Aglutinantes
Aglutinantes
Aglutinantes
En los aglutinantes lipdicos estudiados (aceite de linaza, nuez y
adormidera) la cantidad de cido palmtico es en todos los casos superior a la
de esterico [163], por lo que se deduce que el cociente (C18)/(C16)
presentar un error menor. Dado que adems resulta igualmente adecuado
para la caracterizacin de los aceites secantes, se toma en este caso tambin
como parmetro identificativo.
Los cidos grasos insaturados experimentan una mayor reactividad
ante la oxidacin, por lo que su cantidad en la muestra se reducir de forma
significativa tras el envejecimiento. Sus correspondientes proporciones
relativas no resultan adecuadas para la caracterizacin del aceite secante,
pero son tiles para el estudio del envejecimiento. As pues, la comparacin
de las cantidades relativas de cidos grasos permite tanto la caracterizacin
de aglutinante lipdico como analizar la influencia del envejecimiento en la
composicin qumica.
3.3.1 Aplicacin de los mtodos analticos propuestos a patrones de
aceites secantes
Las metodologas propuestas se aplicaron sobre muestras procedentes
de patrones de tres clases de aceites secantes (linaza, nuez y adormidera)
ampliamente utilizados para la decoracin de pinturas al leo. Se estudiaron
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
160
muestras de aceite secante fresco, as como sometidas a diversos
tratamientos de envejecimiento: natural, acelerado trmicamente y por
irradiacin UV (descritos en el apartado 3.2 del Captulo IV). Los
cromatogramas correspondientes al estudio de aceite de linaza mediante
HPLC-UV-Visible y HPLC-Fluorescencia se muestran en las Figuras 24 y
25, respectivamente.
Figura 24. Cromatograma obtenido por la separacin de los cidos grasos
derivatizados con 2-NPH/1-EDC.HCl bajo las condiciones optimizadas, y extrados
tras la hidrlisis de muestras procedentes de aceite de linaza patrn envejecido: a)
naturalmente durante cinco aos, b) acelerado trmico, c) bajo irradiacin. Las
condiciones instrumentales de HPLC-UV-Vis son anlogas a las expuestas en la
Figura 23.
En ambos casos los picos cromatogrficos correspondientes a los
cidos grasos estudiados aparecen sin interferencias por parte de otras
sustancias presentes en los aceites patrn. Por otra parte, los resultados
muestran que la sensibilidad del mtodo es suficiente en ambas
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
161
metodologas para la cuantificacin de los cidos grasos procedentes de los
aglutinantes lipdicos patrn.
Figura 25. Cromatograma obtenido por la resolucin una mezcla de los cidos grasos
derivatizados con 4-bromometil-7-metoxicumarina en condiciones optimizadas, obtenida a
partir de una muestra procedente de aceite de linaza sometido a envejecimiento: a) natural
durante 5 aos, b) acelerado trmicamente, c) acelerado por irradiacin UV. Condiciones
cromatogrficas anlogas a las expuestas en la Figura 23.
3.3.2 Caracterizacin de los aceites secantes
Los cocientes entre las reas de los picos cromatogrficos
correspondientes a los cidos grasos y el cido palmtico se determinan para
cada aceite secante patrn (linaza, nuez y adormidera), teniendo en cuenta si
el aceite es fresco o sometido a tratamiento de envejecimiento (natural o
acelerado trmicamente o por irradiacin UV). Los resultados obtenidos
empleando la tcnica de cromatografa lquida con deteccin por absorcin
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. ACEITES SECANTES
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162
UV-Visible y Fluorescencia se muestran en la Tabla 16 y 17,
respectivamente.
Tabla 16. Valores de los cocientes (C14)/(C16), (C18:1/C16) y (C18/C16), obtenidos
aplicando la metodologa propuesta empleando HPLV-UV-Visible, para cada aglutinante
lipdico estudiado y clase de envejecimiento aplicado.
aceite
secante
envejecimiento C14/C16 C18:1/C16 C18/C16
linaza fresco 0,030,02 2,60,3 0,540,01
natural 5 aos 0,0350,005 0,160,03 0,550,05
trmico 0,0290,008 0,190,03 0,610,03
irradiacin UV 0,030,02 0,020,03 0,540,02
nuez fresco 0,0300,003 2,030,01 0,300,01
natural 5 aos 0,0190,003 0,180,04 0,320,01
trmico 0,0300,012 0,360,04 0,340,05
irradiacin UV 0,0200,017 0,0100,008 0,310,04
adormidera fresco 0,060,03 1,360,01 0,180,01
natural 5 aos 0,0170,008 0,0350,004 0,210,01
trmico 0,0940,0003 0,140,02 0,210,02
irradiacin UV 0,0090,002 0,0130,006 0,1900,003
Valores de la media y desviacin estndar a partir de 5 medidas independientes.
Tabla 17. Valores de los cocientes entre las reas de los picos correspondientes a los cidos
carboxlicos de inters y el cido palmtico, obtenidos aplicando la metodologa propuesta
para el anlisis por HPLV-UV-Fluorescencia a cada aglutinante lipdico estudiado y clase de
envejecimiento aplicado.
aceite
secante
envejecimiento C14/C16 C18:3/C16 C18:2/C16 C18:1/C16 C18/C16
linaza fresco 0,030,01 71 31 3,50,5 0,480,05
natural 5 aos 0,040,01 - - 0,200,01 0,490,01
trmico 0,0140,004 - - 0,210,05 0,590,03
irradiacin UV 0,050,01 - - 0,070,01 0,490,03
nuez fresco 0,030,02 21 81 2,00,3 0,280,03
natural 5 aos 0,060,03 - - 0,180,04 0,310,03
trmico 0,0150,005 - - 0,260,07 0,310,06
irradiacin UV 0,020,01 - - 0,030,01 0,290,05
adormidera fresco 0,040,03 0,040,04 31 1,70,2 0,160,03
natural 5 aos 0,0210,009 - - 0,040,02 0,210,04
trmico 0,040,01 - - 0,0880,007 0,240,03
irradiacin UV 0,0110,003 - - 0,0290,002 0,190,01
Valores de la media y desviacin estndar a partir de 5 medidas independientes.
Ambas metodologas analticas propuestas aplicadas al estudio de
aceites secantes frescos y envejecidos arrojan resultados semejantes.
Los cidos poliinsaturados se encuentran en grandes proporciones en
las muestras frescas, y su cantidad disminuye drsticamente durante el
proceso de deterioro. Los cidos linoleico (triinsaturado) y linoleico
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. ACEITES SECANTES
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163
(diinsaturado) llegan a desaparecer completamente durante el proceso de
secado, por lo que no se encontrarn en muestras reales. Este resultado
coincide con la descripcin del proceso de deterioro expuesto en el apartado
1.4.4 del captulo III).
En todos los casos el cido oleico se encuentra en proporciones
elevadas en las muestras de aceite fresco, y su concentracin se reduce
drsticamente al envejecer, debido al doble enlace presente en su estructura.
Esto resulta an ms acusado en el envejecimiento por irradiacin UV, por
lo que se considera que este tratamiento resulta ms agresivo para el aceite
secante. Por otra parte, no se establece relacin entre el cociente
(C18:1)/(C16) y el origen de la muestra, por lo que este parmetro se
considera nicamente orientativo acerca del proceso de deterioro de la
muestra.
Figura 26. Obra pictrica La Virgen de
los Desamparados, annimo y perte-
neciente al Museo Mariano de la Baslica
de los Desamparados, Valencia)
El aceite de linaza es el aglutinante lipdico ms rico en cidos grasos
con dobles enlaces, especialmente linolnico, coincidiendo con sus
superiores propiedades secantes. Por su parte, el aceite de nuez contiene
principalmente cido linoleico, y en menor medida linolnico y oleico, por lo
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
164
que su proceso de deterioro es algo ms lento. El aceite de adormidera
contiene mucha menor proporcin de cidos carboxlicos con dobles enlaces,
por lo que experimenta los mecanismos de degradacin mucho ms
lentamente y se considera como semisecante.
El cido mirstico se encuentra en todos los casos en una cantidad muy
reducida, y adems no se deduce relacin clara entre el cociente C14/C16 y
el origen del aceite o el tipo de envejecimiento, por lo que se considera que
no aporta informacin significativa.
El cociente esterico/palmtico vara claramente en funcin del origen
de la muestra, y resulta prcticamente independiente del tratamiento de
envejecimiento. Esto se debe a la falta de dobles enlaces en su estructura, lo
que aumenta su resistencia frente a los procesos de degradacin del aceite
secante. Por lo tanto, se considera que el cociente (C18)/(C16) es el
parmetro discriminante adecuado para la caracterizacin de los diferentes
aglutinantes oleosos.
3.4 Estudio analtico de muestras procedentes de obras de arte
Con el propsito de establecer la capacidad de caracterizacin de las
metodologas sugeridas, se analizaron muestras procedentes de pinturas al
leo.
La Figura 26 muestra una de las obra pictrica seleccionadas para el
estudio analtico, titulada La Virgen de los Desamparados, annimo y
perteneciente al Museo Mariano de la Baslica de los Desamparados,
Valencia (Muestra 14).
Las muestras procedentes de obras de arte presentan mayor dificultad
en su estudio que los patrones, debido a la presencia en la matriz de otras
sustancias como pigmentos, barnices y aditivos, que pueden interferir en la
identificacin del aglutinante lipdico aplicado por el artista. Otro
impedimento aadido consiste en la baja proporcin relativa de aceite
secante y la reducida cantidad de muestra disponible (<1 mg), por lo que se
exige una sensibilidad elevada.
. 3.4.1 Aplicacin de los mtodos propuestos a una muestra de
pintura al leo
Las muestras procedentes de las obras pictricas fueron sometidas a
los procedimientos experimentales propuestos con el fin de caracterizar los
aceites secantes que contienen. En la Figura 27 se muestran los
cromatogramas correspondientes al estudio analtico de la muestra
procedente de la obra pictrica Crucifixin, annima, pero asignada a
Tintoretto.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. ACEITES SECANTES
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165
Figura 27. Cromatograma obtenido a partir de una muestra procedente de la pintura al leo
Crucifixin, del siglo XVII, annima aunque asignada a Tintoretto, mediante las
metodologas propuestas por a) HPLC-UV-Visible y b) HPLC-Fluorescencia.
Ambas metodologas propuestas son lo suficientemente sensibles y
selectivas para el estudio analtico de muestras procedentes de obras
pictricas, ya que los picos obtenidos son cuantificables y no interfieren con
otras sustancias de la matriz.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
166
3.4.2 Identificacin del Caracterizacin de aglutinantes lipdicos en
muestras procedentes de obras pictricas al leo
La caracterizacin de los aceites secantes en muestras procedentes de
obras pictricas al leo, descritas en el apartado 3.3 del captulo IV
(Muestras de 6 a 10), se llev a cabo a partir de la proporcin relativa de
cidos grasos. As pues, los valores de los cocientes mirstico/palmtico,
oleico/palmtico y esterico/palmtico, obtenidos al aplicar las metodologas
analticas propuestas por HPLC-UV-Visible y HPLC-Fluorescencia se
muestran en la Tabla 18 y 19, respectivamente.
Tabla 18. Valores para los cocientes de las reas de los picos cromatogrficos respecto al del
cido palmtico, obtenidos mediante estudio analtico por HPLC-UV-Visible.
muestra C14/C16 C18:1/C16 C18/C16 aceite secante sugerido
6 0,100,01 0,100,06 0,70,2 linaza
7 0,080,04 0,080,07 0,330,02 nuez
8 0,210,07 0,260,10 0,530,07 linaza
9 0,080,02 1,10,2 0,550,10 linaza
10 0,070,03 0,080,02 0,660,16 linaza
Valores de la media y desviacin estndar obtenidos a partir de tres medidas independientes
de tres muestras diferentes tomadas de la obra de arte.
Tabla 19. Valores calculados para los cocientes mirstico/palmtico, oleico/palmtico y
esterico/palmtico a partir de la metodologa analtica propuesta empleando HPLC-
Fluorescencia.
muestra C14/C16 C18:1/C16 C18/C16 aceite secante sugerido
6 0,110,01 0,50,1 0,430,06 linaza
7 0,220,03 0,50,2 0,350,05 nuez
8 0,180,04 0,60,3 0,450,05 linaza
9 0,200,08 0,280,07 0,70,1 linaza
10 0,280,05 0,350,09 0,430,08 linaza
11 0,330,09 0,380,09 0,70,2 linaza
12 0,60,1 0,60,1 0,510,09 linaza
13 0,40,1 0,50,2 0,550,06 linaza
14 0,180,7 0,20,1 0,60,2 linaza
Valores de la media y desviacin estndar obtenidos a partir de tres medidas independientes
de tres muestras diferentes tomadas de la obra de arte.
Los resultados obtenidos muestran que las desviaciones estndar
encontradas en las muestras reales son ms elevadas que en el caso de los
aceites secantes patrn, debido a la considerable complejidad y
heterogeneidad de las obras de arte pictricas [7]. Asimismo, la discrepancia
entre los resultados proporcionados por las dos metodologas puede ser
debida a la misma falta de homogeneidad de las muestras.
Los cocientes calculados para las muestras procedentes de obras
pictricas no coinciden con los obtenidos con los obtenidos a partir de los
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
167
aceites secantes patrn envejecidos. En efecto, los procesos de deterioro que
experimentan las muestras reales difieren de los tratamientos aplicados. En
general, una obra de arte no se expone a elevadas temperaturas, excepto en
incendios ocasionales, ni tampoco recibe grandes dosis de radiacin UV, al
exhibirse habitualmente dentro de edificios (museos, castillos, iglesias,
monasterios, etc) donde se encuentran resguardadas de la luz solar directa.
Por otra parte, las muestras de aceites secantes degradadas sin tratamiento
tampoco se pueden considerar representativo, ya que las muestras de
aglutinantes oleosos se dejaron degradar naturalmente durante cinco aos,
mientras que las pinturas de al leo estudiadas tienen como mnimo tres
siglos. Los procesos de envejecimiento que experimenta una muestra real
est determinada por las agresiones medioambientales (humedad, oxgeno,
microorganismos, agentes qumicos, temperatura, luz solar, etc), que
dependen de las historia de la obra de arte y son habitualmente desconocidas
y difcilmente modelizables [7,12]. Adems, los pigmentos inorgnicos
presentes en la obra pictrica pueden acelerar o retardar la degradacin de
algunos cidos grasos [18].
Los cocientes oleico/palmtico y mirstico/palmtico, obtenidos son en
todos los casos ms elevados que los obtenidos en los aceites secantes
envejecidos, probablemente debido a la proteccin de los cationes metlicos
de los pigmentos, o a las diferencias entre los mecanismos naturales y
artificiales de envejecimiento.
Los valores de C18/C16 para todas las muestras se mantienen entre
0,43 y 0,7, excepto en el caso de las muestras 2 y 4. Esto indica que la
mayora de obras de arte decoradas al leo se emple aceite de linaza,
debido principalmente a sus superiores propiedades secantes. En la Muestra
7 se caracteriz aceite de nuez, probablemente aplicado por el artista para
obtener un secado ms lento. Por otro lado, el aceite de adormidera no se
detect en ninguna muestra real.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
168
4. Caracterizacin de aglutinantes proteicos y oleosos mediante
espectrometra de masas por infusin directa
Los aglutinantes proteicos y oleosos cumplen importantes funciones
en la obra artstica, y son materiales apreciados en el campo de la
conservacin y restauracin, debido principalmente a sus capacidades
filmgenas. Estas sustancias han sido ampliamente estudiadas y se dispone
de diversas metodologas dirigidas a la identificacin de protenas y aceites
secantes en muestras procedentes de obras pictricas, principalmente
mediante GC [160,162,163,165] y HPLC [212], tal y como se detalla en los
apartados 2.2 y 2.4 del Captulo III. No obstante, los procedimientos
experimentales incorporan etapas intermedias de derivatizacin y de
separacin previas a la deteccin, que pueden afectar a principalmente a la
exactitud, precisin y linealidad del mtodo, y por tanto a la fiabilidad de la
caracterizacin.
Los parmetros analticos de una metodologa dependen de la
exactitud y precisin de cada una de las etapas involucradas. Por lo tanto, la
simplificacin del procedimiento experimental mediante la eliminacin de
etapas intermedias, permitir minimizar la introduccin de fuentes de
varianza y aumentar la sencillez, rapidez, robustez, reproducibilidad,
precisin y exactitud del mtodo analtico.
Las etapas intermedias que se introdujeron en el estudio analtico de
protenas y aceites secantes son la extraccin, derivatizacin y separacin
cromatogrfica. La etapa de derivatizacin es habitualmente imprescindible
para la deteccin en HPLC [212,220,240] y para aumentar la volatididad de
los analitos en GC [160,162,163,165]. La aportacin de incertidumbre se
debe a los parmetros de la reaccin, como cuantitatividad, variabilidad del
rendimiento e inestabilidad de los derivados. Por su parte, la etapa de
resolucin cromatogrfica puede introducir fuentes de varianza, debido a la
manipulacin de disolventes y sales que pueden afectar a los derivados
analizados, as como interferencias por parte de otras sustancias de la matriz
o de productos secundarios de la reaccin. En general, la introduccin de
etapas cuyos procedimientos sean largos y complejos, pueden causar prdida
de precisin debido a errores experimentales. Asimismo, estas etapas
consumen generalmente reactivos y disolventes txicos, por lo que su
exclusin proporciona una metodologa ms sostenible y respetuosa con el
medio ambiente.
El mtodo de anlisis de aglutinantes que se propone est basado en la
hidrlisis de las protenas o aceites secantes, la extraccin de los
aminocidos o cidos grasos, respectivamente, y su deteccin mediante la
espectrometra de masas. La nebulizacin e ionizacin de la disolucin de la
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
169
muestra se realizan mediante una fuente de electronebulizacin (ESI),
evitando la fragmentacin de las sustancias introducidas, las cuales se
identifican a partir del ion con m/z equivalente a su masa molecular y se
cuantifican a partir de la abundancia relativa del correspondiente ion. El
mtodo propuesto tiene la ventaja de permitir la identificacin de todos los
aminocidos, incluyendo la arguinina, que no se identifica en GC [160,162]
as como la prolina, 4-hidroxiprolina y cistena, que no se detectan en HPLC
(apartado 1 del presente Captulo). El anlisis por espectrometra de masas
directa permite la identificacin de todos los cidos grasos, incluso de
cadena corta o insaturados. El principal inconveniente radica en que no se
pueden caracterizar simultneamente otros materiales que pueden estar
presentes en las muestras procedentes de obras pictricas, como barnices o
ceras.
El trabajo realizado se centr en el estudio de la etapa de tratamiento
de la muestra (hidrlisis, extraccin y empleo del disolvente adecuado) as
como en la optimizacin de las condiciones instrumentales del espectrmetro
de masas, como presin y temperatura del nebulizador, caudal de la corriente
del gas secante, anchura del barrido, masa enfocada y polaridad del detector.
Por ltimo, la cantidad relativa de aminocidos o cidos grasos se
considera como parmetro caracterstico de cada clase de aglutinante. Los
datos obtenidos para cada patrn se utilizan para la construccin de un
modelo estadstico mediante Anlisis Discriminante Lineal (LDA), una
herramienta quimiomtrica que permite aumentar la fiabilidad de la
caracterizacin. Finalmente, la metodologa propuesta se aplicar sobre
muestras reales pertenecientes al Patrimonio Cultural Valenciano.
4.1 Optimizacin del tratamiento de muestra
4.1.1 Aglutinantes proteicos
La optimizacin de las condiciones de hidrlisis para muestras que
contienen protenas se detallan en el apartado 1.1.1 del presente Captulo.
La deteccin se realiza bajo polaridad positiva, por lo que los analitos
deben de estar totalmente protonados para obtener una sensibilidad ptima.
El HCl 0,1 mol.L
-1
en agua es un excelente disolvente para los aminocidos
(apartado 1.1.1 del presente Captulo), y mantiene una cantidad suficiente de
protones en el medio. Sin embargo, la entrada de agua en el nebulizador del
espectrmetro de masas no resulta adecuada, debido a su elevada tensin
superficial y la baja volatilidad. As pues, la mezcla de aminocidos se
disuelve en 2 mL de una mezcla HCl 0,1 mol.L
-1
en agua/etanol 1:1.
La posible influencia de la hidrlisis sobre los analitos se estudio
mediante el anlisis cuantitativo de cada uno de los aminocidos
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
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170
(1 mmol.L
-1
) por separado, antes y despus de ser sometidos al proceso de
hidrlisis (detallado en el apartado 1.5.1 del Captulo IV), sin que se
observaran modificaciones significativas de la sensibilidad.
4.1.2 Aglutinantes oleosos
La descomposicin de los triglicridos se realiza mediante una
saponificacin [18]. Las condiciones experimentales fueron optimizadas
para el anlisis de aceites, completando la reaccin en un tiempo en
alrededor de 2 minutos, contrariamente a las 16 horas para la hidrlisis cida
(expuesta en el apartado 3.1.1 del presente Captulo).
Las sales carboxlicas obtenidas son insolubles en disolventes
apolares, por lo que se acidifica el residuo slido para producir los
correspondientes cidos grasos. Estos ltimos se extraen con n-hexano
(apartado 3.1.1 de este captulo), que permite dejar atrs las interferencias
polares, as como el cloruro de potasio formado.
La deteccin se realiz bajo polaridad negativa, por lo que los analitos
se introdujeron desprotonados en un medio fuertemente bsico. Por otra
parte, la inyeccin de disoluciones salinas concentradas en el espectrmetro
de masas es desaconsejable, por lo que los cidos grasos se disuelve en KOH
40 mmol.L
-1
en n-propanol/metanol 85/15. Este medio proporciona una
adecuada desprotonacin y disolucin de los cidos grasos, sin resultar
daino para la instrumentacin.
La mezcla de analitos se introdujo en el nebulizador a travs de un
capilar de slice fundida, impulsada por la aplicacin de presin externa. La
automatizacin del impulso de la disolucin de la muestras hacia el
nebulizador proporciona una elevada estabilidad en el caudal de entrada, y
por tanto aumenta la reproducibilidad del mtodo analtico. Por otra parte, el
volumen de muestra introducido se reduce hasta 0,1 mL, por lo que los
analitos se diluyen en una menor cantidad de lquido, aumentando la
sensibilidad.
4.2 Identificacin de los analitos
4.2.1 Aminocidos
La identificacin de los analitos se realiz bajo ambas polaridades
(positiva y negativa), ya que los aminocidos tienen la capacidad tanto de
captar como liberar protones. La deteccin en forma de cationes proporcion
una mayor sensibilidad en las medidas, en este caso la identificacin de los
aminocidos se realizar partir de los correspondientes aductos [AA+H]
+
con
[M+H]
+
m/z. Tal y como se detalla en la seccin 1 de este Captulo,
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
171
glutamina, asparaguina y triptfano desaparecen durante la hidrlisis, por lo
que no se consideran en el estudio analtico. Leucina, isoleucina y 4-
hidroxiprolina tienen la misma masa molecular, por lo que sus iones se
solapan en el espectro de masas. La diferenciacin de dichos analitos que se
propone est basada en la comparacin de los espectros de masas de segundo
grado (MS
2
), obtenidos a partir de la fragmentacin de los iones
moleculares. As pues, la isoleucina y la leucina siguen siendo
indistinguibles, mientras que la 4-hidroxiprolina proporciona un MS
2
claramente diferenciado. No obstante, en las muestras de protenas patrn no
se encontr 4-hidroxiprolina, por lo que este aminocido no se incluye en el
estudio analtico. Asimismo, leucina e isoleucina se consideraron de forma
conjunta.
Los aminocidos seleccionados para el estudio analtico, el etiquetado
de sus correspondientes iones y sus masas moleculares se exponen en la
Tabla 20.
Tabla 20. Parmetros analticos de los aminocidos estudiados.
amino cido masa molecular (g.mol
-1
)
glicina 75,07
alanina 89,09
serina 105,09
prolina 115,13
valina 117,15
treonina 119,12
cistena 121,15
leucina+isoleucina 131,17
cido asprtico 133,10
lisina 146,16
cido glutmico 147,13
metionina 149,21
histidina 155,16
fenilalanina 165,19
arguinina 174,20
tirosina 181,19
La equivalencia entre los iones y los aminocidos se comprob mediante anlisis
independientes de cada uno de ellos.
4.2.2 cidos grasos
Los cidos grasos se detectan en el espectrmetro de masas
aprovechando sus propiedades cidas bajo polaridad negativa, por lo que se
introducen en el nebulizador en forma de carboxilato. Cada analito se detecta
como ion R-COO
-
, del valor m/z equivalente a [M-H]
-
.
La espectrometra de masas permite la identificacin de numerosos
cidos grasos, incluyendo los cidos grasos poliinsaturados inestables
causantes de las propiedades secantes, as como los productos de
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
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172
descomposicin como los cidos de cadena corta y los cidos dicarboxlicos.
Estos ltimos, son doblemente cidos y en este caso se detectan a partir del
ion monodesprotonado de masa molecular [M-H]
-
. Los cidos grasos
seleccionados para el estudio analtico, sus correspondientes iones y masas
moleculares se detallan en la Tabla 21.
Tabla 21. Parmetros analticos de los cidos grasos estudiados.
cido graso Ion [M-H] (m/z)
caprlico (C8) 143*
pelargnico (C9) 157
cprico (C10) 171
subrico (diC8) 173
eicosanoico (C11) 185
azelaico (diC9) 187
lurico (C12) 199*
sebcico (diC10) 201
mirstico (C14) 227*
palmitoleico (C16:1) 253
palmtico (C16) 255*
linolnico (C18:3) 277
linoleico (C18:2) 279
oleico (C18:1) 281*
esterico (C18) 283*
* La equivalencia entre los iones y los cidos grasos indicados se comprob mediante anlisis
independientes de cada uno de ellos.
4.3 Optimizacin de los parmetros instrumentales
4.3.1 Deteccin de los aminocidos
Las condiciones instrumentales se optimizaron empleando como
muestra la mezcla de aminocidos procedente de la hidrlisis de gelatina
bovina. El barrido del detector (50-300 m/z) cumple ampliamente el
intervalo de masas de los analitos, y se deja un margen superior para detectar
posibles productos secundarios o pptidos.
La precisin y la sensibilidad de las medidas disminuyen para iones de
masas moleculares alejados de la masa molecular (m/z) a la que se focalizan
las medidas. Un estudio realizado a varios valores mostr que este efecto era
mucho ms acusado para los iones ligeros, por lo que para el presente
estudio se comprob que los mejores resultados se obtuvieron empleando
como masa molecular enfocada un valor de 90 m/z.
La optimizacin de la temperatura se realiz entre 80C y 350C. Las
representaciones grficas de los valores del logaritmo de abundancia relativa
frente a la temperatura de secado se pueden observar en la Figura 28.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
173
Figura 28. Logaritmo decimal de las abundancias relativas de los iones correspondientes a los
aminocidos a partir de la hidrlisis de una gelatina bovina, detectados mediante
espectrometra de masas directa en funcin de la temperatura. Condiciones instrumentales
optimizadas, presin del nebulizador 25 psi y caudal del gas secante 8 L.min
-1
. Aminocidos
(numerados en orden de masa molecular): A): (7) cistena, (13) histidina, (15) arguinina, (16)
tirosina, B) (1) glicina, (2) alanina, (3) serina, (5) valina, (6) treonina, (9) cido asprtico, (12)
metionina, C) (4) prolina, (8) isoleucina y leucina, (11) cido glutmico, (10) lisina y (14)
fenilanalina.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
174
Los resultados muestran tres grupos de aminocidos con diferente
comportamiento frente a la temperatura. Para la cistena, histidina, arguinina
y tirosina, altas temperaturas de secado proporcionan elevadas
sensibilidades, probablemente debido a que se produce una volatilizacin y
nebulizacin de los analitos ms completa. En el caso de glicina, alanina,
valina, treonina, cido asprtico y metionina, el incremento de temperatura
provoca una disminucin de la seal analtica, debido posiblemente a una
aceleracin de procesos de descomposicin. Los aminocidos prolina,
isoleucina y leucina, cido glutmico, lisina y fenilalanina no resultan
excesivamente influenciados por la temperatura, ya que los dos efectos
detallados ms arriba se compensan. Finalmente, el valor intermedio de
250C se tom como temperatura de nebulizacin ptima.
Se optimiz la presin de nebulizacin entre 10 y 50 psi (Figura 29).
Figura 29. Logaritmo decimal de las abundancias relativas de los iones correspondientes a los
aminocidos obtenidos a partir de la hidrlisis de una gelatina bovina, detectados mediante
espectrometra de masas directa, en funcin de la presin del nebulizador. Condiciones
instrumentales, temperatura de 250C y caudal del gas secante 8 L.min
-1
. Aminocidos (en
orden de masa molecular): (1) glicina, (2) alanina, (3) serina, (4) prolina, (5) valina, (6)
treonina, (7) cistena, (8) isoleucina y leucina, (9) cido asprtico, (10) lisina, (11) cido
glutmico, (12) metionina, (13) histidina, (14) fenilalanina, (15) arguinina y (16) tirosina.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
175
Los resultados obtenidos muestran que la presin del nebulizador no
presenta una influencia significativa sobre la sensibilidad. No obstante, para
la instrumentacin no resulta aconsejable el empleo de elevadas presiones,
por lo que se seleccion un valor intermedio (25 psi).
Finalmente, se estudi la influencia del caudal del gas de secado en la
seal en el intervalo comprendido entre 3 y 10 L.min
-1
(Figura 30).
Figura 30. Logaritmo decimal de las abundancias relativas de los iones correspondientes a los
aminocidos obtenidos aplicando la metodologa propuesta a una muestra de gelatina bovina,
detectados mediante espectrometra de masas directa en funcin del caudal del gas secante.
Condiciones instrumentales optimizadas, temperatura de 250C y presin del nebulizador 25
psi. Aminocidos indicados como en la Figura 29.
Los datos obtenidos muestran que el caudal del gas secante no es
significativo a partir de 5 L.min
-1
, por lo que para asegurar una sensibilidad
adecuada, se escogi un caudal de 8 L.min
-1
.
4.3.2 Deteccin de los cidos grasos
Los parmetros instrumentales se fijaron tras su optimizacin a partir
del anlisis de muestras de aceites mediante espectrometra de masas directa
a una temperatura de trabajo de 200C, presin del nebulizador a 25 psi, y el
caudal de la corriente de gas portador a 5 L.min
-1
[290]. La optimizacin de
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
176
los potenciales del capilar y de las mscaras fue realizada de forma
automtica por el instrumento a partir del anlisis de la mezcla de cidos
grasos obtenidos por hidrlisis de una muestra procedente de aceite de
adormidera patrn envejecido trmicamente (expuesto en el apartado 3.2 del
Captulo IV).
El barrido del detector seleccionado fue de 100 a 400 m/z, el cual
cubre ampliamente el intervalo de masas moleculares de cidos grasos, y se
deja un margen superior para detectar posibles productos secundarios. El
detector se enfoca a 255 m/z, correspondiente a ion palmitato, debido a que
se suele tomar como referencia en la caracterizacin de aceites secantes
[163,165].
4.4 Estudio analtico de las muestras patrn
4.4.1 Anlisis de protenas
La metodologa analtica se aplic al estudio de una muestra
procedente de patrones de los aglutinantes proteicos ms extendidos en
decoracin de tmperas y temples: gelatina porcina y bovina, casena,
protena de huevo y albmina (descritas en el apartado 1.2 del Captulo IV).
La seal obtenida se promedia durante un minuto, para reducir la influencia
de las posibles oscilaciones de caudal durante la deteccin. El espectro de
masas resultante del anlisis de albmina se representa en la Figura 31.
Figura 31. Espectro de masas obtenido a partir del anlisis de la mezcla de aminocidos
extrados por hidrlisis de una muestra patrn de albmina. Condiciones instrumentales:
temperatura de trabajo 200C, presin del nebulizador 25 psi y caudal del gas 5 L.min
-1
,
ionizacin por ESI. Aminocidos indicados como en la Tabla 20.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
177
Los resultados muestran que cada aminocido se detecta sin
solapamiento con el resto (excepto para el caso de leucina e isoleucina), ni
hay interferencias con otras sustancias de la matriz, pese a no haber etapa
previa de separacin. Tampoco se encontraron restos de pptidos u
oligmeros no hidrolizados de protenas. La sensibilidad proporcionada
tambin se consider adecuada para esta clase de muestras.
4.4.2 Anlisis de aceites secantes
El mtodo analtico sugerido se aplic a muestras procedentes de
muestras de patrones de los aglutinantes ms habituales en pinturas al leo:
aceites de linaza, nuez y adormidera, envejecidas naturalmente durante 5
aos, as como por tratamiento acelerado trmicamente y por radiacin UV
(descritas en el apartado 3.2 del Captulo IV). El espectro de masas
resultante del anlisis de aceite de adormidera envejecido trmicamente se
muestra en la Figura 32.
Debido a la elevada resolucin del espectrmetro de masas, los iones
correspondientes a los cidos grasos aparecen sin solapamiento entre ellos,
incluso aquellos que se diferencian tan slo en un doble enlace. Asimismo,
no se observan interferencias con otras sustancias de la matriz, ni la
presencia de iones de masa elevada con una abundancia relativa
significativa, correspondientes a triglicridos parcialmente hidrolizados.
Figura 32. Espectro de masas obtenido a partir del anlisis de aceite de adormidera
envejecida trmicamente. Condiciones instrumentales: temperatura de trabajo 200C, presin
del nebulizador 25 psi, caudal del gas secante 5 L.min
-1
, ionizacin mediante ESI. Los cidos
grasos se indican a travs de sus masas moleculares (Tabla 21).
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
178
4.5 Caracterizacin de patrones de aglutinantes
4.5.1 Diferenciacin entre aglutinantes proteicos
La caracterizacin de las protenas se basa en un tratamiento
estadstico mediante Anlisis Discriminante Lineal, que proporciona una
clasificacin quimiomtrica.
Las categoras definidas para el LDA son las 5 clases de protenas,
(casena, albmina, huevo, gelatina bovina y gelatina porcina). El conjunto
de entrenamiento est constituido por los objetos correspondientes a las
muestras y cada una de sus rplicas. Por lo tanto, se dispone de 83 objetos
estadsticos, repartidos en las 5 categoras siguientes: albmina, casena,
huevo, gelatina bovina y gelatina porcina, tomando 23; 14; 12; 22 y 7
objetos, respectivamente. Por su parte, las variables consideradas son los
iones correspondientes a los 16 aminocidos estudiados (Tabla 20). La
matriz de datos resultante es de 83x16.
Para reducir la influencia de la masa de muestra inicial tomada, se
opt por normalizar las variables mediante dos procedimientos: A) en el
primero los valores de abundancia relativa para cada aminocido (Ab(AA))
se divide por la suma de los valores de abundancia relativa de todos los
aminocidos, y B) en el segundo la abundancia relativa de cada analito se
corrige calculando su cociente con la masa molecular del correspondiente
aminocido MW(AA), y posteriormente cada valor Ab(AA)/MW(AA)
obtenido se divide por la suma de las abundancias relativas corregidas de
cada ion.
=
=
16
1
) (
) (
) ( )
i
i
NA
AA Ab
AA Ab
AA Ab A
=
=
16
1
) (
) (
) (
) (
) ( B)
i i
i
NB
AA MW
AA Ab
AA MW
AA Ab
AA Ab
En primer lugar, se construy un modelo mediante LDA utilizando las
variables normalizadas mediante el primer procedimiento de normalizacin
(A). El grfico de las puntuaciones de las dos primeras funciones
discriminantes muestra una separacin suficiente entre los objetos
correspondientes a cada categora, excepto en el caso de las gelatinas de vaca
y de cerdo que aparecen mezclados. Debido a ello, se reconstruye un nuevo
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
179
modelo, reuniendo los objetos de las gelatinas en una nueva categora
denominada gelatina animal (Modelo I), en este caso los 4 grupos
aparecen correctamente separados. La fase de seleccin excluye las variables
treonina, isoleucina+leucina, cido glutmico, cido glutmico, fenilalanina
y arguinina, por lo que el modelo se construye a partir de las abundancias
relativas normalizadas de los iones correspondientes a los siguientes
aminocidos: glicina, alanina, serina, prolina, valina, cistena, cido
asprtico, lisina, metionina, histidina y tirosina. Los valores de los
coeficientes estandarizados para las tres primeras funciones discriminantes y
las coordenadas del centroide de cada uno de las categoras se expresan en
las Tablas 22 y 23, respectivamente. El grfico de puntuaciones de las dos
primeras funciones discriminantes construidas para este modelo exhibe una
correcta resolucin de la nube de objetos estadsticos en funcin de las
cuatro categoras. (En este caso, no se representa el grfico obtenido, porque
se contina la optimizacin del modelo).
Tabla 22. Coeficientes estandarizados de cada aminocido para cada funcin discriminante
obtenidos en la construccin del Modelo I por LDA, para la caracterizacin de los
aglutinantes proteicos utilizando las variables normalizadas por el procedimiento A.
funcin discriminante
aminocido 1 2 3
gly 0,807 0,315 0,257
ala -0,380 0,16 -1,632
ser 2,07 1,219 -0,100
pro 1,054 -0,418 0,852
val -0,965 -0,150 0,686
thr excluida
cys -0,115 0,578 0,314
ile+leu excluida
asp 0,768 -0,404 -0,173
lys 0,037 -0,123 0,645
glu excluida
met -0,210 -0,745 -0,191
his -0,988 -0,239 0,159
phe excluida
arg excluida
tyr -0,160 0,686 0,965
Tabla 23. Puntuaciones de los centroides de cada categora (protena) para el Modelo I.
funcin discriminante
categora 1 2 3
albmina -7,066 -1,743 -1,797
casena -2,09 -1,315 3,020
gelatina animal 8,417 -0,699 -0,519
huevo -2,174 7,122 -0,083
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
180
En segundo lugar, se construye un nuevo modelo de LDA utilizando
las variables normalizadas por el segundo procedimiento (B), y las cuatro
categoras definidas anteriormente (albmina, casena, protena de huevo y
gelatina animal) (Modelo II). El proceso de seleccin de variables originales
excluye las abundancias relativas correspondientes a los mismos
aminocidos que el Modelo I. El grfico de puntuaciones de las dos primeras
funciones discriminantes se muestra una separacin entre las diversas
categoras que supera la obtenida en el caso del Modelo I, aumentando
ligeramente la distancia entre los centroides. Los valores obtenidos para los
coeficientes estandarizados y de las coordenadas de los centroides se
detallan en la Tabla 24 y 25, respectivamente.
Tabla 24. Coeficientes estandarizados para cada variable original, obtenidos a partir de la
construccin del Modelo II por LDA, para la caracterizacin de protenas utilizando las
variables normalizadas por el procedimiento B.
funcin discriminante
aminocido 1 2 3
gly 0,801 0,355 0,229
ala -0,355 -0,126 -0,512
ser 0,221 1,227 -0,062
pro 0,961 -0,325 0,878
val -0,902 -0,027 0,714
thr excluida
cys -0,073 0,576 0,310
ile+leu excluida
asp 0,812 -0,0384 -0,121
lys 0,000 -0,037 0,675
glu excluida
met -0,212 -0,785 -0,148
his -1,029 -0,246 0,144
phe excluida
arg excluida
tyr 0,002 0,775 0,928
Tabla 25. Puntuaciones de los centroides de cada categora (protena) para el Modelo II.
funcin discriminante
categora 1 2 3
albmina -7,170 -1,848 -1,722
casena 8,391 -0,782 -0,517
gelatina animal -2,851 -1,092 3,305
huevo -2,020 7,160 -0,255
Finalmente, se construye un nuevo modelo matemtico empleando
como variables originales las abundancias relativas de los iones
correspondientes a los aminocidos seleccionados para el Modelo II. Para
minimizar el aporte de informacin errnea, se repite la normalizacin
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
181
llevada a cabo mediante el procedimiento B), pero considerando nicamente
las abundancias relativas corregidas de los siguientes aminocidos: glicina,
alanina, serina, prolina, valina, cistena, cido asprtico, lisina, metionina,
histidina y tirosina, por lo que la matriz de datos tiene como dimensiones
83x11 (Modelo III). El modelo estadstico finalmente obtenido proporciona
una adecuada separacin entre los objetos pertenecientes a diferentes
categoras y centroides, mucho mayor que la obtenida en los dos Modelos
anteriores. Los valores de coeficientes estandarizados de las variables
originales sobre las tres primeras funciones discriminantes y las coordenadas
de los centroides de las cuatro categoras se muestran en las Tablas 26 y 27,
respectivamente. El grfico de puntuaciones de los objetos estadsticos en el
espacio de las dos primeras funciones discriminantes se representa en la
Figura 33.
Tabla 26. Coeficientes estandarizados para cada variable original para las tres primeras
funciones discriminantes, obtenidos a partir de la construccin del Modelo III por LDA, para
la caracterizacin de protenas utilizando las variables normalizadas por el procedimiento B.
funcin discriminante
aminocido 1 2 3
gly 0,984 0,607 0,158
ala 0,184 -0,118 0,834
ser -0,963 1,050 0,063
pro 2,178 -0,096 0,230
val excluida
cys 0,930 0,433 -0,154
asp 1,801 -0,298 0,466
lys 1,469 0,011 0,018
met 0,212 -0,745 0,413
his excluida
tyr 0,576 0,720 -0,638
Tabla 27. Puntuaciones de los centroides de cada categora (protena) para el Modelo II.
funcin discriminante
categora 1 2 3
albmina -8,207 -2,366 1,087
casena 8,852 0,371 0,738
gelatina animal -0,023 -1,508 -2,339
huevo -7,501 8,035 -0,218
La diferenciacin entre las gelatinas de vaca y de cerdo se llev a cabo
mediante la construccin de un modelo quimiomtrico, tomando como
muestras las rplicas de las gelatinas bovina y porcina, considerando
nicamente estas dos categoras, y como variables originales las abundancias
relativas correspondientes a los iones de los 16 aminocidos estudiados
normalizados mediante el procedimiento B (Modelo IV). En este caso el
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
182
proceso de seleccin de variables por pasos incluye para el modelo los
siguientes aminocidos: glicina, alanina, treonina, isoleucina+leucina, cido
glutmico histidina y arguinina. El modelo por LDA proporciona una nica
funcin discriminante, a lo largo de la cual se situan los objetos estadsticos,
claramente separados por categoras (Figura 34). Los valores de los
coeficientes estandarizados de cada variable original para la funcin
discriminante y las coordenadas de los centroides de las categoras
correspondientes a las gelatinas se muestran en la Tabla 28.
Figura 33. Grfico de puntuaciones para los DF1 y DF2 obtenidos aplicando un LDA a los
resultados obtenidos a partir del anlisis por espectrometra de masas directa de albmina,
casena, protena de huevo y gelatina animal.
Figura 34. Grfico de puntuaciones unidimensional para la funcin discriminante
proporcionada por el modelo LDA a partir de los datos de abundancia relativa de los iones
correspondientes a los aminocidos a partir del anlisis por espectrometra de masas directa
de gelatina de cerdo y de vaca.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
183
Tabla 28. Coeficientes estandarizados para cada variable y puntuaciones los centroides de las
dos categoras consideradas.
punt uaciones del centroide
aminocido coeficientes estandarizados categora DF
gly -1,028 gelatina bovina 5,617
ala 3,761 gelatina porcina -1.787
thr 1,754
ile+leu 1,438
glu 1,765
his -4,065
arg 5,072
4.5.2 Diferenciacin entre aglutinantes oleosos
La caracterizacin de los aglutinantes que se propone, consiste en la
construccin de un modelo quimiomtrico mediante LDA a partir del
anlisis de los perfiles de aceites secantes obtenidos mediante espectrometra
de masas.
Los objetos estadsticos considerados para el conjunto de
entrenamiento, con los que se construye el modelo quimiomtrico, son las
rplicas analizadas para cada clase de aceite secante patrn y de
envejecimiento, en total 82, distribuidos tal y como se indica en la Tabla 29.
Tabla 29. Nmero de muestras patrn para cada aglutinante lipdico patrn y clase de
envejecimiento.
envejecimiento
aceite secante natural (5 aos)
acelerado
trmicamente
acelerado por
irradiacin UV
n de objetos
linaza 15 8 9 32
adormidera 4 12 12 28
nuez 7 8 7 22
n de objetos 26 28 28
n total de objetos=82
La clasificacin de las muestras se realiz de acuerdo a su origen
independientemente del envejecimiento experimentado. Las variables
originales a partir de las cuales se clasifican las muestras son las abundancias
relativas de los iones correspondientes a los 15 cidos grasos estudiados,
cuyos valores de m/z ([M-H]
-
) se exponen en la Tabla 21.
Con el objetivo de evitar que la diferencia de cantidad de muestra
tomada en dos rplicas influya en el resultado, se propone la normalizacin
de las variables mediante tres procedimientos: C) las abundancias relativas
para cada carboxilato se dividen por la suma de las abundancias relativas de
todos los cidos grasos, D) los valores de abundancia relativa se dividen los
la suma de las abundancias relativas de los cidos grasos saturados
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
184
(caprlico, cprico, lurico, mirstico, palmtico y esterico), ya que debido a
su estabilidad, se considera que la variabilidad ser menor, y E) los valores
de abundancia relativa de cada cido graso se dividen por las abundancias
relativas de cada uno de los dems cidos grasos y, para cada par de iones, se
toma nicamente un cociente, para eliminar variables correlacionadas. As
pues, a partir de los 15 cidos grasos se obtienen 105 cocientes.
A partir de los datos obtenidos se construyeron tres modelos
quimiomtricos por LDA, tomando como variables los valores normalizadas
por los tres procedimientos anteriormente descritos. La matriz de datos fue
82x15 para las normalizaciones C) y D), mientras que para la E) fue de
82x105. En todos los casos el modelo construido proporcion dos funciones
discriminantes. El ltimo modelo fue el que resolvi ms adecuadamente la
nube de puntos estadsticos, diferenciando correctamente cada objeto
estadstico en funcin de la clase de aceite secante (linaza, nuez y
adormidera), con una
W
=0,201 (Figura 35). Los valores de los coeficientes
estandarizados para las 12 variables originales que influyen ms sobre las
funciones discriminantes se muestran en la Tabla 30.
Figura 35. Grfico de puntuaciones de las dos funciones discriminantes calculadas por el
modelo construido por LDA, a partir de los resultados obtenidos del anlisis de muestras de
(o) linaza, (+) nuez, ( ) adormidera, mediante espectrometra de masas directa.
La funcin discriminante 1 diferencia el aceite de adormidera de los
otros aglutinantes oleosos, y est influenciado principalmente por los
siguientes cocientes de abundancias relativas: palmtico/cprico,
palmitoleico/ subrico, esterico/subrico y oleico/linoleico. Por su parte, la
funcin discriminante 2 discrimina entre el aceite de linaza y de nuez, y
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
185
depende esencialmente de los cocientes palmitoleico/azelaico,
sebcico/azelaico, linolnico/pelargnico y palmtico/cprico.
A) B)
Figura 36.A) Imagen de la Capilla del Ecce Homo (Pego, Comunidad Valenciana), B) Techo
policromado del Saln Dorado de la Lonja de Valencia.
Tabla 30. Coeficientes estandarizados de los cocientes de abundancias relativas ms
importantes para el modelo construido por LDA, para la diferenciacin entre las clases de
aceite secante, considerando lo cidos grasos expuestos en la Tabla 20 y normalizacin de la
abundancia relativa por el procedimiento E).
funcin discriminante
cocientes entre los cidos grasos 1 2
diC8/C9 -0,629 -0,425
C18:3/C9 0,141 0,763
C14/C10 -1,358 -0,002
C16/C10 4,275 0,712
C16:1/diC8 -3,176 -0,593
C16/diC8 1,956 -0,078
C18/diC8 -2,430 -0,588
diC8/diC9 -0,442 -1,473
C18:2/diC9 0,135 1,522
diC10/C12 1,473 0,273
C16/diC10 -1,084 -0,489
C18:1/C18:2 3,05 0,677
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
186
Con el objetivo de estudiar la influencia del deterioro en los aceites
secantes se construy un nuevo modelo de LDA, utilizando las variables
normalizadas por el procedimiento E), y considerando como categoras, el
tratamiento de envejecimiento aplicado (natural, acelerado trmicamente y
degradado por irradiacin UV), sin tener en cuenta el origen vegetal. As
pues, la matriz de datos tendr una dimensin de 82x105.
El modelo estadstico por LDA calcula dos funciones discriminantes,
las cuales permiten la separacin de las tres categoras consideradas. Como
se muestra en la Figura 37, los objetos estadsticos se encuentran
adecuadamente agrupados por la clase de tratamiento de degradacin
experimentado.
Figura 37. Grfico de puntuaciones para las DF1 y DF2, calculadas a partir del estudio
estadstico por LDA, de las muestras procedentes de aceites secantes patrn envejecidas
(naturalmente, y acelerado trmicamente y por irradiacin UV), analizadas por espectrometra
de masas directa.
En el grfico de puntuaciones trazado se aprecia que la funcin
discriminante 1 permite diferenciar el envejecimiento natural de los
tratamientos de deterioro acelerado, mientras que la funcin discriminante 2
distingue entre las muestras de aceites secantes patrn envejecidas mediante
tratamiento por UV y las muestras degradadas mediante los otros dos
procedimientos. Los valores de los coeficientes estandarizados para 14
cocientes seleccionados con ms influencia sobre las funciones
discriminantes se muestran en la Tabla 31.
Los resultados muestran que la funcin discriminante 1 est
constituida principalmente por las proporciones oleico/linolnico,
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
187
oleico/subrico, subrico/caprlico y linolnico/pelargnico. Por otra parte,
las variables originales con ms peso sobre la segunda funcin discriminante
son los cocientes palmitoleico/pelargnico, palmtico/pelargnico,
linoleico/subrico y oleico/subrico.
A) B)
Figura 38. Obras pictricas realizadas en el siglo XVI: A) Trptico de la Magdalena
(Maestro de Alzira) y B) Altar de Cinctorres (Bernat Serra).
Tabla 31. Coeficientes estandarizados de las 14 variables originales ms importantes para el
modelo construidos mediante tratamiento estadstico de los datos por LDA, para la
diferenciacin de los diversos tratamientos de envejecimiento experimentados por los aceites
secantes patrn.
funcin discriminante
cocientes entre los cidos grasos 1 2
C10/C8 -1,590 -0,720
diC8/C8 2,149 0,928
C12/C9 0,774 0,375
C16:1/C9 0,779 -2,732
C16/C9 -0,902 1,803
C18:3/C9 -1,505 0,491
C18:1/C9 1,396 0,588
C11/C10 -0,081 -0,762
diC9/C10 0,235 -0,754
C18:2/diC8 1,576 1,301
C18:1/diC8 -3,046 -1,087
C14/C12 -0,756 1,003
C18:2/C16:1 -0,038 -0,737
C18:1/C18:3 3,179 0,969
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. PROTENAS Y ACEITES SECANTES
_____________________________________________________________
188
4.6 Aplicacin de la metodologa propuesta a muestras procedentes de
obras pictricas
4.6.1 Tmperas y temples
Con el propsito de comprobar la capacidad de la metodologa
sugerida para la caracterizacin de aglutinantes proteicos en muestras reales,
se aplic al estudio de las obras pictricas decoradas en tmpera o temple,
analizadas mediante HPLC-Fluorescencia en el Captulo 1 de la presente
Memoria. La Figura 38 muestra dos de las obras pictricas del siglo XVI a
partir de las cuales se obtuvieron las muestras analizadas: Trptico de la
Magdalena, realizada por el Maestro de Alzira (Muestra 2) y Altar de
Cinctorres, por Bernat Serra (Muestra 3).
Los resultados obtenidos muestran que los aminocidos aparecen en
los espectros de masas con sensibilidad adecuada y sin interferencias con
otras sustancias presentes en la matriz. Al aplicar los modelos constituidos
sobre las muestras de obras pictricas, sus correspondientes aglutinantes
fueron clasificados como protena de huevo, al igual que en los estudios
anteriores expuestos en el apartado 1 del presente Captulo.
4.6.2 Pinturas al leo
El modelo de LDA construido para la identificacin del aglutinante
lipdico, se aplic para la caracterizacin de aceites secantes en obras
pictricas decoradas al leo, las cuales se indican en apartado 4.3 del
Captulo IV. La Figura 36 muestra dos de los elementos del Patrimonio
Cultural a partir de los cuales se obtuvieron dos de las muestras analizadas,
la Capilla del Ecce Homo (siglo XVIII, Pego, Comunidad Valenciana)
(Muestra 18) y el techo policromado del Saln Dorado de la Lonja de
Valencia (siglo XV) (Muestra 19).
En todos los casos se identific el aglutinante oleoso empleado como
aceite de linaza. Estos resultados estn en concordancia con los obtenidos en
el apartado 3.4.2 del presente Captulo, aplicando las tcnicas de HPLC-UV-
Visible y HPLC-Fluorescencia. La espectrometra de masas permiti
aumentar la rapidez de la metodologa y reducir la incertidumbre de los
valores obtenidos debido a la simplificacin del tratamiento de muestra,
principalmente la exclusin de etapas de derivatizacin y de resolucin, sin
que ello conllevara una disminucin de la sensibilidad. Se emple una menor
cantidad de reactivos txicos que en el caso de la HPLC, disminuyendo el
impacto medioambiental.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
189
5. Caracterizacin de los constituyentes de barnices de violines y lades
italianos de la poca renacentista mediante cromatografa gaseosa
acoplada a espectrometra de masas
El barniz en las obras de arte desempea generalmente una funcin de
proteccin de la superficie. En el caso de los instrumentos musicales, la capa
filmgena forma parte del objeto artstico, ya que ejerce una gran influencia
sobre su apariencia y propiedades sonoras. Sin embargo, el barniz
experimenta procesos de degradacin, generalmente asociados a la oxidacin
progresiva de las sustancias que lo componen y que estn causadas,
principalmente, por agentes medioambientales externos, lo que conduce a la
necesidad de su restauracin. En estos casos, resulta esencial modificar lo
menos posible la composicin qumica de la capa filmgena original [5].
El conocimiento acerca de los barnices que recubren la superficie de
los instrumentos musicales de cuerda de la poca renacentista, como los
ingredientes aplicados en su elaboracin, la estructura y la estratigrafa de las
capas, permite alcanzar una mayor informacin acerca de las tcnicas
antiguas de barnizaje, para poder adaptar las condiciones de conservacin,
exposicin y evaluar su eventual fragilidad en el caso de volver a ser
reutilizados por un msico. Asimismo, un conocimiento ms extenso acerca
de la naturaleza del barniz puede resultar til para proponer tratamientos de
restauracin/conservacin adecuados, y que sean lo ms respetuoso posible
con la composicin qumica de la capa filmgena original [5].
El estudio analtico propuesto consiste en la identificacin de las
sustancias presentes en una serie de materiales de referencia (aceites
esenciales y secantes, resinas terpnicas, blsamos, goma laca, y material
resinoso de origen animal), principalmente cidos grasos e
hidroxicarboxlicos y compuestos terpnicos y aromticos, as como
alcoholes, aldehidos y cetonas. Consecuentemente se establece la
identificacin de tales componentes en las muestras procedentes de barnices
de instrumentos de cuerda de la poca renacentista.
El mtodo de anlisis de estas sustancias, que se propone por GC/MS,
est basado en una etapa inicial la transesterificacin y metilacin de los
grupos carboxlicos, mediante la adicin de un reactivo de amonio
cuaternario ((m-trifluorometilfenil) trimetilamonio), seguido de una segunda
etapa de sililacin por adicin de N,O-bis[trimetilsilil]trifluoroacetamida +
trimetilclorosilano (99/1 v/v) (BSTFA+TMCS) para bloquear los grupos
hidroxilo. Despus de cada etapa se introdujo una alcuota en el sistema
cromatogrfico para la separacin e identificacin de sus compuestos a partir
de los tiempos de retencin y los espectros de masas obtenidos, mediante
comparacin con datos bibliogrficos y bibliotecas generales de espectros.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
190
Los espectros de masas de los picos cromatogrficos ms intensos,
obtenidos a partir del anlisis de cada material de referencia se introducen en
una biblioteca de espectros, junto a otras caractersticas como el tiempo de
retencin, el nombre (si ha sido posible la identificacin), el ingrediente del
que proviene y la intensidad relativa en orden decreciente. Los picos
cromatogrficos de las muestras reales se compararon con los almacenados
en la biblioteca de espectros, con el objetivo de identificar el mximo
nmero posible de sustancias en los barnices. Cuando se detectan varias
sustancias de un ingrediente, se sugiere que ste fue utilizado en la
elaboracin de la correspondiente capa filmgena.
Las limitaciones del mtodo radican principalmente en la variabilidad
natural de la composicin qumica de los materiales de referencia y las
posibles diferencias con los ingredientes del barniz, que depende de factores
diversos como la localizacin geogrfica, la poca de la cosecha y de los
tratamientos experimentados durante la elaboracin del propio barniz
(calentamiento, disolucin, purificacin e interaccin con otros
ingredientes). El envejecimiento de las muestras modificar la estructura de
las molculas presentes, aumentando su grado de oxidacin y
polimerizacin.
5.1 Optimizacin del mtodo de anlisis de los materiales de
referencia
Los materiales de referencia estn compuestos por sustancias con
grupos carboxlicos no voltiles y en algunos casos en forma de polmeros,
por lo que no son directamente analizables por GC/MS. As pues, la fase de
transesterificacin introducida produce la ruptura de los enlaces
intermoleculares y la metilacin de los cidos carboxlicos. El uso de un
transesterificante como el m-trifluorometilfenil)trimetilamonio en metanol,
permite obtener los derivados con una nica etapa [77].
La optimizacin de las condiciones de la derivatizacin se llev a cabo
mediante el estudio de la influencia de la temperatura y tiempo de reaccin,
mediante anlisis a varios valores, manteniendo los dems parmetros
inalterados (Tabla 32 y 33, respectivamente). Como referencia se toma el
rea del pico cromatogrfico correspondiente al cido deshidroabitico
(DHA) en la resina de colofonia, en la muestras con mayor grado de
envejecimiento.
Los resultados obtenidos muestran que la temperatura ptima de
trabajo de 80C, mientras que un tiempo de reaccin de 18 h fue considerado
para la reaccin.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
191
Tabla 32. reas del pico cromatogrfico equivalente al derivado metilado del cido
deshidroabitico para la resina de colofonia ms envejecida a varias temperaturas.
T (C) 60 70 80 90 100
rea del pico ME-DHA (unidades
arbitrarias)
808 935 1003 984 956
V= 0,2 ml y tiempo de reaccin 36 h.
Desviacin estndar para tres medidas independiente.
Tabla 33. reas del pico cromatogrfico del derivado metilado del cido DHA para la resina
de colofonia ms envejecida a varios tiempos de reaccin.
Tiempo (h) 6 12 15 18 36
rea de pico ME-DHA
(unidades arbitrarias)
7010 859 974 992 1003
V= 0,2 ml y T=80C
Desviacin estndar para tres medidas independientes.
La segunda derivatizacin propuesta consiste en bloquear los
hidroxilos por sililacin por adicin de un grupo trimetilsilano (TMS,
Si(CH
3
)
3
). Esta modificacin altera la polaridad, la volatilidad y la masa
molecular de la molcula, e incrementa la resolucin en la columna capilar
seleccionada para el estudio analtico. Por otra parte, la modificacin de las
propiedades provoca un cambio en el tiempo de reaccin. As pues, las
molculas con uno o ms grupos alcohol sern fcilmente discernibles
mediante la comparacin de los cromatogramas anterior y posterior a la
sililacin. Por otro lado, los alcoholes proporcionan espectros de masas
complejos, y habitualmente sin el pico molecular, ya que pueden perder
fcilmente agua y forman aductos con otras sustancias polares. La molcula
sililada presenta dos picos caractersticos a M-15 y M-90, cuya deteccin
permiten el clculo de la masa molecular de forma inmediata. Asimismo, el
bloqueo de los grupos hidroxilos evita las reorganizaciones de los iones y
generacin de aductos caractersticas de los alcoholes.
La evaporacin se desarrolla en condiciones suaves, atmsfera de
nitrgeno y a 40C, para evitar que las sustancias se oxiden o se volatilicen y
sean arrastradas por la corriente de gas secante. El disolvente seleccionado
fue el diclorometano, ya que su polaridad intermedia permite solubilizar los
derivados involucrados en el estudio analtico.
La idoneidad del volumen de disolvente utilizado (200 L de
cloroformo), se estudio mediante un anlisis previo de las muestras patrn
por GC/FID. En todos los casos se obtuvieron sensibilidades adecuadas sin
saturar al detector.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
192
5.2 Caracterizacin de los compuestos en esencias y resinas naturales
patrn
El anlisis de las muestras procedentes de los patrones, a travs del
procedimiento mediante GC/MS expuesto anteriormente, poporciona el
cromatograma para cada uno de ellos, junto a los espectros de masas de los
picos cromatogrficos ms importantes. As pues, los resultados obtenidos
para cada uno de los materiales patrn se almacenaron en forma de
biblioteca de espectros.
En primer lugar, los estudios cromatogrficos de cada resina se
realizaron tras el protocolo de metilacin y posteriormente la misma alcuota
metilada se someti al procedimiento de sililacin y se analiz por GC/MS.
Los resultados obtenidos permitieron establecer las caractersticas ms
importantes de los diferentes cromatogramas para cada tipo de resina. Se
tomaron los espectros de masas correspondientes a los picos cromatogrficos
ms intensos de cada resina analizada, los cuales se almacenan en la
biblioteca de datos, incluyendo la totalidad de la informacin disponible
acerca del correspondiente compuesto a travs del siguiente protocolo:
nombre de la molcula (si se ha identificado), tiempo de retencin, orden
decreciente de intensidad y material objeto de anlisis. Estas caractersticas,
que se incluyen en la Tabla 34, facilitan la identificacin de los ingredientes
estudiados, tanto en las muestras reales procedentes de barnices de
instrumentos de cuerda, como para ulteriores anlisis de los mismos
materiales en otras clases de muestra.
Los estudios analticos realizados por GC/MS para cada una de las
resinas patrn proporcin asimismo informacin satisfactoria sobre la
composicin qumica de las mismas. A continuacin se exponen, para cada
material, los compuestos detectados que se han identificado
inequvocamente a partir de su tiempo de retencin y espectro de masas. Las
sustancias obtenidas coinciden con los constituyentes descritos para cada
material estndar, expuestos en el Captulo III, apartados 1.5.4 y 1.5.5. En
principio, los resultados obtenidos proporcionan suficientes datos para la
caracterizacin de resina natural (Tabla 34).
Los aceites esenciales (esencia de trementina y aceite de lavanda),
presentan una gran cantidad de molculas voltiles (monoterpenos, alcoholes
monoterpnicos y sesquiterpenos) y, en menor medida, molculas ms
pesadas, probablemente polmeros formados a partir de los anteriores. Los
compuestos ms ligeros no estarn presentes en las muestras envejecidas,
debido a su evaporacin, por lo que nicamente las sustancias ms pesadas
podrn atestiguar el uso de estos materiales. En la esencia de trementina se
identificaron los siguientes compuestos: -pineno, -pineno, mirceno,
valenceno, cariof ileno, cariofileno oxidado, neocloveno, 3-(6,6-dimetil-2-
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
193
metilenciclohex-3-enilideno)-1-metil butil acetato, mientras que en la
esencia de lavanda se identificaron las siguientes sustancias: -pineno, -
pineno, mirceno, linalol, borneol, acetato de linalilo, valenceno, cariofileno,
cariofileno oxidado, neocloveno, 3-(6,6-dimetil-2-metilenciclohex-3-
enilideno)-1-metil butil acetato y metil sandaracopimarato.
El alcanfor contiene una mezcla de compuestos ligeros con ncleos
aromticos, los cuales se evaporarn durante el envejecimiento.
El blsamo de benju es una mezcla de sustancias ligeras con ncleos
aromticos, las cuales posiblemente se evaporen sin dejar indicios de su
presencia. No obstante se detect un compuesto de mayor masa molecular
(336 g.mol
-1
) el cual es lo suficientemente pesado como para permanecer tras
el envejecimiento.
Los compuestos identificados en la colofonia fueron: los cidos
pimrico, sandaracopimrico, palstrico, isopimrico, DHA, abitico,
neoabitico, y los derivados oxidados 7-oxo-DHA, 15-hidroxi-7-oxo-DHA,
as como otros diterpenoides hidroxilados. La composicin relativa de la
resina depende de la clase de colofonia y de su grado de deterioro. As pues,
en las muestras ms envejecidas abundarn ms los hidroxi- y oxoderivados
del DHA, mientras que la concentracin de abitico disminuye.
La trementina de Venecia est constituida por los siguientes
compuestos: -terpineol, careno, i-elemeno, epimanol, pimaral, cidos
palstrico, isopimrico, 6-deshidrodeshidroabitico, abitico y neoabitico,
as como larixol y acetato de larixilo. Se trata de la nica resina que contiene
estos dos ltimos compuestos, por lo que la deteccin de estos compuestos
en una muestra, indicar directamente la presencia de trementina de Venecia.
Comparte una elevada cantidad de sustancias con la resina de colofonia, por
lo que su distincin puede resultar en ocasiones confusa.
La sandaraca est constituida por diterpenoides labdanos (cidos y
alcoholes). Los compuestos ms caractersticos son los cidos agtico y
comnico, y adems contienen los cidos sandaracopimrico y 7-oxo-DHA.
La composicin qumica relativa vara en funcin del origen de la resina.
El copal de Manila est constituido igualmente por cidos y
alcoholes diterpenoides labdanos, principalmente cido comnico, agtico y
sus anlogos. Asimismo se identificaron los cidos sandaracopimrico,
abitico y 7-oxo-DHA. La cantidad relativa de cada compuestos est muy
influenciada por la clase de copal estudiado.
En las muestras procedentes de goma laca se detect cido
deshidroabitico, abitico cido jalrico y una gran cantidad de otros cidos
grasos y sesquiterpenos hidroxilados de compuestos de estructura semejante,
junto a sus correspondientes ismeros. Casi todas las molculas poseen
grupos hidroxi que dificultan su separacin y la obtencin de los
correspondientes espectros de masas. La composicin qumica de la goma
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
194
laca depende en gran medida de su grado de purificacin.
En la muestras de mastic se identific una fraccin diterpnica
compuesta por cido comnico, cido 6-deshidrodeshidroabitico, cido
deshidroabitico, abitico, 7-oxo-DHA, as como una mezcla de
triterpenoides cidos y neutros como -amirina, cido oleannico, aldehido
oleannico, isomasticadienoico, masticadienoico y mornico. Este ltimo es
especfico del la resina de mastic y se toma como compuesto caracterstico.
La muestra de dammar contiene una mezcla de triterpenoides cidos y
neutros, de los cuales se identificaron los siguientes: dammaradienona,
dammaradienol, cido dammarenlico, hidroxidammarenona, aldehido
oleannico, cido ursnico y aldehido ursnico.
5.3 Caracterizacin de los materiales en barnices de instrumentos
musicales de cuerda de la poca renacentista
El estudio minucioso de los cromatogramas obtenidos a partir de las
muestras procedentes de instrumentos musicales permiti confirmar la
presencia de sustancias correspondientes a los ingredientes analizados, as
como otras procedentes de resinas no consideradas en el presente trabajo,
aditivos y materiales introducidos por contaminaciones modernas.
Los cromatogramas (TIC) resultantes de la muestra procedentes del
lad de Maler y el violn de Stradivarius se muestran en la Figura 39. El
cromatograma resultante del anlisis de la tiorba de Venere presenta gran
semejanza con el obtenido del Stradivarius.
En los tres casos, se encuentran cidos grasos que eluyen entre 23-24
minutos, y diterpenoides entre 24 y 36 minutos. Adems, en el caso del lad
de Maler, aparecen picos cromatogrficos correspondientes a triterpenoides a
partir de 37 minutos. La relacin entre la cantidad de de cidos grasos y la de
terpenoides es inferior en el lad de Maler que en la tiorba de Venere y el
violn de Stradivarius.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
195
Figura 39. Cromatogramas (TIC) obtenidos a partir del anlisis de la fraccin orgnica del
barniz procedente de un lad de Maler (parte superior) y de un violn de Stradivarius (parte
inferior). Los compuestos caractersticos de los aceites secantes se indican en amarillo, los
diterpenoides en verde y los triterpenoides en rojo. Las sustancias sealadas en gris
corresponden a contaminantes modernos.
5.3.1 Aceites secantes
Los cidos grasos y los productos de degradacin (cidos
dicarboxlicos) procedentes de aceites secantes se identificaron en las tres
muestras reales estudiadas. Por otra parte, la presencia de ceras se rechaz,
debido a la ausencia de otros de sus constituyentes como los hidrocarburos.
De ah se establece que el material graso detectado proviene ntegramente
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
196
del aglutinante lipdico sin interferencias. El cociente palmtico/esterico
calculado para las muestras reales fue de 1,40 y 1,57 para el Maler y el
Stradivarius, por lo que se deduce la presencia de aceite de linaza en el
barniz. En la muestra del Venere la proporcin obtenida fue de 1,98, en este
caso se supone que contiene tambin aceite de linaza, aunque con menor
seguridad [7].
Los resultados indican que el disolvente empleado en la elaboracin
del barniz en los tres casos fue aceite de linaza, lo que implica que el
barnizaje de la superficie de los instrumentos de cuerda estudiados incluy
una larga etapa de secado, dando lugar a una capa muy fina.
5.3.2 Resinas terpnicas
Los parmetros analticos de la biblioteca de espectros, tales como el
tiempo de retencin, iones ms importantes del espectro de masas ysu
identificacin se incluyen en la Tabla 34, mientras que su presencia en los
diferentes materiales de referencia y muestra procedente del barniz de los
instrumentos musicales estudiados se discute en la Tabla 35.
Los tres barnices analizados presentan una amplia variedad de
diterpernoides, con tiempos de retencin entre 23 y 35 minutos. Las
muestras reales tienen en comn los picos cromatogrficos ms intensos de
este grupo, correspondientes a los steres metlicos de los cidos 7-oxo-DHA
y 15-OH-7-oxo-DHA, (compuestos n 59 y 60 de la Tabla 34), as como
otros derivados de los anteriores (compuestos n 62; 63; 67 y 68 en la Tabla
34) [77,94]. Los dos primeros son caractersticos de resinas de Pinaceae
muy oxidadas [64,84], categora a la que pertenecen la colofonia y la
trementina de Venecia. Otras sustancias de tipo pimarano y abietano tambin
pudieron ser caracterizadas, a pesar de la baja intensidad de sus
correspondientes picos cromatogrficos, debido a su desaparicin progresiva
causada por el envejecimiento natural.
5.3.2.1 Muestra procedente del barniz de un lad de Maler
El anlisis de la muestra revel la presencia de derivados oxidados de
los compuestos caractersticos de resinas de Pinaceae. Los picos
cromatogrficos correspondientes a los labdanoides, larixol y acetato de
larixilo, especficos de la trementina de Venecia. No obstante, debido al
avanzado grado de envejecimiento, no se puede establecer si estas sustancias
estaban presenten en el barniz original y se oxidaron completamente, o si
nunca formaron parte de la capa filmgena. Por ello, se deduce que para la
elaboracin del barniz se utiliz una resina diterpnica proveniente de
Pinaceae, sin especificar si se trata de colofonia o trementina de Venecia.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
197
El anlisis de la muestra revel la presencia de una abundante fraccin
triterpnica, con once sustancias detectadas que no coinciden con las
identificadas en el dammar y mastic patrn.
El estudio de los espectros de masas de los cuatro compuestos ms
importantes de la fraccin triterpnica (n 74; 75; 83 y 86 de la Tabla 34),
muestra un pico intenso a 218 m/z, seguido de uno menos intenso a 203 m/z.
Estos fragmentos son caractersticos de una ruptura primaria de un
triterpenoide pentacclico, con un doble enlace en la posicin 12 (series 12-
urseno y 12-oleaneno), a travs de un mecanismo retro-Diels-Alder, seguido
de la prdida de un grupo metilo [178,295]. Dos de los compuestos
considerados (n 83 y 86 de la Tabla 34), identificados como - y -
amirenona, respectivamente, se encuentran presentes en el elemi de Manila
(Canarium luzonimicum o C. commune), copal mexicano (Bursera cuneata)
[85] y en franquincienso eritreo (Boswellia sp.) [178], perteneciente a la
familia Burseaceae. Por su parte, los compuestos n 74 y 75 (Tabla 34), se
identificaron como 24-noroleana-3,12-dieno y 24-norursa-3,12-dieno,
respectivamente, a partir de sus espectros de masas y orden de elucin, las
cuales se han detectado en las resinas Boswellia carterii, B. serrata y B.
rivae [295], as como en muestras arqueolgicas resinosas, caracterizadas
como olbano, encontradas en tumbas egipcias fechadas en 1897-1844 A.C.
[178].
Los compuestos n 72 y 73 (Tabla 34) (de masa molecular 392) estn
relacionados con los n 74 y 75 (Tabla 34) (de masa molecular 394). La
comparacin entre los espectros de masas sugiere que sus estructuras se
diferencian en una insaturacin, por lo que se identifican como el 24-
noroleana-3,9(11),12-trieno y 24-norursa-3,9(11),12-trieno, respectivamente
[295], los cuales no han sido anteriormente detectadas en muestras
procedentes de objetos histricos. La aparicin de estas sustancias se debe
probablemente a modificaciones experimentadas por los compuestos
iniciales de la capa filmgena, debido al envejecimiento natural (desde el
suglo XVI), degradacin trmica durante la preparacin del barniz o durante
la misma inyeccin de la muestra en el sistema cromatogrfico.
Los resultados obtenidos permiten sugerir que la fraccin triterpnica
del barniz proviene de una resina o goma resina de la especie Burseaceae, y
posiblemente del gnero Boswellia. No es posible una caracterizacin ms
precisa acerca del origen botnico de esta resina triterpnica, debido a la
ausencia de biomarcadores de la resinas fresca de Burseaceae, y a la falta de
informacin sobre los productos de degradacin de esta clase de material.
La presencia de resinas triterpnicas en el barniz de un lad de Maler
de 1529-1555, puede relacionarse con los ingredientes elemi e incienso,
citados en recetas de barnices de los siglos XIV-XVII. Aunque en la
actualidad, la denominacin elemi se utiliza generalmente para el elemi de
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
198
Manila (C. luzinicum), en textos antiguos la misma palabra se empleaba para
referirse, entre otros, a resinas procedentes de rboles pertenecientes al
gnero Icica, as como al elemi africano (o franquincienso africano),
proveniente del Boswellia frereana [296].
5.3.2.2 Muestra procedente del barniz de un violn de Stradivarius
El anlisis de la fraccin orgnica del barniz del violn de Stradivarius
permiti la identificacin de los labdanoides acetato de larixilo (n35),
larixol (n29) y el sesquiterpenoide epimanool (n18) (en la Tabla 34),
especficos de la trementina de Venecia, adems de otros diterpenoides
caractersticos de la resinas procedentes de Pinaceae. Estos resultados
muestran que la trementina de Venecia es uno de los constituyentes del
barniz. Sin embargo, no se puede establecer si adems est mezclada con
colofonia, u otras resinas de pino [84,297].
Se detectaron asimismo una serie de triterpenoides (n73; 74 y 75 en la
Tabla 34), cuyos correspondientes picos cromatogrficos presentan una
intensidad muy baja, los cuales provienen probablemente de una
contaminacin. Por ello, no es posible asegurar ni tampoco rechazar la
presencia de una fraccin triterpnica.
5.3.2.3 Muestra procedente de la capa filmgena de la tiorba de
Venere
Los resultados obtenidos a partir del anlisis por GC/MS de la muestra
procedente de la tiorba de Venere son semejantes a los del Stradivarius. La
deteccin de acetato de larixilo muestra asimismo que la trementina de
Venecia forma parte del barniz, sin que se pueda excluir la presencia de otras
resinas de tipo Pinaceae. La comparacin de la intensidad de los picos
cromatogrficos de los pimaranos y abietanos correspondientes a los cidos
7-oxo-DHA y 15-OH-7-oxo-DHA, muestra que la resina diterpnica de la
tiorba est en un estado de oxidacin ms avanzado que en el caso del
Stradivarius. Esta observacin es coherente con el hecho que la tiorba de
Venere fue elaborada 120 aos antes que el violn de Stradivarius.
Los triterpenoides detectados cuyos picos cromatogrficos presentan
baja intensidad (n73;74 y 75 en la Tabla 34) provienen probablemente de
una contaminacin, por lo que, al igual que en el caso del barniz del
Stradivarius, no se puede llegar a una conclusin definitiva acerca de la
presencia de una fraccin triterpnica en la capa filmgena.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
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199
Tabla 34. Parmetros analticos almacenados en la biblioteca de espectros acerca de las
sustancias encontradas en los materiales de referencia y en las muestras reales, a partir de su
anlisis por GC/MS a travs de la metodologa propuesta (numeradas en orden creciente de
tiempo de retencin a partir de 7,50 minutos).
n
T.R.
(min)
nombre
(propuesto)
masa
molecular
iones ms abundantes (m/z)
(proporcin relativa (%))
1 7,84 mirceno [67] 136
136(10); 121(20); 107(20)
93(75); 91(90); 67(100)
2 8,76 no identificado 176
176(10); 174 (100);
156(10); 127 (20)
3 8,80 linalool [69] 154
137 (15); 121 (20);
105 (15); 93 (80); 91(100)
4 10,19 -terpentinol 154
136 (55); 121 (55);
107 (10); 93 (100); 91 (80)
5 10,38 careno 136
316 (60); 121 (70);
93 (100); 91 (95); 77 (60)
6 10,89 no identificado 204 203 (80); 184 (10); 174 (100)
7 11,10 acetato de linalilo [69] 196
137 (10); 121 (20);
105 (15); 93 (70); 91(100)
8 12,49 no identificado 264 -------
9 13,44 valenceno o semejante 204
204(40);189(50);161(100);
133(55),119(55);105(70);91(95)
10 13,55 cariofileno o semejante 204
204(10);189(20);161(25);133(45)
119(35);105(60); 91(100)
11 13,63 -elemeno 204
204(10);189(20);161(30);121(60)
105 (65); 91 (100)
12 14,40 no identificado 180 -------
13 15,44 cariofileno oxidado 220 121 (20); 105 (45); 91 (100)
14 15,56 neocloveno o semejante 236
236 (30); 204 (30); 176 (100);
161 (95);105 (60)
15 16,80 no identificado 208 208 (100); 177 (75); 146 (20)
16 17,51 no identificado 250
250 (30), 235 (35), 190 (55)
175 (100); 119 (50)
17 17,56
3-(6,6-dimetil-2-
metilenciclohex-3-
enilideno)-1-metilbutil
acetato
248 248 (10); 188 (50); 173 (100)
18 22,35 epimanool [74] 290
272(20);257(80);244(30);229(20)
202(30);190(30);175(30);161(30)
19 23,65 no identificado 270
270 (100); 242 (20); 227 (55);
199 (95);185 (30)
20 24,86
diterpenoide
no identificado
310
298(80);283(30);241(35);227(40)
216 (100);213 (30)
21 25,02
diterpenoide
no identificado
316
316 (5);300(95);285(100);
203 (40);189 (30)
22 25,20
diterpenoide
no identificado
316
316(10);286(70);271(35);257(60)
253(50);243(30);239(30);201(30);
187 (30)
23 25,25 metil cis-comunato [82] 316
316(70);301(40);241(85);12 (75)
105 (80); 91 (100)
24 25,33
diterpenoide
no identificado, sin -OH
304
304 (5); 289 (100); 257 (30)
230 (30); 215 (25); 207 (20)
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
200
n
R.T.
(min)
nombre
(propuesto)
masa
molecular
iones ms abundantes (m/z)
(proporcin relativa (%))
25 25,38 pimaral o semejante 286 286(90); 291(100); 253(30); 241(90)
26 25,57 metil pimarato [74] 316
316(30);301(30);257(40);241(20)
180 (20); 121 (100)
27 25,77
metil trans-comunato
[84]
316
316(50);301(60);256(50);241(80)
175 (70); 105 (75); 91 (100)
28 25,85
metil sandaracopimarato
[74,82]
316
316(40);301(50);287(25);257(30)
241 (35);121 (100)
29 25,86 larixol [74] 306
301(10);288(20);273(30);275(60)
121 (50); 105(60);91(95);79 (100)
30 26,55
diterpeno
no identificado
316
316(10);301(25);287(30);256(35)
241 (40); 188 (30); 121 (100)
31 26,56 metil palustrato [74] 316
316(30);301(15);287(15);256(70)
241 (100); 227 (10); 187 (10)
32 26,69 metil isopimarato [74] 316
316(45);301(95);257(15);
241(100);185 (25)
33 27,00 metil 6-deshidro-DHA 312
312(50);237(100);197(85);
195(70)
34 27,14 metil DHA [74] 316 314 (10); 299 (20); 239 (100)
35 27,71 acetato de larixilo [74] 348
288(10);270(30);255(100);242(40)
227 (30); 200 (40); 185 (70)
36 27,75 no identificado 316
316(10);274(40);256(25);161 (25)
121 (100)
37 28,10 metil abietato [74,82] 316
316(40);273(10);256(100);241(50)
213 (30); 185 (30)
38 28,31 no identificado, sin OH 336
336(10);289(20);255(25);227(30)
211(30);204(100);189(95);119(60)
39 28,33 no identificado, sin -OH -
305(10);302(15);287(40);255 (80)
227 (90); 211 (100)
40 28,80 no identificado 336 335 (100); 266 (45); 202 (25)
41 28,83 no identificado, sin OH 320 320(5);302(30);287(85); 227 (100)
42 28,84 no identificado, sin-OH 300
300(50);287(15);268(25);240 (20)
225 (100)
43 28,88
diterpenoide
no identificado
312 312 (10); 297 (20); 237 (100)
44 29,02
diterpenoide
no identificado
342 342 (100); 185 (60)
45 29,09 metil neoabietato [74] 316
316(95);30 (10);257(20);241 (20)
187(20);181(40);148(60);135(100)
46 29,19 no identificado, sin OH 362
362(10);247(35);330(10);315 (30)
303(75);288(100);261(90);201(60)
175 (60); 121 (95)
47 29,20 no identificado 336 336 (10); 276 (65); 121 (100)
48 29,36 no identificado 364 364(15);304(95);161(40);121(100)
49 29,69 no identificado, sin OH 362
362(5);347(35);330(25);315 (20)
302 (70); 189 (70); 121 (100)
50 29,71 no identificado 319
319(20);301(20);274(30);256 (40)
241 (70); 189 (40); 121 (100)
51 29,74 no identificado 344
344 (20);299(25);262(30);225 (80)
91 (95); 77 (100)
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
201
n
R.T.
(min)
nombre
(propuesto)
masa
molecular
iones ms abundantes (m/z)
(proporcin relativa (%))
52 29,87 no identificado, con OH 312 312 (25); 237 (100); 195 (25)
53 30,07
diterpenoide
no identificado
314 314(70);299(100);257(35);177(25)
54 30,12
diterpenoide
no identificado
314
314(40);254(100);239(40);197(10),
183 (20)
55 30,20 no identificado, con OH 332
332(5);317(10);303 (55); 289 (70)
258 (90); 201 (75); 91 (100)
56 30,34 metil 15-OH-DHA 330 330(10);315(70);255(100);237 (20)
57 30,46
diterpenoide
no identificado
314 314 (20); 299 (45); 262 (100)
58 30,82 dimetil agatato [82] 362
362(5);347 (35);330(20);315 (30)
302(65);271(45);189(60); 121(100)
59 31,12 metil 7-oxo-DHA [74] 328
328(30);296(15);268(15);
253(100);241(20)
60 31,88 no identificado, sin OH -
319 (20); 303 (95); 289 (60);
271(50);243 (60);107 (65);91(100)
61 32,26 metil 15-metoxi-DHA 344 344 (70), 329 (100), 269 (40)
62 32,41
posible metilacin de n
59 y 65 [94]
326 326(30);215(70);204 (95);109(100)
63 32,65
posible metilacin de n
59 y 65 [94]
326 326(50);294(20);251 (100);185(30)
64 33,07 no identificado -
370(30);340(70);325(50);173(70);
91(100)
65 34,03 metil 15-OH-7-oxo-DHA 344 329 (100); 269 (15); 187 (15)
66 34,13
diterpenoide
no identificado
328 328 (60), 253 (100)
67 35,10
posible metilacin de n
59 y 65 [94]
356 356 (5); 245 (60);205 (100)
68 36,35
posible metilacin de n
59 y 65 [94]
372
372 (80); 165 (40); 152 (100);
112(50)
69 36,42 no identificado - -------
70 37,03 no identificado 362
362 (60);347 (100); 225 (20);
209(40)
71 37,49 no identificado 410
358(90);315(80);205(70);95(95);
79(100)
72 38,01
posiblemente 24-nor
oleana-3,9(11),12-trieno
[295]
392
392 (100); 377 (40); 185 (30);
174(40); 157 (40)
73 38,84
posiblemente 24-norursa-
3,9(11),12-trieno [295]
392 392(100);377(20);255 (20);225(30)
74 39,08
posiblemente 24-
noroleana-3,12-dieno
[178,295]
94
394 (10);379 (5);218 (100);203(60)
189 (30)
75 39,78
posiblemente 24-norursa-
3,12-dieno [178,295]
394
394(10);379 (5); 218 (100);203(20)
189 (20)
76 41,67
triterpenoide no
identificado
454 -------
77 42,10
triterpenoide no
identificado
422 -------
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
202
n
R.T.
(min)
nombre
(propuesto)
masa
molecular
iones ms abundantes (m/z)
(proporcin relativa (%))
78 42,21
triterpenoide no
identificado
424 424(40);409(100);298 (20);257(50)
79 42,61
triterpenoide no
identificado
426 426(30);411(100);393 (70);259(40)
80 43,10 semejante a lupenona 424 424 (100), 313 (60), 205 (90)
81 43,33
triterpenoide no
identificado
426 426(30); 411(100); 393(70); 259(50)
82 43,38
posiblemente 24-norursa-
3,12-dien-11-ona [295]
408 408 (60); 393 (30); 232 (100)
83 43,42 -amirenona [53,85] 424 424 (20); 218 (100)
84 43,49 dammaradienona [53] 424
424(90);409(10);381(15); 313(70)
205 (100); 189 (70)
85 43,89 dammaradienol [53] 426
426 (40); 408 (15); 315 (30)
207(80); 189 (100)
86 44,06 -amirenona [53] 424
424 (20);409 (10); 218 (100)
203(30);189 (25)
87 44,25 -amirina [53] 426
426(10);408(30);393(25);218(100);
203 (70); 189 (40)
88 45,13
metil dammarenolato
[53]
472 454(45); 411(20); 385(100); 343(20)
89 46,38 metil moronato [53] 468
468 (20); 409 (10); 262 (30),
248(50); 203 (30); 189 (100)
90 46,67 metil oleanonato [53] 468 468 (20); 262 (60); 203 (100)
91 46,70
hidroxidammarenona
[53]
442
424 (80);409 (10);355 (85); 311(70);
298 (55); 205 (100)
92 46,92
aldehido olenannico
[53]
438 438(10);409(10);232(25); 203(100)
93 47,46 metil ursonato [53] 468
468 (10); 409 (5); 262 (100);
203(75); 133 (50)
94 47,63 aldehido ursnico [53] 468 438 (10);232(20);203(100);133(70)
95 47,76
metil
isomasticadienonato [53]
468
468 (10);453(100);435 (10);
421(50);393 (10);257 (20)
96 48,24
triterpenoide no
identificado
422 422(5);410(10);391(5);203(100)
97 48,80
metil masticadienonato
[53]
468
468 (10); 453 (100); 435 (10);
421(40); 393 (10); 257 (100)
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
203
Tabla 35. Informacin almacenada en la biblioteca de espectros acerca de la presencia las
sustancias encontradas en cada muestra real y material de referencia* (numerados como en la
Tabla 34).
*materiales de referencia: 1=esencia de trementina, 2=esencia de lavanda, 3=benju,
4=colofonia, 5=trementina de Venecia, 6=sandaraca 7=copal de Manila, 8=mastic,
9=dammar. Para mayor claridad, los resultados obtenidos del anlisis del alcanfor y la goma
laca no se incluyen, ya que no se encontraron en las muestras procedentes de los barnices.
n Maler Strad Venere 1 2 3 4 5 6 7 8 9
1 X X
2 X
3 X
4 X
5 X
6 X
7 X
8 X
9 X X
10 X X
11 X
12 X
13 X X
14 X X X X
15 X
16 X X X
17 X X X
18 X X
19 X
20 X
21 X
22 X
23 X
24 X
25 X
26 X
27 X X X
28 X X X X X X
29 X X
30 X
31 X X X X X
32 X X X X
33 X X X X
34 X X X X X X
35 X X X
36 X
37 X X X X X
38 X
39 X
40 X
41 X
42 X X X
43 X X X X
44 X
45 X X X
46 X
47 X
48 X
49 X
50 X
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. BARNICES DE INSTRUMENTOS DE CUERDA
_____________________________________________________________
204
n Maler Strad Venere 1 2 3 4 5 6 7 8 9
51 X
52 X X
53 X
54 X X
55 X
56 X X X
57 X X
58 X X
59 X X X X X X X
60 X
61 X X X
62 X
63 X X X X X
64 X
65 X X X X
66 X X X
67 X
68 X
69 X
70 X
72 X
73 X X X
74 X X X
75 X X X
76 X
77 X
78 X
79 X
80 X
81 X
82 X
83 X
84 X
85 X
86 X
87 X
88 X
89 X
90 X
91 X
92 X X
93 X
94 X
95 X
96 X
97 X
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
________________________________________________________
205
6. Caracterizacin de resinas sintticas utilizadas en obras de arte
modernas mediante cromatografa gaseosa acoplada a espectrometra
de masas con pirlisis previa
Las resinas sintticas son una amplia categora de materiales modernos
con una extensa gama de propiedades, ampliamente utilizados desde el siglo
XIX en la elaboracin de obras de arte pictricas, as como en tratamientos
de restauracin y conservacin de obras artsticas ms antiguas, por lo que
estn presentes en numerosos objetos de inters artstico/histrico. La
diferenciacin entre los diversos materiales polimricos utilizados por el
artista o el restaurador resulta de gran importancia para la propuesta de
tratamientos de conservacin/restauracin adecuados [6].
La metodologa analtica propuesta para el anlisis de los polmeros
sintticos est basada en la pirlisis directa de la muestra slida sin
tratamiento previo ni adicin de reactivo derivatizante, seguido de la
separacin de los fragmentos por cromatografa gaseosa y su identificacin a
partir de sus correspondiente espectros de masas. En primer lugar se analiza
una amplia coleccin de diversas resinas sintticas utilizadas con propsitos
artsticos (descritas en el apartado 1.6 del Captulo III y expuestas en la
Tabla 5 en el apartado 6.1 del Captulo IV), almacenando la informacin
acerca de los fragmentos caractersticos en cada caso, as como de otras
sustancias minoritarias detectadas.
Las condiciones instrumentales aplicadas fueron previamente
optimizadas en un estudio anterior para la caracterizacin de pigmentos
sintticos en obras pictricas, debido a que en muestras reales ambas clases
de materiales se estudian conjuntamente. No obstante, se estableci la
temperatura ideal para la pirlisis para cada una de las resinas polimricas
consideradas. Finalmente el mtodo analtico sugerido se utiliz para la
caracterizacin de las resinas sintticas en las muestras procedentes de
pinturas artsticas, mediante la comparacin de los fragmentos encontrados
con los caractersticos de los patrones. Asimismo se identificaron otros
materiales orgnicos, como aceites secantes, ceras y plastificantes.
6.1 Estudio de resinas sintticas patrn
El anlisis de las muestras procedentes de los patrones, a travs del
procedimiento mediante Py-GC/MS expuesto con anterioridad, proporciona
el pirograma de cada uno de ellos, junto con los espectros de masas de los
picos cromatogrficos ms importantes.
La influencia de la temperatura sobre la ruptura trmica se estudi
mediante la comparacin, para cada resina sinttica (Tabla 5 del apartado 6.1
del Captulo IV), de los pirogramas obtenidos a tres temperaturas (590; 650
y 794C). Para las resinas de poliestireno (Kraton G), resina de
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
________________________________________________________
206
hidrocarburos saturada (Arkon P90), resina de indeno-benzofurano (resina
de cumarona), acetatos de polivinilo (Mowilith, PVAc, Palmer Cement),
butiral de polivinilo (Mowital B20H), polmero cetnico (AW2, Laropal
A81), resinas fenlicas y poliacrolenas, no se encontraron diferencias
significativas entre los fragmentos proporcionados por la pirlisis a las
temperaturas consideradas. No obstante, para los polmeros de base de
pigmento acrlico, Paraloid y Keton N, se aprecian diferencias en los
compuestos detectados.
Los fragmentos obtenidos permiten obtener informacin til para
evaluar la estructura de cada polmero, la presencia de posibles
contaminantes y la caracterizacin de la correspondiente resina sinttica en
muestras. As pues, los fragmentos denominados caractersticos equivalen a
los monmeros de la correspondiente resina sinttica, y resultan los ms
tiles para su caracterizacin. Otras sustancias detectadas corresponden a
derivados de unidades mayores o resultado de reorganizaciones de los
productos formados tras la pirlisis.
La relacin de los fragmentos detectados en el mbito de este amplio
estudio, junto a su presencia en cada una de las muestras (patrones y reales)
se expone en las Tablas 36 y 37, respectivamente.
6.1.1 Polmeros de vinilo
Las resinas polivinlicas estudiados fueron las siguientes: un polmero
de estireno-etileno/butileno-estireno (SEBS) (dos versiones comerciales:
Kraton G1650 y Kraton G1657), una resina de hidrocarburos saturada
(nombre comercial Arkon P90), una resina de indeno-benzofurano
(cumarona), acetato de polivinilo (tres versiones comerciales: Mowilith,
PVAc y Palmer Cement), butiral de polivinilo (Mowital B20H) y resinas
acrlicas (Paraloid y una pigmento blanco de titanio con base acrlilica). Las
resinas se exponen en la Tabla 5 del apartado 6.1 del Captulo IV de la
presente memoria.
Ambos derivados comerciales de polmero de SEBS muestran una
elevada cantidad del estireno, considerado como el fragmento caracterstico,
y tolueno. Los dems monmeros (etileno y butileno), no aparecen debido a
su baja masa molecular y elevada volatilidad. En la muestra de Kraton
G1657 se encuentran adems trazas de hidrocarburos, probablemente
provenientes del tamizado utilizado en la purificacin.
Los fragmentos caractersticos del Arkon P90 son alquilciclohexanos
saturados como el metilciclohexano, etilciclohexano, 1-etil-3-
metilciclohexano, (1-metiletil)ciclohexano y 1-etil-4-metilciclohexano,
procedentes de la estructura policclica saturada de la resina. Otros
fragmentos identificados fueron alquilciclohexeno, indeno y
decahidronaftaleno.
Los compuestos identificativos de la resina de cumarona detectados a
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
________________________________________________________
207
travs del anlisis por Py-GC/MS fueron: benzofurano, indeno,
metilbenzofurano y metilindeno, las unidades monomricas de las resinas.
Otras molculas encontradas fueron compuestos con anillos aromticos.
Los productos pirolticos de los acetatos de polivinilo son el cido
actico, procedente del polmero y el benceno, producto de reorganizacin
de fragmentos menores. Otras sustancias identificadas en los pirogramas
fueron naftaleno, metilnaftaleno, bi-fenilo y un amplio grupo de
alquilbencenos. En el Palmer Cement se encuentran asimismo benzaldehido
y acetofenona, procedentes probablemente el disolvente del polmero. Las
tres clases de acetato de polivinilo seran indistinguibles en una muestra real.
El pirograma del derivado del butiral de polivinilo Mowital B20H,
presenta como fragmentos caractersticos el butanal, obtenido a partir de la
descomposicin del polmero, y el benceno resultado de reaorganizaciones
de fragmentos anlogos a los producidos en el acetato de polivinilo. Otras
sustancias detectadas fueron: cido butanoico, benzaldehido, 3-penten-2-ona
y una serie de alquil derivados del benceno.
El estudio de una pintura de titanio de base acrlica se llev a cabo con
el objetivo de ampliar la informacin acerca del comportamiento de los
poliacrlicos en la pirlisis. Los fragmentos caractersticos fueron los
siguientes monmeros acrlicos: metil acrilato, metil metacrilato, etil
metacrilato, isobutil acrilato, butil acrilato, isobutil metacrilato, butil
metacrilato. Asimismo se detect el antioxidante butil hidroxitolueno. La
temperatura de pirlisis influye de forma considerable sobre el resultado. A
590C, se producen una gran cantidad de compuestos con ncleos
aromticos como etilbencenos y naftaleno, as como ciclohexadienonas
polisustituidos y otras molculas de elevado peso molecular no identificadas.
Sin embargo a 650C la cantidad de compuestos detectados es mucho menor,
mientras que a 764 se produce una situacin intermedia.
El polmero de Paraloid se estudi para su identificacin y establecer a
que clasificacin pertenece. Los productos de pirlisis caractersticos fueron
los siguientes: metil acrilato, metil metacrilato, etil metacrilato y cido
metacrlico. No obstante, los compuestos ms abundantes fueron etil
metacrilato y metil acrilato, por lo que se propone que se trata de Paraloid
B72. Asimismo se encuentran alquilbencenos, probablemente procedentes
del disolvente o de reorganizaciones durante la pirlisis. Por otro lado el
perfil de los pirogramas depende de la temperatura de ruptura trmica
aplicada. A 590 y 764C se forman 1-(4-etilfenil)etanona y diversas
sustancias de alto peso molecular, as como indicios de plastificante. A
650C no se detectaron estos compuestos. De forma general, para los
polmeros acrlicos la pirlisis a 590C proporciona un nmero mayor de
fragmentos.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
________________________________________________________
208
6.1.2 Polmeros de condensacin
Para el presente estudio se analizaron los siguientes polmeros de
condensacin: resina alqudica, resinas cetnicas (cuatro productos
comerciales: AW2 en polvo con nmero de inventario 90.34.13; AW2 en
forma compacta, n de inventario 90.34.14; Keton N y Laropal A81), resinas
de fenol formaldehido (dos versiones comerciales, con nmero de inventario
90.39.4 y 90.39.6) y acrolena (Akroid). Las resinas y nmeros de inventario
corresponden a los expuestos en la Tabla 5 del apartado 6.1 del Captulo IV.
En la resina alqudica se detect gran cantidad de cido ftlico, junto a
compuestos fenlicos, probablemente derivados de este ltimo, restos de
cido oleico, cidos carboxlicos cortos y derivados con carbonilo. El cido
ftlico se considera como el fragmento caracterstico.
Los pirogramas obtenidos en los anlisis de la muestra de AW2 en
polvo (n 90.34.13) muestran los siguientes de fragmentos caractersticos,
que resultan claramente procedentes de un polmero cetnico: ciclohexanol,
ciclohexanona y diversos correspondientes alquilderivados. Adems se
detectaron ciclohexenos, santeno, octahidropentalenos y otros hidrocarburos
policclicos saturados.
En la muestra procedente de la resina de AW2 en forma compacta (n
90.34.14), se identific una serie de monmeros acrlicos (isobutil
metacrilato, 2-metilpropil metacrilato, 2-etilhexil metacrilato) yderivados
alquilbencnicos, mientras que no se detectaron fragmentos caractersticos
de resinas cetnicas. Probablemente se trate de un material acrlico
errneamente etiquetado.
Los fragmentos caractersticos detectados en Keton N fueron los
mismos a los encontrados en la AW2: ciclohexanol, ciclohexanona y
alquilciclohexanonas. Asimismo se encontraron molculas de santeno,
octahidropentaleno, triciclododecenos y otras sustancias no identificadas de
elevado peso molecular. En este caso, se detecta un mayor nmero de
fragmentos caractersticos tras pirlisis a 764C.
La resina de Laropal A81 contiene una mezcla de sustancias, de las
cuales se identificaron nicamente Z-1-1(butenil)azirina, 2,2-dimethyl-1S-
propandiol, 3-hidroxi-2,2-dimetilpropanal, metil 2,2-dimetil-3-hidroxi
propanato, benzonitrilo y una considerable cantidad de sustancias no
identificadas. Los fragmentos considerados como caractersticos son los ms
intensos, el metil 2,2-dimetil-3-hidroxipropanato, dos picos a t=10,214 y
t=13,92 min, y cuyo pico molecular aparece a 187 y 287, respectivamente.
El benzonitrilo no se puede utilizar como caracterstico, ya que aunque
contiene un nitrgeno, se encuentra en numerosos pigmentos sintticos.
Las sustancias caractersticas de la resina fenlica n 90.39.4 fueron
una amplia variedad de alquilfenoles. Otros fragmentos detectados fueron
alquilciclohexenos, alquilbenzaldehido y gran cantidad de alquilbencenos,
as como naftalenos y metanoazulenos de elevado peso molecular. Por su
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
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209
parte la otra resina fenlica estudiada (n 90.39.6) contiene una elevada
cantidad de alquilfenoles (fragmentos caractersticos), as como
hidroxibenzaldehidos y alquilbencenos.
La resina poliacrolena (Akroid) est compuesta por una compleja
mezcla de diversas sustancias como alquilbencenos, alquilfenoles,
metoxibencenos, metoxifenoles, benzaldehidos y otros derivados cetnicos.
La unidad monomrica acrolena es muy voltil y tiene un bajo peso
molecular, por lo que no se detect en el pirograma. En este caso no se
considera ningn fragmento caracterstico.
6.2 Estudio de muestras procedentes de una obra pictrica moderna
La informacin proporcionada por el anlisis de los polmeros patrn
de resinas sintticas se utiliz para la caracterizacin de la resina presente en
una obra pictrica del artista alemn contemporneo Georg Baselitz (Senta
1992/1993), representada en la Figura 40. El autor, nacido el 1937 en
Deutschbaselitz (Sajonia, Alemania) se considera como uno de los mximos
exponentes de la pintura contempornea en Alemania. Las muestras se
obtuvieron de una zona de color azul y otra de color negro. En ambos casos
se presupone que el artista emple un poliacrlico, por ser el material
frecuentemente utilizado por el autor.
Figura 40. Imagen de la
obra pictrica moderna:
Georg Baselitz, Senta,
1992/1993, pintura sobre
lienzo, 100,5 x 71 cm,
Bayerische
Staatsgemldesammlungen,
nmero de inventario 1785.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
________________________________________________________
210
El estudio meticuloso de los pirogramas obtenidos a partir del anlisis
de las muestras artsticas permiti confirmar la presencia de compuestos
correspondientes a las resinas sintticas patrn, as como aditivos y otros
materiales utilizados en pintura artstica. Los pirogramas resultantes del
estudio de la muestra coloreada de azul (a 590C) y la de pigmento negro (a
764C) se representan en la Figura 41.
Figura 41. Pirogramas (TIC) resultantes del anlisis de muestras procedente de una pintura de
Baselitz, (Senta, 1992/1993), en el primer caso de un rea con pigmento azul (a) y otro con
coloracin negra (b). Los compuestos caractersticos se indican con rectngulos de la
siguiente manera: aceites secantes en amarillo, resinas cetnicas en rojo, acrlicas en verde y
fenlicas en azul. Las regiones con una distribucin continua de hidrocarburos se muestran
con una lnea horizontal. Asimismo se indican los siguientes aditivos: el antioxidante butil
hidroxitolueno ( ) y el plastificante ster ftlico (+).
En ambos casos se detect una amplia cantidad de hidrocarburos. Se
encontr una serie de alcanos lineales de nmero par e impar de tomos de
carbono, por lo que se excluye que provengan de la cera de abeja. La
distribucin de hidrocarburos indica que probablemente sean restos de
parafina. Asimismo se detect en ambas muestras el aditivo antioxidante
butil hidroxitolueno y los monoterpenos canfeno y -canfolenal.
Los compuestos alquilbencnicos detectados en los pirogramas de
todos los polmeros estudiados y en las muestras artsticas son
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
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211
probablemente el resultado de reorganizaciones de fragmentos menores, por
lo que su presencia no aporta informacin significativa para la
caracterizacin de las resinas sintticas.
6.2.1 rea pigmentada de azul
La deteccin de cidos grasos de cadena corta y aldehidos no permite
establecer por s sola la presencia de material oleoso, ya que no se
encuentran cidos carboxlicos ms largos. Asimismo se encontr ster
ftllico, ampliamente utilizado como aditivo plastificante.
La deteccin de una serie de compuestos caractersticos de las resinas
cetnicas (ciclohexanona, 2-metilciclohexanona y 2-etilciclohexanona)
indica la presencia de resinas cetnicas de tipo AW2 o de Keton N. Por otra
parte, la deteccin de metil propil metacrilato no resulta criterio suficiente
para establecer la presencia de una resina poliacrlica.
6.2.2 rea pigmentada de negro
La deteccin de cidos esterico, oleico, palmtico y sus productos de
degradacin como cidos grasos de cadena corta, aldehidos y cetonas,
permiten deducir la presencia de material oleoso en la muestra analizada.
La muestra analizada contiene los siguientes fragmentos
caractersticos de polmeros cetnicos: ciclohexanona, 2-metilciclohexanona,
4-metilciclohexanona y 2-etilciclohexanona. La presencia de estos
compuestos permite proponer el uso de resinas cetnicas como AW2 o
Keton N para la decoracin de la superficie de la obra pictrica. Asimismo
se detectaron compuestos fenlicos, pero como los anillos aromticos
pueden formarse posteriormente mediante reorganizaciones, no se puede
establecer la presencia de una resina de fenol-formaldehido.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
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212
Tabla 36. Parmetros analticos de los fragmentos obtenidos a partir del anlisis de las muestras patrn y procedentes de obra pictrica moderna mediante Py-GC-MS. Se
indican los siguientes datos: orden y tiempo de elucin bajo las condiciones de separacin cromatogrfica aplicadas; denominacin (si se ha identificado) o relacin carga
masa (m/z) del ion molecular (IM); iones ms intensos en el espectro de masas.
n T.R. (min) nombre
iones ms
abundantes (m/z)
n T.R. (min) nombre
iones ms
abundantes (m/z)
1 2,503 acetona 43; 58; 44 26 4,038 cido metacrlico 86; 69; 45
2 2,509 metil acrilato 55; 42; 43 27 4,038 etilciclohexano 83;55;112
3 2,523 2-butanona 42; 72; 71 28 4,197 3-metilenciclohepteno 93; 79; 91
4 2,672 butanal 43;44;72 29 4,205 2-hexenal 55; 49; 83
5 2,863 cido actico 43;44;60 30 4,217 etilbenceno 91;106;77
6 2,932 1-hepteno 43;55; 54 31 4,540 1,3-dimetilbenceno 91;106;77
7 2,939 benceno 78;51;50 32 4,600 no identificado 95; 82;67
8 2,991 3-penten-2-ona 43; 69; 84 33 4,710 2-heptanona 43; 58; 71
9 3,043 metil-metacrilato 69;100;99 34 4,72 ciclohexanol 57; 82; 67
10 3,218 metilciclohexano 83;55;96 35 4,758 butil acrilato 55; 56; 73
11 3,315 Z-1-1(butenil)azirina 97; 82; 47 36 4,863 1-etil-3-metilciclohexano 97;55;126
12 3,340 4-metilciclohexeno 81; 67; 96 37 4,868 estireno 104; 78; 51
13 3,517 1-metilciclohexeno 81; 73;96 38 4,900 ciclohexanona 55; 42; 98
14 3,538 tolueno 91;92; 65 39 4,918 xileno 91; 106; 104
15 3,560 no identificado - IM=138 81;97;67 40 4,920 n-heptanal 70; 43; 42
16 3,598 etil metacrilato 69 99 86 41 4,931 no identificado - IM=125 85; 55; 125
17 3,603 n-hexanal 44 56 43 42 5,048 1-etil-4-metilciclohexano 97; 55; 69
18 3,632 1-metil-4-propilbenceno 105; 134; 91 43 5,102 metil 2,2-dimetil-3-hidroxi-propanato 102; 87; 73
19 3,671 1,3-ciclohexadieno 79; 78; 94 44 5,277 (1-metiletil)ciclohexano 82;83;55
20 3,725 1-octeno 70; 55; 56 45 5,310 (1-metiletil)benceno 105; 96; 110
21 3,798 2,2-dimetilpropanal 56; 55; 43 46 5,340 no identificado - IM=126 55;83;97
22 3,851 isobutil acrilato 43;56;73 47 5,425 2,2-dimetil-1S-propanodiol 56, 55; 73
23 3,873 cido butanoico 60; 74; 43 48 5,430 no identificado 67; 83; 82
24 3,926 3-hidroxi-2,2-dimetilpropanal 56 57 54 49 5,446 no identificado - IM=150 83;55;65
25 3,980 1,3-dimetil-1-ciclohexeno 95; 67; 116 50 5,478 isobutil metacrilato 69;56; 87
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
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213
n T.R. (min) nombre
iones ms
abundantes (m/z)
n T.R. (min) nombre
iones ms
abundantes (m/z)
51 5,544 2-metilpropil metacrilato 69; 56; 87 79 6,441 2,6-dimetilciclohexanona 69; 57; 126
52 5,604 2,6-dimetil-2,4-heptadieno 107; 93; 91 80 6,486 cido hexnico 60; 43; 73
53 5,606 3-metilciclohexanol 71; 81; 57 81 6,600 spiro[5,6]decano 67; 83; 96
54 5,679 2-metilciclohexanona 69; 68; 112 82 6,619 no identificado - IM=169 67; 83; 95
55 5,680 2-propenilbenceno 117;118;91 83 6,627 1-metil-4-propilbenceno 105; 134; 83
56 5,709 3-metilciclohexanona 69, 56; 112 84 6,636 no identificado - IM=148 122; 94; 54
57 5,799 trans-octahidro-1H-indeno 67; 96; 81 85 6,760 1,4-dimetilbenzeno 119; 105; 134
58 5,802 4-metilciclohexanona 55; 112; 56 86 6,778 (2-metilprop-1-enil)ciclohexa-1,5-dieno 91; 119; 77
59 5,808 propilbenceno 91;120;92 87 6,789 1-metoxi-4-metilbenceno 122; 121; 77
60 5,808 isopropilbenceno 105; 77; 106 88 6,795 4-etil-1,2-dimetilbenceno 119; 105; 134
61 5,822 cis-biciclo[4.3.0]noneno 79;80;65 89 6,807 2-metil-cis-octahidropentaleno 81; 96; 55
62 5,849 benzaldehido 104;105;77 90 6,836 1-metil-2-(1-metiletil)benceno 119; 134; 91
63 5,979 1-metil-3-etilbenceno 105;120;77 91 6,89 1-etenil-2-metilbenceno 117;118;116
64 6,017 1,2,3-trimetilbenceno 105;120;91 92 6,911 canfeno 93; 67; 91
65 6,086 no identificado - IM=125 89; 57; 115 93 6,917 biciclo[3.3.1]nonano 81; 96; 54
66 6,107 cis-octahidropentaleno 67; 54; 82 94 6,971 no identificado - IM=142 102; 55; 98
67 6,114 -pineno 93; 69; 91 95 7,004 indano 117;91;63
68 6,120 fenol 94; 66; 65 96 7,020 1-propenilbenceno 117;118;116
69 6,142 butil metacrilato 69; 87; 56 97 7,086 octahidro-5-methylindeno 81;98;65
70 6,169 no identificado - IM=118 104; 94; 76 98 7,114 2-hidroxibenzaldehido 122;65;93
71 6,173 [1H]-3a,4,5,6,7,7a-hexahidroindeno 79;80;93 99 7,136 indeno 115;116;89
72 6,185 etilmetilbenceno 105; 121; 69 100 7,150 1-propinilbenceno 115;116;91
73 6,185 benzonitrilo 69; 57; 56 101 7,190 3-etenil-ciclohexanona 81; 67; 96
74 6,191 -metilestireno 118;117;103 102 7,196 1,3-dietilbenceno 119;105;134
75 6,313 cis-octahidro-1H-indeno 81;67;80 103 7,234 no identificado - IM=156 57; 72; 156
76 6,333 2-pentilfurano 81; 60; 138 104 7,306 no identificado - IM=122 79; 94; 122
77 6,391 1,2,4-trimetilbenceno 105; 120; 77 105 7,318 2-metilfenol 108; 107; 77
78 6,406 benzofurano 118; 89; 63 106 7,319 trans-decahidronaftaleno 138; 67; 95
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
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214
n T.R. (min) nombre
iones ms
abundantes (m/z)
n T.R. (min) nombre
iones ms
abundantes (m/z)
107 7,327 1,4-dietilbenceno 119; 105; 134 132 8,165 2,6-dimetil-2,5-ciclohexadieno 65; 136; 105
108 7,415 octahidro-4,7-metano-1H-indeno 95;67;79 133 8,171 2-metilpropenil)ciclohexa-1,5-dieno 81; 119; 134
109 7,417 1,2-dietilbenceno 105; 119; 134 134 8,247 2-etilciclohexanona 55; 98; 42
110 7,485
1-butilciclohexeno o octahidro-5-
metilindeno
81;96;67 135 8,260 hidrocarburo no identificado 57;70;55
111 7,498 acetofenona 105;77;120 136 8,347 santeno 93; 91; 77
112 7,529
cis-2-
metilenbisciclo[5.2.1.0(2,6)]nonano
79;95;121 137 8,377 -camfenal 103; 93; 67
113 7,618 4-metilfenol 107; 108; 77 138 8,467 2-hidroxi-4-metilbenzaldehido 136;135;77
114 7,774 1-etenil-3-etilbenceno 117; 132; 115 139 8,502 no identificado - IM=144 73; 89; 101
115 7,823 2-metoxifenol 109; 124; 81 140 8,607
3-metil-2-butenilbenceno o
(1,1-dimetil-2-propenil)benceno
131; 146; 91
116 7,830 no identificado - IM=150 81;121;67 141 8,700 no identificado - IM=186 59; 115; 72
117 7,833 o-isopropeniltolueno 132; 117; 115 142 8,703 2,4-dimetilfenol 107; 122; 121
118 7,835 2-nonanona 58; 55; 143 8,712 1,4-dihidronaftaleno 130;115;129
119 7,864 cido heptnico 43; 55; 57 144 8,717 2-metilindeno 130;115;129
120 7,887 endo-triciclo[5.2.1.0(2,6)]decano 95; 67; 79 145 8,743 4-metiltriciclo[5.2.1.0(2.6)]decano 81;65;79
121 7,941 no identificado - IM=150 81;121;65 146 8,764 1-etenil-4-metoxibenceno 134; 91; 121
122 7,966 7-metilbenzofurano 131;130;103 147 8,809 1-hidroxi-4-metilbenzaldehido 136; 135; 107
123 7,968 2-metilprop-1-enil)ciclohexa-1,3-dieno 91; 134; 119 148 8,827 1,2-dihidronaftaleno 128;129;130
124 7,983 cis-decahidronaftaleno 67;81;97 149 8,972 no identificado -IM=143 71; 53; 89
125 8,001 n-C
11
H
24
57; 43;71 150 8,973 etilfenol 107; 122; 77
126 8,042 2-metilbenzofurano 131;132;104 151 9,149 2,3-dimetilfenol 122; 107; 77
127 8,047 nonanal 57; 43; 56 152 9,200 naftaleno 128;127;126
128 8,078 2,6-dimetilfenol 122; 107; 77 153 9,217 no identificado - IM=160 128; 121; 91
129 8,096 feniletanona 81; 109; 43 154 9,235 cido caprlico 60; 73; 43
130 8,125 1-metilbiciclo[3.2.1.0]octan-6-ona 93; 108; 92 155 9,248 3-metilenundecano 70;55;83
131 8,162 no identificado - IM=158 72; 43; 56 156 9,280 1-fenil-2-propin-1-ona 130;102;76
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
_______________________________________________________________________________________________________
215
n T.R. (min) nombre
iones ms
abundantes (m/z)
n T.R. (min) nombre
iones ms
abundantes (m/z)
157 9,327 cido graso no identificado 43; 58; 60 181 10,920 2-metilnaftaleno 142,141,115
158 9,330 1-dodeceno 55; 44; 65 182 11,034 1-metoxi-2-metilfenol 150; 143; 77
159 9,344 2-decanona 43; 58; 56 183 11,058 cido ftlico 104; 76; 50
160 9,359 3,4-dimetilfenol 107; 122; 121 184 11,238 1-(3-metoxifenil)etanona 135; 150; 77
161 9,499 2,3,5-trimetilfenol 121; 136; 135 185 11,413 no identificado - IM=217 56; 99; 145
162 9,729 4-vinil-fenol 120; 91; 119 186 11,422 no identificado - IM=148 84; 55; 43
163 9,762 3-isopropilbenzaldehido 133; 148; 105 187 11,499 no identificado - IM=217 56; 99; 145
164 9,862 2-etilhexil metacrilato 55; 70; 57 188 11,566 2-(1,1-dimetiletil)-4-metilfenol 149 121 164
165 9,863 1,3-dihidro-2H-inden-2-ona 104;132;103 189 11,604 4-(1,1-dimetiletil)-2-metilfenol 149; 158; 121
166 9,908 3-etil-5-metilfenol 121; 136; 91 190 11,714 4-etenil-1,2-dimetoxibenceno 164; 91; 149
167 9,908 2-cumaranona 78;134;106 191 11,818
(1,3,4,5,6,7-hexahidro-1,1,S,S-
tetrametil-2S)-2H-2-4a-
metanonaftaleno
148; 133; 77
168 10,059 2-hidroxi-4,6-dimetilbenzaldehido 150; 149; 121 192 11,830 cido cprico 73; 60; 56
169 10,059 4-oxononanal 43; 85; 71 193 11,873 1,1-bifenil 154,153;152
170 10,227 no identificado -IM=187 115; 69; 57 194 11,929 metil 3-fenil-2-propenato 131; 103; 162
171 10,354 1-(4-etilfenil)etanona 133; 148; 105 195 12,022 tetradeceno [IM=196] 55; 43; 69
172 10,399 trimetilfenol 121 136 135 196 12,152 tetradecano [IM=198] 55; 43; 57
173 10,448 3-fenil-3-propenal 131; 132; 103 197 12,283
[1S-(1, 3a,4, 8)]decahidro-4,8,9-
trimetil-9-metilen-1,4-metanoazuleno
91; 109; 81
174 10,582 2,3-dihidro-2H-inden-1-ona 132;104;78 198 12,546 no identificado - IM=185 143; 129; 115
175 10,586 no identificado - IM=200 126; 67; 95 199 12,730 cido 3-fenil-2-propenoico 147; 148; 103
176 10,663 cido pelargnico 60; 73; 57 200 12,920 no identificado - IM=196 112; 67; 95
177 10,721 1-trideceno 55; 43; 69 201 12,957 no identificado - IM=257 56; 85; 131
178 10,770 1-metilnaftaleno 142,141,115 202 12,993
bis(1,1-dimetiletil)-2,5-ciclohexadien-
1,4-diona
117; 220; 135
179 10,777 2-metil-5-(1-metiletil)fenol 135; 148; 91 203 13,131 3,4-dimetoxibenzaldehido 166; 165; 77
180 10,831 tridecano 57; 43; 71
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
_______________________________________________________________________________________________________
216
n T.R. (min) nombre
iones ms
abundantes (m/z)
n T.R. (min) nombre
iones ms
abundantes (m/z)
204 13,144
2,6-ditercbutil-4-metilen-2,5-
ciclohexadien-1-ona
161; 203; 185 228 15,040 benz[cd]indol-2(1H)-ona 169; 114; 141
205 13,230
[7R-trans-cyn-cis-triciclo[7.3.0.0(2,6)]-
dodecanal
79; 78; 133 229 15,169 dibutil pentadienato 115, 171; 87
206 13,260 1-pentadeceno 55; 43; 57 230 15,245 no identificado - IM=228 134; 79; 194
207 13,354 pentadecano [IM=212] 57; 71; 43 231 15,291 1-heptadecino [IM=236] 55; 81; 67
208 13,404 no identificado - IM=192 111; 192; 67 232 15,372 8-heptadeceno [IM=238] 55; 43; 83
209 13,471 no identificado - IM=217 56; 87; 71 233 15,507 no identificado - IM=212 114; 56; 131
210 13,490 no identificado - IM=208 79; 149; 97 234 15,529 1-heptadeceno[IM=238] 55; 43; 57
211 13,493 no identificado - IM=180 79; 81; 162 235 15,569 no identificado - IM=287 56; 115; 131
212 13,495 no identificado - IM=192 79; 81; 94 236 15,611 heptadecano [IM=240] 57; 71; 43
213 13,531
(1, 3a, 7, 8a)octahidro-1,9,9-
trimetil-4-metilen-1H-3a, 7-
metanoazuleno
105; 118; 87 237 15,678 no identificado - IM=201 127; 126; 98
214 13,542 butil hidroxitolueno 205; 220; 57 238 15,786 no identificado - IM=255 93; 152; 151
215 13,692 no identificado - IM=122 111; 122; 67 239 16,052 no identificado - IM=255 93; 152; 151
216 13,735 no identificado - IM=259 56; 85; 157 240 16,343 3,5-di-tercbutil-4-hidroxibenzaldehido 219; 234; 191
217 13,898 no identificado - IM=192 111; 192; 67 241 16,505 fenantreno 178; 55; 43
218 13,912 no identificado - IM=192 111; 192; 67 242 16,534 no identificado - IM=255 200; 149; 121
219 13,928 no identificado - IM=287 115; 56; 132 243 16,626 no identificado - IM=212 98; 67; 83; 81
220 13,969 no identificado - IM=287 56; 115; 132 244 16,773 no identificado - IM=245 115; 56; 58
221 14,345 1-metil-7-(1-metiletil)naftaleno 169; 184; 154 245 17,256 no identificado - IM=210 98; 95; 94
222 14,426 hidrocarburo no identificado 55; 43; 83 246 17,339 9-heptadecanona 57; 43; 71
223 14,464 no identificado - IM=226 113,56,141 247 17,612 2-heptadecanona 58; 43; 59
224 14,507 hexadecano [IM=226] 57; 43; 71 248 18,286 plastificante (ftalato) 149; 73; 43
225 14,554 no identificado - IM=206 111; 206; 81 249 18,334 cido palmtico 73; 60; 43
226 14,925 no identificado - IM=210 98; 67; 131 250 18,459 no identificado - IM=268 225; 42; 114
227 14,927 no identificado - IM=192 98; 131; 67 251 19,516 heneicosano 57; 43; 71
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
_______________________________________________________________________________________________________
217
n T.R. (min) nombre
iones ms
abundantes (m/z)
n T.R. (min) nombre
iones ms
abundantes (m/z)
252 19,560 2-nonadecanona 43; 58; 59 266 22,545 no identificado - IM=304 94, 111; 79
253 19,596 no identificado - IM=325 195; 194; 93 267 22,812 pentacosano [IM=352] 57; 43; 71
254 19,835 no identificado - IM=325 195; 194; 250 268 22,957 no identificado - IM=425 355, 115; 59
255 19,901 cido oleico 55; 69; 83 269 23,224 2-etilhexil ftalato 149, 57; 167
256 20,129 cido esterico 43; 55; 73 270 23,561 hexacosano [IM=366] 57; 44; 43
257 20,390 docosano [IM=310] 57; 43; 71 271 23,823 no identificado - IM=425 115, 355; 242
258 20,644 no identificado - IM=324 228; 149; 148 272 24,281 heptacosano [IM=380] 44; 53; 71
259 20,825 hidrocarburo no identificado 43; 55; 98 273 24,978 octacosano [IM=394] 57; 71; 43
260 21,226 tricosano [IM=324] 57; 71; 43 274 25,649 nonacosano [IM=408] 57; 71; 43
261 21,453 no identificado - IM=146 109; 43; 123 275 26,296 triacontano [IM=422] 57; 71; 43
262 21,781 no identificado - IM=311 181; 134; 236 276 26,926 heneitriacontano [IM=436] 57; 71; 43
263 22,036 tetracosano [IM=338] 57; 71; 43 277 27,539 hidrocarburo no identificado 57; 71; 43
264 22,045 no identificado - IM=295 325; 65; 42 278 28,137 hidrocarburo no identificado 57; 71; 43
265 22,387 no identificado - IM=304 94; 111; 79
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
_______________________________________________________________________________________________________
218
Tabla 37. Fragmentos detectados a partir del anlisis mediante Py-GC-MS en cada una de las muestras procedentes de resinas sintticas patrn* y de la obra pictrica
moderna**. (La numeracin de los fragmentos se corresponde con la de la Tabla 36). Los compuestos indicados con ( ) son los caractersticos de cada tipo de resina,
mientras que los marcados con (X) son otros compuestos detectados en el anlisis.
*Materiales de referencia (denominacin comercial): 1=Kraton G1650; 2=Kraton G1657; 3=Arkon P90; 4=resina de cumarona; 5=Mowilith; 6 =PVAc; 7=Palmer Cement;
8=Mowital B20H; 9=Pigmento Acrlico; 10=Paraloid; 11=AW2 (90.39.14); 12=AW2 (90.39.13); 13=Keton N; 14=Laropal A81; 15=Resina fenlica (90.39.4); 16=Resina
fenlica (90.39.36); 17=Alkyd y 18=Akoid.
**Muestras procedente de la obra pictrica de Baselitz de las reas de coloracin 19=azul y 20=negro.
n 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 n 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
1 X 26
2 27
3 X X X X X X X 28 X
4 29 X
5 X X 30 X X X X X X
6 X 31 X X X X
7 X X X X 32 X
8 X 33 X
9 34
10 35
11 X 36
12 X X 37 X X X X X X X X X
13 X X 38
14 X X X X X X X X X X X X X X 39 X X X X X
15 X 40 X X X
16 41 X
17 X X X 42
18 X 43
19 X 44
20 X 45 X
21 X 46 X
22 47 X
23 X X 48 X
24 X 49 X
25 X 50 X
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
_______________________________________________________________________________________________________
219
n 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 n 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
51 X 84 X
52 X 85 X X
53 86 X
54 87 X
55 X X 88 X X
56 89 X X
57 X 90 X
58 91 X X X
59 X X 92 X
60 X 93 X
61 X 94 X
62 X X X X X 95
63 X X 96 X X
64 X X 97 X
65 X 98 X
66 X X 99 X
67 X 100 X X X
68 X 101
69 102 X X
70 X 103 X
71 X 104 X
72 X X 105 X X
73 X 106 X
74 X 107 X
75 X 108 X
76 X 109 X
77 X 110 X
78 111 X X
79 112 X
80 X X X 113 X X X
81 X 114 X
82 X 115 X
83 X 116 X
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
_______________________________________________________________________________________________________
220
n 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 n 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
117 X X 150 X X
118 X 151 X
119 X X 152 X X X X X X
120 X 153 X
121 X 154 X X
122 155 X
123 X 156 X
124 X 157 X
125 X X 158 X
126 159 X
127 X X 160 X
128 X 161 X
129 X 162 X
130 X 163 X
131 X 164
132 X 165 X
133 X 166
134 167 X
135 X 168 X
136 X 169 X
137 X X 170
138 X 171 X
139 X 172 X
140 X 173 X
141 X 174 X
142 X 175 X
143 X 176 X
144 177 X X
145 X 178 X X X
146 X 179
147 X 180 X
148 X X X X 181 X X
149 X 182 X
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
_______________________________________________________________________________________________________
221
n 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 n 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
183 X 216 X
184 X 217 X X
185 X 218 X
186 X 219
187 X 220 X
188 X 221 X
189 222 X X
190 X 223 X
191 X 224 X X
192 X 225 X
193 X X 226 X
194 X 227 X
195 X 228 X
196 X X 229 X
197 X 230 X
198 X 231 X
199 X 232 X X
200 X 233 X
201 X 234 X X
202 X 235 X
203 X 236 X X
204 X 237 X
205 X X 238 X
206 X X 239 X
207 X X 240 X
208 X 241 X
209 X 242 X
210 X 243 X
211 X 244 X
212 X 245 X
213 X 246 X
214 X X X X X X 247 X
215 X 248 X
V. RESULTADOS Y DISCUSIN. RESINAS SINTTICAS
_______________________________________________________________________________________________________
222
n 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 n 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
249 X 264 X
250 X 265 X
251 X 266 X
252 X 267 X X
253 X 268 X
254 X 269 X
255 X X 270 X X
256 X 271 X
257 X X 272 X X
258 X 273 X
259 X 274 X
260 X X 275 X
261 X 276 X
262 X 277 X
263 X X 278 X
223
VI. CONCLUSI ONES
VI. CONCLUSIONES
______________________________________________________________
225
La investigacin realizada ha permitido el desarrollo de diversas
metodologas analticas para la caracterizacin de una amplia coleccin de
materiales orgnicos empleados en la elaboracin de capas pictricas y
barnices de obras de arte: protenas, ceras naturales, aceites secantes, resinas
terpnicas y polmeros sintticos, de acuerdo de los objetivos propuestos. En
dichas metodologas se utilizan las siguientes tcnicas analticas: HPLC-UV-
Visible, HPLC-Fluorescencia, GC/FID, GC/MS y Py-GC/MS, as como
espectrometra de masas directa. Las metodologas propuestas se aplicaron
con xito para la identificacin de los materiales estudiados en muestras
reales procedentes de obras pictricas. Como conclusiones derivadas de este
extenso estudio se puede destacar:
1. La cromatografa lquida con detector de fluorescencia permite la
diferenciacin entre protenas utilizadas como aglutinantes proteicos, tales
como gelatina bovina, gelatina porcina, albmina, casena y huevo.
1.1 La reaccin de los aminocidos con el o-ftalaldehido proporciona
derivados fluorescentes con sensibilidad, lmite de deteccin e intervalo
lineal adecuados para la deteccin de dichos analitos procedentes de los
patrones de protenas y extrados de muestras procedentes de obras
pictricas.
1.2 Se establecieron las condiciones instrumentales del cromatgrafo
lquido (composicin de las fases eluyentes, programa de gradiente, fase
estacionaria, flujo y temperatura), que permit ieron la separacin de los
derivados de los aminocidos, sin interferencias con otros compuestos de la
matriz.
1.3 La caracterizacin de las protenas se realiz satisfactoriamente a
partir de la cantidad relativa de aminocidos, calculados a partir del rea del
pico cromatogrfico del OPA-derivado de cada uno de ellos frente al OPA-
derivado de la leucina.
1.4 La metodologa propuesta se ha evaluado mediante su aplicacin a
una serie de muestras procedente de obras pictricas decoradas en tmpera,
donde se caracteriz protena de huevo.
2. Se ha desarrollado un mtodo cromatogrfico para caracterizar ceras
naturales, como cera de abeja, carnauba y ceresina, de forma inequvoca,
tomando como parmetros identificativos las cantidades relativas de
hidrocarburos y de cidos grasos totales de los mismos.
2.1 Los cidos carboxlicos precisaron una derivatizacin con
etilcloroformiato para obtener los correspondientes derivados voltiles. Se
VI. CONCLUSIONES
______________________________________________________________
226
logr asimismo fijar las condiciones cromatogrficas para separar
correctamente los hidrocarburos y los derivados etlicos de los cidos grasos.
2.2 Se estableci una metodologa de hidrlisis cida y extraccin con
un disolvente orgnico para la separacin de los analitos del resto de los
compuestos de la matriz.
2.3 La caracterizacin de las ceras se fundamenta en el clculo de los
cocientes de las reas de los picos cromatogrficos correspondientes a los
hidrocarburos entre C20H-C36H respecto al n-heptacosano, y los cocientes
de las reas cromatogrficas correspondientes a los etilderivados de los
cidos mirstico, oleico, esterico y araqudico respecto al etilderivado del
cido palmtico. El tratamiento quimiomtrico de los valores calculados,
mediante Anlisis por Componentes Principales, proporciona una
discriminacin adecuada entre cera de abeja, la cera de carnauba y ceresina.
As pues, en el correspondiente grfico de puntuaciones las muestras
analizadas aparecen agrupadas por la clase de cera.
2.4 Un nuevo tratamiento estadstico por PCA se llev a cabo para
diferenciar las ceras naturales en presencia de otros materiales con cidos
grasos. As pues, se seleccionaron como variables estadsticas nicamente
los hidrocarburos, alcanzando una adecuada diferenciacin entre los patrones
de ceras naturales estudiados.
2.5 El mtodo analtico propuesto se aplic con xito a la
caracterizacin de cera natural en muestras procedentes de una oleorresina
sobre tabla.
3. Se ha propuesto con xito una metodologa para la caracterizacin de
aceites secantes mediante HPLC utilizando detectores de absorcin UV-
Visible y de fluorescencia. Se seleccionaron muestras procedentes de
patrones de aceites secantes frescos y envejecidos para evaluar la influencia
del deterioro en la identificacin de los aglutinantes oleosos.
3.1 El procedimiento establecido para liberar y separar los cidos de
la matriz fue una hidrlisis cida de los triglicridos seguido de una
extraccin lquido/lquido con hexano. El empleo de este disolvente apolar
mejora el procedimiento, ya que permite evitar la entrada de interferentes
polares en el sistema cromatogrfico y proporciona cromatogramas menos
complejos.
3.2 Se llev a cabo la optimizacin de los parmetros de la reaccin
de derivatizacin de los cidos grasos con 2-nitrofenilhidrazina (uso de
horno de microondas, potencia y tiempo de reaccin) para la deteccin UV-
Visible y con 4-bromometil-7-metoxicumarina para la deteccin por
fluorescencia. En ambos casos, se obtuvieron lmites de deteccin,
sensibilidades e intervalos lineales satisfactorios para la deteccin de los
analitos en los aceites secantes patrn y en las muestras de origen artstico.
La metodologa que utiliza la deteccin de fluorescencia proporciona una
VI. CONCLUSIONES
______________________________________________________________
227
sensibilidad superior a la metodologa fundamentada en absorcin UV-
Visible.
3.3 Se fijaron los parmetros cromatogrficos tales como: fase
estacionaria, fase mvil (composicin, programa de gradiente, flujo),
temperatura y longitudes de onda de trabajo del detector. En ambos casos, se
obtuvo una separacin satisfactoria de los derivados de los cidos grasos, sin
interferir entre ellos o con otros compuestos de la matriz, en un tiempo
inferior a quince minutos.
3.4 La diferenciacin de los aceites de linaza, nuez y adormidera se
realiz a travs del cociente entre las reas de los picos cromatogrficos
correspondientes del derivado de los cidos esterico y palmtico, el cual
permanece prcticamente independiente del grado de envejecimiento del
aglutinante oleoso, y vara en funcin de la clase de aceite secante.
3.5 Las metodologas optimizadas propuestas permitieron la
caracterizacin de aceite de linaza y de nuez en muestras procedentes de
diversas pinturas al leo de la poca renacentista.
4. El empleo de la espectrometra de masas directa permiti el desarrollo de
metodologas analticas sin derivatizacin ni separacin previas para la
diferenciacin de aglutinantes proteicos y oleosos.
4.1 Se estableci un procedimiento para la obtencin de cidos grasos
de los aceites secantes, basado en la saponificacin de la muestra, seguido de
acidificacin y separacin de los cidos grasos de la matriz a travs de una
extraccin lquido/lquido con hexano. Este procedimiento experimental
permite obtener los cidos grasos en un tiempo significativamente menor (5
minutos), al que se precisa en la hidrlisis cida (un da).
4.2 Se optimizaron las siguientes condiciones instrumentales del
espectrmetro de masas: potencial del capilar y de las mscaras de la trampa
inica, polaridad, masa enfocada, intervalo de barrido, presin y temperatura
de nebulizacin y caudal de la corriente del gas secante. Las condiciones
establecidas proporcionaron elevadas sensibilidad y reproducibilidad en la
deteccin de los aminocidos y cidos grasos.
4.3 La caracterizacin de los aglutinantes proteicos y oleosos se
realiz a travs de un tratamiento quimiomtrico mediante Anlisis
Discriminante Lineal efectuado sobre las cantidades de aminocidos y cidos
grasos, respectivamente, como variables estadsticas. En ambos casos, las
diferentes categoras de protenas y aceites secantes se diferencian de forma
significativa, e incluso se logr discriminar entre las diferentes clases de
envejecimiento experimentado por los aceites secantes patrn.
4.4 Las metodologas sugeridas se aplicaron sobre muestras
procedentes de obras pictricas decoradas en tmpera y leos, donde se
caracteriz para cada caso el correspondiente aglutinante utilizado. Estos
resultados coincidieron con los encontrados en los estudios analticos
VI. CONCLUSIONES
______________________________________________________________
228
realizados por HPLC (Conclusiones 1.4 y 3.5).
5. El estudio de la fraccin orgnica de barnices de instrumentos musicales
ha sido realizada utilizando la cromatografa gaseosa acoplada a la
espectrometra de masas, mediante la comparacin entre los compuestos
detectados en materiales patrn y las sustancias encontradas en las muestras
reales.
5.1 Se seleccionaron como patrones un amplio grupo de materiales
descritos como ingredientes en recetas de barnices para objetos renacentistas
de madera, principalmente resinas terpnicas y aceites esenciales.
5.2 Se optimizaron las condiciones (temperatura y tiempo de reaccin)
de derivatizacin por transmetilacin de los compuestos con grupos
carboxlicos, para la obtencin de los steres voltiles analizables por GC.
Asimismo se estableci un procedimiento experimental de sililacin de
grupos hidroxi, que mejor la resolucin de los alcoholes y su deteccin en
el espectrmetro de masas.
5.3 Las condiciones instrumentales fijadas para el cromatgrafo de
gases, como la columna capilar y el programa de temperaturas permitieron la
separacin de todos los compuestos de inters presentes en los patrones y las
muestras reales, un total de 97 compuestos en 11 patrones y varias muestras
procedentes de 3 instrumentos musicales, en un tiempo inferior a 60
minutos. La inyeccin sin divisin de flujo permiti incrementar la
sensibilidad del mtodo, parmetro crucial debido a la reducida cantidad de
muestra disponible, a causa del elevado valor artstico de los instrumentos
musicales de cuerda estudiados.
5.4 La metodologa propuesta permiti la identificacin de una gran
variedad de compuestos en los materiales patrn, as como el
almacenamiento de la informacin obtenida sobre las sustancias detectadas
(espectro de masas, tiempo de retencin, identificacin, material del que
provienen y orden decreciente de intensidad) en una base de datos con forma
de biblioteca de espectros.
5.5 Las muestras procedentes del barniz de una coleccin de
instrumentos de cuerda italianos de la poca renacentista se analizaron
satisfactoriamente con el procedimiento desarrollado. La identificacin de
los picos cromatogrficos se realiz correctamente con la ayuda de la
biblioteca de espectros, que result de especial utilidad para los picos
cromatogrficos con intensidades a nivel del ruido.
5.6 La informacin obtenida mediante la metodologa analtica
propuesta permiti caracterizar una resina de Pinaceae y aceite de linaza en
los barnices de la tiorba de Venere y en el violn de Stradivarius, adems de
una fraccin triterpnica en el barniz del lad de Maler.
6. El estudio analtico de resinas sintticas se llev a cabo siguiendo una
VI. CONCLUSIONES
______________________________________________________________
229
metodologa basada en la pirlisis-GC/MS, sin la adicin de derivatizante ni
tratamiento de la muestra.
6.1 Se realiz la optimizacin de la temperatura de pirlisis entre las
temperaturas 590; 650 y 764C. En el caso de los polmeros acrlicos, a
590C se obtuvieron pirogramas con un mayor nmero de fragmentos
mientras que para la resina cetnica Keton N, se detect un mayor nmero
de compuestos caractersticos a 764C. Para las dems resinas polimricas
estudiadas (poliestireno, resina de hidrocarburos saturada, resina de indeno-
benzofurano, acetato de polivinilo, butiral de polivinilo, polmero cetnico,
resina de fenol-formaldehido y poliacrolena) no se encontraron diferencias
significativas en funcin de la temperatura.
6.2 Las condiciones instrumentales establecidas para el cromatgrafo y
el espectrmetro de masas resultan adecuadas para la resolucin e
identificacin de los 278 fragmentos detectados tras la ruptura trmica de las
18 clases de polmeros sintticos y las muestras pictricas estudiadas, en 29
minutos. Los fragmentos caractersticos detectados en los pirogramas son
sustancias cuya estructura es similar a la de la unidad monomrica de la
resina, por lo que proporcionan mayor fiabilidad para la caracterizacin del
polmero sinttico.
6.3 La metodologa analtica propuesta se aplic al anlisis de
muestras procedentes de una obra pictrica moderna elaborada por el pintor
alemn Baselitz (Senta 1992/1993). El estudio minucioso de los
pirogramas obtenidos revel la presencia de fragmentos caractersticos de las
resinas cetnica, as como de parafina, aceite secante y plastificante.
231
PART B
FOR DOCTOR EUROPEUS MENTI ON
ANALYTICAL STUDY OF MATERIALS USED IN
VARNISHES, BINDING MEDIA AND
CONSOLIDANTS IN ARTWORKS BY
CHROMATOGRAPHIC AND SPECTROMETRIC
METHODS
233
VII. SUMMARY
SUMMARY. INTRODUCTION
________________________________________________________
235
1. Introduction
Artworks are made of a wide variety of materials. They must be
carefully chosen, handled and applied by the artist in order to establish the
aesthetical properties. Later, they can provide useful information to art
researchers about the artistic technique and period of the artist [7]. However,
these materials are degradated through the time by complex processes, due
to external conditions as moisture, temperature, environmental chemicals
and incorrect preservation conditions, as well as to interactions between the
own compounds of the pictorial artwork [8,37]. An adequate restoration and
preservation treatment must be applied to avoid the deterioration processes
and allow the conservation of the artwork. For these reason, a complet
analytical study of the artistic object in order to obtain a maximum of
knowledge about the materials originally used by the artist is strongly useful
[165]. However, this study is difficult because of the effect of the
deterioration, the small quantity of sample avaliable, their complexity and
their low purity [32,162].
The organic materials traditionally used in the field of art are proteins,
waxes, drying oils and terpenic resins, obtained from natural species, due to
their accecibility and plenty. However, during the XIX Century synthetic
materials as polymeric resins were also incorporated to the field of art [7].
Proteins are biopolymers made of aminoacids linked by peptide bonds
[14]. They are among the first natural materials employed for ornamental
purposes and they can be found in a wide variety of historical and artistic
objects. They were employed as binding media, consolidants and covering
materials in pictorial artworks since the antiquity, in the specific pictorial
techniques tempera (with egg protein) and temple (gelatin) [1].
Waxes are organic materials made of a mixture of hydrocarbons, esters
(mono-, di- and tri-), alcohols, free fatty acids, aldehydes, ketones and
triterpenoids, all of them with high molecular mass [7]. They have been
widely used since the antiquity as binding media, consolidant and covering
material for pigment, in encaustic-make pictorial artworks. Likewise, due to
their high hydrophobicity, they have been employed as sealing and
waterproof materials, therefore they can be found in several archaeological
objects, as pottery, graves and building materials [23,26].
Drying oils are complex mixtures of triglycerides, which are triesters
of glycerine with medium sized fatty acids, mainly unsaturated acids, which
are for the most part lost during ageing (linolenic, linoleic and oleic) and
saturated acids (palmitic, stearic and myristic) [7,14]. They are widely used
in oil painting technique as binding media, consolidant and covering,
because of their drying properties: the fresh drying oil is a liquid where the
SUMMARY. INTRODUCTION
________________________________________________________
236
pigment can be solved, and after applying over the surface of the artwork, it
polymerizes and becomes a rigid net where the pigments are agglutined and
protected [4].
Terpenic resins are made of mixtures of natural substances formed by
hydrocarbons formed by polymerization of isoprene, as well as their partial
oxidized derivatives, which shows alcohol, carbonyl or carboxylic groups
(terpenoids) [7]. These materials have been widely used as varnishes applied
as film coat over paintings or wood objects, as string musical instruments. Its
main function lies in to isolate the object from the environment and to avoid
the degradation of the internal layers. They can also be used to modify the
aesthetical properties by means of the addition of pigments. In the case of
string instruments, the varnish also provides mechanical protection, and can
also influence their sonority. Moreover, on the contrary that in paintings, the
varnish in string instruments is considered as a part of the artwork and can
not be removed [5].
Synthetic resins are materials obtained by industrial polymerization of
low-molecular weight molecules, mainly by radical or chemical
condensation pathway reactions, and were firstly synthesized during the
Industrial Revolution [6,7]. The most usual synthetic resins are polyolefines,
acetate polyvinyls, polyacrylics, alkyd, ketonic, phenol-formaldehyde,
polyacroleins, cellulose nitrate and polysiloxanes. Many of these polymeric
resins are widely used in artworks as binders, agglutinants, adhesives,
consolidants, covering material, varnishes and filler for missing parts in
restoration works. However, they can only be found in artworks elaborated
or restored after the 19
th
Century [6].
The analytical methodologies used in these studies are based on
techniques with high sensitivity, selectivity, versatility which allow to work
with small samples [7]. Then an extense variety of analytical techniques
have been used in order to characterize the organic materials in artworks.
The vibrational spectroscopic techniques, such as FTIR [138] and
Raman [149], allows the analysis of a small quantity of sample without
previous treatment and the possibility to simultaneously identify a wide
assortment of materials. On the other hand, separation techniques, coupled
with some sort of detection system, are used to obtain information of the
material in the sample by means of the compounds, due to its selectivity, low
sensitivity and reproducibility. Their identification provides the kind of
material, and the characterization is usually made by the relative amount of
the compounds [165] or the presence of several marker-molecules [162]. The
methodology of analysis usually includes a modification of the properties of
the compounds by a derivatization step treatment to improve the sensibility
of the analysis [165,212]. The most used resolutive techniques are
electrophoresis [197], size exclusion chromatography [209] , gas
SUMMARY. AIMS
________________________________________________________
237
chromatography (GC) coupled with flame injector detector [163] or mass
spectrometry [96], pyrolysis-gas chromatography-mass spectrometry
[22,187] and liquid chromatography (HPLC) with UV-Visible [138] ,
fluorescence [212] and mass spectrometry [53] detection. However, mass
spectrometry is also able to provide by itself qualitative and quantitative
information about the compounds in the sample. For these reason, it can also
be used as analytical technique [275,290].
2. Aims
The general aim of this Doctoral Thesis was to develop methodologies
to characterize several organic materials used in the manufacturation,
restoration and/or preservation of artworks, as proteins, waxes, drying oils,
synthetic polymers and terpenic resins in historical varnishes of string
musical instruments. The selected analytical techniques were liquid
chromatography, gas chromatography and mass spectrometry. The specific
purposes for each study are detailed as follows:
1. Proposal of a methodology to analyze proteins by HPLC-Fluorescence.
- Optimization of the derivatization reaction to improve the fluorescent
properties of the aminoacids.
- To establish the adequate instrumental conditions for the chromatographic
separation of the analytes.
- Identification of each standard aminoacid and determination of the
analytical parameters of the method.
- Characterization of the proteins by means of the relative proportion of
aminoacids.
- Chemometric treatment of the obtained data by Principal Component
Analysis (PCA), in order to improve the realiability of the discrimination
between the proteins.
- Application of the suggested methodology to pictorial artworks.
2. Analytical study of natural waxes in artistic and archaeological objects by
gas chromatography (GC).
- Study of the derivatization reaction to increase the volatility of the fatty
acids.
- Identification of the fatty acids and hydrocarbons in the natural waxes by
GC/FID.
- Characterization of the waxes by means of the relative amount of fatty
acids and alkanes.
SUMMARY. AIMS
________________________________________________________
238
- Selection of the reference compounds for the fatty acids and hydrocarbons,
in order to obtain their relative amount.
- Chemometric study of the information obtained by PCA, in order to
improve the reliability in the differentiation of the natural waxes.
- To verify the analytical procedure, the suggested methodology was applied
to artistic samples.
3. Proposal of methodologies using HPLC-UV-Visible and HPLC-
Fluorescence as analytical techniques to characterize drying oils employed
as binding media in pictorial artworks.
- Optimization of the experimentalprodecure to release and extract the fatty
acids
- Choice of the adequate derivatization reagents to improve the absorptivity
or fluorecence of the fatty acids and optimization of the reaction conditions.
- Establish the parameters of the chromatographic resolution and detection of
the fatty acids derivatives.
- Identification of the carboxilic acids and comparison of the analytical
parameters of both methods.
- Characterization of the drying oils by means of the relative amount of fatty
acids.
- Application of the suggested method to oil painting samples.
4. Optimization of analytical methods to identify protein and oil binding
media without derivatization or separation step by direct mass spectrometry.
- To propose a treatment of hydrolysis of the samples and extraction of
aminoacids and fatty acids.
- Optimization of the instrumental conditions of the mass spectrometer to
identify the aminoacids and fatty acids.
- Differentiation of protein and oil binding media from the relative amount
of aminoacids and fatty acids, respectively, by means of a chemometric
treatment of the obtained data by Linear Discriminant Analysis.
- Application of the methodology of samples from artworks.
5. Analytical study of the organic fraction of varnishes of string instruments
by GC/MS.
- Choosing of reference materials included in recipe to elaborate varnishes
during the Renacentist period.
- Optimization of derivatization method and instrumental conditions of the
GC/MS.
- Identification of the substances present in the standard materials.
- Construction of a mass spectra database for this kind of compounds.
- Characterization of the molecules included in the real samples.
SUMMARY. PROTEINS
________________________________________________________
239
- Application of the proposed method to samples from varnishes of
historical string instruments, including a unit of Stradivarius.
6. Analytical study of polymeric resins present in pictorial artworks by
pyrolysis-GC-MS.
- Study of the instrumental conditions of the thermic breakage of the
analytes.
- Identification of the fragments obtained by means of the analysis of the
standards of the synthetic polymers.
- Identification of the compounds detected in samples from samples from a
modern painting.
- Characterization of synthetic resins and organic additives in the samples
from pictorial artworks.
3. Results and discussion
3.1 Characterization of proteins in pictorial artworks through their
aminoacids relative amount by liquid chromatography with
fluorescence detection
The developed analytical procedure proposes an identification of the
proteins based on the relative amount of aminoacids, which were analyzed
by liquid chromatography with a fluorescence detector.
The first step lay in the decomposition of the protein biopolymer by
hydrolysis with concentrated hydrochloric acid at 110C for 16 h, followed
by the extraction of the obtained aminoacids with a polar acidic solvent, as
0.1 mol.L
-1
aqueous HCl. The hydrolysis step produced an alteration of the
aminoacids content, so that asparagine and glutamine were turned to their
corresponding acids, aspartic and glutamic, respectively. This last can also
undergo a cyclation, turning into pyroglutamic acid. Moreover, the
tryptophan decomposes in an extreme acidic medium. Then these
aminoacids would not appear in the results [162].
Obtained aminoacids were derivatized at room temperature with o-
phthalaldehyde (OPA) as fluorescent reagent in basic borate buffer, using 2-
mercaptoethanol as catalyst. This reagent reacts with primary amines to
provide high sensitive fluorescent adduct, with short time derivatization
times and no needing of heating. However, cysteine and secondary
aminoacids proline and 4-hydroxyproline can not be analyzed, be to the poor
stability of their OPA-derivative [271].
The resolution of the OPA-aminoacids derivatives was performed by
reverse phase liquid chromatography, using an injection loop of 20 L. The
SUMMARY. PROTEINS
________________________________________________________
240
stationary phase was a Zorbax XBD-C18 column, and mobile phase was a
gradient programmed between these two eluents: 5% of tetrahydrofurane in
water buffered at pH 5.8 with acetic acid/sodium acetate and methanol,
running at 1 mL.min
-1
at 30C. Under these conditions, an adequate
resolution, without interfering substances, was obtained in 45 minutes. The
the detection was performed at 340 and 450 nm as excitation and emission
wavelengths, respectively [271].
The optimization of the derivatization parameters (reaction time,
reagent concentration) and the chromatographic conditions (solvents, flow,
gradient program, temperature) were optimized using a mixture 0.8 mmol.L
-1
of the following standard aminoacids (elution order): aspartic acid, histidine,
glutamic acid, serine, lysine, arguinine, glycine, threonine, alanine, tyrosine,
methionine, valine, phenylalanine, isoleucine and leucine. Afterwards, the
analytical parameters of the methodology were determined for all the
aminoacids, using 0.1 mol tryptophan as internal standard. A satisfactory
sensitivity with a limit of detection of 0.08 nmol and an adequate linearity
between 4-330 nmol was obtained for almost the analytes. The analytical
parameters were found similar for all the studied aminoacids, however, 3-
times-higher sensitivity was found for glycine and lysine.
The proteins selected for the study were those most used in tempera or
temple pictorial artworks: albumin, casein, egg, beef gelatin and porcine
gelatin [162]. The characterization was carried out by means of the relative
amount of aminoacids, calculated as the quotient between the
chromatographic peak area corresponding to each aminoacid and leucine
(A(AA)/A(leu)). This last analyte was chosen as reference, due to the
stability of its derivative. In order to improve the reliability of the
differentiation, the obtained data were statistically treated with Principal
Component Analysis. The score plot of the two first principal components
shows the statistic objects grouped by their protein origin with high
resolution. Finally, in order to evaluate the capability of prediction of the
proposed methodology, it was applied to the characterization of samples
from artworks belonging to the Valencian Cultural Heritage. Samples from
four artistic paintings were analyzed and in all of them egg protein was
clearly identified.
Otherwise, it is quite known that the metallic cations, usually coming
from pigments, can complex aminoacids, preventing the derivatization [160].
This effect results in a variation of the relative amount of aminoacid
determined by HPLC-fluorescence, and may be a serious trouble for the
characterization. To avoid it, the analysis of the samples from artistic
artworks was repeated adding a solution of ethylenediamino tetraacetic acid
disodium at pH 9 in ammonia/ammonium chloride, in order to complex the
SUMMARY. NATURAL WAXES
________________________________________________________
241
metallic cations. In this case, egg protein was also identified in the four
studied artworks, and better resolution was found.
The developed analytical procedure shows the advantage of the
detection of the arguinine, which is not possible in gas chromatography with
silica capillary column. Otherwise the main disadvantage is the no
quantification of the secondary aminoacids and cystein. However, the
characterization of the protein can be quite reliably performed with the 15
studied aminoacids by means of the chemometric treatment by Principal
Components Analysis.
3.2 Characterization of waxes by means of their relative amount of
linear alkanes and fatty acids in artworks by gas chromatography
The developed analytical method proposes the characterization of
natural waxes by analysis of their main constituents, linear alkanes (from 20
to 35 carbon atoms) and fatty acids (from 14 to 26 carbon atoms) using gas
chromatography with flame ionization detector.
The first step includes a treatment of the solid sample with
concentrated hydrochloric acid, at 110C for 16h, in order to break the ester
bond and release the fatty acids. Then these last compounds and the alkanes
were separated from the matrix by a liquid/liquid extraction with
chloroform/water, remaining in the organic phase. Furthermore, fatty acids
were turned in to their ethyl derivatives in order to improve their volatility
[163]. Alkanes are directly analyzable by gas chromatography and they do
no need any modification. Furthermore the solvent was evaporated and the
remaining solid was treated with ethyl chloroformate in ethanol/pyridine 4:1
v/v, a reagent widely employed to the ethylation of carboxylic and amine
groups, because of the reaction runs at room temperature with adequate
quantitativity and rapidity. Finally, the obtained mixture was extracted with
chloroform, and an aliquot of 1.5 L was injected into the chromatographic
system.
The separation by gas chromatography was performed in a capillary
column (14% cyano-propyl-phenyl-siloxane) as stationary phase, and the
carrier gas was helium running at 1.5 mL.min
-1
(constant flow). The injector
was made with a split ratio of 1:20. The initial temperature of the oven was
100C, and a gradient of 40C.min
-1
was applied until 275C (nearly 4.4 min)
and this last temperature was maintained for 25 minutes. Under these
conditions, the analytes were satisfactorily separated in 30 minutes without
interferences between them and other compounds. The quantification was
carried out by flame injection with hydrogen and synthetic atmosphere, at
300C with adequate sensitivity [165].
SUMMARY. NATURAL WAXES
________________________________________________________
242
Mixtures of standard hydrocarbons and fatty acids 1 mmol.L
-1
were
studied in order to obtain the retention time of each analyte. The following
hydrocarbons were directly analyzed by gas chromatography: n-eicosane, n-
heneicosane, n-docosane, n-tricosane, n-tetracosane, n-pentacosane, n-
hexacosane, n-heptacosane, n-octacosane, n-nonacosane, n-triacontane, n-
dotriacontane, n-hentriacontane, n-tritriacontane, n-tetratriacontane and n-
pentatriacontane. On the other hand the considered fatty acids (myristic,
palmitic, oleic, stearic, arachidic, behenic, lignoceric and cerotic) were
derivatized with ethyl chloroformate prior to the analysis. In both cases, the
analytes were detected without interferences in 30 minutes, with adequate
sensitivity and resolution. Moreover, no interference was found between
carboxylic acids and linear alkanes.
Studied natural waxes chosen were those most employed in encaustic
pictorial technique, and from different origin, as beeswax (animal), carnauba
(vegetal) and ceresin (mineral) [7]. A small sample of each one was
analyzed, obtaining adequate sensitivity without interferences with other
compounds in the matrix.
For the three standard waxes, the quotient between the
chromatographic peak area of each linear alkane and n-heptacosane
(A(H)/A(C27H)), as well as the ratio between the chromatographic peak area
of each ethyl carboxylate and ethyl palmitate ((FA)/A(C16)). These
compounds were chosen as reference because of their high amount in the
three considered standard waxes. In order to enhance the reliability of the
characterization, the obtained values were statistically treated with Principal
Component Analysis. The score plot of the two first principal components
shows the statistic objects clearly grouped by wax origin with high
resolution. Finally, in order to evaluate the capability of prediction of the
suggested analytical method, it was applied to the characterization of a
sample from an oleoresin belonging to the Mexican Cultural Heritage, where
beeswax was identified.
Waxes in pictorial artworks are often found mixed with other materials
as oils, proteins, resins, polymers, pigments, etc. Especially, oils contain
high amount of fatty acids, which are released during the acid hydrolysis and
are analyzed together with those from the wax, changing the relative amount
of carboxylic acids. In order to characterize the waxes in presence of oils, a
new PCA model was made, taking only the A(H)/A(C27H). The different
waxes appear even now separated. In this case, beeswax was also
characterized in the sample from the analyzed artistic sample.
This work introduces the use of ethyl chloroformate, which has not
previously used in wax analysis. However, its main disadvantage is the
lacking of information obtained about the structure of the triglycerides,
which decompose during hydrolysis.
SUMMARY. DRYING OILS
________________________________________________________
243
3.3 Characterization of drying oils by liquid chromatography coupled
to UV-Visible and fluorescence detector
The developed methodologies propose the characterization of drying
oils used in pictorial artworks by means of the relative amount of fatty acids
determined by liquid chromatography with UV-Visible and fluorescence
detector.
The first step lies in the breakage of the ester bond by hydrolysis with
concentrated hydrochloric acid, heating at 110C for 16 h [165]. The fatty
acids were extracted via a three times liquid/liquid extraction with water and
hexane (optimized parameters), remaining in the hydrophobic phase. Then
the analytes were derivatized with a chromogen (2-nitrophenylhydrazine)
[220] or a fluorescent reagent (4-bromomethyl-7-methoxicoumarine) [240].
The resolution of the fatty acids mixture was also performed with different
condition, depending on the detector.
a) UV-Visible. The fatty acid mixture was derivatized with 2-
nitrophenylhydrazine (2-NPH), using 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl
carbodiimide) hydrochloride as catalyst in acidic medium. The reaction was
carried out by heating with microwave oven at 260 W for 6 min, then a KOH
solution was added to stop the reaction, and the mixture was heated under
the same conditions for 3 minutes to decompose the by-products.
Furthermore, an aqueous solution of hydrochloride acid was added to acidify
the sample and to avoid the introduction of a basic solution into the injector.
Finally, the sample was filtered and was ready to the injection.
The chromatographic separation was performed using a hydrophobic
column Zorbax XDB-C8 as stationary phase, and the mobile phase was a
methanol/water/n-propanol/acetic acid 80/14/5/1 running under isocratic
mode at 1.2 mL.min
-1
. Injection loop volume was 20 L and the wavelength
detection was fixed at 400 nm.
The work was focused in the optimization of the reaction parameters
(solvent, pH, concentration of reagent, use of microwave oven, time, power
and post-derivatization treatment) and the chromatographic conditions
(adequate solvent for elution, detection wavelength). The study was carried
out using a 0.25 mmol.L
-1
solution of the more important fatty acids in aged
oil samples, myristic, palmitic, oleic and stearic. Under the proposed
conditions, the analytes provided gaussian shape chromatographic peaks,
and they were adequately resolved with enough sensitivity in 14 minutes.
b) Fluorescence. The fatty acid solution was derivatized by reaction
with 4-bromomethyl-7-methoxicoumarine (Br-Mmc), using 18-crown-6
ether and KHCO
3
as catalyst in acetone/acetonitrile 25/10 v/v medium. The
reaction was carried out by heating in a water bath at 55C for 25 minutes
SUMMARY. DRYING OILS
________________________________________________________
244
protected from light [240]. The mixture was then filtered and ready for
injection.
The chromatographic resolution of the fatty acids-derivatives was
performed using as stationary phase an apolar column Zorbax XDB-C8. The
composition of the mobile phase changed following a gradient programmed
from methanol/water 90/10 to 100/0 in 25 minutes, and run at 1.5 mL.min
-1
at 30C. Injection loop volume was 20 L and the excitation and emission
wavelenght were adjusted to 325 nm and 295 nm, respectively.
The parameters optimized were the concentration and volume of
reagents, as well as the parameters of the mobile phase (gradient program,
solvent, flow, temperature) and the emission wavelength. The optimization
was performed using the same solution and analytes as for UV-Visible
studies (0.25 mL.min
-1
of myristic, palmitic, oleic and stearic acids). In this
case, gaussian shape chromatographic peaks were also obtained, with
satisfactory sensitivity and without interferences.
For both methodologies, the analytical parameters were determined for
each studied fatty acid, using arachidic acid as internal standard. Under UV-
Visible detection, an ample linerarity was found between 3 and 300 nmol,
with a limit of detection of 1.5 nmol. Under fluorescence detection, the
linearity interval was 0.1-180 nmol, and the detection limit was 0.06 nmol.
As seen, the HPLC-fluorescence methodology provides 25-times sensitivity
than with UV-visible detection. However, the analytes were better resolved
under HPLC-UV-Visible conditions, especially palmitic and oleic, which
appears close in HPLC-Fluorescence. Otherwise, the analytical parameters
were found quite similar for the considered fatty acids.
The studied drying oils were those most usually used in oil paintings
as binding media: linseed, walnut and poppy seed [165]. In order to evaluate
the effect of the ageing in the chemical composition of the drying oils, the
study was focused on the analysis of fresh liquid oils, as well as naturally
aged for 5 years [289] and by two artificial accelerated ageing treatment
(thermic [18] and UV irradiation [163]). The characterization of the drying
oils was based on the relative amount of fatty acids, which were calculated
as the quotient of the chromatographic peak area for each fatty acid and the
palmitic acid. The fresh drying oils samples contain high amounts of
unsaturated fatty acids, especially linolenic, linoleic and oleic acid, which
are lost during the ageing. Only oleic acid was found in the aged samples,
depending on the ageing treatment. Otherwise, myristic acid was found in all
the studied samples in too low amount to be used as an identification
parameter. On the other hand, the ratio stearic/palmitic remains roughly
constant for each kind of drying oil, despite the ageing treatment, so this
quotient was considered as characterizing parameter. Using both suggested
SUMMARY. PROTEINS AND DRYING OILS
________________________________________________________
245
methodologies, the ratio (C18)/(C16) calculated for each standard was:
linseed oil 0,6; walnut oil 0.3 and poppy seed oil 0.2.
The capability of prediction of both methodologies was established by
applying them to the identification of the drying oil in samples from nine
samples from oil paintings from the Valencian Cultural Heritage. In eight
samples, linseed oil was characterized, whereas walnut oil was identified in
one artwork.
3.4 Characterization of protein and oil binding media by direct infusion
mass spectrometry
The purpose of the work detailed below was to propose a methodology
to characterize proteins and drying oils present in artworks as binding media
by means of the content in amino acids and fatty acids, respectively. The
detection was made through direct infusion mass spectrometry with
electrospray ionization (ESI), avoiding the fragmentation of the analytes.
The chosen standard agglutinants were the same as studied in section 1
(albumin, casein, egg, beef gelatin and porcine gelatin) and in section 3
(linseed, walnut, poppy seed, each one naturally and artificially aged via
thermic and UV-irradiation treatment). Analytical procedure was depending
on the kind of binding media:
a) Proteins. Samples were hydrolyzed with the procedure explained in
section 1. The extracted aminoacids were solved in ethanol/aqueous HCl 0.1
mol.L
-1
, and then infused into the mass spectrometer at 0.3 mL.h
-1
.
The parameters of the mass spectrometer were adjusted by
optimization with the following aminoacids, obtained after the hydrolysis of
a sample from beef gelatin (ordered by molecular mass): glycine, alanine,
serine, proline, valine, threonine, isoleucine, leucine, aspartic acid, lysine,
glutamic acid, methionine, histidine, phenylalanine, arguinine and tyrosine.
The sensitivity was found higher under positive polarity, a target mass of 90
m/z, with a scan range of 50-300 m/z. The parameters of the nebulizer were
optimized, by studying their influence over the sensitivity and
reproducibility, to: temperature 250C, gas pressure 25 psi and drying gas
flow rate 8 mL.min
-1
. Under these conditions each aminoacid appeared as
their [M+H
+
] ion without interferences, and the quantitative data was the
abundance ion. Only leucine, isoleucine and 4-hydroxyproline appear at the
same molecular mass (132 m/z). Then mass spectrometry-mass spectrometry
(MS
2
) was applied to differentiate these three aminoacids. Leucine and
isoleucine were not distinguished even by MS
2
, and 4-hydroxyproline was
not found in protein standard, this 132 m/z ion was assigned to isoleucine
and leucine mixture.
SUMMARY. PROTEINS AND DRYING OILS
________________________________________________________
246
b) Drying oils. A saponification was proposed to release fatty acids
from the triglycerides. Samples were hydrolyzed with potassium hydroxide
240 mmol.L
-1
in n-propanol/methanol 85:15 v/v by heating with heating
plate until solvent evaporation. Afterwards, the remaining solid was acidified
with concentrated hydrochloric acid in order to obtain the carboxylic acids.
Then they were extracted as described in section 3. Furthermore fatty acids
mixture is solved in potassium hydroxide 40 mmol.L
-1
in n-propanol/
methanol 85:15 v/v, and then the mixture was infused into the mass
spectrometer through a fused silica capillary by external pressure at 2 bars
[290]. The solvent was less concentrated in order to avoid the introduction of
salts in the mass spectrometer.
The instrumental parameters of the mass spectrometer were adjusted
by optimization considering the following fatty acids, obtained after the
hydrolysis of a sample from poppy seed oil aged by thermic treatment
(ordered by molecular mass): caprylic, pelargonic, capric, suberic,
undecanoic, azelaic, lauric, sebacic, myristic, palmitoleic, palmitic, linolenic,
linoleic, oleic and stearic. As the analytes were deprotonable, they were
introduced in a basic medium into the mass spectrometer and detected under
negative polarity. Then fatty acids were identified as their [M-H]
-
ion, with
adequate resolution, as each fatty acid has a different molecular mass, and
without interferences form other compounds in the matrix. The quantitative
information was provided by the abundance ion. Target mass was 255 m/z
corresponding to the ion or palmitate, and the scan range was 100-400 m/z.
The parameters of the nebulizer were adjusted to: temperature 200C, gas
pressure 25 psi and drying gas flow 5 mL.min
-1
.
The characterization of protein and oil binding media was made from
the relative amount of aminoacids and fatty acids, respectively. After
applying a normalization procedure, the obtained data were statistically
treatment with a supervised classificatory chemometric tool, Linear
Discriminant Analysis (LDA). Obtained results were:
a) Protein. The score plot of the two first discriminant functions shows
adequate separation between albumin, casein, egg protein and animal
gelatin. Therefore, another Principal Component Analysis was made
considering only beef and porcine gelatin, which were then satisfactorily
resolved.
b) Drying oils. The constructed model by LDA provided an adequate
resolution between linseed, walnut and poppy seed oil, despite their different
ageing.
The capability of the suggested methodologies to identify the
agglutinant in complexes matrix was established by applying them to
samples from pictorial artworks belonging to the Spanish Cultural Heritage.
SUMMARY. TERPENIC RESINS
________________________________________________________
247
The same four samples as in section 1 containing protein binding media
were studied, where egg protein was also found in all of them. On the other
hand, nine samples from oil paintings were studied, in one of them walnut
oil was identified whereas linseed oil was characterized in the other eight
artworks.
The main advantage of the developed methodologies was the
suppression of the derivatization and the separation step. This simplification
of the experimental procedure results in an improvement of the
straightforwardness, reproducibility, speed and robustness. Moreover, as the
analytes were separated by their molecular mass, a high resolution found.
3.5 Characterization of the compounds in varnishes of Italian string
instruments by gas chromatography coupled to mass spectrometry
The aim of the work was the characterization of the organic
constituents of historical varnishes from ancient Italian string instruments, a
Maler lute ( 1529-1552), Venere theorbo (1606) and Stradivari violin
(1724) , kept in the Muse de Musique in Paris, by gas chromatography-mass
spectrometry. The work was performed in the laboratories of the Centre of
Research and Restoration of the French Museums, Muse du Louvre, Paris,
France.
The standards chosen for the analytical study were several materials
traditionally used in the elaboration of wood-object varnishes: essential
(turpentine and spike oil) and drying oils, additives (camphor and benzoin)
diterpenic resins (colophony, Venice turpentine, sandarac and Manila copal),
triterpenic resins (dammar and mastic) and animal resin (shellac). These
materials are mainly made of fatty and polyhydroxycarboxylic, terpenic and
aromatic acids, as well as alcohols, ketones and aldehydes [5,7].
The analytical procedure included a first step of methylation by
transesterification in order to break down the intermolecular bond and
improve the volatility of the analytes. The derivatization was carried out by
reaction with a quaternary ammonium ((m-trifluoromethylphenyl)
trimethylammonium) solved in methanol, at 80C for 16 h. Then a second
reaction was performed to block the alcohol groups by silylation. The
methylated sample was treated with N-O-bis[trimethylsilyl]
trifluoroacetamide and trimethylchlorosilane, as catalyst, (99/1 v/v) by
heating at 70C for 15 minutes. After each derivatization, an aliquot of 1 L
was injected into the gas chromatograph.
The chromatographic resolution was carried out in an apolar capillary
column Varian CP-Sil 5 CB Low Bleed/MS. Carrier gas was helium running
at a constant flow of 1.3 mL.min
-1
. Injector temperature was 300C. Oven
initial temperature was 40C, maintained for 1.5 min during splitless
SUMMARY. SYNTHETIC POLYMERS
________________________________________________________
248
injection. Then a 10C.min
-1
gradient was applied until 180C, and another
gradient of 4C.min
-1
was applied until 325C, temperature that was
maintained for 8 min. The mass spectrometry ionization was made under
standard conditions at 70 eV, and the detector scanned from 50 to 850 m/z.
Each standard and samples from string instrument varnishes were
analyzed following the detailed procedure, and their corresponding
compounds were identified by means of the retention time and the mass
spectrum. Then, for each standard, the mass spectrum of the highest
chromatographic peak was introduced in a database, together to other useful
information as the retention time, the name, reference material and the
relative intensity in decreasing order. Furthermore, the chromatographic
peaks found in the samples from historical violins were compared with those
stocked in the database, in order to identify them and propose hypothesis
about the reference materials in the varnishes.
The obtained results points to the use of linseed oil as solvent for the
varnishes. The hypothesis about the characterization of the resinic material
can be summarized as follows:
a) Maler Lute. Traces of highly oxidized Pinaceae resin, probably
Venice turpentine or colophony were found, as well as triterpenic
compound, perhaps coming from elemi.
b) Venere theorbo. Venice turpentine was a constituent of the varnish,
together or not with another Pinaceae resin. On the other hand, the sample
showed a highly oxidized state.
c) Stradivari violin. A Pinaceae resin, probably Venice turpentine was
characterized; however, the use of colophony can not be excluded.
3.6 Characterization of synthetic resins in modern artworks by
pyrolysis-gas chromatography-mass spectrometry
The purpose of work was the characterization of a wide range of
polymeric resins used in the elaboration of artworks from the 19
th
Century,
or in conservation or/and restoration treatment of ancient artistic or
archaeologic objects. These materials were studied by an analytical
procedure based on pyrolysis-gas chromatography-mass spectrometry. Then
the procedure was applied to samples from a modern pictorial artwork from
the German artist Georg Baselitz (Senta 1992/93), from the Munich
collection. The analytical study was carried out in the laboratories of the
Doerner Institut, Bayerische Staatsgemldesammlungen, Munich, Germany.
The selected synthetic materials were resins build by carbon-double
radical polymerization (polystyrene, saturated hydrocarbon resin, inden-
benzofuran polymer, polyvinyl acetate, butanal polyvinyl, and polyacrylate)
and condensation polymers (ketonic resins, phenol-formaldehyde, alkyd and
SUMMARY. SYNTHETIC POLYMERS
________________________________________________________
249
polyacrolein) [6,7].
The solid sample from standard or pictorial artwork was introduced in
a crucible and pyrolyzed by the Curie-point method at 590; 650 or 764C,
without previous treatment or derivatization. The fragments were then
introduced in splitless mode in the chromatographic system. The injector
temperature was 250C. The separation was performed in a (5%-phenyl-
methyl-polysiloxane) Low Bleed capillary column HP 5MS, and the gas
carrier was helium running at a constant flow of 0.5 mL.min
-1
. The initial
oven temperature was 50C, maintained for 2 min, and then a 10C.min
-1
gradient was applied until 320C (nearly 29 min). The mass spectrometry
ionization was made under standard conditions at 70 eV, and the detector
scanned from 42 to 550 m/z.
For each standard material, the compounds obtained by thermic
breakage were identified by means of their corresponding mass spectrum.
Furthermore, for each detected fragment, the information regarding on the
retention time, mass spectrum, name and standard material was stocked.
Special attention was paid over the fragments which structure is close to the
monomer of the synthetic resin, and which would be more useful to its
characterization in unknown samples. Furthermore, the chromatographic
peaks found in samples from modern artworks were compared with those
obtained by analysis of the standards, in order to propose hypothesis about
the materials in its composition.
The results obtained in the analysis from Baselitz artwork points to the
presence of ketonic resin. Some additives as drying oils, paraffin wax, an
antioxidant and a plastifiant were also identified.
251
VII I. ANALYTI CAL STUDY OF
SYNTHETI C POLYMERS I N
ARTWORKS
VIII. SYNTHETIC POLYMERS. EXPERIMENTAL
________________________________________________________
253
CHARACTERIZATION OF SYNTHETIC RESINS USED IN
MODERN ARTWORKS BY GAS CHROMATOGRAPHY
COUPLED WITH MASS SPECTROMETRY BY PREVIOUS
PYROLYSIS
1. Experimental
The analytical methodology explained as follows was proposed to
characterize synthetic resins by pyrolysis-GC-MS. The solid sample was
directly introduced into the pyrolyzer without previous treatment or
derivatization. Then the study of the pyrograms obtained by means of the
analysis of the standards allows to determine the fragments, which
characterize each synthetic polymer. Finally, the proposed method was
applied to samples from a modern pictorial artwork. The corresponding
pyrogram provided adequate information to characterize a polymeric resin
and several additives.
1.1 Standards
Synthetic resins selected for the analytic study, together to their
physical characteristics, supplier and inventory number, are exposed in the
Table 38. These polymers belong to the collection of standard reference
materials, stored in the Doerner Institut, Munich Paintings Collection
(Bayerische Staatsgemldesammlungen), the institution in charge of the
restoration, conservation, care and maintenance of the artistic paintings
deposited in the Art Galleries and Museums of the State of Bavaria.
1.2 Description of the samples from artworks
Samples from artworks were taken by scalpering from a painting by
the German painter Georg Baselitz (Senta, 1992/1993), stored in the
restauratuion workshops of the Munich Paintings Collection (Bayerische
Staatsgemldesammlungen), and supposed to be carried out in acrylic resin.
The two samples were taken from two zones on the surface, painted with
blue and black pigment, respectively, near the frame.
VIII. SYNTHETIC POLYMERS. EXPERIMENTAL
________________________________________________________
254
Table 38. Origin and characteristics of the studied polymeric resins.
resin shape color supplier (year)
inventory
number
polyvinyl
polystyrene
Kraton G 1950 small pieces (gummy) white unknown (1996) 90.39.09
Kraton G 1957 small spheres (hard) white unknown (1998) 90.39.10
saturated hydrocarbon resin
Arkon P90 small pieces white unknown (1998) 90.39.12
indene-benzofurane resin
cumarone
pieces and powder
(homogenous)
brown unknown 90.39.3
polyvinyl acetate
Mowilith 20 small pieces and powder white Fa (Hoest) 90.39.17.1
Mowilith 30 small pieces white unknown ( 1984) 90.39.17.2
Mowilith 40 small spheres (hard) white unknown ( 1984) 90.39.17.3
Mowilith 50 small spheres (hard) white Kremer Pigmente 90.39.17.4
PVAc AYAA pieces white
Constr. Mat. Ltd.
(Brooklyn) (1988)
90.39.8.1
PVAc AYAF small spheres white 90.39.8.3
PVAc AYAT small spheres white 90.39.8.4
PVAc AYA pieces white
Constr. Mat. Ltd.
(1987)
90.39.8.2
Palmer Cement compact
transparent
colorless
unknown 90.39.19.1
Polyvinyl butyral
Mowital B20H powder white unknown ( 1980) 90.39.18.1
Polyacrylic
Paraloid* very viscous red Berkes ---
Acrylic-based
Titanium
pigment
in tube (doughy) white Golden Acrylics 18.11.1
Condensation polymers
Alkyd
Alkyd solidified liquid yellow Kremer Pigmente 90.39.15
Ketonic resin
AW2 powder white unknown 90.39.13
AW2 compact red unknown 90.39.14
Keton N pastilles light yellow
State Museum of
Lower Saxony
(Hannover)
90.39.16
Laropal A81 small spheres (hard) white unknown 90.39.11
Phenol-formaldehyde
Phenol Resin big pieces black unknown 90.39.6
Phenol Resin crystals and powder red-brown unknown 90.39.4
Polyacroleine
Akroid
pieces and powder
(homogenous)
red
Bender and Hobein
(Mnchen)
90.39.1
*liquid resin, the other described standards are solid materials
VIII. SYNTHETIC POLYMERS. EXPERIMENTAL
________________________________________________________
255
1.3 Instrumentation
Analyses were performed using the following instrumentation: a
Curie-point pyrolyzer Pyromat V.108 (GSG Me- und Analysengerte,
Bruchsal, Germany), connected to a gas chromatograph 6890N (Agilent),
coupled to a mass spectrometer MSD, 5975C Inert mass (Agilent). The
chromatographic resolution was achieved through a capillary column HPM
5MS/Low Bleed (5%-phenyl)methylpolysiloxane, (length: 30 m, internal
diameter: 250 m, film thickness: 0.25 m), and maximal temperature
325C. Carrier gas was helium running at a constant flow of 0.5 mL.min
-1
(15 cm.s
-1
. Injector was under splitless conditions.
The chamber of the pyrolyzer was firstly at 200C, and the pyrolysis
was achieved at the selected temperature for 10 s. Injection temperature was
adjusted to 250C, producing an initial pressure over the column cap of 89
kPa. The initial temperature of the oven was 50C, maintained for 2 min,
then a 10C.min
-1
gradient was applied to 320C (29 min). Ionization was
performed under standard conditions at 70 eV, with a voltage of 200 V. The
temperature of the source was adjusted at 250C, whereas the temperature of
the quadrupole was 100C. The mass spectrometer was scanned in the 42-
550 m/z range, with 2.87 cycle.s
-1
.
1.4 Experimental procedure
The sample was introduced in the crucible with a scalpel, adding as
less amount as possible. Then the crucible was fitted into a hollow glass
cylinder, which was set up in the pyrolyzer syringue.
Pyrolysis was achieved by Curie-point method. Crucibles for 590; 650
and 764C were available to perform the analytical study.
After each pyrolysis, crucibles were treated with the following clean-
up protocol: used crucibles were ultrasonicated in methanol (HPLC grade,
Fischer) and then other time with tetrahydrofurane (HPLC grade, Fischer).
Pyrolyzer syringue was cleaned following the same procedure.
Sampling was performed depending on the characteristics of the
standard polymeric resin:
- Kraton G1650, Kraton G1657, Arkon P90, Mowilith 20, Mowilith 30,
PVAc-AYAA, Palmer Cement, Acrylic Pigment, Alkyd, AW2 (90.39.14),
Laropal A81. The aliquot was obtained cutting the synthetic resin with a
scalpel.
- Coumarone resin, Mowital B20H, AW2 (90.39.13), Phenol Resin
(90.34.4), Akroid. A grain of powder was directly taken.
- Mowilith 40, Mowilith 50, PVAc-AYAF, PVAc-AYAT, PVAc-AYA. The
material was previously softened by drenching in ethanol, and then the
aliquot was obtained by cutting with a scalpel.
- Paraloid. Sample was taken with a micropipette.
VIII. SYNTHETIC POLYMERS. RESULTS AND DISCUSSION
________________________________________________________
256
- Keton N, Phenol Resin (90.34.6): a piece was powdered with an agatha
mortar, and a particle of the powder was taken.
2. Results and Discussion
Synthetic resins are a wide category of modern material with an
extensive variety of formulations and functionalities. These polymers have
been employed in the field of art since the 19
th
Century, as base-materials in
pictorial artworks, as well as in conservation/restoration treatment more
ancient artistic artworks, so that they can be found in a wide number of
objects with artistic or historical interest. The characterization of the several
kinds of synthetic materials used by the artist or the conservator is of the
utmost importance to propose adequate conservation and restoration
treatments [6].
The proposed analytical methodology to analyze synthetic polymers
is based on the direct pyrolysis of the solid sample, without previous
treatment or derivatization adding, followed by the resolution of the obtained
fragments mixture by gas chromatography and their individual identification
by means of their corresponding mass spectrum. Firstly, a wide set of several
synthetic resins used in artistic purpose (described in the section 1.6 of the
Chapter III and exposed in Table 38, section 1 of this Chapter), storing the
obtained information about the characteristic fragments of each material, as
well as about other minority detected compounds.
The applied instrumental conditions were previously optimized in an
earlier study to characterize synthetic pigments in artworks, because these
materials are usually analyzed together in real samples. However, pyrolysis
temperature was optimized for each studied synthetic resin. Finally, the
suggested analytical methodology was applied to identify synthetic resin in
samples from artworks, by means of the comparison of the detected
fragments with those characteristic of each standard. Other organic
materials, as drying oil, waxes and plasticizer were likewise identified.
2.1 Study of standard synthetic resins
The analysis of samples from the standards, through the experimental
procedure by Py-GC-MS described previously, provided the corresponding
pyrogram, together with the mass spectrum of the most intense
chromatographic peaks.
The influence of the temperature on the thermic breakage was studied
by comparison, for each synthetic resin (Table 38 in section 1 of this
Chapter), of the pyrograms obtained by pyrolysis at 590; 650 and 764C. In
the case of polystyrene (Kraton G), saturated hydrocarbon resin (Arkon
P90), indene-benzofurane resin (coumarone resin), polyvinyl acetate
VIII. SYNTHETIC POLYMERS. RESULTS AND DISCUSSION
________________________________________________________
257
(Mowilith, PVAc, Palmer Cement), polyvinyl butyral (Mowital B20H),
ketonic polymer (AW2, Laropal A81), phenol-formaldehyde resin and
polyacroleine, no significant dissimilarities were found, in terms of
fragments detected in the pyrograms, at the considered temperatures.
However, the Acrylic-based Titanium pigment, Paraloid and Keton N
pyrograms are clearly dependent on the temperature pyrolysis.
The obtained fragments provided useful information about the
structure of each polymer, the presence of interferences or additives and the
characterization of the synthetic resin in a complex matrix. Therefore, the
fragments with a structure close to the monomer were considered as
characteristic, and were most helpful for the characterization of the
corresponding synthetic resin. Other detected fragments could be considered
as oligomers or the result of reorganization of some products formed during
the pyrolysis.
The list of the fragments detected in the scope of this wide study, is
detailed in Table 36 (Chapter V, section 6, heading table at the end of this
Chapter) indicating their retention time and most intense ion. The fragments
detected in each standard and modern painting samples are indicated in
Table 37 (Chapter V, section 6, heading table at the end of this Chapter).
2.1.1 Vinylpolymers
The following polyvinyl resins were studied: a styrene-
ethylene/butylene-styrene (SEBS) polymer (Kraton G1650 and Kraton
G1657 commercial version), a saturated hydrocarbon resin (commercial
name Arkon P90), one indene-benzofurane polymer (coumarone resin),
polyvinyl acetate (three commercial versions: Mowilith, PVAc and Palment
Cement), polyvinyl butyral (Mowital B20H) and polyacrylic resins (Paraloid
and a commercial acrylic-based Titanium pigment). These resins are
exposed in Table 38 (section 1 of this Chapter).
Pyrograms from SEBS commercial polymer analysis showed a high
amount of styrene, which was considered as the characteristic fragment, and
toluene. The other monomers (ethylene and butylene) do not appear, due to
their low molecular mass and high volatility. In the sample from Kraton
G1657, hydrocarbons were also found, probably coming from the sieving for
purification.
The characteristic fragments of Arkon P90 were saturated
alkylcyclohexanes, as methylcyclohexane, ethylcyclohexane, 1-ethyl-3-
methylcyclohexane, (1-methylethyl)cyclohexane and 1-ethyl-4-
methylcyclohexane, which come from the saturated polycyclic structure of
the resins. Other detected fragments were alkylcyclohexene, indene and
decahydronaphthalene.
VIII. SYNTHETIC POLYMERS. RESULTS AND DISCUSSION
________________________________________________________
258
The following compounds of coumarone resin were detected by Py-
GC-MS and considered as identifying: benzofurane, indene,
methylbenzofurane and methylindene, the monomer of the resin. Several
compounds with aromatic rings were also found.
The pyrolysis products of polyvinyl acetate were mainly acetic acid,
from the polymer, and benzene, formed by reorganization of smaller
fragments. Naphthalene, bi-phenyl and a wide group of alkylbenzenes were
also detected. However, in the Palmer Cement, acetophenone and
benzaldehyde, probably from the solvent of the polymer, could be as well
identified. These three kinds of polyvinyl acetate would probably be by this
way indistinguishable in a complex matrix.
The pyrogram of the polyvinyl butyral Mowital B20H shows as
characteristic fragments the following compounds: butanal, obtained from
the thermic breakage of the polymer, and benzene, formed from
reorganizations of other fragment, by the same way as in polyvinyl acetate.
On the other hand, butanoic acid, benzaldehyde, 3-penten-2-one and several
alkylbenzenes were also identified.
The study of an Acrylic-based Titanium pigment was performed in
order to enlarge the information about the behaviour of acrylic polymers
during the pyrolysis. The characteristic fragments were the following acrylic
monomers: methyl acrylate, methyl methacrylate, ethyl methacrylate,
isobutyl acrylate, butyl acrylate, isobutyl methacrylate and butyl
methacrylate. The antioxidant butylated hydroxytoluene was as well
identified. The fragmentation was depending on the pyrolysis temperature.
At 590C, a wide amount of compound with aromatic rings, as ethylbenzene
and naphthalene, as well as polysubstituted cyclohexadienones and other
high-weighted molecules not identified. However, at 650C a lower quantity
of compound was detected in the pyrogram, whereas at 764C there is an
intermerdiate situation.
The Paraloid polymer was studied in order to identify and classify it.
The pyrolysis fragments were: methyl acrylate, methyl methacrylate, ethyl
methacrylate and methacrylic acid. Nevertheless, the main compounds were
ethyl methacrylate and methyl acrylate, so that the sample was characterized
as Paraloid B72 (EMA/MA). Several alkylbenzenes, probably from the
solvent or by reorganizations during the pyrolysis, were also found. On the
other hand, the shape of the pyrogram depended on the temperature of the
pyrolysis. At 590C and 764C, 1-(4-ethylphenyl)ethanone, several high-
weighted compounds and traces of plasticizer, which were not detected at
650C. It can be assumed that acrylic polymers provided more fragments at
590C.
VIII. SYNTHETIC POLYMERS. RESULTS AND DISCUSSION
________________________________________________________
259
2.1.2 Condensation polymers
The following condensation polymers were analyzed for this study:
alkyd resin, ketonic resin (four commercial products: powdered AW2 with
inventory number 90.34.13; compact AW2 with inventory number 90.34.14;
Keton N and AW2), phenol-formaldehyde resin (two commercial products,
inventory numbers 90.39.4 and 90.39.6) and polyacroleine (Akroid). These
materials, together with their shape and inventory numbers are described in
the Table 38 (section 1 of this Chapter).
In alkyd resin was detected a large amount of phthalic acid, together to
phenolic compounds, which were probably formed from this last one, traces
of oleic acid, short fatty acids, and carbonyl compounds. Phthalic acid was
considered as characteristic fragment.
The pyrograms obtained by the analysis of the samples from powdered
AW2 (n 90.34.13), showed the following characteristic fragments:
cyclohexanol, cyclohexanone and several alkylderivatives, which come
clearly from a ketonic polymer. Moerover, cycloxenes, santene, and other
saturated polycyclic hydrocarbons were besides detected.
By analysis of the sample from compact AW2 (n 90.34.14), several
acrylic monomers (isobutyl methacrylate, 2-methylpropyl methacrylate and
2-ethylhexyl methacrylate) and alkylbenzenes were identified, whereas no
characteristic fragments of a ketonic resin were found. Probably, the studied
material was an acrylic polymer mistakenly labelled.
The characteristic fragments found in the Keton N polymer were the
same as in AW2: cycloxexanol, cyclohexanone and alkylcyclohexanones.
Other detected compounds were santene, octahydropentalene,
tricyclododecene and other high-weighted unidentified molecules. In this
case, more fragments were found after pyrolysis at 764C.
The following compounds were detected after Laropal A81 pyrolysis:
Z-1-1(butenyl)azirine, 2,2-dimethyl-1S-propanediol, 3-hydroxy-2,2-
dimethylpropanal, methyl 2,2-dimethyl-3-hydroxypropanate, benzonitrile
and a large amount of unidentified substances. The fragments considered as
characteristic were the most intense: methyl 2,2-dimethyl-3-
hydroxypropionate and two peaks at t=10.214 and t=13.92, which their
molecular ions appears at 187 and 287, respectively. Benzonitrile might not
used as characteristic, because it can be also found by pyrolysis of synthetic
pigments.
The characteristic substances of Phenol Resin n 90.39.4 were a wide
variety of alkylphenols. Naphthalenes and high-weighted methanoazulenes
were also detected. Otherwise the other studied Phenol Resin (n90.39.6)
provided by pyrolysis a large amount of alkylphenols (characteristic
fragments), as well as hydroxybenzaldehydes and alkylbenzenes.
VIII. SYNTHETIC POLYMERS. RESULTS AND DISCUSSION
________________________________________________________
260
The following compounds were detected in the pyrogram from
polyacroleine (Akroid) analysis: alkylbenzenes, alkylphenols,
metoxybenzenes, metoxyphenols, benzaldehydes and other ketones. In this
case, the monomeric unity of this polymeric resin (propenal) is very volatile
and low weighted, so that it could not be detected. For this material no
characteristic fragments were considered.
2.2 Study of samples from a pictorial modern artwork
The information provided by the analysis of the standard synthetic
polymers was employed to characterize the resin in a modern painting from
the contemporary German artist Georg Baselitz (Senta, 1992/1993)
(Figure 43). The author was born in 1937 in Deutschbaselitz (Saxony,
Germany) and is considered as one of the greatest exponents in the modern
artistic painting in Germany. The painting was supposed carried out in
acrylic paint, because it is a material often used by the artist. The samples
were obtained from two zones, stained in blue and black pigment,
respectively.
Figure 42. Pyrograms (TIC), from the analysis of the blue (a) and (b) samples from a Baselitz
paint ing (Senta, 1992/1993). Characteristic compounds are indicated with coloured
rectangles as follows: yellow for drying oil, red for ketonic polymer, green for polyacrylics
and blue for phenol-formaldehyde resins. Time regions with a continuous series of
hydrocarbons are marked with a horizontal straight line. The following additives are as well
marked: butylated hydroxytoluene ( ) (antioxidant) and phthalic ester (+) (plasticizer).
VIII. SYNTHETIC POLYMERS. RESULTS AND DISCUSSION
________________________________________________________
261
The thorough study of the pyrograms obtained from the analysis of the
artistic samples allow to establish the presence of compounds corresponding
to the standard synthetic resins, as well as some additives and other materials
in the painting. The pyrograms from the study of the blue dyed sample (at
590C), and black pigmented sample (at 764C), are shown in the Figure 42.
In both cases, a wide amount of hydrocarbons was detected. A series
of linear alkanes, even and odd, were identified, so that they do not probably
indicate the presence of beeswax. This n-alkane distribution indicated that
they can be considered as traces of paraffin. The antioxidant butylated
hydroxytoluene and the monoterpenes camphene and -canphenal were also
detected.
The alkylbenzenes detected in the analysis of almost studied standards
are probably the result of reorganizations of other small fragments. For this
reason, they do not provide significant information for the characterization
of the synthetic resins.
Figure 43. Modern pictorial
artwork: Georg Baselitz,
Senta, 1992/1993, painting
on canvas, 100.5 x 71 cm,
Bayerische
Staatsgemldesammlungen
Inventory number 1785
VIII. SYNTHETIC POLYMERS. RESULTS AND DISCUSSION
________________________________________________________
262
2.2.1 Blue pigmented sample
The detection of short chain fatty acids and aldehydes is not enough to
establish the presence of oil material, because long fatty acids, as palmitic,
oleic or stearic acid have not been detected. Phthalic ester, a plasticizer
additive, was as well identified.
The detection of several characteristic fragments of ketonic resin
(cyclohexanone, 2-methylcyclohexanone and 2-ethylcyclohexanone) pointed
to the use of a ketonic polymer as AW2 or Keton N. On the other hand, the
detection of methylpropyl methacrylate is not sufficient to propose the use of
a polyacrylic resin.
2.2.2 Black pigmented sample
The detection of stearic, oleic and stearic acid, together to their
degradation products, as short fatty acids, aldehydes and ketones, so that a
drying oil was probably used in the painting.
The following fragments were identified in the sample:
cyclohexanone, 2-methylcyclohexanone and 2-ethylcyclohexanone,
characteristic of ketonic polymers, as AW2 or Keton N. This kind of resin
has been probably used to carry out the painting. Several phenol compounds
were also found, but as the aromatic rings can be formed by reorganization,
the presence of a phenol-formaldehyde resin can not be suggested.
Table 36. Analytical parameters of the obtained fragments by means of the study of the
samples from standards and from a modern pictorial artwork by Py -GC-MS. The following
information is indicated: order and elution time under the applied separation chromat ographic
conditions; name (if identified) or m/z of the molecular ion (IM); most intense ions in the
mass spectrum.
Table 37. Detected fragments through the analysis by Py -GC-MS in each sample from
standard synthetic resin* and the modern painting**. (The numeration of the fragments
corresponds to that in Table 36). The compounds indicated with ( ) are those considered as
characteristic of each resin, whereas those marked with (X) are other substances detected in
the analysis.
*Reference materials (commercial name): 1=Kraton G1650; 2=Kraton G1657; 3=Arkon P90;
4=coumarone resin; 5=Mowilith; 6 =PVAc; 7=Palmer Cement; 8=Mowital B20H; 9=Acrylic
Pigment; 10=Paraloid; 11=AW2 (90.39.14); 12=AW2 (90.39.13); 13=Keton N; 14=Laropal
A81; 15=Phenol Resin (90.39.4); 16=Phenol Resin (90.39.6); 17=Alkyd and 18=Akoid.
**Samples from a modern painting by Baselitz, pigmented in 19=blue and 20=black.
263
IX. CONCLUSI ONS
VI. CONCLUSIONS
________________________________________________________
265
The performed research has allowed the development of several
analytical methodologies to characterize a wide set of organic materials used
in the making of pictorial layers and varnishes in artworks: proteins, natural
waxes, drying oils, terpenic resins and synthetic polymers, according to the
proposed aims. These methodologies are based on the following analytical
techniques: HPLC-UV-Visible, HPLC-Fluorescence, GC/FID, GC/MS and
Py-GC/MS, as well as direct mass spectrometry. The proposed methods
were successfully applied to identify materials in real samples from pictorial
artworks. As conclusions derived from this extense study, the following
statements can be emphasized:
1. Liquid chromatography with fluorescence detector allows the
differentiation between proteins used as binding media, as bovine gelatine,
beef gelatine, albumin, casein and egg.
1.1 The reaction between the amino acids and o-phthalaldehyde
provides fluorescent derivatives with adequate sensitivity, detection limit
and linear interval, and useful to detect the analytes from the standard
proteins and extracted from samples from pictorial artworks.
1.2 The instrumental conditions of the liquid chromatograph (eluent
composition, gradient programm, stationary phase, flow and temperature)
were established. These fixed parameters provided an adequate separation of
the amino acid derivatives, without interferences with other compounds from
the matrix.
1.3 The characterization of the proteins was satisfactorily performed
by means of the relative amount of amino acids, calculated from the quotient
between the chromatographic peak area of each OPA-amino acid derivative
and the OPA-leucine.
1.4 The proposed methodology has been evaluated by means of its
application to a set of samples from pictorial artworks made of tempera. In
these cases, egg protein was clearly characterized.
2. A chromatographic method to characterize natural waxes, as beeswax,
carnauba wax and ceresin has been developed. The unequivocal
identification was carried out using the relative amount of hydrocarbons and
fatty acid in each sample as characterizing parameters.
2.1 Carboxylic acids were derivatized with ethylchloroformate, in
order to obtain the corresponding volatile derivative. The chromatographic
conditions were also adjusted to adequately separate the linear alkanes and
the ethyl carboxylates.
2.2 A methodology based on the acid hydrolysis of the sample
VI. CONCLUSIONS
________________________________________________________
266
followed by an extraction with an organic solvent, in order to separate the
analytes form the other compounds in the matrix, was performed.
2.3 The characterization of the natural waxes is based on the
calculation of the quotients of the area of the chromatographic peaks
corresponding to the linear alkanes from C20H-C35H by n-heptacosane, and
the ratio of the area of the chromatographic peaks corresponding to each
ethyl derivative of myristic, oleic, stearic and arachidic acids, by ethyl
palmitate. The chemometric treatment of the obtained values, by means of
Principal Component Analysis, provides an adequate discrimination between
beeswax, carnauba wax and ceresin. Therefore, the analyzed samples appear
in the score plot grouped by the kind of natural wax.
2.4 A second statistical treatment by PCA was performed to make a
distinction between the natural waxes, when they are mixed with other
materials containing fatty acids. Then, only the linear alkanes were chosen as
statistical variables. The standard natural waxes were also differentiated with
this chemometric model.
2.5 The proposed analytical method was successfully applied to the
characterization of natural wax in samples from an oleorresin pictorial
artwork.
3. A methodology to characterize drying oils using HPLC coupled to UV-
Visible and Fluorescence detectors has been achieved. Aged and fresh
standard drying oils from several origins (linseed, walnut and poppy seed)
were selected in order to evaluate the influence of the dammage in the
identification of the oil binding media.
3.1 The proposed experimental procedure to release and separate the
fatty acids from the matrix was an acid hydrolysis, followed by a
liquid/liquid extraction with hexane. The use of this apolar solvent improves
the procedure, because it reduces the incorporation of polar interferents in
the chromatographic system, and provides less complex chromatograms.
3.2 The optimization of the parameters of the derivatization reaction of
the fatty acids with 2-nitrophenylhydrazine (microwave oven, power and
reaction time) for the UV-Visible detection and with 4-bromo-7-
metilcoumarine for fluorescence detection, was carried out. In both cases,
satisfactory values of limit of detection, sensitivity and linear interval, for
the detection of the analytes in the stantard drying oils and in the samples
from artistic artworks were obtained. The fluorescence detection
methodology provided higher sensitivity than that based on UV-Visible
quantification.
3.3 Chromatographic parameters, as stationary phase, mobile phase
(composition, gradient program, flow), temperature and detector lengthwave.
In both cases, an adequate separation of the fatty acid derivatives was
obtained, without interferences between them or with other compounds in
VI. CONCLUSIONS
________________________________________________________
267
the matrix, in less than 15 minutes.
3.4 The differentiation of linseed, walnut and poppy seed oils was
carried out by means of the quotient between the area of the
chromatographic peak corresponding to the derivatives of stearic and
palmitic acids. This parameter remains roughly constant from the ageing of
the oil binding media, and varies according to the kind of drying oil.
3.5 The optimized methodologies allow the characterization of linseed
and walnut oil in samples from several oil paintings from the Renacentist
period.
4. The use of direct mass spectrometry allows the development of analytical
methodologies without derivatization or resolution steps, to characterize
protein and oil paintings.
4.1 A procedure was established to release the fatty acids from the
drying oils, based on the saponification of the triglycerides, followed by an
acidification. The carboxylic acids were then separated from the matrix by a
liquid/liquid extraction with hexane. This experimental procedure allows to
obtain the fatty acids in a significatively smaller time (5 minutes) than under
acid hydrolysis conditions (24 hours).
4.2 The following instrumental conditions of the mass spectrometer
were optimized: capillary and skim of the ion trap voltage, polarity, target
mass, scan interval, nebulizer pressure, dry gas and nebulizer temperature.
The fixed conditions provided high sensitivity and reproducibility for the
detection and aminoacids and fatty acids.
4.3 The characterization of protein and oil binding media was achieved
by means of a chemometric treatment by Linear Discriminant Analysis
applying the obtained amount of amino acids and fatty acids, as statistical
variables. For both kinds of materials, the studied categories of protein and
drying oils were clearly differentiated. In the case of the drying oils, a
discrimination attending on the ageing treatment was even achieved.
4.4 The suggested methodology was applied to samples from tempera
or oil paintings, in order to characterize the binding media used in each one.
These results agreed with those obtained in the analytical studies carried out
by liquid chromatography (Conclusions 1.4 and 3.5).
5. The study of the organic fraction in varnishes from music instruments has
been achieved by means of gas chromatography coupled to mass
spectrometry. The comparison of the compounds detected in the standards
and those found in the samples from string instruments allows the
identification of the materials used in the elaboration of the varnishes.
5.1 A wide set of materials described in recipes of varnishes for
Renacentist wood objects was selected as standard. These materials were
mainly terpenic resins and essential oils.
VI. CONCLUSIONS
________________________________________________________
268
5.2 A derivatization of the compounds with carboxylic groups, in
order to improve their volatility and allowing them to be analyzable by GC.
Then the reaction conditions, as temperature and reaction time were
optimized. Moreover, an experimental procedure was established to silylate
hydroxi groups, improving the chromatographic resolution and the mass
spectrometric detection.
5.3 The instrumental conditions adjusted for the gas chromatograph,
as the chosen capillary column and temperature program, allowed the
separation of the compounds of interest detected: 97 compounds in 11
standards and several samples from 3 ancient musical instruments, in less
than 60 minutes. The splitless injection allowed to reach a huge sensitivity, a
decisive parameter, due to the low amount of sample available, because of
the important artistic value of the studied string music instruments.
5.4 Proposed methodology could be used to detect an extense variety
of compounds in the stantard material. Then the obtained information about
each one (mass spectrum, retention time, identification, material from it
comes and decreasing intensity order) was stocked in a database.
5.5 Samples from varnishes of historical Italian string instruments
were successfully analyzed following the developed procedure. The
identification of the chomatographic peaks was carried out using the
database, which was found useful to relate each peak with those from the
standards. The stocked mass spectra were especially useful to detect the
chromatographic peaks with low signal-to-noise ratio.
5.6 The obtained analytical methodology allowed to characterize a
Pinaceae resin and linseed oil in the varnish of the Venere theorbe and the
Stradivarius violin, and the same materials plus a triterpenic fraction were
detected in the varnish from the Maler luth.
6. The analytical study of synthetic resins was carried out following a
methodology based on the pyrolysis-GC-MS, without derivatizant to sample
treatment.
6.1 The optimization of pyrolysis temperature was performed; by
comparing the results applying 590; 650 and 764C. For polyacrylic resins,
the obtained pyrograms provided more fragments when the thermic breakage
was at 590C, whereas in the case of the ketonic polymer Keton N more
chraracteristic fragments were detected under pyrolysis at 764C. The
analysis of the other synthetic polymers (polystyrene, saturared hydrocarbon
resin, indene-benzofurane resin, polyvinyl acetate, polyvinyl butyral,
ketyonic polymer, phenol-formaldehyde resin and polyacroleine) provided
similar results at the threes studied temperatures.
6.2 Instrumental conditions adjusted for the chromatograph and the
mass spectrometer were found suitable for the resolution and detection of
278 fragments provided after pyrolysis of 18 stantard synthetic polymers and
VI. CONCLUSIONS
________________________________________________________
269
from the samples from a modern pictorial artwork, in nearly 29 minutes. The
characteristic fragments detected in the pyrograms are compounds with a
structure close that the monomer of the resin, reason why they allow the
identification of the corresponding synthetic polymer with more reliability.
6.3 The proposed analytical methodology was applied to the analysis
of samples from a modern pictorial artwork by the German painter Georg
Baselitz (Senta, 1992/1993), supposed to be carried out in acrylic paint. The
thourough study of the obtained pyrograms revealed the presence of
characteristic fragments of ketonic resin, paraffin, drying oil and plasticizer,
instead of the expected acrylic markers.
271
X.
BI BLI OGRAF A/ REFERENCES
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