma de Muestra y Procesamiento Coprocultivo La muestra para el cultivo microbiolgico puede obtenerse de 2 formas, dependiendo del estado del paciente: Torula rectal o sonda rectal: Estas tcnicas se utilizan especialmente en el nio menor. 1. Con trula: A travs de una trula de algodn, humedecer en el medio de transporte Cary y Blair en introducir por el recto aproximadamente 2 cm., hacindole girar suavemente. Volver la trula al tubo con medio de transporte. 2. Sonda rectal: Se debe emplear una sonda de NELATON fina y se aspira con jeringa. Agregar sobre el medio de transporte Cary y Blair sin la trula, 1-2 ml. del aspirado .Volver a colocar la trula. Recoleccin de deposicin emitida: El paciente debe emitir la deposicin en un recipiente muy limpio, desde el cual se recolecta, con la trula de algodn, la fraccin de deposicin que muestra mayor alteracin (sangre, pus, mucosidad). Colocar la trula en el medio de transporte. Numero de muestras: Se deben tomar 2 a 3 muestras de deposicin en tiempos diferentes. Enviar juntas al laboratorio. Para estudio de portadores, se deben tomar 3 a 4 muestras seriadas (en das diferentes) Transporte: Las muestras se mantienen y se transportan a temperatura ambiente, en medio de transporte Cary y Blair. Medios de cultivo: Mc Conkey, XLD, TCBS Patgenos: E.coli, Proteus spp, Yersinia sp, Salmonella spp, Shiguella sp, Vibrio spp, Aeromonas, Plesiomonas.

Expectoracin Procedimiento 1. Paciente en ayunas, debe lavarse los dientes y realizar enjuagues con agua corriente, para limpiar la cavidad oral. 2. Obtener el esputo tras una expectoracin profunda, luego de un esfuerzo de tos, preferentemente matinal. 3. El kinesilogo o enfermera debe asistir al paciente durante la obtencin de sta. La muestra debe provenir del sector bajo del tracto respiratorio. 4. La saliva no sirve para realizar este estudio. 5. De no producirse expectoracin espontnea, puede inducirse el esputo con nebulizaciones con suero fisiolgico. 6. Obtener muestra previo inicio de la terapia antimicrobiana. 7. Depositar muestra en placa Petri estril, diseada para este propsito, o en frasco de boca ancha tapa rosca estril. Volumen: De 2 a 10 ml. si es posible. Transporte: La muestra debe enviarse de inmediato al Laboratorio. No debe demorar ms de dos horas en llegar al laboratorio. Transportar placa dentro de una unidad de transporte trmico. NOTA: Una muestra representativa debe presentar al Gram las siguientes caractersticas, en cuyo caso contrario el examen se debe repetir: 25 Polimorfonucleares por campo. 10 Clulas epiteliales por campo. Medios de cultivo: A. Sangre, A. Mc Conkey, A. Chocolate, A. Manitol, A. Sabouraud. Lwenstein-Jensen. Patgenos: Mycobacterium tuberculosis, Pasteurella multocida , Klebsiella oxytoca. K. pneumoniae, Bordetella bronchiseptica, Nocardia asteroides.

Baciloscopia Tincion de Ziehl Neelsen 1.- Coloracin especfica: Se cubre el frotis con fucsina fenicada. Se calienta por debajo de la lmina con un hisopo impregnado de alcohol encendido hasta que se observe la emisin de vapores blancos; retirar la fuente de calor, repetir dos veces ms la misma

operacin; cuidar que el colorante no se derrame, no se seque o hierva. Si esto ocurre, agregar ms fucsina a la preparacin. El tiempo de contacto con la fucsina debe ser entre 5 y 10 minutos. 2.- Decoloracin: decolorar con alcohol cido alternando con lavados suaves de agua fra (el agua tibia desprende los extendidos). Esta operacin se repetir las veces que sea necesario hasta que las partes menos espesas queden incoloras. 3.- Coloracin de fondo: Se cubren los extendidos con azul de metileno por 30 segundos como mnimo. Se lava con agua corriente suavemente. Se limpia con algodn impregnado en alcohol por debajo de la lmina. Se secan las preparaciones a temperatura ambiente sobre un papel absorbente y limpio. Lectura La observacin microscpica se hace con lente de inmersin y ocular 8 a 10x. Se debe leer un mnimo de cinco zonas que sean representativas del extendido y un mnimo de 100 campos tiles. Al cambiar la lmina se debe limpiar cuidadosamente el aceite adherido al lente de inmersin, con un papel seco y suave, especialmente si sta ha sido positiva. Pauta de informe: Ausencia de BAAR*: No se observan BAAR en 100 campos microscpicos. BAAR (+): Menos de 1 BAAR promedio por campo en 100 campos observados. Si el total de bacilos observados es menos de diez, dejar registro interno del nmero encontrado. BAAR (++): Uno a diez BAAR promedio por campo en 50 campos observados. BAAR (+++): Ms de diez BAAR promedio por campo en 20 campos observados. Cuando slo se encuentra de 1 a 3 BAAR en el total de campos observados, es necesario extender la lectura a un mayor nmero de campos hasta agotar las posibilidades de encontrar el cuarto bacilo. Si no es posible confirmar la positividad se debe: Hacer otro extendido de la misma muestra y observar acuciosamente. Si no se encuentran ms bacilos, se informa negativa y si es posible se hace cultivo. Solicitar una nueva muestra. La exigencia de informar positivo con la presencia de mnimo 4 bacilos ms, corresponde a la norma convencional de OPS, que seala que existe la posibilidad de encontrar elementos figurados (precipitados de fucsina, alimentos, partculas de ceras) que puedan inducir a falsos diagnsticos.

Cultivo nasal

Procedimiento: Se acomoda al paciente sentado en un rea con buena iluminacin. Introducir una trula humedecida en solucin salina estril y rotar en el vestbulo de ambas fosas nasales (tabique y cara interna de aletas nasales). Introducir la muestra en medio de transporte. (Amies, Stuart).

Transporte: Llevar al laboratorio a temperatura ambiente a la brevedad posible. Medios de cultivo: A. Sangre, A chocolate, A. Manitol. Patgenos: Staphylococcus aureus.

Cultivo farngeo Procedimiento 1. Se acomoda al paciente sentado en un rea con buena iluminacin y exposicin de la faringe del paciente. 2. Deprimir la lengua con baja lengua para lograr una buena exposicin de la faringe. 3. Frotar la trula con la pared posterior de la faringe y las amgdalas tocando cualquier exudado. 4. Evitar tocar la lengua, vula y pared de la boca.

2. Estudio para Corynebacterium difhtheriae: Tomar 2 muestras con trula, utilizando baja lengua, pasndola por el reborde de la pseudomembrana. 3. Estudio para Neisseria meningitidis: Muestra nasofarngea. Tomar la muestra con trula, por detrs de la vula en la porcin nasal de la faringe. Transporte: Enviar la trula en medio de transporte Stuart, a temperatura ambiente, dentro de una unidad de transporte trmica.

Medios de cultivo: A. Sangre, A. Manitol. Patgenos: El agente principal de faringitis es Streptococcus pyogenes. El estudio de Neisseria meningitidis se realiza con propsitos epidemiolgicos. El estudio de faringitis gonoccica debe ser solicitada en forma especfica por el mdico. El estudio de Corynebacterium difhtheriae se realiza slo cuando se solicita expresamente. Hemocultivo.

Compromiso del estado general asociado a: Fiebre > 38 C. Hipotermia < 36 C. Leucocitosis > 10.000 Granulocitopenia < 1.000 polimorfonucleares x ml. una combinacin de ellos. En pacientes que por su condicin debilitada no responden con fiebre, guiarse por los sntomas y signos clnicos de sepsis: taquicardia, palidez, hipotensin, sudoracin. Paciente con antimicrobianos, en que se sospecha falla de tratamiento, previo al cambio de terapia. Momento de la obtencin: Lo antes posible despus de constatada el alza febril (38) Intervalo de tiempo: Tomar en forma simultnea, el set de hemocultivos pero de sitios de puncin diferentes. (brazo izquierdo, brazo derecho). Volumen de sangre por frasco y numero de muestras: En adultos tomar 10 ml. de sangre por frasco, completando set de 2 muestras. Endocarditis infecciosa : 3 frascos en 24 hrs. Esperar hasta 24 hrs. antes de repetir un nuevo set de 3 frascos adicionales; si los 3 frascos primeros estn negativos hasta ese momento. 1. Recien nacidos: 1 ml. de sangre por frasco completando un set de 2 frascos. 2. Lactantes 1mes-1ao: 1,5 ml. de sangre por frasco, completando un set de 2 frascos. 3. Mayores de 2 aos: 2,5 ml. de sangre por frasco, completando un set de 2 frascos. 4. Adolescentes: 5 10 ml. de sangre por frasco, completando un set de 2 frascos.

Relacin sangre / caldo y tipos de frascos: Se debe mantener una relacin 1/5 a 1/10 respecto de la dilucin sangre / caldo de cultivo. Se utilizan frascos comerciales BACT ALERT. Frascos verdes, con 40 ml. de medio de cultivo, para pacientes adultos: agregar 10 ml. sangre por frasco. Frascos amarillos, con 20 ml. de medio de cultivo, para pacientes peditricos, mximo de 4 ml. de sangre por frasco. Contienen partculas de carbn para inactivar antibiticos. Ambos tipos de frascos permiten el crecimiento de bacterias aerobias, anaerobios facultativos, hongos. Para anaerobios se necesitan frascos especiales. Toma de muestra: 1. Muestra tomada por personal adiestrado (enfermera), con guantes de procedimiento. 2. Seleccionar la vena perifrica de ms fcil acceso. 3. Lavar la extremidad elegida con agua y jabn. 4. Aplicar con trula de algodn, alcohol 70 %, en forma concntrica, partiendo desde el lugar donde se va a puncionar, hacia la periferia. 5. Puncionar la vena y aspirar sangre. 6. Desinfectar la tapa frasco donde se va a inocular la sangre, con alcohol 70% 7. Pinchar la tapa de goma e inocular la sangre que se mezcla con el medio de cultivo. No cambiar de aguja para hacer este proceso. Transporte: A temperatura ambiente, como mximo 6 horas antes de incubarse en el laboratorio. Los hemocultivos se mantienen por 5 das antes de darlos por negativos. La excepcin se da ante la sospecha de algn microorganismo fastidioso, de hongo o ante un diagnstico de Endocarditis bacteriana, en el cual se incuban hasta 10 das. En caso de estar positivos. Se da un informe preliminar.

Patgenos: Brucella sp, Staphylococcus aureus, Haemophilus sp, Streptococcus sp

Liquido asctico Liquido peritoneal: lquido ubicado entre el peritoneo parietal y visceral (cavidad abdominal, peritoneal)

Ascitis: acmulo anormal de lquido en la cavidad abdominal. Peritonitis: inflamacin del peritoneo. Peritonitis primaria: peritonitis bacteriana sin evidencia de ruptura de vscera. PBE: peritonitis bacteriana espontneas Ascitis (cirrosis). Toma de muestra: Por puncin y aspiracin de lquido de cavidad abdominal. -Personal entrenado (mdico) -Tcnica asptica Numero de muestras: 1. Tubo con Heparina, tapa verde: para anlisis bioqumico (glicemia, protenas, otros ). 2. Tubo con EDTA, tapa lila: para recuento celular y diferencial. 3.-Tubo estril para microbiologa, tubo tapa roja estril, sin anticoagulante:3-5ml para gram y cultivo.. 4. Inoculacin directa en frasco de hemocultivo peditrico (amarillo), con 1-3 ml de lquido. Transporte: Transportar lo antes posible al Laboratorio, a temperatura ambiente. Medios de cultivo: A. Sangre, A. Mc Conkey. Patgenos: Yersinia sp, Enterobacterias, Cocaceas

Liquido articular o sinovial Fundamentalmente para evaluar las alteraciones del lquido sinovial en las artritis. La inflamacin de estas articulaciones se puede producir por: Agente fsico o mecnico (traumatismos, gota) Agentes qumicos (hemofilia) Artritis supuradas o spticas Artritis por reacciones inmunolgicas o autoinmunes Artritis reumatoide y fiebre Toma de muestra: Se realiza por puncin articular: Personal entrenado Tcnica asptica Anestesia local Procesar antes de 4 horas de obtenido

Numero de muestras: 1. Tubo con Heparina, tapa verde: para anlisis bioqumico. 2. Tubo con EDTA, tapa lila: para recuento celular y diferencial. 3. Tubo estril para microbiologa o tubo tapa roja estril, sin anticoagulante: 3 a 5 ml, para gram y cultivo. 4. Inoculacin directa en frasco de hemocultivo peditrico (amarillo) con 1-3 ml. de lquido. Transporte: Transportar las muestras tomadas, lo ms rpido posible al laboratorio, a temperatura ambiente. Medios de cultivo: A. Sangre, A. Mc Conkey, A. Chocolate (ambiente CO2). Patgenos: Staphylococccus aureus, Streptococcus agalactiae.

Cultivo de liquido cefalorraqudeo (LCR) En caso de: Meningitis infecciosa -poliomielitis Hemorragias menngeas -LES Encefalitis -sarcoidosis Neuropatas -vasculitis Hipertensin intracraneal benigna -sfilis nerviosa Epilepsia -hidrocefalia normo-tensa Demencia de origen metablico -sndrome Guillain Barre Esclerosis mltiple y sus variantes -personas VIH + Linfoma, leucemia y otro tipo de tumores que involucran al SNC. Toma de muestra: Muestra obtenida por un mdico entrenado en la tcnica de puncin lumbar. Tcnica asptica. Procedimiento: Limpieza por arrastre de la regin lumbar del paciente con agua y jabn. Limpiar la piel con trula de algodn impregnada con alcohol 70% mediante movimientos concntricos que van desde el lugar donde se realizar la puncin, hacia afuera.

Proceder a la puncin lumbar con tcnica asptica (campo estril y equipo de profesionales con vestimenta de proteccin estril. Recolectar el LCR en frascos estriles plsticos con tapa rosca (citoqumico, bacteriolgico y TBC cuando se sospeche).

1.-Tubo con Heparina, tapa verde: para anlisis bioqumico. (Glucosa, y protenas) . 2.- Tubo con EDTA, tapa lila: para recuento celular y diferencial. 3.- Tubo estril para microbiologa,o tubo tapa roja estril sin anticoa-gulante, 1-2 ml.: para gram y cultivo. 4.- Tubo estril sin anticoagulante para ADA (TBC). 5.- Tubo estril para cultivo Koch sin anticoagulante. Inocular adems, 1 frasco de hemocultivo peditrico (amarillo), con 1 ml. de LCR. si es posible. Lo adecuado para el estudio bacteriolgico es de 2 ml. de LCR. En aquellos casos en que se obtiene escasa cantidad de muestra, el clnico debe indicar orden, cul de los estudios que se realizan con el LCR reviste mayor importancia. Otra forma de tomar muestra de lquido cefalorraqudeo es por drenaje ventricular y por puncin de fontanela. Transporte: Se debe enviar a la mayor brevedad posible al laboratorio, en un tubo estril plstico tapa rosca, a temperatura ambiente (no refrigerar), junto con el frasco de hemocultivo. Transportar dentro de una unidad de transporte trmico. Medios de cultivo: A. Sangre, A. Chocolate.
Patgenos: Streptococcus pneumoniae , Neisseria meningitides, Listeria monocytogenes , Nocardia asteroides.

Liquido peritoneal En el caso de: Peritonitis bacteriana 2: perforacin vscera (apendicitis, trauma). Peritonitis 3: complicacin de peritonitis secundaria. Toma de muestra: 1. Se realiza durante el intra-operatorio con jeringa estril. 2. Personal entrenado 3. Tcnica asptica 4. Recolectar muestra, en tubo de polietileno, tapa rosca estril o tubo tapa roja, sin anticoagulante, para estudio microbiolgico, de 3 a 5 ml es suficiente para realizar el estudio de gram y cultivo.

5. No se recomienda inocular frasco de hemocultivo, ya que este tipo de muestras viene con una carga bacteriana alta. Trasporte: Transportar lo antes posible al Laboratorio, a temperatura ambiente, dentro de una unidad de transporte trmico. Medios de cultivo: A. Sangre, A. Mc Conkey.
Patgenos:

Liquido pleural Todo paciente que presente signos clnicos y/o radiolgicos de derrame pleural de etiologa no precisada. Toma de muestra: Debe ser realizada por un mdico entrenado en la tcnica de toracentesis, la puncin aspirativa debe realizarse bajo rigurosa tcnica asptica. Se debe recolectar: 1. Tubo con Heparina, tapa verde: para anlisis bioqumico (glicemia, protenas, otros) 2. Tubo con EDTA, tapa lila: para recuento celular y diferencial. 3. Tubo estril para microbiologa, o tubo tapa roja estril, sin anticoagulante: 3-5ml, para gram y cultivo. 4. Inoculacin directa en frasco de hemocultivo peditrico (amarillo), con 1-3 ml de lquido. 5. Tubo para ADA (TBC) con citrato. 6. Tubo estril para cultivo de Koch.(TBC) Transporte: Transportar lo antes posible al Laboratorio, a temperatura ambiente, dentro de una unidad de transporte trmico. Medios de cultivo: A. Sangre, A. Mc Conkey, A. Chocolate.
Patgenos: Streptococcus pneumonia, Staphylococcus aureus.

Cultivo ocular Recomendaciones: 1. Muestra precoz, tomada en la forma ms asptica posible y antes de la aplicacin de antimicrobianos.

2. La actividad antimicrobiana de los anestsicos tpicos usados pueden interferir con el cultivo. Muestra: Secrecin ocular Raspado conjuntival Procedimiento: 1. Tomar la muestra para cultivo antes de la aplicacin de anestsico tpico. 2. Tomar la muestra con extremo cuidado, con la ayuda de otra persona que inmovilice la cabeza del paciente. 3. Obtener la secrecin con trula estril del fondo de saco inferior en el ngulo interno del ojo del extremo interior del prpado, previo aseo ocular con suero fisiolgico. 4. Rotar la trula suavemente para que toda la superficie del algodn se empape en la secrecin. Transporte: Introducir la trula en el medio transporte Stuart y mantener a temperatura ambiente. Medios de cultivo: A. Sangre, A. Chocolate, A. Manitol.

Patgenos: Neisseria sp, Staphylococcus aureus y streptococcus beta hemolitico.

Cultivo otico Secrecin del conducto auditivo externo. Toma de muestra: 1. Aseo cuidadoso de la piel con suero fisiolgico para disminuir posibilidades de arrastrar bacterias presentes normalmente en esta zona. 2. Tomar con una trula fina llegando hasta las cercanas del tmpano. 3. Dirigir la trula en sentido oblicuo de atrs hacia adelante y de abajo hacia arriba. Trasporte: Cultivo aerobio: Transportar a temperatura ambiente en medio Stuart. Cultivo anaerobio: Transportar en medio anaerobio comercial, a temperatura ambiente.

Medios de cultivo: A. Sangre, A. Mc Conkey, A. Chocolate, A. Manitol, A. Sabouraud.

Patgenos: Aeromonas sp , Arcanobacterium haemolyticum, Moraxella catarrahalis, Streptococcus pyogenes.

Rotavirus y adenovirus (Por Enzimoinmunoensayo) en deposiciones. Rotavirus es el virus que ms frecuentemente produce diarrea en los nios y se trasmite por contacto con alimentos, manos u objetos contaminados por deposiciones de personas infectadas. Se presenta en forma ms grave en menores de 2 aos y se cree que a los 3 aos todos los nios ya han tenido contacto con el virus. Adenovirus, corresponden a un grupo de virus que causan diferentes tipos de enfermedades en el hombre. La mayora de ellos producen infecciones respiratorias, y otros, menos frecuentemente, infecciones gastrointestinales. Pueden afectar a personas de cualquier edad aunque es ms frecuente en los nios. Se presentan durante todo el ao con un discreto ascenso a fines del invierno, primavera y principios del verano.

Toma de muestra: 1. Deposicin por emisin espontnea 2. Deposicin obtenida por sonda rectal. 3. Depositar en caja o frasco plstico limpio entregada por laboratorio. 4. La muestra para leucocitos fecales sirve adems para pesquisa de rotavirus., si la cantidad es de aproximadamente de 2 ml. de deposicin lquida o una porcin de 1 2 gramos de deposicin slida. Transporte: Llevar al Laboratorio, en caja o frasco plstico a temperatura ambiente.

Urocultivo En caso de: 1. Sospecha ITU: Disuria, hematuria, orinas turbias, mal olor. 2. Sndrome febril en estudio. 3. Examen pre-operatorio. 4. Previo procedimiento invasivo urolgico.

Toma de muestra: 1. Tomar la primera miccin de la maana. Si no es posible, dejar permanecer la orina en la vejiga el mayor tiempo posible para aumentar el nmero de microorganismo para volumen.(> 4 horas) 2. La orina es un lquido estril, pero bajo ciertas condiciones puede contaminarse con flora de la uretra, prstata o perin. Orina de 2chorro: Este mtodo depende de la edad, sexo y habilidad del paciente para cooperar. Debe instruirse al paciente en forma verbal y escrita (pacientes que se les da hora) para tomar la muestra. Debe ser tomada por personal adiestrado. Toma de muestra para pacientes femeninas: 1. Lavarse las manos con agua y jabn, enjuagarse y secar con toalla nova. 2. Realizar aseo genital: con una trula de algodn con jabn, limpie los labios mayores por separado, con un solo movimiento de arrastre de arriba hacia abajo. Separe los labios mayores con el dedo ndice y pulgar y limpie en la misma forma los labios menores y vestbulo. 3. Enjuagar con agua tibia usando el resto de las rtulas de algodn. 4. Colocar un tapn de gasa estril en la vagina. 5. Orinar una cantidad pequea en el bao y despus recolectar la orina restante en un tubo estril o frasco. Cerrar evitando el contacto con dedos, genitales externos o ropa. 6. Sacar tapn vaginal y eliminar. 7. Enviar antes de una hora al laboratorio. Toma de muestra para pacientes masculinos: 1. Lavarse las manos con agua y jabn, enjuagar y secar con toalla nova. 2. Lavado: retrae el prepucio, limpiar con trula de algodn y jabn prolijamente con movimiento de arrastre. 3. Enjuagar con agua tibia y secar con trula de algodn. 4. Orinar: el primer chorro se elimina: recolectar la muestra de orina restante directo al tubo estril. 5. Cerrar el tubo.

Recolector de orina peditrico Procedimiento 1. Informar al nio o algn familiar del procedimiento a realizar. 2. Lavado de manos.

3. Prepare la bandeja con todo el material necesario. (trulas con jabn y humedecidas con agua tibia, rin, guantes de procedimiento, toalla desechable, recolector urinario) 4. Colquese los guantes 5. El nio debe estar, en posicin decbito dorsal con las piernas flectadas y abducidas. 6. Realice un aseo genital prolijo de los genitales, seque bien la zona con la toalla desechable y fije el recolector estril de 100cc a la zona.

Recolector en nias: Se inicia con las trulas mojadas y jabonosas, empezando por la zona vulvar, labios mayores, labios menores visualizando meato urinario y se contina con las trulas con agua tibia en la misma forma antes mencionada. Se seca con toalla desechable (puede usar apsito o gasa estril) especialmente la zona del perin. (Tcnica similar a la del adulto). Colocar el recolector del perin hacia arriba cubriendo completamente la zona vulvar. No deben quedar pliegues. Registrar la hora. (Puede colocar un timer para controlar el cambio del recolector). Pedir al acompaante que ponga un paal limpio en forma suelta y con ropa que no presione el recolector. Explicarle que debe revisar al nio cada 10 minutos, si ste orina deber informar de inmediato al personal de enfermera para que proceda a retirar el recolector. La posicin ideal del nio es de pi. En el caso de nios hospitalizados se debe realizar los mismos pasos anteriores.

Recolector en nios: Se sigue el mismo procedimiento que en las mujeres considerando las diferencias anatmicas. Se retrae el prepucio con suavidad limpiando hasta el glande. Introducir el pene en el recolector verificando que los bordes estn bien adheridos. Al retirar el recolector con orina se pegan los bordes uno contra otro y se identifica con el nombre en presencia del paciente. Hay laboratorios que solicitan el traspaso de la orina con tcnica estril a un contenedor. Acomode al nio y avise a quien este a cargo de l que el procedimiento ha terminado Es importante saber que un recolector no puede ser cambiado ms de tres veces seguidas ya que el adhesivo del producto es muy daino y causa erosin de la piel. En el caso de una muestra de orina se debe cambiar el recolector cada 20 minutos

(tiempo de reproduccin de la flora bacteriana). Si se decide cambiar el recolector se deben rea lizar todos los pasos anteriormente descritos.

Catter de permanencia prolongada (puncin): Desinfectar sonda con una trula de algodn con alcohol 70 dejando que se evapore. Puncionar directamente el catter con aguja en extremo distal de la sonda. Colocar la orina aspirada en un frasco o tubo estril

Cateterizacion: Obtener orina por mtodo de cateterizacin de la vejiga con tcnica asptica. No se recomienda rutinariamente por el riesgo de introducir bacterias a la vejiga. Indicar en la orden de laboratorio muestra tomada por catter.

Puncin vesical: Obtenida por tcnica asptica por mdico. Indicar en la orden: muestra por puncin. Transporte: En el mismo tubo o recolector con orina, enviar antes de 1 hora al laboratorio. Transportar a temperatura ambiente, dentro de una unidad de transporte trmico. Medios de cultivo: A. Sangre, A. Mc Conkey. Patgenos: Escherichia coli , Enterococcus spp ,Enterobacter spp, Klebsiella spp ,Proteus spp , Staphylococcus aureus , Staphylococcus saprophyticus , Streptococcus agalactiae, Providencia spp ,Morganella morganii, Corynebacterium urealyticum.

Cultivo de herida Toma de muestra: 1. Limpieza por arrastre con suero fisiolgico en la zona afectada 2. luego con una torula girar sobre la lesin 3. -En el caso de muestras con pus, se debe realizar por aspiracin con aguja y Jeringa. Transporte:

Medio de transporte Stuart o Tubo estril. Medios de cultivo: A. Sangre, A. Mc Conkey.

Patgenos: Staphylococcus sciuri, Staphylococcus epidermidis (no se trabaja, flora normal) Citrobacter spp, Morganella morganii ,Burkholderia cepacia ,Enterobacter spp, Elizabethkingia meningosepticum , Pasteurella multocida, Oligella urethralis ,Corynebacterium striatum, Corynebacteriu urealyticum, Arcanobacterium haemolyticum, Shewanella putrefaciens ,Stenotrophomonas maltophilia, No enterococo, Vibrio alginolyticus ,Vibrio mimicus, Vibrio vulnificus.

. Flujo vaginal Recomendaciones: Dentro de 48 horas sin relaciones sexuales Sin ATB No estando en periodo menstrual Verificar datos paciente Una semana antes de la realizacin del examen no debe aplicarse vulos ni ningn otro medicamento intravaginal. No se realice bao con ducha vaginal el da de la toma de muestra.

Toma de muestra: (realizada por matrona o mdico) 1. Explicar a la paciente 2. La paciente debe estar en posicin ginecolgica 3. Abra el orificio vaginal colocando sus dedos ndice y del medio ( con guantes). 4. Entreabra ligeramente sus dedos y presione suavemente hacia abajo. 5. Dirija las hojas del especulo cerrado, precalentado, dentro de la vagina a un ngulo de 45 grados, siguiendo el contorno natural de la pared vaginal posterior. 6. Cuando el especulo este colocado, retire sus dedos, y rote este, de manera que las valvas queden orientadas horizontalmente. 7. Accione para abrir las valvas parcialmente presionando el elevador del especulo con su pulgar. 8. Busque a travs de las valvas abiertas el cuello uterino y fondo de saco. 9. Fije las valvas en la posicin abierta mediante el ajuste del tornillo o tuerca de fijacin con el pulgar (especulo de metal) o presionando completamente el elevador (especulo plstico). - Se procede a tomar la muestra con distintas trulas.

Torula 1= torula en medio Stuart ---------- Cultivo Torula 2= Torula con solucin salina -------- examen directo y tincin gram.

Transporte: Transportar a temperatura ambiente, procesar lo antes posible. Cuidar la temperatura sobretodo en los meses fros (Trichomonas vaginalis). Medios de cultivo: A. Sangre, A. Mc Conkey, A. Sabouraud. Patgenos: Gardnerella vaginalis , Streptococcus pyogenes , Streptococcus agalactiae , Listeria monocytogenes, Candida sp , Enterococcus spp , Trichomonas vaginalis ,Chlamydia trachomatis , Neisseria gonorrhoeae.

Secrecin uretral Hombres: 1. Acomodar el paciente en una camilla 2. Si hay secrecin abundante tomar muestra con torula estril desde el inicio de la uretra. 3. Si la secrecin es escasa, introducir la torula 2 cm dentro de la uretra y girarla. 4. Sembrar inmediatamente en Thayer Martin (medio selectivo) y depositar la trula en tubo medio de transporte Stuart. 5. Introducir una segunda torula y depositar en suero fisiolgico estril tibio para luego frotar torula en portaobjetos para tincin gram y llevar al laboratorio. Transporte: Transportar a temperatura ambiente, procesar lo antes posible. Mujeres: 1. La secrecin en mujeres es mucho menos abundante y generalmente es enmascarada por secrecin vaginal, si se logra establecer que la secrecin proviene efectivamente de la uretra, introducir torula fina en uretra y sembrar cultivo corriente, luego frotar la torula en portaobjetos para tincin gran. Depositar torula en suero fisiolgico estril tibio y llevar al laboratorio. Transporte Transportar a temperatura ambiente, procesar lo antes posible. Patgenos: Neisseria gonorrhoeae y otros patgenos.

Leucocitos fecales Toma de muestra: 1.- Deposicin por emisin espontnea. 2.- Deposicin obtenida por sonda rectal. En ambos casos de deposicin se deposita en un frasco de polietileno limpio, entregar a laboratorio. Procesamiento: Una vez que el paramdico chequea la muestra debe procesarla, teniendo en cuenta medidas de bioseguridad uso de guantes. 1. La muestra se extiende en una lmina portaobjeto en forma circular en el centro de sta. 2. Debe secarse a temperatura ambiente antes de ser teida. 3. Luego, se tie con Azul de Metileno por tres minutos. 4. Para eliminar el exceso de colorante se lava con agua. 5. Dejar secar a temperatura ambiente por tres minutos 6. La lmina con la preparacin se lee al microscopio ptico con lentes de inmersin 50x o 100x. Resultado: Si el resultado es negativo debe informarse: leucocitos fecales negativo Si el resultado es positivo debe informarse: Ms de 25 por campo, visto con objetivo de 40x: leucocitos fecales abundantes Menos de 25 por campo, visto con objetivo de 40x: leucocitos fecales regular cantidad Si hay uno que otro por campo, visto con objetivo de 40x: leucocitos fecales escasos

Muestras Micologicas Consideraciones: Paciente sin tratamiento antifungico previo (en caso contrario suspenderlo a lo menos 1 semana antes si es tpico o 15 das si es oral). Paciente limpio, bao o limpieza solo con agua y jabn (no desinfectante). Toma de muestra Piel Raspado del borde activo de la lesin con bistur, esptula o portaobjetos estril Si existen vesculas debe cortarse el techo. Raspado y cinta adhesiva transparente (en Pitiriasis versicolor) Uas Las uas no deben estar pintadas. Tomar escamas ms profundas posibles, lmite entre una sana y enferma. Raspado en la porcin distal del espacio subungueal donde se acumula la hiperqueratosis (reas blancas) En caso de onicomicosis superficial se raspa la cara externa de la ua. Pelos Limpiar cuero cabelludo con alcohol Arrancar 10-20 pelos cortados del borde de la alopecia con pinzas Muestra de cuero cabelludo se raspa con bistur. Otras muestras Ocular: Conjuntival (torula estril) Cornea (procedimiento medico) Otica: Con torula estril tomar material purulento o costroso. Cavidad oral: Aseo oral. Raspar lesiones blanquecinas. Flujo vaginal Con especulo. Glande, prepucio, regin anal y perianal:

Tomar con torula estril.

Transporte de muestra Envase limpio y seco Las escamas, pelos, costras o raspados se depositan: en placa de petri estril. Cultivo: A. Sabouraud (suplementado), CHROMagar Cndida. Patgenos: En las micosis superficiales estn involucrados principalmente: dermatofitos, Cndida spp. y Fusarium spp(uas). Procedimiento Examen microscpico directo con KOH 10% 1. Colocar el material a estudiar en un porta-objeto y se cubre con una a dos gotas de KOH al 10%. 2. Luego cubrir la preparacin con un cubre-objeto. Nunca se debe presionar el cubre-objeto con los dedos, 1. ya que los cidos grasos naturales de la piel dificultan la observacin. Cuando la muestra es muy espesa 2. es aconsejable presionar el cubre-objeto con una pinza u otro objeto. De esta manera el hongo puede ser 3. liberado del material biolgico, lo que permite su visualizacin. 4. Guardar en cmara hmeda hasta el momento de la lectura. 5. Observar con objetivo 40 X 6. Informe de resultados: Se observan levaduras en +, ++, +++ Se observan pseudohifas en +,++,+++ Se observan levaduras y pseudohifas en +, ++, +++ Se observan hifas y levaduras en +, ++, +++ Se observan hifas septadas en +, ++, +++ Se observan artroconidios en +, ++, +++ Se observan clamidosporas en +, ++, +++ No se observan elementos micoticos.

Cultivo de hongos: 1. Se siembra la muestra en Agar Sabouraud en placa y en tubo. 2. Incubacin a 25 C. 3. Tiempo de desarrollo: 4 semanas (dermatofitos). 4. Luego se realiza un directo de la colonia con azul de metileno: se coloca una gota de azul de metileno en un porta objeto, se toma un trozo de cinta adhesiva se pasa se manera suave por encima de la colonia y despus se coloca sobre la gota de azul de metileno en el porta, se observa al microscopio con objetivo 40 x. Estructuras filamentosas:

8 Identificacin de bacterias Coprocultivo

Bacteria Shigella spp

Sangre colonia blanca mediana S/H Shigella sonnei colonia blanca mediana S/H Yersinia enterocolitica colonia blanca mediana S/H Salmonella paratyphi colonia blanca mediana A S/H Salmonella typhi colonia blanca mediana S/H Salmonella enteritidis colonia blanca mediana S/H Salmonella grupo B colonia blanca mediana S/H Salmonella colonia blanca mediana typhimurium S/H Proteus mirabilis Colonia gris desparramada S/H Proteus vulgaris Colonia gris desparramada S/H Escherichia coli colonia blanca mediana S/H Vibrio cholerae Colonia grande acuosa /H Vibrio Colonia grande acuosa /H parahaemolyticus Vibrio fluvialis Colonia grande acuosa /H Vbrio mimicus Colonia grande acuosa /H Aeromona caviae Colonia grande acuosa /H Aeromonas hydrophila Colonia grande acuosa /H Plesiomonas Colonia grande acuosa /H shigelloides S/H= Sin Hemolisis /H= Beta hemolisis

MC Lac Lac Lac Lac Lac Lac Lac Lac Lac Lac Lac + Lac Lac Lac Lac Lac Lac Lac -

XLD Roja pequea Roja pequea amarilla pequea Roja pequea Roja H2S (difundio) Roja H2S punto negro Roja H2S punto negro Roja H2S (difundio) amarilla desparramada H2S amarilla desparramada H2S amarilla grande amarilla grande amarilla grande amarilla grande amarilla grande amarilla grande amarilla grande amarilla grande

TCBS no crece no crece no crece no crece no crece no crece no crece no crece no crece no crece no crece Amarillo Verde Amarillo Verde Verde Verde no crece

Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram Bac Gram -

Catala sa + + + + + + + + + + + + + + + + + +

Oxidas TSI a K/A-+ + + + + + + K/A-A/A-K/A+K/A-+ K/A+++ K/A+++ K/A ++ K/A ++ A/A +/+++ A/A +A/A-K/A-A/A-K/A-A/A-A/A-K/A--

LIA K/A-K/A-A/A-K/A ++K/K-+ K/A+K/K+K/K ++ R/A ++ R/A +/+++ K/K-K/K K/K K/A-K/K K/A A/A-K/K

MIO -+--+ --+ +-+ +-+-+ +-+ +-+ +-+ +++++ +++ +++ +-+-+ +++++++

Citrato Urea + + + + + + + + + + + + -

Secreciones Staphylococcus Bacterias S. aureus Sangre marfil grande /H MC No crece Gram Cocac eas G+ racim o Cocac eas G+ racim o Cocac eas G+ racim o Cocac eas G+ racim o Cocac eas G+ racim o Cocac eas G+ racim o Ca + Ox Ur Co a + No Fu Dn a + Xy

S.epidermidis

Blanca mediana /H Variable Blanca mediana S/H

No crece

S.saprophytic us

No crece

S. sciuri

Blanca Grande S/H (huevo frito) Blanca mediana /H (grande) Blanca grande /H Variable

No crece

S.lugdunensis

No crece

S. xylosus

No crece

Ca= Catalsa Ox= Oxidasa Ur= Urea

No=Novobiocina Fu= Furazolidona Coa= Coagulasa

Dna= Dnasa Xy= Xylosa

Streptococcus Bacteria S.pyogenes Sangre MC No crece No crece No crece No crece Gram Cocacea s G+ caden Cocacea s G+ caden Cocacea s G+ caden Cocacea s G+ caden Cocacea s G+ caden Ca Ox Ba S Cam p Bi NaC l I

Gris pequea /H (grande) S. agalactiae Gris mediana /H S.equi Transparent e mediana /H (grande) Streptococcu Gris s grupo D (no mediana S/H enterococcus ) Enterococcus Gris spp mediana /H (variable) Ba= Bacitraciana Bi= Bilis esculina I= Indol Otras Bacteria Kocuria kristinae Corynebacteri um striatum Corynebacteri um urealyticum Rhodococcus equi Listeria Sangre Blanca pequea S/H Verdosa mediana S/H Transparente roco S/H Transparente mediana S/H (acuosa) Blanca

No crece

MC No crec e No crec e No crec e No crec e No

Gram

O TSI -

C -

U Camp -

Cocaceas + G+ tetrada Bacilos + G+ (mazo) Bacilos + G+ (mazo) Cocobacil os G+ Bacilos +

B i +

A/ A

K/K -

K/K -

+ (herra dura) + +

monocytogen es Nocardia asteroides Erisipelothrix rhusiopathiae

mediana /H

crec e No crec e No crec e No crec e No crec e No crec e No crec e LAC LAC LAC -

Blanca roco S/H (tiza) Transparente roco S/H

G+ empalizad a Bacilos + G+ Bacilos G+ filamento so Bacilos G+ Diplococo s GCocobacil os G-

(peque o) K/K -

K/K -+

Arcanobacteri um haemolyticum Moraxella catarrhalis Pasteurella multocida

Blanquecina roco /H Marfil mediana S/H Blanquecina grande S/H (desparrama da) Blanca roco S/H Marfil roco S/H Blanquecina roco S/H Verde mediana S/H

+( invertid o) Dnasa +

A/ A

Oligella urethralis Bordetella bronchiseptica Ochrobactrum anthropi Capnocytopha ga spp

Cocobacil os GCocobacil os GCocobacil os GBacilos G-

K/K -

+ + +

+ + -

K/K + K/K + K/K -

+ + -

Enterobacterias Bacteria Escherichia coli Klebsiella oxytoca Klebsiella pneumoniae Sangre Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama MC LAC + Gram Bacilo s GBacilo s GBacilo s GC + O TSI LIA MI O +++ Ci U -

A/A +- K/K--

LAC +

A/A++ K/K+ A/A +- +

-+-

LAC +

Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Leclersia adecarboxyla ta Citrobacter freundii Citrobacter diversus Citrobacter amalonaticus Citrobacter youngae Proteus mirabilis Proteus vulgaris Providencia alcalifaciens Providencia stuartii Morganella morganii Serratia liquefaciens Serratia marcescens

da S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H

LAC +

Bacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s G-

A/A++ K/K+ A/A++ K/A +A/A-K/A

+-+

LAC +

+-+

LAC +

++-

LAC -

K/A +/++ K/A+-

K/A + K/A+ K/A+ K/A

+--

LAC -

+++

LAC -

K/A --

++-

LAC -

A/A

+--

LAC -

K/A ++ A/A +/+++ K/A --

R/A ++ R/A +/++ + R/A -

+-+

LAC -

++-

LAC -

++-

LAC -

A/A +- R/A +K/AR/A

++-

LAC -

+++

LAC -

A/A++ K/K+ A/A +- K/K+ -

+-+

LAC -

+-+

Serratia rubidaea Hafnia alvei

Rosada S/H Blanca desparrama da S/H Blanca desparrama da S/H Transparent e mediana /H Transparent e grande /H Transparent e grande S/H Amarillenta grande S/H

LAC + LAC -

Bacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s GBacilo s G-

+ +

A/A-K/A+-

K/A K/K--

+-+-+

+ -

Edwarsiella tarda Vibrio alginolyticus Vibrio vulnificus Aeromonas caviae Aeromonas hydrophila

LAC -

K/A /+++ A/A--

K/K ++ K/K

+++

LAC -

+--

LAC LAC LAC -

+ + +

+ + +

K/A-A/A-A/A

K/K K/A A/A

+++ +++--

+ + +

Bacilos no fermentadores Bacteria Pseudomonas aeruginosa Sangre Ploma grande /H (olor jabn popeye) Transparen te pequea S/H Marfil pequea S/H Blanca roco S/H Blanca grande S/H Griscea mediana S/H Transparen te pequea S/H Verde MC LAC Gram Bacilos GCa + Ox OF + Oxidativ o TSI K/K Cit Ur + +

Pseudomonas oryzihabitans Burkholderia cepacia Burkholderia multivorans Acinetobacter baumannii Acinetobacter ursingii Acinetobacter lwoffi Shewanella

LAC -

Bacilos G-

Oxidativ o Oxidativ o Oxidativ o Oxidativ o Alcalino

K/K

LAC -

Bacilos G-

K/K

No crece LAC + (debil ) LAC -

Bacilos GDiplococo s GCocobacil os GDiplococo s GBacilos G-

+ +

K/K K/K

K/K

LAC crece poco LAC -

Alcalino

K/K

Alcalino

K/K

putrefaciens Alcaligenes faecalis Achromobacter xylosoxidans Flavobacterium odoratum Comamonas testosteroni Stenotrophomon as maltophilia (ISP) Elizabethkingia meningosepticu m (S/P) Chryseobacteriu m indologenes Myroides odoratimimus

mediana S/H Blanca roco /H Amarilla pequea S/H Cobriza grande /H Griscea mediana S/H Caf pequea S/H Griscea pequea S/H Naranja mediana /H Griscea mediana /H

-+ LAC LAC Bacilos GBacilos G+ + + + Alcalino Alcalino K/K K/K + + -

No crece LAC -

Bacilos GBacilos G-

+ -

+ +

Alcalino Alcalino

K/K K/K

+ -

LAC -

Bacilos G-

Alcalino

K/K

No crece No crece No crece

Bacilos G-

Alcalino

K/K

Bacilos G-

Inerte

K/K

Bacilos G-

Alcalino

K/K

9 Bibliografa Prueba de susceptibilidad antimicrobiana por difusin en agar. ISP; 2004 Manual de toma de muestras subdepartamento laboratorio clnico 2012, Hospital Base Valdivia. Manual Toma de Muestras Microbiologia 2011, Hospital Rancagua. Manual de procedimientos tcnicos en microbiologa, Hospital Padre Hurtado. http://www.hurtadohosp.cl/archivos/CalidadySeguridad/NormasdeCalidad/Norma s_Laboratorio/MPTDM.pdf http://biblioteca.duoc.cl/bdigital/Documentos_Digitales/600/610/40390.pdf http://www.ispch.cl/sites/default/files/documento/2010/05/Manual%20bacteriol og%C3%ADa%20TBC.pdf