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UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

INTRODUCCIN AL METABOLISMO SECUNDARIO COMPUESTOS DERIVADOS DEL CIDO SHIKIMICO

Profesor
Gabriel Jaime Arango Acosta Dr. Sc. Pharm. Facultad de Qumica Farmacutica

Medelln, marzo de 2008

CONTENIDO
PAG.

INTRODUCCIN AL METABOLISMO SECUNDARIO GENERALIDADES Metabolitos primarios, Metabolitos intermediarios, Metabolitos secundarios REACCIONES ENZIMATICAS Mecanismos enzimticos BIOSNTESIS Istopos estables e Istopos radioactivos FOTOSNTESIS Fijacin del carbono Mtodo biosinttico, Fijacin del carbono, Ciclo de Calvin (Plantas C3) Plantas C4, Metabolismo cido de las Crasulaceas, CAM COMPUESTOS DERIVADOS DEL ACIDO SHIKIMICO 18 Biosntesis del Acido Shikimico Biosntesis de fenilalanina y tirosina Biognesis de los cidos cinmicos FENILPROPANOIDES Plantas que contienen compuestos fenil propanos COMPUESTOS (C6C3)2 (LIGNANOS) Lignanos propiamente dichos, Neolignanos, Lignoides, Lignanos diversos, Lignanos conjugados Biognesis de lignanos Extraccin de lignanos Caractersticas espectrales de los lignanos Inters biolgico de los lignanos Algunas plantas que contienen lignanos ESTRUCTURAS POLIMRICAS Ligninas Taninos, Principales plantas que contienen taninos CUMARINAS Biosntesis de cumarinas Cumarinas simples Cumarinas complejas Furanocumarinas, Piranocumarinas, Cumarinas diversas Tcnicas de extraccin de cumarinas 40 Mtodos espectroscpicos para determinar cumarinas Principales plantas que contienen cumarinas BIBLIOGRAFIA

3 3 4 5 8 10 15 15 15 19 20 20 21 24 25 28 30 30 31 31 31 31 32 34 34 35 36 36 40 41 42

INTRODUCCIN AL METABOLISMO SECUNDARIO

GENERALIDADES Farmacognosia: El trmino Farmacognosia fue utilizado por primera vez por el alemn Aenotheus Seydler, quien lo uso en su tesis doctoral en 1815, en, Analecta Pharmacognostica. Del Griego Pharmakon: droga y Gignosca: adquirir conocimiento de algo; por lo tanto la Farmacognosia es el estudio de las materias primas de origen biolgico: vegetal, microbiano (hongos, bacterias) y animal. Estudia tanto substancias con propiedades teraputicas como substancias txicas, excipientes u otras substancias de inters farmacutico, en general, es la ciencia que estudia los aspectos botnicos, qumicos, biolgicos y econmicos de las drogas, destinadas a la preparacin de medicamentos, de aqu que muchos autores designan a la farmacognosia como Materia mdica o Materia Farmacutica[1]. La Farmacognosia es la ms antigua de las ciencias mdicas, el hombre primitivo tuvo que aprender a distinguir los productos que le servan de alimento y los curativos de los txicos. La Farmacognosia tiene como metas: El conocimiento de las plantas utilizadas en teraputica con miras a la obtencin de drogas en cantidades y calidades convenientes. La prospeccin de nuevas plantas con fines teraputicos, aqu colaboran: La Etnofarmacognosia (Conocimiento popular de la farmacognosia) La Qumica hemisinttica (Sntesis de sustancias a partir de otras conocidas) La quimiotaxonoma (Relacin entre las tipos sustancias qumicas encontrados en un ser vivo y su clasificacin taxonmica) El trmino biosntesis es sinnimo de anabolismo y se refiere a la formacin de molculas complejas a partir de molculas sencillas, esto implica la formacin de enlaces carbono-carbono y de otros tipos, a travs de reacciones catalizadas por enzimas. En el esquema siguiente vemos como en condiciones extremas de temperatura y presin, se muestra la posible formacin de macromolculas complejas a partir de simples molculas inorgnicas. Los seres vivos a partir de H2O, CO2 (por medio de la fotosntesis) y una fuente inorgnica de nitrgeno, efectan el proceso completo, produciendo molculas orgnicas y luego macromolculas, las cuales se ensamblan en estructuras superiores (organelos) que conforman la clula. La composicin qumica de todas las clulas es similar, contienen agua (alrededor de 70%), y en partes mas o menos iguales, protenas, cidos nucleicos, carbohidratos y lpidos. En general podemos decir que los productos naturales se han dividido en tres grupos debido a los diferentes factores que caracterizan a cada uno de ellos.

Metabolitos primarios Son macromolculas fundamentales para los seres vivos, de distribucin general, que sirven para la produccin de metabolitos secundarios, son incorporados directamente del medio o sintetizados a travs de reacciones bioqumicas intracelulares.

SINTESIS DE LAS ESTRUCTURAS CELULARES

[2, 3]

la clula

la clula y sus organelos ribosomas pared celular

estructuras membranas cromosomas supramoleculares macromolculas molculas orgnicas

proteinas lpidos aminocidos c. grasos RNA proteinas

DNA proteinas

celulosa

nucletidos

monosacridos

molculas inorgnicas

CO2 H2O NH3

Metabolitos intermediarios Son molculas pequeas que corresponden a un metabolismo central, producidos directamente de ciclos metablicos primarios. Metabolitos secundarios Es el producto de un metabolismo especfico, originados a partir de un metabolismo intermediario, de distribucin restringida, con una funcin metablica especfica, se encuentran almacenados en el interior de las vacuolas.
PRIMARIO Carbohidratos Protenas Lpidos cidos nucleicos TIPOS DE METABOLISMO INTERMEDIARIO SECUNDARIO Monosacridos Glicsidos, Azcares modificados, Ac. Urnicos Glucosa, fructosa heparina Aminocidos Alcaloides, taninos, fenil propanos, cumarinas cidos grasos Polictidos, terpenos, esteroles, triterpenos Bases Tetrapirroles, alcaloides imperfectos

REACCIONES ENZIMATICAS La formacin de metabolitos primarios, intermediarios y secundarios resumida en el cuadro general del metabolismo secundario, ocurre a travs de reacciones enzimticas, las enzimas que actan como catalizadores de superficie generalmente tienen naturaleza protica lo que las hace muy difcil de aislar y purificar, debido a esto su clasificacin se hace de acuerdo a su accin[3]: Clase Nombre (Grupo)
1 2 3 4 5 6

Actividad cataltica

Oxidorreductasas Cambio de estado de oxidacin, ej. -CHOH a -C=O Transferasas Transferencia de un grupo, ej. Transferencia de metilos C1 Hidrolasas Hidrolizar, ej. de steres o pptidos Liasas Reacciones de ruptura de enlaces, ej. liasa de carbono-nitrgeno Isomerasas Isomerizaciones, ej. epimerizacin cis-trans Ligasas Reacciones de formacin de enlaces, ej. enlaces C-C Cuadro 1: Clases de enzimas y su actividad cataltica

Las enzimas generalmente tienen un grupo protico (cadenas de aminocidos) y un grupo prosttico no aminoacdico, el cual, de acuerdo a su naturaleza, se clasifica en: Cromoprotenas Co, Mg, Fe

Glicoprotenas Lipoprotenas Fosfoprotenas Mtaloprotenas

azcares cidos grasos cido fosfrico Cu, Zn

Este grupo prosttico se puede separar por dilisis y se le conoce como coenzima. Mecanismos enzimticos[1, 4] Reacciones de alkilacin: Son reacciones de Sustitucin nucleoflica o de adicin electroflica y producen alargamiento de cadena Sustitucin nucleoflica Va S-adenosil metionina (SAM) Formacin de SAM
H2N H3C S ATP HO H2N COOH L-Met H2N COOH S-adenosilmetionina H3C S
+

N O N N

OH

NH2 N N N N CH 3 O CH 2-S-CH2CH 2CHCO 2H + NH2 -CH3 N

NH2 N N N CH 2-S-CH2CH 2CHCO 2H .. NH2

HO

OH S-Adenosilmetionina

HO

OH S-Adenosilhomocisteina

METILANTES

C-alkilacin usando SAM

:CH2
S
+

CH

C CH2

: CH2
S+

H2

C H

C CH3

Ad H3C S
+

COOH NH2

O H H3C

Ad + S

COOH NH2

..
OH

a: Las posiciones ortho y para son activadas por grupos OH. b: Los grupos carbonilo aumentan la acidez y permiten la formacin del anin enolato

O y N alkilacin usando SAM

Ad
+

.. OH

H3C

COOH NH2

O H

CH3

Ad S

COOH NH2

S-adenosilhomocisteina

Adicin electroflica Condensacin aldlica y Claisen: Reacciones donde se forman enlaces carbonocarbono, se necesita un buen grupo saliente.
X R Nu
-

C O

R Nu

X O
-

R C O Nu

Mecanismo general
X H3C C OEt O
-

CH2

+ O

C O

OEt

CH3

OEt C O C O X C O C O +

OEt

CH3

SCoA C O

C O C X O

H2C

CH3

+ CO 2 +

HSCoA

El producto de formacin depende de la naturaleza del grupo saliente X. La coenzima A es el equivalente biolgico a la condensacin de Claisen.
O O SCoA
-

O CH2 C SCoA ACoS

O H

OH O SCoA

H2O HO

O H

OH O SCoA

Reacciones de condensacin Va fosfo enol pirvico

O C O CH2 C CO2H OP C CH2 C COOH OH

Va Isopentenil pirofosfato (IPP) o dimetil alil pirofosfato (DMAPP)

H C O :Enz C OPP OH OPP

O X O O O P OP

O X +

-CH
O

O
PP

-O

-O

Reacciones de Carboxilacin y descarboxilacin Carboxilacin

O HN NH CO2 ATP (CH2)4CO 2H O HO C N O NH (CH2)4CO2H

biotina
OH C C OH O HO C N O NH (CH2)4CO2H C C CO2H O N + S (CH2)4CO2H NH

S
O HN NH

O O
-

Biotina

S O

(CH2)4-C-NH-Enz

O 2CCH2CSCoA Malonil CoA

HCO3 /ATP O NH O (CH2)4-C-NH-Enz H3C-C-SCoA Acetil CoA

O 2C N

CARBOXILASA

Descarboxilacin Eliminacin: La eliminacin depende de las caractersticas del grupo saliente

Nu
H B

+ NuH +B

En sistemas biolgicos el grupo saliente ms comn es el fosfato.

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Nu

R1 R2

H C CR2 O O P O
-

R1 OH R2

R2 R2

= + NuH + PO 3

Epoxidacin
O. O2 C H C H C H O C H H2 O C H C H + H2O

Oxoreducin:
R-CH3 R-CH2OH R-CHO R-COOH

NICOTIN AMIDA DINUCLEOTIDO FOSFATO

H H O CNH2 N O OH OH

O O
-

O O
-

N O N N HO HN O N OH

NH2 N NADPH

CH2O P O P OCH2

O CNH2 + N O OH OH

O O
-

O O
-

NH2 N N + NADP

CH2O P O P OCH2 HO

OH

MODO DE ACTUAR
H+ X HR
+ NADPH+H

NADP+

H X R

BIOSNTESIS[2- 5] Todos los compuestos orgnicos estn constituidos por carbono e hidrgeno a menudo contienen oxgeno y nitrgeno y menos frecuentemente azufre, fsforo y halgenos. La formacin de los productos naturales en plantas superiores, algas y algunas bacterias fotosintticas; tiene como origen la fotosntesis, la energa solar es utilizada por clulas que contienen clorofila la cual se encuentra en los cloroplastos. Los productos inmediatos de la absorcin de energa lumnica son ATP y el reductor NADPH, compuestos que ms tarde se utilizan en el proceso de fijacin del carbono con la formacin de enlaces carbono-carbono y la reduccin del CO2 para formar los carbohidratos (CH2O)n.

Cuadro general del metabolismo segundario

Prcticamente toda la vida en la tierra depende de la fotosntesis pues todos los organismos que no son fotosintticos necesitan consumir molculas orgnicas previamente formadas para vivir, adems, la fotosntesis es la nica fuente natural de oxgeno en el planeta Los animales y otros organismos como las bacterias de la putrefaccin, obtienen su energa degradando molculas orgnicas que han sido formadas por otros seres vivos, por lo que podemos afirmar que todos los organismos dependen de la energa solar. Mtodo biosinttico[1, 2, 3, 4] Consiste en el estudio de las tcnicas y procesos de formacin de sustancias en los organismos vivos. Para entender bien el mtodo biosinttico, es necesario conocer la definicin de algunos trminos: Biosntesis: Formacin de una sustancia en o por un organismo vivo (comprobado experimentalmente). Biognesis: Son las hiptesis de la formacin de una sustancia en un organismo. Estas hiptesis deben estar de acuerdo a las reglas y leyes de la bioqumica y la qumica orgnica. Las consideraciones biogenticas pueden facilitar en mucho la determinacin de la estructura de un producto desconocido, pero tambin puede conducirnos a conclusiones errneas. Es por esto, que las teoras deberan solo servir para confirmar o rechazar una estructura propuesta de una sustancia o producto natural.

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Los estudios biosintticos pueden dividirse en dos grupos - Estudio de secuencias biosintticas o Anlisis secuencial - Estudio de mecanismos biosintticos Primero se realiza el anlisis secuencial y luego se determina su mecanismo. Anlisis secuencial Pretende establecer los pasos individuales de una secuencia biogenetca El anlisis secuencial, se basa en la aparicin de productos relacionados entre si en diferentes etapas de la formacin de compuestos, sin embargo, hay que tener en cuenta: El mismo precursor puede metabolizarse de varias maneras diferentes
A v1 B v2 v4 C v3 D P

La diversidad de tejidos del rgano productor de los metabolitos: animales, vegetales superiores y microorganismos; originan sistemas enzimticos diversos que operan de forma diferente. Si las velocidades de reaccin son muy diferentes, se pueden perder la pista de algunas de las sustancias de inters. v1 >>> v2 El producto B va a ser mas abundante pues la velocidad v1 es mucho mayor que v2, debido a esto, se puede pensar errneamente que el producto es B y no P. La deteccin se basa en buscar "molculas claves" que originen los diferentes metabolitos en condiciones biolgicamente posibles (pH7, medio acuoso, presin normal y temperatura ambiente). Istopos estables e Istopos radioactivos Se denominan istopos a los tomos del mismo elemento que contienen el mismo nmero de protones pero diferente nmero de neutrones, y que por lo tanto tienen diferentes nmeros de masa. Los tres istopos del hidrgeno 1H, 2H (deuterio) y 3H (tritio), contienen cero, uno y dos neutrones. No obstante, algunos istopos con demasiados neutrones son inestables y tienden a degradarse para formar un istopo ms estable, se convierte en otro elemento; esos istopos se denominan radioistopos, ya que emiten radiaciones de alta energa al desintegrarse. La cantidad de 146C en la atmsfera terrestre se mantiene constante en el tiempo y pasa a formar parte del ciclo de la alimentacin, segn
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CO2 (gas) plantas, fotosntesis <=> 14C (carbohidratos, alimentos especies vivas)

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Como resultado de los dos equilibrios anteriores, todos los seres vivos contienen la misma fraccin de C-14 e igual a la que existe en la atmsfera. Al momento de la muerte del organismo de la especie considerada, ya no regener este equilibrio y solo se produce la desactivacin radiactiva del C-14 que exista en el momento de extinguirse su vida. Esto nos permite calcular las edades de materiales de la corteza terrestre, basndose en la existencia de 14C radioistopo, el cual se va desintegrando por bombardeo de neutrones provenientes de la estratosfera, produciendo as tomos N como se muestra en la ecuacin siguiente: t = 5730 aos As pues, al medir la cantidad de radiactividad en una muestra de origen orgnico con un contador de partculas Geiger se puede calcula la cantidad de 14C que an queda en el material. As puede ser datado el momento de la muerte del organismo correspondiente. Se ha logrado determinar con bastante exactitud que la radiacin de C-14 en la atmsfera corresponde a la medicin de 13,6 desintegraciones por cada minuto, para 1 gramo de Carbono presente. Esto es as porque, en tanto existe vida, la proporcin 146C / 12 6C , permanece constante de modo que solo consideramos el C total para las mediciones normalizadas. As, Intensidad de radiacin 14C en equilibrio = 13.6 desintegraciones minuto/gramo C El mtodo de datacin por radiocarbono es la tcnica ms fiable para conocer la edad de muestras orgnicas de menos de 60.000 aos. Est basado en la ley de decaimiento exponencial de los istopos radiactivos. El tiempo de datacin de la especie, se calcula fcilmente considerando que 13,6 es la radiacin inicial a t = 0 y que es proporcional al contenido de 146C al momento de muerte del organismo y si llamamos I la intensidad de la radiacin actual de una muestra de ese organismo en la era actual, la edad desde su muerte est dada por t = (1,90104 aos) log(13.6/I)
ELEMENTOS RADIOACTIVOS UTILIZADOS EN INVESTIGACIONES BIOLGICAS Istopo Tiempo de vida Energa de radiacin Observaciones toxicidad media Beta Gama 3 3 3 H 12-43 aos 0.186 nula H. He + ebaja 14 14 14 C 5730 aos 0.156 nula C N + emedia 24 Na 14.9 horas 1.39 1.38 Subgrupo inferior 42 K 12.4 horas 3.5 1.5 Subgrupo inferior 35 S 87.4 das 0.167 -Subgrupo inferior 32 P 14.3 das 1.709 nula Subgrupo inferior 131 I 8.04 das 0.247-0.806 0.08 Subgrupo inferior media

Cuando se emprende un estudio biosinttico hay que tener en cuenta que las conclusiones obtenidas pueden ser errneas si no se detecta bien la "molcula clave"; en Conium maculatum el mximo contenido de -coniceina es alcanzado una semana antes que la coniina, debido a que la velocidad de formacin es muy grande toda la coniina pasa rpidamente a -coniceina; cuando se llega a una determinada cantidad de -

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coniceina, se inhibe la formacin de esta y aumenta la de la coniina, siendo esta precursor de la otra.
N H CH3

CH3

Conina

Conicena

Esta deteccin se dificulta igualmente cuando un intermediario es fcilmente nter convertible con otro metabolito que esta fuera del camino directo:
A B C

D no es un intermediario en el camino que conduce de A a C, sin embargo si se suministra D marcado se obtendr C marcado, demostrar que D no pertenece al camino directo implica demostrar que las siguientes expresiones no son ciertas:
A A A B D D D B C C C

Un mtodo de demostrar esto, es aislar y purificar las enzimas de cada una de los procesos. El problema puede complicarse si la interconversin entre B y D no es un proceso enzimtico, como por ejemplo un hidroxicido y la lactona. En estos casos, es imprescindible efectuar un estudio cintico cuidadoso de las reacciones enzimticas. Un ejemplo real es la biosntesis de ciertas lactonas esteroidales como la hellebrigenina[1]
O H3C OH O O H

HO

OH

H HO

O
3

Ac. mevalnico

pregnelonona
O

OH HO OH

hellebrigenina

progesterona

Esta biosntesis de la hellebrigenina se pudo demostrar fcilmente pues la interconversin de pregnelonona a progesterona es lenta comparada con los otros pasos y al utilizar pregnelonona marcada en el protn 3, se demostr que un porcentaje de la marcacin era retenido en el producto final, indicando que la progesterona no era un intermediario, si as lo fuera, la marca se hubiera perdido totalmente, pues al formarse la progesterona, se pierde ese protn.

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13 ELEMENTOS NO RADIACTIVOS Elemento 2 H 13 C 15 N Abundancia natural % 0.015 1.0 0.36 Espin 1 Deteccin Masas, IR, Masas, RMN Masas, RMN

Formacin del Alcaloide Shimanina a partir del cido O-Succinilbenzoido en la Orquidea Dendrobium pierardii[6]
O COOH
2H

O CHO COOH
NH3 N-Met

NHCH3

COOH Ac. o-succinil benzoico

COOH
B. Schiff

N O Shimanina O
4

CH3

+ N CH3 COOH

5
3 7 8 6 2

5 3
13

N O
12

CH3
10 9 8 117 12 6 2 13

9 10

11

TMS

200

100

* N O O
12 200 6

CH3

10 9 8 117 2 100 0 3 13 4 TMS

Este ejemplo, nos muestra la posibilidad de estudiar el mtodo biosinttico de una sustancia por resonancia magntica nuclear de 13C, el primer espectro de la shimanina, nos muestra claramente todas las seales de 13C; si partimos de cido o-succinil benzoico marcado en el carbono carboxlico de la cadena, se nos formar la shimanina con marcacin (5-13C) como se muestra en la figura, por lo tanto, veremos en el espectro 13C RMN (inferior) un aumento (comparado con las otras seales) en la intensidad de la seal de ese carbono. Efectividad del precursor[1] En plantas superiores se aceptan incorporaciones del 0.1% como efectivas En microorganismos aproximadamente del 5%. El Grado de Incorporacin GI esta dado por la siguiente ecuacin:

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GI = (A2 M2 / A1 M1) x 100

M1 y M2 : [ ] Molares. A1 y A2: Actividades especficas molares del precursor y del producto (Medidas por el mtodo de centelleo)

Cuando en la formacin de una sustancia existen compuestos simtricos, se formarn ismeros marcados, como es el caso de la nicotina, la cual mostrar marcacin en diferentes tomos disminuyendo as el grado de incorporacin
O H2N * OH NH2 H2N * NH 2 O H2N O OH * * N CH3 * * * H O * H NH2

N nicotina

N H3C

N H3C

Como detectar posibles precursores Hay que determinar el lugar y la etapa de formacin Ej. La Brugmancia sanguinea sintetiza la escopolamina en la etapa de prefloracin y no en la de fructificacin, adems, los steres, se forman en las races y son transportados a las partes areas donde pueden ser hidrolizados. Cuando se presume la naturaleza del precursor, este se puede introducir artificialmente en el medio biolgico y seguir su destino. Para seguir el destino existen dos mtodos 1. Marcado isotpicamente - Istopos radioactivos - Istopos estables 2. Mtodo biolgico, usando mutantes o inhibidores enzimticos especficos. Suministro El suministro del metabolito depende del estado fsico del sustrato Si es un gas (18O2, o CO2 marcado con 14C o 13C) se hace crecer el material en atmsfera del gas. Si es lquido o slido se aplica en solucin (estas deben ser solubles en medio fisiolgico). Se pueden aplicar por: Riego (cultivos hidropnicos) Por adsorcin en tallos cortados Por inyeccin de la solucin en el sitio biosinttico Por infiltracin a presin reducida FOTOSNTESIS[3-5]

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El proceso fotosinttico tiene lugar nicamente en las clulas que contienen clorofila y solo en ciertos organelos como los comatforos (pequeos corpsculos coloreados que se encuentran en el interior de las clulas, como los cloroplastos y cromoplastos). Segn la fuente de Energa que utilizan, las clulas se clasifican en: Fototrficas: Obtienen la energa directamente de la luz: clulas vegetales Quimiotrficas: Obtienen la energa de la oxidacin de los alimentos: clulas animales y clulas vegetales en oscuridad Fijacin del carbono[3-5] La fijacin del carbono es la incorporacin fotosinttica del CO2 atmosfrico a compuestos orgnicos, mientras que la carboxilacin es la adicin de una unidad de CO2 a un compuesto orgnico. Ciclo de Calvin (Plantas C3) El conocimiento sobre la fijacin del carbono, se debe en gran parte a Melvin Calvin en 1946, incub una micro alga verde Chlorella pyrenoidosa en presencia de luz y una solucin que contena 14CO2, la incubacin se llevaba a cabo en diferentes periodos de tiempo desde 3 segundos a sesenta segundos, suspendiendo la incubacin con vapores de alcohol; se extraan los compuestos radioactivos y se cromatografiaban en papel, revelndose luego con una placa fotogrfica que marcaba las sustancias radioactivas. A los tres segundos solo dio una sola mancha correspondiente a 3-fosfoglicerato, pero a los treinta segundos dio varias manchas segn el sigiente cuadro.
2 MOLCULAS AC. 3 FOSFOGLICRICO DIHIDRO ACETONA P RIBOSA 5 P FRUCTOSA 1, 6 DI P SEDUHEPTULOSA 7 P XILOSA 5 P ERITOSA 4 P 3 FOSFO GLICERALDEHIDO

CO2

SISTEMA CARBOXIDISMUTASA

RIBULOSA 1, 5 DI P RIBULOSA 5 P

SEDUHEPTULOSA 1, 7 DI P

FRUCTOSA 6 P

Ciclo del carbono en la fotosntesis plantas C3 (ciclo de Calvin) SECUENCIA GLOBAL:

C5

C6

H2O

2 X C3

En 30 segundos
Triosas Dihidroacetona P Gliceraldehido 3P Ac. 3-P glicerato Ribosa 5P Ribulosa 5P Xilosa 5P Ribulosa 1,5 di P Tetrosas: Eritrosa 4P Fructosa 6P Glucosa 6P Fructosa 1,6 di P

Pentosas:

Hexosas:

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16 Seduheptulosa 7P Seduheptulosa 1,7 di P

Heptulosas:

Toda la fijacin fotosinttica del carbono tiene lugar a travs de la carboxilacin de la ribulosa-1,5difosfato (C5), dando un compuesto C6, (esta reaccin es catalizada por la enzima Ribulosa-1,5-difosfato carboxilaza conocida como rubisco), luego se hidroliza para producir dos molculas de fosfoglicerato (C3). En las llamadas plantas C3, la anatoma de las hojas presenta las clulas del mesfilo distribuidas al azar en todo el tejido de la hoja y son los sitios primarios de fijacin del CO2. fig. 1. Plantas C4[3, 5] Algunas plantas que crecen en regiones semi-ridas con elevada intensidad lumnica, poseen un sistema adicional de fijacin de carbono; aunque es menos eficaz en la utilizacin de energia, si lo es para la utilizacin de CO2, reduciendo la fotorespiracin y prdida de agua, estas plantas son conocidas como plantas C4 donde el fosfoenol piruvato es el aceptor inicial del CO2; produciendo un compuesto C4, el oxaloacetato; luego estas reacciones se invierten en otra parte de la planta para dar CO2 que se recombina con de la ribulosa-1,5 difosfato. Las clulas de las plantas C4, a diferencia de las plantas C3, poseen una anatoma caracterstica; las clulas del mesfilo, se encuentras organizadas en torno a las clulas de la vaina del haz, siendo estas, mas prominentes que sus equivalentes en las hojas C3; esta estructura se conoce como anatoma de Kranz o guirnalda. fig. 1.

Fig. 1 Anatoma de las hojas C3 (a) y C4 (b)[3]

En ambos casos intervienen clulas del mesfilo con cloroplastos en la fijacin del CO2. Sin embargo, en las hojas C4 la fijacin de CO2 por el rubisco, tiene lugar en las clulas de la vaina del haz, mientras que en las clulas del mesfilo C4, se especializan en la incorporacin inicial del CO2 en el cido dicarboxilico oxaloacetato, el cual pasa al cloroplasto para reducirse a malato por medio de NADP-malato deshidrogenasa. El transporte de malato entre la clula del mesfilo y la clula de la vaina del haz, origina a la vez el transporte de CO2 entre ambas clulas. Fig. 2.

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Fig. 2: Via C4 de fijacin de CO2[3]

Metabolismo Acido de las Crasulaceas CAM[3, 4, 5] Otro grupo de plantas se conocen como plantas CAM el trmino significa la sigla en ingls de Metabolismo cido de las Crasulaceas, se denomina asi por que fue inicialmente en la familia de las Crasulaceas donde se observ un incremento de cido mlico en horas de oscuridad. Otras grandes familias como Liliaceas, Cactaceas y Euphorbiaceas poseen especies con una bioqumica similar. Al igual que en las plantas C4, se trata de una adaptacin del ciclo fotosinttico en vegetales en situacin de sequia, pues tambin capturan CO2 para producir inicialmente oxaloacetato, pero lo hacen de manera distinta que las plantas C4, pues el mecanismo es temporal (fase oscura y fase lumnica) como se muestra en la figura 3. En la oscuridad el CO2 es fijado al fosfoenolpiruvato produciendo el oxaloacetato, este se oxida para dar malato, el cual se fija en la vacuola. En la luz el malato se puede descarboxilar y pasar membrana y entrar en los cloroplastos para ser fijado por las enzimas del ciclo de Calvin o reducirse a oxaloacetato.

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Fig. 3 Metabolismo cido de las Crasulaceae (CAM)[3]

En general los tipos de fijacin del dixido de carbono CO2 son:

Tipo de fijacin C3 C4 CAM Aceptor de CO2 Ribulosa 1,5 di P Fosfoenolpiruvato Fosfoenolpiruvato Producto de fijacin Fosfoglicerato Oxaloacetato Oxaloacetato Ejemplos de plantas Espinaca, trigo, tabaco Maz, caa de azcar, sorgo Pia, papaya, cactus

COMPUESTOS DERIVADOS DEL ACIDO SHIKIMICO

El cido shikmico se aisl inicialmente en 1885 de la planta asitica "SHIKIMI-NOKI" Illicium sp. (Fam. Illiciaceae) y es reconocido como el compuesto punto de partida para un vasto nmero de sustancias naturales. Su existencia como un discreto constituyente vegetal, ha sido observado en aos recientes, pero no hay duda de que es el metabolito universal de las plantas superiores y de muchas clases de organismos no mamferos.
HO O H H OH OH H OH OH HO HO O

HO

Podemos afirmar que el cido shikmico es el precursor de la mayora de constituyentes vegetales que contienen anillos aromticos; dando un patrn de oxigenacin en el anillo aromtico claro, que permite reconocer los compuestos derivados de este; as, en compuestos aromticos derivados del cido shikmico, las posiciones oxigenadas son de

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tipo catecol (orto) o pirogalol (diorto), y en el caso de los fenoles monooxigenados son generalmente p-hidroxi-compuestos. En compuestos derivados de la ruta del Acetato-Malonato los grupos oxigenados estn en disposicin meta entre s, o sea que los polifenoles son derivados tipo resorcinol. Del cido shikmico se obtiene por hemisntesis el oseltamivir, un medicamento antiviral selectivo contra el virus de la influenza. Lo produce la casa Roche bajo la marca Tamiflu. El oseltamivir es una prodroga, que se transforma en un compuesto activo en el organismo disminuyendo los sntomas de pacientes con la gripe adquirida recientemente y reduce la incidencia de los sntomas propios de una gripe confirmada, como las infecciones bacterianas: bronquitis, sinusitis y neumona.

BIOSNESIS DEL CIDO SHIKMICO[4, 7, 8] La formacin del cido shikmico ocurre a partir de precursores de 3 y 4 tomos de carbono como son el cido fosfoenolpirvico (PEP) y la eritrosa 4-fosfato (E4P) por una condensacin de tipo aldlica, produciendo un compuesto C7 a travs de una serie de etapas que se resumen en la Figura 4.

H O H P P E4P O HO OH O COOH CH2 H O -Pi P O HO OH O OH PEP COOH -Pi HO OH -2H COOH +2H HO OH Acido shikmico OH O OH OH COOH -H2O O OH OH HO COOH OH HO COOH

Figura 4. Biosntesis del cido shikmico a partir de fosfo enol pirvico y eritrosa 4- fosfato.

Biosntesis de fenilalanina y tirosina (Aminocidos aromticos).

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20

Los aminocidos fenilalanina y tirosina, se sintetizan por reacciones posteriores del cido shikmico con PEP, seguida de las transformaciones que se muestran en el esquema de la figura 6, va del cido corsmico como intermediario del cido prefnico para luego formar el fenilpirvico. En microorganismos y plantas, estos aminocidos, se forman separadamente a partir del cido prefnico, ver Fig. 5. Los cidos prefnico, fenilpirvico y el p-hidroxifenilpirvico son los precursores de fenilalanina y tirosina, estos aminocidos son los constituyentes universales de protenas y es punto de partida de la secuencia biosinttica que lleva a los llamados compuestos C6C3
H COOH ATP COOH PO .. OH OH CH2 COOH
+

COOH H H H -HOP

COOH

CH2 PO OH O OP COOH PO OH -HOP O H COOH O O COOH CH2 O COOH O COOH

HO OH

OH

PO

Ac. shikmico

COOH tranaminacin NH2 R

OH
-CO 2

R=H: fenil alanina R=OH: tirosina

CH3

Ac. prefnico

Ac. corsmico

Figura 5. Biosntesis de fenilalanina y tirosina

En el caso de los animales, se produce la hidroxilacin directa de la fenil alanina a tirosina y luego a dihidroxifenil alanina (L-DOPA), precursor de las catecolaminas como el neurotrasmisor noradrenalina y la hormona adrenalina, como se muestra en la figura 6.
COOH NH2 O2 HO L-Phe L-Tyr HO COOH O2 NH2 HO L-DOPA COOH NH2

Catecolaminas

HO [O] COOH COOH HO N H

O H 2N

COOH

Melanina
HO N DOPAcromo

DOPAquinona

Figura 6: Formacin de la melanina[4]

Biognesis de los cidos cinmicos La ruta principal para la produccin de los cidos cinmico a partir de fenilalanina o tirosina, se revel cuando se encontr que los tejidos vegetales contienen sistemas enzimticos capaces de catalizar la remocin de amonaco de estos aminocidos:
COOH R NH2 -NH3 (PAL TAL) R COOH

R = H, Fenilalanina R = OH, Tirosina

R = H, Acido cinmico R = OH, Acido p-cumrico

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En los mecanismos PAL (fenilalanina-amonioliasa) o el TAL (tirosina-amonioliasa) las enzimas actan sobre los grupos salientes en posicin trans, como una eliminacin de tipo Hoffman Fig. 7.
HR
+

COO

HS

H3N

Figura 7: Eliminacin de tipo Hoffman.

Las evidencias experimentales muestran al parecer que la enzima (PAL) se encuentra ampliamente distribuida en los vegetales, mientras que la (TAL) se encuentra principalmente en ciertas gramneas. Estas enzimas son esteroespecficas ya que son capaces de desaminar los L-aminocidos pero no los D-aminocidos. Los cidos cinmicos producidos por accin de los aminoliasas, constituyen el punto de partida para una cantidad enorme de procesos metablicos secundarios. Fenilpropanoides C6C3, C6C2 Y C6C1. Compuestos C6C3 (cidos cinmicos) La importancia fundamental de la secuencia de reacciones cido shikmico cido prefnico fenilalanina (o tirosina) cidos cinmicos, y la amplia distribucin natural de los cidos cinmicos y sus productos de biodegradacin, lleva a la conclusin de que muchos compuestos naturales que contienen cadenas laterales de 3 tomos de carbono ligados a ncleos fenlicos, son productos de reducciones biolgicas de los cidos cinmicos; la naturaleza ofrece muchos ejemplos de casi todos los niveles de oxidacin de la cadena lateral de estos compuestos. Figura 8
COOH NH2
-NH3

COOH
[O]

HO

COOH NH2
-NH3

*
COOH
[O]

HO

NH2
-NH3

HO

COOH

HO

COOH

cido cinmico

HO p-cumrico (Gramineae)

HO cafeico
C1

CH3O HO OCH3
sinpico (Angioespermas)

COOH
C1

CH3O HO OH

COOH CH3O
[O]

COOH
ferlico
-2H

HO

O O

COOH
metilencafeico

* Ocurre en microorganismos y en animales NO ocurre en plantas

Figura 8. Formacin de fenil propanos a partir de fenil alanina y tirosina

21

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Una caracterstica estructural general, en este tipo de sustancias es la presencia frecuente de funciones oxigenadas en posiciones 4, 3 y 4, 4 y 5 y 3, 4 y 5, que son las mismas posiciones oxigenadas presentes en el cido Shikmico.
R 1

3 RO 5 4 OR OR

Es interesante anotar que en ciertos casos los ismeros alil y propenil se encuentran juntos en algunas plantas. Por ejemplo, el safrol y el isosafrol se encuentran en Cananga odorata (Fam. Annonaceae), y la miristicina junto con la isomiristicina en Myristica fragrans (Fam. Myristicaceae).
CH3 CH2X HO HO H-X propenil fenol CH2 CH2X HO HO alil fenol

Es muy probable que ambos ismeros sean biosintetizados de manera independiente, es decir que es improbable un proceso de isomerizacin del uno para generar el otro. Los siguientes son los ncleos principales de los fenil propanos, se puede observar que las sustituciones oxigenadas del anillo son en para o en meta de la cadena
R R R R R R R

OH OH OH OH

OCH3 OCH3 veratril guayacil

OCH3 O

O CH3O OH siringil

OCH3 CH3O

OCH3 OCH3 trimetilgalil

4-hidroxifenil catequil

3,4-metilendioxil

CH2

CH2

CH2

CH2

COOH

H3CO OH

O O

O O

OCH3 OCH3 OH

OH

Eugenol

Safrol-

Miristicina

Anetol

Ac. clorognico

Entre los derivados de los cidos cinmicos, se encuentra el cloranfenicol (cloromicetina), agente bacteriosttico de amplio espectro, inicialmente aislado de cultivos de Streptomyces venezuelae, se sintetiza a partir de la tirosina por medio de una aminacin produciendo la p-aminofenilalanina (L-PAPA), que luego de una serie de reacciones produce el cloranfenicol. Actualmente es sintetizado en forma de steres
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(succinato y palmitato); activo frente a bacterias gram-positivas y gram-negativas, incluyendo anaerobios, clamidias y ricketsias. Exhibe actividad bactericida frente a Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae y Neisseria meningitidis. Por sus efectos secundarios, actualmente no se considera antibitico de primera eleccin. Su biognesis se muestra en la figura siguiente:
COOH NH2 COOH NH2 hidroxilacin N-acilacin HO COOH HO NHCOCHCl2 NHCOCHCl2 CH2OH

OH

NH2

NH2

NO2

Tirosina

p-aminofenilalanina
L-PAPA

cloranfenicol

Compuestos C6C2 Una clase de compuestos C6C2 que provienen de compuestos C6C3 por un proceso de descarboxilacin, estos compuestos son derivados tipo acetofenona, estilbenos y fenil etanoides.
O CH2 CH3 CH3

Estilbeno

fenil etanolide

acetofenona

Compuestos C6C1 A partir de los cidos cinmicos las plantas pueden generar compuestos aromticos C6C1, formando inicialmente el ster de la coenzima A del cido cinmico, el cual puede sufrir degradacin de la cadena lateral, mediante un proceso enzimtico similar a la oxidacin de los cidos grasos. El esquema de este proceso es e1 descrito en la Figura 9.
HO COOH COSCoA [O] R CoASH R H 2O [O] O OH HSCoA H O 2 O CH 3 SCoA HSCoA SCoA R O COSCoA R H COSCoA

Ac. Shikmico

R R

Figura 9. Biognesis de compuestos C6C1

E1 derivado del cido benzoico as originado, puede descarboxilarse para generar compuestos C6, o sufrir una o varias etapas de reduccin para generar derivados tipo benzaldehdo, alcohol benclico y compuestos derivados del tolueno.
COOH CHO

2H R -CO2 Compuestos C6 (bencenoides) Derivados benzaldehdo R

2H R

CH2OH

2H R

CH3

Derivados tipo alcohol benclico

Derivados tipo tolueno

Compuestos C6
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Son pocos los compuestos C6, que han sido aislados en la naturaleza, los ms comunes son la arbutina (el -D-glucopiransido de la hidroquinona) y su ter metlico. La arbutina es derivada de la ruta del cido shikmicofenilalanina; esto se comprob por experimentos en los cuales se administr fenilalanina, cido cinmico, tirosina y cido shikmico marcados con 14C, a hojas de Pera, Pyrus communis (familia Rosaceae), demostrando que la arbutina era originada a partir de estos precursores ya que efectivamente se aisl arbutina radiactiva. Estos resultados y la posterior demostracin experimental de la formacin de arbutina a partir de fenilalanina marcada en Grenvillea robusta (Fam. Proteaceae) confirmaron este hallazgo. Esta biognesis se esquematiza en la Figura 10.
O

Acido shikmico
R

OH R

CO2 Si R=OH

OGlucosil
HO

Glicosilacin
HO

OH

[O]
HO

Arbutina

Figura 10. Biognesis de arbutina

Ejemplos de compuestos C6C1 y C6.

COOH COOH CH3O COOH COOH

HO

HO OCH3

HO OCH3

OH

Acido p-hidroxibenzoico

Acido vanlico

Acido sirngico

Acido saliclico

COOH

HO

COOH

HO

COOH

HO OH

HO OH

HO OH

HO

OH

Acido protocatechuico

Acido glico

Antiarol

Acido gentsico

OH CHO CHO

H3C O OH OCH3 O

Vainillina Alcohol ansico piperonal

Plantas que contienen compuestos fenil propanos[5, 11, 12] Gayuba, Arctostaphylos uva-ursi, Fam. Ericaceae. La gayuba es un pequeo arbusto perenne de montaa, localizado en centro y norte de Europa y en Norteamrica. El extracto acuoso de las hojas secas de Gayuba, es tradicionalmente utilizado para el tratamiento de infecciones en las vas urinarias (Farmacopea Francesa 10a edicin). La gayuba es diurtica y astringente, durante la excrecin ejerce una accin antisptica sobre las vas urinarias, en forma tpica se usa para quitar manchas de la piel.

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25

La droga contiene flavonoides, cido urslico (triterpeno pentacclico), 10% de taninos glicos y entre 5 y 10% de arbutosido y metil arbutosido. Vainilla, Vainilla planifolia, Fam. Orchidaceae. La vainilla esta constituida por los frutos inmaduros, curados y desarrollados de la orquidea Vainilla planifolia, cultivada en de Mjico y algunas islas ocenicas. La vainilla verde contiene hetersidos principalmente glucovanillina y alcohol glucovanillico. Durante el curado, estos compuestos sufren oxidacin e hidrlisis, los principales constituyentes son vainillina, anisaldehido y piperonal. Fruto de ans, Pinpinella anisum, Fam. Unbelliferae/Apiaceae. Esta es una planta herbcea originaria de Egipto y del Medio Oriente y cultivada en casi todas las regiones del planeta. La droga comprende los frutos maduros y secos, son de color gris verdoso y olor aromtico agradable, empleados en forma natural como infusiones es carminativo, estomacal, antiespasmdico expectorante, germicida y aromatizante. Los frutos contienen entre 2 a 3% de aceite esencial, este es incoloro cuyo principal componente es el anetol (hasta un 90%), estragol, anisaldehido. COMPUESTOS (C6C3)2 (LIGNANOS)[1, 4, 6- 8, 10] Los lignanos son una clase de compuestos derivados de fenilpropanos ampliamente distribuidos en la naturaleza, formados por dimerizacin oxidativa de unidades C6C3. Dentro de esta clase de compuestos, se pueden distinguir varios grupos: Los lignanos propiamente dichos: son dmeros oxigenados de fenilpropanos sencillos con puente -' en la cadena lateral.
'

De estos dmeros se han aislado mas de 500 compuestos en aproximadamente 60 familias, del orden Magnoliales y Piperales, se han encontrado principalmente en Myristicaceae, Magnoliaceae, Piperaceae y Aristolacaceae. En races y rizomas de especies de Podophyllum Berberidaceae, y de otras especies, se extraen las tetralinas como podofilotoxina[9], un anticancergeno; en races de Artemisia absinthium (Asteraceae), se han extrado furofuranaos de tipo sesamina, usado como sinergista de piretros, el cido nor-dihidroguairtico y sus derivados, presentan una importante actividad antioxidante.
OH O O O O O CH3O OCH3 OCH3 O O O O O

sesamina

podofilotoxina

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Los lignanos propiamente dichos, dependiendo de las cadenas laterales, se pueden dividir en cinco grupos de estructuras fundamentales: Diaril butanos cuando las cadenas laterales no son sustituidas como el caso del cido guairtico.
H3CO

'

CH3

HO

'

CH3

OCH3 OH

cido guaiartico

Butirolactonas, una de las cadenas es un cido carboxlico y la otra un alcohol que al deshidratarse forman una lactona, pueden ser saturadas o insaturadas.
O O O O H3 CO O HO O

OCH3 OH O

5-metoxi-isoyateina

chaerofilina

Furanos y Furanoides
H3C CH3 OCH3 O H3CO

O O O

O O

HO

OH

Galbacina

furoguayacina

Furofuranos o Difuranos
OCH3 O OCH3 OCH3 O O O

Aschantina

Ariltetrahidronaftalenos (Tetralinas)

26

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O CH3

CH3

OH

Atenuol

Neolignanos: son compuestos cuyas uniones son diferente a -'

HO O HO COOH

CH2 H3C OCH3

OCH3

O
OH OH

cido rosmarnico
OCH3 CH2 H3CO

Eusiderina

H3CO H2C

H3CO

H3C

O CH3 CH2

O-metil magnolol

kadsurenona

Lignoides o los Oligmeros de lignanos, con este trmino se designa al resultado de la condensacin de tres a cinco unidades de fenilpropanos. Lignanos diversos
O O

H 3C O H 3C O H3C O H 3C O CH3

CH3

Schisandrina B

Lignanos conjugados Dentro de esta clase de sustancias existen los lignanos conjugados con otros compuestos fenlicos como los flavolignanos: condensacin entre un lignano y un flavonoide, constituyentes de Sylibum marianum (Asteraceae) o cardo mariano.
OH O

HO

O O

OCH3

OH OH O

=R Silibina

OH

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R OH

O OH

O HO OCH3 H 3C O

Silicristina

OH

HO

Silidianina

Constituyentes de Silimarina

BIOGNESIS DE LIGNANOS La biognesis de los lignanos se basa en el acoplamiento oxidativo de fenoles, este acoplamiento por dimerizacin de los precursores C6C3 puede explicarse de forma bielectrnica o por radicales libres. El acoplamiento bi-electrnico se explica segn el esquema siguiente[8]: Luego del acoplamiento oxidativo de fenoles, actuan NADPH +H+ y aromatizar los anillos, segn el esquema de la formacin del cido guaiartico por radicales libres (ver adelante).
R R

+
HO -O

Ac. guayartico

O-

O-

E1 acoplamiento mediante radicales libres, mostrado en el esquema siguiente, permite determinar las posiciones activas del anillo las cuales son en para y en meta a la cadena lateral[4]:
R' HO R -H X X= CH3, CH2OH, COOH R,R'=H, OH, OCH3

.
X R' O R III

R'

R' O

.O
R I

R' O R IV

.
R II

En la estructura IV, el radical libre se encuentra en la posicin de la cadena; por lo tanto, cuando se unen dos estructuras del tipo IV se forma un lignano, cuando se unen dos estructuras diferentes a IV-IV se forma un neolignano.

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29

X H3CO

H3C

CH3 H OCH3

R'

R'

O R'' R''

O H+

H3CO

H3CO OCH3 NADPH+H+ OH O H+

OCH3

HO

OH

Ac. guayartico

Formacin del cido guaiartico

IV

IV
H3CO

OCH3

OCH3 H3CO O H OH

O O
-OH

H+

O H+

H3CO

OCH3

HO

galgravina

OH

Biognesis de la galgravina

-OH
HO . . O O OH OH O O H3CO O OCH3 HO OH OH -H2 O H3CO O OCH3
H3C O H
+

HO O O
OH-

OH HO O HO O

H3CO O

OCH3

O CH3 O

OH O O O O H-H2 CO O

OH O O HO O
2SAM

OH

H3CO OCH3

OCH3

H3C O O CH3

O CH3

H3CO OH

OCH3

Podofilotoxina

Biosntesis de la podofilotoxina.

EXTRACCIN DE LIGNANOS Los lignanos se pueden aislar por extracciones con metanol seguidas por particiones con solventes de diferentes polaridades. Los lignanos que poseen grupos fenlicos, se pueden separar por precipitacin; a las soluciones alcohlicas se les adiciona KOH acuoso concentrado, estos se precipitan como sales de potasio o con acetato de plomo,
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precipitan como sales de plomo, en este ltimo caso, los fenoles se liberan por la adicin de H2S a la suspencin alcohlica. Una vez obtenido el extracto, se monitorea por cromatografa en capa fina (ccf) y las manchas se observan en UV a 254 nm o con vapores de yodo. CARACTERSTICAS ESPECTRALES DE LIGNANOS Una caracterstica importante de los lignanos, es que todos producen rotacin especfica de la luz polarizada, o sea tienen un valor de ]D. Los espectros UV carecen de detalles particulares exceptuando aquellas conjugaciones con los anillos aromticos, generalmente tienen dos mximos de absorcin de similar intensidad uno entre 230 240 nm y el otro entre 280 y 290nm.Las insaturaciones conjugadas con los anillos aromticos originas desplazamientos de las seales. El espectro de masa muestra los diferentes fragmentos para la asarinina un bifurnico y para el dimetoxi galgravina un tetrahidrofurano.
O O O H 2C O O O Ar Ar-CH=CH.CH2OH O+ Ar-CH=CH.CH2.

m/e=354

m/e=203

m/e=179

m/e=161

H3CO H3CO

O H3CO H3CO OCH3 OCH3 H3CO H3CO

H O

Seales de 1H RMN de lignanos tipo tetrahidrofurnico y arilnaftalinlactona[13]

7.69 1.08 H3C 1.78 3.9 H 1 3CO 7.04 5.10 O HO 5.60 7.0 6.93 6.55 3.83 OCH3 O CH3 3.83 1.05 CH3 1.78 4.43 6.55 3.83 O CH3 7.32 8.36

O O H
5.93 6.60

O H
5.94 6.77-6.94m

OH

O O H H 6.06
6.03

INTERS BIOLGICO DE LOS LIGNANOS Gran nmero de lignanos y neolignanos poseen diferentes usos teraputicos, en especial como inhibidores enzimticos y antihipertensivos como los derivados del pinoresinol, potencializadores de la accin de piretros, como el aceite de ssamo, hepatoprotector como la schisandrina B aislado de los frutos de Schisandra chinensis Fam. Magnoliaceae, etc. pero solo los derivados hemisintticos de la podofilotoxina, con
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[11]

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propiedades citostticas y antimitticas, y los flavolignanos del cardo mariano, con propiedades antioxidantes y hepatoprotectoras, se encuentran con formulaciones farmacuticas y son explotadas teraputicamente. ALGUNAS PLANTAS QUE CONTIENEN LIGNANOS[5, 9-11] Podofilo, resina de podofilo, Podophyllum peltatum, Fam Berberidaceae La droga esta constituido por las races y el rizoma desecado, es una planta herbcea, perenne, comn en lugares hmedos del oriente de Canad y Estados Unidos. Los principios activos del podofilo entre 8 y 12%, son podofilotoxina y y peltatina, los cuales se obtienen precipitando el extracto alcohlico de resina en agua. La resina de podofilo es citotxica y se usa localmente en el tratamiento de verrugas. Hyptis verticillata, Fam. Lamiaceae [9, 10, 13]. Las partes areas de este arbusto de 1 a 2 metros de altura, son usadas por los indgenas centroamericanos, como antibacteriano y antiinflamatorio, antihelmntico y antifngico. Contienen triterpenos, esteroides y los lignanos podofilotoxina, peltatina y cido rosmarnico. Cardo mariano, Silybum marianum, Fam. Asteraceae[4, 11, 12] Hierba bianual que alcanza hasta los 2 m de altura, con hojas alternas, grandes, y el margen muy espinoso, limbo verde oscuro, brillante, con manchas blancas irregulares. Las semillas de Cardo Mariano, desde pocas antiguas, han sido utilizadas en el tratamiento de los trastornos hepticos. La semilla est compuesta por: principios amargos, aceite esencial, resina, tiramina, hitamina y flavonas. El componente ms importante y que justifica su accin es la silimarina que es un componente lignoflavonoide muy amargo y con marcada accin hepato-desintoxicante y regenerador heptico, por lo que resulta particularmente til en el tratamiento de trastornos hepticos, tanto lesionales como funcionales, txicos (tetracloruro de carbono, tioacetamida, paracetamol, etc.), infecciones virales (hepatitis tipo A, B, etc.). ESTRUCTURAS POLIMRICAS A partir de derivados del cido shikmico, se forman tres tipos de polmeros ver Fig 11: Derivados de la tirosina, pasando por dopa amina y que genera la melanina responsable de la pigmentacin de la piel. Ligninas son polmeros de unidades C6-C3 con peso molecular alto 8000 correspondiente a 40 unidades y constituye entre un 22 a un 34% de la madera, contienen tres tipos de residuos aromticos el Guaiacil o coniferil, el siringil o sinapil y el p-cumaril. Se detecta la lignina con el test de floroglusinol en HCl dando un color rojo o tambin con el test de Male, que se puede determinar la clase de material vegetal, se trata el material con KmnO4 seguido de HCl y luego amoniaco, dando un color prpura para las Gynnospermas y un color marrn para las Angiospermas dependiendo de cual sea el residuo. Los polmeros de las Gymnospermas contienen solo residuos de alcohol coniferilico, las Angioespermas dicotiledoneas contienen los residuos coniferil alcohol y sinapil alcohol, mientras que las Angioespermas

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monocotiledoneas contienen los tres residuos coniferil alcohol, sinapil alcohol y pcumaril alcohol[4].
Gymnospermas
OCH3 OH

Angiosperma (Dicotiledoneas)

CH3O OH

OCH3 OH

OCH3

Angiosperma (Monocotiledoneas)

CH3O OH p-hidroxifenil p-cumaril OH siringil sinapil

OCH3 OH

OCH3

guaiasil coniferil

Taninos[1, 5, 11, 14] son sustancias de origen vegetal y de estructura polifenlica, peso molecular entre 500 y 3000; son amorfas, de sabor astringente, solubles en agua, en alcohol y en acetona en forma de soluciones coloidales, pero su solubilidad depende del grado de polimerizacin, son insolubles en solventes apolares;, por su capacidad de precipitar protenas, se usan para curtir la piel. Se encuentran repartidos en la mayora de las especies vegetales, especialmente en familias como: Coniferae, Ericaceae, Labiadas, Leguminosae, Myrtaceae, Poligonaceae, Rosaceae Rubiaceae, Fagaceae, fabaceae, etc. Desde el punto de vista farmacolgico, presentan acciones derivadas de su capacidad de formar complejos y precipitar metales, alcaloides y protenas:

Astringentes y antidiarreicos, se unen y precipitan las protenas presentes en las secreciones. Antimicrobianos y antifngicos. Antdotos para el envenenamiento con alcaloides y metales pesados. Su toxicidad en general es baja y deriva de la posible intolerancia gstrica y estreimiento que pueden causar.

Se localizan en vacuolas, combinados con alcaloides y protenas y desempean una funcin defensiva frente a insectos: agallas, maduracin de los frutos. Se pueden encontrar en todos los rganos de la planta: Corteza: roble (Quersus colombiana), castao (Sterculia apetala), eucalipto (Eucalyptus globulus), granada (Punica granatum), canela (Cinnamomum zeilanicum), quina (Cinchona sp.) Madera: mangle (Rhysophora mangle), acacia (Delonix regia). Hoja: hamamelis (Hamamelis virginiana), t (Thea sinensis), guayaba (Psidium guajava), almendro (Terminalia catappa). Flores: rosa roja (Rosa canina). Granos o semillas: caf (Coffea sp.), kola (Cola nitida). Tejidos patolgicos y rganos viejos: agallas de alepo (corteza de roble resultado de la descomposicin debido a la ovoposicin de las avispas.

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Taninos hidrolizables: galotaninos y elagitaninos, que pueden ser hidrolizados por cidos o enzimas, son formados por varias molculas de cidos fenlicos derivados del shikmico unidos por enlaces ster a un ncleo central de glucosa. Taninos condensados o proantocianinas o tambin llamados catecol taninos, son molculas ms resistentes a la ruptura y cuyas unidades son derivados flavonidicos, estos taninos se estudiaran mas adelante. En este captulo solo hablaremos de los taninos hidrolizables. Galotaninos Los galotaninos son aquellos en los cuales son unidades comprenden ya sea el cido glico o el cido diglico. Algunos ejemplos ruibarbo, clavero, ptalos de rosa roja, hojas de gayuba, agallas de China, hamamelis, castao y arce Elgitaninos son aquellos cuyas unidades contienen el cido elgico o el cido hexahidro difnico. Algunos ejemplos Eucalipto, castao, corteza de roble.
HO COOH O HO HO HO OH HO OH HO COOH O OH OH C O O C OH HO HOOC HO HO O C O HO COOH OH OH HO

cido glico

cido diglico

cido elgico

cido hexahidroxidifnico

Estos taninos pueden ser hidrolizados por enzimas cono la tanasa, secretada por Aspergillus sp. y Penicillum sp., hidrolizando la glucosa y liberando los cidos que los conforman.
CO2H NH2 tirosina HO CO2H CO2H

HO

HO c.cafico HO OH c.glico OH

O CO2H O N H

MeO

CH2OH

HO coniferol

taninos

melanina
O CO2H O O N H CO2H O N H CO2H N H O O R O

lignina
HO R MeO

CH2OH O OR OR OH

HOH2C CH2OH HO

O C

OH O O OH C O O OH n C

HOH2C

MeO

O HOH2C

HO

HO MeO MeO

HO HO

galotaninos

Fig. 11: Diferentes estructuras polimricas derivadas de fenilpropanos.

Las soluciones acuosas de los taninos precipitan con sales de metales pesados Cu, Fe, Hg, Pb, Zn. Con sales frricas los taninos hidrolizables producen una coloracin azul oscura y los taninos condensados una coloracin verdosa. PRINCIPALES PLANTAS QUE CONTIENEN TANINOS[5, 11, 15, 16] Agallas de Roble (alepo) Quercus infectoria, Fam. Fagaceae

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Son excrecencias o verrugas formadas sobre las ramas jvenes del roble, como resultado de la ovodeposicin de la avispa de agalla (Adleria gallaetinctoriae), al desarrollarse la larva, induce a la proliferacin celular de los tejidos del husped, formndose una masa globosa, dura y densa de coloracin variable, donde se acumulan steres galotnicos de glucosa en gran proporcin (50-70%). Hamamelis Hamamelis virginiana, Fam. Hamamelidaceae. Es un arbusto de 2 a 5 m de altura, ampliamente distribuido al norte de Amrica, la droga esta constituida por las hojas secas, utilizadas por sus propiedades astringentes y vasocontrictoras. Las hojas de hamamelis contienen ~10% de galitaninos y elagitaninos, proantocianinas y principios amargos. Almendro tropical Terminalia catappa, Familia Combretaceae rbol extico ampliamente distribuida en zonas tropicales y subtropicales es considerado como la mayor fuente de taninos del trpico, de altura considerable de hasta 25 metros y can recto, cuyas ramas o brazos casi horizontales, saliendo de un mismo punto en todas direcciones, asemeja un quitasol sin curvatura; por cuya agradable y peregrina apariencia se destina para alamedas y jardines; la madera es blanca, cscara lisa, roja por dentro; hojas grandes, nerviosas, ovoides, algo angostadas por sus extremos y rematando en punta, verdes o moraduzcas, verdes amarillosas por debajo y speras; flores pequeas, inodoras, de un verde blancuzco y en espigas; el fruto se asemeja a la almendra comn. Las hojas han sido empleadas en la medicina tradicional en Taiwan, La India, Filipinas, Malasia e Indonesia, para el tratamiento de la dermatitis y la hepatitis[16]. Los compuestos presentes en las hojas de la Terminalia catappa son fundamentalmente taninos hidrolizables como: punicalagina, punicalina Fig. 12, cido chebulgico y geranina.
OH HO O HO OH OH O HO OH O HO HO OH O HO CH3 HO OH OH HO HO OH OH O HO O O O O HO O HO OH HO O HO O O OH

OH O O OH
O HO O

OH

OH OH O

OH OH

Fig. 12. Estructuras qumicas de punicalina y punicalagina.

CUMARINAS[4, 5,9, 10, 17, 18] Las cumarinas su nombre viene de Coumarou nombre comn de la haba tonca (Dipteryx odorata Willd., Coumarouna odorata Aubl. Fam. Leguminosae/Fabaceae), son metabolitos tpicos de plantas superiores y algunos pocos microorganismos, su ncleo es benzo 2 pirona o benzo pirona. En general son lactonas insaturadas y comprenden otra clase de compuestos C6C3, prcticamente todas las cumarinas, a excepcin de la cumarina propiamente dicha, poseen un sustituyente oxigenado en
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posicin 7, ya sea hidroxilado como sucede en la umbeliferona, o combinado (metilo, azcares, etc.). Se han aislado unas 1000 cumarinas naturales en unas 150 especies distribuidas en aproximadamente 30 familias, principalmente en Umbeliferae/Apiaceae, Rutaceae, Leguminosae/Fabaceae, Papilionaceae, Rubiaceae, Lamiaceae, Asteraceae, Solanaceae, Gramineae, etc. En forma libre o como glicsidos. La propiedad fsica mas importante de estos compuestos es la fluorescencia generada con la luz ultravioleta (365 nm), propiedad ampliamente usada para su deteccin. Estos compuestos presentan un amplio rango de actividad biolgica, podemos citar: la accin anticoagulante y antibacterial del dicumarol, la accin antibitica de la novobiocina, la hepatoxicidad y carcinogenicidad de ciertas aflatoxinas, la accin estrognica del cumestrol, la accin fotosensibilizadora de ciertas furanocumarinas, la accin hepatoprotectora de la silimarina, etc., se destaca adems, el uso de cumarinas como saborizantes y en perfumera[17, 18]. Las cumarinas se clasifican en: Cumarinas simples Cumarinas complejas Estas a su vez, se clasifican en Furanocumarinas y Piranocumarinas, las cuales, dependiendo de la posicin del anillo furano o pirano, se subclasifican en lineales y angulares. Cumarinas diversas Biosntesis de cumarinas La biognesis de las cumarinas simples presentes en Gramneas y algunas plantas superiores, se derivan biogenticamente del cido shikmico, va cido cinmico, la especificidad del proceso consiste en la hidroxilacin del carbono 2, produciendo un rompimiento (-oxidacin) de la cadena lateral, como ocurre en plantas del gnero Salix, o una isomerizacin de la cadena y posterior lactonizacin, generando la umbeliferona, se explica segn el esquema siguiente[4, 11],
COOH COOH COOH COOH HO OGlu HO OGlu

[O]
HO HO OH

Glu

-oxidacin
COOH

-Glu

COOH

-Glu
HO

HO

OH

OGlu

HO

cido saliclico

umbeliferona

En general la formacin de cumarinas en plantas superiores, ocurre en forma radicalaria, por accin de enzimas del tipo peroxidasa, como se muestra en la figura 13.

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BIOSINTESIS DE COUMARINAS
O O

OH

OH

HO

HO

H2O2 H H

PEROXIDASA
OH O OH

OH

H2O

OH
OH

OH

O O HO O

HO

OH OH

HO

HO

HO

Figura 13 Biosntesis de las cumarinas

Las cumarinas simples pueden tener sustituciones oxigenadas en las posiciones 6, 7 y 8 del ncleo bencnico, como se muestra en la siguiente tabla.
5 6 7 8 4 3 2

O
1

R6 H H H OH H OCH3 OCH3

R7 H OH OCH3 OH OH OH OH

R8 H H H H OCH3 H OH

NOMBRE Cumarina Umbeliferona Herniarina Esculetina Hidrangetina Escopoletina Fraxetina

ORIGEN PRINCIPAL Haba tonca Leguminosae / Fabaceae, Solanaceae, Thymeliaceae Compuesta Lavandula sp, Ruta graveolens Castao de indias Rosaceae Hydrangea macrophylla (Hortensia) Tabaco, Bella dona Solanaceae Apocinaceae (Echites ursuta), Oleaceae

Cumarinas complejas Adems de las cumarinas simples citadas anteriormente, tambin se originan a partir del cido shikmico las llamadas cumarinas pirnicas y furnicas, estas a la vez se dividen en lineales y angulares dependiendo de la posicin donde se condensa el isopentenil pirofosfato para luego ciclarse y formar el heterociclo. Furanocumarinas. En 1934 se aisl el primero de estos compuestos, el bergapteno (psoroleno metoxilado en posicin 5) de Citrus bergamia y posteriormente la

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xantotoxina (8 metoxi psoroleno); en 1940 se identificaron estos compuestos como los responsables de producir fotodermatitis, estos compuestos son altamente fluorescentes bajo luz UV y aun en la regin visible.

O Sposoleno

O O Angelicina

H3C HO H3C O Marmesina H3C HO CH3 O O O

Columbianetina

Furanocumarinas

Los Psoralenos o furanocumarinas lineales[4, 8, 17], son ampliamente distribuidas en plantas y son particularmente abundantes en Umbeliferae (Apiaceae) y Rutaceae, los ejemplos mas comunes son psoraleno, bergapteno (visnagina), xantotoxina (metoxaleno) e isopimpinelina (kelina). Las plantas que contienen sporalenos, son usadas interna o externamente en PUVAterapeutico (tratamiento fotoquimioterapeutico donde se utiliza el Psoraleno con la luz ultravioleta A cercana al visible-) en el tratamiento de la de psoriasis, vitiligo, y otras afecciones de la piel o para producir bronceado.
R1

O R2

Psoraleno: R1=R2=H Bergapteno: R1=OCH3, R2=H Xantotoxol: R1=H, R2=OH Xantotoxina: R1=H, R2=OCH3 Isopimpinelina: R1=R2=OCH3

El metoxaleno[4, 9, 11] o xantotoxina, un constituyente de los frutos de Ammi majus Umbeliferae (Apiaceae), (apio cimarrn) es usado para facilitar la repigmentacin de la piel, en casos de vitiligo y psoriasis, administrado via oral y luego exposicin a la luz UV, minimiza el riesgo de quemaduras extremas y cncer de piel, el metoxaleno reacciona con las bases pirimdicas del DNA inhibiendo la replicacin y reduciendo la rata de divisin celular.
O NH O H3C O O CH3 HN O N R O O CH3 O N R

O O HN O CH3 O

O O HN O O O CH3 CH3 O

hv

hv

N R

OCH3

N R

Timina de DNA xantotoxina

aducto DNA-psoroleno

diaducto DNA-psoroleno

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La actividad fotosensibilizante de estos compuestos, se explica fundamentalmente por la reactividad en su estado excitado triplete (T1) (ver esquema), que se genera por efecto de la luz UV, ocasionando posibles reacciones de tipo radicalario, pueden ser reacciones enlazantes con protenas o macromolculas (DNA o RNA) y protenas, o reacciones de transferencia de energa al oxigeno molecular[19]. Desactivacin de los estados excitados
S1 CS h Fl Q F S0 Q Fotorreacciones T1

Fotorreacciones

Fl: Fluorescencia, F: Fosforescencia, Q: Calor, CS: Cruzamiento entre sistemas, S0: Estado singlete, S1: Estado excitado, T1: Estado triplete

Las piranocumarinas tienen el ncleo pirano unido en posiciones 6-7: tipo xantiletina y 7-8: tipo sesilina.
H3C H3C O O O H3C H3C O O O

Xantiletina

Sesilina

La biognesis de estas cumarinas relativamente complejas, puede proceder por una ciclizacin de una cumarina simple previamente prenilada[11], e1 esquema general para la biognesis de este tipo de cumarinas es el mostrado en la figura 14:

HO -H

CH2 OPP -H

. .

.
O O O

CH2 O

O HO-

O HO

O marmesina

NADP+ O

psoroleno

Figura 14: Biognesis del psoroleno

Cumarinas diversas
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El dicumarol se forma por fermentacin bacteriana de trboles y pasto, se aisl de hojas descompuestas de Melilotus albus Leguminosae/Fabaceae. El dicumarol (bishidroxicumarina) antogoniza con la protombina y otras protenas necesarias para la coagulacin de la sangre, presentando un problema para el ganado al consumirlo, tambin es utilizado comercialmente en venenos para ratas.
OH CH2 OH

O O

Dicumarol Anlogos sintticos del dicumarol son utilizados va oral como anticoagulantes para el tratamiento de la trombosis, como es el caso de las sales de warfarina y acenocumarol (nicumalona).
NO2
OH O

OH
CH3

O CH3

warfarina

Una aproximacin a la biognesis del dicumarol[4] es hidroxilando la posicin 4 de la cumarina, luego capta una molcula de formaldehdo y condensarse con otra molcula de cumarina hidroxilada en 4 ypor ltimo, enolizar el grupo ceto formando el dicumarol, como se muestra en la figura 14:
O
-OH

acenocumarol (nicumalona)

HCH OH
OH

OH CH2

OH

CH2 -H2O O O O O O

O O

OH

OH

OH

O O

dicumarol

O O

Figura 14: Biognesis del dicumarol

Derivados de 3 fenil cumarinas del tipo cumestrol y el antibitico novobiosina, son ejemplos de cumarinas diversas.
OH O
O H3C O H3C O OH NH2 OH HO H N O CH3 CH3

HO

H3C

O CH3

Cumestrol

Novobiosina

Las aflatoxinas son un grupo de sustancias relacionadas estructuralmente con las cumarinas; son micotoxinas producidas por Aspergillus flavum y A. versicolor y que
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han sido la causa de mortalidad animal por ingestin de alimentos enmohecidos, provocando lesiones hepticas
O O O

OCH3

aflatoxina B

Tcnicas de extraccin de cumarinas La extraccin de las cumarinas puede realizarse tanto sobre material seco como fresco, con solventes de polaridades diferentes, dependiendo de los tipos de estructura, algunas son ligeramente solubles en solventes apolares y a menudo pueden cristalizar directamente en ellos por enfriamiento o concentracin del solvente. Mtodos espectroscpicos para determinar cumarinas[17, 18] UV: Las cumarinas absorbe entre 274 y 311 nm (log : 4.03 y 3.72) atribuidas a los anillos bencnico y pirona y varian segn sus sustituyentes. IR: C=O 1715 - 1745 cm-1 Grupo pirona (lactona conjugada) Psorolenos 1720 cm-1 Furano: C-O furnico : 1088-1109 y 1253-1274 cm-1 Dehidropirano 1735-1750 cm-1 RMN: Se muestran las seales representativas en RMN de 1H y de 13C.
7.5-8.3 J=9.5 Hz 6.1-6.4 O
124 131 116 128 143.6 118 153 116.4 160.4

J:8Hz 6.88d 3.99s

H3C O

7.40d

7.63d J:10Hz 6.24d

O

106.6 125.7 113.2 146.4

144.2 114.2 116.2 160.2

O

5.32d J.9hZ
HO

OH

143.5 148.3 131.2 O

O

4.55d J:9Hz
CH3

69.8 119.7
CH317.8

1.76s

4.60d H H 4.64d J:15Hz

139.2
CH3

25.5

Murrangatina

imperatorina

SM: Fragmentacin de la cumarina y de la colombianetina

-CO O m/z: 146 O O M-28 118 (100) -CO C7H8 90 -H C7H7 89

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- H2O
.O H3C H3C OH H
+

-.CH3
+ +

O O H3C

O H3C H3C

O H3C

.
m/e: 228

CH3 m/e: 228

.

m/e: 246 -CH 3 COCH 3

m/e: 213

O O O

HO

-CO O m/e: 187

+

-CO O H 3C

m/e: 188 (100%)

m/e: 159

m/e: 132

PRINCIPALES PLANTAS QUE CONTIENEN CUMARINAS[5, 11, 20, 21] Haba tonca, Dipteryx odorata Willd., Fam. Leguminosae/Fabaceae) rbol originario de Sur Amrica y cultivada actualmente en Venezuela, Guayana y Brasil, la droga esta constituida por las semillas desecadas que contienen entre 1 y 3% de cumarina, 25% de grasa y gran cantidad de almidn; utilizadas en perfumera y como aromatizante del tabaco y del whisky. Meliloto, Melilotus officinalis (L) Pallas, Fam. Fabaceae. El meliloto constituye una especie forrajera de hojas trifoliales y flores amarillas, ampliamente distribuida, su nombre deriva del griego mli miel, por ser una de las plantas silvestres mas visitada por colibres y abejas, tambin se le conoce como trbol oloroso, debido a que luego de ser recolectada, por su desecacin desarrolla un olor agradable. La droga contiene como principios mayoritarios flavonoides, saponinas triterpnicas pentacclicas y cidos fenlicos, todas las especien en especial las de flores amarillas contienen el o-hidroxi cinmico (melitosido), el cual se hidroliza dando lugar a la lactinizacin y a la cumarina. Por una inadecuada conservacin de la planta, se origina a partir de esta, el dicumarol (ver figura 14), sustancia anticoagulante que han producido procesos hemorrgicos en el ganado. Frutos de apio, Apium graveolens Umbeliferae (Apiaceae). Lea droga esta constituida por frutos maduros y desecados los cuales contienen entre 23% de esencia constituida por terpenos con pequeas cantidades de anhidrico y lactonas del cido sedanlico y fenoles. Cumarinas, furanocumarinas, colina, tirosina, glutamina, asparagina, apiona, oleonesina. Los frutos son utilizados como digestivos, carminativos, diurticos, tranquilizantes y anticonvulsivantes. Apio cimarrn, Ammi majus Umbeliferae (Apiaceae) Planta distribuida en Mesoamrica y el norte de Suramrica los granos del apio cimarrn, contienen furanocumarinas principalmente bergapteno, isopimpinelina y xantotoxina

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